Revista Investigaciones Aplicadas No. 2 (2007) 6-12 Publicada en lnea por la Universidad Pontificia Bolivariana http://convena.upb.edu.

co/~revistaaplicada ISSN CARACTERIZACIN DE POLISCARIDOS NATURALES OBTENIDOS A PARTIR DE FUENTES COLOMBIANAS

J. Saldarriaga, R. Zuluaga, C. lvarez, P. Gan Universidad Pontificia Bolivariana, Cq. 1 #70-01, of. 11-259, Medelln, Colombia Grupo de Investigacin sobre Nuevos Materiales
Recibido 22 Octubre 2007; aceptado 18 Diciembre 2007 Disponible en lnea: 27 Diciembre 2007

Resumen: En este trabajo, se han estudiado dos polisacridos semicristalinos, la celulosa y la manosa, obtenidos a partir de tres tipos de fuentes naturales colombianas. La celulosa fue aislada de residuos fibrosos (raquis) de Musaceas y de cultivos de Acetobacter xylium spp. En el caso de la manosa, esta fue obtenida de semillas maduras de Phytelephas Macrocarpa Palmae (marfil vegetal o Tagua). Componentes no celulsicos fueron observados en ambas muestras de celulosa, los cuales pueden afectar tanto la estabilidad trmica como el dimetro final de las microfibrillas aisladas. Los ensayos de espectroscopa infrarroja FTIR indican que componentes diferentes a la manosa estn presentes en las muestras caracterizadas, lo cual indica que tratamientos adicionales pueden mejorar la pureza del polisacrido. Copyright 2007 UPB. Abstract: In this work, crystalline polysaccharides as cellulose and mannan isolated from three different Colombian natural resources were studied. Cellulose microfibrils were isolated from Musaceae fibrous residues as rachis and Acetobacter xylium spp whereas mannan was obtained form maturate seeds of Phytelephas Macrocarpa Palmae (Ivory nut or Tagua). Non-cellulosic component observed on both cellulose samples affect the thermal stability and the diameter of cellulose microfibrils. FTIR spectroscopy shows non-mannans components on ivory nut samples. This result suggest than an additional treatment step improves the purity of polysaccharide isolated. Keywords: Polysaccharides, Cellulose, Mannan, Colombian natural resources, Physical characterization, Morphology 1. INTRODUCCIN En los ltimos treinta aos, la preocupacin debido a la contaminacin asociada a la presencia

de compuestos sintticos como los plsticos y su incidencia sobre los suelos de cultivo, rellenos sanitarios y otros mtodos de disposicin de residuos slidos ha incrementado de manera

Autor al que se le dirige la correspondencia: Tel. (+574) 4159095 ext 117, fax 4112372. E-mail: piedad.ganan@upb.edu.co (Piedad Gan).

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considerable. Pese al uso de aditivos que buscan incrementar la degradacin de los materiales sintticos, la alternativa de emplear materias primas de origen natural, buscando asegurar la biodegradabilidad, se convierte cada vez en una mejor opcin, pues estos compuestos cumplen con los requerimientos que desde el punto de vista ecolgico se han establecido para una adecuada disposicin final del material. Estos criterios incluyen las siguientes etapas (Albertsson, 1993; Arvanitoyannis et al., 1998): 1. Un tiempo de induccin durante el cual no se presentan cambios en las propiedades. 2. Al final del perodo de induccin puede presentarse un acelerado estado de fragmentacin. 3. En la etapa final se presenta una asimilacin de los productos de la fragmentacin por el ecosistema. Dentro de las potenciales materias primas que permiten cumplir con estos requerimientos se encuentran los polisacridos de origen natural, que gracias a las mltiples fuentes de los cuales pueden ser aislados, cuentan con una alta disponibilidad y un costo moderado. Sumado al desarrollo de materiales polimricos o composites, otros sectores como el alimenticio, el cosmtico o el biomdico ven en este tipo de sustancias materias primas de calidad para el desarrollo de mltiples productos. En este sentido Colombia debido tanto a su biodiversidad como a su alta vocacin agrcola, cuenta con un gran potencial para el aprovechamiento o explotacin de polisacridos semicristalinos como la celulosa y la manosa, los cuales pueden ser aislados bien sea de las paredes vegetales de las plantas o como producto de la actividad extracelular de microorganismos como bacterias. Estos compuestos pueden ser ampliamente utilizados bien sea como reforzantes de compuestos, en el caso de la celulosa, o como aditivo para pinturas, papel, cuero, textiles, pinturas, industria plstica, comstica y de alimentos. Pese a lo anterior, hasta ahora existen muy pocas referencias respecto al aislamiento o an ms utilizacin de este tipo de compuestos obtenidos a partir de fuentes colombianas (Zuluaga et al., 2007). La celulosa es un polmero semicristalino homogneo compuesto por unidades -(1-4) glucosa. Su principal fuente son las paredes celulares de las plantas, en donde se encuentra

