1/21/23

Analize instrumentale
moderne

Catedra Chimie Farmaceutică și toxicologică.

2023

Analize instrumentale moderne

} ANALÍZĂ (‹ fr., lat. m.) s. f. 1. Descompunere reală sau mintală a

unui obiect, fenomen sau a relațiilor dintre obiecte, fenomene etc.,
în părțile lor componente, în scopul cunoașterii; examinare
amănunțită, parte cu parte, a unei probleme, a unui obiect de
studiu.
} ♦ A. psihologică A. funcțională A. sistemică A. de conținut. A.
critică A. conformațională. A. biochimică A. biologică .

} ANALIZĂ CHIMICĂ = procedeu pentru stabilirea compoziției

chimice (calitative sau cantitative) a substanțelor cu ajutorul unor
reacții chimice specifice sau pe baza proprietăților fizico-chimice
specifice (anliiza instrumentală).

ETAPELE ANALIZEI

} prelevarea probei;
} efectuarea analizei;
} interpretarea rezultatelor;
} consemnarea acestora.
Analiza Instrumentală (automată) se realizează cu analizoare
care indică parametrii analitici importanţi pentru controlul
riguros al procesului tehnologic sau a produsului.
Semnal de intrare →analiza propriu-zisa → semnal de ieşire

1
 1/21/23

DEFINIREA ANALIZEI INSTRUMENTALE:

} Mărimea fízica care se corelează cu compoziţia probei
sau cu concentratia analitului, se numeste semnal
analitic.

} Metodele instrumentale de analiză se bazează pe

masurarea unei proprietăţi fizice a analitului:
conductivitate termică sau electrică, fluorescentă,
absorbtie sau emisia de radiatie, etc.

} Mărimea fízica măsurată reprezintă semnalul analitic

si se corelează cu concentratia analitului printr-o
functie de etalonare.

METODE INSTRUMENTALE ÎN CERCETAREA ȘI

CONTROLUL MEDICAMENTELOR
Metodele instrumentale de analiză sunt:
} metode spectroscopice,
} metode electroanalitice,
} metode radiochimice,
} metode termice

} Metode optice spectrale

} Metode optice nespectrale
} Metode electrochimice
} Metode cromatografice
} Metode termice
} Metode imunoenzimatice

Aparate și utilaje de lucru

} Spectrofotometru
} Cromatograful HPLC 1
} Polarimetru
} Balanța
2

3
4

2
 1/21/23

Componentele instrumentelor analitice:

} generatorul de semnal (specia de analizat) produce un
semnal care trebuie să reflecte natura si concentratia
analitului in proba. El poate fi un compus sau un ion
generat de un analit;
} sistemul de detectie (traducatorul) - transforma semnalul
generat de analit intr-un semnal masurabil;
} sistemul de prelucrare al semnalului are rolul de a modifica
semnalul produs în sistemul de detecţie pentru a deveni
accesibil observării sale cu ajutorul unui dispozitiv
indicador (prin amplificare, integrare, diferenţiere,
amortizare sau filtrare).

Modalităţi de operare a instrumentelor computerizate:

} masurătorile analitice computerizate implică interactii diferite între utilizator şi

instrument: off-line, on-line şi in-line;
} sistemul de lucru off-line presupune că datele sunt colectate de operator şi apoi
transformate în computer pentru prelucrare;
} metoda on-line presupune o comunicaţie directa între instrument şi computer
printr-o interfaţă electronică;
} metoda in-line elimină comunicaţia directă între operator şi instrument, aceasta
fiind mediata de computer.

Activități:
} Interpretarea rezultatelor cromatogramei
} Măsurarea unghiului de rotație și realizarea calculelor
} Identificarea și dozarea substanțelor prin metode
spectrofotometrice
} Interpretarea spectrelor IR
} Interpretarea spectrelor RMN
} Discutarea noțiunilor de medicament biologic, produs
biotehnologic și evidențierea metodelor instrumentale
utilizate în controlul farmaceutic.

3
 1/21/23

Metode de separare.
Metode cromatografice

10

Definiție:
Cromatografia este o metoda de separare și
analiză a substanţelor chimice dintr-un amestec, care
se bazează pe interacţiunea diferenţiată a substanțelor
analizate cu două faze cromatografice: faza mobiă și
faza staţionară.
Separarea cromatografică are loc datorită
distribuției inegale cauzate de afinitatea diferită a
componentelor amestecului față de cele doua faze sau
de capacitatea diferită de a difuza între aceste două
faze.

11

Clasificarea metodelor cromatografice

Exista o serie de criterii pe baza cărora se poate face o
clasificare a metodelor cromatografice:
mecanismul separării,
natura fazelor cromatografice,
configuraţia sistemului cromatografic, etc.

