CURS 8

Bacteriologie parte general

Defini ie. Bacteriile reprezint un grup de microorganisme procariote, unicelulare, de dimensiuni microscopice, cu morfologie variat i cu un echipament enzimatic mai mult sau mai pu in complex, n func ie de specie. I. II. III. IV. V. Morfologia bacteriilor Ultrastructura celulei bacteriene Fiziologia bacteriilor Diagnosticul de laborator Principiile terapiei cu antibiotice

I.

Morfologia bacteriilor

Forma i dimensiunile bacteriilor sunt elemente importante pentru diferen ierea i clasificarea lor. Forma bacteriilor este controlat genetic. De i variaz destul de mult n func ie de condi iile de mediu, polimorfismul acestor microorganisme este relativ limitat i caracterizat prin predominan a unei forme tipice pentru o specie dat . Forma bacteriilor este greu de apreciat direct n mediile lor naturale. Morfologia bacteriilor se stabile te, de obicei, pentru celulele cultivate n condi ii artificiale de laborator, caz n care forma celulelor poate fi influen at de vrsta culturii, de compozi ia mediului, de temperatur etc. Datorit acestui fapt, forma bacteriilor, care reprezint un criteriu taxonomic important, se apreciaz n mod conven ional pe celule provenite din culturi tinere, n faza de cre tere activ , pe medii de cultur corespunz toare i n condi ii optime de temperatur , pH etc. Dup forma celulei, bacteriile pot fi grupate n urm toarele tipuri morfologice: y y y y bacterii sferice (cocoidale); bacterii cilindrice (bacilare); bacterii spiralate (elicoidale); bacterii filamentoase.

Bacteriile sferice. Sunt bacteriile cunoscute sub numele generic de coci. Cocii pot fi perfect sferici (Staphylococcus aureus), elipsoidali (Streptococcus viridans), lanceola i (Streptococcus pneumoniae) sau reniformi (Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae). La majoritatea bacteriilor sferice, celulele fiice rezultate n urma procesului de diviziune nu se despart la sfr itul diviziunii, ci formeaz grup ri caracteristice cu valoare taxonomic . n func ie de pozi ia celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint subtipuri morfologice (fig. 8.1): urm toarele ase

1|P a ge

CURS 8 a. cnd diviziunea cocilor se face dup un singur plan, iar celulele fiice r mn izolate rezult micrococii (Micrococcus roseus); b. dac diviziunea celulelor se face dup planuri succesive paralele, celulele r mn ata ate n perechi, formnd diplococii (Streptococcus pneumoniae); c. cnd diviziunea are loc tot dup planuri succesive paralele, dar celulele rezultate formeaz lan uri de lungimi variabile, ca un irag de m rgele, rezult streptococii (Streptococcus pyogenes); d. n cazul n care planurile succesive de diviziune sunt perpendiculare unele fa de altele, iar celulele rezultate sunt dispuse cte patru, se formeaz tetracocii sau tetrada (Gafkya tetragena); e. cnd planurile de diviziune sunt orientate n trei direc ii diferite, perpendiculare unul pe altul, rezult o grupare sub form de pachete cubice numit sarcina (Sarcina flava, Sarcina aurantiaca); f. dac diviziunea se face dup mai multe planuri dispuse neregulat rezult coci aranja i n ' form de ciorchine sau stafilococii (Staphylococcus aureus). Bacteriile cilindrice. Sunt cunoscute sub denumirea de bacili sau bastona e i au diametrul longitudinal de cteva ori mai mare dect cel transversal. Forma bacililor prezint unele varia ii (fig. 8.2) care se refer la laturile i extremit ile celulei. Bacilii sunt drep i, u or ncurba i la mijloc sau la unul din capete. Extremit ile bacililor pot fi t iate drept, ca la Bacillus anthracis sau rotunjite, ca la majoritatea bacililor: Mycobacterium tuberculosis. Marginile laterale ale bacililor sunt de regul paralele, sau pot fi i apropiate la extremit i, dnd bacilului aspectul de fus (Fusobacterium fusifformis) sau ndep rtate i rotunjite la una sau la ambele capete. n urma procesului de diviziune bacilii pot fi grupa i cte doi (diplobacili), n lan uri cu lungimi variabile (streptobacili) sau n palisad (ca scndurile unui gard). Unii bacili formeaz grup ri sub form de rozet sau stea. Raportul dintre cele dou diametre - longitudinal i transversal variaz mult, unele bacterii putnd lua un aspect filamentos sau sferic - oval, fiind denumite cocobacili. Acestea din urm sunt uneori greu de diferen iat de coci. Bacteriile spiralate (helicoidale). Aceste bacterii au form cilindric , alungit , dar prezint curburi ale axului longitudinal. Se cunosc trei subtipuri morfologice (fig. 8.3): vibrionul: n form de virgul (Vibrio cholerae) spirilul: n form de spiral , cu mai multe ture de spir rigide (Spirillum mutans) spirochete, n form de spiral , cu mai multe ture flexibile, care se pot comprima sau relaxa (Treponema pallidum). Bacteriile filamentoase. Acest tip morfologic se ntlne te la actinomicete (bacterii miceliene).

2|P a ge

CURS 8 Dimensiunile bacteriilor Bacteriile au dimensiuni foarte mici, de ordinul micrometrilor (1 m - 10-6 m), din care cauz nu pot fi observate dect la microscop. n medie, dimensiunile bacteriilor sunt cuprinse ntre 0,5-1 m x 3-6 m. Cele mai mici ca dimensiune sunt nanobacteriile descoperite recent, cu dimensiuni de 0,02-0,03 m; cele mai mari pot ajunge intre 10-20 m - lungime, iar n cazul formelor filamentoase, n mod excep ional, chiar la 500 m. Dimensiunile cocilor variaz ntre 0,1-2 m; bacilii au lungimea de 0,5 - 10 m i grosimea de 0,3 - 1,5 m; spirilii i spirochetele au dimensiuni ce variaz ntre 0,25 - 3,5 m diametrul transversal i 6 - 100 m diametrul longitudinal. Dimensiunile mici ale bacteriilor apar ca o condi ie esen ial pentru cre terea i multiplicarea lor rapid , n compara ie cu celulele eucariote, ce le confer un mare avantaj biologic n natur , asigurnd supravie uirea lor.

II.

