Sunteți pe pagina 1din 94

Istvan SAS & Severus-Daniel COVACIU-MARCOV

LUCRRI PRACTICE DE FIZILOGIE ANIMAL I UMAN

Universitatea din Oradea 2006 -uz intern-

CUPRINS FIZIOLOGIA CELULELOR ANIMALE Excitabilitatea celulelor animale Lucrarea nr.1. Excitarea celulelor animale cu ajutorul agenilor fizici i chimici Micarea celulelor animale Lucrarea nr.2 Demonstrarea micrilor ciliare i flagelare la animale unicelulare Hrnirea celulelor animale Lucrarea nr.3 nglobarea particulelor la animale monocelulare Respiraia celulelor animale Lucrarea nr.4 Demonstrarea respiraiei celulare la animale monocelulare Permeabilitatea, difuziunea, osmoza Lucrarea nr.5 Demonstrarea fenomenului difuziunii Lucrarea nr.6 Demonstrarea fenomenului osmozei FIZIOLOGIA SISTEMULUI NERVOS Lucrarea nr. 7 Evidenierea curentului de leziune i a potenialelor de aciune, prin metoda labei galvanoscopice Reflexele i actul reflex Lucrarea nr. 8 Demonstrarea existenei reflexelor la om Lucrarea nr. 9 Actul reflex simplu i analiza lui Lucrarea nr. 10 Verificarea legilor reflexelor ale lui Pflger ANALIZATORII ANALIZATORUL CUTANAT Lucrarea nr. 11 Esteziometrie Lucrarea nr. 12 Efectul masajului cu ghia asupra durerii ANALIZATORUL GUSTATIV Lucrarea nr. 13 Deteminarea ariilor gustative pentru gusturile de baz ANALIZATORUL VIZUAL Lucrarea nr. 14 Reflexul pupilar Lucrarea nr. 15 Determinarea cmpului vizual pentru alb i culori Lucrarea nr. 16 Disocierea vederii binoculare Lucrarea nr. 17 Experiena lui Mariotte Lucrarea nr. 18 Culori complementare Lucrarea nr. 19 Evidenierea purpurului retinian ANALIZATORUL ACUSTICO-VESTIBULAR Lucrarea nr. 20 Extirparea urechii interne la broasc 5 5 5 7 7 8 8 11 11 12 13 14 16 18 19 21 23 24 26 26 27 28 29 29 30 30 31 32 33 33 34 35 35

SISTEMUL MUSCULAR Lucrarea nr. 21 Oboseala muscular Lucrarea nr. 22a Prepararea gastrocnemianului de broasc Lucrarea nr. 22b Preparatul neuromuscular gastrocnemian-sciatic APARATUL DIGESTIV Lucrarea nr. 23 Observarea micrii cililor esofagieni la broasc Lucrarea nr. 24 Hidroliza amidonului cu saliv sau cu HCl APARATUL RESPIRATOR Lucrarea nr. 24 Determinarea capacitilor i volumelor respiratorii la om (spirometrie) Lucrarea nr. 25 Rolul diafragmei n respiraie. Experiena Donders SNGELE
Lucrarea nr. 26 Defibrinarea sngelui de mamifer Lucrarea nr. 27 Obinerea serului i plasmei sanguine de mamifer Lucrarea nr. 28 Volumul globular. Hematocritul Lucrarea nr. 29-30 Numrarea globulelor roii i albe Lucrarea nr. 31-32 Determinarea grupelor de snge principale la om Lucrarea nr. 33 Determinarea timpului de coagulare a sngelui Lucrarea nr. 33 Dozarea hemoglobinei din snge

36 36 38 39 42 42 43 45 45 48 50 50 51 53 54 62 65 66 67 69 69 71 75 76 80 81

cu ajutorul colorimetrului Sahli Lucrarea nr. 34 Obinerea cristalelor de hemin APARATUL CIRCULATOR Lucrarea nr. 34 Automatismul cardiac. Legturile lui Stanius Lucrarea nr. 35 Msurarea presiunii arteriale la om METABOLISMUL
Lucrarea nr. 36 Calcularea metabolismului bazal dup tabele Lucrarea nr. 37 Calcularea deviaiei metabolismului bazal

dup formula lui Ridd


Lucrarea nr. 38 Determinarea ratei metabolice la obolan Lucrarea nr. 39 Determinarea ratei metabolice la obolanii crora

li s-a indus pe cale experimental hipertiroidism sau hipotiroidism


Lucrarea nr. 40 Alctuirea raiilor alimentare

83 85 93

Bibliografie

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

FIZIOLOGIA CELULELOR ANIMALE


Ca unitate fundamental a materiei vii, celula se caracterizeaz printr-o intens activitate fiziologic. Aceast activitate depinde de factori intrinseci i extrinseci celulari. n cazul animalelor pluricelulare, procesele fiziologice celulare sunt procese ale organismului ntreg. Toate celulele organismului, provin dintr-o celul unic, reprezentat filogenetic de protozoare primitive, iar ontogenetic de oul fertilizat. Orict de difereniate apar unele celule la metazoarele evoluate, n structura tuturor se distinge organizarea primitiv. Adic sunt comune manifestrile eseniale ale vieii: metabolism, cretere, reproducere. Cele mai simple experiene de laborator, asupra fiziologiei celulelor pot fi realizate cu ajutorul animalelor monocelulare.

Excitabilitatea celulelor animale


Excitabilitatea este una din proprietile fundamentale ale materiei vii, prin care se deosebete de materia lipsit de via. Prin excitabilitate se nelege capacitatea celulelor de a rspunde la stimuli, adic la modificrile de energie de o anumit durat i intensitate din mediul de via (intern sau extern). Excitabilitatea este o proprietate primordial a membranei celulare. n organismele metazoarelor, unele celule s-au specializat n vederea recepiei excitaiilor din mediul exterior sau interior (celulele receptoare). Sub influena unor ageni externi sau interni, se produce o modificare a potenialelor bioelectrice i ia natere o und ce se propag. Celulele nervoase sunt cele mai specializate, n vederea conducerii undelor biopotenialelor electrice i declanrii reaciei de rspuns.

Lucrarea nr.1 Excitarea celulelor animale cu ajutorul agenilor fizici i chimici


Principiul lucrrii: se observ aciunea diferiilor ageni fizici (temperatur, contact cu un corpul) i chimici asupra organismului monocelular. Materialul necesar: cultur de amibe cu lame de sticl, lamele de sticl, pipete, microscop optic, nisip fin, penset, surs de radiaii calorice, cristale fine de NaCl. Metoda de lucru: 1.) Se scoate o lam de sticl din cultura de amibe, se acoper cu o lamel i se pune la microscop. Se observ amibele. 2.) Se pun cu o penset cteva boabe de nisip pe lama de sticl cu amibe. Urmrind amibele n cmpul microscopic, se observ, c dac aceste n deplasarea lor se ntlnesc i vin n contact cu un corp inert (reprezentat de boabele de nisip), i schimb direcia deplasrii.

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

3.) Tot pe aceeai lam de sticl cu amibe, se proiecteaz dintr-o direcie un fascicul de radiaii calorice. n funcie de intensitatea radiaiei calorice, putem observa reacii de deplasare a amibelor n direcii diferite. Dac curentul cald este favorabil amibelor, acestea se vor deplasa n direcia sursei de radiaii calorice. Dac curentul cald este defavorabil animalelor, acestea se vor deplasa n direcia opus direciei din care vin radiaiile. 4.) Pe marginea lamelei care acoper preparatul microscopic, se aeaz un cristal de NaCl. Dizolvarea progresiv a cristalului de sare n apa de sub lamel, determin deplasarea amibelor ctre marginea opus a lamei. Deci amibele 1 au recepionat variaia nefavorabil a salinitii. Discuii: Agenii fizici i chimici determin efecte negative sau pozitive asupra micrii amibelor, n funcie dac aceti ageni sunt favorabile sau defavorabile acestor animale unicelulare. Adic, anumii factori fizico-chimici din mediul nconjurtor, provoac micorarea tensiunii superficiale 2 , ntr-un loc pe suprafaa celulei. Se produce aici o evaginare, apare un pseudopod, care se fixeaz cu captul su pe substrat, apoi coninutul celulei se scurge n acest pseudopod (micarea amiboidal prin rostogolire), ca i cum corpul amibei ar fi tras ctre punctul de fixare. Un alt psedopod se formeaz apoi n aceeai direcie sau n alta i deplasarea continu. La fel i n corpul omului, leucocitele au reacii pozitive sau negative fa de diferii ageni. Ele se deplaseaz prin trre cu ajutorul pseudopodelor. Tot n acest fel are loc i diapedeza globulelor albe, adic migrarea lor din vase n esuturi. Leucocitele reacioneaz ndreptndu-se ctre locul n care se gsesc bacterii sau se ndeprteaz de locul n care se gsesc toxine 3 .

Fig. 1 Micarea amiboidal: A prin traciune; B - prin rostogolire.

- experiena poate fi efectuat utiliznd euglene sau parameci; - dar au loc i modificri chimice, care presupun un consum de energie, obinut din molecule macroergice (ATP). 3 - aceste mecanisme, mult mai complexe, sunt tratate la disciplinele citologie, biologie celular sau imunologie;
1 2

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Micarea celulelor animale


Organismele unicelulare, protozoare, sau celulele izolate (leucocitele sngelui, spermatozoizii), sunt capabile de deplasare, micare. La acestea micarea se realizeaz prin mecanisme primitive. Unele celule posed diferite organite de micare (formaiuni contractile): flageli (flagelatele, spermatozoizi), membrane ondulante, cili (infuzorii). La altele, acestea nu au o existen permanent i un loc stabil, celulele deplasndu-se cu ajutorul micrilor protoplasmei (de exemplu, pseudopodele de la amib sau la leucocite). Forma cea mai primitiv de micare, ntlnit n seria animal, este micarea amiboidal. Este caracteristic unora din protozoare, amibocitelor din hemolimfa nevertebratelor i globulelor albe ale vertebratelor. Factorii din mediul extern (ex. substane solvate), excit corpul acestor celule i determin formarea unui pseudopod, care contractndu-se, trage nainte corpul celular. Pseudopodul este orientat ntotdeauna n sensul gradientului de concentraie. Distingem amiboismul prin traciune (cele descrise mai nainte) i amiboismul prin rostogolire (pseudopodul se nainteaz continuu, iar protoplasma se rostogolete). Micarea primitiv, protoplasmatic (amiboidal), pe parcursul evoluiei s-a dezvoltat odat cu diferenierea n protoplasm a unor elemente contractile (ex. miofanele la Vorticella) i odat cu diferenierea cililor i flagelilor. Micarea ciliar i flagelar d posibilitatea unor organisme animale unicelulare sau a unor celule al metazoarelor, s se deplaseze cu uurin n mediul lor extern. Micrile ciliare i flagelare, sunt caracterizate de un grad de reactivitate mai ridicat i mai evoluat. Trebuie s se fac distincie ntre kinetocili i stereocili (heterocili). Kinetocilii, au garnitur filamentoas corespunztoare formulei 9+2, i sunt capabile s realizeze un lucru mecanic, deci micri active (ex. ciliatele i flagelatele; spermatozoizii; cmpurile de cili din epiteliul branhiilor molutelor; celulele ciliate al epiteliului traheal sau faringian). Stereocilii au garnitur de filamente 9+0, i incapabili de micri active. Celulelor care posed sterocili, se atribuie funcii receptoare sau senzitive, cum ar fi cazul conurilor i bastonaelor retiniene.

Lucrarea nr.2 Demonstrarea micrilor 4 ciliare i flagelare la animale unicelulare


Principiul lucrrii: se observ modificrile la nivelul micrilor animalelor monocelulare ciliate sau flagelate, sub aciunea unor factori fizici. Materialul necesar: culturi de protozoare, soluie de gelatin de 3 % 5 , lame de microscopie, lamele de sticl, pipet efilat, microscop. Metoda de lucru: 1.) Se ia o pictur de ap din cultura de protozoare i se pregtete un preparat microscopic, n care se vor putea observa micrile de deplasare a acestora i organitele care le determin aceste micri. Se observ c euglena execut micri elicoidale continue n mediul lichid.
4 5

- micarea amiboidal a fost urmrit n experimentul anterior; - se poate folosi i soluie apoas de gum arabic sau soluie apoas de clei de cire;

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

2.) Pe o lam de microscopie se pun cteva picturi din soluia de gelatin de 3 %. Cu ajutorul unei pipete efilate, peste aceast lam, se pune o pictur cu de ap din cultura de protozoare. Preparatul astfel pregtit se examineaz la microscopul optic. 3.) Se observ, c euglenele puse ntr-un mediu mai dens, execut micri flagelare mai rare. Astfel micrile pot fi urmrite mai uor. Se constat, c micarea flagelului, ia natere la baz (aici se gsete corpusculul de bazal, care este centrul micrii) i progreseaz spre vrf, trgnd nainte corpul animalului (celula). 4.) Experimentul descris la punctele 1-3, ofer posibilitatea de a ncetini i urmri, i micrile paramecilor. Paramecii se deplaseaz cu ajutorul cililor vibratili, care sunt dispui n iruri i fac valuri, asemntoare cu cele ce se vd la suprafaa unui lan btut de vnt. Aceste micri sunt coordonate. Discuii: Prin analogie, n corpul animalelor i al omului, celulele ciliate n esuturi se gsesc n epiteliul trahean, i au rol n epurarea cilor respiratorii de particulele de praf, ptrunse odat cu aerul inspirat 6 .

Hrnirea celulelor animale


Pentru a acoperi nevoile energetice i plastice, organismele mono- i pluricelulare trebuie s primeasc din mediul ambiant substane chimice pe care, transformndu-le prin procesul digestiei, le aduc n stare de a fi utilizate. Unele dintre acestea sunt generatoare de energie necesar desfurrii proceselor vitale, altele au rol plastic, servind la construcia i reconstrucia organismului. Procesul de fagocitoz, prin care leucocitele nglobeaz particulele (ex. germeni microbieni), n modul de funcionare este asemntor cu hrnirea animalelor unicelulare. Putem considera, din perspectiva morfologiei i fiziologiei comparate, c procesul nutritiv de la animale monocelulare, sa difereniat pe parcursul evoluiei n procesul de aprare fa de microorganismele patogene, care ptrund n organism. Celulele sangvine, care fagociteaz microparticule cu diametre cuprinse ntre 1-3 (ex. bacterii, granule de amidon, granule de colorani, crbune, etc.) sunt numite microfage. Iar cele, care capteaz macroparticule (ex. celule), sunt numite macrofage. Spre deosebire de fagocitoz, care presupune nglobarea unor particule solide, a fost descris i un alt fenomen, numit pinocitoz, care indic captarea de lichid n vezicula format n celul, prin invaginaia membranei celulare. Hrnirea, respectiv nglobarea particulelor organice la nivel celular, se poate urmri foarte simplu, utiliznd organisme monocelulare (amib i parameci).

- acest aspect se discut mai detaliat la un experiment la capitolul Fiziologia Respiraiei;

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Fig.2 Schema pinocitozei [a] i a fagocitozei [b]

Lucrarea nr.3 nglobarea particulelor la animale monocelulare


Principiul lucrrii: se observ nglobarea a unor particule colorate de ctre animale monocelulare. Materialul necesar: culturi de amibe sau de protozoare, lame de microscopie, lamele, pipete, microscop, pulbere de rou de Congo sau pulbere de tu. Metoda de lucru (1): 1.) Se scoate o lam de sticl din cultura de amibe. 2.) n preparatul microscopic cu amibe se pune praf de tu uscat i se acoper cu o lamel. 3.) Examinnd preparatul la microscop, se observ cum emit amibele pseudopode, cu ajutorul crora le nglobeaz pulberea de tu, i cum aceasta se adun n vacuole. Metoda de lucru (2): 1.) Se scoate o lam de sticl din cultura de amibe. 2.) n pictura de ap, n care se gsesc amibe, se introduce o cantitate mic de pulbere de rou de Congo. 3.) Preparatul biologic astfel obinut, se examineaz la microscop. Se observ, ca n cazul experimentului anterior, cum le nglobeaz amibele particulele de 9

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

pulbere. Particulele nglobate se adun ntr-o vezicul care apare ca o formaie roie n citoplasm. 4.) Dup 10-15 min., se repet examinarea preparatului microscopic. Se observ schimbarea culorii vacuolei din rou n albastru. Discuii (1-2): Pulberile de tu i colorant, nu sunt particule alimentare li nu pot fi digerate. Ele au fost folosite numai pentru a evidenia fenomenul nglobrii cu ajutorul pseudopodelor. Amibele se hrnesc cu bacterii, alge monocelulare, care se gsesc n lichidul n care triete. Acestea sunt nglobate ntr-o vezicul digestiv, n care ptrunde un suc acid, bogat n enzime. Cu ajutorul acestor enzime, particulele alimentare sunt digerate. Aceast digestie intracelular este ns extraprotoplasmatic. Rou de Congo, este o substan care are aceast culoare n mediul alcalin sau neutru, i care i schimb culoarea n mediu acid, devenind albastr. Schimbarea culorii, pe parcursul experimentului, indic prezena unor substane acide produse n cursul digestiei, n vezicula n care a fost nchis pulberea de colorant. Metoda de lucru (3): 1.) Se ia o pictur de ap din cultura de protozoare i se pregtete un preparat microscopic. 2.) n pictura de ap de pe lama de microscopie, se aplic o cantitate mic de colorant (pulbere de tu sau pulbere de rou de Congo). 3.) Preparatul biologic se examineaz la microscop. Se observ intrarea particulelor prin citostomul paramecilor. Privind cu mritoare puternice, pot fi observate formarea a unor vrtejuri de ap, care aduc n cavitatea peristomului microorganismele n suspensie. Prin citostom, acestea intr n corpul celular, n care se formeaz vezicula digestiv. Produsele nedigerate se elimin prin citoproct, care se formeaz numai n momentul evacurii acestora, la partea posterioar a celulei. Discuii (1-2-3): Prin experienele de mai sus, am demonstrat hrnirea a unor organisme monocelulare libere. n corpul celulelor metazoarelor, nu toate celulele ajung n contact direct cu substanele nutritive, venite din mediu. La animale pluricelulare, unele celule se specializeaz n vederea prelucrrii fizice i chimice a hranei, dobndind rol digestiv. Aduse n stare asimilabil, substanele chimice sunt absorbite n lichidele circulante, de unde trec n lichidul interstiial. Prin acest lichid interstiial, celulele fac schimburi nutritive.

10

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Respiraia celulelor animale


Respiraia, este una din proprietile fundamentale ale materiei vii. Dintre diferitele aspecte ale metabolismului, respiraia este cea mai evident. Dac vrem s generalizm, acest fenomen fiziologic (foarte complex ca atare), se exprim prin consum de O2 i producerea de CO2 7 . Consumul de O2 din mediul extern i eliminarea CO2 din interiorul organismului pot fi demonstrate relativ uor la nivelul celulei la animalele superioare i om, ca i la cele inferioare, unicelulare. n general, intrarea O2 n celul i ieirea CO2 se fac prin difuziune pe toat suprafaa celulei.

Lucrarea nr.4 Demonstrarea respiraiei celulare la animale monocelulare


Principiul lucrrii: demonstrarea necesitii de O2 la animalele inferioare (infuzori). Materialul necesar: infuzie proaspt (cu o populaie bogat de infuzori), lame, lamele, sering de 2 cm cu ac ct mai fin 8 , cteva fire de paie uscate de graminee, microscop, cear (sau parafin), capsul sau ibric n care se topete ceara, pens, surs de cldur (bec de gaz sau de spirt). Metoda de lucru: 1.) Pe o lam de microscopie curat se pregtete o camer pentru observaii. Trei fire de pai, cu lungimi de 1,2 - 1,5 cm, se impregneaz cu cear sau parafin topit (n stare lichid, fierbinte). Cu ajutorul acestor fragmente de pai, aplicate pe lama de sticl (uscat), se ncadreaz un spaiu o camer ptrat cu o latur liber. 2.) n camer obinut, se introduce lichid de infuzie, i se acoper cu o lamel. Este foarte important, s nu rmne n lichid bule de aer. 3.) Preparatul biologic astfel obinut, se observ la microscop. Dac exist un numr mare de infuzori n preparat, acesta poate considera satisfctor. 4.) Preparatul se las linitit pe un timp de 15 min. 5.) Folosind acul seringii, sub lamel, n centrul camerei, se introduc 1 - 2 bule de aer. 6.) Se las preparatul n repaus 10 min. 7.) Se examineaz din nou preparatul la microscop. Se constat c infuzorii sau ngrmdit n jurul bulelor de aer. Discui: ngrmdirea infuzorilor n jurul bulelor de aer, se datoreaz necesitii de a respira, ntruct n bulele de aer, cantitatea (concentraia) de O2 este mult mai mare
7
8

- procesul de respiraie, i a transportului de gaze, le vom detalia la capitolul Fiziologia Respiraiei;


- cele mai recomandate ar fi acele seringilor folosite pentru administrarea insulinei;

11

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

dect n lichidul cuprins n spaiul limitat de sub lamel. Fenomenul observat, este denumit oxitactism pozitiv i este determinat, n fond, de posibilitatea unor schimburi respiratorii mai avantajoase dect n restul camerei.

