Sunteți pe pagina 1din 31

5

Boli produse de germeni din genul Brucella


Radu Moga Mnzat

Genul Brucella cuprinde bacterii Gram negative, necapsulate, nesporulate, imobile, cu dimensiuni mici, parazi i intracelulari. n cadrul genului Brucella sunt recunoscute 6 specii: Br. abortus, Br .melitensis, Br. suis, Br. canis, Br. neotomae i Br. ovis, n cadrul primelor trei specii fiind identificate mai multe biovaruri. Brucelele produc boli infec ioase subacute -cronice la diverse specii de mamifere, inclusiv la om, localizate predominant la organele genitale i manifestate prin avort, numite bruceloze, cu excep ia infec iei cu Br. ovis, pentru care s-a folosit mai mult denumirea de orhiepididimit infec ioas a berbecilor (O.I.B. ), dar pentru care n prezent se acrediteaz tot mai mult denumirea de bruceloz ovin cu Br. ovis. 5.1. BRUCELOZELE

(Brucellosis)
Istoric
n anul 1861 Marston semnaleaz pentru prima dat o boal la om, pe care o denume te febra de Malta. Etiologia bacterian a bolii a fost stabilit n 1887 de David Bruce care, mpreun cu Garuana Scicluna au reu it s izoleze din organele oamenilor mor i un germen pe care l descriu i l denumesc Micrococcus melitensis, dup numele dat de localnici insulei lor (Melita). n 1897, Bang i Stribold au izolat o bacterie asem n toare de la vaci care au avortat, iar n 1914 Traum a izolat o a treia specie asem n toare, de la scroafe care au avortat. Studiind cele trei tulpini, Alice Ewans propune n 1918 constituirea genului Brucella n cinstea lui David Bruce, n care s fie ncadr ate cele trei specii: Brucella melitensis, Brucella abortus i Brucella suis, la care sau ad ugat ulterior celelalte specii. n ara noastr bruceloza a fost identificat pentru prima dat la bovine, de F lcoianu i Mih ilescu n 1923, apoi la porcine de Pop Al., n 1934 i mai trziu (1958) la iepuri i berbeci. La om a fost semnalat de Combiescu n 1939 (25). Orhiepididimita infec ioas a berbecilor a fost semanlat n Romnia de Tudoriu i col. n anul 1958 (43). Contribu ii nsemnate la cunoa terea brucelozelor animalelor, din toate punctele de vedere, dar n mod deosebit cu privire la diagnostic i combatere i -au adus: Bugeac (40, 41), Predoiu (26, 27) i Pop Al. (24, 25).

Brucelozele sunt prezente pe toate continentele, dar nu n egal m sur . Aria de r spndire a brucelozelor pe mapamond a suferit modific ri importante n ultimele decenii, n sensul c bruceloza bovin i ovin , care prezint cel mai mare risc pentru s n tatea omului, i mpotriva c rora s-au luat cele mai drastice m suri, au cunoscut un regres, att n ceea ce prive te aria de r spndire ct i n ceea ce prive te prevalen a. Un recul mai pu in nsemnat s-a nregistrat n bruceloza suin i n bruceloza ovin cu Br. ovis. n Europa, bruceloza bovin se mai nregistreaz n pu ine ri i numai sub form de cazuri sporadice sau mici endemii. n ri ca Fran a, Olanda i Belgia prevalen a

R spndire geografic

80

Boli produse de germeni din genul Brucella

brucelozei bovine, ovine i porcine este n sc dere dar pierderile provocate i permanenta amenin are pentru s n tatea animalelor i omului sunt nc destul de nsemnate (7, 8, 12). Bruceloza ovin cu Br. ovis este ntlnit n mai multe ri riverane M rii Mediterane, iar bruceloza porcin este ceva mai extins n Europa dect bruceloza bovin , dar cu tendin pronun at de regres. Acela i lucru este valabil pentru bruceloza ovin cu Br. ovis. Extinderea brucelozei canine este pu in cunoscut , dar este cert c exist n majoritatea rilor europene. Relativ pu in se cunoa te despre bruceloza animalelor marine, printre care a fost eviden iat recent o seroprevalen de 235% (40). Pe teritoriul Romniei bruceloza ovin cu Br. melitensis nu a fost semnalat niciodat , iar ultimul focar de bruceloz bovin dateaz din anul 1968. Bruceloza suin i orhiepididimita infec ioas se mai nregistreaz relativ rar, iar bruceloza canin este prezent , dar nc nu i se cunoa te extinderea (21).

cu Br. abortus, inclusiv n Romnia, i foarte multe persoane s-au mboln vit i continu s se mboln veasc cu Br. melitensis, n rile unde aceasta exist , mai ales dintre cresc torii de oi i capre, sau consumatorii de lapte i produse lactate de la aceste specii. Riscul de mboln vire cu alte specii de Brucella este mai redus, dar nu neglijabil.

Etiologie
n genul Brucella sunt cuprinse 6 specii de bacterii Gram negative, de form bacilar sau cocobacilar , cu dimensiuni foarte mici (0,5-0,7/0,6-1,5Qm). Sunt germeni nesporula i, necapsula i, nefimbria i i imobili, par ial acidorezisten i, n sensul c o solu ie salin de acid acetic 0,5% nu i decoloreaz n frotiurile colorate prin metoda Ziehl-Neelsen modificat , astfel c p streaz culoarea ro ie a fuxinei, care este primul colorant din tehnica men ionat . Pe u oara acidorezisten a brucelelor se bazeaz i alte metode de colorare a brucelelor, pu in diferite: Kster, Kozlowsky, Stamp i mai ales metoda Kster modificat , care este metoda recomandat de OMS. Brucelele sunt preten ioase la cultivare, necesitnd anumi i aminoacizi i vitamine (32). Sunt aerobe i carboxifile (CO 2 5-10% favorizeaz cre terea), nu cresc pe agarul Mac Conkey. Br. ovis i Br. abortus biotip2 necesit neap rat mbog irea mediilor de cultivare cu snge sau ser, n timp ce celelalte specii pot s creasc , chiar dac nu la fel de bine, i pe medii simple (23). Diferen ierea speciilor n cadrul genului se face pe baza: activit ii ureazice, a necesit ii CO2 la cultivare, producerii de H2S, a cre terii n prezen a tiaminei i a fuxinei bazice, prin aglutinare cu ser monospecific, prin tipizare fagic i prin alte teste, dar nu pe baza ferment rii zaharurilor.

Importan

economic

i sanitar

n efectivele n care apar, brucelozele produc pierderi foarte importante, n special prin avorturi, sc derea prolificit ii i f t ri de produ i subponderali, neviabili, respectiv prin reducerea fertilit ii, astfel c exploatarea unui efectiv cu bruceloz devine cu totul nerentabil . La toate acestea se adaug costurile legate de asanarea efectivelor. Dar brucelozele produc pierderi i atunci cnd nu exist ntr-un teritoriu, prin cheltuielile permanente legate de depistarea i inerea sub supraveghere a efectivelor. Brucelozele au n acela i timp o foarte mare importan sanitar , fiind considerate ca unele dintre cele mai importante zoonoze, respectiv ca unele dintre cele mai temute boli profesionale, foarte mul i medici veterinari c znd n trecut victime infec iei

Boli produse de germeni din genul Brucella

81

La primele trei specii ale genului Brucella au fost identificate dou antigene majore de suprafa : M i A. Au fost denumite astfel pentru c Br. melitensis posed 95% antigen M i 5% antigen A, n timp ce Br. abortus posed 95% antigen A i 5% antigen M. Brucella suis are 40% antigen M i 60% antigen A. Alte dou antigene majore (R i Z) au fost ulterior identificate la celelalte specii. Cercet rile imunochimice au relevat existen a mai multor frac iuni antigenice, dintre care unele sunt comune nu numai speciilor din genul Brucella dar i altor specii, din alte genuri (Yersinia, Francisella, Campylobacter). Au fost identificate 9 biotipuri naturale n cadrul speciei Br. abortus, 3 biotipuri n cadrul speciei Br. melitensis i 5 biotipuri n cadrul speciei Br. suis. Brucelele sunt sensibile fa de o gam destul de larg de antibiotice i chimioterapice. Sensibilitatea cea mai mare o manifest fa de streptomicin , tetraciclin , cloramfenicol, oxitetraciclin , doxycyclin i rifampicin . n timp ce primele dou , asociate, pentru c ac ioneaz sinergic, sunt preferate n medicina

veterinar , ultimele dou sunt preferate n medicina uman (30). Substan ele dezinfectante i antiseptice n concentra ii obi nuite ac ioneaz bactericid asupra brucelelor n timp scurt: fenolul 0,5% n 1 or , sublimatul 1 n 5 min., formolul 0,5-1% n 5-10 min., cloramina 0,25% n cteva min., alcoolul 70-90 imediat, laptele de var 1/20 n 3-4 ore (31, 46). C ldura umed inactiveaz repede brucelele: n 2 ore la 55C i n 5-10 min. la 60C. Suspensionate n lapte sunt distruse n 15 min. la 60C i n 60 sec. la 71C. C ldura uscat ac ioneaz ns mai lent, respectiv n 60 min. la 90-95C (25). Prin refrigerare se conserv 1-2 luni la 0C n lapte i produsele lactate i pn la o lun n carne. n mediul ambiant, la temperatura ordinar rezist : n ln i piei de oaie 6 luni, n lichidele fetale 3 luni, n con inutul intestinal 6 luni, n ap 42 zile, n p mnt 73 zile. La 0C, n produsele patologice (exsudat uterin, placente) rezist 7 luni; sunt rezistente la putrefac ie. Saramurarea are slab ac iune bactericid , dar saramurarea urmat de afumare le distruge (25, 46).

5.1.1. BRUCELOZA

BOVIN Importan

Bruceloza bovin (B.B.) este o boal infecto-contagioas produs obi nuit de Br. abortus, care afecteaz organele genitale i se manifest n principal prin avorturi i tulbur ri de reproduc ie.

Etiologie
Bovinele se infecteaz i fac boala n mod obi nuit cu Br. abortus, dar se pot infecta uneori i cu Br. melitensis. Simptomele produse de aceasta sunt similare cu cele date de infec ia cu Br. abortus.

Bruceloza bovin are o foarte mare importan economic , pentru c foarte mari pot fi pierderile pe care le cauzeaz , prin avorturi, morbiditate perinatal , diminuarea produc iilor, valorific ri neeconomice ale produc iilor, cheltuieli legate de asanare i supraveghere etc. Dar deosebit de mare este i importan a sanitar a bolii, fiind vorba de una dintre cele mai temute zoonoze i n acela i timp una dintre cele mai temute boli profesionale, tributul pl tit de breasla veterinarilor, (inclusiv din ara noastr ) de-a

82

Boli produse de germeni din genul Brucella

lungul timpului acestei boli fiind enorm. Cel mai frecvent medicii veterinari contracteaz aceast boal cu ocazia diagnosticului de gesta ie, a rezolv rii f t rilor distocice i a tratamentului endometritelor.

Caractere epidemiologice
n afar de bovine, la infec ia brucelic cu Br. abortus mai sunt receptive i o serie de alte specii de animale, domestice sau s lbatice, n special rumeg toare, dar i solipede sau porcine. Bovinele adulte ajunse la maturitate sexual sunt mai sensibile dect tineretul, femelele sunt mai sensibile dect masculii, iar femelele gestante sunt mai sensibile dect femelele negestante. Bovinele sunt socotite nu numai cele mai receptive la infec ia cu Br. abortus, dar i singurele gazde i rezervor natural de germeni n natur , a acestei specii. ntr-un efectiv de bovine indemn, bruceloza este introdus aproape invariabil prin achizi ionarea de animale infectate, dar aparent s n toase clinic. Aceste animale, de cele mai multe ori, nu sunt eliminatoare de germeni. Cu ocazia gesta iei urm toare, n momentul expulz rii produsului de concep ie, indiferent dac acesta este avortat, f tat la termen sau prematur, se elimin cantit i mari de germeni, care sunt prezen i n lichidele fetale, placent sau avortoni. Eliminarea de brucele prin secre iile genitale continu timp de 2-3 s pt mni, dup care poate s sisteze complet sau s se reia cu ocazia urm toarei f t ri sau avort. n schimb, eliminarea de brucele prin lapte poate s continue o lung perioad de timp, cu sau f r intermiten e, laptele fiind una dintre cele mai importante surse de infec ie pentru om. n cadrul unui efectiv infectat, infec ia se transmite de la animalul bolnav la animalul s n tos, direct sau indirect, pe cale digestiv , odat cu apa sau furajele, mai

pu in pe cale respiratorie sau conjunctival , prin contact percutan sau pe calea mucoaselor genitale, fie cu brucele provenite din mediul ambiant (contaminat cu ocazia avorturilor sau f t rilor), fie cu sperm infectat , provenit de la reproduc tori bolnavi. De cele mai multe ori femelele i masculii cu bruceloz cronic nceteaz s mai elimine brucele, dar procesul poate suferi reactiv ri spontane. Dinamica difuz rii bolii este de tip endemic, cu debut insidios. n faza preepidemic , primele cazuri sunt sporadice i pot s apar numai dup multe luni de la introducerea n efectiv a unui animal infectat. O dat cu primul, respectiv primele cazuri de avort, sunt diseminate n mediul ambiant i mari cantit i de germeni, cu care se vor infecta alte animale dar, pn cnd boala se va manifesta i la acestea vor trebui s mai treac nc alte cteva luni. Inciden a avorturilor (mboln virilor) cre te n timp, respectiv n faza epidemic ajungndu-se la o prevalen de 40-50%. Deoarece o femel gestant de regul avorteaz o singur dat , rar de dou ori, excep ional de trei ori, n faza postepidemic , dac efectivul este cu circuit nchis, inciden a avorturilor scade pn aproape de zero. Dac ns n aceast faz se achizi ioneaz alte animale, din ferme indemne, are loc o recrudescen epidemiologic , avorturile putnd s reapar n mas , la animalele nou-achizi ionate. Durata ntregului ciclu (faza preepidemic , epidemic i postepidemic ), dac nu se intervine, se poate extinde pe 2-3 ani.

