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ISSN 0365 0871

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUCUMAN


FACULTAD DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA

ARCHIVOS
DE

BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA


TUCUMAN
TOMO XXI N 1

TUCUMAN
REPUBLICA ARGENTINA

2010 - 2011

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUCUMAN


Rector CPN Juan Alberto Cerisola Vicerrectora Dra. Alicia Bardn Secretaria Acadmica Dra. Susana Maidana Secretaria de Ciencia y Tcnica Dra. Dora Miceli Secretario de Poltica Administrativa y Gestin CPN Luis Sacca Secretario de Bienestar Universitario Abogado Mauricio Argir Secretario de Planeamiento Obras y Servicios Arq. Carlos Prieto Secretario de Extensin Universitaria Dr. Mario Leal Secretario de Postgrado Dr. Edgardo H. Cutn

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA

Decana Dra. Silvia Nelina Gonzlez de Elas Vice Decana Dra. Ada Ben Altabef Secretaria Acadmica Dra. Alicia Snchez Riera Secretario de Bienestar Universitario Farm. Eduardo Khouri Secretario de Control y Gestin Econmica Lic. Christian Simensen de Bielke Coordinador de Rendimientos Cientficos Dr.Jos Alberto Komaid Coordinador de Extensin Dra. Mara Atilana Jimnez Daz

COMIT EDITORIAL Editor responsable

INDICE
INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE TRABAJOS EDITORIAL PROLOGO CARTA DEL EDITOR ARTICULOS ORIGINALES
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL DE ANEMIA FERROPNICA Y RASGO BETA TALASMICO: VALOR PREDICTIVO DE LAS PRUEBAS DE CRIBADO

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Dr. Jos Alberto Komaid


Miembros titulares

Dra. Ada Mara Surez Dra. Mirtha Rachid Bioq. Mara A. Vliz

8 18 21 48 96

ARTICULOS ESPECIALES RESUMENES DE TESIS 2010

COMIT CIENTIFICO Director honorario

RESUMENES DE TESINAS 2010 CONTENIDO

Dr. Ral A. Salomn


LOS TRABAJOS ORIGINALES SON ARBITRADOS POR CALIFICADOS PROFESIONALES QUE CONFORMAN EL CUERPO DOCENTE DE LA UNT Y CUYA NMINA SE DETALLA AL FINAL DE ESTA PUBLICACIN.
DISEO GRFICO Y DIAGRAMACIN : Dr. Jos Alberto Komaid REVISIN Y EDICIN : Dres. Jos Alberto Komaid; Ada Mara Surez; Mirtha Rachid y Bioq. Mara A. Vliz

REGISTRO DE LA PROPIEDAD INTELECTUAL Ley 23412 N 188912 REGISTRO NACIONAL DE PUBLICACIONES EN SERIE ISSN N 0365-0871

INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE TRABAJOS TRABAJOS


ARCHIVOS DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA - TUCUMAN Contribuciones Los Archivos de Bioqumica, Qumica y Farmacia Tucumn aceptar para su publicacin artculos originales, informes breves, resmenes de tesis, artculos especiales, editoriales y suplementos sobre temticas relacionadas a la Bioqumica, Qumica y Farmacia. Este medio de difusin est abierto a autores de todos los mbitos en que se desarrollen las disciplinas de bioqumica, qumica y farmacia, as como las ciencias sobre las que estas se sustentan. Los artculos originales son trabajos de investigacin completos y deben presentarse respetando las siguientes divisiones: Introduccin, Materiales y mtodos, Resultados, Discusin, Agradecimientos y Bibliografa. Los informes breves son trabajos de menor extensin, entre los que se incluyen casusticas, casos clnicos, descripcin de tcnicas avaladas por experimentos concluyentes. Su extensin ser limitada y sin divisiones en el texto. Los artculos especiales son conclusiones o consensos de reuniones de especiales grupos de trabajos sobre temas de inters nacional o regional. Los autores deben ser reconocidos como especialistas en la materia y debe acompaarse de bibliografa amplia y actualizada. Los editoriales debern abordar tpicos de actualidad y relevancia para la comunidad cientfica de las disciplinas motivo de la publicacin. Los lineamientos y oportunidad de la temtica abordada en este segmento quedan a criterio del Comit Editor para su publicacin. Los Resmenes de Tesis o Tesinas deben ser trabajos ya aprobados por jurado y se remitirn en su idioma original ms una versin en ingles en formato pdf. Los suplementos corresponden a revisiones sobre un tema especfico ampliamente tratados y con el consenso de otros autores especialistas sobre dicho tema. Tambin se incluirn conclusiones arribadas en eventos cientficos, siempre que ellas cubran ampliamente la temtica propuesta. Estas contribuciones quedan a criterio del Comit Editor para su publicacin. Cada autor es personalmente responsable de su publicacin. Los manuscritos remitidos para su publicacin sern sometidos a revisin de arbitros reconocidos en la disciplina o del Comit Editor, segn corresponda. La publicidad de eventos cientficos debern estar ajustado a las normas de presentacin del texto y no sern sometidos a revisin. Normas para presentacin de originales. Los manuscritos sern remitidos via e-mail a: archivosfbqf@fbqf.unt.edu.ar . Los trabajos podrn ser redactados en ingles o en espaol (si tuvieran otro orgen que el nacional, en su idioma original). Los artculos originales, informes breves y artculos especiales incluirn dos resmenes de no ms de 200 palabras, uno en espaol y el otro en ingls sin citas bibliogrfica ni ilustraciones. Se remitirn dos archivos adjuntos tipeados mediante procesador de texto Word en letra Arial cuerpo 12 para el ttulo y en cuerpo 10 para el resto del texto. Las ilustraciones o tablas sern presentadas en formato jpg en pgina aparte y una versin completa con textos e ilustraciones, tablas, frmulas etc en su real presentacin, se utilizar la opcin papel tamao A4 con 2,5 cm. de margen. El ttulo se tipear en maysculas y a rengln siguiente los autores en maysculas y minsculas. La versin contendr el texto y las tablas, figuras e ilistraciones tal como se sugiere su impresin.
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INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE TRABAJOS INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE TRABAJOS INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIN DE TRABAJOS Se sugiere a los autores ordenar la propuesta de la siguiente forma: Ttulo, Autores (apellido e iniciales con superndice si pertenecieran a diferentes Instituciones), Institucin en que se realiz, direccin real y electrnica del responsable, resumen en castellano, resumen en ingls, palabras clave, introduccin, material y mtodos, resultados, discusin, conclusiones, bibliografa. La citas bibliogrficas sern ordenas segn el orden en que son citadas y sern expresadas siguiendo las abreviaturas del Index Medicus, es decir en el caso de trabajos originales se notar el autor/es su apellido seguido de sus iniciales, rengln seguido el ttulo del trabajo y luego las abreviaturas de la publicacin, volumen en arbigo, pgina inicial y final y ao de la publicacin. En caso de cita de libro, apellido y nombre del autor/es, ttulo del libro, ao de publicacin, nmero de edicin, lugar de publicacin, casa editorial, nmero de pginas, nmero y ttulo de captulo (si correspondiera) especificando pginas inicial y final. La versin electrnica ser remitida con ttulo que indique nombre del archivo y/o autor. . El costo de las publicaciones ser de $ 10 por cada pgina, esto incluye la publicacin ms un ejemplar del folletin. Las consultas se recibirn en la misma direccin de e-mail.

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EDITORIAL EDITORIAL
El criterio mayormente empleado para valorar eficiencia y cumplimiento de la labor cientfica es el nmero de publicaciones. Sin embargo las actividades cientficas que desarrollan nuestros alumnos, docentes y graduados, a menudo y por diferentes motivos, no siempre tienen la oportunidad de reflejarse en este sentido. Cada especialidad genera ncleos de influencia que, si no revisten proyeccin internacional, no logran traducirse como artculos de revistas consideradas referentes. Los trabajos con repercusin nacional o regional son igualmente relevantes y marcan tendencia en determinadas reas del conocimiento, con la misma calidad de los internacionales, pero con injerencias diferentes. En nuestro pas la investigacin, tanto bsica como aplicada, est fundamentalmente subvencionada por Organismos pblicos y por esta razn, a ellos debemos responder. Si los resultados tienen trascendencia regional y contribuyen a fortalecer algn aspecto clnico, productivo y/o ambiental, resultar mucho ms lgico dar respuesta cientfica a una dificultad que ignorarlos por no encuadrarse entre las exigencias de las revistas de impacto internacional. Nuestra revista ser de discusin abierta y de libre acceso. La versin impresa de los trabajos correlacionada con el ISSN, podr ser consultada desde el dominio http://www.fbqf.unt.edu.ar. La inclusin de un resumen en ingls (reconocido como idioma cientfico generalizado) permitir proyeccin hacia consultas extranjeras, situacin que contribuir a la difusin, aun cuando el manuscrito completo estuviera redactado en idioma espaol. La re-edicin de ARCHIVOS DE LA FACULTAD DE BIOQUMCA, QUMICA Y FARMACIA, adems de reconocer la visin progresista y el espritu innovador de los docentes fundadores (en honor a ellos decidimos mantener el nombre original), tiene el propsito de brindar un espacio acadmico de excelencia para conclusiones con impacto regional. Nuestro objetivo a mediano plazo es reflejar la produccin cientfica NOA NEA e instalar la discusin de problemticas, cuya importancia y calidad acten como parmetros de orientacin para quienes deban definir reas de vacancia. La rigurosa originalidad, la periodicidad y la cuidadosa seleccin de los artculos por dos o ms jueces estrictos e independientes, definen el desafo institucional tendiente a posicionar nuestros esfuerzos en niveles de alta competitividad. Prof. Dra. Silvia Nelina Gonzalez de Elias Decana

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PRLOGO PRLOGO
Estimados colegas: cuando, mentalmente, me remonto a los tiempos de los pioneros que se aventuraron a publicar una revista que mostrase la produccin de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn, no puedo menos que sorprenderme que con una mquina de escribir y las ganas de llevar adelante esa idea nos hayan dejado el testimonio de una institucin, que independientemente de las grandes editoriales, pona en esas pginas la muestra del esfuerzo diario. Leer los Archivos de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia que se encuentran en la biblioteca, llena de orgullo la intensidad del esfuerzo y lo prolfico y desinteresado de los resultados de ese esfuerzo. Adems, de su lectura, surgen retazos de historia, de ejemplos, de ancdotas que, de no haberse escrito en esas pginas, hubieran sido olvidadas. Hoy, todo ese contenido, nos marca el camino recordndonos de dnde venimos y hacia dnde vamos. Reeditar estas pginas, con nuevas tecnologas, nuevos materiales y bajo otra visin de la sociedad, no tiene otro objetivo que continuar en esa huella que nos dejaron insinuada nuestros maestros y mentores para que, los que nos sigan en el futuro, tengan, al igual que nosotros, una referencia de lo que hicimos como grupo humano, independientemente de los currculos individuales. Estoy muy agradecido, en primer lugar a la seora decana Dra. Silvia Nelina Gonzlez de Elas por haberme confiado la concrecin de su anhelo de volver a contar con un espacio donde mostrarnos como comunidad, en segundo lugar a todos los colegas que me acercaron el material que volcamos en estas pginas, en tercer lugar a los compaeros del Comit Editor y Cientfico por la seriedad con que asumieron esta labor y por ltimo a todas las autoridades que acompaan a la seora Decana por haberme facilitado el acceso a toda la informacin y orientado con sus sugerencias. A todos los miembros de esta facultad, les deseo un venturoso ao 2011 y les pongo a consideracin estas pginas para interiorizarse de la labor conjunta y para que consideren este espacio como propio para volcar su aporte y compartir criterios dada la amplitud que propone el nuevo formato. Finalmente agradezco el apoyo financiero del Rectorado de la UNT y de las firmas anunciantes que posibilitan mejorar la calidad del material grfico. Dr. Jos Alberto Komaid Editor responsable

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CARTA DEL EDITOR CARTA DEL EDITOR


Aprender a aprender Transitamos la primera dcada del siglo XXI que nos encuentra an asimilando los grandes descubrimientos y avances de la ciencia y la tecnologa del siglo pasado. Pero parece que solo tratamos de capitalizar las enseanzas positivas cuando de las negativas es de las que ms se aprende. Un caso con bombos y platillos Sin lugar a dudas uno de los descubrimientos con ms connotaciones sociales a nivel mundial fue el del VIH (virus de la inmunodeficiencia humana), sin embargo la historia de este evento puso al descubierto uno de los ms sonados fraudes cientficos. El Dr. Robert Gallo, primero en atribuirse la paternidad del descubrimiento, fue puesto en evidencia mediante el llamado Informe Crewdson publicado el 9/11/1988 en el Chicago Tribune con el ttulo The great AIDS quest que dedic 16 pginas a hacer pblicos los resultados obtenidos por el Dr. R. Gallo. El artculo de 50.000 palabras dibuja la zigzagueante carrera del Dr. Gallo y, sobre todo, narra con gran detalle las incidencias habidas entre un laboratorio y otro, refirindose al laboratorio del Dr. Luc Mountaigner del Instituto Pasteur de Francia. El propio Crewdson resume as la presentacin: La historia emerge menos heroica de lo que

se suele presentar, pero no menos espectacular: datos falseados y experimentos secretos, virus fantasmas y genes desaparecidos, resultados irreproducibles y notas de laboratorio embrolladas, cultivos sin etiquetar y fotografas manipuladas(...). Es la historia de un cientfico influyente e intimidador que persigui un virus errneo durante ms de un ao para luego emerger con un hermano virtual genticamente gemelo del virus que haba sido realmente descubierto por sus rivales de Pars. Lo que ocurri en el laboratorio de Robert Gallo es un misterio que quiz no ser nunca aclarado. Pero la evidencia abrumadora es que hubo o un accidente o un robo. El
Senado y el Ministerio de Salud ratificaron estas conclusiones. La historia cobr tales ribetes novelescos que fue llevada al cine bajo el ttulo Y la banda sigui tocando en una clara alusin a la impunidad de estas conductas en la comunidad cientfica. Habra para llenar varias pginas con esta historia pero su final no es tan trgico, las influencias polticas del Dr. R. Gallo decidieron ignorar su inconducta y actualmente dirige un laboratorio que recibe docenas de millones de dlares destinados a investigaciones sobre leucemias. La ciencia al servicio del capital Un captulo que tampoco capitalizamos son las miradas de trabajos de investigacin que respaldan a medicamentos que deben retirarse del mercado a poco de ser aprobados por los organismos de control. Entre los miles de casos, uno destacable es el del uso de la Talidomida recomendada como antiemtico en embarazadas!. Ningn responsable por la teratogenia de la droga?. Los investigadores no fueron penalizados, solo se retir la droga del mercado, pero entre 1958 y 1963 nacieron miles de nios con malformaciones no informadas por los investigadores que respaldaron el uso del frmaco. An hoy se retiran del mercado
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CARTA DEL EDIITOR CARTA DEL EDIT OR CARTA DEL ED TOR

docenas de medicamentos por semana a poco de su lanzamiento debido a denuncias de diferentes grado de toxicidad. Y las pruebas de campo? no encontraron esas fallas o fueron deliberadamente ocultadas?. El uso de pesticidas de probada toxicidad para el habitat, el uso de aditivos para naftas que contaminan las reservas de agua potable, el paulatino reemplazo de especies por hbridos que no permiten su reproduccin, y una larga lista de dao a la habitabilidad futura del planeta sigue ocurriendo. Ahora la pregunta obligada: porqu sigue sucediendo esto?. Las respuestas surgen desde diferentes campos, la tica, los paradigmas, la economa. Desde la tica tendramos que decir que, en ciencia como en todos los rdenes de la vida, hay hombres de bien y otros no tanto. Desde los paradigmas podramos decir que cambiaron para convertir al cientfico en tan exitoso cuanto ms papel venda. O sea cuantos ms trabajos publique en revistas de alto impacto, que no son otra cosa que cadenas comerciales de distribucin mundial. No creo que haga falta tratar el campo de la economa, ocultar datos, falsear resultados y respaldar un veneno no puede hacerse sino con fines econmicos. Una pregunta que nadie responde sin dudar es estamos seguros que el nmero de publicaciones y el impacto de la revista definen el xito o la utilidad del equipo de investigacin?. No publicar no significa no investigar El bamb es una planta cuya importancia socio-econmica no sera posible imaginar por el hombre occidental. Millones de personas basan sus vidas en esta planta, proveyndose de alimento, vivienda, indumentaria, material de construccin de embarcaciones y una infinidad de productos exportables que permiten su subsistencia. Al producirse la floracin, una etapa cclica que vara de unos 50 a 100 aos dependiendo de la especie y una enormidad de otros factores, la colonia de bambes muere. Esto sera relativamente trgico si no fuera que al caer la semillas atraen y permiten una sobrepoblacin de roedores que no solo acaban con las semillas sino que tambin con las cosechas de cuanto alimento encuentran. Baste decir que este acontecimiento fue causa de las hambrunas ocurridas en China en 1785, 1815, 1833, 1881, 1911, 1929, 1959, y 1977 adems de haber puesto a los osos Panda, especie que se alimenta exclusivamente de los brotes del bamb, al borde de la extincin. Para comprender la manera de prevenir estos desastres se necesitaron de muchos aos de estudios sin publicaciones hasta llegar a resultados que expliquen las causas concurrentes que canalizan el fenmeno. Si esos investigadores hubieran estado ajustados a los paradigmas que mantenemos, y al no obtener resultados que llenen pginas de tinta, no hubieran podido contar con los fondos para hallar una solucin a este fenmeno y estaramos hablando de las hambrunas del 2006 y de la raza ya extinguida de Pandas. perversin, La perversin, est en el hombre o en el sistema? En un jardn de infantes, un grupo de estudiantes de psicologa de una universidad estadounidense, llevaron a cabo un experimento. Llevaron a una docena
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de nios de entre 4 y 6 aos de edad a un parque y les dieron una caja de cartn a cada uno pidindoles que tomen un pedacito de parque y lo pongan en la caja, lo lleven a sus casa y lo cuiden para devolverlo a la semana siguiente. A diario preguntaban a los nios sobre el pedacito de parque a su cuidado y reciban respuestas asombrosas como pajaritos comiendo, nidos de hormigas y otras fantasas. Sin esperar al ltimo da fueron a las casas de los nios involucrados en el experimento y constataron que en las cajas solo haba un puado de tierra seca y unas hojas mustias de csped. Qu los llev a los nios a mentir?, porque podemos apelar a la imaginacin en cuanto a la riqueza del relato, pero basado en una mentira. La mentira surge de una exigencia imposible de cumplir independientemente del raciocinio del individuo. Esos nios no tenan ninguna motivacin salvo la responsabilidad impuesta. De lo expuesto, muy sucintamente, podramos sacar muchas conclusiones, entre otras, que la verdadera autonoma es el mejor pasaporte a la verdad y al xito del emprendimiento. Y a su vez, es la mejor manera de vivir y servir honestamente. Para pensarlo no?. Hasta la prxima!. Los invito a usar este espacio para expresarse libremente sobre los temas que consideren de inters general. Atentamente Dr. Jos Alberto Komaid

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ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES


DIAGNSTICO DIFERENCIAL DE ANEMIA FERRPENICA Y RASGO BETA TALASMICO: VALOR PREDICTIVO DE LAS PRUEBAS DE CRIBADO Lazarte S., Leri de Nofal M., Rossi E, Jimnez C., Ledesma Achem E., Iss B. Instituto de Bioqumica Aplicada. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. UNT Balcarce 747. San Miguel de Tucumn. Telfono/Fax: 0381-4310994 Correo electrnico: slazarte@fbqf.unt.edu.ar RESUMEN Las anemias microcticas hipocrmicas ms frecuentes son la anemia ferropnica (AF) y el rasgo beta talasmico (RBT). Para diagnstico en grandes poblaciones se han usado ndices derivados del hemograma automatizado, y la prueba de resistencia osmtica eritrocitaria tubo nico inmediata y 24 horas post incubacin (ROETUI y ROETU24). El propsito del estudio fue determinar la seguridad diagnstica de 5 ndices y de la ROETU en la diferenciacin de AF y RBT. Los ndices examinados fueron: Mentzer (IM), Shine y Lal (S&L), England y Fraser (E&F), Srivastava (IS), y recuento de glbulos rojos (RGR). Se estudiaron 32 pacientes con RBT y 21 con AF. Se realiz: hemograma (Coulter ACT10), ROETUI y ROETU24, ferremia, transferrina y saturacin de transferrina (Wiener Lab), y electroforesis de hemoglobina a pH alcalino. Se determin la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo (VPP y VPN), eficiencia (EF) e ndice de Youden (IY) de los ensayos. Hubo diferencia significativa (p<0,05) en RGR, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, ferremia, saturacin de transferrina, ROETUI y ROETU24. El IY revel S&L>IM>RGR=IS>E&F >ROETUI>R mientras que la EF fue S&L>IM> RGR>IS=ROETU24>E&F>ROETUI. El ndice de S&L sera til en el diagnstico diferencial de AF y RBT si el laboratorio cuenta con hemograma automatizado, y en caso contrario, la ROETUI y ROETU24. Palabras clave: talasemia, anemia ferropnica, ndices eritrocitarios discriminantes, resistencia osmtica eritrocitaria ABSTRACT Iron-deficiency anemia (IDA) and beta-thalassaemia trait (BTT) are the most common hypochromic microcytic anaemia. For mass screening, indices derived from the cellular blood count obtained in hematological counter, and immediate and 24 hours post incubation single tube erythrocyte osmotic resistance test (ISTEOR and 24STEOR) have been used. The purpose of this study was to determine the diagnostic accuracy of 5 indices and STEOR in IDA and BTT differentiation. The indices examined were: Mentzer (MI), Shine and Lal (S&L), England and Fraser (E&F), Srivastava (SI), and red blood cell count (RBC). 32 patients with BTT and 21 with IDA were studied. The following tests were performed: blood count (Coulter ACT10), ISTEOR and 24STEOR, iron, transferrin and transferrin saturation (Wiener Lab), and alkaline hemoglobin electrophoresis. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value (PPV and NPV), efficiency (EF) and Youden index (YI) of the trials were determined. A significant difference (p<0.05) in RBC, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, iron, transferrin, transferrin saturation, ISTEOR and 24STEOR was observed. YI revealed
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ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES

Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

S&L>MI>RGR=SI>E&F>ISTEOR>24STEOR, while EF was S&L>MI>RGR>SI= 24STEOR>E&F>ISTEOR. If the laboratory have automated blood count facility, S&L index would be useful in the differential diagnosis of IDA and BTT, and when not, ISTEOR and 24STEOR. Key words: thalassaemia, iron deficiency anaemia, discriminator red blood indices, erythrocyte osmotic resistance MATERIALES Y MTODOS Diseo Se realiz un estudio observacional descriptivo, de corte transversal. Poblacin, muestra y criterios diagnsticos Se estudiaron 53 individuos en el perodo comprendido entre marzo de 2009 y julio de 2010, que asistieron al Instituto de Bioqumica Aplicada para diagnstico etiolgico de anemia. El Instituto de Bioqumica Aplicada pertenece a la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la UNT, y cuenta con laboratorios donde se realiza el estudio de anemia, hemostasia, endocrinopatas y enfermedad celaca. De cada paciente se obtuvo una muestra de sangre. La muestra fue recibida en EDTA tripotsico para la realizacin del hemograma; en heparina para la realizacin de la prueba de resistencia osmtica eritrocitaria (ROE); y otra alcuota sin anticoagulante para las determinaciones bioqumicas en suero. El diagnstico de -talasemia menor incluy la presencia de microcitosis e hipocroma, y el aumento de la fraccin de hemoglobina A2 (HbA2) en la corrida electrofortica de hemoglobina. El diagnstico de anemia ferropnica se hizo en base a la disminucin de los niveles de hierro srico, aumento de la capacidad de unin de hierro a transferrina, y disminucin de la saturacin de tranferrina (<16%). Una vez diagnosticados, los pacientes se dividieron en 2 grupos: grupo con rasgo -talasmico (GRBT) y grupo con anemia ferropnica (GAF); los cuales se clasificaron segn la edad en adultos (>12 aos) y nios (<12 aos). Estudios hematolgicos Las tcnicas empleadas en el anlisis de las muestras de sangre fueron las siguientes: Hemograma e ndices hematimtricos: se realiz en el contador hematolgico automatizado marca Coulter modelo ACT10. Ferremia: se us un equipo de Wiener Lab. El CV del ensayo es de 4,2%, y los valores de referencia (VR) son de 50-170 g/dL en la mujer, y de 65-175 g/dL en el hombre. Capacidad Total de Unin de Hierro a Transferrina (CTUT): se determin con reactivo marca Wiener Lab. El CV del mtodo es de 8,3% y el VR es de 250-400 g/dL. Saturacin de transferrina: es el resultado del cociente entre ferremia y CTUT, multiplicado por 100. El VR es de 20-50 %. Electroforesis de Hemoglobina: la corrida se realiz en tiras de acetato de celulosa, en una cuba de electroforesis con fuente de poder marca CHEMAR. Se us el buffer tris-EDTA-brico pH 8,5, preparado en el Laboratorio de Hematologa de la Ctedra
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ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES

Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

de Bioqumica Clnica. Para el control de calidad interno se proces un hemolizado obtenido de sujetos normales. ROE tubo nico inmediata (ROETUI): se realiz con una solucin salina hipotnica de 4 g/L de NaCl en buffer fosfato (4). A 5 mL de esta solucin se agregaron 50 L de sangre heparinizada del paciente. Adems se agreg 50 L de dicha sangre a 2 tubos ms: uno con 5 mL de solucin salina de 9 g/L de NaCl en buffer fosfato (0% hemlisis), y otro con 5 mL de agua destilada (100% de hemlisis). Luego de mezclar, los tubos se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente y se centrifugaron. Los sobrenadantes se leyeron en espectrofotmetro a 540 nm, usando como blanco el tubo 0% de hemlisis. Para el clculo del porcentaje de hemlisis se us la densidad ptica (DO) del tubo correspondiente al 100 % de hemlisis (% hemlisis [4g/L] = DO 4g/L x 100/DO100%). ROE tubo nico post incubacin a 37 durante 24 horas (ROETU24): la muestra de sangre heparinizada se incub a 37C durante 24 horas. Luego se emple la misma tcnica de ROETUI. ndices eritrocitarios de discriminacin Con los resultados de volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y recuento de glbulos rojos (RGR) se calcularon los ndices de: Mentzer, Shine y Lal, England y Fraser, y Srivastava (6). En la Tabla 1 se muestran las frmulas de clculo de los ndices, y los valores discriminantes de las pruebas de tamizaje usadas para la diferenciacin entre talasemia menor y anemia por deficiencia de hierro (4, 6). 1: TABLA 1 Valores de corte usados en la diferenciacin entre rasgo -talasmico (RBT) y anemia ferropnica (AF) PRUEBA DE TAMIZAJE
12 Recuento de glbulos rojos (RGR) (x10 /L) 12

RBT >5,0 <13 <1530 Negativo

AF <5,0 >13 >1530 Positivo

ndice de Mentzer (IM) = VCM/RGR


2 ndice de Shine y Lal (SyL) = VCM xHCMx0,01 2

VCM-RGR-5Hbndice de England y Fraser (EyF) = VCM-RGR-5Hb3,4 HCM/RGR ndice Srivastava (IS) = HCM/RGR ROETUI (% de hemlisis) ROETU24 (% de hemlisis)

<3,8 <50 <85

>3,8 >50 >85

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ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES

Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

Las frmulas de clculo de la sensibilidad (S), especificidad (E), valor predictivo positivo (VPP), valor predictivo negativo (VPN), ndice de Youden (IY) y eficiencia (EF) se muestra en la Tabla 2 (7). 2: TABLA 2 Frmulas de clculo de S, E, VPP, VPN, IY y EF NDICE Sensibilidad CLCULO* Positivos verdaderos (PV)/Falsos negativos (FN) + PV Especificidad Negativos verdaderos (NV)/Falsos positivos (FP) + NV predictivo Valor predictivo positivo Valor predictivo negativo ndice de Youden Eficiencia PV/PV + FP NV/NV + FN S+E-1 PV + NV/N total de casos

*Los resultados se multiplicaron por 100 para informarlos en % Anlisis de los resultados Para el estudio estadstico de los datos se us el programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 9.0. Los resultados fueron expresados como la media desviacin estndar, luego de ser sometidos a la prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov. Para las comparaciones se us el t-Test de Student. El nivel de significacin fue de 0,05. Consideraciones ticas Se obtuvo un consentimiento informado de todos los pacientes para el uso de los resultados obtenidos, donde se garantiz el anonimato y confidencialidad de los mismos. En el caso de los nios el consentimiento fue firmado por el padre o la madre del mismo.
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ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES ARTICULOS ORIGINALES

Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

RESULTADOS En 32 pacientes se confirm la presencia de menor mediante electroforesis de hemoglobina donde se observ aumento en la fraccin de HbA2; 21 fueron de sexo femenino y 11 de sexo masculino. Los 21 restantes presentaron AF, ya que tenan ferremia y saturacin de transferrina disminuidas; 18 eran de sexo femenino y 3 de sexo masculino. 20 pacientes con AF presentaron HbA2 normal en la corrida electrofortica, y 1 la mostr disminuida. El GRBT estuvo compuesto por 5 nios con edades de 1 a 12 aos, y 27 adultos (19 mujeres y 8 hombres) con edades de 20 a 82 aos. El GAF fue integrado por 3 nios de 1, 6 y 9 aos, y por 18 adultos (16 mujeres y 2 hombres) con edades comprendidas entre 16 y 54 aos. 1: GRFICO 1 RGR (x1012/L), VCM (fL), HCM (pg), hierro (g/dL), transferrina (g/dL), saturacin de transferrina (%), ROETUI (% hemlisis) y ROETU24 (% hemlisis) en los grupos GRBT y GAF adultos (Instituto de Bioqumica Aplicada, Tucumn, 2010)
100
7

90
6
39

80
5

70

39 36

60
29

GR

VCM

3 N=

18 ferropenia

29 talasemia

50 N=

18 ferropenia

29 talasemia

DIAGNST

DIAGNST

40
300
47

30
6

200
29
22

20
100
30 35

10 N=

HIERRO
18 ferropenia 29 talasemia

HCM

0 N=

18 ferropenia

26 talasemia

DIAGNST

DIAGNST

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Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

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17 ferropenia

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El anlisis estadstico demostr variaciones significativas (p<0,05) en el recuento de eritrocitos, volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM), hierro srico, transferrina, saturacin de transferrina, ROETUI y ROETU24 entre los grupos GRBT y GAF adultos (Grfico 1). Los resultados de los grupos GRBT y GAF nios se presentan en la Tabla 3; no se efectuaron comparaciones debido al escaso nmero de datos. En los pacientes menores de 12 aos se observaron valores mayores en los resultados de RGR, hierro, transferrina, y saturacin de transferrina en el grupo GRBT, mientras que el VCM, HCM, ROETUI, y ROETU24 mostraron resultados ms altos en el grupo GAF. TABLA 3: Parmetros hematolgicos y bioqumicos de los grupos GRBT y GAF nios (Instituto 3 de Bioqumica Aplicada, Tucumn, 2010) PARMETROS RGR [x1012/L] VCM [fL] HCM [pg] HIERRO [g/dL] TRANSFERRINA [g/dL] SATURACIN [%] ROETUI [% de Hemlisis] ROETU24 [%de Hemlisis] *n=2; n=1
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GRBT (n=5) 5,650,53 63,36,7 20,12,2 10150 31053 3419 9,711,0 35,619,2

GAF (n=3) 4,660,40 74,58,7 24,23,6 384 21620* 170* 56,330,5 88

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Diagnstico difrencial de anemia ferropnica y rasgo.

Con respecto a los ndices calculados, en la Tabla 4 se muestran los resultados de E, S, VPP, VPN, IY y EF de los mismos, como as tambin de la ROETUI y ROETU24. De acuerdo al IY el poder discriminatorio de las pruebas usadas fue: SyL>IM>RGR>IS>EyF>ROETUI>ROETU24. Segn la eficiencia el orden fue: SyL>IM>RGR>IS=ROETU24>EyF>ROETUI.
4: TABLA 4 E, S, VPP, VPN, IY y EF de las pruebas de cribado evaluadas (Instituto de Bioqumica Aplicada, Tucumn, 2010) PRUEBA RGR IM SyL EyF IS ROETUI ROETU24 E 86 95 86 95 95 55 41 S 88 84 100 75 78 97 100 VPP 90 96 91 96 96 76 81 VPN 82 80 100 71 74 92 100 IY 74 79 86 70 73 52 41 EF 87 89 94 83 85 80 85

La combinacin del ndice de S&L, que fue el ms eficiente, con la ROETUI y ROETU24 determin: S= 97%, E = 94% , VPP = 97% , VPN = 94%, IY = 91% y EF = 96%.

DISCUSIN De acuerdo a los antecedentes, la ROETU se ha realizado con distintas concentraciones de NaCl, que varan desde 3,2 hasta 4,0 g/L (8, 9, 10, 11). En el presente trabajo, para probar la resistencia de los eritrocitos de forma inmediata y tras una incubacin de 24 horas a 37C, se us una solucin de NaCl de 4 g/L en buffer fosfato. Aunque en reportes previos ROETU ha mostrado una sensibilidad superior al 91%, la especificidad ha variado desde 64,2% hasta 95% (8). ROETUI y ROETU24 demostraron ser mtodos altamente sensibles (97 y 100%, respectivamente), pero poco especficos (55 y 41%, respectivamente), y con un VPN del 92 (ROETUI) y 100% (ROETU24) para el RBT. La baja especificidad se debe a la alta frecuencia de deficiencia de hierro en nuestra poblacin, patologa que no fue tenida en cuenta en estudios que informan una especificidad de 91% (9). El resultado del estudio actual coincide con El-Beshlawy et al (10) en nios de edad escolar en Egipto, quien determin una especificidad de ROETUI tambin baja (34,1%), con una sensibilidad alta (87%) y un VPN de 82,3%, debido a la alta prevalencia de anemia ferropnica en dicha poblacin. En Italia, ROETUI combinada con la observacin de la morfologa de los glbulos rojos en frotis sanguneo, sin embargo, detect virtualmente todos los sujetos con RBT (11).

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Los mejores ndices diagnsticos de -talasemia menor fueron el de S&L y el de Mentzer, segn el IY (86 y 79%, respectivamente), y la eficiencia (94 y 89%, respectivamente). Asimismo Okan et al (6) en Turqua, encontraron que el ndice de S&L fue el mejor para diferenciar AF de RBT, ya que mostr un IY de 88%; mientras que en la India, Rathod et al (12) concluyeron que las frmulas de S&L y de Mentzer fueron superiores en el diagnstico de RBT. El IM permiti diagnosticar el 71% de los individuos con RBT en Tucumn (Argentina) (13). Para Ntaios et al (14), el mejor fue el ndice de Green y King (G&K) segn IY (70,86%), seguido por el ndice de E&F, y el RGR; pero el primero no fue calculado en el presente estudio por no contar con el valor de RDW (Red Distribution Width). Los ndices G&K, Ricerca y E&F fueron recomendados para discriminar RBT y AF en nios chinos (15). En Npoles (Italia) el ndice E&F present el mejor IY (64,2%) y el de G&K la mejor EF (80,2%) (16); y en Palestina el ndice ms eficiente tambin fue el de G&K (17). Otros autores concluyeron que el RGR fue superior a todos los ndices calculados (18, 19). Las diferencias encontradas podran atribuirse a las diferencias genticas, que determinan fenotipos y comportamiento distintos en nuestra poblacin. Se ha sugerido que la combinacin de ROETU con los ndices discriminantes es superior a cualquiera de ellos usados individualmente (20). As, la asociacin del mejor parmetro evaluado, el ndice de S&L, con ROETUI y ROETU24 demostr ser el procedimiento ms eficiente para el diagnstico de RBT. El grupo GRBT adulto manifest diferencias significativas (p<0,05) en el RGR, VCM, HCM, ferremia, transferrina, y saturacin de transferrina con respecto al grupo GAF, por lo que una correcta evaluacin del metabolismo del hierro tambin contribuye al diagnstico diferencial. Sin embargo, dicho estudio no puede ser usado en el cribado de masas de poblacin. CONCLUSIONES Para diferenciar RBT de AF, en los laboratorios que cuentan con contador hematolgico, sera recomendable el clculo de los ndices de discriminacin, teniendo en cuenta que los ndices de S&L y Mentzer son los ms eficientes en nuestra poblacin. La prueba de ROETU, a pesar de su baja especificidad, sera aconsejable para aquellos laboratorios que carecen de hemograma automatizado, porque permite descartar de manera confiable aquellos individuos que no presentan RBT. Sin embargo, ninguna de estas pruebas de cribado permite el diagnstico seguro de RBT, por lo que el paciente sospechoso por cualquiera de estos mtodos, debera ser derivado a un centro especializado para su confirmacin. AGRADECIMIENTOS Este trabajo de investigacin fue realizado con el subsidio CIUNT 26/D431. BIBLIOGRAFA 1. World Health Organization. Report by the Secretariat. 11/05/2006. Thalassaemia and other hemoglobiphaties. Consultado el 04/08/2010. Disponible en Internet en: http://apps.who.int/gb/ebwha/pdf_files/EB118/B118_5-en.pdf

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thalassaemia minor from iron deficiency in Palestinian population. Int J Lab Hematol, 30 (4): 324-30; 2008. Beyan C, Kaptan K, Ifran A. Predictive value of discrimation indices in differential diagnosis of iron deficiency anemia and beta-thalassemia trait. Eur J Haematol, 78 (6): 524-6; 2007. Demir A, Yarali N, Fisgin T, Duru F, Kara A. Most reliable indices in differentiation between thalassaemia trait and iron deficiency anemia. Pediatr Int, 44 (6): 612-6; 2002. Manglani M, Lokheshwar MR, Vani VG, Bhatia N, Mhaskar V. NESTROFT-An effective screening test for beta thalassaemia trait. Indian Pediatr, 34: 702-7; 1997.

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ACADEMIA USO REVISIONES DE LA ACADEMIA NORTEAMERICANA DE PEDIATRA DEL USO PREBIOTIC TICO DE PROBIOTICOS, PREBIOTICOS. CME/CE News Author: Laurie Barclay, MD Pediatrics. Published November 29, 2010. Los beneficios actualmente conocidos de probiticos y prebiticos para la salud, inclusive aquellos agregados a frmulas infantiles y otros productos alimenticios para nios, fueron revisados en una Academia Norteamericana de la Pediatra (AAP) el informe se public el 29 de noviembre en lnea en la revista

Pediatrics.