Ultrastructura celulei bacteriene (fig. 8.4)

Descrierea constituen ilor structurali ai celulei bacteriene a fost posibil datorit perfec ion rii tehnicilor de studiu, n special cele de citochimie i de microscopie electronic . Elementele structurale ale celulei bacteriene au fost i clasifcate n: elemente structurale constante sau permanente i elemente structurale inconstante sau nepermanente. Elemente structurale constante:       Peretele celular Membrana citoplasmatic Citoplasm Materialul nuclear Organitele citoplasmatice Incluziunile citoplasmatice

Peretele celular bacterian Celula bacterian este delimitat de un perete celular. Acesta acoper membrana citoplasmatic i poate fi la rndul s u acoperit, la unele specii, de o capsul sau de un strat mucos. Peretele poate fi pus n eviden prin colora ie sau prin examinare la microscopul electronic. Examinat la microscopul electronic peretele celular izolat are aspectul unui sac gol, care conserv forma bacteriei din care provine i are o constitu ie asem n toare ochiurilor unei plase.Ultrastructura peretelui celular este diferit la cele dou grupe mari de bacterii (clasificate n func ie de afinit ile tinctoriale): bacterii Gram pozitive i bacterii Gram negative. La bacteriile Gram-pozitive peretele celular (fig. 8.5) apare la microscopul electronic ca un strat unic, omogen. Componentul care se g se te n cea mai mare parte n peretele celular al acestor bacterii (80-90 % din greutatea uscat a celulei) este pegtidoglicanul sau mureina. n afara acestui component, peretele celular mai con ine proteine, polizaharide i acizi teicoici.
3|P a ge

CURS 8 Peptidoglicanul poate fi atacat de lizozim, o enzim mucolitic i de antibioticul penicilin . Acizii teichoici (grec. tekhos = zid. perele) sunt prezen i numai n peretele celular al bacteriilor Gram-pozitive, conferindu-le o serie de propriet i importante: influen eaz pasajul ionilor ia nivelul peretelui celular. La bacteriile Gram-negative peretele celular (fig. 8.6) este mai sub ire, dar are o structura mai complex . El este alc tuit din urm toarele structuri: membrana extern a peretelui celular: fosfolipide, proteine i lipopolizaharide (LPS) spa iul periplasmic (cuprins ntre membrana citoplasmatic i membrana extern a peretelui celular): complexul peptidoglican - lipoproteine Semnifica ia biologic a peretelui celular: y Peretele celular reprezint sistemul de sus inere mecanic al ntregii celule. Datorit rigidit ii sale determin forma caracteristic a celulelor bacteriene i o protec ie mpotriva factorilor nefavorabili din mediui. Asigur protec ia celulei fa de ocul osmotic; f r suportul rigid al peretelui celular, membrana plasmatica nu ar putea rezista presiunii interne. Particip la procesul de cre tere i diviziune celular , urmnd membrana citoplasmatic n formarea septului transversal care separ celula mam n cele dou celule fiice. Datorit porilor, peretele celular permite p trunderea n celul a substan elor nutritive i eliminarea substan elor rezultate din metabolism. n cazul bacteriilor mobile, constituie suportul rigid pe care se sprijin flagelii in contrac ie. Con ine substan ele care dau specificitatea antigenic a celulelor i receptorii specifici pentru fixarea bacteriofagilor (virusuri care paraziteaz bacteriile). Protopla tii i sferopla tii Unele bacterii sunt n mod normai lipsite de perete celular. A a sunt, de exemplu, micoplasmele, un grup de bacterii parazite intracelular. Izotonismul celulei parazitate asigur micoplasmelor supravie uirea n lipsa peretelui celular. Dac se trateaz cu lizozim (enzima care hidrolizeaz peptidoglicanul din peretele celular) celulele bacteriene Gram-pozitive, peretele celular este distrus integral. R mne doar membrana citoplasmatic ce men ine forma aproximativ sferic . Aceste forme poart numele de protopla ti. Protopla tii nu- i mai pot reface prin sintez peretele celular daca acesta a fost complet distrus. La bacteriile Gram-negative peretele celular bacterian nu poate fi degradat complet sub ac iunea lizozimului ci, i sl be te numai structura. La aceste bacterii lizozimul nu distruge dect p tura de murein , membrana extern a peretelui celular r mnnd aproape intact . n medii hipotonice celulele astfel tratate lizeaz , iar n medii hipertonice se transform n sferopla ti. Ace tia se deosebesc de protopla ti prin aceea c peretele lor celular este numai par ial distrus.

y y y y y

4|P a ge

CURS 8 Membrana citoplasmatic (fig. 8.7) Membrana citoplasmatic acoper citoplasma celulei bacteriene, separnd-o de suprafa a intern a peretelui cclular de care este, de obicei, strns lipit . Poate fi pus n eviden i la microscopul fotonic, dup colorare selectiv cu albastru Victoria sau f r colorare, la bacteriile vii examinate in cmp ntunecat, caz in care apare ca o linie net , luminoas , str lucitoare. La bacterii, membrana citoplasmatic prezint o structur bilaminar , fiind format dintrun dublu strat fosfolipidic, n grosimea c ruia exist diferite proteine i polizaharide. Membrana citoplasmatic este prev zut cu numeroase invagin ri de form vezicular , lamelar sau tubular care p trund n citoplasm . Aceste invagin ri sunt denumite mezozomi i mpreun cu membrana citoplasmatic din care deriv formeaz sistemul membranar unic sau "unit membrana". Datorit sistemelor enzimatice pe care le con ine, ea are importante func ii n metabolismul energetic. La celulele eucariote aceste func ii sunt ndeplinite de organite specializate (mitocondriile). Mezozomii sunt structuri multifunc ionale. Au o deosebit importan , ca r spuns la nevoile variate ale celulei. Formarea lor reprezint o modalitate prin care celula bacterian i m re te suprafa a membranei citoplasmatice, n func ie de condi iile de mediu. Mezozomii sunt lega i att de membrana plasmatic , ct i de materialul nuclear, avnd rol important n controlul replic rii cromozomului bacterian. Mezozomii sunt implica i i n sinteza membranei plasmatice, a peretelui celular i a septului transversal care separ celulele dup diviziune. Semnifica ia biologic a membranei citoplasmatice y y Membrana citoplasmatic reprezint o component permanent a celulei bacteriene, avnd rolul de a delimita spa iul intracelular. Pentru celula bacterian membrana citoplasmatic reprezint o barier osmotic semipermeabil , ce asigur o rapid echilibrare a ionilor de sodiu ntre interiorul i exteriorul celulei, o concentrare intracelular a ionilor de potasiu i de magneziu, precum i p trunderea sau evacuarea unor molecule de dimensiuni mici Membrana citoplasmatic este sediul a numeroase enzime respiratorii, reprezentnd o important structur cu rol energetic Membrana citoplasmatic coordoneaz cre terea i diviziunea celular , ini iind replicarea cromozomului bacterian i asigurnd separarea cromozomilor fii, prin formarea septului transversal de diviziune. Citoplasma Citoplasma este un sistem coloidal complex format din proteine, lipide i glucide, ap (80%), s ruri minerale i o serie de substan e rezultate n urma metabolismului. Citoplasma bacterian nu are o organizare definit , similar celei din celulele eucariote, care con ine organite diferen iate i delimitate de membrane. Aspectul ei este variabil n func ie de v rsta culturii i de condi iile dc mediu. La celulele tinere i n condi ii normale de dezvoltare, citoplasma ader de peretele celular i se prezint ca o mas dens , omogen i intens colorabil . La celulele b trne citoplasma i pierde treptat afinitatea tinctorial , se ndep rteaz de peretele
5|P a ge

