BRUCELOSE

ROSA BENGALA
Princpio do Teste: A Brucelose um teste de aglutinao bacteriana para a deteco qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos do anti-Brucella no soro humano e animal. A suspenso bacteriana aglutina quando misturada com as amostras que contm os anticorpos especficos de IgG ou de IgM na amostra paciente. Informaes Gerais: Metodologia: Temperatura da anlise: Amostra: Sensibilidade analtica Sensitividade Diagnstica Efeito Prozona Interpretao Aglutinao Bacteriana 18 25C soro no diludo 25 (+ 5) Ul/mL 93.3% >1000 Ul/mL Visual

Procedimento para o Mtodo Qualitativo: Nota: Deixar todos os reagentes e as amostras atingirem a temperatura ambiente e agitar o antgeno de Brucella gentilmente antes do uso 1 - Colocar 50L do antgeno de Brucella em divises separadas da placa, para as amostras a serem testadas, bem como para os controles positivo e negativo. 2 - Adicionar 50L de cada amostra no diluda e uma gota de cada controle no diludo. 3 - Homogeneizar, estendendo o lquido igualmente sobre cada diviso da placa. 4 - Agitar a placa com suave movimento de rotao manualmente ou em agitador automtico a 100 rpm durante 2 minutos, e observar a aglutinao sob luz incidente.. 5 - Marcar os resultados. Procedimento para o Mtodo Semi-Quantitativo: 1- Diluir o soro sobre a placa, conforme esquema abaixo. Diluies adicionais podem ser preparadas. 2- Pipetar 25L de soluo salina 0,85% nas divises 2 a 6 da placa. 3- Pipetar 25L de soro nas divises 1 e 2 da placa. 4- Com a mesma pipeta aspirar e expulsar vrias vezes o soro e a soluo salina contidos na diviso 2 at obter uma boa mistura. 5- Transferir 25L da diviso 2 a 3, misturar e assim sucessivamente at a diviso 6, desprezando 25L restantes.
TUBOS Soluo Salina 0,85% L Soro L Misturar e Transferir L Antgeno L Diluio 1 25 25 1:1 2 25 25 25 25 1:2 3 25 25 25 1:4 4 25 25 25 1:8 5 25 25 25 1:16 6 25 25 25 1:32 7 25 25 25 8 25 25 25 9 25 25 25

Reagentes: -Reagente Brucelose - Frasco com 3 mL Brucela abortus, tenso 544 entre 1% Buffer Lactate, pH 3.6 1 mol/L Phenol 5 g/L Brucelose -Controle Positivo - Frasco com 0,5 mL. Matriz soro animal Anticorpos Br. Abortus > 50 Ul/ml Azida Sdica 0.95 g/l - Placa de vidro para leitura Estabilidade e Armazenagem: Condies: Fechar imediatamente aps o uso No congelar Armazenamento: 2 8 C Estabilidade: at a data de validade Amostra: Soro: 8 dias de 2- 8C 3 meses (- 20C) - Amostras contendo fibrina devem ser centrifugadas. - Descartar amostras contaminadas. - No usar amostras altamente hemolizadas ou amostras lipmica. - No necessita de inativao Interferncias: No interferncia at: Hemoglogina 10 mg/dL Lipemina 10 mg/dL Fator Reumatide 300 Ul/mL Bilirrubina 2,5 mg/dL Controle de Qualidade: Os controles positivos e negativos (usar soluo fisiolgica) so recomendados para monitorar o desempenho do procedimento, assim como um teste padro comparativo para uma interpretao melhor do resultado. Limitao do Procedimento: O diagnstico clnico no deve ser feito em preenchimento de um nico resultado de teste, mas deve integrar dados clnicos e do laboratrio Precaues: 1. Phenol: (T) R24/25 txico: Txico em contato com pele e se engolido. R34: Causa queimaduras. S28.2: Aps o contato com a pele, lave imediatamente com gua em abundncia. S45: Em caso de acidente, procure o conselho mdico imediatamente. 2. Os reagentes contm azida sdica (0.95 g/L) como preservativo. No engula! Evite o contato com pele e as membranas mucosas. 3. Tome as precaues necessrias para o uso de reagentes no laboratrio.

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Para melhor visualizao da aglutinao, sugerimos transferir as diluies para lmina de vidro. Leitura e Interpretao: Examinar macroscopicamente a presena ou ausncia de aglutinao visvel imediatamente aps remover a lmina do rotator. A presena de aglutinao indica uma concentrao do anticorpo anti-Brucela igual ou melhor que 25 Ul/mL. O ttulo no mtodo semi-quantitativo, definido assim que a maior diluio mostrar um resultado positivo. Clculo: A concentrao aproximada do anticorpo na amostra do paciente calculada como segue: 25 x Ttulo da diluio = Ul/mL Valores Esperados: At 25 Ul/mL. Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. Implicaes Diagnsticas O diagnstico da Brucela pode ser avaliado pela isolao do microorganismo no sangue ou nos tamboretes, ou pela titulao de anticorpos especficos no soro do paciente. O reagente, por causa de sua frmula em um buffer cido, reativo com os anticorpos de IgG e de IgM e muito til para o diagnstico dos indivduos crnicos que apresentam um nvel elevado do anticorpo de IgG. Referncias: 1. Young E J. Clinical Disease 1995; 21: 283-290 2. Alton GC. Techniques for Brucellosis Laboratory INRA Paris, 1988 3. Ariza J. Current Opinion in Infectious Diseases 1996; 9: 126-131. 4. Comit mixto FAO/OMS de expertos en Brucelosis. WLD Health Org Tech Rep Ser 1958; 148: 1-60. 5.Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press, 1995.

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BRUCELOSE
Rosa Bengala

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