Permeabilitatea, difuziunea, osmoza


Celulele animale (i cele vegetale) sunt traversate de un considerabil flux (curent) de materie i energie, aflndu-se n schimb permanent cu mediul care o nconjoar, constituind sisteme deschise. Datorit metabolismului, celulele reuesc s-i menin un nivel ridicat, aproape constant al energiei libere interne. Adic celulele se afl ntr-o stare staionar. Aceast stare staionar este caracterizat printr-un echilibru dinamic cu mediul exterior (echilibru metabolic i energetic). Starea de echilibru a sistemului celular (steady state), trebuie neleas n sensul, c diferenele de potenial i concentraiile ionice, sunt invariabile n timp. Adic, fluxul net al fiecrei ioni este zero. Realizarea acestei echilibru staionar, se face pe seama unei cheltuieli energetice permanente. Celula este sediul unor reacii biochimice, prin care se asigur energia necesar vieii celulare. Aceste reacii sunt condiionate de permeabilitatea membranei plasmatice, prin care se realizeaz un transfer de substane n ambele sensuri (intrare i ieire). Pe o parte i de alta a membranei periplasmatice (membrana celular morfologic sau numai funcional), exist diferene foarte relevante de concentraii ionice i de potenial electric. Membrana celular intervine ntr-o anumit form la meninerea acestor diferene. Este important c n funcionarea membranei, elementele nutritive 9 trebuie s intre n celul, n timp ce produii de catabolism 10 s prseasc celulele. n timp ce substanele indigene, indispensabile funcionrii celulelor, s nu o traverseze n nici un sens membrana. Permeabilitatea celular, definete tocmai uurina cu care unele substane strbat zona periplasmatic superficial li sistemul de endomembrane. Permeabilitatea celulelor este o nsuire fundamental a acestora, i este determinat de compoziia biochimic i structura celulelor, de specificul reaciilor biochimice care se petrec n acestea. n aceeai timp, permeabilitatea celulelor este determinat i de compoziia i concentraia mediului extern. ntre permeabilitatea celular i factorii 11 ei determinani, exist relaii foarte strnse, modificndu-se n funcie de diverse condiii fiziologice i fizico-chimice. n privina mecanismelor permeabilitii celulare, distingem fore pasive i active. Forele pasive, sunt cele care nu necesit cheltuieli energetice, n timp ce forele active sunt cele consumatoare de energie celular. n experienele de laborator putem studia cel mai uor, fenomenele difuziunii i osmozei.

sruri minerale, ap, oxigen, aminoacizi, oze, acizi grai, biocatalizatori bioxid de carbon, sruri minerale, ammoniac, sruri de amoniu, uree, acid uric, etc. 11 printre factorii influenatori al permeabilitii celulare, se enumer: coeficientul de partaj, dimensiunea moleculelor, gradul de ionizare, prezena ionilor nedifuzabili, metabolism celular. Caracteristicile acestor factori sunt tratai n detaliu la disciplina Citologie.
9 10

12

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr.5 Demonstrarea fenomenului difuziunii


Principiul lucrrii: folosind dou medii lichide, aparent nemiscibile, se demonstreaz n timp fenomenul difuziunii. Materialul necesar: un pahar conic, cristale de bicromat de potasiu sau CuSO4 (sulfat de cupru), pipet efilat, ap distilat. Metoda de lucru: 1.) n paharul conic, se pun 20 cm3 de ap distilat. 2.) Cu ajutorul pipetei se introduce la fundul paharului soluia saturat de bicromat de potasiu (sau sulfat de cupru). Aceasta, avnd densitate mai mare, rmne la fundul paharului, deplasnd n sus apa distilat. Se poate observa existena a unei membrane separatoare ntre cele dou medii lichide. 3.) Dup circa 6 ore 12 , la nivelul suprafeei de separare se formeaz un strat mai puin colorat. Se observ, progresarea lichidului colorat spre partea superioar a paharului, pn cnd se realizeaz o soluie uniform colorat. 4.) Se poate remarca i diferena n timp a vitezei de difuziune a celor dou soluii saturate.

Fig.3 Schema difuziei simple (fazele de dizolvare a unei substane solide n mediul lichid)

Discuii: Prin experimentul prezentat mai sus, am observat fenomenul ptrunderii unei substane n masa altei substane, adic fenomenul difuziunii. Difuziunea poate avea loc i n cazul soluiilor desprite printr-o membran separatoare. Pot s

12

Ne avnd posibilitatea de a atepta cu studenii peste 6 ore pn la reuita experimentului, se recomand, s se pregteasc experimentul n prealabil n alte pahare, de ctre cadrele didactice. De recomandat, n timp de 6, 8, 10 ore naintea efecturii lucrrilor practice, astfel putnd fi urmrit i diferena n timp a difuziunii.

13

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

difuzeze prin membrana celular gazele, aa cum se ntmpl n procesul respiraiei (intrare de O2 i eliberare de CO2). Prin difuziune are loc un transport n sensul gradientului de concentraie. Adic din partea unde concentraia este mai mare, ctre partea unde concentraia este mai mic. Viteza de difuziune depinde de gradientul de concentraie a celor dou soluii, ct i de suprafaa de difuziune.

Lucrarea nr.6 Demonstrarea fenomenului osmozei


Principiul lucrrii: folosind sruri anorganice, se demonstreaz existena fenomenului osmozei. Materialul necesar: soluie de CuSO4 10%, ferocianur de potasiu cristalizat n cristale mari, pahar Berzelius de 150 ml, silicat de sodiu 5%, diferite sruri (sulfat feros, clorur de magneziu, acetat de plumb). Metoda de lucru (1): 1.) Se toarn n paharul Berzelius 100 ml de soluie de CuSO4 10%. 2.) Se introduce n lichidul din pahar un cristal de ferocianur de potasiu. 3.) Cele dou sruri intr n reacie. n mprejurul cristalului se formeaz o pelicul de ferocianur de cupru, de culoare brun. 4.) Pelicula de ferocianur de cupru, se comport ca o membran semipermeabil, pe care apa poate s o strbate pentru dizolvarea ferocianurii de potasiu. Se formeaz o soluie, ce se concentreaz n mod rapid. Volumul acesteia se mrete, conducnd la distensia peliculei de ferocianur de cupru, care se rupe i se reface imediat, prin reacia dintre cele dou sruri. Precipitatul de ferocianur de cupru, formeaz astfel un sac, care crete mereu, ramificndu-se. Metoda de lucru (2): 1.) Se toarn n paharul Berzelius 100 ml de soluie de silicat de sodiu 5%. 2.) Se introduc n lichid cristale de diferite sruri (din cele amintite la materiale necesare). 3.) Se observ formarea silicailor corespunztori, n funcie de cristalele folosite (silicat de Fe, Mg, Pb). Acest silicai sunt prezente sub forma unor arborizaii fine, divers colorate, care seamn cu o formaie vegetal acvatic. Discuii (1-2): Cnd substanele difuzeaz prin pereii poroi ai unei membrane separatoare avem de-a face cu fenomenul de osmoz. Pentru ca substanele s poat difuza este necesar ca diametrul moleculelor s fie, evident, mai mic dect al porilor. Prin 14

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

difuziune la nivelul membranelor se creeaz o for numit presiune osmotic, care variaz n raport direct sau indirect, proporional cu diferii factori. Printre aceti factori enumerm variaia n raport direct cu concentraia i n raport indirect cu greutatea molecular a substanelor. Membranele, care avnd pori suficient de mari, permit trecerea concomitent a solvenilor i a substanelor dizolvate se numesc membrane permeabile. De acest tip este membrana citoplasmatic care acoper celula animal. Experienele de sus, demonstreaz numai in vitro fenomenul osmozei. n organismul viu, fenomenul este mult mai complicat 13 .

Fig.4 Schema fenomenului osmozei (egalarea gradientului de concentraiei a unei substane dizolvat n ap, mprit printr-o mebran permeabil)

13

- experimentul demonstrrii fenomenului de hemoliz de la capitolul IV. ilustreaz consecina difuzrii soluiilor hipotonice n eritrocit.

15

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

FIZIOLOGIA SISTEMULUI NERVOS


Sistemul nervos pe lng sistemul endocrin, formeaz sistemul stimulo-integrator 1 al organismelor animale. Sistemul nervos (S.N.), datorit organizrii i funcionrii sale, dispune de o reea de informaie rapid cu ajutorul creia percepe orice modificare a factorilor fizici, chimici, metabolici din mediul intern sau cel extern. n acelai timp, dispune de mecanisme efectoare rapide i precise, cu ajutorul crora poate s reajusteze ntr-un timp scurt i cu maximum de eficien, funcionarea interioar i comportamentul animalelor i al omului, n mediul lor de via. La metazoare inferioare (spongieri, celenterate, viermi), cele amintite mai sus, apar sub forma unui mecanism elementar, alctuit din cuplul excitaie - reacie. Pe msura dezvoltrii sistemului nervos, relaiile interne i mai ales relaiile organismelor cu mediul lor de via, se diversific. Deci, aceste relaii devin mai complexe, depind dialogul simplu, excitaie-reacie, devenind o adevrat conversaie ntre informaiile senzoriale, controlul i preluarea acestora, ca i alegerea rspunsurilor cele mai potrivite. Astfel, activitatea reflex elementar se perfecioneaz, devenind treptat o activitatea comportamental complex, activitatea nervoas superioar. Potenialul de aciune. Orice celul vie n stare de repaus este polarizat, adic menin un potenial stabil de o parte i de alta a membranelor lor. Celulele vii au sarcini pozitive pe suprafaa membranei (sunt electropozitive) i sarcinii negative n interior membranei (sunt electronegative). Sub aciunea stimulului care depete valoarea prag, celula devine excitat. Procesul de excitaie se poate manifesta electric, fie prin depolarizarea membranei celulare (a crei expresie este excitaia); fie printr-o hiperpolarizare, care se manifest prin inhibiie (oprirea activitii celulare secretorii sau motorii). Diferena de potenial dintre interiorul al exteriorul celulei poart numele de potenial de repaus, i este genarat de pompa de sodiu-potasiu. Potenialul de repaus msurat prin metode electrofiziologice (micro-eleotrode intracelulare) este egal cu -90 mV pentru fibra muscular striat i -70 mV pentru neuron. Unda negativ care ia natere la n locul excitat, adic pe suprafaa fibrelor nervoase, i care se propag de-a lungul acestora este potenialul de aciune (curentul de aciune). Valoarea potenialului de aciune (P.A.), este n medie de 80-100 mV. n nregistrare monofazic , el cuprinde: o depolarizare iniiatoare (10 mV) , care amorseaz fenomenele ce duc la excitarea fibrelor nervoase; un potenial de vrf (spike); iar n faza de revenire, postpotenialul negativ i postpotenialul pozitiv. Asigurarea conducerii potenialului de aciune (potenialul de propagare) se face prin dou mecanisme biofizice. Aceste dou mecanisme biofizice sunt: mecanismul circuitului local al lui Hermann (n cazul fibrelor amielinice); i mecanismul conducerii saltatorii (n cazul fibrelor mielinice). Mecanismul conducerii saltatorii a influxului nervos, asigur acestora o vitez mult mai mare, cu o cheltuial energetic proporional mai mic 2 . Existena unei diferene de potenial ntre suprafaa intact ei suprafaa secionat a muchilor striai (curent de leziune) a fost demonstrat nc n secolul XVIII de ctre L. Galvani (1789), prin utilizarea ca aparat de msur, a unui preparat neuromuscular de broasc. Deoarece
1

Sistemele integratoare n regnul animal, sunt: sistemul trofo-integrator (sistem sanguin; sistem reticulohistiocitar), sistemul stimulo-integrator (sistem nervos; sistem endocrin) i sistemul psiho-inegrator. Aceste sisteme integratoare reprezint componentele principale a unui mecanism funcional integrator complex. Adic componente a capacitii organismului animal de adaptare permanent (echilibru dinamic), pentru meninerea constanei mediului intern (Bernard, 1859), a homeostaziei (Cannon 1929). Datorit faptului, c depolarizarea se produce numai n regiunea nodurilor lui Ranvier, care reprezint doar 1/1000 din suprafaa total a axonului. Adic, numai la nivelul acestor noduri se produc schimburile ionice cu lichidul interstiial, ceea ce nseamn o reducere considerabil a travaliului realizat de pompa de Na+-K+.

16

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman


laba de broasc ndeplinete rolul unui galvanoscop, ea a mai fost numit "lab galvanoscopic". Cu ajutorul labei galvanoscopice, se poate dovedi i prezena potenialelor de aciune n muchiul contractat tetanic sau n nervul excitat.

Fig.5. Potenialul de aciune i modificrile de excitabilitate.

17

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Fig.6. Transmiterea saltatoric prin fibrele mielinice (1.- axon, 2.- teaca de mielin, 3.-nod Ranvier, AP- potenial de aciune)

Lucrarea nr. 7 Evidenierea curentului de leziune i a potenialelor de aciune, prin metoda labei galvanoscopice
Principiul lucrrii: se evideniaz prezena curentului de leziune i a potenialului de aciune, folosind un preparat neuromuscular sciatic de broasc. Materialul necesar: broasc, trus de disecie, planet, ace ou gmlie, acumulator, bobin de inducie, cheie ntreruptoare, srme, excitator de sciatic, soluie Ringer, baghet de sticl. Metoda de lucru: 1.) Broasca imobilizat prin distrugerea mduvei spinrii (spinalizare), se fixeaz pe planet, cu partea ventral n jos. Pe partea posterioar a coapselor se face cte o incizie longitudinal. Se descoper pachetele vasculonervoase, din care se izoleaz nervii sciatici de la emergen, pn la articulaia genunchiului. Se secioneaz la emergen, unul din nervi descoperii. 2.) De pe coapsa labei cu sciaticul secionat, se ndeprteaz pielea. Apoi, folosind o foarfec mare, se secioneaz aceeai lab, deasupra genunchiului. 3.) Laba secioneaz se aeaz n apropierea broatei. Folosind o baghet de sticl, nervul sciatic secionat, se aplic pe suprafaa muscular intact i cea tiat. La atingerea celor dou suprafee se produce contractarea brusc a labei. 4.) Tot la aceeai broasc, se nltur pielea i de pe gamba labei nesecionate. Nervul sciatic se ncarc pe un excitator. Pe musculatura gambei denudate (ori pe nervul sciatic), se aplic nervul sciatic al labei secionate. 18

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

5.) n momentul nchiderii cheii ntrerupttoare, curentul faradic (generat de acumulator i bobina de inducie) provoac contracia musculaturii labei, n aceeai timp cu contracia labei galvanoscopice. Dup ntreruperea curentului, muchii se relaxeaz. Discuii Imediat dup secionarea unui muchi striat, potenialul de repaus (P.R.) nu dispare ci doar se reduce la -20, -40 mV, datorit scurtcircuitrii celor dou suprafee ale membranei de ctre lichidul celular prelins din leziune. Diferena de potenial dintre suprafaa muchiului i interiorul secionat (curentul de leziune) este suficient pentru a excita nervul sciatic i musculatura labei galvanoscopice. n timpul stimulrii indirecte, tetanice a muchiului gastrocnemian de broasc, potenialele de aciune (P.A.) produse n muchi, sunt de asemenea capabile s declaneze rspunsul preparatului neuromuscular de broasc.

Reflexele i actul reflex


Reflexul (un act nervos simplu organizat) este legtura obligatorie ntre excitarea unei suprafee senzitive sau senzoriale i o anumit reacie efectorie. Mai poate fi definit ca transformarea unei stimulri senzitive sau senzoriale, ntr-o reacie efectorie, fr participare contient. Forma fundamental a activitii sistemului nervos este actul reflex. Actele reflexe nu se fac cu participarea contiinei. Participarea contiinei la actele reflexe poate fi cel mult secundar. Nu trebuie confundat cu actele reflexe actele psihomotorii. Actele psihomotorii au perioade de latene de zeci de ori mai mari dect latena reflexelor i necesit o nvare prealabil. Actul reflex trebuie considerat ca modul fundamental de integrare funcional unitar a organismului animal i de integrare a acestuia n mediul su de via. Astfel excitanii din mediul extern pot fi considerai ca factori ce determin reacii de integrare, de adaptare ale organismului n mediul su de via. Pentru realizarea unui act reflex, este absolut necesar prezena unui arc reflex. Arcul reflex, putem defini ca totalitatea elementelor anatomice, care particip la un act reflex. Arcul reflex este nnscut. Arcul reflex presupune existena urmtorilor componeni anatomici: - un receptor: format din terminaii nervoase senzitive; - o cale aferent: format din fibre nervoase aferente; - un centru nervos: locul unde se realizeaz legtura funcional ntre neuronul aferent i cel eferent - o cale eferent: reprezentat de fibrele eferente, care conduc influxurile nervoase de la centri la efectori - un efector: organele care produc reacia de rspuns (muchii striai, muchii netezi, aparatele secretoare). Deci, arcul reflex poate fi considerat ca un sistem cibernetic, schematizat n felul urmtor: Cel mai simplu arc reflex este constituit dintr-un receptor difereniat 3 (un neuron senzitiv), n care conducerea se face centripet, i care face sinaps ntr-un centru nervos cu neuronul aferent a
3

n unele cazuri poate fi chiar extremitatea fibrei nervoase amielinice

19

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman


crui prelungire centrifug se pune n legtur cu organul efector. Exist reflexe simple, monosinaptice (ex. reflexul miotatic), dar majoritatea arcurilor reflexe sunt polisinaptice, coninnd unul sau mai muli neuroni intercalai. Arcurile reflexe, rmn nemodificate pe tot parcursul vieii, deci, reaciile reflexe sunt previzibile. Arcurile reflexe pot fi asociate sau urmate i de senzaii contiente. Dar multe acte reflexe se desfoar, fr s devin contiente, ca clipitul, reflexele respiratorii, reflexele circulatorii, etc.

Fig. 7 Schema arcului reflex miotatic: 1 - fus neuromuscular; 2 - ganglion spinal; 3 - fibr senzitiv; 4 - fibr motoare a muchiului extensor; 5 - neuron intercalar inhibitor; 6 - fibr motoare a muchiului flexor; 7 - muchi extensor; 8 - muchi flexor.

Reflexele pot fi clasificate att dup poziia receptorilor, ct i n raport cu organul efector. Astfel dup poziia receptorilor, reflexele se clasific n: - reflexe exteroreceptoare (exteroceptoare): care se produc n urma excitrii organelor de sim, i n mod obinuit sunt reacii complexe. Ex.: ntoarcerea capului la lumin sau la sunet; secreia de saliv dup introducerea n gur a unui aliment; strnutul n urma inflamrii mucoasei nazale; - reflexe proprioreceptoare (proprioceptoare): sunt caracterizate prin faptul, c receptorul este localizat n organul efector (fusul neuromuscular, fusul neurotendinos Golgi) sau n articulaii. Ex.: reflexul rotulian; - reflexe interoreceptoare (interoceptoare): sunt declanate de excitarea receptorilor din interiorul organismului. Ex.: reflexele presoare i depresoare, declanate de excitarea zonelor reflexogene; voma, provocat de excitarea mecanic sau chimic a receptorilor din mucoasa faringian sau peretele stomacului; reflexul miciunii; reflexul defecaiei; reflexul pilorului, etc.

20

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman


Pavlov, I.P., descrie trei principii fundamentale, care stau la baza studiului reflexelor, i anume: principiul determinismului; principiul caracterului structural; respectiv, principiul unitii analizei i sintezei n funcionarea cortexului cerebral.

Lucrarea nr. 8 Demonstrarea existenei reflexelor la om


Principiul lucrrii: se excit receptorii unor arcuri reflexe i se nregistreaz rspunsul reflex. Materiale necesare: ciocan pentru reflexe, tampoane de vat, 3 eprubete gradate, suc de lmie, soluie de glucoz 5%, buci mici de ghea. Desfurarea lucrrii: Reflexul rotulian (patelar). Persoana de experien st pe un scaun picior peste picior sau pe o mas, astfel nct picioarele s nu ating podeaua. Experimentatorul lovete uor, cu ciocanul pentru reflexe, tendonul muchiului cvadriceps sub rotul. Se repet experiena, cu deosebirea c subiectul strnge cu putere pumnii, dinii sau numr invers de la 100. Reflexul achilian. Persoana de experien st n genunchi pe o mas sau scaun, astfel nct ambele picioare (planta) s atrne peste marginea suportului. Experimentatorul lovete cu ciocanul pentru reflexe sau cu partea lateral a minii tendonul achilian (cel mai puternic tendon din organism). Reflexul ciliospinal. Observai cu atenie pupilele subiectului, care st confortabil pe un scaun. Un alt coleg strecoar pe neateptate o bucic de ghia pe pielea spatelui persoanei explorate. Reflexul salivar. a) se cltete cavitatea bucal cu ap; b) se colecteaz saliva secretat n timp de 3 minute, ntr-o eprubet gradat i se noteaz cantitatea; c) se cufund un tampon de vat n soluie de glucoz 5% i se umezete partea superioar a limbii. Repetai punctul b. d) introducei un tampon de vat n suc de lmie i umezii partea superioar a limbii. Repetai punctul b. Reflexul lui Babinski. Verificarea acestei reacii, care const n extensia degetului mare de la picior, se face printr-o stimulare uoar n lungul marginii 21

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

plantei. n mod firesc acest reflex se manifest la noii nscui, pn la un an i jumtate. Dup aceast vrst, reflexul este prezent n caz de ntrerupere a dezvoltrii cilor corticospinale sau de lezare a lor. n aceste situaii motoneuronii din mduv sunt eliberai de influenele inhibitoare trimise de la cortexul motor pe aceste ci. Discuii: n clinic, controlul reflexelor miotatice d preioase indicaii asupra strii normale de funcionare a centrului medular, n care pot s existe n condiii patologice, stri de hipo sau hiperexcitabilitate i rspunsul s fie mai slab sau mai intens. Impulsurile nervoase proprioceptive nu sunt capabile de iradiere sau generalizare. Reflexele bineuronale fiind monosinaptice se produc cu latena cea mai mic, ele avnd un rol important n meninerea staiunii i tonusului muscular. Controlul reflexelor monosinaptice i polisinaptice n practic medical dau posibilitatea verificrii integritii funcionale a mduvei.