y y

CURS 8 celular i cap t o structur granular cu numeroase vacuole. n interiorul citoplasmei se g se te materialul nuclear, incluziunile, vacuolele i al i constituen i. O caracteristici a citoplasmei bacteriene este prezen a unei mari cantit i de ARN, care i confer caracterul de bazofilie, mai intens la celulele tinere. Materialul nuclear (fig. 8.8) Spre deosebire de celulele eucariote, care au un nucleu cu structur bine definit , m rginit de o membran , con innd un num r definit de cromozomi capabili de diviziune mitotic , materialul nuclear bacterian are o form primitiv de organizare, lipsit de membran , situat in partea central a celulei i care nu sufer modific ri de tip mitotic in cursul ciclului de diviziune. Datorit caracteristicilor sale particulare, aceast structur a fost desemnat cu numero i termeni: nucleoid, nucleozom. material nuclear, nucleoplasm . cromozom bacterian etc. Din punct de vedere chimic materialul nuclear con ine 60% ADN, 30% ARN i 10% proteine. Se pare c ARN-ul i proteinele contribuie la conservarea unit ii structurale a nucleoplasmei, n lipsa unei membrane proprii. Pe sec iuni ultrafine s-a observat c regiunea nuclear este plin cu filamente foarte fine, uneori aranjate n iruri ondulate, paralele, care seam n cu o jurubi de a , cteodat r sucit . Aceste filamente sunt formate din ADN i corespund cromozomului bacterian. Prin metode speciale cromozomul bacterian a fost extras din celul , constatndu-se c este alc tuit dintr-o singur , molecul , gigant. (aproximativ 1 mm lungime la Escherichia coli) de ADN de form circular , cu extremit ile reunite, cu lungimea de 1400 m i un diametru de 2,5 nm, pliat foarte strns n dou rnduri de bucle succesive, stabilizate de c tre proteine. Semnifica ia biologic a materialului genetic y y Determin arhitectura celulei bacteriene, ereditatea i capacitatea ei de evolu ie. Datorit lipsei membranei proprii, un contact direct ntre ADN i ribozomii din citoplasm face ca transferul informa iei genetice s se realizeze foarte rapid.

Ribozomii Ribozomii sunt particule nucleoproteice intracitoplasmatice, de form aproximativ sferic . La procariote, n faza de cre tere activ , se g sesc n citoplasm 1500 - 100.000 (n medie 20 30.000) particule ribozomale. Ribozomii sunt componen i esen iali ai sistemului de traducere a informa iei genetice i au rol n sinteza proteinelor. Vacuolele Vacuolele sunt forma iuni sferice, cu diametrul de 0,3-0,5 m, mai pu in refringente dect citoplasma, care apar n celula bacterian n perioada de cre tere activ . Num rul lor este variabil n raport cu mediul de cultur (6- 20/celul ). Con in diferite substan e metabolice i sunt nconjurate la periferie de un nveli lipoproteic unistratificat numit tonoplast.

6|P a ge

CURS 8 Incluziunile citoplasmatice Incluziunile citoplasmatice sunt forma iuni structurale ce con in o serie de substan e inerte, depuse n citoplasma celulei, cu rol de substan e de rezerv . Dup structura lor, eviden iat la microscopul electronic, ele sunt de dou tipuri:  incluziuni nconjurate de membrane: incluziunile de poli - hidroxibutirat, incluziunile cu sulf i carboxizomii,  incluziuni nenconjurate de membrane: incluziunile de polimeri anorganici, incluziunile polizaharidice Incluziunile de poli- -hidroxibutirat sunt specifice numai procariotelor. Aceste incluziuni se observ u or datorit gradului mare de refringen sau pot fi puse n eviden dup o colorare specific pentru gr simi (negru de Sudan). n celulele vii apar ca granula ii rotunde, foarte refringente i reprezint un material de rezerv tipic pentru procariote. Incluziunile de polimeri anorganici au fost denumite de c tre Grimm (1902) incluziuni de volutin deoarece au fost g site n num r mare la bacteria Spirillum volutans. Aceste incluziuni au fost descoperite de c tre V. Babe n 1897 la Corynebacterium diphtheriae i Mycobacterium tuberculosis i apoi de Ernst n 1899 la alte bacterii, fapt pentru care mai sunt numite i corpusculii Babe -Ernst. Datorit con inutului mare n polifosfa i anorganici produc efecte metacromatice (se coloreaz n ro u - violet cu albastru de metilen), motiv pentru care au fost denumite i granula ii metacromatice. Granulele de volutin reprezint o rezerv de fosfor i energie intracelular . Incluziunile polizaharidice cuprind incluziunile de glicogen i amidon. Acestea se ntlnesc ca substan e de rezerv la bacteriile aerobe sporulate. La microscopul fotonic pot fi observate dup o prealabil tratare a celulelor cu iod n iodur de potasiu. n aceste condi ii, incluziunile de glicogen se coloreaz n brun ro cat, iar cele de amidon n albastru, n contrast cu citoplasma care apare colorat n galben pal. Elemente structurale inconstante:       Capsula i stratul mucos Glicocalixul Flagelii Pilii i fimbriile Sporul Cromatoforii Aceste elemente apar doar la unele specii bacteriene. Capsula i stratul mucos (fig. 8.9) Unele bacterii au proprietatea de a elabora, n anumite condi ii de mediu, substan e mucilaginoase cu caracter vscos. Dupa unii autori, aceast proprietate ar exista poten ial la toate bacteriile, dar s-ar manifesta regulat numai la unele specii, in timp ce la altele s-ar traduce doar prin prezen a unei forma iuni foarte bine organizate, invizibil cu mijloacele uzuale de cercetare. n func ie de structura i raporturile cu celula bacterian substan a mucoid se poate prezenta sub urm toarele forme:

7|P a ge

CURS 8 a) Microcapsula - la care substan a mucoid alc tuie te un strat foarte fin n jurul celulei bacteriene b) Macrocapsula sau capsula adev rat se prezint ca o forma iune morfologic distinct care nvele te de jur-mprejur fecare celul sau perechi de celule. c) Stratul mucos - apare ca o mas amorf , neorganizat , n jurul celulei bacteriene. d) Zooglea este un strat mucos ce leag ntre ele mai multe celule, formnd adev rate colonii mucilaginoase de bacterii. Spre deosebire de stratul mucos, care formeaz n jurul bacteriilor o re ea lax i difuz de exopolizaharidc, f r o structur definit , capsula adev rat este strns aderen de jeretele celular. Exemple de bacterii capsulate: Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae., Klebsiella pneumoniae. De i capacitatea de a elabora capsul sau strat mucos constituie un caracter ereditar determinat genetic - pentru anumite specii bacteriene, ea poate s nu se manifeste atunci cnd condi iile de mediu sunt neadecvate sau poate fi pierdut prin muta ie. Celulele bacteriene care nu au aceast capacitate o pot dobndi prin recombinare genctic , dup ce au primit prin transfer determinantul genetic corespunz tor, de la o bacterie care formeaz capsul sau strat mucos. Semnifica ia biologic a capsulei y y Capsula este un produs inert care rezult din activitatea metabolic a celulei bacteriene i care poate fi ndep rtat, celula bacterian p strndu- i viabilitatea. Capsula are un rol ecologic n supravie uirea bacteriilor n natur . Ea protejeaz celula bacterian de efectul nociv al deshidrat rii, datorit propriet ilor sale higroscopice i reprezint un rezervor pentru stocarea substan elor nutritive sau a celor rezultate din metabolism La bacteriile patogene, capsula are rol protector fa de ac iunea fagocitelor. Bacteriile patogene capsulate au o virulen mai mare pentru om i animale. Astfel, pneumococul capsulat este virulent, n timp ce tulpinile necapsulate sunt nevirulente i fagocitabile.

Glicocalixul Glicocalixul este alc tuit dintr-o mas de filamente polizaharidice ata ate de lipopolizahariele de pe suprafa a bacteriilor, formnd n ansamblu o structur ca o psl pe suprafa a celulei, asigurnd fixarea acesteia de alte celule sau suporturi. n mediile naturale competitive, populate de mai multe specii de bacterii, selec ia favorizeaz celulele protejate de glicocalix. Semnifica ia biologica a glicocalixului y Glicocalixul reprezint un rezervor de hran pentru bacterii, prin legarea diferi ilor ioni i molecule care provin din mediul nconjur tor sau sunt eliberate prin digestia enzimatic a celulelor moarte. Prin glicocalix, bacteriile se leag de structurile poiizaharidice similare de pe suprafa a celulelor vegetele, iar n cazul bacteriilor patogene, aceast fixare are un gradient de specificitate. Spre exemplu, vibrionul holeric se leag de "marginea n perie" a celulelor intestinale umane, iar gonococul de celulele vaginale.

8|P a ge

CURS 8 Prezen a glicocalixului la bacteriile patogene reprezint o protec ie pentru celul , asigurnd fixarea i men inerea ei n mediile naturale sterile (ex. c ile urinare), f r a fi ndep rtat , precum i o rezisten m rit fa de bacteriofagi sau protozoare.

Flagelii Flagelii sunt apendici filamento i, dispu i la suprafa a bacteriilor, reprezentnd organite de locomo ie. Posibilitatea de deplasare se ntlne te numai la anumite bacterii ca: bacili, vibrioni i spirili. Morfologie Flagelii sunt structuri filamentoase sub iri, flexibile, de form helical . Lungimea lor este mult mai mare dect aceea a celulelor care i poart . De asemenea, ei sunt mai lungi la celulele b trne i la cele care tr iesc n medii lichide. Forma lor este cilindric de i, uneori, apar turti i ca o panglic . Num rul flagelilor pe suprafa a unei celule variaz ntre 1-100, fiind caracteristic pentru o anumit specie. n func ie de dispunerea flagelilor pe suprafa a celulei bacteriene, acestea pot fi (fig. 8.10): atriche (bacterii imobile, f r flageli - majoritatea bacteriilor) monotriche (cu un singur flagel polar, exemplu Vibrio cholerae); lofotriche (cu un smoc de flageli situat la un pol al celulei, exemplu Spirillum marinus) amfitriche (cu un flagel la ambii poli ai celulei) peritriche (cu flageli pe toat suprafa a celulei, exemplu Proteus vulgaris). Existen a flagelilor este controlat genetic i reprezint un caracter care poate fi pierdut i redobndit prin muta ie. Mi carea este determinat de reac ia celulei la diferi i stimuli din mediu. Cnd celula se deplaseaz n direc ia stimulului se vorbe te de un tactism pozitiv, iar cnd se ndep rteaz de stimul de un tactism negativ. n func ie de natura stimulului deosebim urm toarele tipuri de tactisme: chemotactism, fototactism, aerotactism. termotactism etc. Chemotaxia - este o modalitate de deplasare preferen ial a bacteriilor sub efectul unor concentra ii inegale de substan e chimice din mediu. Se manifest fie prin atragerea, fie prin respingerea bacteriilor din zonele n care concentra ia substan ei este mai ridicat . Din punct de vedere al atragerii i respingerii bacteriilor, exist dou grupe mari de substan e chimice: substan e chemotactic pozitive (atractante): zaharuri, aminoacizi, O2, Ca ; substan e chemotactic negative: acizi gra i, alcooli, H\ OH Aerotaxia - reprezint deplasarea celulelor bacteriene ntr-un anumit mod n func ie de gradientul de O2 Prin aceast mi care fiecare bacterie caut zona de concentra ie n oxigen adecvat tipului s u respirator, aerob, anaerob, microaerofil.

9|P a ge

CURS 8 Pilii i fimbriile Sunt apendici filamento i, pericelulari. prezen i la barteriile Gram negative(Escherichia coli, Proteus, Klebsiella, Shigella, Salmonella) i mai rar la bacteriile Gram pozitive. Pot fi eviden ia i numai prin microscopie electronic . Sunt mai numero i dect flagelii, mai sub iri i mai casan i. Dup structur , func ie i determinism genetic, ace ti apendici au fost grupa i n dou categorii: o pilii de sex - apendici filamento i care reprezin receptori specifici pentru bacteriofagi i calea de transfer a ADN-ului bacterian i plasmidial n procesul de conjugare o fimbriile - care nu sunt implicate n transferul ADN cromozomal, viral sau plasmidial. Pilii de sex sunt n num r de 1-10/celul . Sunt codifica i de informa ia genetic extracromozomal (plasmidul de sex). Semnifica ia biologic a pililor y y Pilii de sex sunt organite esen iale pentru transferul ADN cromozomal sau plasmidial n cursul conjug rii celulelor bacteriene Pilii poart receptori pentru fixarea bacteriofagilor de celulele bacteriene i servesc drept conduct prin care se realizeaz transferul genomului fagic n celula bacterian . Pierderea pililor prin muta ie determin rezisten a fa de infec ia cu bacteriofagi.