unida a hemicelulosas, lignina y pectinas principalmente. La mayor parte de la celuosa de origen vegetal que se extrae a nivel mundial procede de maderas, sin embargo en los ltimos aos otras especies vegetales no madereras e incluso residuos agroindustriales se vienen empleando, tal es el caso de los desechos de cultivos de cereales (Sun et al., 2004), o Musaceas (Zuluaga et al., 2007). Es posible obtener celulosa de algas como la Valonia (Baker et al., 1997) o la actividad extracelular de microorganismos como el Acetobacter, Agrobacteria, Rhizobia o Sarcina (Jung et al., 2005). El tipo de fuente empleada condiciona tanto las caractersticas fsicas como morfolgicas y mecnicas de la celulosa. En el caso de la manosa, se encuentra conformada por unidades -1,4-manosa. Es un material abundante en la naturaleza y se encuentra como homopolmero en los endospermas de plantas como Phytelephas Macrocarpa Palmae (conocida en Colombia como Tagua y en otras regiones del mundo como marfil vegetal) combinado con celulosa y hemicelulosas en algunos casos. Tambin se encuentra presente en algas como Codiaceas o Dasycladaceas (Hori et al., 2007) y semillas de leguminosas (Petkowicz et al., 2001). Cuenta con dos fases, el tipo I se encuentra en la naturaleza en un alto estado cristalino, en tanto que la tipo II es ms semicristalina. Pese que existen varios estudios sobre su composicin y morfologa (Chanzy et. al., 1987, Hori et al., 2007, Kapoor et al., 1995) no existen mayor informacin sobre especies producidas en Colombia, pues hasta el momento sus aplicaciones se encuentran orientadas al desarrollo de artesanas. En el presente trabajo, se exponen entonces los principales aspectos relacionados con la composicin qumica, estructura cristalina y comportamiento trmico de muestras de celulosa y manosa obtenidas de fuentes naturales colombianas y que incluyen desechos agroindustriales de Musaceas, obtenidas mediante los procesos fermentativos del Acetobacter xylinum spp y de semillas maduras de Phytelephas Macrocarpa Palmae.

2. METOLOGA 2.1. Materiales Las muestras analizadas proceden de dos fuentes:

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Haces fibrosos extrados de raquis de banano (Musa AAB, variedades Valery y Gran Enano) cultivadas en la regin de Urab (Colombia). La celulosa bacteriana fue obtenida de la actividad extracelular del Acetobacter xylinum spp, tradicionalmente empleado para la elaboracin de vinagre casero. Semillas maduras de Phytelephas Macrocarpa Palmae recolectadas en la regin norte del departamento de Choc (Colombia) y que tradicionalmente son empleadas para la elaboracin de productos artesanales. 2.2. Obtencin de los polisacridos