Patogenez
De la poarta de intrare, reprezentat de mucoasa digestiv , mai pu in mucoasele genital , conjunctival i nazofaringian , germenii ajung n sistemul limfatic, ini ia l n limfonodurile regionale, de unde difuzeaz spre alte limfonoduri i sistemul circulator sanguin. O dat cu sngele, n care se

Boli produse de germeni din genul Brucella

83

multiplic , difuzeaz n tot organismul, dar vor r mne viabili i se vor multiplica numai germenii ajun i n peretele uterin, n mamel i n limfonodurile aferente, n timp ce germenii din snge i alte esuturi vor disp rea. n uter, mamel i limfonoduri brucelele pot s r mn n stare de laten mai multe luni. Multiplicarea germenilor este reactivat cnd intervine starea de gesta ie, brucelele avnd o afinitate special pentru uterul gestant, placent i esuturile fetale, datorit con inutului bogat n erithritol al acestora, fa de care brucelele prezint chimiotactism. n uterul gestant brucelele se multiplic excesiv la nivelul vilozit ilor coriale i a carunculilor uterini, n lichidele fetale i esuturile fetale. Rezultatul multiplic rii brucelelor la nivelul placentoamelor este inflama ia necrotico-purulent , cu reducerea leg turilor dintre mam i f t, a aportului nutri ional i de oxigen, avnd drept consecin moartea produsului de concep ie i avortul. Dac infec ia are loc ntr-un stadiu mai avansat al gesta iei, iar fenomenul inflamator-necrotic cuprinde o suprafa cotiledonar mai redus , gesta ia poate fi dus la termen, sau aproape de termen, dar nou-n scutul este subponderal, neviabil. Mai ales n cazul avorturilor mai tardive are loc reten ia total sau par ial a placentei, din cauz c , n paralel cu inflama ia necrotic a placentoamelor are loc i o proliferare conjunctiv , care determin sudarea carunculilor uterini de cotiledoanele placentare. Re inerea unor por iuni de placent ntrzie mult debarasarea uterului de brucele care, n cazul expulz rii placentei n totalitate se produce cam n trei s pt mni. Persisten a n uter a resturilor de placent , devenite astfel corp str in pentru organism, conduce de regul la suprainfec ia local cu germeni piogeni i de putrefac ie, care agraveaz

mult starea animalului. Acestea se pot solda cu st ri toxico-septicemice letale sau cel pu in cu infecunditate, tulbur ri de ciclu sexual i alte tulbur ri de reproduc ie. Vi eii mai tineri se pot infecta, dar fac infec ii pasagere, urmate de apari ia de anticorpi n snge, care de asemenea dispar dup 1-2 luni. La vi eii mai mari, la juninci i la masculi, brucelele pot s r mn n sistemul limfatic n stare de laten mai multe luni, relundu- i multiplicarea i diseminarea cnd intervine starea de gesta ie la femele i maturizarea gonadelor la masculi. n formele cronice, prezen a brucelelor se limiteaz la splin , glanda mamar i limfonodurile aferente acesteia, uterul gestant, testicule, glandele anexe i limfonodurile regionale. Infec ia brucelic induce restructur ri imunobiologice importante. n prima faz are loc o stare de premuni ie, care se transform n imunitate steril dup 3-8 luni la tineret i 10-18 luni la animalele adulte (46).

Tabloul clinic
Perioada de incuba ie poate s varieze ntre 10 i 239 de zile, dependent de starea fiziologic a animalelor i doza infectant . Este mai scurt dac infec ia se produce la un animal gestant, aproape de termenul de f tare i este mai lung dac infec ia a fost contractat ntr-o faz timpurie a gesta iei. n cercet rile experimentale ale lui Thomsen citat de Pop (43), perioada de incuba ie a fost de 239 zile cnd infec ia s-a produs n ziua montei fertile. Principala manifestare a brucelozei la vaci este avortul. De cele mai multe ori avortul se produce n ultima treime a perioadei de gesta ie. Uneori avortul este mai timpuriu, n ultimele 3-5 luni de gesta ie, sau gesta ia este dus pn n preajma termenului normal de f tare, cnd

84

Boli produse de germeni din genul Brucella

se produce f tarea prematur de vi ei subdezvolta i i neviabili. Avortul este precedat adesea de unele semne premonitorii, prezente i n cazul f t rilor normale: tumefac ia labiilor vulvare i congestia mucoasei vaginale, secre ia vaginal crescut , cu aspect sticlos, uneori de culoare ro ietic , tumefierea mamelei i secre ie mamar cu aspect colostral i miros fetid. n cazul avorturilor mai timpurii se elimin de regul fetusul mort, cu nvelitori cu tot, animalele nu se resimt prea mult i la ns mn area f cut la un nou ciclu pot s r mn din nou gestante, de cele mai multe ori f r s mai avorteze. Alteori avortul este urmat de infecunditate temporar sau definitiv . Dac avortul se produce ntr-o faz avansat a gesta iei se produc frecvent reten ii placentare care, pe lng perturbarea ciclului hormonal se soldeaz i cu complica ii endometriale de suprainfec ie, respectiv cu st ri septicotoxiemice. O manifestare notabil , dar mai rar , este i mamita brucelic . Chiar dac nu ntotdeauna se produce o inflama ie evident a compartimentelor mamare, la examenul secre iei mamare se constat modific ri organoleptice, chimice, citologice i bacteriologice proprii mamitelor infec ioase. Tot cu o frecven redus pot s apar i alte manifest ri, ca: artrite, tendovaginite, bursite i abcese n esutul conjunctiv subcutanat. Artritele, mai ales la nivelul buletului, carpului, tarsului sau jaretului, ca i tenosinovitele de la nivelul metacarpului i metatarsului determin chiop turi. La masculi bruceloza evolueaz cel mai adesea asimptomatic. Uneori, mai ales n formele acute, se remarc , totu i, edeme ale scrotului i orhite, cu m rirea n volum a testiculelor i epididimelor, cu sensibilitate local , reducerea libidoului, tumefierea i sensibilitatea veziculelor seminale,

fluidifierea spermei. Aceste manifest ri se estompeaz , pe m sur ce boala se cronicizeaz .

Tabloul morfopatologic
Diseminarea germenilor pe cale limfatic determin inflama ia acut a limfonodurilor, care apar tumefiate, cu medulara slab delimitat de cortical i cu prezen a de hemoragii discrete sau ntinse. Sinusurile sunt infiltrate cu neutrofile, eozinofile i plasmocite. Leziunile principale, avnd caracter inflamator necrotic, sunt localizate n special la nivelul uterului gestant, a placentei, testiculelor i veziculelor seminale, precum i n limfonoduri. Aspectul exterior al uterului este normal i, uneori i aspectul placentei este normal. n cazurile tipice, n spa iile intercotiledonare i face apari ia un exsudat de culoare galben-murdar, vscos, cu flocoane pultacee (15). nvelitorile fetale, ngro ate din cauza infiltra iei cu un fluid gelatinos, galben-murdar, sunt acoperite cu un exsudat inflamator coagulat, con innd fibrin i diverse celule, n special celule epiteliale i leucocite. Unele cotiledoane n ntregime, altele par ial, apar necrozate, acoperite cu un exsudat vscos, de culoare maronie. Aparenta aderen dintre vilozit i i carunculi, care mpiedic desprinderea placentei, cel pu in pe anumite por iuni este mai mult rezultatul unei prolifer ri conjunctive locale, a infiltra iei fibrocitare printre celulele cotiledonare i vilozitare i a fuziunii celor dou structuri celulare. Fetusul este edema iat, cu lichid serosangvinolent n esutul conjunctiv subcutanat i n cavit ile seroase, uneori cu focare necrotice i granuloame cu celule gigant n ficat, splin , rinichi, pulmoni i limfonoduri (15). Glanda mamar nu prezint leziuni macroscopice. La examenul histologic se pot constata, de i nu n toate cazurile: focare de

Boli produse de germeni din genul Brucella

85

infiltra ie limfoplasmocitar i mici granuloame, cu aspect de mamit intersti ial nesupurativ , care comprim acinii glandulari, ceea ce poate conduce, n final, la atrofia i chiar necroza parenchimului mamar (25). La nivel testicular, se g sesc leziuni distrofice, vacuoliz ri i necroze ale epiteliului tubilor contor i care conduc la obstruarea tubilor i suprimarea spermatogenezei. Peritubar se pot g si infiltra ii limfoplasmocitare i cu polimorfonucleare neutrofile, sub form de man oane (25). Parenchimul testicular afectat are aspectul unei mase cazeoase, compus din exsudat fibrinos, celule parenchimatoase degenerate i celule inflamatorii care, n unele cazuri, poate s ajung s substituie n ntregime parenchimul testicular. Procese patologice similare se pot g si i n epididim, chiar dac n m sur mai mic dect n testicul: focare de proliferare limfohistiocitar i supurative, granuloame, fibroze. Mai pu in frecvente la bovine dect la porcine i ovine sunt leziunile osteoarticulare, la nivelul vertebrelor toracolombare, a sinoviilor, a burselor seroase i tecilor tendinoase care sufer inflama ii purulente i infiltra ii limfogranulocitare i fibrocitare, cu formarea de granuloame care, ntr-o faz mai avansat , pot suferi de asemenea o transformare purulent .

Diagnostic
La bovine bruceloza trebuie suspicionat ori de cte ori apar avorturi, mai ales dac sunt n a doua jum tate a gesta iei, iar la tauri ori de cte ori apar orhite, nso ite sau nu de manifest ri, dintre cele prezentate anterior: reten ii placentare, tulbur ri de ciclu, artrite, bursite etc. Diagnosticul diferen ial trebuie s aib n vedere celelalte avorturi infec ioase (campilobacterian, salmonelic, chlamydian,

listeric, leptospiric, rickettsian, IBR i altele), precum i avorturile neinfec ioase (mecanice, toxice, alimentare i parazitare, n special trichomonotic) i avorturile micotice. Pentru confirmare se recurge n toate cazurile la examenul de laborator care urm re te dou obiective: a. punerea n eviden a agentului etiologic; b. punerea n eviden a anticorpilor. Ca teste de teren, pentru inerea sub observa ie a efectivelor, se poate recurge la: c. testul inelar cu lapte; d. testul alergic. a. Pentru eviden ierea agentului etiologic se preleveaz por iuni de placent , de preferin cotiledoane cu leziuni, mucus vaginal i avortonul sau cel pu in stomacul ligaturat la ambele orificii, pulmonul i splina, eventual colostru, lapte, sperm , lichid de higrom (39). n laborator se execut examene bacterioscopice, cu metode de colorare specifice i ncerc ri de izolare a germenilor pe medii de cultur speciale, n atmosfer mbog it cu CO2. Frotiurile, f cute de pe cotiledoane placentare, din pulmonii fetali, ficat, con inut abomasal sau secre ii vaginale, se fixeaz normal la cald, sau cu alcool etilic i se coloreaz prin colora iile Ziehl-Neelsen sau Kster modificate, prin Gram sau Machiavello, sau se examineaz n ultraviolete dup ce au fost tratate cu fluorocrom (IF). n cazurile pozitive se g sesc germeni slab acidorezisten i (respectiv fluorescen i), cu morfologia specific , situa i intracitoplasmatic. Trebuie evitate eventualele confuzii cu Coxiella burnetti (tot parazit intracelular) i cu Yersinia (n cazul IF, din cauza nrudirilor antigenice).

86

Boli produse de germeni din genul Brucella

Izolarea n cultur pur a Br. abortus reu e te cel mai bine din stomac, pe agar cu ser i dextroz . n cazul probelor probabil supracontaminate (placent , secre ii vaginale etc.), la mediul de cultur se adaug , ca inhibitori, bacitracina 25 g/ml, acid nalidixic 5 g/ml, nistatin 100 g/ml, polymixin B 5 g/ml, cicloheximidin 100 g/ml i vancomycin 20 g/ml. Rezultate foarte bune se ob in i pe bulion cu ser i dextroz , bulion tripton -soia, sau bulion special pentru Brucella, cu adaos de inhibitori (48). Incubarea se face la 37C, n atmosfer cu 10% CO2, timp de pn la 6 s pt mni. Coloniile suspecte se examineaz prin aglutinare, cu seruri specifice antiBrucella abortus S i R sau cu seruri monospecifice pentru epitopii A i M. Identificarea sumar i diferen ierea coloniilor S i R se face suspensionnd coloniile suspecte n solu ie apoas de acriflavin 0,1%: coloniile S dau suspensie omogen , coloniile R dau depozit (48). Pentru identificarea definitiv , tulpinile respective se trimit unui laborator autorizat pentru identificarea germeilor din genul Brucella, prin metode men ionate la capitolul Etiologie. ntruct n multe ri continu s se foloseasc vaccinuri vii n profilaxia brucelozelor, se pune i problema diferen ierii tulpinilor vaccinale de cele virulente. Tulpina B19 de Brucella abortus se recunoa te pe baza faptului c nu necesit CO2 la cultivare, cre terea este inhibat de 3 g/ml benzylpenicilin n mediu de cultur , sau de 2 g/ml albastru de thionin i este slab virulent . Tulpina Rev1 de Br. melitensis se caracterizeaz prin cre tere lent pe mediile de cultur adecvate, nu cre te deloc n prezen a fuxinei 20 g/ml, a thioninei 20 g/ml, a benzylpenicilinei 3 g/ml, cre te n

prezen a streptomicinei i este slab virulent pentru cobai i oareci (48). b. Testele serologice sunt larg utilizate n practic pentru diagnosticul brucelozei bovine, att n scopul confirm rii unor suspiciuni, avnd n vedere c evolu ia obi nuit a bolii este subacut sau cronic , ct i pentru identificarea indivizilor infecta i, dar s n to i clinic, din focarele de boal , precum i pentru inerea sub observa ie a efectivelor s n toase. n decursul timpului au fost verificate i recomandate un num r foarte mare de teste serologice, dintre care s-au dovedit mai avantajoase i sunt ast zi recomandate de Oficiul Interna ional al Epizootiilor (48): testele de aglutinare, reac ia de fixare a complementului i ELISA, n diverse variante. Dintre testele de aglutinare, n primul rnd este recomandat testul cu roz bengal (TRB). Se execut pe pl ci de sticl , pe pl ci de email sau pe folii speciale din plastic. Se amestec 0,03ml ser de cercetat cu o cantitate egal de antigen colorat cu roz bengal. Se omogenizeaz cu aten ie timp de 4 minute i se observ aglutinarea care, dac se produce, indic o reac ie pozitiv . Testul este socotit ca foarte sensibil, de i sunt posibile i reac ii false, att pozitive ct i negative. Probele reac ionate pozitiv se reverific prin R.F.C. Animalele vaccinate reac ioneaz pozitiv la TRB. Testul de aglutinare pe pl ci, cu antigen tamponat (TAPAT), de asemenea recomandat de O.I.E., este asem n tor cu primul, dar folose te alt antigen, alte propor ii ntre ser i antigen (0,08ml+0,03ml), iar citirea se face dup ce pl cile au fost alternativ: omogenizate, incubate nc 4 min. i apoi din nou omogenizate. Ca i n cazul TRB, TAPAT este apreciat ca foarte sensibil, dar poate furniza i rezultate false, n ambele sensuri. Din aceast cauz , reac iile pozitive trebuie