Fimbriile sunt alc tuite dintr-un num r variabil de molecule de fimbrin . Fimbriile r mn legate de protopla ti i sferopla ti, ceea ce arat originea lor intracclular . Semnifica ia biologic a fimbriilor y y y y y y y Cre terea suprafe ei de absorb ie a substan elor nutritive. Cre terea activit ii respiratorii a bacteriilor. Facilitarea ader rii bacteriilor de diferite substraturi sau alte organisme. Formarea unor pelicule de bacterii reunite prin fimbrii la suprafa a mediilor lichide. Servesc ca organite de transport a unor metaboli i Contribuie la stabilizarea cuplurilor de conjugare Influen eaz virulen a bacteriilor patogene prin: fixarea bacteriilor patogene de celule i esuturi, determinarea unei specificit i de esut; inducerea form rii de anticorpi datorit antigenelor din fimbrii; conferirea unei rezisten e deosebite a bacteriilor la fagocitoz .

Sporul bacterian (fig. 8.11) La unele bacterii, forma vegetativ se poate transforma ntr-un spor. Aceste bacterii se numesc sporogene. La bacterii se ntlnesc mai multe tipuri de spori: Endosporul (sporul propriu-zis) - este o forma iune intracelular , refringent i rezistent la factorii nefavorabili de mediu. Este caracteristic pentru genurile Clostridium i Bacillus.
10 | P a g e

CURS 8 Exosporul - reprezint o forma iune rezistent , care se ntlne te la bacteriile metanooxidante Artrosporul - constituie o forma iune intracelular , cu o rezisten mai sc zut comparativ cu a endosporului, dar superioar formei vegetative. Se formeaz prin fragmentarea celulei vegetative. Adev ratul spor bacterian sau endosporul este ntlnit la speciile genului Bacillus i Clostridium. Datorit calit i lor sale deosebite de rezisten , endosporul conserv n stare dormant , timp ndelungat, toate propriet ile genotipice ale celulei vegetative din care provine. Indiferent de morfologia celulei n care se constituie, forma sporului (endosporului) este rotund sau oval , cu diametrul variabil. Pozi ia sporului n celul este diferit i reprezint un criteriu taxonomic. Astfel, sporul ocup o pozi ie central la Bacillus anthracis, subterminal la Bacillus cereus sau o pozi ie terminal la Clostridium tetani. La unele specii, diametral sporului este mai mare dect al celulei n care se formeaz , din care cauz deformeaz celula. Sporii deforman i i ntlnim la bacilii telurici, anaerobi, apar innd genului Clostridium i pot avea pozi ie central , dndu-le acestora aspect de fus (Clostridium pasteurianum), pozi ie subterminal aspect de rachet de tenis (Clostridium sporogenes) sau b de tob , dac sporul este terminal. Sporul este unic i numai excep ional s-au descris mai mul i spori n aceea i celul . La microscopul fotonic sporii apar ca forma iuni refringente distincte, incolore, deoarece nu sunt permeabili la coloran i. Pot fi ns colora i prin metode speciale (ex. cu verde malachit). Ultrastructura. (fig. 8.12) tunicile (nveli urile sporale) - reprezint trei straturi suprapuse: unul extern (exina), unul intern (ntina), ntre care se g se te stratul mijlociu; i reprezint 26-30 % din structura sporului,con innd 80% din proteinele sporale; cortexul este o zon situat sub tunica intern , format nnat dintr-un peptidoglican (altul dect mureina) membrana sporoplasmei - este identic cu membrana citoplasmatic a celulei vegetative; sporoplasma (inima sporului) - reprezint 60-70% din greutatea sporului i con ine elementele biologic active ADN, ARN, mai pu in ARN mesager, ribozomi). Sporogeneza Reprezint un proces de morfogenez n urma c ruia n interiorul unei celule bacteriene se diferen iaz o alt celul diferit din punct de vedere chimic, enzimatic i fiziologic. Sporogeneza este nso it i de unele modific ri biochimice. Astfel, unele substan e care se sintetizau n celula vegetativ nu se mai sintetizeaz n celula pe cale de sporulare, n schimb n aceasta din urm apar substan e noi. n cursul sporogenezei la unele bacterii aerobe sau anaerobe se elibereaz n mediu substan e biologic active: enzime, antibiotice, toxine. Fenomenul este deosebit de important pentru industria microbiologic , bacteriile respective fiind utilizate n producerea industrial a enzimelor (Bacillus subtills), antibioticelor (specii de Bacillus i Streptomyces), toxine (specii de Clostridium) etc.

11 | P a g e

CURS 8 Germinarea sporului Reprezint fenomenul de transformare a sporului n celula vegetativ , respectiv trecerea sporului din stare dormant , metabolic inactiv , la starea metabolic activ . Se realizeaz in trei faze succesive: activarea, ini ierea germin rii i cre terea postgerminal . y y Activarea germin rii - este produs n condi ii favorabile de umiditate, temperatur , pH i de unele substan e chimice. Ini ierea germin rii - este marcat de cre terea sporului n volum, ca urmare a absorb iei de ap , de pierderea refringen ei, tumefierea cortexului, a tunicilor sporale i pierderea termoiezisten ei. Cre terea postgerminal - dezintegrarea structurilor sporale nceput n faza de ini iere se des vr e te in faza de cre tere postgerminal paralel cu dobndirea activit ii respiratorii i a altor activit i metabolice. Cortexul i tunicile sporale dispar, iar noua celul vegetativ ce se constituie n centrul sporului cre te, se alunge te i herniaz din spor. Cre terea postgerminal se sfr e te n momentul n care celula vegetativ intr n prima diviziune.

Semnifica ia biologic a sporului y Sporul reprezint o etap normal a ciclului de dezvoltare a bacteriilor sporogene, deoarece sporogeneza necesit condi ii de mediu similare celor reclamate de celula vegetativ , se deosebe te de celula vegetativ prin mai multe caractere i se comport ca o form de rezisten ce p streaz toate caracterele fenotipice i genotipice ale speciei y Sporul bacterian nu reprezint o form de multiplicare ca la fungi. Rezisten a sporului bacterian la factorii nefavorabili de mediu este deosebit de mare; pot rezista cteva ore la 120 C c ldur umed sau 200C c ldur uscat . S-au eviden iat spori viabili i dup mai bine de 100 ani (Bacillus anthracis). Cromatoforii Cromatoforii sau aparatul fotosintetic reprezint un complex de structuri membranoase implicate n procesul de conversie a energiei luminoase n energie chimic . Plasmidul (fig. 8.13) Plasmidele sunt molecule de ADN independente de cromosomul bacterian localizate n citoplasm . Plasmidele de dimensiuni mari sunt prezente, de obicei, n una sau dou copii, n timp ce plasmidele de dimensiuni mici pot fi prezente n 10 -100 copii. Plasmidele nu sunt esen iale pentru supravie uirea celulei. Multe dintre ele poart gene codificatoare ale anumitor caractere ale celulei gazd . Urm toarele tipuri de plasmide sunt relevante din punct de vedere medical: Plasmide ale virulen ei. Poart determinan i ai virulen ei bacteriei, ex. genele enterotoxinei sau hemolizinei.

12 | P a g e

CURS 8 Plasmide ale rezisten ei. Poart informa ie genetic ce confer rezisten la agen i antiinfec io i.