Fig.8 Schema reflexului rotulian (1.-mduva spinrii, 2.-calea aferent, 4.-calea eferent, 5.-efectorul)

Fig.9 Micrile efectuate n cazul reflexului: 1.-Rotulian, 2.-Babinski, 3.-Achilian

22

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 9 Actul reflex simplu i analiza lui


Principiul lucrrii: se examineaz un act reflex simplu i efectele stimulrii, distrugerii sau scoaterii temporare din funciune a unora dintre elementele care compun arcul reflex (receptor, cale aferent, centru nervos, cale eferent). Materiale necesare: o broasc mare, suport vertical simplu, virol, suport lateral, instrumente pentru disecie, un anestezic (cloroform, novocain), cronometru, 2 pahare Berzelius de 50 ml, soluie de acid acetic 5% i 15%. Desfurarea lucrrii: 1. se decapiteaz broasca; 2. se atrn prin intermediul unui crlig de suport; 3. se ateapt 20 min pentru a trece ocul operator; 4. se pune, cu ajutorul unui pahar Berzelius, acid acetic 5% n contact cu degetul mare de la piciorul stng al broatei; 5. se urmrete rspunsul dup cteva clipe, broasca flecteaz piciorul stng, adic realizeaz un act reflex; 6. se anesteziaz receptorii tegumentari ai labei piciorului stng cu cloroform sau alt anestezic mbibat n vat sau tifon i fixat n jurul labei pentru 5-10 min; 7. se introduc degetele piciorului anesteziat n soluie de acid acetic 5%; 8. se urmrete efectul. Care este acesta? Rspuns: 9. se ateapt pn trece efectul anestezicului; 10. se secioneaz nervul sciatic al piciorului stng n apropierea genunchiului; 11. se introduce laba piciorului stng n acid acetic 5%; 12. se urmrete efectul 13. se stimuleaz, cu ajutorul unui excitator de mn alimentat de o bobin de inducie, captul dinspre gastrocnemian al nervului sciatic; 14. se urmrete efectul. 15. se pune un tampon de vat mbibat cu acid acetic 15% pe tegumentul regiunii lombare a piciorului stng; 16. se urmrete efectul. 17. prin introducerea unui ac lung n canalul vertebral al aceleiai broate, se distruge mduva spinrii; 18. se introduce laba piciorului drept n acid acetic 5%; 19. se noteaz efectul obinut.

23

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Discuii: O condiie esenial pentru producerea actului reflex este integritatea arcului reflex. ntreruperea arcului reflex pe oricare punct al traseului duce la dispariia reflexului.

Lucrarea nr. 10 Verificarea legilor reflexelor ale lui Pflger


Principiul lucrrii: la o broasc spinalizat (care a fost decapitat, dar are mduva spinrii intact) se examineaz rspunsul la excitani de intensitate crescnd. Materiale necesare: broasc, suport vertical simplu, suport lateral, virol, crlig pentru agarea broatei, instrumente de disecie, soluii de acid acetic (1,0; 2,5; 5,0; 15,0 i 96%), 5 pahare Berzelius de 50 ml, cronometru. Desfurarea lucrrii: 1. se decapiteaz broasca; 2. se atrn de suport; 3. se ateapt 20 de min pentru a trece ocul operator; 4. se introduce degetul mare de la piciorul stng n soluie de acid acetic 1,0%; 5. se observ efectul. Notai timpul reflex .. 6. se nltur efectul acidului acetic asupra tegumentului prin introducerea extremitii tratate n ap; Se repet punctele 4, 5 i 6, utiliznd soluii de acid acetic de 2,5; 5,0; 15,0 i 96%. Completai n tabelul urmtor timpul reflex:
Conc.acid acetic % 1 2,5 5 15 96 Rspunsul animalului flecteaz degetul excitat flecteaz piciorul al crui deget a fost excitat flecteaz i piciorul simetric celui excitat flecteaz toate picioarele se contract toi muchii scheletici ai corpului Legile reflexelor localizrii unilateralitii simetriei iradierii generalizrii Timpul reflex .. . .

24

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Chiar la o broasc spinalizat, se poate observa coordonarea reflexelor: se pune n regiunea dorsal stng o bucic de hrtie mbibat n acid acetic 15%, iar piciorul stng se leag de suportul vertical. Dup ncercri repetate, broasca ndeprteaz cu piciorul drept excitantul de pe tegument. Este legea coordonrii reflexelor.

Fig.10. Legile reflexelor medulare: I. legea localizrii; II. legea unilateralitii; III. legea simetriei; IV. legea iradierii; V. legea generalizrii; VI. legea cordonrii reflexelor

Discuii: Legile reflexelor medulare descrise de Pflger sunt valabile numai pentru reflexele exteroceptive sau de flexiune sau nociceptive. Reflexele de flexiune sunt multisinaptice, adic terminaia medular a neuronului senzitiv, intr n contact cu mai muli neuroni intercalari prin intermediul crora impulsurile ajung la neuronul efector. Intervenia neuronilor intercalari n arcul reflex explic unele particulariti ale ale reflexelor de flexiune: difuzarea impulsurilor generate de exteroceptori, n mduva spinrii; cu ct stimularea nociceptorilor este mai puternic, cu att excitaia cuprinde mai muli motoneuroni medulari i rspunsul motor devine mai extins. Reflexul de flexiune dureaz mai mult dect timpul de aplicare a stimulului, datorit unui proces de postdescrcare aprut n circuitele reverberante ale neuronilor intercalari.

25

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

ANALIZATORII
Omul primete permanent informaii despre diversele schimbri care au loc n mediul extern i intern. Acesta se realizeaz cu ajutorul analizatorilor sau a sistemului senzorial. Noiunea de analizator a fost introdus n fiziologie de I.P. PAVLOV. Prin analizator se nelege ansamblul structurilor care asigur perceperea energiei excitantului, transformarea ei n procesul specific de excitaie (segmentul periferic sau receptorul), conducerea excitaiei la stucturile SNC (segmentul intermediar sau calea de conducere), analiza ei n zone specifice ale scoarei emisferelor cerebrale (segmentul central), ceea ce are ca rezultat formarea unor senzaii specifice. Analizatorii au un rol excepional n elaborarea reaciilor de adaptare a organismului. Receptorii au urmtoarele proprieti: - specificitatea capacitatea de a percepe un anumit excitant adecvat; - nalta sensibilitate capacitatea de a percepe excitani adecvai la o intensitate foarte mic a acestora; - receptorii genereaz ritmic impulsuri de excitaie, ca rspuns la aciunea excitantului; - adaptarea se exprim prin micorarea activitii receptorilor i a frecvenei de generare a impulsurilor de excitaie n cazul c un excitant acioneaz un timp ndelungat; - mobilitatea funcional mrirea sau micorarea numrului de receptori care funcioneaz, n dependen de starea funcional a organismului .i de condiiile mediului nconjurtor; - specializarea receptorilor la un anumit parametru al excitantului specific receptorii sunt heterogeni n raport cu excitantul specific. Unii reacioneaz la nceputul aciunii lui, alii la ntreruperea aciunii lui, iar a treia categorie la modificarea intensitii excitantului. Sensibilitatea diferitelor organe de sim poate crete prin perfecionarea centrilor corticali n urma unui exerciiu susinut. Astfel se explic capacitatea degusttorilor de a diferenia substane cu miros i gust foarte asemntor, capacitatea pictorilor de a deosebi foarte multe nuane coloristice, sensibilitatea tactil i auditiv crescute ale nevztorilor.

ANALIZATORUL CUTANAT
Receptorii analizatorului cutanat sunt localizai la nivelul tegumentului i mucoaselor. Epiderma cuprinde numai terminaii nervoase libere, a cror excitare determin senzaii dureroase. Menionm c epiderma nu conine vase de snge i limfatice, de aceea lezarea ei nu provoac hemoragii. n derm se gsesc terminaii nervoase libere, precum i terminaii nervoase sub form de corpusculi: - corpusculii Meissner, Merckel i couleele nervoase de la baza foliculilor piloi sunt specializai pentru recepionarea excitanilor tactili; - corpusculii Vater-Pacini, care se afl n hipoderm n numr mult mai mare dect n derm, recepioneaz excitaii de presiune; - corpusculii Krause recepioneaz excitaii de rece, iar cele de cald sunt preluate de corpusculii Ruffini.

26

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 11 Esteziometrie


Principiul lucrrii: se exploreaz diferite regiuni ale corpului, ndeprtnd treptat vrfurile esteziometrului, pn ce percep dou senzaii de atingere diferite. Materiale necesare: esteziometru.

Fig.11. Esteziometru

Esteziometrul este un aparat asemntor cu un ubler, alctuit dintr-o rigl metalic gradat, susinut de un mner. Cu acest dispozitiv se msoar sensibilitatea de presiune. n lipsa esteziometrului, se poate utiliza un compas metalic cu vrfurile puin tocite i un liniar. Desfurarea lucrrii: Persoana de experien ade pe un scaun cu ochii nchii. Experimentatorul atinge diferite regiuni ale corpului (buza inferioar, buza superioar, obraz, gt, faa posterioar a braului i antebraului, palm, vrful degetelor, gamb, plant i vrful degetelor de la picior) cu vrfurile esteziometrului apropiate. sE continu explorarea, ndeprtnd succesiv vrfurile esteziometrului cu cte 1 mm (unul dintre cursori se las la diviziunea 0, iar cel deal doilea va fi mobil). Se noteaz pentru fiecare zon cercetat daistana minim dintre vrfurile esteziometrului la care se percep dou senzaii diferite de atingere. nlocuind vrfurile de os cu butoane metalice, se determin sensibilitatea la presiune a acelorai zone. Rezultate i discuii: rezultatele obinute se trec n tabelul alturat. Sensibilitatea tactil are rol i n perceperea triei, formei i greutii corpurilor. Nevztorii percep forma i dimensiunea obiectelor prin intermediul simului tactil, care este mult mai dezvoltat dect la vztori. Deci, funcia unui organ de sim este perfectibil prin perfecionarea analizei i sintezei de la nivel cortical. 27

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Regiunea investigat buza superioar buza inferioar obraz gt faa ant. a braului faa post. a braului faa ant. a antebraului faa post. a antebraului palm vrful degetului indicator vrful degetului mare faa ant. a gambei faa post. a gambei talpa piciorului vrful degetului mare vrful degetului mic

Pragul spaial al sensibilitii tactile (mm) presionale (mm)

Avnd n vedere c tegumentul are, n afar de funcia de sensibilitate, i alte importante funcii (protecie, respiraie, excreie, termoreglare, depozit, metabolic i de absorbie), distrugerea unei treimi din suprafaa sa pune n primejdie supravieuirea organismului. Datorit rolului complex pe care l ndeplinete pielea, culoarea i aspectul ei reflect starea fiziologic a organismului.

Lucrarea nr. 12 Efectul masajului cu ghia asupra durerii


Principiul lucrrii: se provoac o intens senzaie dureroas i se determin timpul n care dispare durerea, fr a masa locul respectiv, iar apoi prin masarea locului respectiv sau al altuia cu ghia. Materiale necesare: cuburi mici de ghia, erveele, cronometru. Desfurarea lucrrii: subiectul de experien st pe un scaun cu palma dreapt sprijinit pe o suprafa plan. Ciupii tegumentul dintre degetul mare i indicator al subiectului, pn la nivelul insuportabil al durerii. Cronometrai timpul necesar pentru dispariia complet a durerii . Repetai acelai lucru cu mna stng. Imediat ce nivelul insuportabil al durerii este atins, declanai cronometrul i masai simultan poriunea afectat prin 28

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

micri circulare cu un cub de ghia. Apa rezultat prin topire se absoarbe cu un erveel. Notai timpul necesar pentru dispariia durerii Repetai experimentul cu mna dreapt i aplicai un masaj circular cu ghia n regiunea cotului. Notai timpul necesar pentru dispariia durerii .

ANALIZATORUL GUSTATIV
Organul principal al gustului este limba. Receptorii gustativi sunt ns rspndii i la nivelul vlului palatin, n partea posterioar a faringelui i pe laringe. Dintre cele trei categorii de papile, caliciforme, fungiforme i filiforme, numai primele dou conin muguri gustativi. La nivelul mucoasei bucale, alturi de receptorii gustativi se afl i receptori pentru sensibilitatea termic, tactil, dureroas, iar n musculatura limbii proprioceptori. Din acest motiv senzaiile gustative au un caracter complex. Alimentele excit mai nti receptorii tactili, foarte numeroi pe papilele filiforme, ceva mai trziu pe cei termici i apoi receptorii gustativi. Receptorii pentru rece predomin n partea anterioar a cavitii bucale, iar cei pentru cald n partea posterioar. Partea central a suprafeei limbii nu percepe nici cald nici rece. Vrful limbii are o nalt sensibilitate la temperatur. Temperatura cea mai potrivit pentru formarea senzaiilor gustative este de 24C. Receptorii pentru durere (nociceptorii) reprezint n cadrul mucoasei bucale 25-40% din totalul receptorilor. Nociceptorii sunt cei mai numeroi n esuturile dinilor, pna la 75.000/cm2, n timp ce la nivelul tegumentului sunt cca 200/cm2. Exist 4 tipuri de muguri gustativi, structural similari. Fiecare tip de mugure gustativ este specializat pentru unul dintre stimulii gustativi de baz: dulce, acru (acid), srat, amar, la care rspunde cel mai puternic; cu toate acestea, fiecare tip de mugure recepioneaz mai mult dect un singur tip de stimul. Pe baza acestei specializri, se pot delimita pe suprafaa limbii mai multe arii gustative.

Fig. 12 Ariile sensibilitii gustative i inervaia lor: 1 amar; 2 - acru; 3 -srat; 4 - dulce; 5 - vag; 6 glosofaringian; 7 - facial.

Lucrarea nr. 13 Deteminarea ariilor gustative pentru gusturile de baz


Principiul lucrrii: se pun n contact diferite substane sapide (dulci, srate, acre, amare) cu ct mai multe puncte ale limbii i pe un desen al ei se schieaz ariile n care sunt percepute. 29

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Materiale necesare: soluii de zahr 5%, sare de buctrie 5%, oet de vin, sulfat de chinin 0,5%, tampoane mici de vat sau de tifon. Desfurarea lucrrii: subiectul cltete cavitatea bucal cu ap distilat. Se nmoaie un tampon n soluie de zahr 5%, cu care experimentatorul atinge mai multe puncte ale limbii subiectului. Pe un desen al limbii se indic zonele n care a fost perceput cel mai intens gustul dulce. Dup cltirea cavitii bucale cu ap distilat, se va proceda la fel i pentru celelalte substane i ariile pentru celelalte gusturi fundamentale.

ANALIZATORUL VIZUAL
Lucrarea nr. 14 Reflexul pupilar
Reflexul pupilar fotomotor este declanat de aciunea luminii i const n micorarea pupilei (mioza) care este proporional cu intensitatea luminii. Micorarea pupilei se realizeaz prin contracia fibrelor musculare netede circulare ale irisului, care formeaz muchiul constrictor al pupilei (m. sphincter pupillae), inervat de fibrele parasimpatice ale nervului oculomotor, prin care se transmit impulsurile nervoase de la centrul nervos situat n mezencefal. Dilatarea pupilei (midriaza) se produce la ntuneric i se datorete contraciei fibrelor musculare netede radiare ale irisului, care formeaz muchiul dilatator al pupilei (m. dilatator pupillae), inervat de fibre simpatice care i au originea n regiunea toracic a mduvei. Mediatorii simpatici i parasimpatici, precum i alte substane simpatico- i parasimpaticomimetice, pot aciona i direct asupra irisului, producnd midriaz sau mioz.

Principiul lucrrii: se observ, pe om, modul de acomodare a diametrului pupilei la cantitatea de lumin care ptrunde n ochi. Desfurarea lucrrii: se acoper cu mna, pentru o perioad de 1-2 minute, ochii unei persoane aezate n faa unui geam luminat. La ridicarea minii, se observ cum pupilele ambilor ochi se micoreaz, datorit contraciei reflexe parasimpatice a muchilor circulari ai irisului. Prin reflexul pupilar, care se produce simetric la ambii ochi, este astfel micorat cantitatea de lumin care ptrunde n ochi. Apoi se acoper din nou ochii cu mna i dup 1-2 minute, mna se ridic astfel nct ochiul drept s fie expus direct luminii, iar ochiul stng s primeasc lumina indirect. Se observ c i ochiul stng prezint reflexul pupilar, dei nu a fost expus aciunii directe a luminii, ca i ochiul drept. Rezult c muchii iridoconstrictori inervai de parasimpaticul oculomotor acioneaz sinergic.

30

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Fig.13 Schema reflexului pupilar

Lucrarea nr. 15 Determinarea cmpului vizual pentru alb i culori


Cmpul vizual este spaiul care poate fi cuprins cu privirea, atunci cnd aceasta este fixat asupra unui punct. Spaiul vizibil cu un singur ochi se numete cmp vizual monocular, iar spaiul vizibil cu ambii ochi se numete cmp vizual binocular. Cmpul vizual binocular reunete cele dou cmpuri monoculare, care se suprapun n partea lor nazal. n poriunea din mijloc a cmpului vizual comun vederea este binocular, iar de o parte i alta a acestei poriuni, vederea este monocular.

Fig.14 Schematizarea n grade a vederii binocluare i a zonelor monoculare

Principiul lucrrii: n timp ce subiectul privete un punct fix de pe tabl aflat n dreptul ochiului, experimentatorul traseaz cu cret alb i colorat cmpul vizual pentru ochiul respectiv. Materiale necesare: tabl, cret alb i colorat, suport pentru nas, rigl gradat. Desfurarea lucrrii: cu cret alb se face pe tabl un punct la nivelul ochiului drept al subiectului care st n picioare, cu faa la tabl, la o distan de civa cm de aceasta. Distana dintre tabl i subiect este marcat de un suport de lemn, pe care se sprijin spina nazal a subiectului. Se traseaz cu creta 4 linii drepte care se ntretaie n punctul alb: una vertical, una orizontal i dou nclinate cu 45 fa de 31

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

primele. Subiectul nchide ochiul stng, iar cu dreptul privete fix n punctul alb. Experimentatorul deplaseaz creta alb de-a lungul fiecrei jumti a fiecrei linii, de la extremitatea liniei spre ochiul subiectului, i marcheaz locul n care se gsete creta cnd subiectul declar c a perceput culoarea acesteia. Apoi se unesc cele 8 puncte ntre ele, obinndu-se un poligon care reprezint cmpul vizual pentru alb al ochiului drept al subiectului. Folosind cret colorat, se traseaz n acelai mod cmpurile vizuale pentru albastru, rou i verde, apoi cele 4 cmpuri vizuale pentru ochiul stng (alb i culori).

Fig. 15

Perimetrul cmpurilor vizuale pentru alb i culori

Lucrarea nr. 16 Disocierea vederii binoculare


Principiul lucrrii: se demonstreaz c, dac deplasm unul dintre globii oculari astfel ca axele ambilor ochi s nu mai fie centrate pe acelai punct (obiect), fiecare ochi vede obiectul separat. Materiale necesare: un semn (punct, cruce) trasat pe o foaie de caiet sau pe tabl. Desfurarea lucrrii: subiectul privete semnul cu ambii ochi. El apare unic datorit vederii binoculare. Apoi subiectul privete semnul apsnd cu un deget sub unul dintre ochi, astfel ca s deplaseze globul ocular n sus. Se constat c din semnul unic se desprinde un altul, care se deplaseaz n sus cu ct deplasarea

32

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

globului ocular este mai mare. Astfel, fiecare ochi vede acum imaginea pe cont propriu.

Lucrarea nr. 17 Experiena lui Mariotte


Principiul lucrrii: se demonstreaz existena petei oarbe, lipsit de celule receptoare. Materiale necesare: o bucat de hrtie, pe care se gsete o figur constnd dintr-un dreptunghi n care sunt desenate un cerc i o cruciuli, distanate cu 7 cm (distana aproximativ dintre cele dou pupile). Desfurarea lucrrii: se nchide ochiul stng i se ine figura n faa ochiului drept, la distana de 30 cm, fixnd cruciulia. Aceasta se vede clar, iar cercul se vede difuz. Se apropie ncet figura de ochi i se constat c, la distana de aprox. 15 cm, cercul dispare. Discuii: Fenomenul se datoreaz faptului c la aceast distan, imaginea reperului negru se proiecteaz pe retin n dreptul petei petei oarbe, adic acolo unde lipsesc elementele sensibile i nu se formeaz imaginea.