Para su anlisis fueron lavadas cuidadosamente utilizando agua destilada hasta alcanzar un pH neutro. La denominacin para estas muestras en el texto ser B. Para realizar una adecuada caracterizacin, las semillas de maduras de Phytelephas Macrocarpa Palmae fueron sometidas a un vigoroso raspado mecnico utilizando herramientas tradicionales como sierras metlicas. El resultado fue un polvo blanco con un tamao de malla de 240. Estas muestras sern denominadas en lo sucesivo como T. 2.3. Caracterizacin de los polisacridos Los ensayos de espectroscopia infrarroja FTIR fueron realizados empleando un equipo marca Nicolet 460 ESP. Al menos 20 barridos usando una resolucin de 4 cm-1 fueron llevados cabo en cada una de las muestras. En cuanto al estudio de la estructura cristalina, fue utilizado un difractmetro Rigaku Miniflex 3D/Max con una radiacin de Ni filtrada con CuK en una longitud de onda de 0,1542 nm. La unidad fue operada a 40 kV y 30 mA, con un velocidad de evaluacin del ngulo de 5-50 a 2 /min. El anlisis trmico de las muestras fue realizado en un equipo de termogravimetra marca Metler Toledo TGA/SDTA85, utilizando atmsfera de nitrgeno y una velocidad de calentamiento de 10 C/min. Con miras a establecer el tamao de las muestras de celulosa aisladas, un microscopio de fuerza atmica marca Nanoscope IIIa (Digital Instruments, Santa Barbara CA, USA) con una cabeza multimodo fue utilizado para la muestra R. Mientras que la celulosa bacterial, muestra B, fue analizado a travs de micrografas realizadas en un microscopio electrnico de barrido, Jeol JSM 5910 LV. Debido a la naturaleza no conductora de las muestras, estas fueron recubiertas con oro empleando un sputter coater. 3. RESULTADOS Los espectros de los tres tipos de muestras aisladas se presentan en la Fig. 1. En las tres muestras existe una marcada presencia de los grupos hidrfilos, especialmente en la regin entre 3400 y 3300 cm-1 as como alrededor de 1650 cm-1, lo cual indica su tendencia a la captacin de humedad. En el caso de la muestra

Tras someterlos a un proceso de secado a 105 C durante 24 h, los haces fibrosos de raquis de banano obtenidos mediante extraccin mecnica en un equipo de desfibrado mecnico dotado con cuchillas de acero, fueron sometidos a la accin de diversos tratamientos qumicos sucesivos, y que esencialmente son: Disposicin de los haces fibrosos en una solucin de KOH al 5 % en peso durante 14 h a temperatura ambiente. Tras alcanzar un pH neutro, el precipitado se dispone en una solucin al 1 % en peso de NaClO2 a 70 C durante 1h. El precipitado es nuevamente puesto en una solucin de solucin al 5 % en peso de KOH durante 14 h a temperatura ambiente. Los tratamientos qumicos finalizan utilizando una solucin de HCl al 1 % en peso a 80 C durante 2 h. Una vez el residuo final alcanza un pH neutro, es sometido a la accin mecnica, utilizando un waring blender, durante varios minutos. Estas muestras sern denominadas en el resto del texto como R. En el caso de la celulosa bacterial, una cepa de un precultivo elaborado a partir de Acetobacter xylinum spp fue utilizada. Para ello, se realiz la inoculacin de 10 ml del sobrenadante de un precultivo, la cual fue dispuesta en 1 l de sustrato rico en glucosa, como el jugo de pia. El pH del medio fue ajustado a 4,0 con cido actico al 10 % con miras a estimular la produccin de celulosa. Este cultivo se realiz en condiciones estticas, a temperatura ambiente y en un lugar oscuro. Las muestras de celulosa fueron extradas a partir del quinto da del montaje del cultivo.