Boli produse de germeni din genul Brucella

87

verificate prin R.F.C. sau cu un alt test foarte specific. Reac ia de aglutinare lent n tuburi (RAL), conceput de Wright, s-a folosit pe scar larg n Romnia de foarte mult vreme i se mai folose te nc , n special pentru inerea sub observa ie a efectivelor (screening). Prezint unele neajunsuri, cum ar fi consumul mare de antigen i de munc , f r a furniza un rezultat cert, rezultatele pozitive sau dubioase trebuind apoi s fie verificate prin R.F.C. Cel mai mare neajuns este legat de propor ia relativ mare de rezultate fals negative i fals pozitive pe care le furnizeaz . Reac ia de fixare a complementului a fost i a r mas cel mai precis test serologic pentru confirmarea diagnosticului de bruceloz . R.F.C., conceput de Bordet i Genou, a fost adaptat pentru diagnosticul unui num r mare de bacterioze i viroze (20). Adaptarea se refer la stabilirea modului de preparare i titrare a reagen ilor, dilu iile i cantit ile introduse n reac ie, eventual timpii de lucru i mai ales modul de citire i interpretare a rezultatelor, respectiv stabilirea pragului minim de semnifica ie diagnostic . Se poate executa n tuburi Wassermann, n pl ci standard cu godeuri (macrometoda) sau pl ci de microtitrare, ultima tehnic fiind cea mai convenabil . Principiul metodei r mne neschimbat, indiferent de tehnica utilizat . Se poate executa la cald (37C) sau la rece (4C), ultima variant fiind recomandat n multe tehnici. Antigenul, serul hemolitic i alexina sunt produse biologice standardizate. Suspensiile de eritrocite se prepar ex tempore. Probele pozitive ob inute de la bovine infectate cu Br. abortus se pot diferen ia de probele pozitive provenite de la animalele vaccinate, dac R.F.C. se execut dup cel pu in 12 luni de la ultima vaccinare.

Testul ELISA a fost adaptat mai recent pentru diagnosticul brucelozei bovine i este recomandat n manualul de standarde de diagnostic al O.I.E. (48) ca posibil metod alternativ a R.F.C. pentru schimburile interna ionale. n varianta pentru testarea probelor de ser sau de lapte pe baza IgG rezultatele sunt echivalate cu cele ob inute prin R.F.C., iar varianta pe baz de IgM se dovede te chiar mai sensibil , dar mai pu in specific . Rezultatele i mai bune n ceea ce prive te sensibilitatea i specificitatea se ob in, dup Samartino i col. (34) prin ELISA de competi ie, care permite o mai bun diferen iere a animalelor vaccinate cu B19 de cele infectate natural. Mai recent au fost verificate pentru diagnosticul B.B., cu rezultate bune, testul PCR (10) i testul de polarizare a fluorescen ei (33). c. Testul inelar cu lapte (TIL) este ncadrat tot ntre testele serologice, deoarece are la baz tot reac ia antigen-anticorp. Antigenul este standardizat iar anticorpii se g sesc n laptele provenit de la vacile cu bruceloz . Are avantajul c este u or de executat, elimin complet stresul provocat animalelor cu ocazia prelev rii probelor pentru alte teste serologice, se poate executa n laborator sau n ferm , pe probe individuale sau pe probe comasate din lapte. Exist mai multe tehnici (cu lapte proasp t sau refrigerat, la cald sau la temperatura mediului etc.) dar principiul este acela i: antigenul colorat standardizat se cupleaz cu anticorpii i complexul format este antrenat la suprafa , odat cu gr simea. Dac n lapte nu exist anticorpi, antigenul colorat r mne n lapte, pe care l coloreaz , inelul de smntn r mnnd de culoare alb . Sunt posibile reac ii false, att negative, ct i pozitive (26). Animalele vaccinate dau reac ii pozitive la TIL. Testul are mai mult valoare orientativ , toate reac iile pozitive trebuind s fie

88

Boli produse de germeni din genul Brucella

verificate prin R.F.C. sau ELISA. Este util mai ales pentru sreening. d. Testul alergic, const n inocularea strict intradermic a unei substan e revelatoare standardizate, extras din Br. abortus, cunoscut la noi sub numele de brucelin . Este o substan purificat , care nu induce alergie, putnd fi repetat f r restric ii. Rezultatul se cite te dup 48-72 ore, pe baza reac iei locale. Testul poate furniza i rezultate pozitive false, din care cauz animalele pozitive alergic trebuie verificate i prin R.F.C. (4). Prin testul alergic pot fi discriminate n mare m sur animalele cu reac ii serologice false de cele cu reac ii serologice datorate infec iei brucelice autentice, f r a induce starea de alergie cu ocazia test rii, dar nu pot fi diferen iate reac iile postinfec ioase de cele postvaccinale (32). Prevenirea apari iei B.B. se face, n toate rile, prin m suri generale, iar n unele dintre rile unde boala exist se practic i m suri imunoprofilactice. Pentru rile indemne, de cea mai mare importan este p strarea indemnit ii eptelului, n special prin supravegherea strict a importurilor de animale i a statusului efectivelor proprii. Importurile de bovine n ara noastr se fac numai cu aprobarea A.N.S.V., din ri, respectiv din efective, care atest cu certificate de s n tate c sunt libere de B.B. n timpul carantinei profilactice, bovinele importate sunt supravegheate clinic i controlate serologic prin TRB, un test de aglutinare (TAPAT, RAL) sau prin R.F.C., cel mai devreme n a doua s pt mn de carantin (se folosesc probele de snge care au fost trimise i pentru L.E.B.). i bovinele achizi ionate din ar sunt carantinate i trebuie s fie nso ite de certificat sanitar veterinar care s ateste c au fost examinate

Profilaxie

serologic cu cel mult 30 de zile nainte de transfer i c provin din efective indemne de B.B. Cu toate acestea, n timpul carantinei profilactice, care este de 60 zile, acestea vor fi examinate nc o dat serologic, nainte de comasarea cu efectivul beneficiarului. n scopul depist rii timpurii a unui focar de B.B. se in sub observa ie clinic i serologic i efectivele proprii. n acest scop se examineaz bovinele de reproduc ie n vrst de peste 12 luni, dup un anumit algoritm, stabilit de forurile tutelare, n func ie de iminen a riscului de (re)apari ie a bolii. O aten ie deosebit trebuie acordat cazurilor de avort, f t ri premature, leziuni extragenitale suspecte de bruceloz , care trebuie recoltate nu mai devreme de 2-3 s pt mni de la avort sau f tare. Trimiterea de probe pereche recoltate la dou i trei s pt mni de la avort este i mai convenabil . n unele ri, dintre cele n care B.B., continu s fie o problem , se practic vaccinarea vi eilor, preferabil la vrsta de 36 luni pe cale s.c. cu tulpina atenuat vaccinal B19 sau la orice alt vrst , pe cale conjunctival . n ambele cazuri durata protec iei conferite este semnificativ mai mare dect durata reactivit ii serologice postvaccinale, care n general nu dep e te 9-12 luni. n intervalul de timp care reprezint diferen a dintre cele dou durate, pot fi depistate prin examen serologic animale bruceloase i diferen iate fa de cele vaccinate antibrucelic. La neajunsul c animalele vaccinate reac ioneaz un timp la testele serologice la fel ca animalele vaccinate, ceea ce pune grele probleme inerii sub observa ie prin screening serologic a efectivelor se adaug i neajunsul c sub 1% din vacile vaccinate fac infec ii mamare i devin eliminatoare prin lapte a tulpinii B19. Acest neajuns pare a fi nl turat n ultimul timp prin utilizarea unui

Boli produse de germeni din genul Brucella

89

nou vaccin, preparat dintr-o mutant deficitar a Br. abortus numit RB51 care induce foarte bun protec ie fa de infec ia cu Br. abortus (imunitate mediat celular) dar nu i anticorpi detectabili prin reac iile serologice curent folosite, ceea ce permite diferen ierea probelor de ser provenite de la animalele infectate de cele provenite de la animalele vaccinate. Acestea din urm pot fi totu i detectate serologic, dar prin R.F.C. cu antigen preparat chiar din tulpina RB51 (17). Vaccinarea antibrucelic a taurinelor cu tulpina B19 a fost verificat i n ara noastr de Ionic i col. (14), ca o alternativ de rezerv pentru cazul c programul de eradicare a B.B. n Romnia s-ar fi dovedit ineficient.

B.B. este o boal infec ioas declarabil oficial, supus m surilor de carantin de gradul III, inclus n lista B a Oficiului Interna ional al Epizootiilor. Bazele programului de combatere a brucelozei au fost puse de Bang, nc din secolul trecut, care a stabilit principiile care i i poart numele i care au fost aplicate n numeroase ri i chiar extrapolate n combaterea i a altor bolii, cu difuzibilitate lent , n care exist metode precise de diagnostic individual. n esen , aceste programe urm resc asanarea efectivelor, prin:  eliminarea imediat din efectiv a animalelor bolnave;  depistarea ct mai timpurie a animalelor nou-infectate prin controale serologice periodice i eliminarea lor;

Combatere

 oprirea montelor naturale;  dezinfec ii curente. Avnd n vedere c Romnia se num r printre primele ri din Europa care au lichidat B.B. (1968) precum i riscurile deosebite din punct de vedere economic i sanitar pe care le-ar presupune reapari ia acestei boli, Legea 66/1974 prevede m suri deosebit de drastice pentru o asemenea eventualitate, n vederea asan rii imediate. Programul de asanare trebuie s prevad lichidarea ntregului efectiv, prin t iere n abator. Se vor controla serologic i alte animale, bovine sau din alte specii, la care se apreciaz c a fost posibil difuzarea infec iei cu Br. abortus. Depopularea total este urmat de o dezinfec ie riguroas a tuturor suprafe elor contaminate: ad posturi, padocuri, teren, ustensile, precum i de deratizare. Din fermele contaminate, pn la asanare, se pot da n consum condi ionat, dup sterilizarea termic (cu anumite excep ii), carnea i produsele comestibile, precum i laptele. Boala se consider lichidat i m surile de carantin se ridic atunci cnd toate animalele din ferm au fost abatorizate i au fost efectuate trei dezinfec ii generale consecutive, la interval de o lun , dup care ferma poate fi repopulat . Pe toat durata focarului, medicului veterinar i revine obliga ia efectu rii unor instructaje de protec ia muncii cu ngrijitorii i personalul expus infec iei brucelice, inclusiv personalul din abator, n cursul c ruia se explic modul n care boala se poate transmite la om i care sunt m surile de protec ie necesare.

5.1.2. BRUCELOZA

PORCIN

Bruceloza porcin (B.P.) este o boal infecto-contagioas , produs de Brucella suis, care afecteaz porcinele domestice i

s lbatice, i alte specii de animale ajunse la maturitate sexual , manifestat n principal prin avorturi, tulbur ri de reproduc ie,

90

Boli produse de germeni din genul Brucella

abcese subcutanate, orhiepididimite.

artrite,

orhite

R spndire
Bruceloza este r spndit n toat lumea, dar mai mult n Asia i mai pu in n Africa, dect n Europa i America. Marea Britanie, Scandinavia i alte cteva ri sunt indemne. n celelalte ri europene, printre care i Romnia, inciden a bolii este relativ redus i se fac eforturi sus inute n vederea eradic rii.