Fig.16 Figura utilizat n experiena lui Marriotte

Lucrarea nr. 18 Culori complementare


Principiul lucrrii: privirea, un timp mai ndelungat, a unui obiect de o anumit culoare, determin apariia, pe fond alb, a imaginii obiectului n culoarea complementar. Materiale necesare: patrate cu latura de 20 cm, de hrtie colorat: roie, verde, albastr i galben, lipite pe cte o coal de hrtie alb. 33

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Desfurarea lucrrii: subiectul privete intens, timp de un minut, de la cca 2 m, un patrat de o anumit culoare, dup care deplaseaz rapid privirea pe fondul alb. Dup cteva secunde, el percepe un patrat de aceeai mrime, avnd ns culoarea complementar celui privit anterior. Discuii: Prin amestecul n proporii egale a celor apte culori se poate face sinteza luminii albe. Acest fapt se demonstreaz cu discul lui Newton (cu 30-40 de turaii pe minut). Se mai poate obine lumin alb i din amestecul numai al unor culori, numite complementare. Lund n considerare cele amintite mai sus, explicaia celor observate n urma experimentului este urmtoarea: n timp ce se privete atent culoarea roie, elementele fotosensibile ale acestei culori se obosesc, astfel cnd deplasm privirea pe fondul alb, elementele retiniene fotosensibile pentru culoarea complementar (n exemplul dat: verde) sunt excitate de lumina alb, i apare culoarea verde. n mod identic se ntmpl i n cazul a celorlalte culori complementare.

Lucrarea nr. 19 Evidenierea purpurului retinian


Principiul lucrrii: la animalele inute la ntuneric se poate observa, la microscop, descompunerea purpurului retinian, sub influena luminii. Materiale necesare: broasc inut la ntuneric 48 de ore, soluie de alaun de fier i amoniu 5%, cristalizor mic, instrumentar de disecie. Desfurarea lucrrii: a) se ia o broasc inut la ntuneric i ntr-o camer ntunecat, la lumin roie, i se scoate un ochi ( astfel: broasca se fixeaz pe plut cu partea dorsal n sus, apoi se prinde cu o pens cu cioc pleoapa i se secioneaz; n spaiul de deasupra ochiului se introduce vrful unei foarfece fine i curbe i se taie esutul care fixeaz esutul n orbit, apoi se secioneaz nervul optic i se izoleaz ochiul din orbit). Ochiul se secioneaz iar retina se ntinde pe o lam de sticl. Aceasta se privete la microscop la lumin natural i se observ cum se decoloreaz purpurul retinian trecnd ntr-o culoare slab glbuie. b) se scoate i cellalt ochi i se ine fix n faa unui geam cu cercevele, iluminat uniform, timp de 2-3 s. Apoi ochiul se pune repede ntr-un cristalizor cu alaun i se pstreaz 15 min la ntuneric. Alaunul fixeaz purpurul retinian, mpiedicnd distrugerea lui la lumin. Se disec ochiul ntr-o camer luminoas, se ntinde retina pe o lam de sticl i se privete cu lupa. Se vor vedea dungile ntunecate ale cercevelelor ferestrei, care au oprit distrugerea purpurului retinian din dreptul lor, atunci cnd ochiul a fost expus luminii. 34

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

ANALIZATORUL ACUSTICO-VESTIBULAR
Lucrarea nr. 20 Extirparea urechii interne la broasc
Principiul lucrrii: se distrug canalele semicirculare la o broasc i se obsev efectele n mediu terestru i acvatic. Materiale necesare: o broasc, bisturiu cu vrful bine ascuit, un ac cu vrful ncovoiat i bont, pens hemostatic, plut, ace cu gmlie. Desfurarea lucrrii: se fixeaz broasca, neparalizat, cu partea ventral n sus. Se prinde maxilarul inferior cu o pens hemostatic i se trage napoi, fixndu-l n aceast poziie. Se face o incizie pe linia median a vlului palatin i prin ndeprtarea celor dou laturi se descoper baza craniului, pe care se vd, n dreptul cavitilor orbitare, dou proeminene osoase la nivelul crora sunt canalele semicirculare. n vrful uneia dintre proeminene se face un orificiu cu vrful bisturiului. Prin acest orificiu se pot vedea, cu o lup, canalele semicirculare. Se introduce prin orificiu vrful unui ac ncovoiat, se nvrtete uor i se distrug canalele semicirculare. Se elibereaz broasca. Aceasta i ine corpul nclinat spre partea lezat. Se excit prin atingere unul dintre picioarele posterioare ale broatei. Broasca se ndeprteaz de excitant executnd micri n cerc spre partea operat, iar dac face salturi mari se rstoarn pe spate. Pus ntr-un bazin cu ap, execut, de asemenea, micri n cerc spre partea operat. Dup distrugerea canalelor semicirculare de ambele pri, broasc rmne nemicat n primele momente. Dac este mpins, face micri dezordonate, se rstoarn pe spate. Dup un timp i restabilete capacitatea de a face deplasri mici, dar dac i se acoper ochii cu leucoplast rmne neputincioas, ca dup operaie.

35

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

SISTEMUL MUSCULAR
Lucrarea nr. 21 Oboseala muscular
Principiul lucrrii: Ergografia reprezint una din probele fiziologice prin care poate fi nregistrat fenomenul de oboseal muscular la om i factorii care condiioneaz. Concomitent se poate calcula i lucrul mecanic efectuat. Materialul necesar: ergograf Zimmerman, metronom. Tehnica lucrrii: Se fixeaz antebraul persoanei n gutiera ergografului iar degetul mediu se introduce ntr-un inel pus n legtur cu sistemul mecanic al aparatului.

Fig. 17. Ergograf Zimmerman

Persoana explorat este instruit s execute flectri ritmice ale degetului mediu, n ritmul dictat de un metronom. Tracionnd inelul ergografului, este antrenat resortul de rezisten al aparatului. Sistemul mecanic deplasat prin flectarea degetului antreneaz n micare indicatoarele cadrelor, pe care se poate citi valoarea lucrului mecanic efectuat (n gram metri) i un sistem de nregistrare pe hrtie. Grafica obinut se numete ergogram. n principiu se urmrete timpul ct o persoan poate executa flexiuni digitale, pn la instalarea oboselii musculare.

36

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Ritmul micrilor. Se determin timpul de apariie a oboselii musculare la o persoan care efectueaz traciuni cu o frecven de 60 / min i concomitent se noteaz i lucrul mecanic prestat. La o persoan la fel de antrenat sau la aceeai persoan, dup 30 min n repaus, se urmresc parametrii amintii n condiiile unui ritm de 120 traciuni / min. Se constat instalarea rapid a oboselii cnd ritmul este prea alert, impropriu persoanei. Caracterul activ sau pasiv al repausului. Alte dou persoane sunt puse s efectueze efortul la ergograf cu aceeai frecven. Se va nota la fel timpul scurs pn la instalarea oboselii musculare i lucrul mecanic realizat. Apoi una din persoane va efectua timp de 3-5 min micri active cu mna opus, iar a doua nu (odihn pasiv, acelai timp). Cele dou persoane vor repeta proba. Se va constata un decalaj ntre cei doi subieci n favoarea celui care a beneficiat de odihn activ (instalarea mai tardiv a oboselii musculare i un lucru mecanic crescut). Irigaia muchilor activi. Efectuarea determinrii la alte dou persoane, unul avnd aplicat un garou pe antebraul activ. n condiii de irigaie deficitar instalarea oboselii apare mult mai devreme i lucrul mecanic este redus.

Fig. 18 Ergogram

Manifestarea oboselii n aspectul ergogramei depinde de mai muli factori: ritmul de stimulare, intensitatea stimulrii, rezistena pe care trebuie s o nving muchiul n contracie, posibilitile de refacere a potenialului energetic muscular, etc. Modificnd experimental valorile acestor factori, se poate determina rolul lor n instalarea i manifestarea fenomenului de oboseal. Pentru aceasta este necesar stabilirea unor parametri ai graficului care s poat fi msurai sau calculai cu precizie. Acetia de obicei sunt: 1. Linia de oboseal: se stabilete prin unirea vrfurilor de contracie cu o dreapt. 2. Unghiul de oboseal, care este unghiul pe care l face linia de oboseal cu orizontala de la baza tuturor contraciilor. 3. Coeficientul de oboseal (Co), care se obine astfel: - se msoar nlimea fiecrei contracii n parte; - se adun toate aceste valori i se obine nlimea total H; aceasta se reduce prin puterea mritoare a peniei pentru a se afla nlimea total real Hr; - numrul contraciilor msurate este N; 37

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Co = Hr / N 4. Travaliul muscular total: Tr = Hr x G, unde G este greutatea, n grame, pe care muchiul o ridic n contracie. 5. Timpul de epuizare, pe care l stabilim cunoscnd viteza de derulare a hrtiei sau nregistrnd timpul.

Lucrarea nr. 22a Prepararea gastrocnemianului de broasc


Pentru studierea activitii musculare se utilizeaz cel mai adesea muchiul gastrocnemian de broasc. Extragerea sa din organism se realizeaz cu uurin, operaiunea decurgnd n anumite etape.

Materiale necesare: broasc, a, ser Ringer pentru poikiloterme, o cutie Petri, instrumentar de disecie, ace de sticl cu vrful bont, plut pentru disecie, vat. Tehnica de lucru: A. Gastrocnemianul cu o singur articulaie ataat. n cutia Petri se pune ser Ringer. Instrumentarul menionat se aeaz la ndemn pe masa de lucru. Se paralizeaz broasca i se fixeaz pe masa de lucru cu faa dorsal n sus. Se prinde tegumentul la nivelul clciului cu pensa dreapt (de preferin cu cioc) i se face o incizie perpendicular pe axul piciorului. Unul dintre braele foarfecii se introduce sub tegument, care se secioneaz pe linia median pn deasupra genunchiului. Marginile tegumentului se rsfrng i se fixeaz pe plut cu ace, astfel nct suprafaa sa extern s nu ating muchiul. Cu ajutorul pensei curbe sau a unui ac de sticl se separ gastrocnemianul de ceilali muchi i de os. Se introduce un fir de a pe sub tendonul lui Achile i se leag strns. Aa va servi la ataarea muchiului de penia nscriitoare. Dup legare, tendonul se secioneaz ct mai departe de nod. Ridicnd de a captul liber al muchiului, acesta se ndeprteaz de os i tibioperoneul se secioneaz sub genunchi. Urmeaz secionarea printr-o singur tietur a femurului i muchilor coapsei, imediat deasupra genunchiului. Preparatul astfel obinut se pstreaz n capsula cu ser pn la fixare n miograf. B. Gastrocnemianul cu dou articulaii ataate Se incizeaz tegumentul i se evideniaz muchiul la fel ca n metoda precedent. Pe sub tendonul lui Achile se introduce un bra al foarfecii i se taie tibioperoneul lng glezn i apoi sub genunchi. Deasupra acestuia se secioneaz femurul i musculatura coapsei printr-o singur tietur. Se ridic de pe plut laba i se pune gastrocnemianul n capsula cu ser, dup care, printr-o ultim seciune separm glezna care va rmne ataat muchiului. 38

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Mai simplu i mai rapid se poate proceda astfel: dup ce broasca a fost paralizat, se reteaz piciorul, imediat deasupra genunchiului. Prindem strns esuturile rmase la gamb, apucm tegumentul cu o crp i l tragem spre vrful piciorului. El se desprinde uor i operaiunea decurge asemenea cu dezbrcarea unei mnui. Se fac apoi seciunile menionate anterior, astfel nct gastrocnemianul s rmn cu cele dou articulaii ataate.

Fig.19 Gastrocnemianul i nervul sciatic la broasc

Lucrarea nr. 22b Preparatul neuromuscular gastrocnemian-sciatic


Realizarea unui preparat neuromuscular const n izolarea unui muchi mpreun cu nervul su. Preparatul sciatic-gastrocnemian se poate folosi n toate experimentele care necesit stimularea muchiului. Aceasta se va realiza prin eliberarea de acetilcolin provocat de excitarea nervului. Pentru obinerea lui se pot utiliza mai multe metode. Sunt prezentate n continuare dou dintre acestea.

A. Preparatul cu nerv scurt Materiale necesare: aceleai ca i la prepararea gastrocnemianului - broasc, a, ser Ringer pentru poikiloterme, o cutie Petri, instrumentar de disecie, ace de sticl cu vrful bont, plut pentru disecie, vat. Tehnica de lucru: broasca paralizat se fixeaz pe plut cu partea dorsal n sus. Se descoper gastrocnemianul; se incizeaz tegumentul de-a lungul coapsei i 39

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

se fixeaz pe plut. Se disociaz longitudinal muchii coapsei cu vrful unui ac de sticl i se descoper nervul sciatic, sub forma unui cordon alburiu nsoit de artera femural. Continum disocierea muchilor pn n regiunea centurii pelviene, unde nervul se secioneaz. Se taie, folosind o foarfec mic, toate colateralele nervului. Se lucreaz cu mult grij, ntruct cea mai mic leziune duce la pierderea proprietilor de excitabilitate i conductibilitate. Nervul eliberat se ia pe acul de sticl i se aeaz pe gastrocnemian. n continuare se procedeaz la izolarea muchiului dup metoda descris mai sus (gastrocnemianul cu o singur articulaie ataat). Preparatul astfel obinut se pstreaz n capsula cu ser pn la utilizare. B. Preparatul cu nerv lung. Laba galvanoscopic Metoda prezint ca principal avantaj faptul c obinem ntregul nerv. n plus, evitm secionarea sa, iar originea rahidian rmne i este protejat ntr-un fragment de coloan vertebral. Materiale necesare: aceleai ca la metoda anterioar; avem nevoie n plus de un cristalizor mare, deoarece toate operaiunile se desfoar de la un moment dat sub ser. Tehnica de lucru: broasca paralizat se fixeaz pe plut cu partea ventral n sus. Se ndeprteaz tegumentul de pe abdomen, ncepnd de la simfiza pubian pn n zona membrelor anterioare. Peretele muscular abdominal se incizeaz la baza membrelor posterioare, continund pe prile laterale pna la linia sternului, dup care se rsfrnge n sus sau se ndeprteaz. Se scot acum toate organele abdominale apare coloana vertebral i n prelungirea sa urostilul ncadrat de cte 4 filete nervoase ce constituie plexul lombo-sacral, din care se desprinde sciaticul. Sngele care s-a acumulat n cavitatea abdominal se nltur cu un tampon de vat. Detam apoi ntregul tren posterior, secionnd cu o foarfec mare imediat deasupra locului de origine a primei perechi de nervi. Prindem acum restul de coloan n ciocul unei pense (sau ntre dou degete) i l ridicm de pe pluta de disecie, inndu-l suspendat. Tragem captul tiat al tegumentului ca pe o mnu. Din acest moment, tot ceea ce urmeaz se desfoar n cristalizorul cu ser. Se fac dou seciuni paralele cu filetele nervoase, ntre acestea i iliumuri, pn la locul n care sciaticul dispare n articulaie. Folosim tot o foarfec mare, cu vrful rotunjit. Se lucreaz cu atenie, pentru a nu prinde sciaticul n tietur. ntoarcem acum piesa cu partea dorsal n sus. Se prinde vrful urostilului cu pensa curb i, cu mare atenie pentru a nu leza sciaticul, se detaeaz din articulaie. Dup aceasta tracionm urostilul uor i continuu, desprinzndu-l astfel de nervi. Ne putem ajuta pentru aceasta i cu o baghet de sticl. Urmeaz ndeprtarea celor dou iliumuri. Se taie apoi urostilul, rmnnd ataat de nerv doar fragmentul de coloan din care ies nervii i pe care l secionm la mijloc. Cei doi nervi cu capetele protejate de cte un fragment de coloan sunt acum separai. Pornind de la 40

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

articulaia coxo-femural spre genunchi izolm un sciatic, detandu-l de esuturile nconjurtoare cu ajutorul unui ac de sticl. Dup ce am ajuns la genunchi, secionm deasupra sa femurul i musculatura coapsei. n acest moment este realizat preparatul numit laba galvanoscopic. Pentru definitivarea preparatului neuromuscular urmeaz s facem cele necesare pentru desprinderea gastrocnemianului de tibioperoneu, cu sau fr articulaia gleznei (vezi lucrrile precedente). Se procedeaz la fel i pentru cellalt membru.

Fig.20. Schema preparrii preparatului gastrocnemian-sciatic la broasc

41

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

APARATUL DIGESTIV
Digestia reprezint totalitatea proceselor care asigur transformarea alimentelor n substane asimilabile de ctre esuturile organismului. n procesul digestiei, alimentele sunt supuse unor transformri mecanice, sunt transportate de-a lungul tubului digestiv, descompuse chimic sub aciunea enzimelor i apoi absorbite. Aceste aciuni se realizeaz datorit funciilor proprii ale tubului digestiv i ale glandelor sale anexe: funcia motorie, funcia secretorie i cea de absorbie. Aparatul digestiv mai ndeplinete i alte roluri: funcia endocrin (de sintez i eliberare a unor hormoni cu rol reglator asupra digestiei) i funcia excretoare (de eliberare n lumenul tubului digestiv a unor substane nefolositoare). Multitudinea funciilor ndeplinite de aparatul digestiv implic variate metode de explorare a acestora.

Lucrarea nr. 23 Observarea micrii cililor esofagieni la broasc


Principiil lucrrii: La broasc plafonul cavitii bucale este acoperit cu un epiteliu ciliat. Particule fine de plut sau negru de fum, sunt deplasate spre regiunea stomacal datorit micrii cililor esofagieni. Materiale necesare: broasc, plut de disecie, ace cu gmlie, instrumentar de disecie, bucele fine de plut, praf de crbune, ser fiziologic, microscop, lam de sticl. Desfurarea lucrrii: broasca se paralizeaz prin distrugerea mduvei spinrii i se fixeaz pe plut cu partea ventral n sus. Se incizeaz tegumentul i planeul muscular abdominal, descoperind esofagul i stomacul. Apoi se secioneaz i se ndeprteaz maxilarul inferior. Apoi se descoper deschiderea esofagului i se incizeaz i ndeprteaz poriunea lui ventral pe o distan de 1-2 cm. a) pe regiunea posterioar a palatinului i la nceputul esofagului se presar cteva bucele de plut i se urmrete deplasarea acestora spre stomac (dac micarea nu se produce, esofagul trebuie umezit cu ser). b) o poriune de esofag, excizat din partea sa dorsal, se pune pe o lam de microscopie i se presar cu praf de negru de fum. Se observ la microscop deplasarea acestuia spre captul stomacal al esofagului; se poate vedea i micarea cmpurilor de cili. c) o bucat de esofag, nu prea mare, pus cu partea ciliar n jos pe lam, se deplaseaz. Micarea poate fi urmrit i la microscop. ncetinirea motilitii cililor se produce prin rcirea mucoasei sau sub aciunea fumului de igar, ct vreme nclzirea mucoasei are efecte opuse.

42

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Fig.21 Cavitatea buco-faringian la broasc: 1.-dini de pe maxilar; 2.-dini vomerieni; 3.-narina intern; 4.-deschiderea spre trompa lui Eustache; 5.-glota; 6.-deschiderea spre sacul vocal (la masculi); 7.-limba; 8.-maxilarul superior; 9.-maxilarul inferior

Lucrarea nr. 24 Hidroliza amidonului cu saliv sau cu HCl


Funcia secretorie (secreia enzimelor digestive, care descompun chimic nutrienii) este asigurat de glandele anexe ale tubului digestiv: salivare, ficat, pancreas, precum i de glandele gastrice i intestinale. Glandele salivare parotide secret saliva seroas, sublingualele saliva mucoas, iar submandibularele saliva mixt. n saliv se gsesc dou enzime care descompun glucidele: amilaza salivar (ptialina) i maltaza. A mai fost identificat i o enzim proteolitic cu rol limitat (kalicreina).

