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+
RT
Ea
LnA LnK
Sustituyendo ln A = B.
RT
E
-
a
Ae = k
ln k = B -
E
RT
a
Esta ecuacin permite deducir que la velocidad de cualquier reaccin qumica ser
mayor al aumentar la temperatura de la reaccin y disminuir la energa de activacin.
Se sabe que por cada 10 de elevacin de temperatura la velocidad de reaccin se
duplica. Precisamente, los catalizadores disminuyen la energa de activacin y en
consecuencia aumentan considerablemente la velocidad de la reaccin
catalizada.
Llamamos k a la constante de velocidad de la reaccin espontnea, y k a la
catalizada:
ln k = B -
E
RT
y ln k' = B -
E
RT
a a
'
Restando mutuamente, tenemos
2.303 RT
' E - E
=
k
k'
log , bien o ,
RT
' E - E
=
k
k'
ln
a a a a
Esta relacin nos indica cuantas veces es ms rpida una reaccin catalizada de una
no catalizada.
Come se ha visto el papel de un catalizador consiste en reducir el valor de G al
facilitar el estado de transicin. Una enzima une a un amolcula de sustrato o en
algunos casos varios sustratos, en una regin de la enzima denominada sitio activo
como se muestra en la figura.
El sitio activo es un espacio de la enzima rodeado por cadenas laterales de
aminocidos, que facilitan la unin del sustrato, en donde intervienen las cadena
laterales de aminocidos.
Segn la hiptesis de la cerradura y la llave la enzima acomoda al sustrato de la
misma manera que lo hace la cerradura con su llave especfica.
Hay otra hiptesis del ajuste indicido, en el cual se distorsiona tanto la enzima
como el sustrato, esta distorsin se refiere a un cambio qumico tanto de la enzima
como del sustrato.
Un ejemplo real del ajuste indicido se muestra en la siguiente figura. En la cual la
Hexocinasa, muestra una forma en ausencia de la glucosa y otra forma en presencia
de la glucosa
A continuacin se muestra el sitio activo de la la quimotripsina y la accin de los
restos de a. cidos del sitio activo que intervienen en la reaccin de hidrlisis pptica.
Pero adems de distorsionar o acomodar simplemente los sustratos, en muchos
casos las cadenas laterales de los aminocidos cidos o bsicos, pueden adicionar o
eliminar protones como se ver a continuacin al hablar del efecto del pH en la accin
enzimtica.
Factores que afectan la velocidad de las reacciones enzimticas
Efecto del pH sobre la velocidad de reaccin
El pH tiene una influencia marcada sobre la velocidad de las reacciones enzimticas.
Caractersticamente, para cada enzima hay un valor de pH al cual la velocidad es
ptima y a cada lado del ptimo la velocidad es inferior. Esto se debe a que los sitios
activos de la enzima se componen a menudo de grupos ionizables que deben
encontrarse en la forma inica adecuada, con el fin de mantener la conformacin del
sitio activo, unir los sustratos o catalizar la reaccin. Adems, uno o ms de los
sustratos pueden contener grupos ionizables y slo una forma inica del sustrato
puede unirse a la enzima y experimentar la catlisis. La relacin pH actividad de la
enzima depende del comportamiento cidobsico de la enzima y del sustrato. La
disminucin de la actividad enzimtica podra deberse a la formacin de una forma
inica incorrecta del sustrato o de la enzima, o de ambos. El pH ptimo de la
enzima y el pH de su entorno celular no siempre es el mismo; de tal manera que, en
ocasiones, la regulacin intracelular de su actividad es el pH.
FIGURA 2.13
Velocidad frente al pH, un modelo monoprtico sencillo
Considerar un sistema en el que el sustrato es un cido dbil, HA, pero slo la forma
ionizada A
-
se une a la enzima. El verdadero sustrato es entonces A
-
. Para una
concentracin total fija de cido dbil, la proporcin que se encuentra en la forma
inica apropiada se calcula con la ecuacin de Henderson-Hasselbalch.