Importan

economic

i sanitar

Atunci cnd apare ntr-un efectiv, B.P. produce pierderi deosebit de mari, prin avorturi, tulbur ri de reproduc ie i morbiditate. Combaterea bolii se face prin lichidare, ceea ce nseamn alte pierderi. Importan a sanitar este de asemenea foarte mare, pentru c dou dintre biotipurile de Br. suis, respectiv biotipul 1 i 3, sunt foarte patogene pentru om, fiind considerate chiar mai periculoase dect infec ia cu Br. abortus, dar boala la om nu apare de regul prin consum de produse infectate, ci la cresc tori, muncitorii din abatoare, veterinari. Cu rare excep ii, la om este deci o boal strict profesional .

rumeg toare din Canada, Alaska i Siberia, iar biotipul 5 este patogen pentru oareci. Biotipurile 1 i 3, pentru care gazda natural este numai porcul, sunt r spndite n lume, mai ales n America, dar nu n Europa. Biotipul 2, larg r spndit n Europa i slab patogen pentru om are ca gazde naturale, n afar de porcii domestici i s lbatici, i unele specii de iepuri s lbatici la care produce o boal mortal . Din aceast cauz B.P. este socotit boal cu focalitate natural , greu de eradicat. Diferen ierea ntre biotipuri se face pe baza unor teste metabolice i de cromobacteriostaz . Br. suis se cultiv bine pe medii de cultur cu dextroz , ser, tripticaz , infuzie cu cartof, dar nu necesit CO2 la izolare i cultivare.

Epidemiologie
n mod obi nuit B.P. apare la porcii ajun i la maturitate sexual , care se mboln vesc de la al i porci, cu sau f r semne clinice de boal , cu care au venit n contact direct, ceea ce se ntmpl cel mai adesea ca urmare a achizi ion rii de porci infecta i. Transmiterea se face de regul pe cale digestiv , prin consum de furaje sau ap contaminate, sau pe cale genital . Sursa primar care contamineaz apa sau furajele o reprezint nvelitorile i lichidele fetale, avortonii i secre iile vaginale postavortive. Purceii mici se pot infecta i prin supt. Mucoasa conjunctival i nazal sau pielea lezionat pot fi de asemenea por i de intrare pentru germeni. n acela i timp B.P. este i o boal veneric . Ea se poate transmite prin materialul seminal infectat, n timpul montei naturale sau artificiale. Comportamentul Br. suis fa de agen ii fizici, chimici i medicamento i nu prezint particularit i

Etiologie
Porcinele se mboln vesc obi nuit cu Br. suis, pentru care porcul este gazda natural . Cu Br. suis se pot infecta accidental i alte specii de animale (cai, bovine, cini, p s ri), cu sau f r exprimare clinic . Porcii pot fi, la rndul lor, gazde accidentale pentru alte specii de Brucella. De notat ns c porcinele se mboln vesc numai cu Br. suis, n timp ce cu alte specii de Brucella porcii fac numai infec ii asimptomatice. Dintre cele 5 biotipuri de Br. suis numai primele trei sunt specifice porcilor, biotipul 4 (ncadrat la un moment dat ca Br. rangiferii) se ntlne te la reni i la unele

Boli produse de germeni din genul Brucella

91

fa de comportamentul altor specii ale genului, descrise la partea general . Cnd B.P. apare pentru prima dat ntrun efectiv, avorturile apar n mas , afectnd pn la 50-60% din scroafele i scrofi ele gestante, dar ulterior num rul lor scade mult, aproape la zero. O recrudescen a avorturilor apare mai trziu dac se introduc n efectiv noi scrofi e sau scroafe, din efective indemne sau dac intervine un nou factor favorizant.

Patogenez
De la poarta de intrare, reprezentat cel mai adesea de o mucoas , pe c i limfatice traversnd limfonodurile regionale, brucelele se ndreapt spre vasele sanguine periferice, pentru a intra n torentul circulator. Bacteriemia apare dup 1-2 s pt mni, pn cel mai trziu la 5-6 s pt mni de la infec ie i dureaz aproximativ 5 s pt mni, dup care mai poate reap rea cu intermiten , pentru intervale scurte de timp, pe o durat de cteva luni. Brucelele circul prin snge nglobate n citoplasma neutrofilelor i macrofagelor, la ad post de factorii umorali de ap rare ai organismului. n aceast faz brucelele ajung n toate esuturile, dar nu r mn cantonate dect n limfonoduri, mai ales n cele mandibulare, faringeale, gastrohepatice i iliace, n peretele uterin, placent , splin , glanda mamar , ficat i vezica biliar . Manifestarea brucelozei prin simptomele caracteristice este urmat la femele, de cele mai multe ori, de vindecare, cu pozitivare serologic i alergic i cu sterilizare bacteriologic , dar nu n toate cazurile. Din p cate unii indivizi r mn purt tori permanen i de germeni, n special n esutul limfatic, mamel i uter, reprezentnd un mare pericol epidemiologic, prin riscul de rediseminare bacteriemic pe care l implic . La masculi acest risc este mai mare dect la femele.

De cele mai multe ori, apari ia B.P. ntr un efectiv nu este sesizat clinic mult vreme. La un moment dat proprietarul sesizeaz apari ia avorturilor ntr-o propor ie crescnd , infertilitate, repetarea c ldurilor i ceva mai trziu, orhite, chiop turi, parapareze. Avorturile pot s survin ncepnd din luna a doua de gesta ie sau chiar mai devreme. n aceste cazuri este vorba de avorturi embrionare, cu reluarea ciclurilor sexuale i repetarea c ldurilor. Asemenea evolu ii au loc dac infec ia s-a produs n timpul montei. Dac infec ia s-a produs dup mont , avortul se poate produce n oricare faz a gesta iei. Dac eliminarea progenilor are loc foarte tardiv, respectiv cu numai cteva zile nainte de termen, nici nu mai vorbim de avort ci de f tare prematur dar, n aceste cazuri, al turi de unii produ i cu aspect normal sunt elimina i i produ i normal dezvolta i dar mor i, sau vii dar subponderali sau mumifia i. Avorturile timpurii pot s treac complet neobservate, n timp ce avorturile care se produc n treimea mijlocie sau n ultima treime a gesta iei pot fi precedate de semne prodromale: stare general rea, edem al mamelei i vulvar. Dup avort scroafele nu se resimt prea mult i se remit complet relativ repede, cu excep ia ctorva cazuri care mai prezint scurgeri vaginale timp de 1-2 s pt mni, dup care i acestea reintr n c lduri. Urm toarea gesta ie de obicei decurge normal. La masculi infec ia brucelic este mai evident manifestat clinic i mai persistent n timp, dar nici la vieri nu se exteriorizeaz infec ia n toate cazurile. La nceput apare o alterare a st rii generale, nso it de febr , care trec de obicei neobservate, dup care se pot remarca st ri de infertilitate, reducerea libidoului, orhite i orhiepididimite care din acute devin cronice, iar mai trziu pot s apar chiar atrofii testiculare. i la vierii la

Tabloul clinic

92

Boli produse de germeni din genul Brucella

care localizarea genital nu este aparent clinic, infec ia poate fi totu i instalat n testicule i veziculele seminale, infectnd sperma. n afar de localiz rile genitale, la porcine mai frecvent dect la alte specii, att la scroafe ct i la vieri, att la adul i ct i la tineret sau chiar la sugari pot s apar artrite purulente, la nivelul membrelor i articula ilor intervertebrale mai ales n regiunea lombo-sacral , nso ite de tulbur ri locomotorii i paraplegie. La porcine nu sunt rare abcesele subcutane, n limfonoduri i mai ales n mamel la scroafe.

i chiar intraosos, cu localizare mai frecvent i destul de caracteristic , n vertebrele lombare i sacrale (spondilita brucelic ).

Diagnostic
La porcine bruceloza trebuie s fie suspicionat ori de cte ori apar avorturi i alte tulbur ri de reproduc ie, manifest ri care trebuie s determine diagnosticianul s examineze atent vierii i s fac o anchet epidemiologic atent . Diagnosticul diferen ial trebuie s aib n vedere leptospiroza, sindromul SMEDI i boala lui Aujeszky. Odat survenit suspicionarea de B.P., confirmarea diagnosticului nu ridic probleme deosebite. Pentru confirmarea diagnosticului stau la dispozi ie metode:  bacteriologice  serologice  alergice Se trimit la laborator avortoni, placent , limfonoduri, testicule cu leziuni, organe cu leziuni, abcese, secre ii uterine, toate ct mai proaspete. n laborator se execut frotiuri directe, colorate prin metode elective, ns mn are pe medii adecvate i teste de identificare, a a cum s-a prezentat n partea general . n mod deosebit se preteaz pentru izolarea germenului: avortonii, limfonodurile i gonadele de la animale sacrificate de necesitate i articula iile cu leziuni, care permit izolarea brucelelor, adesea chiar n cultur pur , pe medii speciale, dar n atmosfer normal . n practic diagnosticul serologic este cel mai la ndemn i cel mai utilizat, de i nu i cel mai perfect, n primul rnd din cauz c nu to i porcii infecta i posed anticorpi la titrurile detectabile. Tot din acest motiv testele serologice sunt utile nu att pentru diagnosticul individual, ct mai ales pentru diagnosticul de efectiv. Datorit contactului

Tabloul morfopatologic
La femele se pot g si chi ti ovarieni i uterini, endometrit brucelic miliar i, prin contiguitate, inflama ia supurativ difuz a cotiledoanelor i membranelor placentare. La vieri se g sesc leziuni de gravitate variabil n testicule: focare necrotice de ntindere mai mare sau mai mic , granuloame, abcese, degenerarea parenchimului. Uneori leziunile inflamatorii i necrotice cuprind toat structura testicular intern care, eliminat par ial, las n loc adev rate caverne. n ficatul avortonilor, dar i al porcilor adul i se pot g si granuloame miliare, care con in celule gigante, epitelioide, neutrofile i limfocite, cu centrul caezos sau necrotic, care se extinde tinznd s cuprind granulomul n ntregime i care sunt nconjurate, par ial sau total, de o capsul fibroas (38). Unele limfonoduri sunt m rite n volum, cu noduli miliari. Sunt frecvente artritele i periartritele serofibrinoase, localizate la nivelul epifizelor oaselor lungi sau intervertebral, precum i artritele i periartritele difuze sau ncapsulate, sub form de abcese. Abcese ncapsulate se pot g si i n esutul conjunctiv subcutanat, n mu chi, n viscere

Boli produse de germeni din genul Brucella

93

strns dintre animale, a perioadei de gesta ie mai scurt i a altor cauze, bruceloza suin difuzeaz mult mai rapid n efectiv dect bruceloza bovin , astfel c , atunci cnd survine suspiciunea de bruceloz , pe baza primelor manifest ri clinice semnalate, un num r nsemnat de animale prezint deja anticorpi, la titruri semnificative. Pentru reac ia de aglutinare se poate folosi fie un antigen corpuscular specific (Br. suis), fie un antigen care const dintr-o suspensie de Br. abortus, datorit nrudirii dintre cele dou specii. Tehnicile cele mai folosite au fost cele de aglutinare pe lam (R.A.R.) i de aglutinare lent , n tuburi (R.A.L.). Animalele care d deau reac ie pozitiv prin metoda standard (RAL) avnd mai mult de 25 UI, erau considerate infectate. O surs a erorilor de depistare prin RAL a animalelor infectate cu Br. suis o reprezint anticorpii blocan i, responsabili de producerea a a-numitelor fenomene de zon (6). Ast zi metoda standard este considerat insuficient de specific , fie c se face la 37C, fie c se face la 56C. O reducere semnificativ a propor iilor reac iilor nespecifice s-a ob inut atunci cnd s-a ncercat i s-a reu it desf urarea reac iei la pH acid, de 3-4. Plecnd de la aceste observa ii a fost pus la punct o nou tehnic de agutinare, cu antigen brucelic tamponat (ABT) la pH 3,65 (Buffered Brucella Antigen Test). Antigenul tamponat la pH acid este ast zi elementul comun n mai multe tehnici serologice, dintre care tehnicile n pl ci cu antigen necolorat i cu antigen colorat cu roz bengal sunt n mod special recomandate. Cu toate c prin aceste teste se ob ine o eliminare substan ial a reac iilor nespecifice, reac iile pozitive ob inute trebuie totu i confirmate prin R.F.C. n ara noastr a fost pus n uz recent un set de diagnostic pentru bruceloz , prin

reac ia de seroaglutinare rapid , un antigen tamponat la pH acid i colorat cu roz bengal. Antigenul se livreaz mpreun cu un ser martor pozitiv i un ser martor negativ. Reac ia se execut pe pl ci de sticl cu godeuri sau pe pl cu e emailate. Reac ia de fixare a complementului, de i ceva mai laborioas n execu ie dect reac iile de aglutinare, indiferent de tehnic , are avantajul unei mai bune specificit i, datorit faptului c detecteaz aproape exclusiv anticorpii IgG i nu anticorpii IgM, care sunt principala surs a erorilor, respectiv a reac ilor fals pozitive. Pe de alt parte, nedetectarea IgM, care se tie c sunt primele imunoglobuline care apar dup infec ia brucelic ( i nu numai) reprezint i un dezavantaj i anume este cauza pentru care animalele cu infec ie brucelic se pozitiveaz serologic mai trziu prin R.F.C. dect prin testele de aglutinare, care se bazeaz n principal pe reac ia antigenului cu IgM. Anticorpii fixatori de complement apar mai trziu dar persist mai mult timp n snge, pe ct vreme aglutininele apar mai timpuriu dar i dispar mai curnd din snge. Titrurile anticorpilor aglutinan i i fixatori evolueaz dup dou curbe u or decalate, datorit c rora postinfec ios, dependent de momentul test rii, se pot ob ine rezultate pozitive la ambele tipuri de reac ii (aglutinare i fixare de complement) sau numai la una dintre cele dou tipuri de reac ii. Tot din cauza decal rii curbelor celor dou tipuri de imunoglobuline nu se sconteaz ob inerea nici n viitor a rezultatelor pozitive de 100%, la test rile individuale, prin nici una dintre cele dou tipuri de reac ii. Cu toate c testul imunoenzimatic ELISA s-a ad ugat arsenalului de teste folosite pentru diagnosticul brucelozei mai trziu, sa afirmat deja ca un test cu sensibilitate i specificitate comparabile cu cele ob inute prin R.F.C. n func ie de natura antigenului