Principiul lucrrii: amidonul este degradat treptat pn la maltoz sub aciunea amilazei salivare sau a unui agent hidrolizant artificial (acidul clorhidric). Materiale necesare: - pentru recoltarea salivei: stativ cu eprubete, plnie de sticl, hrtie de filtru, instalaie pentru filtrare la vid;

43

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

- pentru hidroliza amidonului: amidon fiert n soluie, saliv, HCl 5%, soluie de iodo-iodur de potasiu (I+IK), pahare Berzelius, eprubete, pipete, plac de sticl, bec de gaz. Desfurarea lucrrii: A. Recoltarea salivei. Se cltete gura cu ap cldu, apoi se excit glandele salivare mestecnd o bucat de cauciuc sau mirosind eter. Saliva care se formeaz se colecteaz printr-o plnie mic ntr-o eprubet. n timp de 30 min se pot recolta, de la un individ, aprox. 10 ml saliv. Pentru a putea fi utilizat n experiment, saliva se filtrez la vid prin hrtie de filtru. B. Hidroliza amidonului cu saliv prin metoda picturilor. ntr-un pahar Berzelius se face un amestec din 1 g amidon i 1 ml ap distilat, peste care se mai adaug 100 ml ap distilat. Amestecul se fierbe timp de 2 min, dup care se obine soluia opalescent de amidon. Pe o lam de sticl mare, aezat pe un fond alb, se depun, egal distanate, 20-30 picturi de I+IK. ntr-o eprubet se iau 5 ml soluie de amidon i se adaug 2 ml saliv diluat cu ap distilat n proporia de 1:3. Din acest amestec se depune, din secund n secund, cte o pictur, peste o pictur de I+IK. Se obine astfel scara de culori (de la albastru nchis la incolor) caracteristic degradrii amidonului. C. Hidroliza amidonului cu HCl. Se ia o prob din soluia de amidon i se face reacia cu I+IK, obinndu-se o coloraie albastru nchis. ntr-un pahar Berzelius se iau 50 ml soluie de amidon, peste care se adaug 5 ml HCl 5% i se pune la fiert. La intervale de 5 min se iau probe din soluia pus la fiert (cte 1 ml, ntr-o eprubet), peste care se adaug 2 ml ap distilat i o pictur de I+IK. Se va obine o scar de culori, care corespunde produilor succesivi ai degradrii amidonului: amidon amilogen amilodextrin eritrodextrin acrodextrin (albastru) (albastru-violet) (violet) (rou-brun) (roz) acrodextrin maltoz. (incolor) (incolor)

44

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

APARATUL RESPIRATOR
Lucrarea nr. 24 Determinarea capacitilor i volumelor respiratorii la om (spirometrie)
Respiraia const din totalitatea proceselor care privesc transportul O2 din atmosfer la esuturi i al CO2 rezultat din oxidrile celulare, n sens invers. Procesul respirator poate fi divizat n 4 etape majore: 1 ventilaia pulmonar, mecanismele care asigur primenirea aerului la nivelul alveolelor pulmonare; 2 difuzia O2 i CO2 la nivelul alveolelor; 3 transportul gazelor respiratorii prin snge i celelalte lichide biologice; 4 reglarea ventilaiei pulmonare. n timpul unei respiraii normale sau forate, se introduc sau se scot din plmni cantiti de aer caracteristice, care din punct de vedere practic sunt mprite n volume i capaciti respiratorii. Volumele reprezint cantiti de aer din anumite momente ale ciclului respirator, iar capacitile sunt combinaii de volume.

Principiul lucrrii: aerul expirat sau inspirat (normal sau forat) se introduce ntr-o incint impermeabil, care ridic un cursor ce ne indic volumul introdus. Materiale necesare: spirometru, pahar cu alcool. Exist mai multe tipuri de spirometre, care sunt grupate n dou categorii: spirometre umede i spirometre uscate. Un spirometru umed este alctuit din dou pri principale: un recipient cilindric a crui interior cuprinde un cilindru central i o zon periferic ngust, n care se toarn ap; un clopot cilindric (c) care se poate deplasa n interiorul centurii de ap a recipientului. Cilindrul central al recipientului este strbtut, axial, de un tub metalic (tm) care este orizontalizat i exteriorizat la baza cilindrului, unde se prelungete cu un tub de caucic (tc). La captul liber al acestuia se ataeaz o pies bucal care const dintr-un tub scurt de sticl. Cnd se sufl aer prin tubul de cauciuc, clopotul aflat n poziia zero, adic scufundat pn la refuz n centura de ap, se ridic cu att mai sus cu ct cantitatea de aer introdus este mai mare. Aceasta este indicat pe scara gradat (s) de un ac indicator (i). Prin intermediul unui fir, care trece peste un scripete (S), cilindrul mobil este pus n legtur cu o greutate (g) care faciliteaz ridicarea lui, ajutndu-l s nving fora de frecare. Principalele componente ale spirometrului uscat Barnes (fig. 6) sunt: o cutie metalic cilindric (C) i un burduf (B) din folie de polietilen, plasat n interiorul cutiei, care colecteaz aerul. n centrul capacului metalic superior al burdufului se afl fixat un capt al unei rigle metalice (S), gradat n cm ncepnd de sus. Excursia 45

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

captului superior al riglei, care iese la exterior printr-un orificiu practicat n capacul cutiei, poate fi blocat cu ajutorul unei piedici.

Fig. 22 Spirometre (stnga: cu ap, dreapta: uscat Barnes) (explicaii n text)

Desfurarea lucrrii: a) determinarea aerului curent respirator (VC). Persoana experimentat st pe un scaun i respir normal. Ea introduce n tubul spirometrului aerul a 5 expiraii normale. Volumul total de aer introdus se mparte la numrul expiraiilor (aprox. 2500 ml : 5 = aprox. 500 ml), ceea ce reprezint volumul de aer inspirat sau expirat n mod curent. b) determinarea aerului complementar (volum inspirator de rezerv VIR). O serie de 5 inspiraii forate cu expiraii normale, distanate ntre ele cu pauze de 1 min, va introduce n spirometru o cantitate total de aer de 10.000 ml. Din aceast cantitate 2.500 ml o reprezint aerul curent, iar 7.500 ml este aerul complementar. Pentru o inpiraie forat revin deci 1.500 ml aer. 46

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

- se mai poate folosi i urmtoare metod: se ventileaz spirometrul, ridicnd i cobornd de cteva ori cilindrul mobil (sau rigla), apoi se oprete la un animit nivel (de ex. la 3.000 ml). Persoana examinat face o inspiraie obinuit din exterior, apoi introduce repede piesa bucal n gur, i strnge nrile i inspir, ct mai profund, aer din spirometru. Calculndu-se diferena dintre valoarea indicat de spirometru la nceput (3.000 ml) i la sfrit (1.500 ml), aflm volumul aerului complementar, de aprox. 1.500 ml. c) determinarea aerului de rezerv (volum expirator de rezerv VER). O serie de 5 expiraii forate cu inspiraii normale, distanate ntre ele cu pauze de 1 min, va mpinge n spirometru o cantitate total de 10.000 ml aer. Din acesta 2.500 ml este aerul curent, iar 7.500 ml este aerul de rezerv. De o expiraie forat revine un volum de 1.500 ml. - dup o expiraie obinuit, extraspirometru, persoana examinat face o expiraie forat n spirometru. Se citete pe scala gradat valoarea fraciunii de aer respective. d) determinarea capacitii vitale (VC + VIR + VER). Persoana examinat face o inspiraie forat, dup care i strnge repede nrile i face o expiraie forat n spirometru, cu vitez medie, care se mrete spre sfrirul efortului expirator. Se citete volumul pe scala gradat. La sfrit se face nsumarea valorilor aflate la pct. a, b i c i se compar cu valoarea capacitii vitale aflate la pct. d.

Fig. 23 Relaiile funcionale dintre volumele i capacitile respiratorii

47

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Valoarea capacitii vitale a persoanei examinate se compar cu valoarea standard normal pentru categoria de vrst, sexul i nlimea persoanei respective. Valorile standard ale capacitii vitale se gsesc n tabele, sau pot fi stabilite cu ajutorul nomogramelor. n lipsa acestora, valoarea capacitii vitale poate fi calculat dup formula lui West: CV = I x F, n care I = nlimea persoanei (cm) i F = un factor a crui valoare este 20 pentru femei, 25 pentru brbai i 29 pentru atlei. Capacitatea vital normal este, n medie, de 3.500-4.000 ml. O valoare foarte mare (pna la 9.000 ml) se ntlnete la sportivi. n afeciunile pulmonare grave se produce scderea capacitii vitale. Cunoscnd capacitatea vital, putem calcula ctul vital (QV), dup urmtoarea formul: QV = (CV x G) / I CV = capacitatea vital (ml); G = greutatea subiectului (kg); I = nlimea (cm). Ctul vital variaz n funcie de vrst, fiind de 130 la 6 ani, 320 la 10 ani, 565 la 14 ani i 800 la adultul normal. La adulii tuberculoi QV scade la 500, 400 sau 300, valoarea lui fiind cu att mai mic cu ct boala este mai avansat. Rezultate i discuii: -Valorile obinute cu ajutorul spirometrului i prin calcul se vor trece n tabelul urmtor: Parametrul VC VIR VER CI (VC + VIR) CV CT (CV + VR) CV (valoarea standard normal) QV Valori normale (ml) brbai femei 500 400 1500 1200 1500 1200 2000 1600 3500 2800 5300 4300 Valori experim. (ml)

Lucrarea nr. 25 Rolul diafragmei n respiraie. Experiena Donders


Principiul lucrrii: membrana de cauciuc, care este ridicat sau lsat n jos, joac rolul diafragmei n respiraie. Ea produce o scdere a presiunii aerului n

48

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

incint i o dilatare a pulmonului, sau o cretere a presiunii i o micorare a pulmonului. Materiale necesare: dispozitiv Donders pentru cine sau un dispozitiv mai mic i mai simplu pentru cobai, pulmon de cine sau de cobai, instrumentar de disecie. Dispozitivul Donders este un model al cutiei toracice care const dintr-un clopot de sticl nchis la partea inferioar cu o membran subire i elastic de cauciuc, strns legat peste marginile clopotului. Membrana prezint la mijloc un crlig metalic, similar cu cele de la pneumograful Bert. n partea superioar, clopotul este nchis etan de un dop prin care trece un tub metalic sau de sticl pe care se va mbrca traheea pulmonului; tot prin dop trece i captul unui manometru. Desfurarea lucrrii: pentru a introduce pulmonul de cine n dispozitivul Donders original, se desface membrana de cauciuc de la baza aparatului, se leag traheea de tubul central care srbate prin dopul de sus, apoi se leag la loc membrana. Pentru pulmonul de cobai care este mai mic, este suficient s se scoat dopul din partea superioar a vasului pentru a putea lega traheea de tub. Trgnd de cuiul din mijlocul membranei n jos, facem o depresiune n incinta aparatului. Aerul de la exterior, cu presiune mai mare, va ptrunde n plmni i i va dilata. Este actul analog inspiraiei. Ridicnd cuiul membranei, mrim presiunea din incint prin scderea volumului; aerul va iei din plmn, care se va micora. Este actul analog expiraiei.

Fig.24 Schema unui dispozitiv Donders, simplu

49

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

SNGELE
Lucrarea nr. 26 Defibrinarea sngelui de mamifer
Printre proteinele plasmatice un loc important l ocup factorii coagulrii, care mpreun cu factorii trombocitari ai coagulrii, realizeaz hemostaza. Factorul I al coagulrii (fibrinogenul) este o protein plasmatic care se formeaz n sistemul reticuloendotelial din ficat i din mduva osoas. n cursul coagulrii, fibrinogenul se transform n fibrin, printr-un proces de polimerizare, care const n unirea cap la cap a mai multor molecule de fibrinogen. Acesta este un proces complex, la care particip 13 factori ai coagulrii, se desfoar n 4 faze i necesit prezena ionilor de Ca2+. La coagularea sngelui ntr-o eprubet, deasupra se separ un lichid incolor serul, care este plasma lipsit de fibrinogen.

Principiul lucrrii: firioarele de fibrin rezultate n urma coagulrii sngelui de mamifer, se prind de mturicea de oel, sau ader i se ncolcesc n jurul perlelor de sticl, de unde pot fi separate. Materiale necesare: snge proaspt, mturice de srm inoxidabil de oel, lame de sticl, ace, microscop. Desfurarea lucrrii: aprox. 20 ml snge recoltat ntr-un pahar Berzelius se bate cu mturicea de oel timp de 30 min (sau se agit 30 min cu bile de sticl pentru 50 ml snge, sunt necesari 25 ml bile). Dup un timp, se constat c de firele de srm (bilele de sticl) s-au prins o mulime de firioare de fibrin, rezultate din transformarea fibrinogenului n procesul de coagulare.

Fig.25 Filamente de Fibrin

50

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Pentru separarea fibrinei, se spal mturicea (bilele) n curent de ap, n scopul ndeprtrii globulelor care au mai rmas aderente n trama fibrelor de fibrin. Firele se separ apoi de pe mturice (bile) cu ajutorul unor ace fine, se pun pe o lam de sticl i se observ la microscop.

Lucrarea nr. 27 Obinerea serului i plasmei sanguine de mamifer


Principiul lucrrii: din sngele proaspt se va obine serul (lichidul care se separ de globule i nu mai conine fibrinogen), sau plasma (lichidul fr globule, dar care conine fibrinogen). Materiale necesare: snge proaspt, pahare Berzelius, eprubete, centrifug, pipete de decantare, anticoagulant. Pentru examenul morfologic i biochimic al sngelui, se utilizeaz frecvent patru anticoagulani: citratul de sodiu, oxalaii, EDTA i heparina. Citratul de sodiu, soluie 3,8%, se utilizeaz n proporie de 1 volum la 9 volume de snge (proporia de anticoagulant fiind mare, se va ine cont de diluie, acolo unde este cazul). Sngele recoltat pe citrat este folosit pentru examenul morfologic, nu i pentru determinri biochimice. Oxalaii se prepar astfel: 0,8 g oxalat de potasiu i 1,2 g oxalat de amoniu se dizolv n 100 ml ap distilat. Se folosete n proporia 0,1 ml oxalat la 1 ml snge (i n acest caz se va ine cont de diluie). Soluia se repartizeaz n vasele sau eprubetele de colectare a sngelui, care apoi se usuc n etuv la 60C i se acoper, dup uscare, cu dopuri. Utilizarea oxalailor duce la autoliza leucocitelor i nu se preteaz la dozarea azotului din snge. EDTA etilendiamintetraacetat, sare disodic sau dipotasic, n cantitate de 1-2 mg/ml snge, este foarte potrivit pentru examinarea morfologic a sngelui. Din probele prelevate pe EDTA se pot determina, timp de 24 de ore dac sunt inute la frigider: hematocritul, hemoglobina, numrul de globule roii i albe. De asemenea se pot doza: glicemia, proteinemia, uremia. Citratul, oxalaii i EDTA acioneaz prin complexarea ionului de Ca2+, mpiedicnd formarea firioarelor de fibrin. Heparina este anticoagulantul optim pentru examenul biochimic al sngelui, dar nu se recomand pentru numrarea globulelor. Se utilizeaz 0,1 ml heparin 1% pentru 5 ml de snge. Pentru o examinare corect i ct mai complet a sngelui, probele se iau astfel: - o eprubet cu EDTA, pentru determinri morfologice; - o eprubet cu heparin, pentru determinri biochimice, - o eprubet fr anticoagulant, pentru determinri din ser.

51

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Desfurarea lucrrii: A. Obinerea serului. - obinerea serului prin coagulare spontan. Sngele recoltat ntr-un pahar Berzelius (fr anticoagulant) se examineaz dup o or. Se constat c s-a format un chiag care a expulzat un lichid incolor sau glbui-roietic, serul sanguin. El nu mai conine fibrinogen, acesta fiind cuprins n chiag, sub form de fibrin, dar conine de cele mai multe ori hemoglobin, care provine din distrugerea unor globule roii. - obinerea serului prin defibrinarea sngelui. Sngele defibrinat (obinut n experiena precedent) se centrifugheaz timp de 10 min la minim 3000 turaii/min. n eprubetele de centrifug se separ globulele roii la fund i serul clar, incolor sau uor glbui, deasupra. Serul poate fi prelevat n alt vas cu ajutorul unei pipete de decantare. B. Obinerea plasmei. Sngele recoltat pe anticoagulant se centrifugheaz timp de 10 min la 3000 turaii/min. Supernatantul astfel obinut (plasma) se poate utiliza pentru o gam larg de dozri biochimice (conine toate elementele solvate ale sngelui), precum i ca mediu de incubare in vitro a unor esuturi (conine toi aminoacizii liberi eseniali).

Plasma sanguin

Serul sanguin

Elemente figurate

Cheag

Fig. 26. Plasma i serul sanguin

52

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 28 Volumul globular. Hematocritul


Sngele este considerat un esut conjunctiv de consisten fluid, n care substana fundamental este reprezentat de plasm, iar celulele de elementele figurate. Exist un raport plasmoglobular (55% plasm la 45% elemente figurate din volumul total al sngelui), care n condiii fiziologice se menine ntre limite constante. Modificrile acestui raport sunt explorate prin metoda hematocritului, un parametru foarte important n diagnosticul i evoluia ocurilor hemoragice, deoarece n urma unei pierderi de snge masive, elementele figurate se refac pe alt cale i mai ncet dect plasma.

Principiul lucrrii: termenul hematocrit se refer n realitate la tubul folosit n vederea determinrii raportului plasmei sanguine la suma elementelor figurate sau numai a hematiilor. Totui, n practic acest termen semnific procentul volumului eritrocitar din sngele integral. Determinarea lui se face prin dou metode: a) macrometoda (Wintrobe) i b) micrometoda (microhematocritul). n urma sedimentrii, printr-o centrifugare uoar, se exprim volumul sedimentului ca procent din volumul ntregii coloane de snge. A. Macrometoda Wintrobe Materiale necesare: snge recoltat pe anticoagulant, hematocrit, centrifug. Hematocritul este un tub de sticl cu diametrul de 0,5 mm, gradat de la 0 la 100, care se adapteaz perfect la o centrifug special, cu dou brae. Desfurarea lucrrii: se aspir snge n tub pna la diviziunea 100. Tubul se nchide la partea inferioar cu un dop de cauciuc, se aeaz n suportul centrifugii i se centrifugheaz la 10 min la 3000 de turaii/min. Sngele se va separa ntr-o coloan limpede, glbuie de plasm i o coloan roie format din globule. Lungimea celor dou coloane este citit pe gradaia tubului. B. Microhematocritul Materiale necesare: snge recoltat pe anticoagulant, tubuoare Mett pentru microhematocrit, centrifug. Tubuoarele Mett sunt capilare de sticl cu lungimea de 5 cm i negradate. Desfurarea lucrrii: se umple tubul cu snge prin capilaritate i se nchide la ambele capete cu un chit special, cear sau plastilin. Se centrifugheaz 10 min la 3000 turaii/min, ntr-o centrifug special pentru microhematocrit sau, n lipsa acesteia, ntr-o centrifug obinuit de mas, n care tuburile sunt introduse n eprubete. Dac tubul de hematocrit este gradat n mm (vezi /a/), se face citirea direct. Considernd nlimea coloanei de snge centrifugat n tub 100, se exprim n 53

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

procente nlimea coloanei de hematii. Dac tubul nu are diviziuni (vezi /b/), citirea coloanelor se poate face cu ajutorul unei linii gradate sau a hrtiei milimetrice. Calculul se va face dup formula: 100 x h h% = ---------, unde H H = nlimea total a coloanei de snge; h = nlimea coloanei de hematii. La valoarea obinut, se fac urmtoarele corecii: - plasma interstiial. ntre hematii rmne un spaiu cu plasm interstiial reinut, ce reprezint aprox. 4% din volumul eritrocitar global. Pentru scderea acestui volum, se nmulete valoarea hematocritului cu 0,96. - stratul leucocitar-trombocitar. n mod normal grosimea acestui strat este neglijabil (sub 1%). n caz de leucocitoz, acest strat crete considerabil i trebuie msurat pentru a aprecia corect att stratul eritrocitar ct i pe cel plasmatic. - hematocritul arterial este mai sczut. Obinuit se determin hematocritul sngelui venos. Pentru a afla hematocritul arterial, care se folosete la determinarea volumului sanguin, se nmulete hematocritul venos msurat cu 0,864. Valori normale (%) media limite normale 40,7 35,2 - 49,0 44,9 39,0 - 51,0 33,9 35,0 Valori experimentale (%) dup dup citire corecii 1 2 3 4 5 6

femei brbai bovine cabaline

Lucrarea nr. 29-30 Numrarea globulelor roii i albe


n sngele circulant al organismului fiziologic normal, numrul elementelor figurate: hematii, leucocie, trombocite se menine la valori constante, dependente de specie i de sex. La unul i acelai individ, numrul elementelor figurate se modific semnificativ n cazul modificrii brute a condiiilor de mediu i n stri patologice.

54

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Principiul lucrrii: determinarea numrului de elemente figurate din snge sau alte lichide biologice se bazeaz pe numrarea direct, la microscop, a celulelor dintr-un volum cunoscut de lichid care a fost diluat n prealabil ntr-o proporie cunoscut. Diluarea prealabil a sngelui este necesar n vederea evitrii coagulrii lui i pentru a permite numrarea elementelor figurate, care sunt foarte multe ntr-un volum mic de snge. A. Numrarea globulelor roii Materiale necesare: lichid de diluie (Hayem, Marcano sau Gower), pipet Potain pentru hematii, hemocitometre, microscop, ace pentru puncie, vat, alcool, eter. a) lichidul de diluie trebuie s ndeplineasc urmtoarele caliti: - s fie izotonic cu sngele, pentru a nu produce hemoliza sau ratatinarea eritrocitelor; - s conin un fixator, care s conserve forma hematiilor i s mpiedice autoliza i aglutinarea lor. Se utilizeaz diferite lichide de diluie: Lichidul Hayem - clorur mercuric (sublimat) HgCl2 ..................5,0 g se dizolv n 100 ml ap - clorur de sodiu NaCl .10,0 g - sulfat acid de sodiu NaHSO4 37,5 g Se completeaz cu ap la 1000 ml. Tnsescu i Ivanovici nu includ clorura mercuric n compoziia lichidului Hayem, iar Pico i Nstsescu dau urmtoarea compoziie a soluiei: - clorur mercuric HgCl2 ..................................0,5 g - sulfat de sodiu Na2SO4 x 10 H2O ....5,0 g - clorur de sodiu NaCl ..1,0 g Se completeaz cu ap la 100 ml. Dup preparare, lichidul Hayem se filtreaz prin hrtie de filtru. Pentru obinerea de rezultate bune, soluia nu trebuie s fie mai veche de trei sptmni. n cazuri de disproteinemii, aceast soluie poate produce precipitarea i aglutinarea hematiilor. Acelai lucru se poate ntmpla n ciroze i pneumonii atipice. Lichidul Gower - sulfat de sodiu Na2SO4 12,5 g - acid acetic glacial .33,3 ml Acest lichid este superior soluiei Hayem, deoarece mpiedic formarea rulourilor de hematii n disproteinemii. Lichidul Marcano - sulfat de sodiu Na2SO4 5,0 g - formol 40% ..1,0 ml 55

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Se completeaz cu ap distilat la 100 ml. Ca lichid de diluie se poate folosi i ser fiziologic. b) pipeta de diluie Potain pentru hematii conine n total 101 volume, din care un volum revine capilarului, subdivizat n 10 uniti egale, cu inscripiile 0,5 i 1,0, iar 100 de volume revin bulei de diluie n care se afl o bil de culoare roie. La partea de sus a pipetei se adapteaz un tub de cauciuc, care permite o aspiraie uniform a lichidelor. Dac sngele este tras n tubul capilar pn la diviziunea 0,5, respective 1,0, i apoi completat cu lichidul de diluie pn la diviziunea 101, se obine o diluie a sngelui de 200, respective 100 ori. De unde rezult acest calcul?