"Los esfuerzos de optimizar el ambiente microbiano intestinal aument el inters en agregar probiticos y prebiticos a productos nutricionales. Al igual que con antibiticos, el uso y la eficacia de probiticos y prebiticos deben estar apoyados por evidencia basada en la medicina," escribe R. Franco. Greer, MD, FAAP, y Dan W. Thomas, MD, FAAP, y el Comit en la Nutricin; Seccin en la Gastroenterologa, Hepatology, y Nutricin. "El propsito de este informe clnico es de revisar los usos mdicos de probiticos y prebiticos y para resumir lo que se sabe actualmente de sus beneficios para la salud como suplementos dietarios aadidos a productos alimenticios comerciales para nios, inclusive en frmula infantil. La gua en este informe ayudar a proveedores peditricos de asistencia mdica a tomar decisiones apropiadas con respecto a la utilidad y el beneficio de probiticos y prebiticos para sus pacientes". 29 de noviembre Pediatrics. Los probiticos son suplementos o alimentos que contienen microorganismos viables capaces de cambiar la microflora del husped. Los ensayos clnicos aleatorios (RCTs) (por sus iniciales en ingls) han mostrado que los probiticos son moderadamente efectivos en el tratamiento de la gastroenteritis vrica aguda en nios sanos. Por otra parte, en bebs y nios con diarrea aguda por gastroenteritis viral, la administracin de probiticos tempranamente en el curso de la infeccin puede reducir la duracin de la diarrea en 1 da. A pesar de la falta de evidencia de la eficacia de probiticos para tratar la diarrea asociada a antibiticos en nios saludables, RCTs ha demostrado que son moderadamente efectivos para la prevencin. Aunque se necesitan ms estudios, alguna evidencia apoya el uso de probiticos para prevenir enterocolitis necrotizante en nios de bajo peso al nacer (peso de nacimiento entre 1000 y 1500 G). Se necesitan estudios adicionales antes que un probitico pueda ser recomendado para el tratamiento de sndrome de intestino irritable, de la enfermedad de Crohn, del clico, y del estreimiento, o para la prevencin de infecciones y alergia comunes en nios. Sin embargo, resultados preliminares fueron favorables en RCTs en los que probiticos fueron utilizados para tratar gastritis por Helicobacter pylori en nios, sndrome de intestino irritable, colitis ulcerativa crnica, y clico infantil, o para
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prevenir atopa de la niez. La evidencia a la fecha no ha mostrado un beneficio de probiticos en tratamiento o prevencin de cnceres humanos ni la enfermedad peditrica de Crohn. El uso rutinario de probiticos o prebiticos agregado a frmula infantil y otros alimentos destinados para el consumo por nios no es apoyado por evidencia de eficacia clnica actualmente disponible, pero estas frmulas no parecen ocasionar dao a nios sanos. Sin embargo, los probiticos no deben ser administrados a nios con enfermedades crnicas ni graves, inclusive a nios inmunocomprometidos, o desnutridos, o que porten dispositivos mdicos. Los prebiticos son suplementos o alimentos que contienen un ingrediente no digestible que promueve selectivamente el crecimiento y/o la actividad de bacterias probiticas nativas. Los prebiticos encontrados en la leche humana pueden ayudar a reducir infecciones comunes y eczema atpico en nios sanos, pero se necesita ms evidencia antes de recomendar agregar prebiticos a la frmula infantil. "Preguntas importantes quedan por establecer en las aplicaciones clnicas de los probiticos, inclusive la duracin ptima de la administracin de probiticos as como dosis y especies microbianas preferidas," concluyen los autores del informe. "El impacto a largo plazo en el microflora visceral en nios es desconocido. Tambin se queda sin establecer si hay beneficio biolgico significativo en la administracin de probiticos durante embarazo y lactancia comparado al beneficio biolgico potencial derivado de frmulas infantiles conteniendo probiticos". Informacin Adicional The complete Clinical ReportProbiotics and Prebiotics in Pediatrics is available on the American Academy of Pediatrics website. Definiciones Los probiticos son productos alimenticios que contienen microorganismos que pueden alterar el microflora del anfitrin con beneficios potenciales, y los prebiticos son ingredientes de alimentos no digestibles que estimulan el crecimiento de bacterias nativas de probitico. Simbitico es un producto que contiene tanto probiticos como prebiticos. Esta es una revisin de evidencias de beneficios de probiticos y prebiticos en nios, basados en RCTs recientes y revisiones sistemticas. El estudio destaca: Un nio al momento de nacer tiene un tracto gastrointestinal estril, pero la colonizacin bacteriana ocurre rpidamente, ms en el alimentado con bibern que en nios alimentados a pecho. Se piensa que la impronta bacteriana ocurre a travs de leche materna y puede contribuir a la salud general del nio.
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RCTs Publicados sugieren que hay un beneficio moderado al dar probiticos para prevenir las infecciones gastrointestinales agudas en nios. En el RCTs, el rotavirus fue el organismo ms comnmente estudiado, y los suplementos de probiticos fueron administrados generalmente en servicios de guarderas infantiles. En los estudios, los nios alimentados con probiticos tuvieron menos episodios de diarrea, y el nmero necesario para prevenir a 1 nio de la gastroenteritis ha sido estimado en 7. Hay tambin evidencia que los probiticos pueden reducir la duracin de gastroenteritis aguda en nios por 1 da. El tratamiento con probiticos ha demostrado reducir el riesgo de diarrea antibitico-asociado, con un riesgo relativo de 0,44. Se demostr que 1 de 7 casos de diarrea antibitico-asociado puede prevenirse por el uso de un probitico. Los probiticos pueden ser utilizados para reducir la incidencia de diarrea antibitico-asociado. Hay menos evidencia que apoye el uso de probiticos para la dermatitis atpica en nios. En 1 estudio, la incidencia de dermatitis crnica atpica en nios fue reducida cuando madres ingirieron probiticos durante embarazo. Sin embargo, en otro estudio, la ingestin de probioticos por nios no redujo la incidencia de dermatitis de atpica en nios de alto riesgo. En otro estudio ms de nios, el uso de probiticos por 8 semanas redujo la severidad de dermatitis de atpica en nios con esa condicin. Una revisin de Cochrane en 2008 concluy que haba evidencia insuficiente para demostrar la efectividad de probiticos en el tratamiento del eczema. Actualmente, hay evidencia insuficiente para recomendar probiticos a madres embarazadas para la prevencin de la enfermedad alrgica en la niez. Hay alguna evidencia de un beneficio de probiticos para prevenir enterocolitis necrotizante en nios recin nacidos, en un estudio de 27 nios tratados, previno 1 caso, en otro estudio de 21 nios tratados, previno 1 caso. Sin embargo, no todos los probiticos ha sido estudiados, y no puede generalizarse la recomendacin de su uso. Hay un beneficio moderado de probiticos para la infeccin de H. pylori en adultos, y se necesitan ms estudios antes de recomendar su uso para erradicar gastritis por H. pylori en nios. Hay una sugerencia que los probiticos pueden ser beneficiosos en la enfermedad de intestino irritable, pero hay evidencia insuficiente al presente para recomendar su uso para colitis ulcerativa o la enfermedad de Crohn en nios. Hay evidencia insuficiente para el uso de probiticos para el estreimiento o para sntomas de sndrome de intestino irritable. En nios exclusivamente criados a pecho, los probiticos han sido encontrado tiles para el clico infantil, pero se necesitan ms estudios antes que puedan ser recomendados generalmente. Hay evidencia insuficiente para apoyar el uso de probiticos o prebiticos en infecciones extraintestinales en nios. Los prebiticos ha sido utilizados para desrdenes alrgicos e infecciones, pero hay evidencia insuficiente para apoyar recomendarlos al presente.
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No se hicieron RCTs para probar la eficacia de prebiticos en mantener la remisin en la colitis de ulcerativa en humanos. Aunque estudios en animales hayan apoyado el uso de prebiticos en la prevencin de cncer, se necesitan estudios en humanos. El uso combinado de probiticos con prebiticos todava no ha mostrado ser beneficioso en enfermedades alrgicas pero puede mejorar la funcin inmune en conjunto. Los probiticos no debe ser dados a nios que estn gravemente o crnicamente enfermos hasta que su seguridad haya sido establecida. Implicancias clnicas: Hay moderada evidencia para apoyar el uso de probiticos, pero no de prebiticos, en la gastroenteritis por rotavirus y clico infantil en nios exclusivamente criados a pecho. Hay evidencia insuficiente para recomendar probiticos o prebiticos para infecciones extraintestinales o desrdenes alrgicos en nios.

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RESUMENES DE TESIS APROBADAS EN 2010 RESUMENES DE TESIS APROBADAS EN 2010


"CARACTERIZACIN DE SALIVARICINA CRL 1328 Y SU APLICACIN EN EL DISEO DE PRODUCTOS FARMACUTICOS PARA LA PREVENCIN DE INFECCIONES UROGENITALES." TESISTA: Licenciado Esteban Vera Pingitore DIRECTORA: Dra. Mara Elena Ftima Nader de Macas DIRECTOR ASOCIADO: Dr. Fernando Juan Manuel Sesma COMISIN DE SUPERVISIN DE TESIS: Dra. Graciela Font de Valdz; Dr. Faustino Sieriz Este trabajo fue realizado en el Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET), de la Fundacin Miguel Lillo y de la Fundacin para la Educacin, la Ciencia y la Cultura (FECIC). Con el apoyo financiero del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET) y la Agencia Nacional de Promocin Cientfica y Tecnolgica (ANPCyT). RESUMEN Las infecciones urogenitales femeninas constituyen un problema social y de salud pblica con una elevada tasa de incidencia a nivel mundial. Como resultado pueden producirse complicaciones ginecolgicas y de embarazos que afectan tanto a la madre como al recin nacido. Por otro lado, la recurrencia de estas infecciones disminuye la calidad de vida de las mujeres que las padecen. El ecosistema urogenital de mujeres sanas en edad reproductiva esta representado por una amplia diversidad microbiana, en el que estn presentes diferentes especies de lactobacilos, que si disminuyen o desaparecen se incrementa el riesgo de infecciones. La aplicacin y disponibilidad de antibiticos en el tratamiento de estas infecciones han mejorado significativamente la salud y el bienestar de las mujeres. Sin embargo, la aparicin de cepas resistentes a antibiticos se incrementa en forma permanente. Como resultado, se requieren profilaxis alternativas y estrategias teraputicas. Una alternativa vlida es la aplicacin de productos probiticos conteniendo bacterias lcticas benficas y/o bacteriocinas. Lactobacillus salivarius CRL 1328 es un microorganismo aislado de vagina humana con diferentes propiedades benficas, entre ellas la produccin de bacteriocina (salivaricina CRL 1328) con actividad antimicrobiana frente a patgenos urogenitales. El objetivo de este trabajo es evaluar la posibilidad de incluir salivaricina en el diseo de un producto farmacutico a ser empleado en la reconstitucin de la microbiota urogenital y en la prevencin de infecciones, combinndola con lactobacilos con propiedades benficas. Para ello, se iniciaron diferentes estudios bsicos y aplicados tendientes a conocer en detalle el sistema de produccin de la sustancia antimicrobiana. Se estudi la influencia de diferentes nutrientes sobre el crecimiento y produccin de salivaricina por Lactobacillus salivarius CRL 1328, empleando un medio qumicamente definido. Se caracteriz el locus responsable de produccin de salivaricina, el cual est constituido por 9 genes responsables de la produccin, inmunidad y secrecin
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de salivaricina. Esta bacteriocina pertenece a la clase IIb y est compuesta por dos pptidos estructurales Sal y Sal. Se identific el mecanismo de accin de la salivaricina utilizando Enterococcus faecalis como cepa sensible. Los pptidos maduros de la salivaricina, Sal y Sal, fueron qumicamente sintetizados. Estos pptidos exhiben su actividad antimicrobiana ptima en una razn equimolecular. Se determin que salivaricina disipa el potencial de membrana y el gradiente de protones a travs de la membrana, ambos componentes de la fuerza protomotriz. Se evalu la estabilidad de salivaricina CRL1328 al proceso de liofilizacin y almacenamiento a diferentes temperaturas. Se observ que se conserva activa por un periodo de por lo menos 18 meses, tanto a temperatura ambiente como a 4C y a -20C, obtenindose mejores resultados a las dos ltimas temperaturas, principalmente cuando se liofiliza con polietilenglicol, sacarosa y cido ascrbico. Por otro lado se evalu la resistencia al proceso de liofilizacin y almacenamiento de distintas formulaciones conteniendo combinaciones de salivaricina y diferentes sustancias y lactobacilos vaginales seleccionados para su inclusin en el diseo de un compuesto farmacutico. Los resultados obtenidos de viabilidad de microorganismos y actividad antimicrobiana de salivaricina representan un avance en el diseo de un producto de farmacutico dirigido a prevenir infecciones urogenitales o reestablecer la microbiota. Y a la vez son originales, ya que no existe en el mercado farmacutico un producto con las caractersticas del obtenido en el presente trabajo de tesis doctoral.

REACCIONES ENZIMTICAS DE INTERS EN LA INDUSTRIA QUMICA Y/O FARMACUTICA TESISTA: Bioq. Cintia Mariana Romero DIRECTOR: Dr. Mario Domingo Baigor COMISION DE SUPERVISION: Dra. Licia Mara Pera; Dra. Virginia Rodriguez; Dr. Ral Salomn; Dr. Mario Domingo Baigor. Este trabajo de Tesis Doctoral se realiz en: Planta Piloto de Procesos Industriales y Microbiolgicos. Con el apoyo financiero de: Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET) Agencia Nacional de Promocin Cientfica y Tcnica (ANPCYT), Secretara de Ciencia y Tecnologa (SECYT), Consejo de Investigaciones de la Universidad nacional de Tucumn (CIUNT), Planta Piloto de Procesos Industriales y Microbiolgicos (PROIMI). RESUMEN En la ltima dcada las reacciones de hidrlisis y de sntesis han alcanzado gran importancia en la industria qumica y farmacutica. Puede mencionarse la hidrlisis de grasas y aceites, la sntesis de steres de azcares y cidos grasos, la
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produccin de intermediarios para sntesis orgnica, la acetilacin de alcoholes, reacciones de Transesterificacin, la resolucin de mezclas racmicas, etc. Los steres de azcares y cidos grasos son surfactantes no inicos naturales. Son sintetizados a partir de componentes naturales de los alimentos y muestran propiedades prebiticas. La selectividad enzimtica, que incluye sustrato, estreo-, regio- y quimioselectividad, puede ser marcadamente modificada por las condiciones experimentales del entorno. En particular el uso de solventes orgnicos permite incrementar la solubilidad de sustratos no polares, facilitar la separacin del producto, suprimir las reacciones enzimticas no deseadas y favorecer las reacciones de sntesis, imposibles de biocatalizar en agua. Las lipasas (triacilglicerol acilhidrolasas, EC 3.1.1.3) son enzimas que, dependiendo de las condiciones de reaccin, catalizan la hidrlisis o la sntesis de steres. Algunas de estas enzimas, disponibles comercialmente, se encuentran en uso para una gran variedad de aplicaciones biotecnolgicas. Los sistemas no convencionales, constituyen una herramienta interesante para incrementar la productividad de muchos bioprocesos en los que participan estas enzimas. En este trabajo de tesis doctoral se plante el estudio de reacciones enzimticas de inters en la industria qumica y/o farmacolgica utilizando enzimas libres y/o ligadas a la biomasa como as tambin el desarrollo de sistemas convencionales y/o no convencionales para la produccin de sustancias de aplicacin industrial. Se logr identificar actividad lipasa producida por un hongo filamentoso, A. niger MYA 135 tanto extracelular como ligada a la biomasa, ambas con interesantes propiedades biotecnolgicas. Del estudio de estas actividades enzimticas se puede concluir que tienen una promisoria aplicacin en diversas reacciones tanto de hidrlisis como de sntesis tales como la produccin de biodiesel, ya que ambas actividades libre y ligada a la biomasa mostraron capacidad de sntesis y estabilidad en solventes hidroflicos, fundamentalmente metanol y etanol, solventes que participan junto a un cido graso en la produccin de este biocombustible. Tambin estos sistemas fueron capaces de sintetizar distintos esteres de azcares y cidos grasos que se utilizan como surfactantes y aromatizantes, respectivamente, en la industria alimenticia. Estas actividades enzimticas mostraron ser tipo y regioselectivas como as tambin resistentes a pH y temperatura propiedades que las hacen muy interesantes para diversas reacciones de aplicacin industrial, como la industria de detergentes y la alimenticia. Se logr purificar e identificar una lipasa extracelular con propiedades interesantes, la que podra ser utilizada en potenciales reacciones en sistemas no convencionales de alto valor agregado. Por otro lado, los beneficios que presenta la actividad ligada al micelio en la produccin de biodiesel, convierten a este sistema en el elegido como proyeccin en la produccin de este biocombustible, debido a que es un sistema econmico y de factible manipulacin a nivel industrial.

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ESTUDIOS DE COMPONENTES CELULARES Y EXTRACELULARES EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE INTOXICACIN CON PLOMO TESISTA: Bioq. Rossana Cristina Prez Aguilar DIRECTORA: Dra. Sara Serafina Snchez COMISION DE SUPERVISION: Dra. Sara Serafina Snchez; Dra. Silvia Nlida Fernndez de Brunetti; Dra. Susana Beatriz Genta Este trabajo fue realizado en el Instituto de Biologa Dr. Francisco D. Barbieri de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumn y en el Departamento de Biologa del Desarrollo del Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas (INSIBIO CONICET) RESUMEN La contaminacin ambiental y particularmente la del agua de bebida tiene gran impacto en la salud de la poblacin. En las ltimas dcadas, la rpida y creciente industrializacin y urbanizacin produjo un incremento global de contaminantes, entre ellos los metales pesados. Entre estos el plomo ocupa un lugar importante como contaminante atmosfrico, de los suelos por erosin de los depsitos naturales y del agua para consumo. Este metal produce un amplio rango de efectos txicos en organismos vivos, tanto humanos como animales. As el sistema nervioso, el hgado y el rin son blancos de la accin txica del plomo, causando alteraciones morfolgicas y funcionales. Sin embargo, hasta el presente los mecanismos celulares y moleculares implicados en la patobiologa plmbica no estn totalmente dilucidados. El presente trabajo de Tesis Doctoral estuvo dirigido a analizar las alteraciones celulares y de la matriz extracelular del hgado y del rin, rganos responsables de la homeostasis corporal y blanco de la accin del plomo. Para llevar a cabo los objetivos propuestos se desarroll un modelo de intoxicacin plmbica en ratas Wistar, administrando el metal como acetato de plomo al 0.06% en el agua de bebida durante 4 meses, considerando la importancia de esta va de administracin. En los animales expuestos al plomo se observ a nivel heptico un incremento significativo de las protenas extracelulares laminina, colgeno IV y fibronectina, particularmente en los espacios perisinusoidales, determinado por tcnicas inmunohistoqumicas. A nivel ultraestructural se evidenci la trasformacin fenotpica de las clulas estrelladas hepticas en clulas tipo miofibroblastos SMA+ proponindose a este tipo celular como responsable del incremento de las molculas extracelulares. Adems se determin la participacin de la va de sealizacin TGF en la accin txica del plomo. En los animales expuestos al plomo se evidenci mediante cromatografa en capa fina e inmunohistoqumica, que los ganglisidos GM1, GM2 y GM3, molculas de superficie celular, mostraron cambios significativos en su expresin y localizacin. Estos resultados permiten sugerir que en el hgado el plomo induce la activacin y transformacin de las clulas estrelladas en miofibroblastos y el incremento de la sntesis de matriz extracelular, alteraciones vinculadas con el inicio de un proceso fibrognico. A nivel renal la exposicin plmbica produjo variaciones en la expresin y localizacin de las molculas extracelulares laminina, colgeno IV y fibronectina.
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Estas alteraciones se acompaan de cambios ultraestructurales a nivel glomerular y tubular. La intoxicacin plmbica produjo variaciones cuali y cuantitativas en los ganglisidos GM1, GM2, GM4 y 9-O-Acetil GD3 presentes en la superficie celular glomerular y tubular. Particularmente esta ltima molcula se increment significativamente a nivel glomerular lo que sugiere su participacin en la regulacin de los procesos apoptticos renales y por lo tanto en los mecanismos de defensa celular ante la exposicin txica. Los resultados de este Trabajo de Tesis evidencian que la incorporacin de plomo con el agua de bebida an a bajas dosis produce modificaciones en las molculas de superficie celular y de la matriz extracelular en hgado y rin, alterando la compleja trama molecular que regula el comportamiento celular.

DETECCIN, DETECCIN, PURIFICACIN BIODIRIGIDA Y ANLISIS ESTRUCTURAL DE METABOLITOS BIOACTIVOS DE ORIGEN VEGETAL TESISTA: Farm. Melina Araceli Sgariglia DIRECTORA: Dra. Marta Amelia Vattuone COMISION DE SUPERVISION : Dra. Marta Amelia Vattuone; Dra. Susana Beatriz de Ftima Genta; Dr. Csar Atilio Nazareno Cataln. El presente trabajo de tesis fue realizado en la Ctedra de Fitoqumica del Instituto de Estudios Vegetales Dr. Antonio Rodolfo Sampietro de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn. Tucumn. Argentina. HIPTESIS Algunos de los extractos vegetales obtenidos poseen actividad antimicrobiana, antiinflamatoria y/o antioxidante, careciendo de actividad citotxica y genotxica. La composicin de por lo menos un extracto es conveniente para llevar a cabo el aislamiento y purificacin biodirigidos de constituyentes con actividad antimicrobiana (sobre patgenos humanos y/o fitopatgenos de importancia en agricultura), antiinflamatoria y/o antioxidante; y la determinacin de su estructura qumica. El/Los componente/s bioactivo/s actan en los organismos en niveles o con mecanismos diferentes a los conocidos. OBJETIVOS GENERALES Encontrar, en las plantas seleccionadas estructuras qumicas nuevas que acten en los organismos en niveles o con mecanismos diferentes a los conocidos. Estas podran ser la base para que mediante modificaciones qumicas adecuadas de la estructura bsica, llevadas a cabo por especialistas en ese tema, se produzcan principios activos de sntesis o de hemi-sntesis y se lleguen a desarrollar opciones teraputicas ventajosas. Validar Cientficamente los usos etnomedicinales de las plantas seleccionadas.

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OBJETIVOS ESPECFICOS Practicar extracciones con tres solventes diferentes en partes areas de plantas nativas o naturalizadas del norte argentino que se utilizan como cicatrizantes, vulnerarias o antiinflamatorias. Determinar las actividades antimicrobiana, antioxidante y antiinflamatoria, as como tambin las actividades citotxica y genotxica en los extractos. Seleccionar un extracto para llevar a cabo el aislamiento y purificacin biodirigidos de el/los constituyente/s con las actividades mencionadas. Determinar la estructura qumica de la/s sustancia/s aislada/s responsable/s de las actividades biolgicas enunciadas.

BIOACTIVOS SMALLANTHUS CONSTITUYENTES BIOACTIVOS DE SMALLANTHUS CONNATUS Y PRUNUS FUNGICIDA TUCUMANENSIS. SNTESIS DEL POTENTE FUNGICIDA NATURAL VERNOLEPIN. SNTESIS TESISTA: Sandra Mnica Bach DIRECTOR Dr. Csar Atilio Nazareno Cataln COMISION DE SUPERVISIN: Dr. Csar Atilio Nazareno Cataln; Dra. Mara Ins Ybarra; Dra. Susana Beatriz de Ftima Genta Durante el desarrollo de la presente tesis doctoral se alcanzaron los siguientes logros: 1) Se realiz el aislamiento y la elucidacin estructural de los metabolitos bioactivos de Smallanthus connatus, a saber: la ls fluctuanin y su anlogo con resto 2 metilbutirato que result ser nuevo como producto natural; los diterpenos cido ent kaur16en19oico y epimanoilxido; el triterpeno amirina; los esteroles sitosterol y stigmasterol adems de varios sesquiterpenos y otros metabolitos ampliamente distribudos en el reino vegetal. 2) Por comparacin con las ls producidas por S. macroscyphus, se obtuvo evidencia en apoyo al punto de vista que S. connatus y S. macroscyphus son especies diferentes. 3) De la corteza de Prunus tucumanensis se aislaron cantidades significativas de sitosterol y nalcanoles, encontrndose que el extracto metanlico es un poderoso secuestrante de radicales libres, ms efectivo que el butilhidroxitolueno (bht); posee una capacidad antioxidante del 67.6% en comparacin al bht y tiene un elevado contenido de fenoles. 4) Se aportaron datos relevantes sobre la actividad antiinflamatoria in vitro del extracto metanlico de la corteza de P. tucumanensis, que exhibe actividad antiinflamatoria similar a los preparados comerciales de Prunus africana utilizados en el tratamiento de la hiperplasia prosttica benigna (hpb). 5) Se desarroll un procedimiento simple para la extraccin y aislamiento de minimolide cristalina a partir de hojas de Mikania minima sin necesidad de utilizar mtodos cromatogrficos. 6) Se realiz la primera sntesis estereo y enantioespecfica de vernolepin a partir de minimolide utilizando un procedimiento de tres pasos con un rendimiento global de aproximadamente 36%. El paso clave de la sntesis es el reordenamiento de cope de minimolide en tolueno a reflujo.
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7) Se presentan los resultados comparativos de la actividad antifngica de vernolepin y anfotericin b frente a algunas cepas de hongos, que abren un panorama muy favorable para la utilizacin de vernolepin como agente antifngico.