Cuando el pH es superior en una unidad al pKa 10/1 del total se encuentran como A
-
.
Cuando el pH = pKa + 2, 100/1 del total se encuentran como A
-
. Cuando el pH es una
unidad menor que el pKa 1/10
se encuentran como A
-
; as podemos esperar que la velocidad aumente a medida que
se incremente el pH, como se muestra en la figura 2.14 donde el pKa del sustrato se
supone que es 4. Se supone tambin que el sitio activo de la enzima contiene un
grupo bsico B que deber estar protonado, BH
+
, para unirse al sustrato A
-
. La
proporcin de concentracin total de enzima en la forma inica adecuada BH
+
disminuye al aumentar el pH, como se ilustra en la figura 2.14 donde el pKa del sitio
ac-tivo se supone es 7. La actividad mxima terica se dar a un pH en el que toda la
enzima se encuen-tra como BH
+
y todo el sustrato como A
-
. Sin embargo, los dos
valores de pKa se diferencian slo en tres unidades y, por lo tanto, la combinacin
mxima de BH
+
y A
-
se dar a un pH de 5.5 en el que el 97% del sustrato total y
enzima total estarn en la forma inica adecuada.
FIGURA 2.14
Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin
Muchas reacciones qumicas transcurren a una velocidad mayor si la temperatura
aumenta. Un aumento en la T comunica ms energa cintica a las molculas del
reactivo, dando ms colisiones eficaces por unidad de tiempo. Las reacciones
catalizadas enzimticamente se comportan anlogamente hasta cierto punto. Las
enzimas son molculas proteicas complejas; su actividad cataltica se debe a una
estructura terciaria altamente ordenada y exacta que da lugar a la formacin de sitios
estereoespecficos de unin del sustrato con el centro cataltico. La estructura terciaria
de una enzima se conserva por un gran nmero de enlaces dbiles no covalentes; por
lo tanto, una enzima es una estructura frgil y muy delicada. Si la enzima absorbe
demasiada energa, la estructura terciaria se rompe y la enzima se des-naturaliza y
pierde su actividad cataltica. As, al elevarse la temperatura, el aumento esperado en
velocidad debido al incremento de colisiones E+S es anulado por el aumento de la
velocidad de desnaturalizacin; por lo tanto, una representacin de actividad cataltica
frente a T generalmente muestra un pico que se conoce como temperatura ptima.
Las enzimas de peso molecular bajo compuestas de cadenas polipeptdicas sencillas
y que poseen puentes disulfuro son, generalmente, ms estables al calor que las de
peso molecular alto como las enzimas oligomricas.
FIGURA 2.15
La curva que presentan las reacciones catalizadas por enzimas se debe:
Al incremento habitual de la reaccin por aumento de la temperatura.
Desnaturalizacin de la enzima que se lleva a cabo entre 45 - 60 C.
Como se mencion anteriormente, la relacin entre la constante de velocidad k, y la
energa de activacin Ea viene dada por la ecuacin de Arrhenius
RT
Ea
Ae K
RT
Ea
Lne LnA LnK
+
b x m Y
A
T R
Ea
LogK
A Ln
RT
Ea
LnK
RT
Ea
LnA LnK
+
+
+
,
_
+
log
1
303 . 2
1
La forma integrada de la ecuacin de Arrhenius es:
1 2
1 2 a
1
2
T T
T T
R 303 . 2
E
k
k
log
O bien
Donde k1 y k2 son las constantes especficas de velocidad de reaccin a dos
temperaturas diferentes, t1 y t2, respectivamente.
El efecto de temperatura sobre la velocidad de reaccin se expresa
frecuentemente en trminos de un coeficiente de temperatura, Q10, que es el factor
en que aumenta la velocidad al incrementar la temperatura 10 C.
Efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de reaccin
La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima se incrementa al aumentar la
concentracin de sustrato hasta un punto en el cual ya no hay incremento, aun con la
adicin de ms sustrato. En esta fase, el sustrato ha saturado los sitios activos de la
enzima y se ha logrado la velocidad mxima de la reaccin, la cual depende de la
afinidad de la enzima y el sustrato correspondiente.
FIGURA 2.16
La ecuacin de esta hiprbola corresponde a una cintica clsica de Michaelis-
Menten
[ ]
[ ] S Km
S V
Vo
+
max
1
2
1 2
1 2
a
k
k
log
T T
T RT 303 . 2
E
10
Q log T RT 303 . 2
E
10 1 2
a
Enzimas reguladas y no reguladas
Enzimas reguladoras
Todas las enzimas presentan caractersticas que influyen en la regulacin de su
actividad dentro de la clula, por ejemplo:
pH. El pH ptimo de una enzima es de 5 y su entorno tiene un pH de 7, por lo
tanto, la actividad de esa enzima no es la ptima.
Temperatura. La catalasa tiene una actividad ptima a 0 C. La temperatura
corporal es de 36.5 C, la actividad de la enzima no es total.
Presencia de cofactores. Algunas enzimas necesitan cofactores como Mg
++
,
Fe
++
, etc.; la concentracin de estos metales regula la actividad enzimtica.
Concentracin de sustrato. La actividad enzimtica dentro de la clula
tambin se ve regulada por la concentracin de sustratos.
Adems de estas propiedades comunes a todas las enzimas, hay otras que tienen
funciones especiales para regular el metabolismo, stas se denominan enzimas
reguladoras. Hay dos tipos de regulacin:
1) Enzimas alostricas
2) Enzimas moduladas covalentemente
Enzimas alostricas
El trmino alostrico significa otro sitio. Las enzimas alostricas poseen, adems
del sitio activo, otro sitio al que se enlaza de modo reversible, no covalente, el cofactor
o modulador. El centro alostrico es tan especfico para el modulador como lo es el
sitio activo para el sustrato. Un modulador puede ser (+) cuando estimula la actividad
de la enzima; (-) cuando inhibe la actividad enzimtica; puede ser homotrpico,
cuando su modulador es el propio sustrato; y heterotrpico, cuando su modulador
es diferente al sustrato. Algunas enzimas poseen ms de un sitio alostrico y se
denominan polivalentes.
a) Rutas lineales
Inhibicin o retroinhibicin
Estimulacin o retroalimentacin
b) Rutas ramificadas
Enzimas moduladas covalentemente
Existen dos tipos de modificaciones covalentes de las enzimas
a) Modificaciones irreversibles por hidrlisis. Los zimgenos o proenzimas
inactivos pueden activarse al eliminar uno o ms pptidos de la molcula
proteica. Por este procedimiento el pepsingeno se transforma en pepsina; el
tripsingeno en tripsina, etc. En general, las enzimas digestivas de naturaleza
proteoltica requieren esta activacin que evita la autodestruccin de las
clulas que los secretaron (una activacin precoz del tripsingeno a tripsina
en las clulas del pncreas da lugar a la pancreatitis aguda, a menudo,
mortal). Una vez utilizadas las enzimas, se inactivan destruyndose por medio
de hidrlisis.
FIGURA 2.22
Las hormonas proteicas, como la insulina, sufren modificaciones de prohormona a
hormona activa; ejemplo:
Preproinsulina proinsulina insulina
- pptido - pptido
b) Modificacin reversible por interconversin. Las conformaciones R (relajada) y
T (tensa) pueden verse estabilizadas por modificacin covalente de las
molculas enzimticas. Para ello se requiere la activacin de enzimas
convertidoras que, a su vez, tambin suelen ser reguladas.
FIGURA 2.23
Las formas desfosforiladas son ms activas en las vas sintticas
Las formas fosforiladas son ms activas en las vas degradativas
Este es un ejemplo de modificacin covalente de enzimas por fosforilacin
desfosforilacin.
