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PARA SU USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de Creatina Quinasa en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilizacin en Manual. Cat. No. CK 110 20 x 2,5 ml PRINCIPIO
HK

CK-NAC-activada
Creatina Quinasa EC 2.7.3.2 MANUAL

CK

Fosfato de creatina + ADP Glucosa + ATP

Creatina + ATP

Glucosa-6-P + ADP
G-6-PDH +

1. Tampn/Glucosa 2. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 1. Tampn/Glucosa 2. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 1. Tampn/Glucosa 2. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 1. Tampn/Glucosa 2. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 1. Tampn/Glucosa 2. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato

1 x 70 ml 20 x 2,5 ml

Glucosa-6-P + NADP

Gluconato-6-P + NADPH + H+

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. 1 x 70 ml 20 x 3,0 ml COMPOSICIN DEL REACTIVO Componentes Concentraciones en la prueba

CK 335 20 x 3,0 ml

CK 522 10 x 10 ml

1 x 105 ml 10 x 10 ml

CK 112 5 x 20 ml

1 x 105 ml 5 x 20 ml

CK 113 6 x 30 ml

2 x 100 ml 6 x 30 ml

SIGNIFICADO CLINICO(3) La Creatina Quinasa (CK) se encuentra principalmente en el msculo estriado, el cerebro y los tejidos musculares. El anlisis de la actividad de la CK en plasma o suero, provee un marcardor sensible para la deteccin de enfermedades del tejido muscular esesqueltico. Por ej. En la distrofia muscular del tipo Duchenne se pueden encontrar niveles de CK hasta 50 veces superior al lmite de normalidad establecido. En el caso de la distrofia muscular progresiva la actividad mxima de sta enzima se observa en nios y lactantes La actividad de la CK es tambin til en el diagnstico del infarto de miocardio y acidentes cerebrovasculares. La determinacin de la CK utilizando creatina fosfato y adenosin-5-difosfato (ADP) como substratos en lugar de creatina y adenosin-5-trifosfato (ATP), tiene varias ventajas en el funcionamiento del test ya que permite un valor de reaccin ms rpido resultando en una sensibilidad mayor. Se utilizan cantidades de muestra pequeas y no se necesitan los blancos de muestra. Debido a la oxidacin de los grupos sulfidril en la zona activa de la creatina quinasa, la enzima es muy inestable. Sin embargo, el enzima se reactiva aadiendo compuestos tiol. Por este motivo se incluye N-acetil-L-cisteina (NAC) en el test. Tambin se incluyen en el sistema del test adenosin-5'- monofosfato (AMP) y diadenosin pentafosfato, para inhibir la actividad mioquinasa la cual interfiere. En este sistema de test no existen sulfatos ya que alteran la reaccin , METODO UV Este es un mtodo estndar optimizado segn las recomendaciones de la Deutschen Gesellschaft fr Klinische Chemie.
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1. Tampn/Glucosa Tampn Imidazol Glucosa Mg-Acetato EDTA 2. Enzimas/Coenzimas/Sustrato ADP AMP Pentafosfato de diadenosina NADP HK G-6-PDH N-Acetilcisteina Fosfato de creatina

0,10 mol/l, pH 6,7 20 mmol/l 10 mmol/l 2,0 mmol/l 2,0 mmol/l 5,0 mmol/l 10 mol/l 2,0 mmol/l 2,5 U/ml 1,5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solucin 1 contiene azida sdica. Evitar su ingestin o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el rea afectada con agua abundante. En caso de ingestin o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un mdico. La azida sdica reacciona con el cobre y plomo de las tuberas, lo que podra producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formacin de estas azidas. Las superficies metlicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sdica deben ser lavadas con hidrxido sdico al 10% Hojas informativas sobre Salud y Seguridad estn disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propsitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

MANUAL - CK NAC - CK 110 ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS 1. Tampn/Glucosa Listo para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8C. 2. Enzimas/Coenzimas/Sustrato Reconstituir un vial de Enzimas/Coenzimas/Sustrato 2 con el volumen adecuado de Tampn/Glucosa 1: 2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (CK 110) 3,0 ml para el kit de 20 x 3,0 ml (CK 335) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (CK 522) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (CK 112) 30 ml para el kit de 6 x 30 ml (CK 113) Estables durante 3 semanas entre +2 y +8C 3 das entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampn/Glucosa Enzimas/Coenzimas/Sustrato MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) PROCEDIMIENTO 25C Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medicin: Pipetear en la cubeta: 25/30C Macro Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 2,5 ml Muestra 0,1 ml Semi Micro 1,0 ml 0,04 ml 37C Macro Semi Micro 2,5 ml 0,05 ml 1,0 ml 0,02 ml 340 nm, Hg 365 nm o Hg 334 nm 1 cm de espesor 25C/30C/37C Frente al aire Hombre Mujer 10 - 80 U/l 10 - 70 U/l 30C 15 - 130 U/l 15 - 110 U/l

PAGINA 2 DE 2 CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se debern seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programacin del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material est limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIA Evitar la hemlisis ya que interfiere con el ensayo. VALORES NORMALES EN SUERO
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37C 24 - 195 U/l 24 - 170 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica de la poblacin. LINEALIDAD Si la variacin de absorbancia por minuto excede: 0,25 a 340 nm/Hg 334 nm 0,14 a Hg 365 nm diluir 0,1 ml de muestra en 0,9 ml de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 10. REFERENCIAS 1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem 1977; 15: 255. 2. Stein, W. (1985), Med. Welt 36: 572. 3. Szasz, G., et al. Clin. Chem 1976; 22: 650.

3 min a 25C 2 min a 30C 1 min a 37C Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. CALCULOS Para calcular la actividad de la CK utilizar las frmulas siguientes: 25/30C
U/l = 4127 x A340 nm/min U/l = 4207 x A Hg 334 nm/min U/l = 7429 x A Hg 365 nm/min

Mezclar, incubar durante:

37C
U/l = 8095 x A340 nm/min U/l = 8252 x A Hg 334 nm/min U/l = 14571 x A Hg 365 nm/min

Revisado 26/01/04 wpt

RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912 Email: applications@randox.com Website: www.randox.com

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