ENOLGICAS NOPROPIEDADES ENOLGICAS DE LEVADURAS NO-SACCHAROMYCES ASOCIADAS A BEBIDAS FERMENTADAS. TESISTA: Lic. en Biotec. Luca Margarita Mendoza DIRECTORA : Dra. Marta Elena Faras COMISIN DE SUPERVISIN: Dra. Mara Cristina Maldonado; Dra. Fabiana Mara Saguir RESUMEN Saccharomyces cerevisiae, levadura predominante en la fermentacin alcohlica de los vinos puede co-habitar con especies no-saccharomyces en los primeros estadios del proceso de vinificacin. hanseniaspora/kloeckera, candida y pichia, gneros ms frecuentes en fermentaciones espontneas, pueden sobrevivir por perodos prolongados contribuyendo a la composicin qumica y caractersticas organolpticas del vino. La fermentacin malolctica conducida por bacterias lcticas, principalmente Oenococcus oeni, ocurre despus de la fermentacin alcohlica contribuyendo a disminuir la acidez, mejorar el flavor y estabilizar microbiolgicamente el producto final. En este trabajo de tesis se realiza una investigacin sistemtica de la distribucin y expresin de los diferentes parmetros de inters enolgico en cultivos puros y mixtos de levaduras no-saccharomyces asociadas con la fermentacin natural del mosto de uva. Se aislan e identifican fenotpica y molecularmente 52 cepas de levaduras no-saccharomyces provenientes de la superficie y mosto de uvas de diferentes varietales de la regin noroeste de Argentina. Las levaduras pertenecen a los gneros candida, pichia, metschnikowia, cryptococcus, rhodotorula y schizosaccharomyces, siendo el gnero mayoritario kloeckera/hanseniaspora. Las levaduras no-saccharomyces presentan bajo grado alcohlico, mayor acidez voltil y mayor capacidad para producir compuestos de aroma en relacin a cepas de Saccharomyces cerevisiae. En base a sus ptimas caractersticas enolgicas, se seleccionan Kloeckera apiculata mc1 y Saccharomyces cerevisiae mc2. Cultivos mixtos de las levaduras seleccionadas presentan menor poblacin celular que sus respectivos cultivos puros y la menor biomasa no se correlaciona con la competencia por sustratos nitrogenados o la produccin de factor killer. Cultivos puros y mixtos de K. apiculata presentan ptimos parmetros cinticos y metablicos a bajos valores de ph mientras que S. cerevisiae no modifica estos parmetros a diferentes ph ensayados. La fermentacin a bajas temperaturas conduce a una mayor contribucin de la levadura no-saccharomyces. El SO2 no muestra efectividad para controlar el crecimiento de K. apiculata en cultivos puros y mixtos. Las levaduras vnicas ejercen actividad nula, estimulatoria e inhibitoria sobre bacterias lcticas de inters enolgico, siendo el efecto cepa dependiente. An cuando Oenococcus oeni presenta mayor sensibilidad que Lactobacillus hilgardii a
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los compuestos inhibitorios producidos por las levaduras, su actividad malolctica especfica incrementa. La inhibicin ejercida por S. cerevisiae mc2 sobre el crecimiento bacteriano involucra un efecto sinrgico entre metabolitos de fermentacin y factores proteicos producidos por la levadura. Las microvinificaciones realizadas con el cultivo mixto de las levaduras seleccionadas permiten obtener vinos con mayor aroma frutal y equilibrio-armona en relacin al cultivo puro de s. cerevisiae. la inoculacin secuencial con o. oeni x2l mejora las caractersticas aromticas, astrigencia y equilibrio-armona de los vinos, logrndose una aceptacin unnime de un grupo de catadores de bodegas. Los resultados de esta tesis doctoral permiten proponer por primera vez un cultivo iniciador mixto de levaduras no-saccharomyces y saccharomyces, k. apiculata mc1 y s. cerevisiae mc2, con cepas autctonas de la regin del noroeste argentino. las ptimas caractersticas organolpticas del producto fermentado durante la microvinificacin, nos permite asegurar la potencial aplicacin de las levaduras seleccionadas en la industria vitivincola para obtener vinos de calidad controlada y perfil de aroma y sabor apropiados.

COMPUESTOS FOTOPROTECTORES (CAROTENOIDES PRODUCCIN DE COMPUESTOS FOTOPROTECTORES (CAROTENOIDES Y LEVADURAS MICOSPORINAS) POR LEVADURAS TESISTA: Lic. Martn Molin DIRECTORA: Dra. Mara Rosa Giraudo DIRECTOR ASOCIADO: Dr. Faustino Sieriz COMISION DE SUPERVISION: Dr. Guillermo Ral Castro; Dra. Mara Eugenia Mnaco RESUMEN La presente tesis doctoral trata del estudio de la produccin y acumulacin de compuestos orgnicos naturales, las micosporinas y los pigmentos carotenoides, por levaduras aisladas en la patagonia noroccidental, algunas cepas de referencia y mutantes, con nfasis en la actividad biolgica que cumplen. El trabajo provee avances en el conocimiento bsico y aplicado, establece la funcin fotoprotectora de los compuestos de referencia frente la radiacin UV-B, sus caractersticas fsico-qumicas, los factores queafectan su produccin, y su potencial biotecnolgico. Los resultados obtenidos permiten demostrar que distintas especies de levaduras son capaces de producir una micosporina nica, determinada mgg y diversos pigmentos carotenoides entre los que se destaca la astaxantina (en cepas nativas de Xanthophyllomyces dendrorhous). Se establece un mtodo de extraccin de mgg especfico para determinaciones cuantitativas, con etanol 80% a 80c, y uno de extraccin con agua destilada para obtencin de mgg aplicable a escala industrial. Se describe un mtodo de purificacin de mgg (carbn activado, resinas de intercambio inico) apto para produccin industrial, y se establece que la molcula es estable en condiciones extremas de pH ytemperatura lo que asegura su integridad durante la extraccin y purificacin.
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Estos mtodos permiten la posterior obtencin de pigmentos o el empleo de la biomasa en otras aplicaciones. La comparacin de la supervivencia de distintas cepas capaces de producir y acumular distintas concentraciones de carotenoides y/o mgg permite demostrar que ambos compuestos, separados o juntos, ejercen un rol fotoprotector contra la radiacin UV-B y que pequeas variaciones en su acumulacin son importantes para determinar la supervivencia intraespecfica. Del total de pigmentos identificados, slo la torularrodina y astaxantina protegen contra la radiacin UV-B. la mgg ejerce un efecto fotoprotector en concentraciones mayores a los 2,5 mg g-1. esta molcula resulta ser ms fotoestable que otros maas conocidos y presenta capacidad antioxidante contra el oxgeno singulete. De las levaduras nativas se destaca la especie Xanthophyllomyces dendrorhous, como especie productora de mgg y astaxantina. las cepas nativas producen ms cantidad de mgg que las de referencia alcanzando un mximo 39 mg g-1. sin embargo la mxima produccin de mgg fue alcanzada por la cepa mutante, obtenida a lo largo de este trabajo. La acumulacin de mgg en esta cepa tiene lugar despus de haber alcanzado la fase estacionaria de crecimiento, que indica su condicin de metabolito secundario. Las concentraciones superiores a 20 g l-1 de glucosa en el medio de cultivo, inhiben casi totalmente la acumulacin, en tanto que altas concentraciones de peptona la estimulan (valor mximo alcanzado, 93 mg g-1). Todos los factores estresantes utilizados (excepto la radiacin) tuvieron efectos negativos o neutros sobre la acumulacin de mgg; en pocos casos la acumulacin de pigmentos se vio estimulada (mximo alcanzado, 1147 g g-1). Se demuestra que la produccin y extraccin de mgg puede realizarse en ciclos repetidos de fermentaciones empleando clulas inmovilizadas en perlas de alginato de calcio. Las micosporinas de levaduras en concentraciones de 5% bloquean eficazmente la radiacin UV-B y poseen gran potencial biotecnolgico para ser utilizadas en la formulacin de pantallas solares para uso humano.

SISTEMA ALIMENTACIN DESARROLLO DE UN SISTEMA DE ALIMENTACIN PROBITICA PARA GANADO PORCINO TESISTA: Farmacutica Gloria Romina Ross DIRECTOR : Dra. Silvia Nelina Gonzlez COMISIN DE SUPERVISIN: Mag. Fernando Daniel Holgado; Dr. Carlos Horacio Gusils Len Este trabajo de tesis doctoral se llev a cabo en la Ctedra de Salud Pblica de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumn y en el Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET), de la Fundacin Miguel Lillo y de la Fundacin para la Educacin, Ciencia y Cultura (FECIC). Se realiz con el apoyo financiero del CONICET y el CIUNT.
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RESUMEN El desarrollo sustentable responde a las necesidades del presente de forma igualitaria, pero sin comprometer la sobrevivencia y prosperidad de generaciones futuras. Esto implica un equilibrio dinmico entre poblacin, medio y productividad. en la actividad agropecuaria el concepto involucra reformas para evitar impactos en sobre-explotacin de recursos no renovables, efectos ambientales y calidad alimentaria. El uso de los antibiticos, como promotores de crecimiento se expandi con la ganadera intensiva y actualmente resulta un punto de inflexin ya que, adems de resistencia microbiana, existe un riesgo potencial para la salud humana por efecto residual en alimentos. Por lo expuesto, es necesario reducir la dependencia a los mismos. Una opcin, poco factible econmicamente, sera evitar hacinamiento y aplicar tcnicas de control sanitario para reducir infecciones. Otra eleccin, sera desarrollar alternativas que favorezcan el crecimiento y la eficiencia de conversin alimenticia. en este contexto, los probiticos resultan una alternativa atrayente. Su accin puede resumirse en: colonizacin intestinal; exclusin de patgenos intestinales; estimulacin del sistema inmune e influencia positiva en actividades metablicas. An cuando existen diversas formas de administrar un probitico, la sensibilidad de muchas de estas bacterias a las condiciones ambientales, limitan su uso en alimentos no refrigerados y suplementos farmacuticos. Por ello la tendencia es aplicar microencapsulacin como proteccin celular durante su almacenamiento y posterior trnsito gastrointestinal. Los objetivos de este trabajo de tesis doctoral fueron, a partir de cerdos jvenes sanos, aislar y seleccionar cepas potencialmente probiticas, evaluar efectos benficos in vitro e in vivo y adems posible forma de administracin. las bacterias, aisladas de heces, fueron seleccionadas por propiedades probiticas generales y especficas. Cumplieron este requisito tres bacterias lcticas: Enterococcus faecium c 14, Enterococcus faecium c 38 y Lactobacillus amylovorus lb 31. Una mezcla equitativa de estas cepas se administr, oralmente, a cerdos destetados durante 35 das para evaluar, en animales suplementados con probiticos (grupo tratado), parmetros de crecimiento, flora intestinal, cidos grasos tisulares, histologa intestinal, y compararlos con valores de animales del grupo control (sin probitico). Los animales del grupo tratado presentaron, mejor conversin de alimentos, disminucin significativa de enterobacterias, reduccin de cidos grasos saturados con incremento de cido linoleico conjugado en tejidos y una mejor conservacin de la arquitectura intestinal con menor nmero de infiltrados celulares y eosinfilos. se optimiz un proceso de microencapsulacin para vehiculizar las cepas seleccionadas, empleando como matriz alginato de calcio. Con ello se logr mejorar viabilidad, resistencia a condiciones gstricas y liberacin bacteriana en medio intestinal simulado. Al evaluar vida de estante de las cpsulas liofilizadas, se evidenci mantenimiento de viabilidad celular durante 180 das. De lo expuesto se deduce la importancia de desarrollar probiticos destinados al ganado porcino ya que podran emplearse para mejorar su estado sanitario y productividad. as la carne porcina podra ser altamente competitiva, an en los mercados mundiales ms exigentes, satisfaciendo la demanda de carne segura y saludable por parte de los consumidores.
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Los resultados de esta tesis doctoral representan el primer ejemplo de estudios in vivorealizados con probiticos husped especfico para ganado porcino.

POLINUCLEARES TRANSICIN 4,4COMPLEJOS POLINUCLEARES DE METALES DE TRANSICIN CON 4,4LIGANDO AZOBIS (PIRIDINA) COMO LIGANDO PUENTE TESISTA: Lic. Gaston Pourrieux DIRECTOR: Dr. Nstor Eduardo Katz DIRECTOR ASOCIADO: Dra. Florencia Fagalde COMISIN DE SUPERVISIN: Dra. Ada Ben Altabef; Dr. Eleuterio Arancibia RESUMEN Los complejos de coordinacin vienen siendo objeto de estudio en el campo de la nanotecnologa debido a la posibilidad que estos ofrecen de ser utilizados para el diseo de dispositivos moleculares. En particular para los complejos de los metales de transicin renio y rutenio sus propiedades fisicoqumicas dependen del entorno de coordinacin, por lo cual, una adecuada eleccin del los ligandos que rodean al tomo central permitira controlar casi a voluntad procesos tales como la transferencia electrnica y transferencia de energa fenmenos de alta relevancia para la construccin de alambres moleculares, interruptores moleculares, etc. El ligando 4,4- azo(bis)piridina (4,4-azpy) por sus caractersticas estructurales puede ser utilizado como puente entre dos centros metlicos y permitir la transmisin de efectos electrnicos entre estos debido a que presenta nitrgenos piridnicos y nitrgenos del grupo azo --N=N-- de los anillos aromticos que conjugados con la nube de electrones posibilitan una deslocalizacin de carga a lo largo de su estructura. Buscando estudiar las propiedades fisicoqumicas de complejos en los cuales se encuentre presente la molcula de 4,4-azpy se sintetizaron los complejos mononucleares [Ru(trpy)(bpy)(4,4-azpy)](pf6)2.H2O ; [Ru(tpm)(bpy)(4,4-azpy)](pf6)2 .3 H2O ; [Re(bpy)(co)3 (4,4-azpy)](cf3so3) la especie dinuclear simtrica 4,4-azpy)Ru(bpy)(trpy)](pf6)4.2 H2O , las especies [(trpy)(bpy)ru( dinucleares asimtricas [(trpy)(bpy)Ru(4,4-azpy)ru(NH3)5] (pf6)4.10 H2O ; 4,4-azpy) Ru(NH3)5](pf6)3.ch3CN.6 H2O , ms las especies [(bpy)(Co)3Re(dinucleares de valencia mixta [(trpy)(bpy)Ruii(azpy)ruiii(nh3)5]5+, [(bpy)(Co)3Re(azpy)Ru(NH3)5]4+ con bpy = 2,2-bipiridina y 4,4-azpy = 4,4azobis(piridina) , trpy = 2,2:6,2-terpiridina y tpm = tris(1-pirazolil)metano. Los complejos sintetizados se caracterizaron mediante diferentes tcnicas: espectroscopia UV-visible, voltamperometra cclica, espectroelectroqumica, anlisis elemental, espectroscopia vibracional, resonancia magntica nuclear y espectrofluorometria a temperatura ambiente y a bajas temperaturas (77 k). Para el caso de los complejos dinucleares asimtricos de valencia mixta se analiz la transferencia intramolecular de electrones utilizando el formalismo de marcu-hush. Se estudio el efecto de diferentes estmulos externos sobre las propiedades pticas de los complejos sintetizados observndose cambios reversibles en los
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espectros uv-visible y de fluorescencia modulados por [H+] , luz y potencial electroqumico aplicado. Los cambios en las propiedades pticas debido a variaciones de ph permitieron calcular el pka del estado fundamental, mientras que la irradiacin a una longitud de onda adecuada permiti comprobar que la fotoisomerizacin del ligando 4,4-azpy de la forma trans a la forma cis ocasiona un aumento o recuperacin de emisin en los complejos de renio. por ultimo la electrolisis a potencial controlado permite tambin el control de las propiedades fotofsicas de algunos de los complejos cuando se reduce de manera selectiva el ligando 4,4'-azpy. los clculos computacionales utilizando la teora del funcional de la densidad (dft) verificaron que la isomerizacin del ligando 4,4'-azpy provoca una inversin de estados en la cual el orbital desocupado de menor energa lumo para la configuracin cis , esta centrado en la bpy recuperndose as la emisin caracterstica de cromforo [Re(bpy)(Co)3]. Se concluye que la incorporacin de un ligando tan verstil como lo es la 4,4'-azpy en complejos de rutenio y renio posibilita el control de muchas de sus propiedades fisicoqumicas lo cual es de gran relevancia para la utilizacin de estos complejos en el diseo de dispositivos moleculares. ANCHOTA ANCHOITA) EFECTO FERMENTACIN DE ANCHOTA (ENGRAULIS ANCHOITA) SALADA. EFECTO SOBRE DEL STRESS SALINO SOBRE LA FLORA LCTICA INVOLUCRADA TESISTA: Lic. Carolina Belfiore DIRECTOR: Dra. Graciela M. Vignolo DIRECTOR ASOCIADO: Dr. Ral R. Raya COMISION DE SUPERVISION: Dra. Marta Elena Faras; Dra. Marcela Alejandra Ferrero RESMEN Engraulis anchoita es la especie ms abundante en el sudeste del ocano atlntico (4.300.000 tn) y es un recurso compartido entre Brasil, Argentina y Uruguay. Argentina es el nico que lo utiliza para alimentacin humana, siendo pionero en su explotacin y manufactura. E. anchoita es una de las especies pelgicas ms apta para aplicar tecnologas de salado-maduracin; en nuestro pas la metodologa empleada es una adaptacin del salado y madurado de sardina espaola e italiana con la cual se obtiene un producto muy apreciado en gastronoma. La maduracin es un proceso lento que requiere entre 6 y 9 meses para ser completado y es llevada a cabo por va enzimtica en la que participan principalmente enzimas endgenas del tracto digestivo junto a la accin microbiana. a los efectos de seleccionar cepas con aptitud tecnolgica y formular un cultivo iniciador que permita la estabilizacin del proceso se plante el estudio de las poblaciones microbianas, principalmente bacterias lcticas (bl) presentes durante el proceso de saladomaduracin de anchota durante dos zafras consecutivas, as como la influencia en dichas poblaciones de los parmetros tecnolgicos involucrados (en particular la presencia de NaCl). La aplicacin de tcnicas de biologa molecular permiti establecer que las bl estuvieron representadas por Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc carnosum, Lactobacillus sakei y Lactobacillus curvatus y correspondieron a aislamientos realizados durante los primeros estadios del proceso. en presencia de
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concentrciones crecientes de sal, la microbiota lctica fue reemplazada por especies ms tolerantes como Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus warneri. La evaluacin de propiedades de inters tecnolgico permiti la seleccin de tres cepas de bl, L. curvatus sacb03a, L. sakei sacb704 y Leuc. mesenteroides sacb07, basada fundamentalmente en la habilidad para tolerar altas concentraciones salinas (10-15% NaCl), no produccin de dextrano, no formacin de aminas biognicas y sensibilidad a cloranfenicol, tetracaclina y eritromicina. las tres cepas contienen el gen gdh que codifica para la enzima glutamato deshidrogenasa, clave en la produccin de compuestos de aroma; los ensayos de compatibilidad sugieren la posibilidad de usar los microorganismos seleccionados en forma conjunta. se evalu el agregado de osmoprotectores como inductores de resistencia de L. curvatus sacb03a, L. sakei sacb704 y Leuc. mesenteroides sacb07 a ambientes hipersalinos. Por otra parte se determin la participacin de stas bacterias en la degradacin de protenas en medio anchota permitiendo determinar que las mismas contribuiran a la degradacin de las protenas durante los primeros estadios del proceso mediante la acidificacin del medio y/o la accin de peptidasas y aminopeptidasas en conjunto con las proteasas endgenas. Finalmente se abord mediante un enfoque protemico, la expresin/inhibicin diferencial de protenas por parte de L. sakei sacb704 producida por el estrs salino. se determin que de 18 spots diferenciales 4 de ellos fueron expresados en presencia de sal (10%). Los resultados obtenidos permiten proponer una modificacin del proceso de salado-maduracacionadas, como ser Salmonella, Shigella y E. coli enteropatgenas. Su estructura consta de un anillo n-terminal formado por el enlace entre el grupo amino del residuo glicina 1 y el carboxilo de la cadena lateral del asprtico 8. los residuos 9 a 21 forman una horquilla que atraviesa el anillo y queda retenida por el impedimento estrico entre los grupos aromticos de los residuos fenilalanina 19 y tirosina 20 y los residuos del anillo. La actividad antibitica es ejercida mediante un mecanismo de accin que involucra diferentes blancos de accin. mccj25 inhibe la arn polimerasa bacteriana y, en cepas hipersensibles, disipa el gradiente protnico y produce una disfuncin de la cadena respiratoria con formacin de radicales superxido. En este trabajo de tesis se demostr que mccj25 es capaz de interaccionar con membranas bacterianas aun cuando se disipa el gradiente protnico en la clula por accin de protonforos, lo que impide que el pptido sea incorporado intracelularmente. Sin embargo, en estas condiciones, se observ que la actividad antibitica no fue abolida y que especies reactivas del oxgeno eran formadas por accin de mccj25 sobre la cadena respiratoria. En sistemas modelo de membrana y por medio de espectroscopa de infrarrojo se observ que mccj25 estabiliza la fase gel de vesculas fosfolipdicas, aumentando la temperatura de transicin de fase y el grado de orden de las cadenas carbonadas en la zona hidrofbica de la membrana y disminuyendo el grado de hidratacin de los grupos carbonilo en la zona interfasial. mediante espectroscopa de fluorescencia se pudo demostrar que el pptido particiona de manera cooperativa y con mayor afinidad hacia membranas con mayor grado de orden y se ubica cercano a la zona interfasial de las bicapas. Finalmente, la interaccin de mccj25 con vesculas fosfolipdicas produjo un aumento en la permeabilidad de la membrana hacia molculas pequeas. Debido a
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que las cepas bacterianas ms sensibles a mccj25 tienen membranas con mayor grado de orden, en este trabajo de tesis se postula que el pptido al interaccionar y estabilizar regiones de la membrana bacteriana con mayor grado de orden, altera gradientes inicos transmembrana y produce disfuncin de enzimas de la cadena respiratoria, que lleva a la generacin de especies reactivas del oxgeno. La caracterizacin de las bases moleculares de la interaccin de mccj25 con membranas biolgicas permitir disear o dirigir la bsqueda de variantes y derivados del pptido antibitico que posean una mayor actividad en este blanco de accin, lo que permitir ampliar el espectro de accin ntimicrobiana de mccj25.