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T, en esta regin se encuentran las bandas 3504, 3479 y 3375 cm-1, que estn asociadas a la presencia de manosa cristalina, posiblemente de tipo I, tal como lo indican autores como Hori et al. (2007). En todas las muestras, bandas asociadas con la celulosa tales como 1426 cm-1 relacionada con las vibraciones asimtricas del grupo CH y simtricas del grupo CH alrededor en la zona entre 13801320 cm-1 son observadas. En las muestras R y B se aprecian adicionalmente vibraciones de los grupos C-O-C en la regin entre 1200 a 1100 cm-1 y de los CO en la regin cercana a 1060 cm-1, an cuando en la muestra B existe un alto grado de saturacin de la regin. Lo cual indica una marcada presencia de celulosa en las muestras R y B. En el caso de la muestra R, se observan vibraciones en la regin de 1730 cm-1 que se relacionan con componente no celulsicas, tales como hemicelulosas residuales como la xilosa, y cuya presencia puede afectar el tamao de la muestra aislada. En la muestra B, tambin existen vibraciones en esta regin, y que sumadas a apreciada en 1250 cm-1 indican la presencia de pectinas (Kacurkov et al., 2002). De acuerdo con esto, la muestra bacterial debe ser sometida a mayores procesos de limpieza con miras a incrementar la pureza de la celulosa obtenida. En los tres espectros se aprecian bandas en la regin entre 950890 cm-1 asociadas a las uniones presentes tanto en la celulosa como en la manosa. Para la muestra T, existe una fuerte vibracin en 872 cm-1 que puede estar ligada directamenete a la presencia de unidades Dmanopironosa, la cual ha sido observada en otras fuentes de manosa de origen vegetal (Navarini et al. 1999). En tanto que las vibraciones observadas en 1739 y 1251 cm-1, y asociadas con grupos carboxlicos indican la presencia de componentes tipo glucoxilanos. Respecto a la estructura cristalina, en la Fig. 2 se presentan los difractogramas de algunas de las muestras aisladas. En el caso de la muestra R, ste se encuentran dominados por la estructura tpica de la celulosa tipo I debido a la presencia del ngulo a 22. En la muestra tipo B, no incluida, se observa el mismo pico aunque ms ancho, resultado que guarda relacin con el nivel de cristalizacin, tal como lo sugieren otros autores como Watanabe et al. (1998).
Transmitancia

3500

3000

2500

2000

1500
-1

1000

500

Nmero de onda (cm )

Fig. 1. Espectros infrarrojos de los polisacridos aislados de muestras de haces fibrosos de raquis (R), cultivos bacteriales (B) y tagua (T).

Intensidad (unidad arbitraria)

R 10 20 30 40

2 ()

Fig. 2. Difractogramas de los polisacridos aislados de muestras de haces fibrosos de raquis (R) y tagua (T). En el caso de la muestra T, el difractograma indican claramente la presencia de cristales de manosa con un alto grado de cristalinidad, as se deriva de la presencia de los ngulos a 16, 18, 20, 24, 25 y 29, y que son comparables a los observados por otros autores para este tipo de hemicelulosa (Kapoor et al., 1995, Hori et al., 2007). A su vez este resultado confirma lo comentado antes en los resultados de la espectroscopa infrarroja de esta muestra. As mismo, en este caso no se aprecia presencia de celulosa cristalina combinada con esta muestra. Estos ngulos indican que el tipo de celda unitaria

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observada corresponde a una de tipo ortormbica (Hori et al., 2007). El comportamiento trmico de las muestras de polisacridos aislados se presenta en la Fig. 3. La muestra B, contiene una regin de degradacin adicional cuando se compara con las dems, en especial con la otra muestra de celulosa, en este caso vegetal denominada R. Es posible que esta regin de degradacin se encuentre asociada con componentes no celulsicas tales como pectinas, protenas, cidos nucleicos y dems restos de membrana de las clulas bacteriales, siendo alguno de estos componentes observado antes en los ensayos de espectroscopia infrarroja (George et al., 2005). Estas sustancias pueden ser removidas mediante la utilizacin de tratamientos qumicos que mejoren la pureza de la muestra de celulosa. La primera regin de degradacin que se observa para todas las muestras se relaciona con la tendencia a la captacin de humedad, tal como se observo antes en los resultados obtenidos usando espectroscopia infrarroja. Respecto a la tercera zona de prdida en peso, para las muestras R y B corresponde a la degradacin de la celulosa. Superada esta regin, la muestra B contiene un mayor nivel de residuos, esto puede estar ligado a impurezas de carcter mineral asociados al sustrato empleado para el cultivo y que no fueron removidos por el proceso de limpieza de la muestra.