94

Boli produse de germeni din genul Brucella

folosit, ELISA poate fi direc ionat pentru detectarea cu predilec ie a IgG sau IgM specifice, ceea ce are influen asupra sensibilit ii testului, dup cum se execut n fazele timpurii sau tardive ale bolii. ELISA a fost recomandat att pentru screening ct i pentru confirmare de diagnostic. Exist mai multe variante (tehnici) propuse, dar n prezent se fac eforturi pentru realizarea unei tehnici standardizate, acceptat pe plan interna ional. Se pare c ELISA de competi ie se deta eaz ca preferabil (19). Dintr-un studiu comparativ ntreprins de un colectiv de cercet tori din mai multe ri de pe Continentul american n anul 1999, privind sensibilitatea i specificitatea unor teste serologice de diagnostic a brucelozei porcine au reie it urm toarele rezultate: aglutinarea pe lam cu antigen tamponat 77,1% respectiv 96,9%; R.F.C. (serurile anticomplementare fiind socotite negative) 93,3% respectiv 95,5%; ELISA indirect 94,0% respectiv 97,9%; ELISA de competi ie 90,8% respectiv 96,6%; testul de polarizare a fluorescen ei 93,5% respectiv 97,2% (21). Reac iile pozitive false, ob inute prin diverse tehnici serologice, se datoreaz nrudirii antigenice dintre brucele, Yersinia enterocolitica serogrup O9, E. coli serogrup O157 i salmonelele din grupul N. Reac iile false ob inute datorit acestor cauze nu trebuie privite ca simple neajunsuri ale examenului serologic pentru B.P. ci ca o obliga ie de identificare a agentului cauzal, deoarece infec iile cu ace ti germeni, n special Y. enterocolitica i E. coli O157 pot uneori s ridice probleme la fel de mari ca i B.P., dar de alt natur , i n primul rnd pentru s n tatea public i n comer ul interna ional (13). Testul alergic este mai pu in folosit n practic , de i are o valoare relevatoare comparabil cu a testelor serologice. Testul alergic cu brucelohidrolizat a fost introdus n

Romnia pentru diagnosticul B.P. n urm cu aproape jum tate de secol (2) i a fost mult vreme preferat altor teste, n anumite circumstan e, pentru c are unele avantaje:  num rul animalelor reac ionate alergic este mai mare dect al celor reac ionate serologic, deoarece reactivitatea alergic continu i dup negativarea bacteriologic i serologic a animalelor;  testarea alergic nu induce pozitivarea alergic i serologic ;  identificarea animalelor reac ionate alergic nu este condi ionat de marcarea lor prealabil ;  testul alergic poate fi executat n teren de medicul practician, f r ajutorul laboratorului. Ca dezavantaje ale testului alergic se men ioneaz pozitivarea mai tardiv dect pozitivarea serologic i cu un volum mai mare de munc fizic (2, 3, 5). Dup alte surse este mai pu in sensibil i specific dect testele serologice i din aceast cauz reac iile pozitive trebuie confirmate prin R.F.C. (48). Produsul biologic folosit n ara noastr pentru diagnosticul alergic al B.P. se nume te Brucelin P. Este un produs proteic purificat, specific i nealergizant, ob inut din germeni de Br. suis, recomandat de produc tor ca test suplimentar testelor serologice, n unit ile n care se suspicioneaz prezen a B.P. Se injecteaz strict intradermic i se cite te dup 48 ore, pe baza caracterului reac iei locale.

Profilaxie i combatere
Baza profilaxiei B.P. o constituie p strarea indemnit ii efectivelor, prin m suri generale, care pot fi schematizate astfel:  Achizi ionarea de animale de reproduc ie sau pentru amelior ri genetice numai din efective sigur indemne de B.P.;

Boli produse de germeni din genul Brucella

95

starea de indemnitate se atest prin certificat de s n tate care indic data ultimului examen serologic f cut la furnizor, cu nu mai mult de 30 zile naintea livr rii.  Carantin profilactic i controlul serologic n timpul carantinei profilactice.  Evitarea contactului cu al i porci i cu ale animale, care ar putea fi infectate cu Br. suis, printr-o ct mai bun izolare a fermei.  Supravegherea permanent a efectivului prin controlul reproduc torilor, la intervale de timp a c ror durat este impus de iminen a riscului de apari ie a bolii.  Reducerea riscului de apari ie a bolii prin asanare prompt i eficient a focarelor de boal declarate.  Reducerea focalit ii naturale a bolii prin m suri luate n colaborare cu factorii responsabili pentru s n tatea faunei silvatice (mistre i, iepuri). Imunoprofilaxia B.P. nu s-a dovedit a fi o metod atractiv , pentru c nu se poate sconta pe o imunitate solid i de durat la efectivele vaccinate, dar n schimb, ar deveni problematic inerea sub observa ie serologic a efectivelor, deoarece vaccinarea induce pozitivare serologic i alergic . Un vaccin atenuat contra B.P. a fost totu i conceput i utilizat n China. Este vorba de tulpina 2 de Br. suis biovarietatea 1. Se administreaz pe cale oral , nu produce avort i nu persist n esuturi, dar produce imunitate fa de infec ia natural cu Br.
5.1.3. BRUCELOZA

suis. Alte patru vaccinuri, unul atenuat (tulpina de Br. abortus RB51), un vaccin inactivat preparat din Br. suis i dou vaccinuri subunitare, au fost verificate n Venezuela, de Lord i col. (17). Odat diagnosticul de B.P. confirmat se declar boala oficial i se declar carantin . Combaterea eficient a bolii nu este posibil prin depistarea i eliminarea animalelor infectate. Nu este posibil nici eradicarea bolii prin tratamente n mas , de i vindec ri clinice s-ar putea ob ine, la unii subiec i n anumite stadii ale bolii, cu anumite antibiotice dar, din cauza parazitismului intracelular al brucelelor, sterilizarea bacteriologic a organismelor este imposibil . R mnerea n efectiv a unor animale vindecate clinic dar put toare de brucele ar duce la perpetuarea la infinit a focarelor de boal . n aceast situa ie singura metod valabil de combatere o reprezint asanarea prin depopulare total i repopularea cu un efectiv indemn, dup prealabila cur enie i dezinfec ie riguroas . Metoda reclam cheltuieli imediate mari, dar este cea mai economic , pe termen lung. Acest principiu se aplic att n cazul fermelor mici ct i n cazul gospod riilor popula iei. n cazuri extreme, atunci cnd este vorba de un nucleu genetic deosebit de valoros i cnd s-au depistat numai foarte pu ini reagen i, n unele ri se accept i programe complexe de m suri care nu implic depopularea total a fermei, dar f r garan ia unui rezultat final favorabil.

OVIN

I CAPRIN (B.O.C.)
din Micrococcus melitensis n Brucella melitensis, boala produs la om, capre i ovine a r mas cunoscut n literatur sub numele de bruceloz , respectiv bruceloza uman , bruceloza caprin i bruceloza ovin .

Dup ce, ntre boala descris la om, de David Bruce n 1887, pe insula Malta i boala identificat la caprele de pe aceea i insul , c iva ani mai trziu, s-a constatat o identitate etiologic i dup ce Alice Ewans a propus schimbarea denumirii acestui agent

96

Boli produse de germeni din genul Brucella

Deoarece boala descris cu mai bine de jum tate de secol mai trziu n Australia i Noua Zeeland , ca i agentul s u etiologic, prezentau unele asem n ri cu bruceloza ovin , dar i cteva deosebiri certe, s-a convenit ca aceasta s fie denumit orhiepididimita infec ioas a berbecilor sau bruceloidoza cu inten ia de a marca astfel deosebirile dintre cele dou boli. Totu i, n ultima vreme tot mai multe lucr ri de specialitate opteaz pentru denumirea de bruceloz pentru ambele entit i, dar cu specificarea: bruceloza ovin i caprin cu Br. melitensis i respectiv bruceloza ovin cu Br. ovis. Exist ns lucr ri de sintez n care sub denumirea de bruceloz ovin este descris numai boala produs de Br. melitensis (39), ca i lucr ri n care sub aceea i denumire este descris numai boala produs de Br. ovis (1). Pentru a evita confuziile, edi ia de fa va p stra i nomenclatura mai veche, nc prezent n majoritatea lucr rilor de specialitate, al turi de nomenclatura mai nou . Bruceloza ovin cu Br. melitensis mai este cunoscut i sub denumirea de melitococie, tocmai pentru a sugera natura sa etiologic . n afar de Br. melitensis, la oaie sunt posibile i infec ii cu Br. abortus, asem n toare clinic, dar cu mult mai mic importan epidemiologic , gravitate i extindere. Bruceloza oilor i caprelor (B.O.C.) este cel mai r spndit n insulele din Marea Mediteran i n rile riverane acesteia, dar este prezent i n unele ri din Asia i America de Sud. Cele mai afectate ri din Europa par s fie Grecia, Italia, Spania i Portugalia, n care sunt prezente cele trei biovariet i de Br. melitensis. n Romnia nu a fost semnalat pn n prezent. B.O.C. poate s produc pierderi nsemnate att la oi ct i la capre, prin

avort, tulbur ri de reproduc ie, orhite i diminuarea produc iilor, dar B.O.C. este n primul rnd important pentru u urin a cu care se transmite la om i pentru gravitatea bolii la om. B.O.C. cu Br. melitensis este una dintre cele mai temute zoonoze i cea mai periculoas la om, dintre bruceloze (47).

Caractere epidemiologice
Cele mai receptive par s fie caprele i n m sur ceva mai mic , ovinele. De altfel, rile n care B.O.C. este r spndit se disting prin num rul foarte mare de capre pe care l de in. Par s fie receptive toate rasele de oi i de capre, dar n m sur diferit . Animalele adulte sunt cu mult mai receptive dect tineretul. Exist multe similitudini ntre B.O.C. i B.B., din punct de vedere epidemiologic, ca patogenez , clinic i morfologic, dar i unele deosebiri, n cele ce urmeaz fiind discutate mai ales acestea din urm . Principalele specii afectate reprezint i principalele surse primare de infec ie i rezervorul natural de germeni. Eliminarea germenilor are loc n special n momentul f t rilor i avorturilor, dar i cteva s pt mni n continuare. Sunt foarte bogate n brucele nvelitorile fetale, lichidele fetale, avortonii, secre iile uterine, laptele i mai pu in alte secre ii sau excre ii. Transmiterea bolii se face pe cale genital sau digestiv . Datorit caracterului grupat al montelor i f t rilor (cele dou momente critice privind transmiterea), B.O.C. apare exploziv, afectnd 50-90% din femelele gestante dar, n anul urm tor devine sporadico-enzootic , afectnd de predilec ie primiparele i masculii tineri. Manifest rile clinice n B.O.C., asem n toare cu cele de la bovine, sunt mai severe la capre dect la oi.

R spndire i importan

Tabloul clinic

Boli produse de germeni din genul Brucella

97

Indiferent de momentul infec iei, principala manifestare clinic a bolii este avortul, cu sau f r semne prodromale, de regul ncepnd din a treia lun de gesta ie i pn n luna a cincea, uneori chiar n preajma termenului de f tare, cnd vorbim mai curnd de f tare prematur , pentru c produ ii sunt expulza i vii, chiar dac sunt subponderali i pu in viabili. Nu toate oile sau caprele infectate avorteaz . La aceste specii reten iile placentare i endometritele sunt mai rare dect la bovine, dar sterilitatea temporar apare i n absen a acestora, la circa 10% din femele. Mamitele brucelice sunt frecvente i spre deosebire de vaci, la oi i capre mamitele brucelice sunt evidente clinic, prin aspectul inflamat al cel pu in unui compartiment mamar, cu prezen a de noduli inflamatori de m rimea unei nuci i cu secre ie lactat modificat , zeroas , cu grunji sau flocoane. Eliminarea de brucele prin lapte la capre persist luni de zile, n timp ce la oi nceteaz relativ curnd. La masculi evolueaz n majoritatea cazurilor inaparent, eventual cu infertilitate, i numai uneori se exprim prin orhite sau orhiepididimite. Att la femele, ct i la masculi exist i localiz ri extragenitale: artrite, spondilite lombo-sacrale, bursite, tenosinovite.

Diagnostic
Se suspicioneaz B.O.C. atunci cnd ntr-o turm apar avorturi i orhite, dar se au n vedere la diagnosticul diferen ial toate celelalte boli abortigene ale ovinelor de natur infec ioas (salmonelic, chlamydian, listeric, camphylobacterian, leptospiric), parazitar (toxoplasmic) sau nutri ional (toxiemie de gesta ie), dar n primul rnd orhiepididimita infec ioas n care, n afar de avort se ntlnesc i leziuni testiculare. Practic, un diagnostic diferen ial cert ntre aceste afec iuni nu este posibil, f r ajutorul laboratorului. Examenul bacteriologic este foarte important pentru confirmarea bolii, mai ales la primele focare care apar ntr-o ar sau ntr-o zon . Izolarea i identificarea Br. melitensis nu implic dificult i, dar reclam metode i medii speciale, a a cum s-a prezentat la partea general (11). Metodele serologice sunt mai u or de executat i sunt preferate n zonele endemice, unde reagen ii pentru examenele serologice exist tot timpul la dispozi ie n toate laboratoarele, ceea ce nu este ntotdeauna cazul n rile indemne. Diagnosticul serologic se execut n toate cazurile de suspiciune clinic , atunci cnd se fac mi c ri de animale i cnd se practic controale de rutin la efectivele avute sub observa ie, momentul optim pentru ultima instan fiind sfr itul sezonului de f t ri, cnd inciden a i titrurile reac iilor sunt maxime. Se utilizeaz acelea i teste serologice ca la bovine, cu excep ia TIL, cu antigen specific sau cu antigen corpuscular de Br. abortus tulpina 99 sau 1119, dar nu cu rezultate la fel de bune ca n bruceloza bovin . n special R.A.L. d rezultate nesatisf c toare la ovine i caprine, n timp ce testul de aglutinare cu antigen tamponat i R.F.C. dau rezultate satisf c toare, mai ales pentru supravegherea serologic a efectivelor.