III. Fiziologia bacteriilor

1. Necesit i nutritive ale bacteriilor Pentru cre terea i multiplicarea lor, microorganismele necesit prezen a n mediu a unor substan e nutritive care s con in att elemente chimice necesare pentru sinteza constituen ilor celulari i activit ii enzimatice, ct i substan e necesare producerii de energie. Aceste elemente se clasific n: 1. bioelemente majore (macroelemente, macronutrien i): C, H, O, N, K, S, Mg, Na, Cl etc. 2. bioelemente minore (microelemente, micronutrien i): Zn, Mo (molibden), Cu, Mn- de i se g sesc ntr-un procent extrem de mic, au rol esen ial n metabolismul bacteriilor, intrnd n alc tuirea unor enzime. Carbonul. Reprezint cam jum tate din greutatea uscat a bacteriilor, fiind elementul principal dintre macrolelemente. Unele bacterii pot folosi C din substan e anorganice (CO2, s rurile acestuia- CaCO3, Na2CO3, etc), iar altele doar din substan e organice (aminoacizi, acizi nucleici etc.) Azotul. Dup carbon, azotul reprezint un element important. Este obligatorie prezen a lui n proteine, acizi nucleici. Majoritatea bacteriilor l folosesc n biosinteze pornind de la NH3, unele ns pot fixa azotul atmosferic, pe care mai apoi l transform n amoniac. Factorii de cre tere. Sunt substan e pe care, n general, microorganismele sunt incapabile s le sintetizeze n cursul metabolismului lor i n absen a c rora multiplicarea lor este imposibil . La unele microorganisme, aceste substan e sunt sintetizate n timpul metabolismului lor i nu sunt necesare n mediu, dar alte microorganisme nu posed aceast capacitate, fapt ce implic prezen a acestor factori n mediu. Factorii de cre tere sunt: vitaminele, aminoacizii i bazele azotate. 2. Tipuri trofice Microorganismele se caracterizeaz printr-o mare diversitate metabolic , multe dintre ele, avnd capacitatea de a se dizolva pe substraturi anorganice, utilizn c i metabolice inaccesibile pentru plante i animale. Exist 2 criterii de baz , n func ie de care microorganismele pot fi clasificate n mai mmulte tipuri nutri ionale: sursa de energie i sursa de carbon. n func ie de sursa de energie: fototrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina chemotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substan ele chimice.
13 | P a g e

CURS 8 Acestea la rndul lor se mpart n: o chemoorganotrofe, care utilizeaz ca surs de energie substan ele organice o chemolitotrofe (gr. litos-piatr , cu sensul de mineral), care utilizeaz ca surs de energie substan ele anorganice n func ie de sursa de carbon: autotrofe: bacteriile care utilizeaz ca surs de carbon CO2 i s rurile sale minerale (compu ii anorganici). heterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca surs de carbon substan ele organice.

Dac se iau n considerare ambele criterii, bacteriile se clasific n: fotoautotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina i ca surs de carbon CO2 i s rurile sale minerale (compu ii anorganici). fotoheterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina i ca surs de carbon substan ele organice chemoautotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substan ele chimice i ca surs de carbon CO2 i s rurile sale minerale chemoheterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substan ele chimice i ca surs de carbon substan ele organice.

3. Cre terea bacteriilor Cre terea este definit n sens biologic, ca procesul de m rire coordonat a tuturor constituen ilor unui organism, ca rezultat al producerii sau ad ug rii de substan nou . La toate speciile unicelulare cre terea are ca rezultat multiplicarea acestora, respectiv cre terea num rului de indivizi. La organismele pluricelulare cre terea are ca efect sporirea volumului, respectiv a taliei individuale. Celulele bacteriene care cresc ca mas i volum nu i m rec propor ional toate dimensiunile. De exemplu, la bacteriile cilindrice, n timpul cre terii echilibrate, diametrul cilindrului r mne fix, n a a fel nct are loc doar cre terea n lungime a celulei. Cre terea nu continu la nesfr it, deoarece la un moment critic este ntrerupt , fiind urmat de diviziunea celular . Cre terea unei popula ii de microorganisme este rezultatul cre terii i diviziunii organismelor individuale care formeaz popula ia respectiv , ntr-un mediu de cultur corespunz tor, bacteriile perfect adaptate au o cre tere echilibrat . Culturile aflate n stare de cre tere echilibrat i men in o compozi ia chimic constant deoarece cre terea biomasei este nso it de o cre tere comparabil a celorlalte componente ale popula iei (proteine, ARN, ADN, ap intracelular ). 4. Multiplicarea bacteriilor Multiplicarea reprezint cre terea num rului de de celule bacteriene, ce se poate realiza prin mai multe mecanisme:
14 | P a g e

CURS 8 1) 2) 3) 4) 5) Diviziune direct (simpl , binar sau sciziparitate) nmugurire Fragmentare Prin spori (de propagare) Conjugarea

1) Diviziunea direct Reprezint forma cea mai r spndit de multiplicare a bacteriilor, constnd n scindarea celulei mam n dou celule fiice, cel mai adesea identice, egale ca m rime (diviziune izomorf ) sau uneori inegale (diviziune heteromorf ). Procesul de diviziune implic 3 etape succesive: a. Apari ia unui sept transversal format din membrana citoplasmatic , ce mparte spa iul citoplasmatic n 2 compartimente; b. Invaginarea peretelui celular la nivelul septului transversal i p trunderea lui centriped , cu separarea lui n dou foi e; n aceast etap celulele fiice astfel formate vor avea to i constituen ii proprii, dar peretele celular r mne comun; c. Separarea celulelor fiice prin scindarea peretului celular comun; n unele cazuri, celulele fiice r mn legate ntre ele prin septul transversal, deoarece peretele celular nu se divide. Diferen ele care apar n proceselde clivaj a septului creeaz tipuri caracteristice, reflectate n forma i modul de aranjare al celulelor bacteriene. Astfel, diplococii sunt forma i prin clavajul incomplet al septului; streptococii se formeaz prin sinteza de septuri succesive orientate paralel. 2) Multiplicarea prin nmugurire nmugurirea reprezint o modalitate particular de reproducere, constnd n formarea pe suprafa a celulei a unui mugure terminal sau lateral, care va deveni o nou celul , ce r mne legat de celula mam printr-un tub de leg tur , la nivelul c ruia apare septul transversal. Celulele rezultate prin nmugurire prezint uneori tendin a de a r mne ata ate e celula mam , formnd colonii cu celule unite prin ramifica iile lor tubulare. Ex. Pasteurela 3) Multiplicarea prin fragmentare Multiplicarea prin fragmentare este o form special de nmul ire vegetativ observat la majoritatea bacteriilor filamentoase (actinomicete). Re eaua de celule se fragmenteaz , masa celular r mne ini ial constant , crescnd doar num rul de celule. Acestea cresc prin acumularea de mas la extremit i. 4) Multiplicarea prin spori Este ntlnit la unele bacterii (filamentoase) care formeaz spori (exospori) la suprafa a re elei de celule (hife) sau n vezicule sporale (sporangii).
15 | P a g e

CURS 8 Sporii pot fi localiza i i n interiorul celulei, asem n tori cu sporii de rezisten .