antes tiene baja influencia en la degradacin de la muestra. Se aprecia tambin que an a 800 C, la prdida de peso no es total, sugiriendo la presencia de impurezas, posiblemente sales. En la micrografia por AFM de la Fig. 4 se observan microfibrillas de celulosa aisladas de raquis de banano. En este caso se aprecian tanto microfibrillas individuales con dimetros promedios entre 5 y 10 nm as como haces con dimetros entre 50 y 60 nm. La existencia de los mismos, se encuentra asociada con la hemicelulosa residual presente en la muestra, tal como se coment antes. Haces fibrosos con dimetros del orden de 160 nm son observados en la micrografa obtenida mediante microscopa SEM para la celulosa procedente de los cultivos bacteriales. Es posible que a su vez estos se encuentren conformados por microfibrillas de menor tamao, y que para obtenerlas es necesario emplear tratamientos qumicos o mecnicos adicionales.

100

Prdida en peso (%)

R 80 B T

Fig. 4. Micrografa AFM de muestras de celulosa aislada de raquis.

60

40

20 200 400 600 800

Temperatura (C)

Fig. 3. Anlisis trmico de muestras de haces fibrosos de raquis (R), cultivos bacteriales (B) y tagua (T). Para la muestra T, la mxima regin de degradacin se encuentra asociada a la presencia de la manosa, siendo la temperatura mxima 291 C. La influencia de los componentes diferentes a la manosa presentes en la muestra y comentados

Fig. 5. Micrografa SEM de muestras de celulosa aislada de cultivos bacteriales.

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Adicionalmente, sobre la superficie de los haces de microfibrillas de celulosa de la muestra B, ver Fig. 5, se aprecian sustancias con forma poco definida, a modo de recubrimiento, que se relacionan con los componentes no celulsicos comentados antes. 4. CONCLUSIONES En el presente trabajo dos tipos de polisacridos, la celulosa y la manosa, obtenidos a partir de tres tipos diferentes de fuentes naturales han sido estudiados. Los diferentes resultados indican que gracias a su estructura y caractersticas, estos polisacridos pueden ser empleados para el desarrollo de mltiples tipos de materiales bien sea desde su desempeo trmico o mediante el aprovechamiento de sus estructuras cristalinas. De otro lado, tratamientos qumicos principalmente, deben ser considerados con miras a incrementar la pureza de las muestras, en especial a las obtenidas a partir de la actividad extracelular del Acetobacter xylium spp, en el caso de la celulosa o de las semillas de Phytelephas Macrocarpa Palmae para la manosa. AGRADECIMIENTO Los autores expresan su agradecimiento al CIDIUPB y Colciencias por el apoyo financiero al desarrollo de los proyectos de investigacin cuyos resultados se presentan en este trabajo. Igualmente a los estudiantes del programa de Ingeniera Mecnica por su motivacin y esfuerzo para el desarrollo del mismo.

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SOBRE LOS AUTORES Jorge Saldarriaga Profesor de la Facultad de Ingeniera Mecnica de la Universidad Pontificia Bolivariana, Magster en Ingeniera nfasis en Nuevos Materiales. rea de inters investigativo: polmeros y materiales compuestos de matriz polimrica. Robin Zuluaga Ingeniero Agroindustrial de la Universidad Pontificia Bolivariana, estudiante de doctorado en Ingeniera y miembro del Grupo de Investigacin sobre Nuevos Materiales de la misma Universidad. rea de inters investigativo: materiales compuestos a partir de fuentes naturales. Catalina lvarez Ingeniera Agroindustrial de la Universidad Pontificia Bolivariana, estudiante de doctorado en Ingeniera y miembro del Grupo de Investigacin sobre Nuevos Materiales de la misma Universidad. rea de inters investigativo: materiales compuestos a partir de fuentes naturales. Piedad Gan Profesor de la Facultad de Ingeniera Mecnica de la Universidad Pontificia Bolivariana y Investigador del Grupo de Investigacin sobre Nuevos Materiales de la misma Universidad. Doctor en Ingeniera de Materiales. rea de inters investigativo: polmeros y materiales compuestos de matriz polimrica.

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