DISTINTAS LA ACTIVIDAD BIOLGICA DE PROPLEOS DE DISTINTAS REGIONES DE LA ARGENTINA TESISTA: Farmacutica Mara Ins Nieva Moreno DIRECTOR: Dra. Mara Ins Isla COMISION DE SUPERVISION: Dra. Mara Ins Isla; Dra. Elmira Contreras de Riscala Dra. Alicia N. Snchez Riera de Granger Este trabajo de tesis fue llevado a cabo en el Laboratorio de Fitoqumica, del Instituto de Estudios Vegetales Dr. Antonio R. Sampietro, de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, de la Universidad Nacional de Tucumn. RESUMEN El propleos es un producto natural resinoso, elaborado por las abejas a partir de secreciones de las yemas de las plantas, as como de la corteza de ciertos rboles. El presente estudio pretende contribuir al conocimiento de la calidad biolgica de propleos argentinos para poder establecer estndares de calidad que permitan a los apicultores obtener productos naturales diferenciados. Recientemente el propleos fue incorporado como un suplemento dietario en el cdigo alimentario argentino (resolucin 357/08 de la Secretara de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentos y 94/08 del Ministerio de Salud de la Nacin) de all la importancia de normatizar la calidad qumica y biolgica de este alimento funcional. En este trabajo las muestras de propleos fueron extradas por raspado de colmenas ubicadas en diferentes regiones fitogeogrficas de la argentina: Amaicha del Aalle y El Corte (Tucumn), Cerrillos, Fernndez y Forres (Santiago del Estero), Roque Senz Pea y Jean Jos Castelli (Chaco), Vernica (Buenos Aires). El contenido de flavonoides vara entre 14 y 37 mg/g de propleos, lo cual indicara que son comparables a los propleos brasileros en cuanto a su calidad qumica, principalmente los propleos de Amaicha del Valle. los flavonoides representan aproximadamente el 10% del total de principios solubles y el 50% del contenido total de compuestos fenlicos. Los propleos analizados presentan actividad antibacteriana contra un amplio espectro de bacterias patgenas humanas gram positivas y gram negativas antibitico resistentes aisladas de infecciones de piel y partes blandas de pacientes
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de un hospital de Tucumn. los valores de concentracin inhibitoria mnima (cim) para las bacterias gram positivas se encuentran entre 7 y 200 g/ml, mientras que para las bacterias gram negativas entre 300 y 1200 g/ml. los propleos ms activos fueron los de Amaicha del Valle. los metabolitos bioactivos aislados fueron identificados como cido cafeico y 24 dihidroxichalcona. Los valores de cim para estos compuestos fueron inferiores a los del extracto de propleos y ambos se comportaron como agentes bactericidas. Todos los propleos presentaron capacidad depuradora de radicales libres dpph y protegieron a las lipoprotenas (ldl) de la modificacin oxidativa inducida por cobre, observndose en todos los casos un marcado efecto dosis-respuesta. Los preparados ms activos fueron los extractos de propleos procedentes de Amaicha del Valle. Se comprob que en este extracto existen al menos cuatro compuestos con actividad antioxidante, depuradora de radical libre estable dpph y que uno de ellos es 2,4- dihidroxichalcona, compuesto con actividad antibacteriana. Los extractos de propleos de Amaicha del Valle inhibieron a la enzima xantinoxidasa evitando la formacin de cido rico y de anin superxido, depuran radicales libres hidroxilos protegiendo a los lpidos, protenas, azcares y cidos nucleicos de la oxidacin. Adems presentaron actividad inmunomoestimulante, antiinflamatoria y antimutagnica. Los resultados obtenidos indicaran el potencial uso de este producto natural en formulaciones nutricionales, suplementos dietarios o productos fitoterpicos. Para establecer la seguridad del uso del propleos ms activo se evalu la toxicidad mediante ensayos biolgicos que utilizan organismos eucariotas y procariotas. Ni el extracto de propleos, ni 24 dihidroxichalcona, mostraron mutagenicidad en los diferentes ensayos, en presencia y en ausencia de activadores metablicos, en las concentraciones en las que presentan actividad biolgica.

BACTERIAS ALIMENTOS ESTERASAS DE BACTERIAS LACTICAS EN ALIMENTOS FERMENTADOS TESISTA: Lic. Mara Claudia Abeijn Mukdsi DIRECTORA: Dra. Roxana B. Medina de Figueroa COMISIN DE SUPERVISIN: Dra. Graciela Celestina Rolln; Dra. Fernanda Beatriz Mozzi Este trabajo fue realizado en la Facultad de Bioquimica, Quimica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn y el Centro de Referencia para Lactobacilos Dr. Ernesto Padilla (CERELA), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET), de la Fundacin Miguel Lillo y de la Fundacin para la Educacin, la Ciencia y la Cultura (FECIC). Con el apoyo financiero del CONICET. RESUMEN Las esterasas representan un grupo muy diverso de hidrolasas que catalizan la ruptura y formacin de enlaces ster. Estn ampliamente distribuidas en
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la naturaleza y son requeridas por sus posibles aplicaciones biotecnolgicas (industrias agrcola, alimenticia y farmacutica). Las esterasas de bacterias lcticas (bl) contribuyen en la generacin de compuestos de flavor en los alimentos (carboxil esterasas) y de antioxidantes in vivo (cinamil esterasas). Como generadoras de flavor, son responsables de la liberacin de cidos grasos (ag) de cadena corta por hidrlisis de los triglicridos, impartiendo sabores picantes en los quesos. Tambin catalizan reacciones de sntesis de steres en presencia de alcohol. Los steres de ag de cadena corta son responsables del flavor frutal en los quesos y contribuyen al aroma al minimizar el sabor intenso de los ag. Como generadoras de compuestos antioxidantes, tienen un rol beneficioso para la salud, debido a su capacidad de liberar cidos hidroxicinmicos, con propiedades antioxidantes, a partir de steres hidroxicinamatos presentes en alimentos de origen vegetal. Las cinamil esterasas (ce) de la microflora colnica son indispensables para la hidrlisis de los hidroxicinamatos y consecuente liberacin de cidos hidroxicinmicos biodisponibles. En el presente trabajo de tesis, se evalu actividad esteroltica y capacidad de sntesis de steres de bl aisladas de leches y quesos de cabra y oveja del noroeste argentino, representadas principalmente por los gneros Lactobacillus y Enterococcus. Las mismas presentaron un sistema esteroltico complejo, capaz de liberar ag de cadena corta. Se caracterizaron los mecanismos de sntesis de steres (esterificacin y alcohlisis) in vitro, siendo descriptos por primera vez en el gnero Enterococcus. Lactobacillus fermentum crl1446 y Enterococcus faecium crl 1814 se emplearon para evaluar su contribucin a la sntesis de steres en miniquesos caprinos. Los estudios evidenciaron la capacidad de las cepas de sintetizar steres con flavor frutal en quesos. Con respecto a las cinamil esterasas, se seleccion L. fermentum crl 1446 con actividad feruloil esterasa (fe) in vitro, evalundose por primera vez el efecto de la administracin oral de bl con actividad fe en ratones. Se observ incremento de actividad fe a nivel intestinal y disminucin de lipoperxidos plasmticos, lo cual implicara mejoras en el estado oxidativo de los animales tratados. Para vehiculizar la cepa con actividad fe en un alimento se elaboraron quesos de cabra empleando L. fermentum crl 1446, detectndose actividad fe en dichos quesos. Esta cepa podra ser empleada para el desarrollo de un alimento funcional que libere compuestos antioxidantes a nivel intestinal, y presente caractersticas de aroma y sabor deseadas por el consumidor. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis doctoral constituyen un aporte al conocimiento del rol de las esterasas de bl en los alimentos por su capacidad de generar compuestos de flavor y por liberar compuestos antioxidantes in vivo. Los estudios de mecanismos de sntesis de steres permitiran regular la produccin de estos compuestos en los quesos. los resultados sobre el efecto de la administracin oral de bl con actividad fe contribuiran a aportar nuevos criterios para la seleccin de microorganismos con potencialidad probitica.

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DEFENSA BIOQUMICA DE LA DEFENSA EN FRUTILLA (fragaria ananassa) TESISTA : Alicia Ins Mamani de Marchese DIRECTOR: Dr. Juan C. Daz Ricci CODIRECTOR : Dr. Atilio P. Castagnaro COMISION DE SUPERVISION : Dra. Elmira C. M. de Riscala; Dr. Fernando E. Prado ii. 1. HIPTESIS DE TRABAJO Este trabajo se sustenta en la hiptesis que la frutilla contiene metabolitos secundarios con propiedades antimicrobianas que pueden estar involucrados en la defensa de la planta, ya sea en forma directa como antimicrobianos, o como inductores o intermediarios de las defensas naturales. ii. 2. OBJETIVO GENERAL El objetivo general del presente trabajo es investigar los mecanismos defensivos inducidos por compuestos presentes en la frutilla, tanto con fines conceptuales, como con la intencin de disponer de elementos para elaborar nuevas estrategias que contribuyan al manejo sostenible de las enfermedades vegetales. ii. 3. OBJETIVOS ESPECFICOS Para lograr el objetivo general se proponen los siguientes objetivos especficos: 1. Purificar y caracterizar compuestos con propiedades antimicrobianas obtenidos a partir de frutilla (fragaria x ananassa). 2. Caracterizar el espectro antimicrobiano in vitro del o los compuestos purificados e investigar el modo de accin de los mismos. 3. Investigar la capacidad del o los compuestos aislados para inducir proteccin contra la antracnosis en plantas de frutilla. 4. Estudiar parmetros bioqumicos que estn asociados a la respuesta defensiva. 5. Elucidar la estructura qumica del o los compuestos purificados a travs de diferentes tcnicas espectromtricas.

CARACTERIZACIN ACTIVAS AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE NUEVAS BIOMOLCULAS ACTIVAS MICROORGANISMOS EXTREMFILOS PRODUCIDAS POR MICROORGANISMOS EXTREMFILOS (EXTREMOCINAS) TESISTA : Lic. Leandro Arturo Snchez DIRECTOR: Dr. Osvaldo Daniel Delgado DIRECTOR ASOCIADO: Dr. Faustino Sieriz COMISIN DE SUPERVISIN : Dra. Mara Ester Lucca; Dr. Ral Salomn Este trabajo de tesis doctoral se realiz en su totalidad en la Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiolgicos (PROIMI), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET) (se realiz en el marco de una beca otorgada por CONICET en cmoanyioc deet 2).0 0e5l . RESUMEN Los organismos que habitan en ambientes extremos o extremfilos son actualmente considerados una importante fuente de metabolitos, enzimas y bioproductos con caractersticas nicas y diferenciadas de aquellos producidos en condiciones normales.
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Los ecosistemas extremos abarcan lugares como volcanes y giseres, profundidades marinas, salares, desiertos, hielos y lagos alcalinos, entre otros. Dentro de los extremfilos es posible encontrar no solo procariotas, sino tambin organismos comprendidos en los tres dominios: archeae, procariotas y eucariotas. Las aplicaciones para estos organismos y sus enzimas estn relacionados con la formulacin de detergentes, procesos de peletera, industria del papel, procesamiento de efluentes industriales, produccin de ciclodextrinas y produccin de antibiticos. El aumento en la frecuencia de cepas patgenas humanas resistentes a los antibiticos clsicos, provocada por el uso frecuente e inadecuado de los mismos, sumado a una irregular aparicin de nuevos antibacterianos y escasez de compaas farmacuticas abocadas a tal fin, gener que el desarrollo de nuevos antibiticos sea un problema de inters global, que representa un constante desafo. de all surge la necesidad de bsqueda de nuevos antimicrobianos para su uso farmacutico o bien para ser aplicados en procesos industriales alimenticios de manera de mejorar la calidad y seguridad del producto final. Nisina es la nica bacteriocina de uso en productos lcteos, pero su aplicacin es restringida. es por ello el continuo inters en el aislamiento y caracterizacin de nuevos microorganismos o enzimas, antibiticos y otros metabolitos por ellos producidos, capaces de trabajar y catalizar reacciones especficas bajo condiciones extremas. Este trabajo se centr en la bsqueda de microorganismos psicrotolerantes y psicrfilos con la capacidad de producir sustancias inhibitorias de bacterias patgenas humanas y de animales, que sean activas a bajas temperaturas para su potencial uso en la conservacin de alimentos o en la industria farmacutica. se aislaron cerca de 8.000 morfotipos coloniales, de muestras de suelo y agua provenientes de la isla de los estados, ushuaia, donde las temperaturas mximas anuales varan entre 11c y 1c. Mediante tcnicas de seleccin e identificacin bacteriana se logr establecer que 11 aislamientos bacterianos eran psicrfilos y psicrotolerantes. La mayora de ellos estn filogenticamente relacionados con Serratia proteamaculans, y que uno de ellos con Pseudomonas sp. Los compuestos antimicrobianos demostraron un amplio espectro de inhibicin contra bacterias patgenas gram negativas y gram positivas. poseen bajo peso molecular, alta termo-estabilidad y resistencia a pHs extremos. Se optimiz la produccin del compuesto antimicrobiano producido por la cepa S. proteamaculans 136, en diferentes medios de cultivo, siendo el comnmente usado Luria-Bertani el medio en el que se alcanz la mayor productividad (800 ua/ml). Se logr el escalamiento para producir el compuesto en 7,5 litros de cultivo en biorreactor con condiciones controladas de temperatura, pH y oxgeno disuelto. Se elabor un protocolo efectivo de purificacin del antimicrobiano seleccionado que involucra procesos de adsorcin en carbn activado, extraccin en fase slida y RP-HPLC, lo que permiti purificar al principio inhibitorio producido por la cepa S. proteamaculans 136. Estudios de esta molcula demostraron que es producida durante la fase estacionaria de crecimiento y presenta caractersticas hidrofbicas. La inhibicin microbiana se produce a concentraciones inhibitorias mnimas del orden nanomolar, que provocan una alteracin de la membrana plasmtica en las clulas sensibles ensayadas.
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El anlisis por espectrometra de masas y resonancia magntica nuclear, como as tambin la elucidacin qumica estructural, permiti identificar al compuesto como andrimida. de esta forma se describe por primera vez la produccin de andrimida por una cepa psicrotolerante de S. proteamaculans.

ESTRUCTURA TRUCTURAMCCJ25: RELACIN ESTRUCTURA-FUNCIN Y GENES CROMOSMICOS DE RESISTENCIA AL ANTIBITICO ANTIBITICO TESISTA : Lic. Sergio Benjamn Socas DIRECTOR : Dr. Ral A. Salomn COMISIN DE SUPERVISIN : Dra. Mara J. del R. Amoroso; Dra. Paula A. Vincent Este trabajo de tesis doctoral se realiz en el Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas (INSIBIO) e Instituto de Qumica Biolgica Dr. Bernab Bloj de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn (CONICET UNT) RESUMEN La entrada del pptido antibitico microcina j25 en las clulas sensibles depende del receptor de membrana externa fhua y de la protena de membrana interna sbma. Esta ltima tambin transporta microcina b17 hacia el citoplasma. Una comparacin de ambas microcinas revel que comparten una secuencia tetrapeptdica, vgig. Nosotros especulamos que este rasgo estructural en la microcina j25 podra ser un motivo reconocido por sbma. para probar esta hiptesis, usamos una variante de mccj25 en la cual la isoleucina en vgig (posicin 13 en la secuencia de la mccj25) fue reemplazada por una lisina (i13k). Esta mutante no tiene actividad biolgica en condiciones normales. Sin embargo, en experimentos en los cuales la entrada de microcina era independiente del receptor fhua, i13k mostraba una actividad inhibitoria similar a la de la mccj25 nativa. ms an, en ensayos de competencia, la mccj25 interfera con la captacin de colicina m, que tambin emplea fhua, mientras que la mutante i13k no tena efecto. De estos resultados, concluimos que el residuo ile13 es requerido slo para la interaccin con fhua, y que vgig no es un elemento reconocido por sbma. Por otra parte, se investig la diferente sensibilidad a mccj25 que presentan distintas cepas de laboratorio de Escherichia coli, observndose que la sensibilidad aumentaba al incrementarse la concentracin de leucina en el medio de crecimiento. Se sabe que la concentracin intracelular de la protena reguladora de respuesta a leucina, lrp, un regulador transcripcional, es inversamente proporcional a la concentracin de leucina. Una mutante lrp no presentaba el efecto de leucina sobre la sensibilidad a mccj25, siendo hipersensible al antibitico. Por otro lado, corriente arriba del promotor del gen yoji, que codifica para un exportador de mccj25, identificamos seis potenciales sitios de unin a lrp. posteriormente, determinamos cules de ellos son necesarios para el efecto de lrp. Estudios adicionales demostraron que lrp es un regulador positivo de yoji, lo que nos sugiri el siguiente modelo para el efecto de leucina: un aumento de la leucina exgena disminuye los niveles de lrp, lo cual a su vez reduce la transcripcin
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de yoji, con la consiguiente disminucin en la exportacin de mccj25. esto hara a las clulas ms sensibles al antibitico. Por otra parte, en el presente trabajo identificamos nuevos genes cromosmicos de resistencia a mccj25. uno de ellos, ydie, confiere resistencia total al antibitico al ser sobreexpresado. este efecto no se debe a un aumento en la excrecin del antibitico. Algunos resultados sugieren que ydie actuara secuestrando mccj25, evitando as la accin inhibitoria del antibitico sobre la arn polimerasa. esto representa un nuevo mecanismo de resistencia celular a mccj25. Finalmente, observamos que la sobreexpresin del complejo importador de zinc de E. coli, znuabc, incrementa la resistencia a mccj25. este efecto se ve reforzado por la eliminacin simultnea del exportador de este metal. en sntesis, una acumulacin Intracelular de zinc inducira un mecanismo alternativo de resistencia a mccj25, independiente de los ya conocidos ydie-yoji. La caracterizacin de este nuevo mecanismo de resistencia se encuentra en marcha en nuestro laboratorio. ESTACIONARIA MCCJ25: RESISTENCIA EN FASE ESTACIONARIA Y APLICACIONES BIOTECNOLGICAS TESISTA : Lic. Mara Fernanda Pomares DIRECTOR: Dr. Ricardo Norberto Faras DIRECTORA ASOCIADA : Dra. Paula Andrea Vincent COMISION DE SUPERVISION : Dr. Fernando Sesma; Dr. Mario Baigor Este trabajo de tesis doctoral se realiz en el Instituto de Qumica Biolgica Dr. Bernab Bloj de la Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn e Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas INSIBIO (CONICET/UNT). RESUMEN Microcina j25 (mccj25) es un pptido antimicrobiano producido por E. coli y activo contra bacterias estrechamente relacionadas a la cepa productora, como ser Escherichia coli, Salmonella y Shigella. En el presente trabajo de tesis nos propusimos estudiar si el incremento de los niveles intracelulares de guanosina 3,5-bispirofosfato (ppgpp) es responsable de la mayor resistencia a mccj25 observada en clulas de E. coli cuando estas son expuestas al antibitico en fase estacionaria de crecimiento. Nuestros resultados sugieren que existe una correlacin directa entre la acumulacin de ppgpp y la resistencia a mccj25. esto se debe a que el nucletido induce la expresin de yoji, una bomba que expulsa la microcina de las clulas, lo que mantendra la concentracin intracelular del antibitico por debajo de un nivel txico. mccj25 presenta un gran potencial como preservante de alimentos, sin embargo, es refractaria a la digestin por las enzimas proteolticas del estmago (pepsina) y del contenido intestinal (tripsina y quimotripsina), lo que limita su aplicacin.
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En este trabajo se seleccion una variante de mccj25, en la que se sustituy el residuo gly12 por tyr, que fue sensible a la digestin por quimotripsina. Esta microcina present una actividad antimicrobiana similar a la microcina nativa y fue capaz de inhibir el crecimiento de S. newport y E. coli o157:h7 en leche y yema de huevo. A diferencia de mccj25, la variante mccj25(g12y) fue inactivada por las enzimas digestivas tanto in vitro como in vivo. Adems, comprobamos que mccj25(g12y) no modifica la poblacin de coliformes de la microflora intestinal de ratn. Finalmente, con el objeto de producir mccj25 in situ en alimentos, clonamos en un plsmido que replica tanto en E. coli como en L. latis los genes necesarios para la sntesis y exportacin del antibitico bajo la regulacin de promotores de bacterias lcticas. La proyeccin final es inocular el producto alimenticio con una bacteria lctica productora de mccj25. La utilizacin de mccj25 como agente teraputico es limitada debido a su estrecho espectro de accin, restringido a slo algunos gneros de bacterias gramnegativas, por lo que nuestro objetivo fue encontrar una herramienta que permita ampliar este espectro. La aplicacin conjunta de mccj25 y el pptido permeabilizante de membrana kffkffkffk [(kff)3k] permiti sensibilizar a cepas resistentes al antibitico. Demostramos que mccj25 en presencia del pptido (kff)3k, es capaz de inhibir la viabilidad de S. typhimurium, una cepa naturalmente resistente al antibitico. Adems, estudios con macrfagos infectados con S. typhimurium demostraron que la mezcla (kff)3k/mccj25 presenta un potente efecto inhibitorio sobre la replicacin intracelular del patgeno. Asimismo, encontramos que mccj25, por si sola, puede inhibir el crecimiento de S. typhimurium dentro de los macrfagos. esto sera causado por el ph cido de la vacuola del macrfago que produce la sensibilizacin de las bacterias frente al antibitico. FERMENTOS LCTICAS Y SUS BIOPOLMEROS: NUEVAS APLICACIONES AN ALIMENTOS FUNCIONALES FUNCIONALES TESISTA : Bqca. Mara Cecilia Rodrguez DIRECTOR : Dra. Graciela Font de Valdez DIRECTOR ASOCIADO : Dra. Fernanda Beatriz Mozzi COMISIN DE SUPERVISIN : Dra. Gladis Susana Alvarez; Dra. Marta Valverde Este trabajo de tesis doctoral fue realizado en el Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA), dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET), de la Fundacin Miguel Lillo y de la Fundacin para la Educacin, la Ciencia y la Cultura (FECIC). Parte del trabajo fue desarrollado en CIDCA, La Plata, Buenos Aires. Con el apoyo financiero del CONICET, Agencia Nacional de Promocin Cientfica y Tecnolgica (ANPCYT) y Consejo de Investigaciones de la Universidad Nacional de Tucumn (CIUNT).