Cintica de las enzimas alostricas
La cintica que se ha estudiado (de tipo hiperblico) no resulta aplicable a la totalidad
de las enzimas. Existen muchas enzimas de estructura oligomrica cuyas
subunidades se influyen mutuamente; es decir, la actuacin de una de ellas repercute
en el comportamiento de las dems. Como consecuencia de este fenmeno, la
cintica de estas enzimas suele ser ms compleja: en general, de tipo sigmoideo.
Cooperatividad: Ecuacin de Hill
La concentracin de sustrato puede influir en la velocidad de reaccin de las enzimas
reguladoras, dan-do lugar a la mencionada cintica sigmoidea.
FIGURA 2.24
El efecto cooperativo se atribuye a que la enzima presenta varios centros activos (uno
por cada mon-mero), ya que puede adoptar dos conformaciones espaciales distintas:
la forma R (relajada) ms activa, y la forma T (tensa) menos activa, en equilibrio
dinmico. La presencia del sustrato puede desplazar el equilibrio, favoreciendo la
adopcin de una de ellas, de acuerdo con el esquema siguiente:
FIGURA 2.25
La ecuacin simplificada de Hill explica matemticamente la cintica sigmoidea al
suponer la capacidad preferente de la enzima para unirse simultneamente a n
molculas de sustrato, segn la ecuacin
Por un razonamiento anlogo al seguido con la deduccin de la ecuacin de Michaelis
se llega a lo siguiente:
P E + +
n
ES S n E
[ ]
[ ] S Km
S V
Vo
+
max
El sentido qumico de K 0.5 (anlogo al descrito para Km) es el de aquella concentracin
de sustrato que permite a la enzima trabajar a la mitad de la mxima velocidad. Al
operar matemticamente la ecuacin tenemos
Al aplicar logaritmos se obtiene
b mx Y
Al reordenar, se obtiene la ecuacin de una recta en la que n es su pendiente
A n se le denomina coeficiente de Hill. Si su valor es 1, no existe cooperatividad; si es
mayor que 1, hay cooperatividad positiva; y si es menor que 1, la cooperatividad es
negativa. Sus valores habituales en las enzimas reguladoras oscilan entre 2 y 3.
n n
0.5
n
max
[S] K
[S] V
V
+
'
0.5
max
K log - [S] log n
V V
V
log
( ) [ ] S V [S] K V
n
max
n
0.5
n
+
[ ] S V V[S] VK
n
max
n
0.5
n
+
[ ] V[S] - S V VK
n n
max
0.5
n
[S] V) - (V VK
n
max
0.5
n
V
[S] V) - (V
K
n
max
0.5
n
V
V) - (V
S
K
max
n
0.5
n
n
K
S
V
1
]
1
5 . 0 max
V
V
5 . 0
max
log log
V
V
log k n S n
V
Efectores alostricos
Las enzimas alostricas modifican su actividad cataltica al fijar determinados ligandos
sobre el centro activo: sustrato natural, sustrato anlogo, inhibidores competitivos,
entre otros. Estos ligandos se podran denominar ligandos homotrpicos, pero con
frecuencia estos u otros compuestos pueden fijarse a centros diferentes del centro
cataltico, llamados centros alostricos. Estos ligandos sern heterotrpicos y
tambin son capaces de modificar la actividad cataltica de las enzimas reguladoras.
Los inhibidores alostricos disminuyen o anulan la actividad cataltica de la enzima
y los activadores alostricos la aumentan.
La activacin o inhibicin puede afectar a diversos parmetros de la cintica
enzimtica. Entre los modelos clsicos se consideran los sistemas K en los que se ve
afectada la K0.5 y los sistemas V, en los que resulta alterada la velocidad mxima.
En el esquema A es activador o modulador positivo e I es modulador negativo o
inhibidor.
FIGURA 2.26
En la figura 2.26 se representan las modificaciones cinticas producidas por un
activador (A) o un inhi-bidor (I) en los dos sistemas considerados.