5) Conjugarea (fig. 8.14)

Conjugarea reprezint transferul de ADN de la o celul donatoare la o celul receptoare, proces ce implic contactul dintre celule. Conjugarea este posibil dac exist 2 componente: plasmidele pentru conjugare i traspozonii. n procesul conjug rii aceste componente sunt ele nsele transferate. Conjugarea este ntlnit mai ales la bacteiile Gram-negative (E. coli)

IV. Diagnosticul de laborator

Infec iile pot fi diagnosticate fie direct, prin detectarea patogenului, fie indirect prin punerea n eviden a anticorpilor. Domeniul microbiologiei care se ocup cu diagnosticarea de laborator a infec iilor se nume te microbiologie clinic . Materialul analizat n laborator este recoltat, n func ie de aparatul n care se localizeaz infec ia. Poate fi recoltat de la nivelul aparatului respirator (de pe amigdale, fluid din sinusuri, secre ii pulmonare), urogenital (urin , secre ii genitale), snge, r ni, abcese, tractul gastrointestinal, LCR, exudate, transudate. Bacteriile au dimensiuni de ordinul micrometrilor, astfel nct este nevoie de amplificarea imaginii de 1000 ori (limita maxim a microsocopului optic). La o astfel de amplificare pot fi detectate bacterii a c ror densitate celular este de minim 104-105/ml. Examinarea microscopic a unui astfel de material necesit realizarea unor preparate: Preparate native: cu sau f r coloran i vitali, sunt utilizate pentru observarea bacteriilor vii. Contrastul redus al unor astfel de preparate face necesar utlizarea unui microscop cu cmp ntunecat sau cu contrast de faz . Preparate colorate: au un contrast mai bun, astfel nct pot fi observate bine la microscopul optic. Bacteriile sunt n prealabil aplicate pe lam , uscate la temperatura camerei i fixate prin c ldur sau alcool metilic. Dup fixare se aplic colorantul. Metodele de colorare pot fi: simple: utilizeaz un singur tip de colorant: albastru de metilen, fucsin fenicat etc. compuse: colora ia Gram (fig. 8.15), colora ia Ziehl-Neelsen colora ii speciale: utilizate pentru a pune n eviden unele elemente structurale ale bacteriilor ( spori, incluziuni cu glicogen, nucleoidul) Microscopia fluorescent : o alt tehnic special . O substan fluorocrom absoarbe lumin cu lungime de und mic i emite lumin cu o lungime de und mai mare. Preparatele colorate cu fluorocromi sunt expuse la lumin cu o anumit lungime de und . P r ile colorate apar clare pe un fond ntunecat. Aceast tehnic necesit un echipament special. Se utilizeaz pentru observarea micobacteriilor (bacilul Koch, leprei). Fluorocromul (izotiocianatul de fluorescein ) este legat de un anticorp care, la rndul lui, se va cupla cu antigene prezente la nivelul celulei bacteriene.
16 | P a g e

CURS 8 Pentru a putea fi studiate i identificate, bacteriile pot fi cultivate n laborator. Medii de cultur (fig. 8.16) Microorganismele se pot dezvolta i n afara mediului lor natural pe medii de cultur artificiale, care reprezint substraturi nutritive (lichide sau solide, organice sau anorganice) ce pot asigura dezvoltarea i multiplicarea lor. Mediile se folosesc pentru izolarea i p strarea sub form de culturi pure a microorganismelor, precum i pentru identificarea speciilor n func ie de propriet ile lor fiziologice. De aceea, ele trebuie s fie ct mai asem n toare cu substraturile naturale. Mediile de cultur trebuie s ndeplineasc anumite condi ii pentru ca specia microbian s se poat dezvolta: y y y s con in substan ele necesare microorganismului precum i ingredientele care s condi ioneze cre terea sa; substan ele trebuie s corespund indica iilor tehnice, s fie cnt rite exact i s fie introduse n recipient n ordinea strict indicat ; s aib gradul de alcalinitate sau aciditate (pH) corespunz tor dezvolt rii microorganismului respectiv i s -i asigure men inerea n limite compatibile cu cre terea lui (prin sisteme tampon); s fie stabil, adic s - i p streze toate calit ile ini iale pe toat durata incub rii; sterilizarea nu trebuie s altereze mediul; acesta trebuie s r mn steril pn n momentul nsmn rii; s asigure condi iile de aerobioz / anaerobioz corespunz toare microorganismului rspectiv; s fie repartizate n recipiente care s mpiedice contaminarea culturii care se dezvolt n ele, att nainte ct i dup ns mn are; s asigure un anumit grad de umiditate.

y y y y y

Clasificarea mediilor de cultur Diversitatea extrem a compozi iei chimice a mediilor de cultur nu permite o clasificare propriu-zis , deoarece suprapunerile apar foarte frecvent. criteriile de clasificare sunt urm toarele: a. Dup provenien : medii naturale: y y de origine vegetal : must de mal , cartof glicerinat etc. de origine animal : lapte, bil , etc

medii artificiale:  lichide: bulionul, apa peptonat  solide: geloza, gelatin

17 | P a g e

CURS 8 b. Dup compozi ie: o medii uzuale: folosite curent n laborator, pentru cultivarea unui num r mare de microorganisme (bulionul, apa peptonat , geloza, gelatina) o medii complexe (compuse): folosite pentru izolarea i cre terea unor microorganisme care se dezvolt slab sau nu se dezvolt pe medii simple (geloz -ser, geloz -snge, bulion-ser etc.) o medii speciale: prin compozi ia lor permit cre erea preferen ial a anumitor specii dintr-un amestec heterogen de microorganisme (dintr-o prob natural ). Aceste medii con in un indicator de pH, un zah r fermentescibil, antiseptice selective, antibiotice: medii de mbog ire, medii selective, medii elective, medii de conservare, medii de identificare. Prepararea mediilor de cultur se face dup re ete, respectnd cu stricte e ordinea ingredientelor i condi iile de sterilitate. Culturi i colonii microbiene Cultivarea microorganismelor se face n medii lichide i pe medii solide: Culivate n medii lichide, microorganismele formeaz culturi (fig. 8.17) al c ror aspect este diferit n func ie de grup, de specie i de propriet ile fizico-chimice ale mediului. Culturile prezint o serie de caracteristici care pot fi utile pentru identificarea speciilor cultivate i pentru eventualele forme de variabilitate: gradul de tulburare a mediului; mirosul pigmentarea culturii

Cultivate pe medii solide, microorganismele se dezvolt sub form de colonii (fig. 8.18). Colonia reprezint o popula ie celular rezultat din cre terea i multiplicarea uneia sau nai multor celule apar innd acelea i specii sau tulpini. Caracterizarea coloniilor implic precizarea urm toarelor aspecte: dimensiunile aspectul marginilor profilul coloniei consisten a transparen a sau opacitatea culoarea i aderen a.