12

4
 1/21/23

Clasificarea metodelor cromatografice

În funcție de mecanismul separării:
Cromatografie de adsorbție
Cromatografie de repartiție
Cromatografie cu faze chimic legate
Cromatografie de schimb ionic
Cromatografie de excluziune
Cromatografie de afinitate

13

Clasificarea metodelor cromatografice

În funcţie de natura fazelor cromatografice
- Cromatografie de gaze
- Gaz-lichid (GLC)
- Gaz-solid (GSC)
- Cromatografie de lichide
- Lichid-lichid (LLC)
- Lichid-solid (LSC)
- Cromatografie cu fluide supercritice (SFC)

14

Clasificarea metodelor cromatografice

În funcţie de configuraţia sistemului cromatografic
Cromatografie pe coloană:
- Cromatografie pe coloane clasice (cu umplutură)
- Cromatografie pe coloane capilare
Cromatografie planară:
- Cromatografie în strat subţire
- Cromatografie pe hârtie

15

5
 1/21/23

Clasificarea metodelor cromatografice

În general, metodele de separare cromatografice se
împart în două categorii:
q în prima intră cele care se bazează pe interacţiunea
diferită a componenţilor cu faza staţionară (repartiţie,
adsorbţie, schimb ionic şi afinitate),
q iar în a doua cele care se bazează pe mărimea diferită
a componenţilor (excluziunea sterică).

16

Toate metodele cromatografice au următoarele

elemente comune:

} Faza staționară
} Faza mobilă
} Are loc separarea componenților din amestec
} Reactivii și materialele sunt de puritate cromatografică

17

CROMATOGRAFIA ÎN STRAT SUBȚIRE

Cromatografia pe strat subțire este o tehnica foarte
răspîndită datorită simplității ei și posibilității de analizare a
unor amestecuri complexe din punct de vedere calitativ si
cantitativ.
Aplicații practice:
analitică
üIdentificarea
üDozarea semicantitativă
üDozarea
üDeterminarea impurităîilor
tehnologică
üPurificarea substanței
üSepararea componenților

18

6
 1/21/23

Tehnica de lucru CSS:

I. Saturarea cu vaporii developantului a camerei de
cromatografiere (1)(15-20 de minute).
II. Aplicarea probei (soluției), sub forma de spot (3,4) sau bandă la
1-2 cm de marginea inferioară a plăcii cromatografice, pe o linie
imaginara numită linie de start (6). Probele pot fi aplicate
automat sau manual cu microcapilare, micropipete sau
microseringi. Placa cromatografica (2) este formată dintr-
o placa de sticla sau folie de aluminiu acoperita cu un
strat subțire de adsorbent (silicagel, silicagel chimic
modificat, alumina, celuloza microcristalina etc.).
III. Introducerea plăcii în camera cromatografică.
IV. Developarea. Nivelul eluentului se va situa sub nivelul
liniei de start. Eluentul migreaza de-a lungul placii
cromatografice datorita fortelor de capilaritate, purtand
cu viteze diferite componentii amestecului de analizat,
fapt care se concretizeaza in separarea lor. Nivelul pana la
care se ridica eluentul se numeste linie de front (5). Dupa
ce frontul eluentului parcurge o anumita distanță (≈8cm)
V. Uscarea plăcii cromatografice, la aer sau sub un flux de aer
cald
VI. Vizualizarea rezultatelor se realizează la lumina zilei, cu
lampa ultraviolet, la întuneric (pentru observarea fluorescenței)
sau prin pulverizare cu reactivi de culoare specifici

19

Aplicații practice:
üIdentificarea
üDozarea semicantitativă
üDozarea Linie
üPurificarea substanței de front
üSepararea componenților
h
developant

Rf standard= hstandard
h developant

Rf S. de analizat= hS. de analizat

h developant h s.de analizat. h
s.stand.

Dacă Rf standard = Rf S. de
analizat atunci, substanța Linie de
S. S. de analizat
analizată este identică standard start
celei standard

20

Aplicații practice:
üIdentificarea
üDozarea semicantitativă
üDozarea Linie
üPurificarea substanței de front
üSepararea componenților

Compararea vizuală a dimensiunilor

petelor și a intensității colorației sau a
f luorescenței se folosește pentru
evaluarea semicantitativă

Linie de
start

21

7
 1/21/23

Aplicații practice:
üIdentificarea
üDozarea semicantitativă
üDozarea Linie
üPurificarea substanței de front
üSepararea componenților

Dozarea substanțelor separate pe

cromatogramă se efectuează, după răzuirea
petelor respective și eluarea substanțelor de
pe absorbant cu un solvent potrivit, prin
metode titrimetrice, metode
spectrofotometrice sau alte metode fizico-
chimice

S. standard S. de analizat Linie de

start

22

Aplicații practice: Aplicații practice:

üIdentificarea üIdentificarea
üDozarea semicantitativă üDozarea semicantitativă
üDozarea üDozarea
üPurificarea substanței üPurificarea substanței
üSepararea componenților üSepararea componenților

Linie
de front

Im purități

Separarea cromatografică a unui amestec de

aminoacizi. Vizualizarea rezultatelor cu
ajutorul ninhidrinei (reacție pentru grupa
aminică alifatică primară) cu formarea
Digoxin Digoxin probă Linie de compușilor violeți, cu excepțoia prolinei-
de analizat
standard
start culoare galben portocaliu.

23

Analize instrumentale oderne

Întrebări

?
24