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RESUMEN La gastritis es una inflamacin de la mucosa del estmago que afecta al 80% de la poblacin mundial, segn datos de la Organizacin Mundial para la Salud, y se desarrolla como consecuencia de la accin de irritantes endgenos o exgenos que exceden la capacidad de resistencia de la mucosa. El cido acetil-saliclico (asa) es un frmaco de uso frecuente debido a sus mltiples acciones teraputicas; pero su ingesta prolongada produce efectos adversos en la mucosa gstrica. Actualmente, los alimentos probiticos conteniendo bacterias lcticas (bal) se emplean en el tratamiento de diversos desrdenes gastrointestinales siendo sus efectos benficos atribuidos no slo a la cepa probitica sino tambin a los metabolitos producidos durante la fermentacin. Se ha sugerido que ciertos exopolisacridos (eps) de bal tendran propiedades inmuno-reguladoras y antiulcerosas. El objetivo de este trabajo de tesis doctoral fue evaluar la actividad gastroprotectora de bal productoras de eps (eps+) que presentan propiedades tecnolgicas de inters. Se evaluaron cepas de Streptococcus thermophilus (especie muy usada en la elaboracin de lcteos fermentados) crl 638, crl 804 y crl 1190 cuyos biopolmeros presentan diferentes caractersticas fisicoqumicas; se us la cepa crl 728 no productora (eps-) con fines comparativos. para investigar el potencial efecto gastroprotector de las leches fermentadas se estandarizaron dos modelos experimentales de gastritis (crnica activa y crnica superficial) en ratn (cepa balb/c) usando asa como inductor. Se evalu el efecto de la dosis (200 y 400 mg de asa/kg/d) y perodos de administracin (10 y 20 das). La leche fermentada con S. thermophilus crl 1190 (lf1190) fue efectiva en la prevencin y tratamiento de ambos tipos de gastritis, obtenindose un efecto similar a omeprazol, frmaco empleado en el tratamiento aloptico. Las ventajas del uso del alimento probitico (lf1190) se reflejaron en: modulacin de la respuesta inflamatoria gstrica (disminucin de las clulas productoras de citoquinas proinflamatorias , inf-g y tnf-a y aumento de la citoquina reguladora, il-10) y conservacin parcial de la capa superficial de mucus gstrico. El producto lf1190 no perdi efectividad durante la vida de estante (30 das, 4c) y tiene buenas caractersticas reolgicas (77,63 2,160 mpa.s de viscosidad aparente). Se demostr que el eps producido por S. thermophilus crl 1190 (eps1190) aislado, purificado y suspendido en leche, es tambin efectivo en el tratamiento de gastritis pero en menor grado. Los resultados obtenidos sugieren que S. thermophilus crl1190 y/o su biopolmero constituyen una alternativa biolgica para la prevencin y tratamiento de gastritis. Este trabajo es un aporte al conocimiento de los alimentos probiticos con propiedades especficas en salud.

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CARACTERIZACIN IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DEL BLANCO DE ACCIN DE MICROCINA J25 EN LA MEMBRANA CELULAR TESISTA : Lic. Miriam Carolina Chaln DIRECTOR : Dra. Paula Andrea Vincent COMISION DE SUPERVISION : Dr. Ral Armando Salomn; Dra. Adriana Prez Chaia Este trabajo de Tesis Doctoral se realiz en el Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas (INSIBIO) e Instituto de Qumica Biolgica Dr. Bernab Bloj de la Facultad de Bioqumica Qumica y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumn (CONICET UNT). Los experimentos de Voltametra Cclica se realizaron con la colaboracin de la Dra. Natalia Wilke en el laboratorio del Dr. Bruno Maggio, CIQUIBIC-Departamento de Qumica Biolgica de la Facultad de Ciencias Qumicas (CONICET-UNC). Los experimentos de Resonancia Paramagntica Electrnica se realizaron en el laboratorio del Dr. Stefano Rufini de la Universidad Tor Vergata. Roma-Italia. Los experimentos de Espectroscopa Infrarroja se realizaron con la colaboracin de la Dra. Rossana Chen y el Dr. Leonardo Cortez. RESUMEN Microcina J25 (MccJ25) es un pptido antibitico de 21 L-aminocidos (G1G-A-G-H5-V-P-E-Y-F10-V-G-I-G-T15-P-I-S-F-Y20-G) producido por una cepa entrica de Escherichia coli. Posee dos blancos de accin independientes: la ARN polimerasa (ARNP) y la cadena respiratoria. Este ltimo est mediado por un aumento de la produccin de superxido que lleva a la inhibicin de las actividades NADH y lactato deshidrogenasas en la cadena respiratoria disminuyendo el consumo de oxgeno. En esta tesis se obtuvieron dos derivados del antibitico por sustitucin de las Tyr9 y Tyr20 por fenilalanina. Ambos pptidos mutantes fueron bien transportados por la clula blanco y se mantuvieron activos sobre la ARNP. Slo el derivado Y9F perdi la capacidad de sobreproducir superxido y de inhibir el consumo de oxgeno. Estos resultados confirman que la Tyr9 est involucrada en la accin de MccJ25 en el blanco en la cadena respiratoria. Adems, se detect la formacin de un radical tirosilo en la Tyr9 de la molcula de MccJ25 mediante tcnicas de espectroscopia de infrarrojos y resonancia paramagntica electrnica. Se midi el potencial redox de MccJ25 utilizando voltamperometra cclica con respecto a un electrodo de calomel y a otro de Ag/AgCl. El potencial calculado para microcina fue de 0,97 V, y se observ una oxidacin irreversible del pptido. Los ltimos experimentos confirman que es Tyr9 quien est involucrada en procesos redox y que la formacin del radical tirosilo se debe a una oxidacin de la misma. De acuerdo al potencial redox calculado para MccJ25 y a los potenciales redox de los componentes de la cadena reportados en la bibliografa, podemos ubicar al antibitico entre las quinonas y los citocromos. Lo que sugiere que seran los citocromos los involucrados en la formacin del radical tirosilo mediante una oxidacin del pptido.
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Mutantes en menaquinona, ubiquinona, y citocromo bd fueron resistentes a MccJ25 y al derivado Y9F. Adems, en membranas aisladas de estas cepas mutantes, MccJ25 no produjo sobreproduccin de superxido ni inhibicin de las actividades NADH y lactato deshidrogenasas. Los resultados indican que estos componentes de la cadena respiratoria estn implicados en el mecanismo de accin del pptido sobre su segundo blanco de accin, el cual requiere de la formacin del radical tirosilo y la sobreproduccin de superxido. Finalmente se estudi el efecto de MccJ25 sobre los niveles de ATP en clulas de E. coli. Los resultados obtenidos indican que el pptido induce disminucin de los niveles intracelulares de ATP independientemente de la inhibicin de ARNP y que el efecto sobre la deplecin de este nucletido depende de la concentracin intracelular del antibitico. Los resultados obtenidos en esta tesis proporcionan un punto de partida para el desarrollo de inhibidores ms potentes basados en el blanco en la membrana, reemplazando diferentes aminocidos en la molcula de MccJ25 por potenciales aminocidos redox capaces de formar radicales o el desarrollo de una mutante que inhiba selectivamente la RNAP, sin actuar sobre la membrana. Esto podra tener una importante aplicacin en el diseo de molculas modificadas del antibitico con actividad antimicrobiana incrementada o de mayor espectro.

PROBITICOS PREVENCIN PRODUCTOS PROBITICOS PARA LA PREVENCIN DE INFECCIONES INTESTINALES ESTUDIOS APLICADOS. INTESTINALES EN TERNEROS. ESTUDIOS BSICOS Y APLICADOS. TESISTA : Bioq. Natalia Cecilia Maldonado DIRECTORA : Dra Mara Elena Ftima Nader Macas Co-DIRECTORA : Dra Clara Silva de Ruiz COMISION DE SUPERVISION : Dra. Mara Cristina Apella; M.Sc. Ing. Zoot. Fernando Holgado RESUMEN La diarrea neonatal en terneros es una de las principales causas de mortalidad en animales recin nacidos en los establecimientos lecheros de nuestro pas, y como consecuencia, ocasionan grandes prdidas econmicas a este sector. En la actualidad se proponen alternativas novedosas para la prevencin de las infecciones intestinales, entre las que se incluyen el uso de probiticos. La utilizacin de complejos vitamnicos, prebiticos y probiticos tiene como finalidad combinar los efectos benficos de algunas sustancias (vitaminas y minerales), con los efectos benficos de determinados microorganismos para restaurar el equilibrio de la microbiota intestinal y evitar desbalances en las poblaciones microbianas que puedan facilitar la colonizacin de bacterias patgenas. El objetivo de este trabajo de tesis doctoral fue avanzar en el diseo de un producto probitico conteniendo bacterias acido lcticas y esporuladas autctonas, combinadas con vitaminas, minerales y sustancias prebiticos.
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Para ello, y en base a la especificidad de especie que exhiben los miembros de la microbiota indgena, se han aislado e identificado fenotipicamente noventa y seis cepas de Bacterias Lcticas (BL) y nueve cepas de bacterias del gnero Bacillus a partir de heces y cavidad bucal de terneros de 0-3 meses de edad. En los microorganismos aislados se ha realizado el relevamiento de propiedades benficas en ensayos in vitro, que incluyen la evaluacin de las caractersticas de la superficie bacteriana (relacionadas con la formacin de biofilm protector) y la produccin de sustancias antagnicas (relacionadas con la inhibicin a patgenos). Posteriormente, en aquellos microorganismos que compartan propiedades, se han evaluado las propiedades funcionales, que incluyen la resistencia y sobrevida a condiciones que simulan las del tracto gastrointestinal de los terneros (condiciones cidas y sales biliares cido) y la susceptibilidad a antimicrobianos y terapias frecuentes. Se preseleccionaron quince cepas de BL, las que fueron identificadas genticamente e incorporadas en la coleccin de cultivos de CERELA. Finalmente, se seleccionaron seis cepas por sus caractersticas sobresalientes: Lactobacillus murinus CRL 1695 (auto-agregante), Lactobacillus johnsonii CRL 1693 (hidrofbica y productora de acido lctico), Lactobacillus amylovorus CRL 1697 (productoras de cido lctico), Lactobacillus mucosae CRL 1696 (productora de perxido de hidrgeno), Lactobacillus salivarius CRL 1702 (hidrofbica, resistente a pH cido) y Enterococcus faecium CRL 1703 (productor de acteriocina). Para evaluar las bacterias esporuladas se determinaron las propiedades de superficie, inhibicin de bacterias patgenas y perfil de resistencia antibitico. Finalmente, se seleccion Bacillus subtilis M14 para su potencial incorporacin en el diseo del producto. En las cepas de BL seleccionadas se evaluaron sus propiedades tecnolgicas: resistencia al proceso de liofilizacin en distintos soportes (leche descremada, concentrado proteico de suero de queso y lactosa), su estabilidad en el tiempo (2, 4 y 6 meses) y el mantenimiento de sus propiedades probiticas a lo largo de su conservacin. Asimismo, se determin la compatibilidad entre las cepas y se evaluaron diferentes combinaciones para su inclusin en el/los productos veterinarios. Los productos finales se disearon con diferentes mezclas de bacterias lcticas incorporadas como polvos liofilizados en una matriz de leche descremada, adicionados de complejos vitamnicos, minerales e inulina. Se estudi la viabilidad de los microorganismos durante su conservacin a 4C. Los microorganismos mostraron comportamientos diferenciales, que dependen de las propiedades individuales de las cepas, y de los protectores y las sustancias adicionadas en el diseo de los productos. La propuesta de combinar vitaminas, minerales y prebiticos con microorganismos probiticos permite avanzar en un tema en un todo coherente con la tendencia mundial de evitar el uso de antibiticos con fines preventivos en ganadera. En las etapas siguientes, los productos diseados debern ser evaluados en ensayos in vivo.

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MICROCINA MEMBRANAS ACCIN DEL PPTIDO ANTIBITICO MICROCINA J25 SOBRE MEMBRANAS INTERACCIN. BIOLGICAS: ESTUDIO TOPOLGICO DE LA INTERACCIN. TESISTA : Bioq. Fernando G. Dupuy DIRECTOR : Dr. Roberto D. Morero DIRECTORA ASOCIADA : Dra. Rosana N. Chehn COMISIN DE SUPERVISIN : Dr. Roberto Morero; Dra Rosana Chehn; Dra. Sonia Daz; Dr. Ral Raya. RESUMEN Microcina j25 (mccj25) es un pptido antibitico de 21 aminocidos producido por E. coli y activo contra cepas filogenticamente relacionadas, como ser Salmonella, Shigella y E. coli enteropatgenas. Su estructura consta de un anillo Nterminal formado por el enlace entre el grupo amino del residuo glicina 1 y el carboxilo de la cadena lateral del asprtico 8. Los residuos 9 a 21 forman una horquilla que atraviesa el anillo y queda retenida por el impedimento estrico entre los grupos aromticos de los residuos fenilalanina 19 y tirosina 20 y los residuos del anillo. La actividad antibitica es ejercida mediante un mecanismo de accin que involucra diferentes blancos de accin. Mccj25 inhibe la ARN polimerasa bacteriana y, en cepas hipersensibles, disipa el gradiente protnico y produce una disfuncin de la cadena respiratoria con formacin de radicales superxido. En este trabajo de tesis se demostr que mccj25 es capaz de interaccionar con membranas bacterianas aun cuando se disipa el gradiente protnico en la clula por accin de protonforos, lo que impide que el pptido sea incorporado intracelularmente. Sin embargo, en estas condiciones, se observ que la actividad antibitica no fue abolida y que especies reactivas del oxgeno eran formadas por accin de mccj25 sobre la cadena respiratoria. En sistemas modelo de membrana y por medio de espectroscopa de infrarrojo se observ que mccj25 estabiliza la fase gel de vesculas fosfolipdicas, aumentando la temperatura de transicin de fase y el grado de orden de las cadenas carbonadas en la zona hidrofbica de la membrana y disminuyendo el grado de hidratacin de los grupos carbonilo en la zona interfasial. Mediante espectroscopa de fluorescencia se pudo demostrar que el pptido particiona de manera cooperativa y con mayor afinidad hacia membranas con mayor grado de orden y se ubica cercano a la zona interfasial de las bicapas. Finalmente, la interaccin de mccj25 con vesculas fosfolipdicas produjo un aumento en la permeabilidad de la membrana hacia molculas pequeas. Debido a que las cepas bacterianas ms sensibles a mccj25 tienen membranas con mayor grado de orden, en este trabajo de tesis se postula que el pptido al interaccionar y estabilizar regiones de la membrana bacteriana con mayor grado de orden, altera gradientes inicos transmembrana y produce disfuncin de enzimas de la cadena respiratoria, que lleva a la generacin de especies reactivas del oxgeno. La caracterizacin de las bases moleculares de la interaccin de mccj25 con membranas biolgicas permitir disear o dirigir la bsqueda de variantes y derivados del pptido antibitico que posean una mayor actividad en este blanco de accin, lo que permitir ampliar el espectro de accin antimicrobiana de mccj25.