Fig.27 Pipete Potain

n bula de diluie se vor afla 101 1 volume, din care 0,5, respectiv 1 volum de snge, iar restul pn la 100 lichid de diluie. Un volum din cele 101 rmne pe tubul capilar i nu particip la diluarea sngelui. Deci, factorul de diluie va fi: 100 vol. lichid + snge ---------------------------- = 100, sau 1 vol. snge

100 vol. lichid + snge ---------------------------- = 200 0,5 vol. snge 56

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Dup ntrebuinare, pipetele se spal cu ap, apoi cu alcool i eter, se usuc, se sterilizeaz la cldur uscat. c) hemocitometrul este format dintr-o lam de sticl groas, care are gravat pe ea o reea cu dimensiuni cunoscute. Zona lamei pe care se afl reeaua gradat se gsete la o adncime de 0,1 mm fa de restul lamei, aa nct, atunci cnd acoperim camera cu o lamel, ea delimiteaz un spaiu nalt de 1/10 mm. n acest spaiu ptrunde sngele diluat, iar globulele se dispun ntr-un singur strat, permind numrarea lor. Mai des folosite sunt urmtoarele tipuri de lam: - camera Thoma Reeaua lamei Thoma are latura de 1 mm i suprafaa de 1 mm2. Suprafaa este subdivizat cu linii triple n 16 patrate de ordinul al II-lea cu suprafaa de 1/25 mm2, care la rndul lor sunt subdivizate prin linii simple n 16 patrate de ordinul al III-lea cu suprafaa de 1/400 mm2. - camera Burker Are o suprafa de 9 mm2, mprit n 9 patrate de cte 1 mm2, delimitate prin linii triple. Fiecare mm2 este subdivizat prin linii duble n 16 patrate cu suprafaa de 1/25 mm2. La ntretierea liniilor duble se nscriu patrate mici, cu suprafaa de 1/400 mm2. - camera Burker-Trk Are o suprafa de 9 mm2, gravat dup tipul Burker combinat cu tipul Thoma. Partea central a reelei, n form de cruce, este de tip Thoma, iar colurile, de tip Burker. - camera Goreaev Are un cadrilaj n care alterneaz cte un grup de 16 patrate cu suprafaa de 1/400, cu grupuri de patrate cu suprafaa de 1/25 mm2. La toate tipurile de lame, patratele cu suprafaa de 1/400 se folosesc pentru numrarea hematiilor, iar cele cu suprafaa de 1/25 mm2 pentru numrarea leucocitelor. Curirea lamei i a lamelei se face imediat dup utilizare, prin splare cu ap rece sau cldu. Dac s-a uscat sngele pe lam, se spal cu ap cldu i spun, se cltete cu ap de robinet i se usuc la temperatura camerei, sau se terge cu o crp ce nu las scame. Dup curire, camera i lamela se apuc numai de margini. a) privire din fa; b) privire din profil; R = reea; L = lamel; S = nlimea camerei. Fig. 10.6. Tipuri de reele de numrat hematii a = Thoma; b = Burker-Trk; c = Burker; d = Goreaev. 57

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Fig.28 Schema grilelor de lucru Camera Thoma

d) microscopul: se lucreaz cu obiectiv uscat mare 40, ocular 10 sau 7, lumin slab. Desfurarea lucrrii: a) recoltarea sngelui: se terge degetul (inelar sau mijlociu) cu alcool i eter pentru dezinfecie i ndeprtarea grsimii. Cu un ac de sering flambat i ters cu alcool, se face o neptur n pulpa degetului n partea lateral, brusc i suficient de profund, nct sngele s curg spontan sau cel mult dup o uoar presiune dea lungul laturii degetului, la o oarecare distan de locul nepturii. Stoarcerea degetului duce la diluarea sngelui cu limf i la obinerea unor rezultate eronate. Prima pictur de snge se terge, iar a doua se aspir n pipet pn la diviziunea 0,5 (n anemii pn la 1), citirea fcndu-se cu pipeta n poziie aproape orizontal. Dac sngele depete uor diviziunea, prin atingerea vrfului pipetei cu o hrtie de filtru se poate aduce coloana de lichid la diviziunea dorit. Se terge sngele de pe exteriorul pipetei i se aspir foarte rapid lichidul de diluie pn la diviziunea 101. Se aeaz pipeta n poziie orizontal, se astup cele dou capete cu policele i 58

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

indexul i se agit timp de 5 min pentru omogenizare. Pn la numrarea globulelor, pipeta rmne n poziie orizontal. b) umplerea camerei de numrat. Se aplic lamela pe lama de numrat, fie prin adeziune, fie cu ajutorul cavalerilor. Dac lama nu are cavaleri, lamela se va aburi uor la margini pentru a adera bine. Aderena dintre lam i lamel este asigurat cnd se formeaz inelele lui Newton (inele colorate de refracie). Se agit pipeta, apoi primele picturi care se scurg sunt lsate s cad pe o hrtie de filtru. Vrful pipetei se apropie de marginea camerei acoperit cu lamela i se las s intre prin capilaritate n camer o cantitate de lichid, n spaiul de 1/10 mm format ntre lam i lamel. Spaiul dintre lam i lamel trebuie s fie umplut n ntregime, fr ca lichidul s treac n anurile laterale, fr s intre bule de aer n camer. n caz contrar, operaia se repet dup tergerea camerei. Camera se aeaz orizontal pe platina microscopului, unde va sta cteva minute n repaus pentru stabilizarea hematiilor. c) numrarea hematiilor se face pe patratele de ordinal III, astfel: se numr nti globulele care se afl pe latura stng a patratului, apoi cele care se afl pe latura lui superioar i n sfrit cele din interiorul patratului. Nu se numr globulele situate pe latura dreapt i inferioar ale patratului, deoarece acestea intr n numrtoarea patratului aflat lateral, respectiv dedesubt. Se face astfel citirea tuturor celor 16 patrate de ordinul III de pe un patrat de ordinul II, apoi se trece la alt patrat de ordinul II. Se citesc astfel patratele de ordinul III de pe 2 pn la 5 patrate de ordinul II (de obicei 5). d) calcularea rezultatului se face dup formula: N x 4000 x 200 nr. hematii/mm3snge = -------------------------, unde n N = numrul hematiilor gsite n total n cele 5x16=80 ptrele de ordinul III; n = numrul ptrelelor de ordinul III de pe care au fost numrate hematiile (de obicei 80); 1/4000 = volumul unui ptrel de ordinul III, cu suprafaa de 1/20 x 1/20 = 1/400 mm2 i nlimea de 1/10 mm; 200 = factorul de diluie al sngelui n pipeta Potain, n cazul n care s-au aspirat 0,5 volume de snge. Rezultatele se vor trece n urmtorul tabel: 59

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Nr. hematii/mm3 snge (x 106) femeie brbat nou-nscut bovine cabaline obolan (alb)

valori normale 4,2 4,5 4,5 5,0 5,0 6,0 5,9 6,5 7,4 7,7

valori experimentale

Se vor compara valorile experimentale obinute cu valorile normale corespunztoare.

B. Numrarea globulelor albe Materiale necesare: pipeta pentru diluia leucocitelor, lichid de diluie (Hayem pentru leucocite sau Trk), hemocitometre, microscop, ace pentru puncie, vat, alcool, eter. a) lichidul de diluie. Pentru globulele albe se folosete: b) Lichidul Hayem pentru hematii, la care se mai adaug 0,4 g violet de metil (sau albastru crezil sau albastru de toluidin). Lichidul Trk - violet de genian 1% .1 ml - acid acetic glacial ...3 ml - ap distilat .300 ml Aceste lichide au proprietatea de a distruge stroma globulelor roii (mai ales lichidul Trk) i de a colora nucleul globulelor albe. Astfel n cmpul microscopic rmn numai leucocite. b) pipeta pentru diluia leucocitelor conine n total 11 volume, din care 1 volum revine capilarului subdivizat n 10, iar 10 volume se afl n bula de diluie. Bila de omogenizare este de culoare alb. Diluia sngelui recoltat pn la diviziunea 0,5 este de 1/20, iar a celui recoltat pn la diviziunea 1 de 1/10. c) hemocitometre cele utilizate i pentru hematii. d) microscopul se utilizeaz obiectivul 40, condensatorul microscopului cobort. 60

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Desfurarea lucrrii: a) recoltarea sngelui ca i pentru hematii, aspirnd snge pna la diviziunea 0,5 i lichid de diluie pn la diviziunea 11. Se agit pipeta timp de 3 min. b) umplerea camerei de numrat la fel ca pentru hematii. c) numrarea leucocitelor se face pe patratele de ordinul II (cu suprafaa de 1/25 mm2). Se numr leucocitele din 125 patrate de ordinul II (care reprezint 5 patrate de ordinul I, fiecare cu o suprafa de 1 mm2). Tehnica de numrare este cea folosit i pentru hematii. d) calcularea rezultatelor se face dup formula: N x 10 x 20 snge = ------------------, n care n

nr.

leucocite/mm3

N = numrul total de leucocite de pe 5 patrate de ordinul I (sau 125 patrate de ordinul II); n = numrul patratelor de ordinul I citite; 1/10 = nlimea camerei (mm); 20 = factorul de diluie pentru leucocite, n cazul n care s-a aspirat snge pna la diviziunea 0,5 a pipetei.

Rezulatele se vor trece n urmtorul tabel: Nr. leucocite/mm3 snge valori normale valori experimentale 4.000 9.000 8.000 12.000 12.000 20.000 7.000 9.000 8.000 11.000

adult sugar nou-nscut bovine cabaline obolan

61

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 31-32 Determinarea grupelor de snge principale la om


Prezena sau absena antigenilor (aglutinogene) pe hematii i prezena sau absena anticorpilor (aglutinine) n plasm a dus la delimitarea a 4 grupe sanguine principale (sistemul ABO), care au o deosebit importan practic n cazul transfuziilor de snge. Spre deosebire de sistemul ABO, pentru sistemul Rh nu se gsesc, n mod spontan, anticorpi n plasm. Producia de anticorpi anti-Rh este provocat natural sau artificial (dup transfuzii).

A. Determinarea grupelor de snge principale Principiul lucrrii: Prezena sau absena antigenilor (aglutinogene) pe hematii i prezena sau absena anticorpilor (aglutinine) n plasm a dus la delimitarea a 4 grupe sanguine principale (sistemul ABO), care au o deosebit importan practic n cazul transfuziilor de snge. Spre deosebire de sistemul ABO, pentru sistemul Rh nu se gsesc, n mod spontan, anticorpi n plasm. Producia de anticorpi anti-Rh este provocat natural sau artificial (dup transfuzii). Determinarea grupelor sanguine principale se face pe baza reaciei de aglutinare a hematiilor, care apare ori de cte ori A se ntlnete cu i B se ntlnete cu . Natura acestei reacii este similar cu cea dintre un antigen (A,B) i un anticorp (, ). Caracteristicile grupelor sanguine sunt redate n tabelul urmtor: Aglutinoge Aglutinin n (n (pe hematii) plasm) 0 , A B AB Frecv. grupei la europeni 45% 42% 10% 3% Primete de la grupa 0 A, 0 B, 0 0, A, B, AB Doneaz grupei 0, A, B, AB A, AB B, AB AB

Grupa I. II. III. IV.

Materiale necesare: seruri hemotest A i B, lame de sticl, ace pentru puncie, vat, alcool, ser fiziologic. Desfurarea lucrrii: pe o lam de sticl foarte curat se pune n stnga o pictur din serul grupei A, iar n dreptul o pictur din serul grupei B. Apoi cu o pipet fin se aspir snge din pulpa degetului persoanei a crei grup sanguin vrem s o determinm i se pune peste fiecare pictur o cantitate mic de snge. Cu colul unei lame se amestec sngele cu serul (pentru fiecare pictur cu alt

62

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

col). Dup 20 de s ncepe fenomenul de aglutinare; dup 2 min acesta trebuie s fie foarte net. Rezultatele se pot prezenta n una din urmtoarele variante (fig. 8): 1) nu se produce fenomenul de aglutinare n nici una din picturi. Hematiile nu conin nici unul din aglutinogeni. Face parte din grupa 0 (I). 2) se produc fenomene de aglutinare n ambele picturi. Hematiile conin ambii aglutinogeni (A i B). Sngele face parte din grupa AB (IV). 3) aglutinarea se produce numai n serul din dreapta (B, care are aglutinina ). Hematiile conin aglutinogenul A. Sngele este din grupa A (II). 4) aglutinarea se produce numai n serul din stnga (A, care conine aglutinina ). Hematiile conin aglutinogenul B. Face parte din grupa B (III). Dac aglutinarea nu este net, se poate aduga dup 2,5 min o pictur de ser fiziologic, care face aglutinarea mai evident. Determinarea se poate face i invers, plecnd de la picturi standard de hematii (grupele A i B) pe care se pune cte o pictur mai mare din serul subiectului. La determinarea grupelor sanguine cu ajutorul serurilor hemotest pot apare i reacii false. False reacii pozitive: a. Determinarea la temperaturi sczute (sub 15C). b. Serul-test sau eritrocitele-test sunt infectate; apare panaglutinarea (aglutinarea n toate picturile). c. Prezena de globuline n exces (VSH crescut, boli infecioase, la femei n perioada menstrual). d. Pseudoaglutinare; fenomenul dispare prin adugare de ser fiziologic.

Fig.29. Determinarea grupelor sanguine prin determinarea aglutinogenelor

63

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

False reacii negative: a. Serul hemotest are titrul slab, prin depirea perioadei de valabilitate. b. Utilizarea unei suspensii prea concentrate de hematii, fr un efect aglutinant vizibil. c. Citirea nainte de dou min de la punerea amestecurilor n contact. d. Serul de analizat are un titru slab de aglutinine, cum este cazul vrstnicilor.

B. Determinarea factorului Rho (D) Principiul lucrrii: Caracteristicile tipurilor de snge n funcie de Rh: Aglutinoge Aglutinin Frecv. n (pe (n ser) grupei la hematii) europeni + + Rh Rh 83-86% Rh+ Rh+ Rhanti-Rh 14-17% RhRh-, Rh+ Astzi se cunosc mai muli antigeni Rh. Primul antigen cunoscut este D sau Rho, care este i cel mai puternic. Anticorpul su se numete anti-D. Pentru determinarea Rho, se procedeaz ca i n cazul grupelor de snge principale, folosind ser anti-Rho (D). Materiale necesare: ser anti-Rh (D), eritrocite cunoscute Rh+ i Rh- n suspensie n ser propriu, sngele fiind recoltat fr anticoagulant, cutie Petri cu hrtie umezit, servind drept camer umed, lame, pipete Pasteur, termostat la 37C. Sngele de cercetat se recolteaz din pulpa degetului; cu ajutorul unei pipete Pasteur se pune ntr-un tub de hemoliz o cantitate de 0,5-1,0 ml snge. Dup ce se coaguleaz, se sparge cheagul cu vrful pipetei, obinndu-se hematiile necesare suspendate n serul propriu. Se procedeaz identic i pentru recoltarea hematiilor cunoscute Rh+ i Rh-. Desfurarea lucrrii: pe o lam se pune o pictur mare de ser anti-Rh, care se amestec cu o pictur din suspensia de hematii de cercetat. Amestecul se face cu colul unei lame. Pe o a doua lam se repet aceei operaie cu hematiile cunoscute Rh+ i Rh-. Lamele sunt aezate n cutia Petri pe dou baghete de sticl. Se pune cutia n termostat la 37C i se citete dup 1-2 ore. Dac sngele este aglutinat, el este Rh+. n picturile de control, hematiile sunt aglutinate (cele Rh+) sau nu (cele Rh-). Reacia este considerat negativ numai dup 2 ore la 37C. Tipul de snge TRANSFUZII Primete Doneaz la de la

64

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 33 Determinarea timpului de coagulare a sngelui


Principiul lucrrii: se noteaz timpul scurs din momentul scoaterii sngelui din vasul sanguin i pn la coagularea lui. A. Tehnica n camer umed (metoda lamelor) Materiale necesare: 3 lame de sticl bine degresate, cutie Petri cu hrtie de filtru umed (camer umed), ace pentru puncie, alcool, vat, cronometru. Desfurarea lucrrii: se face o neptur n pulpa degetului i se pun pe fiecare lam cte 3-4 picturi de snge. Se noteaz timpul. Punem lamele n camera umed pentru a evita evaporarea lor. Din cnd n cnd se ntorc ntr-o parte; nceputul coagulrii este dat de momentul cnd pictura nu mai curge, dar se deformeaz atunc cnd lama este inut vertical. Timpul de determinare a coagulrii este dat de momentul cnd pictura nu se mai deformeaz atunci cnd lama este inut vertical. Rezultate: - Timpul de coagulare al sngelui meu este: - nceputul coagulrii . - terminarea coagulrii . Valori normale: 4-5 min. B. Metoda Lee i White Materiale necesare: sering pentru puncie venoas, eprubet, baie de ap la 37C. Desfurarea lucrrii: se efectueaz rapid priza de snge (prin venopuncie) pentru a se evita aciunea trombokinazei tisulare, care poate modifica valorile finale. Se ia ntr-o eprubet 1 ml snge i se pune n baia de ap, la 37C. Procesul coagulrii se consider nceput din momentul aspirrii sngelui cu seringa, cnd se d drumul la cronometru. La fiecare minut se nclin eprubeta la 45. Coagularea se produce cnd, la nclinare, sngele nu mai curge din eprubet. Se citete timpul scurs. Rezultate i discuii: - Timpul de coagulare al sngelui meu este de .. min. Valori normale 6-12 min. Se cunosc mai multe metode de determinare a timpului de coagulare. Deoarece rezultatele obinute variaz n funcie de metoda utilizat, se admite ca valoare fiziologic 5-10 min. 65

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 33 Dozarea hemoglobinei din snge cu ajutorul colorimetrului Sahli


Globulele roii din snge au form de disc biconcav (suprafa maxim la volum minim) i prin proteina complex pe care o conin (hemoglobina) reprezint principalii transportori ai gazelor respiratorii n organism. Hemoglobina este un tetramer n care fiecare monomer se compune dintrun grup prostetic (hem) i un lan polipeptidic (globin). Hemul este constituit dintr-un inel tetrapirolic ce conine un atom de Fe. Pe fiecare atom de fier din structura hemoglobinei se fixeaz cte o molecul de O2 (deci tetramerul de hemoglobin transport, la ncrcare maxim, 4 O2). Se cunosc 6 tipuri de lanuri polipeptidice normale, notate cu alfa, beta, gamma, delta, epsilon i zeta. Molecula de hemoglobin conine de obicei o pereche de lanuri de un tip i o pereche de alt tip. De concentraia hemoglobinei n snge depinde capacitatea acestuia de a transporta gazele respiratorii.

Principiul lucrrii: se compar colorimetric o soluie de clorhidrat de hematin obinut din sngele de cercetat, cu un etalon fcut din sticl maron. Materiale necesare: hemoglobinometru, pipet de 0,02 ml, pipet Pasteur, baghet de sticl pentru amestec, acid clorhidric N/10. Hemoglobinometrul Gowers-Sahli este format dintr-un comparator colorimetric, n care se afl un dublu martor i o eprubet cu dou scri: o scar are notat hemoglobina n grame, cealalt n procente fa de valoarea normal (100% corespunde la 16 grame). Colorimetrului i este ataat o pipet capilar de 0,02 ml, o baghet pentru amestec, o pipet simpl i o eprubet cu HCl. Desfurarea lucrrii: se pun n eprubeta colorimetrului, cu o pipet simpl, 68 picturi din soluia de HCl N/10. Splm pulpa degetului cu alcool, apoi cu eter i facem o neptur cu un ac de sering dezinfectat i trecut prin flacr. Din pictura de snge care se formeaz lum cu pipeta 0,02 ml (n timp ce aspirm, pipeta se apropie orizontal, pentru ca sngele s nu se scurg napoi pe deget). tergem vrful pipetei cu hrtie de filtru, apoi i golim coninutul n eprubeta gradat a hemoglobinometrului. Prin aspirare i suflare, splm pipeta cu HCl din eprubeta gradat, pentru a goli toate resturile de snge din pipet n eprubet. Agitm eprubeta puternic de cteva ori, pentru a omogeniza amestecul i pentru a opri eventuala coagulare a sngelui. Exact dup 3 min, dilum soluia brun-nchis rezulatat, cu ap distilat, pn ajunge s aib aceeai culoare cu martorul. Pentru a uura amestecarea, afundm i scoatem din eprubet o baghet de sticl subire. Citim, la marginea de jos a meniscului, coninutului sngelui n hemoglobin, exprimat n grame sau n procente. Cifrele citite pe eprubeta gradat sunt valabile la lumina natural. n cazul citirii la lumin artificial, trebuie scoas din valoarea citit 1/12 parte.