Tabloul morfopatologic
Se aseam n cu cel de la taurine. La autopsia oilor sacrificate, cu manifest ri grave, se g se te limfadenit hiperplazic , uneori cu focare necrotice i purulente. Splina este hiperplaziat . n ficat se pot g si noduli i focare de necroz . Mucoasa uterin prezint leziuni inflamatori, ca la bovine. Testiculele sunt m rite, cu aderen a ntre nvelitori i prezen a de focare necrotice, noduli i abcese.

98

Boli produse de germeni din genul Brucella

ntr-o ampl investiga ie ntreprins n anul 1998 de Micolan i col. (18) n SUA, au fost apreciate comparativ 17 teste serologice n diagnosticul brucelozei la capre, cele mai sensibile i specifice dovedindu-se testul de aglutinare cu roz bengal, R.F.C. (A) i R.F.C. (M) la rece i ELISA din lapte. La rezultate similare au ajuns Garin-Bastuji i col.(11) de la laboratorul de referin OIE pentru Brucella din Alfort, care consider ca cele mai adecvate pentru diagnosticul B.O.C.: diverse variante ale ELISA, aglutinarea pe lam cu roz bengal i R.F.C. n unele ri se produce i se utilizeaz pentru diagnostic n efective nevaccinate, un produs revelator al st rii de alergie numit brucelin . Se administreaz s.c. sau i.d. i se cite te rezultatul dup 48 ore, pe baza caracterului reac iei locale. Avantajele testului alergic constau n: execu ie mai u oar dect recoltarea de snge i eliminarea inconvenientelor legate de recunoa terea ulterioar a animalelor care au reac ionat pozitiv (a a cum este cazul la testele serologice), n scopul confirm rii diagnosticului, n turmele n care nu se practic marcarea.

Profilaxie
De cea mai mare importan este evitarea introducerii bolii n ar prin importul de animale infectate. n afar de actele sanitare veterinare care s ateste indemnitatea efectivelor de origine i data ultimului examen serologic f cut la furnizor se impune, ca m sur suplimentar de protec ie, examenul serologic efectuat dup prima s pt mn a carantinei profilactice. Pentru astfel de situa ii, de comer interna ional, O.I.E. recomand n primul rnd n ceea ce prive te B.O.C., testul de aglutinare cu antigen brucelic tamponat i R.F.C., iar ca test alternativ, testul alergic.

ELISA va putea fi luat de asemenea n considerare, dup ce va fi standardizat . n cazul c se ob in reac ii pozitive prin unul din testele de supraveghere, diagnosticul trebuie neap rat confirmat prin metode mai precise, examenul bacteriologic fiind indispensabil, pentru c numai un diagnostic bine fundamentat poate s justifice m surile de combatere, care sunt foarte severe i deci foarte costisitoare, n cazul semnal rii bolii ntr-o ar indemn , a a cum este i ara noastr . n fapt singura cale de prevenire a difuz rii bolii n alte efective este lichidarea n totalitate a efectivului n care au fost depistate cazuri de boal i supravegherea strict a animalelor suspectate de contaminare. n rile n care B.O.C. este endemic nu se poate merge pe asemenea m suri, dect n anumite circumstan e, ca de exemplu atunci cnd apare un focar de boal ntr-o zon ntins din ar , pn atunci indemn . n mod obi nuit se prefer s se previn i s se combat B.O.C. printr-un complex de m suri care include:  depistarea turmelor infectate prin metode bacteriologice (n caz de avort), serologice i alergice;  asanarea turmelor infectate prin controale serologice frecvente i eliminarea frecvent a animalelor infectate, distrugerea materialelor virulente (avortoni, placente) i dejec ii;  inerea sub control a mi c rilor de animale i controlul periodic de rutin , serologic sau alergic, al efectivelor libere de B.O.C. n rile sau n regiunile n care prevalen a B.O.C. este mare, la arsenalul m surilor de mai sus se adaug imunoprofilaxia de necesitate. Garin-Bastuji i col. consider c strategia combaterii B.O.C. printr-un complex de m suri care include vaccinarea, preferabil cu Rev1 pe cale conjunctival cu doz standardizat , a

Boli produse de germeni din genul Brucella

99

ntregului efectiv, este mai pu in costisitoare dect strategia bazat numai pe depistareeliminare, care de altfel nici nu se poate aplica n zone cu prevalen ridicat a bolii (11). Au fost concepute mai multe vaccinuri, dintre care o utilizare mai larg au dobndit vaccinul viu constituit din tulpina modificat Rev1 i vaccinul inactivat preparat din tulpina H38. Vaccinul Rev1 este constituit dintr-o tulpin revertant a unei mutante streptomicino-dependente de Br. melitensis biovarietatea 1. Aceasta posed nc un anumit grad de patogenitate rezidual (risc de avort, eliminare prin lapte), dar tocmai datorit acesteia confer o imunitate solid , care dureaz 4-5 ani. Rezisten a fa de infec ie se coreleaz ns i cu pozitivarea serologic , ceea ce pune problema supravegherii serologice a efectivelor vaccinate prin metode serologice. Acest inconvenient este n parte dep it prin:  alegerea c ii conjunctivale pentru vaccinare;

 reducerea dozei vaccinale de la 109 bacterii/doz la 107 sau chiar 105;  coborrea vrstei de vaccinare sub 6 luni. n acest fel devine posibil controlul serologic al animalelor vaccinate, dup 12 luni de la vaccinare. n prezent se experimenteaz cu rezultate promi toare, n SUA, un alt vaccin, preparat din mutanta R a tulpinii VTRM1 de Br. melitensis (9). Pentru evitarea unor neajunsuri ale vaccinurilor vii, n unele ri sau situa ii epidemiologice este preferat vaccinul inactivat. Se folose te mai ales un vaccin preparat prin inactivarea cu formol a tulpinii virulente H38, cu adjuvant uleios. Acest vaccin are ns i unele dezavantaje, comparativ cu primul: confer imunitate de mai scurt durat , dar cu pozitivare serologic de relativ mai lung durat i produce reac ii locale.

5.1.4. BRUCELOZA

ECVIN

Bruceloza ecvin (B.E.) poate fi consecin a infec iei cu Br. abortus, Br. melitensis sau Br. suis. Surse primare de infec ie sunt bovinele, ovinele, caprinele i suinele bolnave de bruceloz , cu care caii vin n contact. Importan a economic a bolii este redus deoarece se manifest sub form de cazuri izolate, rare. Cu att mai pu in se pune problema importan ei economice a bolii n Romnia, unde sursele de infec ie primare cu Br. abortus i melitensis lipsesc complet. n schimb trebuie subliniat importan a sanitar a bolii, dat fiind transmisibilitatea i gravitatea bolii la om. De cele mai multe ori infec ia brucelic la ecvine nu este urmat de apari ia manifest rilor clinice, iar atunci cnd apar,

acestea au caracter localizat, extragenital. Postinfec ios poate apare o faz febril , corespunz toare bacteriemiei, care poate fi urmat de localizarea infec iei la nivelul unor articula ii, a unor burse seroase sau teci tendinoase, unde produc inflama ii purulente: artrite, bursite, tenosinovite cu evolu ie subacut sau cronic . Cele mai frecvente i caracteristice localiz ri sunt n regiunea greb nului i a jaretelor, dar se g sesc i artrite cu alte localiz ri, tenosinovite la oricare din membre, abcese n regiunea gtului, a sternului etc. Localizarea n regiunea greb nului, cunoscut i sub denumirea de boala greb nului se caracterizeaz prin tumefierea difuz , cald i dureroas a

100

Boli produse de germeni din genul Brucella

regiunii, la nceput de consisten ferm , dar dup 2-3 zile de consisten fluctuant i insensibil , cu tendin e de regresare. Dup acest stadiu leziunea greb nului se poate resorbi complet sau poate suferi, n cele din urm , o transformare purulent lund na tere un flegmon, care cuprinde esutul conjunctiv, vertebrele, ligamentul cervical i alte esuturi adiacente. n evolu ia brucelozei la cal, care este cronic , pot s alterneze perioade de ameliorare i de recrudescen . Diagnosticul nu este simplu, deoarece leziuni asem n toare, mai ales la nivelul greb nului, datorate altor cauze, nu sunt rare la cai. Confirmarea bacteriologic este
5.1.5. BRUCELOZA

problematic . Cel mai indicat este diagnosticul serologic prin R.F.C. sau reac ia de aglutinare cu antigen tamponat la pH acid. i examenul alergic folosit ca metod complementar poate oferii rezultate satisf c toare. n rile n care bruceloza bovin i ovin sunt endemice, se practic uneori tratamentul brucelozei la cai, pe cale general cu antibiotice i local, prin metode chirurgicale, sub protec ie de antibiotice i antiseptice. Profilaxia B.E. se face numai prin m suri generale, care vizeaz evitarea contactului cailor s n to i cu animale de diverse specii, inclusiv solipede, bolnave de bruceloz .

ANIMALELOR S LBATICE
nesemnalate, constituie rezervorul natural pentru cel pu in o parte din speciile i biovariet ile de Brucella cunoscute dar, deocamdat exist argumente n acest sens numai n ceea ce prive te transmiterea infec iei cu Br. suis biovarietatea 2, de la iepuri la porci (motiv pentru care aceasta va fi prezentat mai pe larg n continuare). Dar i varianta invers este valabil , respectiv mboln virea animalelor s lbatice de la animalele domestice, ceea ce este mai probabil n cazul brucelozei carnivorelor.

La bruceloz sunt receptive i un num r mare de specii de mamifere s lbatice: cervidee, c mile, girafe, antilope, elani, bizoni, elefan i, iepuri, obolani, oareci, mistre i, zebre, vulpi, hiene, acali, coio i, lupi, oposumi (39). De cele mai multe ori infec ia brucelic la animalele s lbatice evolueaz asimptomatic. n cazurile mai rare cnd se exprim clinic, manifest rile nu difer de cele observate la animalele domestice. F r ndoial c aceste specii de animale s lbatice, i probabil multe altele, nc

5.1.6. BRUCELOZA

IEPURILOR

Bruceloza iepurilor (B.I.) este important deoarece iepurii, domestici i s lbatici, dar n special cei s lbatici reprezint adesea o surs primar de infec ie cu brucele pentru mamiferele domestice, conferind brucelozei statutul de boal cu focalitate natural . Iepurii pot fi infecta i cu Br. abortus sau cu Br. melitensis dar, de cele mai multe ori sunt infecta i cu Br. suis (n special

biovarietatea 2 n Europa), pentru care sunt considera i rezervor natural. Bruceloza iepurilor este o boal r spndit n toat Europa, inclusiv n ara noastr . La noi a fost semnalat n mai multe rnduri, de fiecare dat cu Br. suis (45). Se nregistreaz sub form de cazuri sporadice sau sub form de endemii circumscrise anumitor zone. De la iepuri se transmite uneori la porci.

Boli produse de germeni din genul Brucella

101

Evolu ia infec iei brucelice este adesea asimptomatic . Atunci cnd boala devine clinic , de regul manifest rile nu sunt caracteristice, cu excep ia orhitelor la iepurii adul i. Iepurii bolnavi ncep s sl beasc i n 2-3 luni pot s moar n stare de cahexie. De cele mai multe ori iepurii cu bruceloz sunt descoperi i mor i sau cu pu in nainte de moarte. La autopsie se constat c splina este hiperplaziat , uneori pres rat cu noduli necrotici miliari, ficatul este m rit n volum, de asemenea pres rat cu focare necrotice. Focare necrotice se mai g sesc n pulmon, limfonoduri, testicule, ovare. Se mai pot g si abcese n esutul conjunctiv subcutanat, n limfonoduri, viscere, iar la femele, piometrit . Diagnosticul de bruceloz la iepure trebuie confirmat necondi ionat prin metode de laborator, pentru evitarea confuziilor cu

tularemia, yersinioza sau salmoneloza. n cazul cadavrelor, diagnosticul bacteriologic este indispensabil, dar n cazul animalelor bolnave este preferabil diagnosticul serologic. R.F.C. este considerat testul de referin pentru bruceloza iepurilor, dar ELISA este considerat de unii autori la fel de specific i ceva mai sensibil dect R.F.C. (37).

Profilaxie i combaterea
Profilaxia i combaterea B.I. n mediul silvatic este problematic . Serviciile veterinare responsabile de s n tatea faunei silvatice, n colaborare cu alte servicii, cu organele silvice i asocia iile de s n tate pot ntreprinde unele m suri de supraveghere, diagnostic i depistare de animale bolnave i cadavre, n vederea distrugerii lor.

5.1.7. BRUCELOZA

CANIN
la

Bruceloza canin cu Br. canis, este o boal infecto-contagioas a cinilor, transmisibil la om, manifestat prin avort, sterilitate i orhite sau orhiepididimite. De i mult mai rar dect alte specii, i numai accidental, cinii se pot infecta natural (dar i experimental) i cu Br. abortus, Br. melitensis i Br. suis, n special n urma consumului de placente sau avortoni de la bovine, ovine, caprine sau porcine. De regul infec ia este asimptomatic n aceste cazuri i r mne cantonat la nivelul limfonodurilor aferente tubului digestiv o perioad lung de timp. n mod practic cinii nu pot s fie o gazd prea important n lan ul epidemiologic al acestor specii de Brucella, dar rolul lor poten ial nu trebuie totu i ignorat. O importan practic mult mai mare se acord brucelozei canine produs de Br. canis (B.C.B.C.), specie identificat pentru prima dat de Carmichael i Bruner, n anul

1968. Descrierea de mai jos se refer aceasta din urm .

R spndire
nc nu se cunoa te bine r spndirea geografic a B.C.B.C. dar se pare c este prezent cu o prevalen mai mic sau mai mare, pe toate continentele. Prima semnalare oficial a bolii n Romnia a fost f cut de Nec ulescu i col. (21), care pun la punct i testul cu rozbengal pentru diagnosticul serologic rapid al B.C.B.C.