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EXPRESIN DE METALOPROTEASAS DE MATRIZ EN EL OVIDUCTO DE LLAMA Tesinista: Renato Zampini e-mail: renz_85@hotmail.com Director: Dra. Silvana A. Apichela e-mail: sapichela@hotmail.com Co-director: Dr. Martin E. Argaaraz e-mail: martin3ea@yahoo.com.ar Instituto de Biologa Dr. Francisco D. Barbieri; Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia - Universidad Nacional de Tucumn. Chacabuco 461 San Miguel de Tucumn RESUMEN El estudio de las metaloproteasas de matriz (MMPs) en oviducto y fluido oviductal reviste particular inters biotecnolgico ya que reportes en otros mamferos las han asociado a eventos tales como la expansin del cmulo y la interaccin ovocito-espermatozoide (Gabler y col., 2001), la liberacin y activacin de factores de crecimiento (Fowlkes y Winkler, 2002), y la fluidizacin del semen (Tentes y col., 2007). En el caso particular de los camlidos, hasta el momento se desconoce si el oviducto sintetiza y secreta MMPs. Teniendo en cuenta lo antes expuesto se decidi iniciar el estudio de las MMPs en el oviducto de llama. El objetivo de este trabajo fue identificar las secuencias nucleotdicas de algunas MMPs (colagenasas y gelatinasas) en oviducto de llama, y analizar su expresin en clulas epiteliales oviductales (CEO) de mpula, istmo, unin tero tubal (UUT) y papila de la UUT. A tal fin se disearon cebadores para MMP-1, MMP-2, MMP-8, MMP-9 y MMP-13 a partir secuencias de ARNm conocidas de otros mamferos. Mediante RT-PCR de ARN total de oviducto se amplificaron fragmentos de la talla esperada para MMP-1, MMP-2, MMP-9 y MMP13, los que fueron clonados y secuenciados. Los cebadores para MMP-8 no generaron productos de amplificacin. Las secuencias de los productos amplificados con los cebadores para MMP-1, MMP-2 y MMP-9 mostraron un elevado porcentaje de identidad con sus homlogas en otras especies, mientras que el fragmento amplificado con los cebadores para la MMP-13 no mostr correspondencia con secuencias homlogas en otras especies. Una vez conocidas las secuencias, se disearon cebadores especficos para estudiar la expresin en CEO, determinndose que este tipo celular expresa MMP-1, MMP-2 y MMP-9 en mpula, istmo, UUT y papila. En este trabajo, por primera vez, se determinaron y caracterizaron secuencias de MMP-1, MMP-2 y MMP-9 a partir de ARN de oviducto de llama, adems se identific su expresin en CEO lo que sugiere que dichas MMPs podran ser secretadas al lumen oviductal y estar involucradas en los eventos reproductivos que all tienen lugar. Finalmente, se contribuy al conocimiento del ambiente oviductal, lo cual es esencial para el desarrollo de biotecnologas reproductivas en camlidos sudamericanos por ser un recurso gentico genuino y de gran importancia a nivel regional. El desafo biotecnolgico que se plantea a partir de estos hallazgos es probar estas enzimas en medios de fecundacin, criopreservacin de espermatozoides y otras biotecnologas reproductivas en estos animales. Palabras claves: Metaloproteasas de Matriz, Colagenasas, Gelatinasas, Oviducto, Llama
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ENZIMAS PRODUCCIN DE ENZIMAS AMILOLTICAS CON PICHIA PASTORIS Alumno: Pablo Savoy - pablosavoy@yahoo.com.ar / pablo.savoy@tabacal.com.ar Director/a: Dra. Maria Ester Lucca Catedra de Microbiologa Superior. UNT mlucca@proimi.org.ar / proimiservicos@arnet.com.ar Lugar: PROIMI-Planta piloto de procesos industriales microbiolgicos. Ctedra de Microbiologa Superior- UNT. Direccin: Av. Belgrano y Pje Caseros 4000- Tucumn Argentina La produccin de protenas heterlogas con Pichia pastoris permite alcanzar altos rendimientos en procesos biotecnolgicos por su preferencia por el metabolismo respiratorio que favorece altas densidades celulares. Usualmente se expresan dichas protenas bajo el promotor de la enzima alcohol oxidasa (AOX1) fuertemente regulado e inducido por metanol, pero el metanol puede ser peligroso e inhibidor para algunas protenas recombinantes como las enzimas amilolticas. La utilizacin de genes glucolticos constitutivos como el promotor de la enzima fosfoglicerato quinasa (PGK) presenta ventajas tecnolgicas frente a AOX1 y permite obtener protenas heterlogas sin necesidad de la etapa de induccin. En este trabajo se utiliz una cepa recombinante de Pichia pastoris que expresa una protena de fusin (-amilasa de Bacillus subtilis y glucoamilasa de Aspergillus awamori) bajo el promotor constitutivo PGK, a esta cepa se la G. Con el objeto de evaluar la potencialidad de denomin Pichia pastoris PGK- esta cepa para la produccin industrial de enzimas se disearon ensayos necesarios para seleccionar las condiciones operativas ptimas, la fuente de carbono y de nitrgeno que permitan obtener mayores rendimientos de enzimas, el sistema de cultivo en fermentador ms apropiado y la utilizacin de medios alternativos que permitan obtener cantidades importantes de enzima. Se determin la concentracin de biomasa, concentracin de la fuente de carbono, concentracin de protenas totales y actividad de las enzimas extracelulares -amilasa y glucoamilasa. Las condiciones operativas ptimas para la produccin de la protena de inters en medio YPD fueron 28 C, pH 5,5 y concentracin de oxgeno disuelto igual o mayor al 60%. La fuente de carbono con la que se obtuvo mayor actividad enzimtica de ambas enzimas y mayor concentracin de biomasa fue la glucosa con valores de actividad (U/ml) de 15,51 para -amilasa y 14,20 para glucoamilasa. El extracto de levadura y el fosfato cido de amonio fueron las mejores fuentes de nitrgeno con las que se obtuvieron los mejores valores de actividad, pero con sulfato de amonio se obtuvieron las mayores producciones especficas (U/mg biomasa) de ambas enzimas La produccin de la protena de inters en distintos sistemas de cultivo se evalu en fermentador Discovery (1l) en ptimas condiciones operativas. Con todos los sistemas de cultivo (Lote, Lote alimentado y Cultivo Continuo) se obtuvo actividad amiloltica en caldo y se obtuvieron las mximas actividades de -amilasa y de glucoamilasa en Lote alimentado. Las productividades volumtricas de ambas enzimas difieren de acuerdo al sistema ensayado y en Cultivo Continuo se obtuvieron productividades significativamente mayores especialmente en el caso de la -amilasa. Palabras claves: Pichia pastoris, -amilasa, glucoamilasa, cultivo continuo.
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PLANTINES AZCAR RESPUESTA DE PLANTINES DE CAA DE AZCAR A INOCULACIN CON AISLADAS ENDOMICORRIZA RIZOBACTERIAS AISLADAS DE ESPORAS DE ENDOMICORRIZA Alumno: Andrea Sarquiz Director : Dr. Carlos H. Bellone Ctedra de Microbiologa Agrcola LICENCIATURA EN BIOTECNOLOGA ASIGNATURA TRABAJO FINAL RESUMEN: En los ltimos aos se investig la utilizacin de biofertilizantes, debido al impacto negativo de los fertilizantes qumicos en el medio ambiente. Por esto se analiz la simbiosis existente entre los hongos y las plantas, siendo de gran inters la asociacin del tipo endomicorriza, la cual presenta diversas estructuras como arbsculos, vesculas, clulas auxiliares y esporas. stas ltimas pueden encontrarse tanto en el suelo como en el interior de la raz, a su vez pueden infectar la planta, transportando en su interior diferentes bacterias, de inters para el crecimiento de la misma. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar microorganismos que colonizan las esporas de endomicorrizas que al inocularlos a caa de azcar favorecen el crecimiento. Se aislaron e identificaron esporas de la rizsfera de la caa de azcar de los cultivares RA 87-2, LCP 85-382, CP 65-350, TUC 77-42, se determinaron los gneros Glomus y Gigaspora. Para determinar el crecimiento de las bacterias fijadoras de nitrgeno, las esporas extradas se colocaron en medios de cultivo especfico. Se aislaron 3 gneros diferentes: Pseudomona, Beijerinckia y Burkholderia. Con el fin de observar el impacto de los microorganismos sobre la caa de azcar, se inocularon los aislamientos en estacas de caa de azcar y se compararon con estacas sin inocular (testigo). Se analizaron los siguientes parmetros de crecimiento: cantidad de nacimiento en relacin a la cantidad de primordios radiculares existentes, nmero de ramificaciones, longitud, dimetro y volumen de las races. Se determin que las bacterias Burkholderia, Beijerinckia indica y Pseudomonas fluorescens presentaban diferencias significativas con respecto al testigo. Se realizaron pruebas de los aislamientos, se estudi la capacidad de fijar nitrgeno, de producir ndoles totales y de colonizar races. Se observ que las cepas con mejores resultados producan ndoles totales, presentaban una colonizacin de 10-4 y 10-5, y se encontraban en el interior de las esporas. La inoculacin de las estacas de caa de azcar se debe realizar con aislamientos de las bacterias del interior de las esporas.

BIODEGRADACIN DEFINIDO BIODEGRADACIN DE LINDANO POR UN CONSORCIO DEFINIDO DE ACTINOMYCETES - Nombre del alumno: Juliana Mara Sez - Email: julianasaez@hotmail.com
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- Nombre del director: Claudia S. Benimeli (PROIMI), e-mail: cbenimeli@yahoo.com.ar - Nombre del co-director: Mara Julia Amoroso (PROIMI), e-mail: amoroso@proimi.org.ar - Lugar donde realizaron el trabajo: PROIMI. Av. Belgrano y Pje. Caseros. San Miguel de Tucumn (4000). RESUMEN: El lindano es un plaguicida organoclorado, el cual fue utilizado intensivamente en todo el mundo con diversos fines. Sin embargo, actualmente su uso est prohibido o altamente restringido en la mayora de los pases ya que es considerado un carcingeno potencial y se acumula en el medio ambiente causando severos problemas de contaminacin. En razn de lo mencionado, en los ltimos aos se ha puesto especial nfasis en la biorremediacin de plaguicidas, es decir, la remocin y/o degradacin de contaminantes ambientales mediante el uso de organismos vivos o partes de ellos. Los actinomycetes son bacterias Gram (+) muy abundantes en la naturaleza, las cuales poseen un gran potencial para la biodegradacin de compuestos txicos, debido a su diversidad metablica y a su capacidad para actuar sobre diferentes sustratos. El objetivo de este trabajo de tesis fue seleccionar un consorcio definido de actinomycetes, aislados a partir de ambientes contaminados, con capacidad para biodegradar lindano. Para tal fin, se aislaron 11 cepas de actinomycetes de muestras de suelo extradas de un depsito de plaguicidas organoclorados ubicado en la localidad de Argentina, provincia de Santiago del Estero. Se seleccionaron cuatro aislamientos en base a su capacidad para tolerar lindano y utilizarlo como fuente de carbono. Estos microorganismos y las cepas Streptomyces sp. M7 y Streptomyces coelicolor A3, fueron utilizados para ensayos posteriores de actividad especfica de declorinasa y de remocin del plaguicida, en cultivos puros y mixtos formados por dos, tres, cuatro, cinco y seis actinomycetes. Los resultados demostraron que todos los actinomycetes estudiados presentaron actividad especfica de declorinasa (AED) al ser cultivados individualmente en presencia de 1,66 mg L-1 de lindano como fuente de carbono. Al realizar los cultivos mixtos, se observ que la mayora de ellos potenciaron su AED con respecto a los cultivos puros. Solamente cinco cultivos mixtos no mostraron incremento en la actividad. En cuanto a la remocin de lindano, los resultados mostraron que tanto los cultivos puros como los consorcios de actinomycetes fueron capaces de remover, en distinto grado, el plaguicida del medio de cultivo. Los cultivos mixtos dobles, triples y cudruples presentaron, en la mayora de los casos, mayores porcentajes de remocin de lindano que los cultivos puros. Por el contrario, las combinaciones de cinco y seis actinomycetes no removieron eficientemente el plaguicida del medio, evidencindose niveles de lindano residual elevados, incluso mayores a los obtenidos por los cultivos puros. El consorcio formado por las cepas A2, A5, Streptomyces sp. M7 y A11, fue seleccionado como el ms promisorio para la biodegradacin de lindano ya que present el menor valor en la relacin entre la concentracin de lindano residual y actividad especfica de declorinasa.
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Los resultados obtenidos demuestran que consorcios definidos de actinomycetes autctonos son agentes potenciales para biorremediar ambientes contaminados con plaguicidas organoclorados. - Palabras clave: Lindano, actinomycetes, consorcio microbiano.

SELECCIN AISLAMIENTO, SELECCIN Y CARACTERIZACIN DE MICROORGANISMOS PERTENECIENTES AL GNERO BACILLUS BUENOS PRODUCTORES DE LIPASAS. OPTIMIZACIN DE UN MEDIO DE PRODUCCIN. Nombre del alumno: Mariana Prez Ibarreche Email: marianapi84@hotmail.com Nombre del director : Mario Domingo Baigor. e-mail: baigori@proimi.org.ar Lugar donde realizaron el trabajo: PROIMI. Av. Belgrano y Pje Caseros. SM. de Tucumn (4000) RESUMEN Las lipasas son acilglicerol ster hidrolizas que catalizan los enlaces steres de los triglicridos, produciendo cidos grasos libres y glicerol. Los Bacillus son bacterias Gram positivas en forma de bastn los cuales son particularmente interesantes para aplicaciones biotecnolgicas ya que son microorganismos GRAS (generalmente considerados como segu-ros) y tienen la capacidad de producir diversas enzimas y productos de inters comercial. El presente trabajo de investigacin consisti en el aislamiento, selec-cin y caracterizacin de cepas de Bacillus sp. productoras de lipasas y la optimizacin de un medio de produccin. Del screening de actividad lipasa de los doce microorganismos aislados de las muestras contaminadas con jabones y de la cepa de laboratorio Brevibacillus agri E12, tres de ellas mostraron actividad lipasa. El anlisis zi-mogrfico de las cepas A2 y A3 revel bandas de actividad hasta -naftiles de 14 carbonos. En tanto Brevibacillus agri E12 revel un perfil enzi-mtico con capacidad de hidrolizar sustratos de hasta cadena de cidos grasos de 18 carbonos. En medio lquido nicamente Brevibacillus agri E12 mostr actividad lipasa utilizando como sustrato pnitrofenilpalmitato. A ra-zn de estas caractersticas catalticas presentadas por Brevibacillus agri E12, se seleccion para la optimizacin del medio de produccin de una actividad lipasa. Al evaluar las variables significativas en su produccin de lipasas por Plackett-Burman se encontr significancia estadstica con un = 0,05, para peptona, sacarosa, aceite de oliva, agitacin, melaza, glicerol, tiempo, NaCl, volumen, fosfato dipotsico y extracto de levadura. En esta etapa de optimizacin se logr aumentar la actividad lipasa especfica (1,7 mU/ g) tres veces con respecto al medio de cultivo tomado como re-ferencia Luria Bertani (0,6 mU/ g). Para la siguiente etapa de optimizacin mediante BoxBehnken se tomaron como variables de estudio cuatro de las variables significativas: melaza, aceite de oliva, cloruro de sodio y pep-tona. El mejor resultado de actividad especfica (8,4 mU/ g) se obtuvo en el tratamiento compuesto por la menor concentracin de melaza proba-da (1 g ART/L), la mayor de aceite de oliva (0,3%) y las intermedias de NaCl (6 g/L) y
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peptona (12,5 g/L). En esta etapa de optimizacin se consigui aumentar la actividad lipasa especfica catorce veces con respecto al medio Luria Bertani. Palabras claves: Lipasas. Bacillus. Optimizacin.

BACTERICIDA PROCESOS ACTIVIDAD BACTERICIDA INDUCIDA POR PROCESOS DE FOTOLISIS Y PRESENTES FOTOCATLISIS SOBRE BACTERIA PATGENAS PRESENTES EN AGUA. Nombre del alumno: Cecilia Beatriz Paulino. e-mail: cecipaulino@hotmail.com Directora: Mara Cristina Apella. Lugar de trabajo: CERELA, Facultad de Cs. Biolgicas (Ctedra de Qca. Gral.) e-mail: mapella@cerela.org.ar Lugar de realizacin del TF: Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA), Laboratorio de Ecofisiologia Tecnolgica. Chacabuco 145, San Miguel de Tucumn. RESUMEN La mayora de las enfermedades gastrointestinales, que afectan principalmente a pases en desarrollo, son debidas a la presencia de una variedad de microorganismos patgenos presentes en el agua como bacterias, parsitos y virus. El principal riesgo de enfermedad est asociado con la ingestin de aguas contaminadas con bacterias provenientes de materia fecal humana o animal que ocasionan enfermedades infecciosas, en su mayora intestinales, que van desde una leve gastroenteritis hasta diarreas severas (a veces fatales), hepatitis y fiebre tifoidea. La fotlisis y fotocatlisis solar son tcnicas utilizadas para la desinfeccin de aguas contaminadas. La ltima metodologa consiste en la utilizacin de un semiconductor, como TiO2 (dixido de Titanio), que acta como catalizador de la reaccin que se inicia como consecuencia de la accin de la radiacin ultravioleta sobre la superficie de las partculas del fotocatalizador. Los resultados obtenidos en este trabajo mostraron que los procesos de fotlisis y de fotocatlisis son eficientes para la desinfeccin de las aguas contaminadas con cepas, tanto de coleccin y salvajes de E. faecalis como en el caso de la cepa de coleccin de P. aeruginosa, ya que inhiben el crecimiento de las mismas sin recuperacin postratamiento, a excepcin de la cepa salvaje de E. faecalis mcs la que poseera sistemas de proteccin contra el estrs oxidativo, ausente en el resto de los microorganismos tratados. Al analizar la cintica de desinfeccin utilizando diferentes concentraciones del catalizador, si bien mayores concentraciones ofrecen menores tiempos de desinfeccin en la mayora de los casos, es preferible la utilizacin de menores concentraciones para facilitar los procesos de extraccin y minimizar costos. Se estableci como causa de muerte la prdida de integridad de la membrana celular como consecuencia de la accin de las especies reactivas del oxgeno (ERO) sobre los fosfolpidos de la membrana. El ataque de los radicales oxidantes genera procesos de peroxidacin lipdica, desestabilizando la integridad estructural de la membrana celular. Este efecto fue evidenciado por la formacin de malondialdehdo utilizado como ndice para la cuantificacin del proceso y mediante
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la observacin, por microscopa electrnica de transmisin, de las alteraciones estructurales de las clulas. Palabras clave: Fotocatlisis, Desinfeccin, Dao celular.

POTENCIAL BACTERIAS EVALUACIN DEL POTENCIAL EMPLEO DE BACTERIAS LCTICAS DE RECUPERACIN RESPUESTA INTERS BIOTECNOLGICO EN LA RECUPERACIN DE LA RESPUESTA A BIOTECNOLGICO MODELO DE POR INFECCIONES, EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE INMUNOSUPRESIN POR CICLOFOSFAMIDA. Alumno: Victoria Pacheco, E-mail : vico_pacheco@hotmail.com Directora : Dra. Gladis Susana lvarez , Investigador Independiente (CONICET) (CERELA) Centro de Referencia para Lactobacilos Docente Bioqumica Clinca I (Instituto de Bioqumica Aplicada, FBQF, UNT), E-mail : salvarez@cerela.org.ar Lugar donde se realiz el trabajo : Laboratorio de Bioqumica y Clnica Experimental CERELA Direccin : Chacabuco 145 San Miguel de Tucumn , TucumnArgentina RESUMEN El objetivo de este trabajo fue seleccionar bacterias cido-lcticas (BAL) de inters biotecnolgico, de acuerdo a su capacidad para disminuir las alteraciones y acelerar la recuperacin de la respuesta inmune frente a infecciones en hospedadores inmunocomprometidos, con la finalidad de desarrollar productos alimenticios que puedan ser aplicados en poblaciones de riesgo. En primer lugar, se seleccionaron cepas de BAL con actividad inmunomoduladora en ratones inmunocompetentes. Para ello, ratones adultos fueron tratados por va oral con diferentes cepas de Lactobacillus de la coleccin de cultivos de CERELA y se evaluaron sus efectos sobre la produccin de citoquinas y la funcionalidad de los macrfagos peritoneales. Los resultados obtenidos demostraron que la dosis de 108 clulas/ratn/da de L. rhamnosus CRL1505 y L. rhamnosus CRL1506, durante 5d de administracin, fueron tratamientos ptimos para estimular el sistema inmune ya que, al igual que la cepa probitica de referencia L. casei CRL431, indujeron el incremento de los niveles de citoquinas en fluido peritoneal y en suero, y de la funcionalidad de los macrfagos peritoneales, evidenciada por un aumento de su actividad fagoctica y microbicida, y de la produccin de citoquinas luego de una estimulacin in vitro. Se continuaron los ensayos con L. rhamnosus CRL1506, en comparacin con la cepa probitica de referencia, L. casei CRL431, y se estudi su efecto en ratones inmunocomprometidos. Para ello, a ratones adultos se les administr las BAL en estudio. Al finalizar cada tratamiento, estos grupos y ratones controles recibieron una inyeccin intraperitoneal de ciclofosfamida (150 mg/Kg) y en diferentes tiempos post-quimioterapia (durante 15d) se estudi: a) la actividad fagoctica y fungicida de macrfagos peritoneales; b) el recuento total y diferencial de leucocitos; c) la funcionalidad de neutrfilos; y d) la expresin del marcador Gr-1 en sangre por clulas mieloides. La ciclofosfamida indujo una severa neutropenia y redujo el nmero de clulas Px+ y Gr-1+ en sangre. Los grupos tratados con L. rhamnosus CRL1506 o L. casei CRL431 presentaron un descenso menos
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pronunciado y una recuperacin ms temprana del nmero de neutrfilos y de clulas Px+ y Gr-1low. Finalmente, se evalu la capacidad del tratamiento seleccionado, en la resistencia a un patgeno oportunista. Para ello se emple un modelo experimental de candidiasis sistmica en ratones inmunocompetentes e inmunosuprimidos por ciclofosfamida, y se estudi la resistencia al desafo y la respuesta inmune innata contra el microorganismo patgeno. La administracin preventiva de L. rhamnosus CRL1506 o L. casei CRL431 indujo la recuperacin ms temprana del nmero de neutrfilos en sangre, el reclutamiento ms eficiente de clulas fagocticas al sitio de lesin, y el incremento de la resistencia al desafo con Candida albicans. La influencia de la administracin preventiva de L. rhamnosus CRL1506 sobre la inmunidad innata sera responsable, al menos en parte, del aumento de la resistencia a la infeccin por el mencionado patgeno. Por lo tanto este trabajo no solamente permiti seleccionar una promisoria cepa de BAL para ser utilizada con fines biotecnolgicos en el desarrollo de alimentos con propiedades funcionales para hospedadores inmunocomprometidos, sino que posibilit el diseo de un camino metodolgico, utilizando modelos experimentales adecuados para la correcta y eficaz seleccin de microorganismos destinados a este fin. Palabras claves : Bacterias cido lcticas ciclofosfamida candidiasis.