Identificarea bacteriilor Principiul de baz al identific rii bacteriilor este acela de asocia o cultur necunoscut cu locul ei n sistemul de clasificare bazndu-ne pe c t mai multe caracteristici posibile:
18 | P a g e

CURS 8 morfologice: forma, m rimea, colora ia, spori, flageli, capsul fiziologice: determinate cu indicatori din mediu. Sunt disponibile n prezent sisteme miniaturale de cultivare a bacteriilor. Ex. de caractere: enzime ale lan ului respirator, heolizine, lipaze, lecitinaze, enzime ale diverselor c i metabolice (glucidice, proteice etc), produ i finali de metabolism, chimice: ADN, structura peretelui celular, structura antigenic .

Metodele de genetic molecular sunt extrem de importante i n plin ascensiune. Obiectivul principal al acestor metode este identificarea direct a secven elor de nucleotide din materialul analizat. Aceste metode sunt utilizate, mai ales, n cazul bacteriilor care nu pot fi cultivate, sunt greu cultivabile sau prezint un timp de nmul ire foarte lung. Sunt utilizate urm toarele metode: probe de ADN. Din moment ce ADN-ul este dublu catenar, este posibil detectarea secven elor monocatenare cu tehnici de hibridizare ce utilizeaz lan uri monocatenare marcate radioactiv sau nu. Amplificarea. Obiectivul principal este cre terea sensibilit ii pentru detectarea mai u oar a ADN-ului, din moment ce acesta se g se te natural, n cantit i extrem de mici. Cea maim utilizat metod este PCR-ul. *Identificarea prin metode de amplificare i de cipuri genice. n cadrul acestei tehnici, mii de nucleotide specifice bacteriilor patogen umane sunt prezente pe suprafa a unui cip de 2 pe 2 cm. Acest cip este nc rcat cu ADN amplificat din materialul de analiz . Apoi gradul de legare cu secven e complementare este m surat pe baz de fluorescen la un microscop cu laser. Prezen a genelor ce dau rezisten la antibiotice poate fi m surat i ea astfel.* Detec ia direct a antigenelor bacteriene Antigenele specificae pentru anumite specii sau genuri pot fi detectate direct, utiliznd anticorpi. Exemplele includ detectarea antigenelor bacteriene din LCR n meningitele acute purulenete, detec ia antigenelor gonococice din secre iile tractului urogenital. Utilizarea de animale de laborator Testarea pe animale este o tehnic utilizat mai ales n trecut. Pn nu demult, toxinele bacteriene (difteric , tetanic , botulinic ) puteau fi confirmate dora pe animale d elaborator. n prezent, sunt utilizate metode genetice care eviden oiaz genele codificatoare de toxine.

19 | P a g e

CURS 8

V.

Terapia cu antibiotice

Terapia antibacterian specific se bazeaz pe tratarea infec iilor cu agen i specifici mpotriva respectivului patogen. O tr s tur a acestor farmaceutice este toxicitatea selectiv , ce se refer la ac iunea n doze mici asupra bacteriilor, ce nu provoac r u macroorganismului infectat. Cel mai important grup de agen i antiinfec io i este reprezentat de antibiotice. Aceste substan e sunt produse de fungi sau bacterii (de obicei Streptomycetes). Fiecare agent antiinfec ios are un anumit spectru de ac iune, ceea ce nseamn c ac ioneaz asupra unei ni e de bacterii care prezint sensibilitate natural la respectiva substan . Unele antibiotice au un spectru limitat de ac iune (vancomicina). Majoritatea au un spectru mai larg, cum sunt tetraciclinele care afecteaz toate bacteriile. Eficacitatea unui agent antiinfec ios define te modul n care acesta afecteaz popula ia bacterian . Se disting dou efecte de baz : efectul bacteriostatic (reversibilitatea inhibi iei cre terii) i efectul bactericid. Multe substan e pot dezvolta ambele efecte, n func ie de concentra ie, tipul de organism i faza de cre tere. Multe dintre aceste antibiotice au i un efect postantibiotic. Acesta const n leziunile pe care le provoac la nivelul popula iei bacteriene, acesteia trebuindu-i o anumit perioad pentru a se recupera i a- i putea relua activitatea. Acest efect poate dura cteva ore. Un agent bacteriostatic singur nu poate elimina total agentul infec ios. Vindecarea rezult prin efectul combinat al agen ilor antiinfec io i i al sistemului imunitar. n esuturile n care sistemul imunitar este ineficient (endocard), n mijlocul unei infec ii purulente, n care nu mai exist fagocite func ionale sau la pacien ii imunosupresivi, este nevoie de substan e bactericide. Astfel, este important de tiut dac un antibiotic este bactericid sau bacteriostatic. O popula ie bacterian care infecteaz un organism va con ine ntotdeauna cteva celule rezistente. Dac tratamentul este realizat discontinuu, aceste celule duc la posbile rec deri. Tratamentul cu antibiotice poate avea efecte secundare: Efectul toxic se datoreaz lez rii celulelor sau esuturilor gazdei. Trebuie verificat concentra ia sanguin a unor substan e, n timpul tratamentului, n special n cazul substan elor care se elimin dificil (vancomicina). Reac iile alergice Efecte secundare biologice. Ex. nlocuirea sau ndep rtatarea florei normale a organismului. Bacterii problematice. Tulpinile cu rezisten dobndit sunt ntlnite printre enterobacteriacee, stafilococi. Tratamenul acestor infec ii ntmpin adesea dificult i. Aceste bacterii sunt responsabile de majoritatea infec iilor nosocomiale. Cauza inciden ei ridicate n ceea ce prive te rezisten a la antibiotice este variabilitatea genetic pronun at . Cu ct sunt administrate mai des tratamente cu antbiotice, cu att mai mult cre te num rul de tulpini care dobndesc rezisten .
20 | P a g e

CURS 8 Exist dou teste standard de verificare a nivelului rezisten ei bacteriei la antibiotice: Testul seriei dilu iilor: se determin minimul concentra iei substan ei inhibitoare pentru blocarea prolifer rii celulelor bacteriene. Antibiograma (fig. 8.19): const n inocularea bacteriei pe mediu i aplicarea unor discuri mbibate n diferite tipuri de antibiotice. Cu ct raza cercului format n jurul discului repectiv, unde nu se mai dezvolt bacterii, este mai mare, cu att microrganismul repectiv este mai pu in rezistent la antibiotic.

21 | P a g e