Importan
Importan a economic nu este ridicat , deoarece cinii se cresc mai pu in pentru scopuri economice i pentru c boala este de obicei sporadic . Importan a sanitar este notabil , de i evolu ia bolii la om este mai benign dect n cazul celorlalte specii de Brucella.

102

Boli produse de germeni din genul Brucella

Br. canis este o specie a genului Brucella, n cadrul c reia a fost identificat deocamdat o singur biovarietate. Br. canis nu se deosebe te morfologic de celelalte brucele, dar se deosebe te biochimic, cultural, antigenic i patogenic. Nu necesit CO2 la izolare, nu produce H2S, cre terea nu este inhibat de tionin , pe agar produce n mod spontan colonii de tip R i aglutineaz cu ser monospecific anti antigen R, nu i cu antigen monospecific A sau M.

Etiologie

sau cu sperm contaminat , n cazul ns mn rilor artificiale.

Patogenez
Infec ia se produce de obicei pe calea mucoasei bucale i vaginale, dar i celelalte mucoase, ca mucoasa olfactiv i conjunctival , pot fi penetrate de Br. canis. La poarta de intrare brucelele sunt fagocitate i apoi transportate spre esuturile tractusului genital i sistemul limfatic, unde se multiplic . Diseminarea bacteriemic este posibil pe durata mai multor ani, prin intermediul leucocitelor pe care le paraziteaz intracelular. Ca urmare apare o hiperplazie limforeticular i hiperglobulinemie. Cre terea globulinemiei se face pe seama anticorpilor specifici, care pot fi identifica i prin reac ii serologice dar care nu au capacitatea de a proteja sau steriliza esuturile. Cel mai mare num r de germeni se concentreaz n organele bogate n esut limfoid, n gonade i epiteliul placentar. Inflama ia testiculelor i epididimelor are influen asupra calit ii spermei, care sufer unele modific ri. Ca urmare apar anticorpi aglutina i antispermatici i hipersensibilitate de tip ntrziat fa de sperm care, n ultim instan , contribuie la producerea epididimitelor i sterilit ii. Locul de cantonare a germenilor pe perioada cea mai ndelungat , n absen a bacteriemiei, este prostata. n aceast perioad titrul anticorpilor scade pn la zero, deoarece prezen a imunoglobulinelor n snge este condi ionat de existen a bacteriemiei, ceea ce dovede te c n B.C.B.C. imunitatea mediat celular este imunitatea dominant , cinii vindeca i spontan fiind nesusceptibili de reinfec ie, de i nu posed anticorpi specifici.

Caractere epidemiologice
Se mboln vesc cinii adul i, femele sau masculi, indiferent de ras , dar la cinii f r st pn care tr iesc liberi pe str zi i se mperecheaz la ntmplare, boala este mult mai frecvent dect la cinii cu st pn, la care mperecherile sunt dirijate sau supravegheate. Num rul cinilor infecta i, care nu exprim clinic boala dar sunt pozitivi serologic, este mai mare dect al cinilor cu forme clinice de boal . Ambele categorii elimin cantit ii mari de germeni, n momentul avortului sau a f t rii normale, con inu i n placent , lichidele fetale i avortoni. Femelele care au avortat pot s mai elimine brucele prin secre iile vaginale timp de pn la 6 s pt mni i aproape la fel de mult timp prin lapte. Materialul seminal poate de asemenea s con in cantit i mari de germeni timp de 6-8 s pt mni, dup care eliminarea germenilor se face cu intermiten i n cantitate mai mic , pn la 1-2 ani. Germenii provin din prostat i epididim. Aceea i surs o au i germenii din urin dar, evident c n urin germenii sunt mai pu in numero i, din care cauz i importan a urinei ca surs primar de infec ie a fost pus de unii sub semnul ntreb rii. Transmiterea se poate face i n clinic , dac se utilizeaz instrumentar nesterilizat (speculum vaginal, seringi etc.)

Boli produse de germeni din genul Brucella

103

Infec ia brucelic cu Br. canis rareori include manifest ri clinice care s indice diagnosticul sau suspiciunea de B.C.B.C., cu excep ia masculilor care, la examenul fizic prezint epididimit . C elele gestante avorteaz n a doua lun de gesta ie, mai frecvent cu dou s pt mni nainte de termenul de f tare. Avortonii sunt edema ia i, congestiona i i par ial autoliza i chiar n momentul expulz rii. n cavit ile seroase pot fi prezente exsudate sangvinolente; unele c ele duc gesta ia pn la termen dar numai unii produ i de concep ie sunt normali. Al turi de ace tia sunt f ta i i c ei mor i sau subdezvolta i, care mor n primele ore sau zile de via . Nici c eii care supravie uiesc acestei faze critice nu sunt s n to i. Ei prezint cu intermiten febr , leucocitoz , hiperglobulinemie i limfadenomegalie generalizat , manifest rile bolii n sfera genital urmnd s apar dup maturitatea sexual . Num rul cinilor masculi prezenta i la consulta ie cu semne clinice de bruceloz este mai mare dect num rul c elelor, pentru motivul c afec iunea la masculi este mult mai evident dect la femele, ceea ce i alerteaz pe proprietari. Este vorba de o destindere a scrotumului, din cauza acumul rii de lichide serosangvinolente. De asemenea, au loc: o cre tere n volum a cozii epididimului, n timp ce testiculele au volum normal sau, n formele cronice pot fi chiar atrofice; modific ri ale ejaculatului, care scade ca volum i consisten , dar acestea de regul nu sunt sesizate de proprietar. Uneori ceea ce se sesizeaz este numai sterilitatea, n absen a manifest rilor clinice, la nivelul gonadelor sau burselor testiculare. La cinii cu spondilit lombosacral se observ la nceput ataxie, dificult i n mers sau la ridicarea n pozi ie patrupodal , schiop tur , apoi parapareze i n cele din

Tabloul clinic

urm paraplegie. Cu totul incostant se mai pot observa: simptome de meningit , dermatit piogranulomatoas i tulbur ri oculo-conjunctivale.

Diagnostic
Practic, B.C.B.C. este suspicionat numai atunci cnd au fost sesizate tulbur ri din partea aparatului genital femel sau mascul. Unele examene de laborator clinic pot s nt reasc sau nu suspiciunea de B.C.B.C. Pledeaz pentru B.C.B.C.: hiperglobulinemia i cu concomitent hipoalbuminemie, hiperplazia limfoid i plasmatic la nivelul forma iunilor limfoide, aspectul radiografic al discurilor intervertebrale, aspectul macroi microscopic al materialului seminal. Confirmarea diagnosticului de B.C.B.C. se face prin metode bacteriologice i serologice. Examenul bacteriologic vizeaz n special izolarea brucelelor din snge, din produsele avortate (avortoni, placent ), sau din limfonoduri i splin de la cadavre. Metodele serologice sunt cele mai convenabile pentru confirmarea diagnosticului. Ele necesit un antigen specific preparat dintr-o tulpin de Br. canis sau, la nevoie, din Br. ovis sau alte specii de Brucella aflate n faz R. Se preteaz cel mai bine pentru diagnostic reac iile de aglutinare i reac ia de fixare a complementului. n ambele cazuri se poate lucra cu antigen homolog (Br. canis) sau cu antigen heterolog (Br. ovis), ultimul fiind chiar preferat deoarece coloniile nu au caracter mucoid. Dintre toate tehnicile de efctuare a reac iei de aglutinare, se pare c cele mai slabe rezultate se ob in prin tehnica clasic de aglutinare n tuburi (RAL), care furnizeaz cele mai multe rezultate pozitive false. Cele mai bune rezultate, ca sensibilitate i specificitate se ob in prin

104

Boli produse de germeni din genul Brucella

tehnica de aglutinare rapid pe lam , n prezen a mercaptoetanolului, cu antigen colorat cu roz bengal. Dac se utilizeaz mercaptoetanolul n tehnica clasic cre te specificitatea i a RAL dar pozitivarea se nregistreaz cu 2-3 s pt mni mai trziu dect n cazul tehnicii rapide, pe lam . Testele de seroprecipitare n gel de agar i ELISA sunt mai precise dect cele de aglutinare, dar i mai laborioase, din care cauz nu s-au extins prea mult n diagnosticul curent. Toate testele serologice r mn pozitive numai cteve luni dup dispari ia bacteriemiei, dup care se negativeaz , de i animalele pot r mne purt toare de brucele n anumite esuturi, a a cum s-a ar tat, timp de ani de zile .

produse biologice provenite de la acesta (secre ii, placent , avortoni etc).

Profilaxie i combatere
Evitarea contactului direct cu cini a c ror situa ie sanitar este necunoscut ar fi o prim i adesea salutar m sur de profilaxie. Trebuie evitat mperecherea ntre cini cu antecedente perinatale, avnd cauze necunoscute, sau care prezint cea mai slab suspiciune de B.C.B.C. nainte de mperechere se recomand controlul serologic pentru bruceloz a ambilor parteneri. Un vaccin eficace contra B.C.B.C. nu a fost nc preparat nici unde i, probabil c nici nu ar fi util, dac animalele vaccinate nu mai pot fi apoi controlate serologic. ncerc ri au fost f cute, cu vaccinuri vii i inactivate, dar f r succes. B.C.B.C. nu este prezent ca boal declarabil i carantinabil n legisla ia aproape a nici unei ri. Aceasta nu nseamn c nu este util carantina profilactic , n cazul achizi ion rii de cini, indiferent de ras , mai ales n canise. n timpul carantinei este recomandabil controlul serologic, de dou ori la interval de o lun . De asemenea, n cazul caniselor bine organizate se recomand i controlul serologic periodic, pentru depistarea B.C.B.C. Asanarea unei canise este posibil pe baza unui program de m suri, pe termen lung, care prevede n principal instituirea carantinei, controlul serologic periodic al efectivului, cu eliminarea celor reac iona i pozitiv i dezinfec ii curente. O canis poate fi considerat asanat numai dup ce la trei controale serologice, f cute succesiv la interval de o lun , nu a mai fost depistat nici un animal pozitiv.

Tratament
Tratamentul B.C.B.C. este posibil, rezultate mai bune ob inndu-se cu tetraciclin asociat cu streptomicin , cu care se pot ob ine vindec ri sau cel pu in amelior ri clinice, dar nu i steriliz ri bacteriologice, pentru c datorit parazitismului lor intracelular, brucelele se pot sustrage ac iunii antibioticelor. Din aceast cauz recidivele sau reinfec iile nu sunt surprinz toare. Legisla ia nu prevede nimic special n leg tur cu B.C.B.C. dar, nainte de a ntreprinde ceva n acest sens trebuie ca proprietarul s fie con tientizat c tratamentul este de lung durat (3-4 s pt mni) i deci foarte costisitor iar rezultatele sunt cu totul incerte. n plus, de i la om infec ia cu Br.canis este rar i evolu ia benign sau chiar asimptomatic , B.C.B.C. r mne totu i o zoonoz , care reclam m suri de protec ie persoanelor care vin n contact cu animalul bolnav sau cu

Boli produse de germeni din genul Brucella


5.2. EPIDIDIMITA

105

INFEC IOAS A BERBECILOR

(Bruceloza ovin cu Br. ovis)

106

Boli produse de germeni din genul Brucella

Cu toate c , n edi ia a asea (1992) a Codului Zoo-Sanitar Interna ional al Oficiului Interna ional al Epizootiilor infec ia brucelic a ovinelor cu Br. ovis este denumit exclusiv Bruceloza ovin cu Br. ovis (pentru infec ia cu Br. melitensis fiind rezervat denumirea de Bruceloza caprin i ovin cu Br. melitensis) noi, n edi ia de fa a acestei lucr ri, pentru evitarea confuziilor, vom continua s re inem, n paralel, denumirea mult mai larg cunoscut de Epididimita infec ioas a berbecilor (EIB), al turi de denumirea, mai nou , de Bruceloza ovin cu Br. ovis (B.O.B.O.).

Istoric i r spndire geografic


Prima descriere a bolii, cu precizarea agentului etiologic, a fost f cut n anul 1953 de Buddle i Boyes, n Noua Zeeland i Australia dar, n perioada imediat urm toare a fost identificat n multe alte ri, printre care SUA, URSS, Africa de Sud, Fran a, Cehoslovacia, Bulgaria, alte ri din Europa de Est i probabil aproape toate rile mari cresc toare de ovine. n Romnia a fost identificat de Tudoriu i col. nc din anul 1958 (43).

Importan
Importan a B.O.B.O. este exclusiv economic . Produce pierderi prin deprecierea berbecilor, care nu mai pot fi folosi i ca reproduc tori, prin tulbur ri de reproduc ie la oi (avorturi, f t ri de miei mor i sau neviabili, repetarea c ldurilor) i prin costul m surilor de profilaxie i combatere a bolii.

Etiologie
Preciz ri privind caracterele distinctive ale speciei Br. ovis au fost f cute la partea general . Principalele teste distinctive care permit diferen ierea fa de celelalte specii ale genului (cu excep ia Br. canis) sunt: nevoia de CO2 la cultivare (+), producerea de H2S (-), activitatea ureazic (-), bacteriostaza cu fuxin bazic (-), faptul c ntotdeauna coloniile sunt de tip R, precum i testul de aglutinare cu ser monospecific anti antigen R (+). Dintre aceste teste, numai nevoia de CO2 la cultivare deosebe te Br. ovis de Br. canis, la care se adaug spectrul de patogenitate, respectiv ovinele pentru Br. ovis i canidele pentru Br. canis. ntre Br. ovis i Br. melitensis, prin testul de imunoelectroforez a fost pus n eviden o nrudire antigenic destul de strns , mai ales dac Br. melitensis se g se te n faz R. Din leziunile vechi de B.O.B.O., n afar de Br. ovis mai pot fi izola i, inconstant, al i germeni, n special piogeni, ca germeni de infec ie secundar .