66

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Indice derivat: hemoglobina eritrocitar medie (HEM) reprezint concentraia medie n hemoglobin a hematiei. Se calculeaz dup urmtoarea formul: Hb(%) x 100 HEM = ------------------------hematocrit Valorile normale variaz ntre 32-34%. Rezultate i discuii: - Valorile obinute se vor trece n urmtorul tabel: valori normale Hb(g/100 HEM ml) 12,0 15,5 14,0 16,0 8,0 15,0 8,0 14,0 valori experimentale Hb% Hb(g/100 HEM ml)

Hb% femei brbai bovine cabaline

- Se vor completa, prin calcul, i coloanele Hb% i HEM de la valori normale. n cazul determinrii hemoglobinei din sngele animalelor care au eritrocite nucleate (peti, broate), soluia devine opalescent din cauza nucleilor eritrocitelor, care nu se dizolv n HCl. Datorit opalescenei, care este proporional ca intensitate cu numrul eritrocitelor, se obin valori ale hemoglobinei cu 18-20% mai mari dect cele reale.

Lucrarea nr. 34 Obinerea cristalelor de hemin


Combinaiile hemoglobinei cu unele substane formeaz cristale caracteristice, dintre care unele au aceeai form la toate speciile de vertebrate (cristale de hemin i de hemocromogen), iar altele difer de la o specie la alta (cristale de oxihemoglobin). Prepararea cristalelor din prima categorie prezint importan pentru medicina legal, deoarece permite identificarea petelor de snge. Cristalele de hemin sunt cunoscute mai ales sub denumirea de cristalele lui Teichmann i sunt date de sngele tuturor vertebratelor, deoarece hemul este componenta nespecific a hemoglobinei.

67

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Principiul lucrrii: oxihemoglobina este descompus de ctre acidul acetic glacial n globin i hematin, iar aceasta din urm se va combina cu clorul, dnd cristale de hemin sau de hematin (cristalele lui Teichmann). Materiale necesare: ace de sering, alcool, eter, acid acetic glacial, NaCl 0,1%, microscop, lam i lamel, bec de gaz. Desfurarea lucrrii: pe o lam de sticl se pune o pictur de snge propriu, peste care se adaug o pictur de NaCl 0,1%. Se nclzete uor lama deasupra unui bec de gaz, pn la evaporarea picturii. Se repet adugarea NaCl i evaporarea. Dup evaporare, masa de snge se adun la mijlocul lamei i se acoper cu o lamel. Se pune n dou puncte opuse, la marginea lamelei, cte o pictur de acid acetic glacial. Se nclzete foarte ncet, fr a se ajunge la o evaporare complet. Se observ apoi lama la microscop i se constat prezena a numeroase cristale brune, romboidale, izolate, ncruciate cte dou sau dispuse n stea. Rezulate i discuii: cristalele se vor privi la microscop i se vor desena. Cristalele nu se formeaz n prezena grsimii, ruginei, spunului sau dac pata de snge este foarte veche.

68

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

APARATUL CIRCULATOR
Lucrarea nr. 34 Automatismul cardiac. Legturile lui Stanius
Inima denervat sau scoas din organism i inut ntr-o soluie adecvat continu s se contracte ritmic datorit automatismului su imprimat de celulele P (pace-maker) ale esutului nodal. Geneza impulsurilor automate care provin de aici are la baz caracteristicile potenialului membranar al acestor celule. n primul rnd, potenialul de repaus al celulelor esutului nodal este mai sczut dect cel al neuronilor i muchilor scheletici (-50 pn la -60 mV, fa de -90 mV la neuroni). Pe de alt parte, membranele lor manifest permeabilitate mrit pentru Na+. Din acest motiv, celulele sistemului nodal nu au capacitatea de a-i menine un potenial de repaus constant, influxul de Na+ determinnd o depolarizare lent i continu pe parcursul diastolei. n momentul cnd aceast depolarizare diastolic atinge pragul de excitaie se declaneaz deschiderea canalelor ionice voltaj-dependente i se produce potenialul de aciune (PA) care se propag n musculatura atrial i apoi n cea ventricular, determinnd sistolele respective. Celulele esutului nodal sunt grupate, la broasc, n trei formaiuni neuro-musculare: ganglionul Remack (1) situat n peretele sinusului venos, ganglionul Ludwig (2) din peretele interatrial i ganglionul Bidder (3) situat la limita dintre atrii i ventricul. Frecvena cea mai mare de descrcare (panta de depolarizare lent cea mai scurt) o au celulele miocardice embrionare din ganglionul Remack. Din acest motiv, n mod normal ritmul cardiac se afl sub controlul su. Acest lucru se va demonstra prin realizarea primei ligaturi a lui Stanius. Cea de-a dou ligatur va scoate ventricolul de sub influena frenatoare a ganglionului Ludwig, care joac un rol moderator asupra forei i frecvenei contraciilor inimii. Pe inima la care s-a realizat o singur ligatur (cea de-a treia) se pot evidenia dou ritmuri: ritmul sinusal, despre care am vorbit i un ritm propriu ventricular, mai lent dect primul, determinat de activitatea stimulatoare spontan a ganglionului Bidder.

Principiul lucrrii: izolarea prin ligaturare a diferitelor caviti ale inimii determin ritmuri de contracie care demonstreaz rolul celor trei ganglioni. Aceste experiene sunt cunoscute sub numele de ligaturile lui Stanius. Materiale necesare: o broasc mare, plut, instrumentar de disecie, ace cu gmlie, a, suport reglabil cu excentric Pachon, serfin cardiac (dispozitiv din srm pentru prinderea inimii), peni tip Engelmann i kimograf. Desfurarea lucrrii: broasca paralizat se fixeaz pe plut cu partea ventral n sus. Se pregtesc cele dou fire de a pentru ligaturi. Prindem cu pensa dreapt 69

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

(cu cioc) tegumentul, la 1,0-1,5 cm sub stern i cu foarfeca mare facem o incizie care se continu n form de V, spre baza membrelor superioare i mai departe, pn n treimea anterioar a arcului mandibular. Fragmentul de tegument astfel delimitat se ndeprteaz. Se prinde cu aceeai pens vrful sternului i se ridic uor, dup care se face o mic incizie imediat sub el, cu vrful foafecei ndreptat oblic n sus, pentru a nu leza inima i pentru a nu seciona vena abdominal. Prin butoniera astfel realizat se introduce un bra al foarfecei i se continu incizarea peretelui muscular, oblic spre dreapta i spre stnga, dup care urmeaz secionarea claviculelor (nu i a arterelor branhiale). Platoul osteomuscular ndeprteaz i pericardul, cu o forfecu fin. Urmeaz realizarea ligaturilor i nregistrarea efectelor. Pentru aceasta se prinde vrful inimii cu serfina, se ridic uor, secionm frenul (esutul care leag inima de peretele dorsal al corpului) i dm inima peste cap. Ea se va menine n aceast poziie prin greutatea peniei. Acum este momentul s observm i s stabilim locurile de aplicare a ligaturilor: - linia alb (limita dintre sinusul venos i atrii) - anul de demarcaie dintre atrii i ventricul. Firele de a se trec pe sub inim, n zonele stabilite anterior. Pe fiecare se realizeaz cte un la lejer care, la momentul oportun, va fi strns. Pregtim penia pentru nscriere i montm pluta pe care este fixat broasca la suportul cu excentric Pachon ataat suportului universal. Se ataeaz serfina la peni i se corecteaz poziia plutei, astfel nct inima s ajung n poziie vertical i penia, n momentul relaxrii acesteia, s fie n poziie orizontal. Acionnd urubul micrometric al suportului universal, aducem vrful nscriitor pe hrtie i, dac e cazul, i corectm poziia pe vertical. Pornim nscrierea la vitez medie (2-4 mm/s). Dup cteva contracii se oprete nscrierea, se ndeprteaz penia i se strnge ferm laul de pe linia alb. Am realizat astfel prima ligatur. Se va nregistra apoi oprirea inimii i eventual contraciile sinusului venos. Dac acestea sunt prea slabe pentru a fi nregistrate, numrai-le n unitatea de timp i notai frecvena. Procedm n acelai mod pentru realizarea celei de-a doua ligaturi pe anul atrio-ventricular. astfel detaat se nltur. Se

70

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

A treia ligatur, care este de fapt a doua fr prima, se realizeaz n mod obinuit pe o nou inim. Dac reuim s tiem cu foarfeca mic aa (sau nodul ei) de pe linia alb, nu mai este nevoie s sacrificm o nou broasc. Rezultate i discuii: - Ataai lucrrii nregistrrile obinute. - Pe baza analizei graficelor sau a numrrii frecvenei de contracie, completai tabelul: Frecvena de contracie (contr./min) Momentul 1. iniial 2. dup lig. I 3. dup lig. a II-a 4. dup lig. a III-a Frecvena se poate calcula dup formula: F = 60/i, unde F = frecvena; i = intervalul n secunde dintre dou contracii succesive; 60 = secundele dintr-un minut. - Notai concluziile care reies cu privire la rolul ganglionilor: - Remack: - Ludwig: - Bidder: sinus atrii ventric ul observa ii

Lucrarea nr. 35 Msurarea presiunii arteriale la om


Principiul lucrrii: La om, msurarea presiunii arteriale se realizeaz prin metode nesngernde, bazate pe principiul comprimrii unei artere mari cu ajutorul unei manete pneumatice, n care se realizeaz o presiune msurabil cu

71

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

un manometru. Tensiunea pereilor arteriali este indicat de presiunea de comprimare capabil s ntrerup circulaia sngelui prin arter. Controlul medical al presiunii arteriale ofer informaii despre starea fiziologic a aparatului circulator. Se msoar doi indici: presiunea maxim (sistolic = Pmax) i presiunea minim (diastolic = Pmin). n condiii normale, n raport cu vrsta, la adulii ntre 20 i 40 de ani, presiunea sistolic este cuprins n intervalul 105-140 mm Hg (n general, se aplic regula dup care valoarea ei trebuie s fie egal cu 100 plus vrsta). Aceast regul nu se aplic ns persoanelor trecute de 60 de ani. Domeniul de normalitate pentru presiunea minim se afl ntre 70 i 80 mm Hg (n general, jumtate din Pmax plus 10 mm Hg). Plecnd de la aceti doi parametri de baz, se pot calcula i alii, legai de presiunea arterial: - presiunea diferenial: Pd = Pmax Pmin - presiunea medie: Pmed = (Pmax + 2Pmin) / 3 - raportul Pmax/Pmin. Un raport Pmax/Pmin mai mic de 1,5 se constat la persoanele cu insuficien cardiac, iar unul mai mare, la persoanele emotive, ntruct nelinitile i emoiile mresc presiunea arterial. Msurarea se face dup o perioad de adaptare a subiectului i se repet de 2-3 ori, deoarece la prima determinare se obine, de regul, o valoare mai mare. n principal se folosesc dou metode de msurare: metoda palpatorie (RivaRocci) i metoda ascultatorie (Korotkov). Materiale necesare: tensiometru (T), stetoscop (S). Tensiometrul se compune din urmtoarele pri: - o manet pneumatic de cauciuc, nvelit n pnz neextensibil, prevzut cu accesoriile de fixare; - o par de cauciuc pus n legtur cu maneta cu ajutorul creia se comprim aerul din manet; - un manometru (aneroid sau cu mercur) pus n legtur cu maneta; - un urub anexat perei de cauciuc, cu ajutorul cruia se face decomprimarea. Metoda palpatorie. Maneta se aplic pe bra, deasupra cotului. Cu para de cauciuc, al crei urub este nchis, se comprim aer n manet, n timp ce se palpeaz artera radial, pn cnd pulsul devine imperceptibil. Se decomprim cu atenie, prin slbirea urubului, i se noteaz presiunea pe care o indic manometrul n momentul cnd se simte prima pulsaie. Aceast presiune este cu 72

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

puin inferioar presiunii sistolice din arter. Principalul dezavantaj al acestei metode este acela c nu permite determinarea presiunii minime. Metoda ascultatorie. n condiiile comprimrii arterelor, se produc turbulene n circulaia sngelui i, n consecin, vibraii ale pereilor arteriali, traduse stetoscopic prin zgomote, pe a cror percepere se bazeaz aceast metod.

Fig. 30. Msurarea presiunii arteriale

Se procedeaz ca i la metoda palpatorie, cu meniunea c pe suprafaa plicii cotului se aplic plnia unui stetoscop. Se mrete rapid presiunea, pn la dispariia pulsului. Decomprimnd progresiv, la scderea presiunii din manet cu puin sub presiunea sistolic, n stetoscop se aude un zgomot discret. Este momentul cnd presiunea arterial atinge valoare maxim. Se citete pe monometru valoarea. n continuare, zgomotele cresc n intensitate, transformnduse n sufluri tot mai puternice. n apropierea presiunii diastolice, zgomotele reapar, 73

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

pentru ca n curnd s dispar. Se noteaz valoarea presiunii n momentul ultimului zgomot auzit, aceasta fiind presiunea diastolic. Rezulate i discuii: - Se complecteaz cu valorile obinute urmtorul tabel: Valoarea (mm Hg)

Parametrul Pmax Pmin Pd Pmed Pmax/Pmin

74

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

METABOLISMUL
Prin arderea glucidelor, lipidelor i proteinelor n organism rezult ap, bioxid de carbon, uree (ultima din oxidarea proteinelor) i energie, care este ncorporat n substanele macroergice ATP i CP. Energia acestor compui servete pentru sinteza unor substane (proteine, acizi grai, enzime, hormoni), transportul prin membrane, contracia muscular, conducerea influxului nervos, etc. Cu toate c din utilizarea substanelor macroergice rezult, n afar de energie caloric, i energie mecanic, electric i chimic, n cele din urm i acestea se transform n cldur. De aceea, dac se determin cantitatea de cldur eliberat de un organism n 24 de ore, se obine o msur precis a energiei cheltuite de acesta (a intensitii metabolice). Aceast energie se poate msura direct cu ajutorul calorimetrului un spaiu nchis, cu perei dubli de cupru, ntre care circul printr-un sistem de tuburi, o cantitate determinat de ap (care absoarbe cldura produs de organism i n consecin temperatura ei crete). Avnd n vedere cantitatea de ap care circul i valoarea cu care crete temperatura ei, se poate calcula cldura eliberat de organism. O calorie reprezint cantitatea de cldur necesar pentru a ridica cu 1C temperatura unui gram de ap; 1 kilocalorie = 1000 calorii. Deoarece aceast metod este laborioas i dificil, a fost nlocuit n practic cu o metod indirect mai simpl calorimetria indirect. Pentru a determina rata metabolic pe aceast cale, se are n vedere c prin arderea glucidelor, lipidelor sau proteinelor rezult aproape aceeai cantitate de energie (cldur) dac sunt oxidate n organism sau dac sunt arse n afara organismului, n bomba calorimetric. De asemenea, pentru arderea complet a acestor substane se utilizeaz aceeai cantitate de oxigen, att in vivo ct i in vitro. n tabelul de mai jos sunt date coeficientul caloric al oxigenului, cldurile de ardere i oxigenul consumat cnd este ars cte 1 g din fiecare dintre principiile alimentare.

Principii alimentare glucide lipide proteine

Cldura de ardere (kcal/g) 4,1 9,3 5,4 in vitro 4,3 in vivo

O2 consumat (l/g) 0,75 2,03 0,93 0,93

Coef. caloric al O2 (kcal/l) 5,0 4,7 4,5 4,5

Pentru scopuri practice (n calorimetria indirect), se utilizeaz coeficientul caloric mediu al oxigenului, 4,825 kcal/l O2. Cunoscnd cantitatea de oxigen consumat ntr-o unitate de timp, se poate determina n mod indirect rata metabolic (producia de cldur).

75

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 36 Calcularea metabolismului bazal dup tabele


Principiul lucrrii: se raporteaz n procente valoarea metabolismului bazal obinut pe cale experimental, cu aparatul Krogh, la valoarea metabolismului bazal standard, obinut din tabele. Deviaiile de peste 10%, n sens pozitiv sau negativ, fa de M.B. standard, se consider de natur patologic. Materiale necesare: cntar pentru persoane, instrumentar pentru msurarea nlimii corporale, tabele (cu date medii statistice) pentru determinarea M.B. standard. Desfurarea lucrrii: se msoar nlimea i greutatea persoanei de experien. Pe baza valorilor obinute pentru greutate i nlime i a numrului care corespunde vrstei, se calculeaz din tabele (separate pentru cele dou sexe) valoarea M.B. standard, astfel: - fiecrei greuti corporale i corespunde, imediat lateral dreapta, o valoare X. - la intersecia dintre vrst i nlimea corpului se afl valoarea Y. M.B. standard = X + Y (kcal/24h). Exemple de calcul: O student are urmtoarele date: greutatea corporal 65 kg, vrsta 19 ani, nlimea 172 cm. Greutii i corespund 1277 kcal, iar la intersecia dintre nlime i vrst se afl valoarea 258 kcal. Deci, M.B. stand. = 1277 + 258 = 1535 kcal. Presupunem c valoarea M.B. obinut pe cale experimental este de 1600 kcal. 1535 kcal .. 100% 1600 kcal x = 104% Valoarea M.B. obinut experimental este mai mare dect a celui standard cu 4%, deviaie admis ca normal. Dac valoarea experimental este 1380 kcal, atunci: 1535 kcal.. 100% 1380 kcal.. x = 89% Deviaia este de 11% n minus, este deci nefireasc. 76

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Rezultate i discuii: - Dup modelul de mai sus, determinai n cazul Dvs. urmtorii parametri: - M.B. pe cale experimental . - M.B. standard dup tabele . - deviaia metabolismului fa de valoarea standard . - Explicai cauzele deviaiei, pozitive sau negative, ale M.B. experimental fa de cel standard. Presiunea vaporilor de ap n funcie de temperatur Temperatur a C 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 4,6 9,2 17,5 31,8 55,3 92,5 149 234 365 526 760 1 4,9 9,8 18,7 33,7 58,3 97,2 156 244 370 546 2 5,3 10,5 19,8 35,7 61,5 102 164 255 385 567 Presiunea H2O (mm Hg) 3 5,7 11,2 21,1 37,7 64,8 107 171 266 401 589 4 6,1 12,0 22,4 39,9 68,3 113 179 277 417 611 5 6,5 12,8 23,8 42,2 71,9 118 188 289 434 634 6 7,0 13,6 25,2 44,6 75,7 124 196 301 451 658 7 7,5 14,5 26,7 47,1 79,6 130 205 314 469 682 8 8,0 15,5 28,3 49,7 83,7 136 214 3,27 487 707 9 8,6 16,5 30,0 52,4 88,0 143 224 341 506 733

Suprafaa corpului la om (m2), n funcie de nlime i greutate nlimea (cm) 200 195 190 185 180 1,56 1,53 1,49 1,63 1,60 1,57 1,73 1,70 1,67 1,64 25 30 35 Greutatea (kg) 40 45 50 55 1,84 1,80 1,77 1,74 1,71 60 1,91 1,87 1,84 1,80 1,77 65 1,97 1,93 1,90 1,86 1,83 77

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 - continuare nlimea (cm) 200 195 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120

1,19 1,17 1,14 1,12 1,09 1,06 1,03 1,00 0,97 0,95 0,93 0,91

1,28 1,26 1,23 1,21 1,18 1,15 1,12 1,09 1,06 1,04 1,01 0,98

1,36 1,34 1,31 1,29 1,26 1,23 1,20 1,17 1,14 1,11 1,08 1,04

1,46 1,43 1,40 1,37 1,33 1,30 1,27 1,24 1,20 1,17 1,14 1,10

1,53 1,50 1,47 1,44 1,40 1,36 1,33 1,30 1,26 1,23 1,20 1,16

1,61 1,57 1,54 1,50 1,46 1,42 1,39 1,36 1,32 1,29 1,26 1,22

1,67 1,63 1,60 1,56 1,52 1,48 1,45 1,42 1,38 1,35 1,31 1,27

1,73 1,69 1,66 1,62 1,58 1,54 1,51 1,47 1,43 1,40 1,36

1,79 1,75 1,72 1,68 1,64 1,60 1,56 1,52 1,48

Greutatea (kg) 70 2,03 1,99 1,96 1,92 1,89 1,85 1,81 1,78 1,73 1,69 1,65 1,61 1,57 75 2,09 2,05 2,02 1,98 1,95 1,91 1,86 1,83 1,78 1,74 1,70 1,66 80 2,15 2,11 2,08 2,04 2,00 1,96 1,91 1,88 1,83 1,79 1,75 1,71 85 2,21 1,17 2,13 2,09 2,05 2,01 1,96 1,93 1,88 1,84 1,80 90 2,26 2,22 2,18 2,14 2,10 2,06 2,01 1,98 1,93 1,89 95 2,31 2,27 2,22 2,19 2,15 2,11 2,06 2,03 1,98 100 2,36 2,32 2,28 2,24 2,20 2,16 2,11 2,07 105 2,41 2,37 2,33 2,29 2,25 2,21

78

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Metabolismul bazal la om (kcal/m2/h) BRBAI vrsta 6 7 8 8,5 9 9,5 10 10,5 11 12 13-15 16 16,5 17 17,5 18 18,5 19 19,5 20-21 22-23 24-27 28-29 30-34 35-39 40-44 45-49 50-54 55-59 M.B. 53,00 52,45 51,78 51,20 50,54 49,42 48,50 47,71 47,18 46,75 46,35 45,72 45,30 44,80 44,03 43,25 42,70 42,32 42,00 41,43 40,82 40,24 39,81 39,34 38,68 38,00 37,37 36,73 36,10 vrsta 6 6,5 7 7,5 8 8,5 9-10 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14 14,5 15 15,5 16 16,5 17 17,5 18-19 20-24 25-44 45-49 50-54 55-59 60-64 65-69 FEMEI M.B. 50,62 50,23 49,12 47,84 47,00 46,50 45,90 45,26 44,80 44,28 43,58 42,90 42,10 41,45 40,74 40,10 39,40 38,85 38,30 37,82 37,40 36,74 36,18 35,70 34,94 33,96 33,18 32,61 32,30 79

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

60-64 65-69

35,48 34,48

Lucrarea nr. 37 Calcularea deviaiei metabolismului bazal up formula lui Ridd


Principiul lucrrii: se determin tensiunea arterial, pulsul arterial i se introduc n formula lui Ridd, pe baza creia se calculeaz deviaia de la normal a metabolismului bazal. Materiale necesare: tensiometru, stetoscop i cronometru. Desfurarea lucrrii: persoana de experien respect condiiile necesare pentru determinarea metabolismului bazal. Experimentatorul msoar de 3 ori, la intervale de 1-2 min, tensiunea arterial i pulsul subiectului. Rezultatele obinute se introduc n formula lui Ridd: D% = 0,75 x [Fp + (Ps Pd) x 0,74)] - 72, unde: D% = deviaia M.B. fa de M.B. standard; Fp = pulsul/min; Ps = presiunea sistolic; Pd = presiunea diastolic. Presupunem c valoarea pulsului este 76, presiunea sistolic de 120 i cea diastolic de 80 mm Hg. D% = 0,75 x [76 + (120 80) x 0,74] - 72 = 7,2 Deviaia M.B. fa de standard se ncadreaz, n acest caz, n limitele normale. Deviaia M.B. se poate determina i dup nomograme speciale. Valoarea frecvenei pulsului se unete cu valoarea rezultat din diferena dintre presiunea

80

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

sistolic i cea diastolic. Punctul de intersecie cu linia mijlocie indic mrimea deviaiei M.B. de la normal, n procente.

Lucrarea nr. 38 Determinarea ratei metabolice la obolan


Principiul lucrrii: animalul este introdus ntr-un sistem nchis (aparat pentru determinarea consumului de oxigen) din care bioxidul de carbon este absorbit continuu cu ajutorul carbonatului de calciu. Presiunea sistemului se menine constant, astfel c orice schimbare de volum se datorete consumrii oxigenului de ctre animal. Modificarea volumului de gaz din aparat se determin cu ajutorul unei seringi gradate. Rata metabolic se calculeaz dup principiul utilizat la om. Materiale deoxigen. Desfurarea lucrrii: n timp ce se pregtete aparatul pentru lucru, se ine deschis clema g de pe tubul vertical. n timpul funcionrii aparatului, lichidul manometric se menine la acelai nivel prin mpingerea uoar a pistonului seringii. Se cntrete obolanul cu precizie i se noteaz greutatea .. g. Se ridic capacul i se unge cu vaselin gura exicatorului (pentru a asugura ermetizarea celor dou jumti). Se pune carbonat de calciu proaspt pe fundul exicatorului. Se introduce obolanul i se acoper cu capacul. Se testeaz etaneitatea sistemului, astfel: se nchide clema de pe tubul vertical (g) i se trage cu atenie pistonul seringii. Lichidul manometrului se mic spre exicator. Dac sistemul nu este etan, lichidul revine la poziia iniial. Pentru a remedia defectul, se aplic vaselin n jurul dopului de cauciuc i n toate locurile unde este o legtur ntre un tub de cauciuc i sticl. Se deschide clema tubului vertical g i se pune un cartona cu marginea superioar la nivelul ambelor meniscuri ale lichidului manometric. Se ateapt 4-5 min, pentru a permite egalizarea temperaturii din aparat cu cea din mediul exterior. Se nchide clema i se nregistreaz momentul n ore, min i s .. . Exact dup fiecare min, se nregistreaz gradaia la care se afl pistonul seringii, care corespunde volumului de oxigen consumat: dup un min . ml 81 necesare: obolan, aparat pentru determinarea consumului

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

dup 2 min ... ml dup 3 min ... ml dup 4 min ... ml dup 5 min ... ml dup 6 min ... ml dup 10 min . ml Se continu observaiile pn seringa se golete de aer. Se deschide clema tubului vertical i se ia capacul, pentru a permite mprosptarea aerului din exicator. Se repet experiena de 3 ori i se determin media volumului de oxigen consumat de obolan pe min, or i n 24 de ore. Suprafaa corporal la obolan, n funcie de greutate Greutatea (g) 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 82 0 0,0131 0,0146 0,0161 0,0174 0,0186 0,0199 0,0210 0,0222 0,0233 0,0243 0,0253 0,0263 0,0273 0,0283 0,0293 0,0301 0,0310 0,0319 0,0328 2 0,0134 0,0149 0,0164 0,0176 0,0189 0,0201 0,0213 0,0224 0,0235 0,0245 0,0255 0,0265 0,0275 0,0285 0,0294 0,0303 0,0312 0,0321 0,0329 Suprafaa (m2) 4 0,0137 0,0152 0,0167 0,0179 0,0192 0,0204 0,0215 0,0227 0,0237 0,0247 0,0257 0,0267 0,0277 0,0287 0,0295 0,0304 0,0313 0,0322 0,0331 6 0,0140 0,0155 0,0169 0,0181 0,0194 0,0206 0,0218 0,0229 0,0239 0,0249 0,0259 0,0269 0,0279 0,0289 0,0297 0,0306 0,0315 0,0324 0,0333 8 0,0143 0,0158 0,0171 0,0184 0,0196 0,0208 0,0220 0,0231 0,0241 0,0251 0,0261 0,0271 0,0281 0,0291 0,0299 0,0308 0,0317 0,0326 0,0326

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

240 250 260 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 410 420

0,0336 0,0345 0,0353 0,0369 0,0377 0,0384 0,0392 0,0399 0,0407 0,0414 0,0421 0,0428 0,0435 0,0442 0,0449 0,0456 0,0463 0,0470

0,0338 0,0346 0,0354 0,0370 0,0378 0,0386 0,0393 0,0401 0,0408 0,0416 0,0423 0,0430 0,0437 0,0444 0,0451 0,0458 0,0465 0,0472

0,0339 0,0348 0,0356 0,0372 0,0380 0,0387 0,0395 0,0402 0,0410 0,0417 0,0424 0,0431 0,0438 0,0445 0,0452 0,0459 0,0466 0,0473

0,0341 0,0349 0,0357 0,0373 0,0381 0,0389 0,0396 0,0404 0,0411 0,0419 0,0426 0,0433 0,0440 0,0447 0,0454 0,0461 0,0468 0,0475

0,0334 0,0343 0,0351 0,0359 0,0375 0,0383 0,0390 0,0405 0,0413 0,0420 0,0427 0,0434 0,0441 0,0448 0,0455 0,0462 0,0469 0,0475

Lucrarea nr. 39 Determinarea ratei metabolice la obolanii crora li s-a indus pe cale experimental hipertiroidism sau hipotiroidism
Principiul lucrrii: se determin rata metabolic a trei loturi de obolani: martor, lot cu hipertiroidism i lot cu hipotiroidism, i se compar rezultatele. Materiale necesare: 9 obolani tineri, de aceeai vrst, sex i greutate (150-200 g), aparat pentru determinarea consumului de oxigen, triiodotironin sau tiroxin, sau chiar esut tiroidian uscat, soluie 0,5% tiouracil sau 0,02% propiltiouracil sau 1,0% perclorat de potasiu.

83

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Desfurarea lucrrii: se constituie 3 loturi de obolani: martor M, la care s-a provocat hipertiroidism HT i la care s-a provocat hipotiroidism hT, fiecare din 3 indivizi. Tratamentul obolanilor dureaz dou sptmni. n prima zi i apoi sptmnal animalele se cntresc i se nregistreaz greutatea corporal: Ziua Lot M HT hT La lotul HT se adaug zilnic n hran 1,0% tiroid uscat, sau se injecteaz intraperitoneal, o dat la 3 zile, 15,0 mg triiodotironin sau 25,0 g L-tiroxin. n hrana lotului hT se adug zilnic 0,5% tiouracil sau 0,02% propiltiouracil sau 1,0% perclorat de potasiu. La ncheierea celor dou sptmni de tratament, se determin comsumul de oxigen (QO2) la obolanii din cele 3 loturi. Rezultate i discuii: - Trecei rezultatele n urmtorul tabel: Parametri Consumul de oxigen (ml/m2/24 h) Rata metabolic (kcal/m2/24 h) Indivizi M 1 2 3 Media 1 2 3 Media Loturi HT hT 1 8 Greutatea (g) 15

84

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Lucrarea nr. 40 Alctuirea raiilor alimentare


Principiul lucrrii: la populaiile adulte, raia alimentar se alctuiete avnd n vedere n special felul activitii prestate. n acelai timp se ine seama de vrst, sex, greutate corporal i condiii geografice. Materiale necesare: tabel cu compoziia chimic i puterea caloric a produselor alimentare. Compoziia i puterea caloric a produselor alimentare (n 100 g produs) Denumirea prod. alim. Fin de cartofi Fin de gru cl.I Fin de gru cl.II Gri Arpaca Orez Macaroane, fidea Mazre Fasole Porumb grune Fulgi de porumb Pine din fin de gru cl.I Pine din fin de gru cl.II Pine de secar Carne de berbec Carne de vit Carne de iepure Carne de porc 4,83 16,15 19,00 20,43 22,33 0,84 15,30 9,45 7,20 9,00 40,23 192,6 208,5 165,8 150,7 175,3 85 7,14 0,84 46,56 228,0 Proteine 0,70 9,35 9,78 9,52 6,30 6,46 9,35 15,68 16,24 7,00 12,67 6,89 Lipide 1,02 1,30 0,74 1,10 0,93 0,84 2,21 1,93 4,23 1,21 0,65 Glucide 80,47 69,95 68,41 70,37 68,43 72,77 71,23 50,85 50,57 63,83 69,41 47,71 Kcal 332,8 334,6 332,7 334,4 316,6 333,5 338,2 293,3 291,8 329,7 347,8 229,9

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Creier Limb de vac Ficat de vac unc Carne de curcan Carne de gin Carne de pui Calcan Crap tiuc Icre de nisetru Lapte acru Fric Smntn sup. Smntn cl.I Brnz Unt Ulei vegetal Ou Glbenu de ou Miere de albine Zahr Cacao Ciocolat Bomboane cu lapte Marmelad Halva Dulcea de mere Dulcea de fragi Dulcea de zmeur Varz proaspt Varz fermentat Conopid Ceap verde 86

8,55 15,20 18,05 16,15 23,28 19,00 20,43 14,06 15,20 17,86 25,37 3,36 2,88 1,92 2,88 15,36 12,00 15,36 0,34 20,06 5,10 2,64 14,03 0,34 0,34 0,34 1,44 0,80 1,76 1,04

8,55 15,75 34,50 31,50 7,65 4,50 2,25 0,81 3,24 0,63 14,22 3,33 19,00 34,20 28,50 17,10 94,05 94,81 11,40 27,55 18,79 34,13 8,46 29,39 -

2,94 4,31 3,43 2,45 2,94 0,49 77,24 77,24 98,90 38,19 51,30 74,77 73,25 43,42 65,93 73,49 69,64 4,51 1,79 4,42 3,74

114,6 208,8 123,7 395,2 166,6 119,8 104,7 65,2 92,5 79,1 236,3 62,4 202,6 336,0 286,9 234,1 874,7 881,7 157,2 321,2 318,1 405,5 413,6 548,6 396,1 300,3 508,9 217,7 298,6 286,9 24,4 10,6 25,3 19,0

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Ceap Revent Salat Spanac Mcri Castravei Roii Past de tomate 30% Suc de tomate Dovleci Fasole psti Gulii Cartofi Morcovi Pstrnac Ptrunjel Ridichi Sfecl Caise Portocale Struguri Viine Pere Cpuni Lmi Zmeur Mandarine Prune Coacze roii Coacze negre Prune uscate Mere Mere uscate Suc de caise

2,00 0,40 1,28 2,96 2,40 0,80 0,80 4,08 0,85 0,80 2,016 0,64 1,40 1,04 1,12 1,44 0,96 1,20 0,51 0,77 0,60 0,85 0,34 0,85 0,51 0,85 0,77 0,60 0,85 0,85 3,40 0,43 2,38 0,43

8,93 2,55 3,06 2,89 3,06 2,04 3,23 17,68 3,06 6,55 5,44 10,71 19,00 7,40 9,27 9,10 4,17 8,84 10,98 8,19 14,58 12,87 11,16 8,82 9,27 9,18 9,00 12,60 10,08 12,06 62,10 10,08 63,36 14,35

44,8 12,1 17,8 24,0 22,4 11,6 16,5 89,2 16,0 30,1 31,5 46,2 83,6 34,6 42,6 43,2 21,0 41,2 47,1 36,7 62,2 56,3 47,2 39,6 40,1 41,1 40,1 54,1 44,8 52,9 268,6 43,1 269,5 60,8 87

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Suc de portocale

0,60

13,78

59,0

Desfurarea lucrrii: Pe lng unele coli funcioneaz internate. Presupunem c suntei director de scoal i n sfera preocuprilor dvs. intr i ndrumarea personalului de administraie a internatului. Propunei o raie alimentar echivalent cu 3500 kcal, innd seama de toate condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc i care sunt discutate n continuare. Raportai aceast raie la 30 de persoane. n raport cu energia cheltuit zilnic, activitile au fost grupate n 4 categorii: Nevoile energetice zilnice ale organismului, n funcie de munca depus Cate g. I Persoane etc. II Persoane care lucreaz n producia mecanizat: strungari, III IV frezori, textiliti, conductori de 4000 4500-5000 autoturisme, etc. Persoane care fac munc fizic lucrnd pe maini: tractoriti, escavatori, etc. Persoane care fac munc fizic grea: hamali, cei care sap pmntul, etc. 3500 care desfoar munc intelectual: profesori, medici, ingineri, cercettori. Funcionari, Felul muncii Nevoile energ. (kcal) 3000-3200

La alctuirea raiilor alimentare se au n vedere urmtoarele: - puterea caloric a raiei alimentare trebuie s corespund cheltuielilor zilnice de energie; - proporia de proteine, lipide i glucide variaz n funcie de felul muncii prestate, dup cum reiese din tabelul:

88

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Necesarul de proteine, lipide i glucide ntr-o raie alimentar echilibrat Coninutul n hran (g/24 h) al Categoria I II III IV proteinelor 109 122 141 163 lipidelor 106 116 134 153 glucidelor 433 491 558 631

- absorbia glucidelor, lipidelor i proteinelor la nivelul tubului digestiv nu este total (proteinele, de exemplu, se absorb n proporie de 92%). De aceea coeficientul caloric se consider c este: 4 kcal/g pentru proteine i glucide i 9 kcal/g pentru lipide. - organismul are nevoie de proteine cu valoare biologic complet (proteine care conin toi aminoacizii eseniali, de ex. cazeina i lactalbumina din lapte, ovalbumina i ovovitelina din ou, albumina i miozina din carne). Proteinele din cereale, mazre, fasole, nu conin toi aminoacizii eseniali. Ele sunt considerate proteine cu valoare biologic incomplet. - prin amestecarea proteinelor cu valoare biologic complet cu proteinele cu valoare biologic incomplet, se ridic valoarea biologic a proteinelor incomplete cu mult peste media aritmetic a componentelor. Astfel, amestecul de 100 g carne i 200 g fin alb are o valoare biologic mai mare dect 300 g carne. - cu ct este mai bogat i mai variat un regim alimentar, cu att asigur mai bine necesarul zilnic de substane hrnitoare. - un comsum exagerat de grsimi, de proteine sau de glucide duce la perturbri metabolice. Astfel, excesul de lipide n hran duce la acumularea de corpi cetonici n organism, iar cel de proteine, la acumularea de amoniac i uree. Excesul de alimente bogate n glucide, pe lng c ncarc exagerat tubul digestiv, poate induce diabetul zaharat. Un exemplu de raie alimentar alctuit dup aceste reguli este prezentat n tabelul:

89

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Compoziia raiei alimentare pentru o persoan care desfoar munc intelectual Produsul alimentar cantit (g) 200 200 200 100 200 100 50 300 100 50 50 1550 pine macaroane carne de vit brnz ou zahr dulcea de mere cartofi morcovi ptrunjel ulei alimente 4,20 1,04 0,72 -47,40 Total: 115,97 109,18 442,46 3278,4 57,00 7,40 4,55 44 250,8 34,6 21,6 0,8 13,78 18,70 38,00 15,36 24,00 32,96 1,30 1,68 18,90 17,10 22,80 108,8 95,42 142,46 2,94 0,98 98,80 0,17 459,8 676,4 331,6 234,1 314,4 405,5 denumirea Coninutul n proteine, lipide i glucide (g) P L G Puterea caloric (kcal)

Rezultate i discuii: - Prezentai, ntr-un tabel asemntor celui mai sus, raia limentar alctuit de dv. Produsul alimentar cantit (g) denumirea Coninutul n proteine, lipide i Puterea glucide (g) P L G caloric (kcal)

90

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Total: alimente

91

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

92

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Bibliografie
Ardelean G., Roioru C., - Integrarea i coordonarea organismului animal, Editura Universitii Baia-Mare, 1996. Andronescu A., - Anatomia funcional a sistemului nervos central, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1979. Baciu I., - Fiziologie, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1977. Balint P., - Az elettan tanknyve, Budapest, 1965. Benetato C., - Elemente de fiziologie normal i patologic, Editura medical, Bucureti, 1962 Dorofteiu M., 1980. Lucrri practice de Fiziologie. Litografia I.M.F. Cluj-Napoca (uz intern) Hefco V., 1997. Fiziologie experimental. Ed. Univ. Al. I. Cuza Iai (uz intern) Hulic I., - Sistemul nervos vegetativ, Editura medical, Bucureti, 1975. Hulic I., - Fiziologie uman, Editura medical, Bucureti, 1989. Mrgineanu D.G., Isac M. I., Tarba C., - Biofizic, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1980. Mirza A., 1973. Lucrri practice de Fiziologie. Inst. Medicin, Timioara, Lito I.M.F. Picos C. A., Nstsescu Gh., 1988. Lucrri practice de fiziologie animal. Univ. Bucureti (uz intern), Bucureti Pintea V., Cotru M., Manta D.A., Slgeanu G., - Fiziologie, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1983. Pop M., - Fiziologie general, Universitatea din Oradea, 1993. Pop M., arc A., - Biologie uman, Editura Universitii din Oradea, 1997. Pora A.E.,- Fiziologia sistemului nervos i activiti nervoase superioare, Bucureti, 1956. Pora E. A., Roca D. I., Frcanu V., 1955. Tehnic de lucrri practice de fiziologie animal. Univ. Cluj (uz intern) Pora A.E., Roca I.D., - Curs de fiziologia animal i omului, Editura de stat didactic i pedagogic, Bucureti, 1961. Roca I.D., - Fiziologie animal, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1977. Roioru C., Sevcencu Cr., Gherghel P., 1995. Lucrri practice de Fiziologie Animal pentru uzul studenilor. Ed. Univ. Babe-Bolyai, Cluj Napoca Ruch T., Fulton J., - Fiziologie medical i biofizic, Editura medical, Bucureti, 1963. 93

Lucrri practice de Fiziologie animal i uman

Strungaru Gh., Pop M., Hefco V., - Fiziologie animal, Editura didactic i pedagogic, Bucureti, 1983. Szentagothai J., Rethelyi M., - Funkcionalis anatomia, Medicina, Budapest, 1989. erban M., Cotariu D., - Biochimia contraciei musculare, Editura Academiei R.S.R., Bucureti, 1970. Theodorescu-Exarcu I., Badiu G., - Fiziologie, Editura medical, Bucureti, 1993. Voiculescu I.C., Petricu I.C., - Anatomia i fiziologia omului, Editura medical, Bucureti, 1976. Zilov G. N., Magnitji A. N., Makaricev A. I., Semenova G.T., Saravatova O.F., Scepkin N.G., 1954. Lucrri practice de Fiziologie. Ed. Stat pentru literatur tiinific, Bucureti

94