Caractere epidemiologice
Pn n prezent B.O.B.O. a fost descris numai la ovine. Masculii sunt mai receptivi dect femelele, adul ii sunt mai receptivi dect tineretul, unele rase sunt mai receptive dect altele. Berbecii infecta i, cu sau f r semne clinice evidente, dup epuizarea perioadei de incuba ie pot s elimine brucele, o dat cu sperma sau urina, timp de peste patru ani (39). Oile infectate, la rndul lor, vor infecta al i berbeci. Acestea elimin brucelele o dat cu secre iile vaginale, produsele avortate (placent , lichide fetale, avorton), urin i uneori prin lapte dar, spre deosebire de berbeci, oile se autosterilizeaz n r stimp de numai cteva luni. n afar de calea venerian de transmitere a bolii, de tip berbec-oaie-berbec-oaie, care poate avea loc n cursul aceluia i sezon de monte sau n sezoane diferite i care este cea mai frecvent cale de transmitere a B.O.B.O., au fost descrise i alte c i de transmitere: oral , o dat cu apa sau furajele contaminate, nasofaringean , homosexual sau, mai pu in, prin intermediul a ternutului contaminat (16). B.O.B.O. are de obicei caracter endemic, cu difuzare lent n efectiv, datorit caracterului grupat i limitat al sezonului de monte, astfel c , pentru a se ajunge la o prevalen de 50% a bolii ntre berbeci este nevoie de 3-5 ani. B.O.B.O. poate dobndi o dinamic de tip epidemic, datorit obiceiului transhuman ei, dac se fac mi c ri necontrolate de animale. De la contaminarea uneia dintre mucoasele men ionate ca posibile por i de intrare ale germenilor i pn la instalarea primelor leziuni pot s treac 1-4 luni. R.F.C. devine pozitiv dup 2-7 s pt mni de la infec ie (1). n primele s pt mni germenii se multiplic la poarta de intrare, dup care ajung n snge (bacteriemie), o dat cu care difuzeaz n tot organismul, dar vor persista i se vor multiplica numai brucelele ajunse n esuturile pentru care au tropism: organe genitale i limfonodurile aferente, splin i uneori n rinichi. n mod deosebit se multiplic Br. ovis n coada epididimului, n veziculele seminale i n canalele deferente, unde produce degenerarea i descvamarea epiteliului, cu posibila obstruc ie a elimin rii materialului seminal.

Patogenez

Boli produse de germeni din genul Brucella

107

Tabloul clinic
La berbeci, B.O.B.O. evolueaz n dou faze: acut i cronic . Faza acut este sesizabil la inspec ie doar n foarte pu ine cazuri, respectiv cnd se manifest prin edemul scrotumului i epididimului, mai pu in a testiculelor, ceea ce produce dificultate n deplasare i durere la palpare. Uneori semnele locale sunt nso ite de manifest ri generale: febr , abatere, inapeten , erup ie eritematoas scrotal . Dup aproximativ o s pt mn simptomele generale se amendeaz i se intr n cea de-a doua faz , cronic . n marea majoritate a cazurilor, cnd boala nu este sesizabil la examenul fizic, forma acut se manifest totu i prin alterarea calit ii materialului seminal i, n consecin , prin reducerea fertilit ii. n faza cronic se poate sesiza apari ia unei indura ii ini ial circumscrise la nivelul cozii epididimului, care se extinde lent, cuprinznd tot corpul epididimului. Fiind de regul unilateral sau inegal evoluat , leziunea poate fi cel mai bine sesizat dac se palpeaz simultan ambele testicule, n special cozile epididimelor. Testiculele nu sunt cuprinse de regul dar, dac sunt cuprinse, ini ial apar pu in destinse pentru ca n continuare s involueze, devenind atrofice. Silonul dintre epididim i testicul dispare, n tecile vaginale se acumuleaz ini ial exsudat, tunica scrotal este edema iat i ca urmare toat regiunea apare deformat , asimetric . Mai trziu lichidul se resoarbe i pot apare fibroze, aderen e i atrofie. Din cauza sensibilit ii locale berbecii se deplaseaz cu oarecare dificultate. i n faza cronic evolu ia poate fi att de discret nct, f r a fi sesizat nimic anormal la inspec ie sau palpa ie, se constat doar c materialul seminal este de calitate redus i con ine brucele. Deteriorarea calit ii spermei se refer la: reducere volumetric i modificarea culorii ejaculatului, reducerea motilit ii i apari ia de spermatozoizi anormali. Formele cronice se pot termina prin complica ii (abcese, fistule) i numai n mod excep ional prin vindec ri spontane. La femele evolu ia infec iei este obi nuit inaparent clinic. Uneori are loc inflamarea mucoasei genitale, din care cauz fie c nu poate avea loc nidarea, fie c produsul de concep ie este eliminat curnd (avort embrionar). Foarte rar germenul persist n aparatul genital pe toat sau pe aproape toat durata gesta iei, producnd placentit , urmat de avort sau na tere prematur de miei subponderali, neviabili sau chiar de f tare la termen de miei mor i sau vii, dar neviabili.

Tabloul morfopatologic
n formele acute, la autopsie se poate constata un edem al scrotului i epididimului, exsudat serofibrinos acumulat n tecile vaginale i prezen a de granuloame n epididim. Mai trziu n epididim se pot g si granuloame, focare de necroz , abcese, spermatocele, procese de scleroz . Tunicile devin ngro ate, de consisten fibroas i aderente ntre ele. Placenta oilor care au avortat este edema iat , ngro at . Cotiledoanele sunt ngro ate, de culoare deschis (albg lbui), cu suprafa a necrozat . Focare cu aspect asem n tor se pot g si i n zonele intercotiledonare. Avortonul nu prezint modific ri caracteristice.

Diagnostic
Diagnosticul B.O.B.O. se bazeaz pe trei examene principale:  examenul serologic (R.F.C., ID, ELISA, IHA);  examenul fizic local, prin palpare;  examenul bacteriologic. Examenul serologic este cel mai important, pentru c poate s depisteze infec ia cu Br. ovis i n cazurile, foarte numeroase, n care manifest rile clinice sau prezen a brucelelor nu sunt sesizabile. Testul serologic cel mai larg utilizat n lume este R.F.C. Testul de imunodifuzie n gel de agar, care este mai simplu, a fost de asemenea verificat, cu rezultate destul de bune de unii autori, cu scopul de a substitui R.F.C., dar s-a dovedit mai pu in sensibil. n schimb ELISA s-a dovedit mai sensibil i mai rapid dect R.F.C. (35, 36), dar i ceva mai laborios, astfel c R.F.C. continu s fie testul recomandat ca preferen ial de c tre OIE. n toate testele, pentru evitarea erorilor, este necesar ca n ceea ce prive te reagen ii, i tehnicile evaluarea s se fac pe baza standardelor interna ionale. Prin testele men ionate, animalele vaccinate reac ioneaz pozitiv, la fel ca cele infectate natural. Spre deosebire de berbeci, care se men in pozitivi ani de zile, la oi reac iile serologice sunt slabe i de scurt durat . Berbecii care prezint modific ri ale forma iunilor intrascrotale sunt suspec i de B.O.B.O. dar poate fi vorba i de infec ii cu alti germeni, ca Br. melitensis, C. pseudotuberculosis sau Actinobacillus seminis. De asemenea, avortul la oi se poate datora infec iei cu Br. ovis, dar i infec iei cu al i germeni ca: Br. melitensis, Chlamydia psittaci, Salmonella abortus ovis, Listeria monocytogenes, Campylobacter fetus, Coxiella burnetti, Toxoplasma gondii, precum i altor cauze infec ioase sau neinfec ioase, care nu produc leziuni decelabile la examenul fizic prin palpare a esuturilor intrascrotale.

108

Boli produse de germeni din genul Brucella

Eviden ierea agentului etiologic se poate face prin colorarea frotiurilor din sperm , printr-o colorare special electiv , eventual prin metoda Kster modificat , recomandat de OMS. Izolarea Br. ovis se poate face pe medii speciale, n atmosfer mbog it cu CO2, din secre iile vaginale, placent , stomacul sau pulmonii avortonului, material seminal sau testicule cu leziuni. Diagnosticul alergic este posibil dar nu a intrat n practica curent . Din cercet rile f cute de Predoiu (28) rezult c diagnosticul infec iei cu Br. ovis la oi este cu mult mai dificil dect la berbeci, deoarece la acestea semnele clinice particulare lipsesc, iar durata pozitiv rii bacteriologice i alergice este limitat la un interval foarte scurt de timp. Numai R.F.C. furnizeaz rezultate pozitive timp ndelungat dar, n general, nu mai mult de un an de la momentul infec iei.

Tratament
Administrarea zilnic la berbecii bolnavi, n faza de debut, a 1g tetraciclin asociat cu 1g streptomicin ar putea conduce la vindecarea clinic i chiar bacteriologic dar, aceasta din urm nu este cert (39). Din acest motiv, tratamentul berbecilor cu B.O.B.O. nu face parte din complexul m surilor de combatere a bolii, n nici o ar (femelele se autosterilizeaz ).

Profilaxie
Pentru prevenirea difuz rii B.O.B.O. n teritoriu sunt deosebit de importante m surile care vizeaz p strarea indemnit ii efectivelor nc libere de B.O.B.O., cu focalizarea aten iei asupra principalelor modalit i prin care infec ia p trunde ntr-un efectiv indemn, respectiv prin intermediul ovinelor, n special a berbecilor nou achizi iona i din turme infectate, sau prin contactul ntmpl tor direct cu animalele infectate, la p une, sau indirect prin mijlocirea surselor primare sau secundare contaminate de acestea. Pentru aceasta se impune ca achizi ionarea de animale sau de material seminal s se fac numai din efective indemne, fapt atestat prin certificatul de s n tate n care se precizeaz n mod expres lipsa infec iei cu B.O.B.O., constatat n cursul ultimelor 3 examene serologice prin R.F.C., precum i absen a oric rei reac ii sau manifest ri clinice de B.O.B.O. la ovinele cump rate, cu cel mult 30 zile nainte de livrare la furnizor, reexaminarea acestora urmnd s se fac dup prima s pt mn a carantinei profilactice, la beneficiar. Pentru materialul seminal se impun condi ii similare privind efectivul de origine, plus precizarea c acesta nu con ine Br. ovis sau anticorpi anti Br. ovis. n ara noastr este prev zut supravegherea serologic prin R.F.C. sau ELISA i, n unele situa ii, prin examen fizic i bacteriologic a:  berbecilor reproduc tori, cu 2 s pt mni nainte i dup sezonul de mont ;  berbecilor cu manifest ri clinice i a oilor care au avortat;  berbecilor care se vnd (la furnizor i beneficiar);  ovinelor importate, dup prima s pt mn de carantin ;  ovinelor exportate, n ultimele 30 zile nainte de livrare. Profilaxia specific este posibil i se practic n multe ri (nu i n Romnia), n care boala cunoa te o r spndire mai important , dar numai de necesitate, n efective infectate sau amenin ate iminent, deoarece vaccinarea induce pozitivare serologic i complic (dar nu anuleaz ) posibilitatea recunoa terii (diferen ierii) reac iilor postinfec ioase de cele postvaccinale, respectiv a inerii sub observa ie serologic a efectivelor. n unele ri (SUA, Noua Zeeland ) se prefer vaccinurile inactivate cu Br. ovis sau amestec de Br. ovis plus B19, n timp ce n alte ri (Fran a, Republica Sud-African ) se prefer vaccinul viu Rev1. Anterior a fost folosit i vaccin monovalent B19, iar n China se folose te o tulpin atenuat de Br. suis, biotipul 2. Schemele de vaccinare difer n func ie de tipul de vaccin i de ar , dar, n general, se practic vaccinarea tineretului n rcat i apoi a berbecilor adul i, anual (de i anticorpii persist 2-3 ani), cu 2-3 luni nainte de sezonul de mont . Reac iile postvaccinale nu sunt rare Prin vaccinarea sistematic a berbecilor, conform unui program care cuprinde, al turi de alte m suri, eliminarea operativ a berbecilor cu leziuni, a celor cu reac ii intense i a celor eliminatori de brucele, se consider c n decurs de 2-3 ani se poate ajunge la asanare. La rezultate similare se poate ajunge prin substituirea tuturor berbecilor cu berbeci vaccina i, proveni i din efective indemne, avnd n vedere c oile nu r mn purt toare de Br. ovis de la un sezon de f tare la altul. Din acela i motiv este nc neclar dac prin vaccinarea att a oilor ct i a berbecilor se ob in rezultate superioare, din punct de vedere medical i economic, variantei n care se vaccineaz numai berbecii. n Romnia, ca i n multe alte ri, combaterea focarelor declarate de B.O.B.O. se face printr-un program de m suri care vizeaz asanarea efectivului. Programul se bazeaz pe depistarea periodic a reagen ilor prin R.F.C. i examen clinic i direc ionarea lor spre abator. ntr-o prim etap depist rile trebuie s se fac trimestrial sau chiar mai frecvent, pentru ca ulterior acestea s se fac mai rar, eventual la interval de 6 luni. Efectivul poate fi considerat asanat dac , la dou controale succesive, la interval de 3 luni, nu a mai fost depistat nici un caz pozitiv sau dubios, serologic sau clinic.

Boli produse de germeni din genul Brucella

109