SEALIZACIN MECANISMOS DE SEALIZACIN INVOLUCRADOS EN LA MADURACIN DE DEL ARAQUIDNICO OVOCITOS DE ANFIBIO. ROL DE LA CASCADA DEL CIDO ARAQUIDNICO Nombre del alumno: Mara Eugenia Ortiz e-mail del alumno:mariaeugeortiz@gmail.com Nombre del director: Dra. Liliana Zelarayn Lugar de trabajo: Ctedra de Biologa. Instituto de Biologa Dr. Francisco arbieri. Fac. de Bioq., Qca. y Farmacia. UNT. Chacabuco 461. 2do piso. e-mail del director: lzelarayan@fbqf.unt.edu.ar Palabras claves: maduracin del ovocito, prostaglandinas, cido araquidnico, cidos grasos poliinsaturados, ciclo-oxigenasa, lipooxigenasa. RESUMEN La liberacin del arresto meitico por accin de la progesterona (P4) marca el inicio de la maduracin del ovocito, una profunda diferenciacin celular que lo prepara para su fertilizacin y posterior desarrollo. Sin embargo, los mecanismos involucrados en este fascinante proceso biolgico an no han sido totalmente dilucidados. En el presente trabajo se continu con el estudio de los mecanismos de sealizacin involucrados en la regulacin de la maduracin del ovocito de anfibio inducida por P4. Nuestro inters se ha centrado en el anlisis comparativo de la formacin de los segundos mensajeros que participan en la reiniciacin de la meiosis inducida por la hormona, relacionados a la cascada del cido araquidnico (AA). En tal sentido, se estudi la participacin de las prostaglandinas (PGs) y las enzimas involucradas en
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su sntesis, durante la maduracin de ovocitos de Rhinella arenarum (ex Bufo arenarum). La cascada del AA participara en los procesos reproductivos de esta especie, dado que la incubacin de ovocitos desnudos y folculos completos en presencia de AA es suficiente para reiniciar la meiosis en forma dosis dependiente. Por otra parte, la activacin de la fosfolipasa A2 (PLA2), principal enzima que cataliza la liberacin del AA desde las membrana celulares, provoca la reiniciacin de la meiosis en ovocitos de Rhinella arenarum. Sin embargo, durante la maduracin inducida por P4 en esta especie, el AA podra liberarse por accin de otras fosfolipasas diferentes de PLA2, ya que los inhibidores de dicha enzima no afectan de manera significativa el proceso. La maduracin inducida por P4 puede ser adems parcialmente inhibida por los antiinflamatorios no esteroideos (AINEs), sustancias que afectan negativamente la actividad de la ciclooxigenasa (COX), otra enzima de la cascada del AA. Esto sugiere que COX participara de los mecanismos involucrados durante la reiniciacin de la meiosis. En tal sentido, bajo la ), uno de los productos de COX, ovocitos (PGF2 accin de la prostaglandina F2 y folculos reinician la meiosis de manera dosis y tiempo dependiente. La sensibilidad de esta respuesta es mxima durante el perodo reproductor del animal y estara correlacionada a las variaciones estacionales de la respuesta ovrica a P4. Es probable que esta prostaglandina, por un mecanismo desconocido, active al pre-MPF transformndolo en MPF activo que permite la reiniciacin de la meiosis, como lo avalan los experimentos de microinyeccin . Este de ovocitos inmaduros con citoplasma madurado bajo la accin de PGF2 proceso, de manera similar a la maduracin inducida por P4, sera independiente parece ser un de la transcripcin gnica. La maduracin inducida por PGF2 fenmeno genuino, como lo seala el hecho de que los ovocitos tratados con la misma son capaces de completar la meiosis, activarse por estimulacin elctrica o microinyeccin de espermatozoides y formar proncleos. Si bien hasta el momento se desconocen los mecanismos de accin de las PGs en la induccin de la maduracin de ovocitos de anfibios, los resultados obtenidos en el presente trabajo representan un aporte original sobre el tema y plantean nuevos interrogantes en el estudio del proceso de maduracin.

USO DE PRODUCTOS NATURALES PARA EL CONTROL DE PATGENOS DE CITRUS Autor: Negrillo Kovacevich Lucas Fabian Director: Dr. Jorge Esteban Sayazo Lugar de Trabajo: Ctedra de Botnica Inst. De Estudio Vegetal Palabras Claves: Citrus, Hongos, Biocidas RESUMEN La provincia de Tucumn concentra cerca del 90 % de la actividad citrcola limonera del pas y es en consecuencia un referente mundial de esta importante actividad agroindustrial. Uno de los principales problemas de la citricultura mundial
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consiste en las enfermedades de poscosecha que ocasionan grandes prdidas econmicas y que en su mayora son de origen fngico. Entre las especies fngicas ms frecuentemente encontradas como causantes de enfermedad de poscosecha de los citrus se pueden citar: Penicillium digitatum (podredumbre verde), Penicillium italicum (podredumbre azul), Alternara citri (podredumbre negra), Botrytis cinerea (podredumbre gris), Colletotrichum gloesporioides (antracnosis), Geotrichum candidum (podredumbre amarga), Phytophtora citrophtora (aguado) y Fusarium oxysporum (hongo saprfito del suelo). Los tratamientos qumicos, que retardan la aparicin de enfermedades posteriores a la cosecha, aseguran la proteccin de los frutos frescos. Sin embargo, su uso continuo origin el desarrollo de resistencia en los organismos y contaminacin ambiental por la acumulacin de residuos txicos para el hombre, tanto para el que los consume como para el que los manipula. Consecuentemente, es deseable el desarrollo de estrategias alternativas de manejo capaces de complementar o reemplazar el uso de productos qumicos sintticos con el empleo de microorganismos, de sustancias inductoras de las respuestas defensivas vegetales y/o con el empleo de sustancias biocidas naturales. Este trabajo se orient a la bsqueda especies vegetales de la Puna Argentina con actividad antifngica y potencial aplicacin en el control de infecciones post-cosecha de frutas ctricas. Se detect actividad antifngica in vitro contra cepas de Penicillium digitatum y de Geotrichum candidum en tres de las nueve especies ensayadas: Chuquiraga atacamensis, Parastrephia phyliciformis y Parastrephia lepidophylla. Se establecieron valores de CIM50 de 60 g/ml (expresada en equivalentes de compuestos fenlicos) para extractos de P. phyliciformis y de 90 g/ml para extractos de C. atacamensis frente a cultivos de P. digitatum, mientras que P. lepidophylla present valores de CIM de 300 a 600 g/ml frente a cepas de P. digitatum y de G. candidum. Los valores de CFM fueron similares a los valores de CIM frente a ambos microorganismos ensayados. Los ensayos in vivo mostraron un efecto protector del extracto acuoso de P. lepidophylla (600 g de compuestos fenlicos) contra la infeccin de frutos por una cepa salvaje de P. digitatum. Adems, se determin que la actividad antifngica del extracto de P. lepidophylla no estaba relacionada con una actividad inhibitoria del extracto sobre actividades de poligalacturonasa fngica.

CAPACIDAD DEL ESTUDIO DE LA CAPACIDAD ANTAGNICA Y DEL EFECTO EN LA PLNTULAS AISLAMIENTOS TRICHODERMA EMERGENCIA DE PLNTULAS DE SOJA DE AISLAMIENTOS DE TRICHODERMA SPP. Nombre: Marianela Maza. Email: marianelamaza@gmail.com Director: Dra. Ing. Agr. Marta Graciela Yasem de Romero Lugar de trabajo: Ctedra de Fitopatologa - Facultad de Agronoma y Zootecnia Universidad Nacional de Tucumn (UNT). Email: romeroyasem@arnet.com.ar Lugar donde realizaron el trabajo: Ctedra de Fitopatologa - Facultad de Agronoma y Zootecnia - Universidad Nacional de Tucumn (UNT). Direccin: Florentino Ameghino S/N El Manantial Tucumn
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RESUMEN Los problemas sanitarios ocasionados por hongos, bacterias, virus y nematodos afectan seriamente el cultivo de soja (Glycine max (L.) Merrill) provocando prdidas en su rendimiento y/o afectando la calidad de las semillas. Para combatir los patgenos fngicos se utilizan compuestos qumicos que, si bien son muy eficientes en su control, tambin son txicos inespecficos que eliminan tanto a los organismos patgenos como a los que actan como antagonistas. Se usan en dosis cada vez mayores debido a la generacin de resistencia lo que ocasiona un importante deterioro ambiental y un riesgo para la salud. Como alternativa de manejo de cultivos surge la utilizacin conjunta de bajas dosis de fungicidas y cepas de antagonistas tolerantes a los agroqumicos. Los hongos del gnero Trichoderma spp. presentan caractersticas singulares que los convierten en agentes eficientes de biocontrol tales como: facilidad de aislamiento y cultivo, rapidez de crecimiento, competencia por el sustrato, produccin de compuestos con actividad antibitica, y metabolitos voltiles. En este trabajo de investigacin se seleccionaron cuatro cepas de hongos pertenecientes al gnero Trichoderma spp. que posean capacidad antagnica frente a los hongos patgenos portados por las semillas de soja Corynespora cassiicola, Diaporthe/Phomopsis y Fusarium semitectum y se evalu su incidencia en la emergencia de plntulas. El antagonismo se determin por competencia por el sustrato, deteccin de metabolitos difusibles y voltiles y por observaciones microscpicas de la interaccin de las hifas. Se hicieron cultivos duales, se midi diariamente el dimetro de cada colonia hasta enfrentamiento y se calcularon el rea de la colonia y el porcentaje de rea ocupada (PAO). Estos parmetros se compararon mediante la prueba de LSD de Fisher al 5%. Los aislamientos TW y TX produjeron mayor inhibicin sobre F. semitectum y Diaporthe/Phomopsis mientras que TX y TY lo hicieron sobre C. cassiicola. La cepa TZ tuvo el menor efecto sobre los tres patgenos. La deteccin de metabolitos difusibles se realiz cultivando el hongo antagonista sobre papel celofane en placas de Petri y sembrando los hongos patgenos, luego de retirado el papel. Se midieron dos dimetros en posicin ortogonal de las colonias y se calcularon los porcentajes de inhibicin. Las cepas antagonistas TW, TX y TY evidenciaron elevados porcentajes de inhibicin sobre C. cassiicola, Diaporthe/Phomopsis y F. semitectum; la cepa TZ slo mostr efecto significativo sobre F. semitectum. Se realiz la deteccin mediante el mtodo de placas de los metabolitos voltiles producidos por las cepas TY y TZ (que mostraron diferencias en su capacidad antagnica). Los porcentajes de inhibicin sobre F. semitectum y Diaporthe/Phomopsis fueron altos (30 y 43%, respectivamente), pero en el caso de C. cassiicola no super el 16,7%. La capacidad antagnica de TW fue Grado 2 (Escala de Elas y Arcos) y Clase 2 (Escala de Bell); la de TX y TY fue Grado 4 y Clase 1 y la cepa TZ present Grado 0 y Clase 3, a los siete das sobre los tres patgenos. Los distintos aislamientos de Trichoderma spp. manifestaron, al ser observados al microscopio ptico, efecto parastico por enrollamiento, penetracin de las hifas y/o formacin de estructuras de gancho, interfiriendo con las funciones biolgicas del patgeno y deteniendo su crecimiento.
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Para determinar el efecto bioprotector y/o estimulante de la emergencia de plntulas de soja de los aislamientos de Trichoderma spp., se sembraron semillas inoculadas con suspensiones de antagonistas en bandejas plsticas usando sustrato estril. Se detect un pequeo aumento en el porcentaje de germinacin de las semillas tratadas con TY, POOL y TZ con respecto a los testigos. A los ocho das las plntulas se extrajeron del sustrato y se midieron la altura de la parte area y el largo del sistema radicular, el peso fresco y el seco. El tratamiento TY fue el ms eficiente en cuanto al largo de la raz, aunque no se observ diferencias significativas con el resto de los tratamientos biolgicos. Fue posible determinar diferencias significativas en la altura de las plntulas que se increment en presencia de TY y TX. Entre las plntulas inoculadas con los diferentes aislamientos de Trichoderma spp. no se observaron diferencias significativas entre ellos cuando se analiz el peso fresco del sistema radicular pero s al analizarse el de la parte area donde TX y TY mostraron mejor desempeo. En cuanto al peso seco de la parte area, se observ una disminucin de los tratamientos biolgicos con respecto a los testigos. Cuando se analiz el peso seco del sistema radicular los antagonistas mostraron superioridad frente a los testigos Por ltimo, se evalu la sensibilidad in vitro de los aislamientos TY y TZ al fungicida Metalaxil-M 3,75% + Fludioxonil 2,5% mediante cultivo de los hongos en presencia de diferentes concentraciones del producto qumico. A las 72 horas se midi los dimetros en posicin ortogonal de las colonias y se calcul el CE50 evidencindose moderada sensibilidad de las cepas, siendo TY ms sensible que TZ por lo que no sera posible su uso combinado en sistemas de manejo integrado en soja. PALABRAS CLAVE: control biolgico, hongos antagonistas, soja

ESENCIAL PRODUCTOS USO DEL ACEITE ESENCIAL DE ORGANO COMO ADITIVO DE PRODUCTOS LCTEOS FERMENTADOS Alumno: Marcial Guillermo Emilio (guillemarcial@cerela.org.ar/guimark@hotmail.com) Director:: Dra. Carola Schuff , Ctedra de Qumica organica II (cshuff@fbqf.unt.edu.ar) Dra. Graciela Font de Valdez, CERELA-CONICET (gfont@cerela.org.ar) Lugar de trabajo: Ctedra de Qumica Orgnica II, Universidad Nacional de Tucumn CERELA-CONICET, Laboratorio Experimental de Alimentos. RESUMEN: El objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un nuevo producto lcteo fermentado asociado a los componentes naturales de una planta aromtica de uso comn en alimentos, el organo. Se extrajo el constituyente aromtico de esta planta, su aceite esencial, mediante arrastre con vapor de agua. Se estudi su composicin qumica mediante cromatografa gaseosa acoplada a espectrometra de masa, determinndose que sus componentes mayoritarios fueron -terpineno, terpineno, terpinen-4-ol y timol. El aceite esencial de organo (AEO) se us como aditivo en la elaboracin de quesos, con el fin de aromatizar/saborizar los mismos. Se elaboraron quesos con
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concentraciones variables del aceite y se sometieron los mismos a una degustacin. Se determin que la concentracin ptima para lograr una buena aromatizacin/saborizacin fue 200 ppm. Investigaciones previas demostraron que el AEO presenta un efecto antibacteriano importante. Por tal razn se analiz el efecto del AEO sobre el crecimiento de las bacterias lcticas (CRL 656 y CRL 468, Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus; CRL 813 y CRL 728 Streptococcus thermophilus y CRL 597, Lactococcus lactis ssp lactis) que componen el fermento lctico para quesos de pasta semidura (diseado y formulado en el Laboratorio Experimental de Alimentos de CERELA) mediante el mtodo de difusin en agar. No se observ efecto inhibitorio hasta una concentracin de 1000 ppm. Se estudi la actividad metablica de cada una de las cepas que forman el fermento, y del fermento completo en presencia y ausencia de AEO. No se observaron cambios significativos en la actividad de las cepas. Se disearon y formularon quesos de pasta semidura con el agregado de hojas de organo o su aceite esencial. Se observ un aumento de la microflora contaminante en los quesos elaborados con hojas de organo, hecho que no ocurri con el agregado de la esencia. Se concluye que con el agregado del aceite se obtiene un queso aromatizado ms homogneo y de mejor calidad microbiolgica. Palabras claves: bacterias lcticas, quesos, aceites esenciales.

POLIFOSFATO NUEVOS ROLES DEL POLIFOSFATO EN CLULAS DE ESCHERICHIA COLI EN FASE ESTACIONARIA Alumna: Andrea Mariana Lencina; e-mail: andreamarianalencina@gmail.com Directoras: Bioq. Mara Regina Rintoul, e-mail: grintoul@fbqf.unt.edu.ar; Dra. Viviana Andrea Rapisarda e-mail: vrapisarda@gmail.com; Instituto. de Qumica Biolgica Dr. Bernab Bloj, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia (UNT), Departamento Bioqumica de la Nutricin, INSIBIO (CONICET-UNT); tel: 0381-4248921; Lugar donde se realiz el trabajo: Instituto de Qumica Biolgica Dr. Bernab Bloj, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia (UNT), Departamento Bioqumica de la Nutricin, INSIBIO (CONICET-UNT), Chacabuco 461, (4000) San Miguel de Tucumn. RESUMEN: El polifosfato (poliP) es un polmero lineal compuesto por residuos ortofosfato unidos entre s por enlaces fosfoanhdrido de alta energa. Este polmero se acumula en las clulas durante la fase exponencial y se degrada en la fase estacionaria, debido a que se utiliza principalmente como reserva de energa. Nuestro grupo inform que clulas de Escherichia coli crecidas hasta fase estacionaria en medios con concentraciones de fosfato mayores a 37 mM, presentaban: alta viabilidad, alta expresin de los genes y actividad de las enzimas de la cadena respiratoria y del sistema de defensa, baja produccin de especies reactivas del oxgeno y escaso dao oxidativo. Se demostr tambin, que el responsable de estos efectos era el alto nivel de poliP presente en dichas clulas. Arch. Bioq., Qum. y Farm. Tucumn Tomo XXI N 1 2010-2011

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La habilidad de las bacterias para colonizar un ambiente depende, entre otros factores, de su estado fisiolgico, de su capacidad de desplazarse y de la resistencia a compuestos presentes en el medio, tales como los antibiticos. Los microorganismos anaerobios facultativos poseen flexibilidad respiratoria, lo que representa una ventaja al momento de la colonizacin. Tres de las principales clases de antibiticos bactericidas, -lactmicos, quinolonas y aminoglicsidos, los cuales poseen distintos blancos de accin, producen la muerte de las bacterias por un mecanismo comn, independiente de dichos blancos. El mecanismo descrito como crtico es el estrs oxidativo inducido por estos antibiticos, ya que estimulan la produccin de dosis letales de radicales hidroxilo, a travs de una reaccin de tipo Fenton. As, para este trabajo final, nos planteamos determinar en clulas crecidas hasta fase estacionaria en cultivos con suficiente y alta concentracin de fosfato, la influencia de la concentracin de fosfato del medio en la capacidad de reanudar el crecimiento, en el metabolismo energtico celular en cultivos con distintas fuentes de carbono, la motilidad por swimming o swarming y la resistencia a antibiticos bactericidas con diferentes blancos de accin. Los resultados mostraron que las clulas, crecidas en medios con altas concentraciones de fosfato hasta fase estacionaria tarda, presentan mayor viabilidad y una corta fase lag al ser reinoculadas en medio fresco. Tambin presentan motilidad tipo swarming y mayores valores de CIM para la mayora de los antibiticos estudiados. La mejora en estos factores de virulencia bacteriana indica que altas concentraciones de fosfato otorgaran ventajas a E. coli que le permitiran colonizar y sobrevivir en el ambiente. Con respecto a la va metablica utilizada por la clula en medios con distintas fuentes de carbono y disponibilidad de oxgeno, se ensay la expresin del opern nuo y el gen ndh que codifican para NDH-1 y NDH-2 de E. coli, respectivamente. El opern nuo mostr muy poca variacin en su expresin, en las condiciones ensayadas, presentando un nivel de expresin basal. En medios con altas concentraciones de glucosa (40 mM), se observ que la expresin de ambos genes era mayor en medios con elevada concentracin de fosfato. La expresin del gen ndh mostr una gran variacin segn la fuente de carbono empleada y la disponibilidad de oxgeno y adems, una inusual y elevada expresin en anaerobiosis. Hasta el momento, no se han descrito funciones para esta enzima en anaerobiosis, por lo que resultara interesante profundizar el estudio de la expresin de ndh en estas condiciones tanto para determinar el o los reguladores de la transcripcin involucrados, como para poder elucidar la funcin de NDH-2 en estas condiciones de cultivo. Palabras clave: Escherichia coli, polifosfato, motilidad, antibiticos, fuentes de carbono.

CLONADO Y EXPRESIN DEL DOMINIO ACTIVO DE LEFTY2 FUSIONADO A LA FLUORESCENTE PROTENA FLUORESCENTE VERDE (GFP) JULIN HORACIO JUREZ Julianhj_1@hotmail.com Director : Dr. PABLO A. VALDECANTOS pvaldecantos@fbqf.unt.edu.ar
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RESUMENES DE TESINAS RESUMENES DE TESINAS RESUMENES DE TESINAS Lugar de trabajo: Ctedra de Biologa Celular y Molecular Siglas usadas: TGF-: Factores de crecimiento Transformante Lefty2: monmero del factor de crecimiento Lefty2. EGFP: variante de la proteina fluorescente verde.

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RESUMEN La superfamilia de los factores de crecimiento transformante beta (TGF-) agrupa a un conjunto de aproximadamente 40 protenas extracelulares estructuralmente relacionadas. Este extenso grupo de ligandos comprende a importantes reguladores de una gran variedad de procesos celulares tales como la regulacin de la proliferacin celular, diferenciacin, morfognesis sea, migracin, apoptosis, reproduccin, remodelacin de tejidos, desarrollo, adhesin, crecimiento neuronal, cicatrizacin y respuesta inmune. Entre los miembros de esta superfamilia se incluyen a las tres isoformas de TGF- (TGF- 1, TGF- 2, TGF- 3), activinas e inhibinas, protenas morfogenticas seas (BMPs), factores de diferenciacin de crecimiento (GDFs). Los TGF- son sintetizados como una protena precursora biolgicamente inactiva que contiene una secuencia amino- terminal, un propptido TGF- de longitud variable y el dominio TGF- en el extremo carboxilo. Todos estos ligandos son sometidos a un procesamiento proteoltico, liberando al segmento carboxi- terminal de 110 a 140 aminocidos que constituye el TGF- activo, con elevada similitud de secuencia de aminocidos entre ellos. Los miembros de esta familia pueden unirse a distintos receptores de TGF- serina/treonina quinasas que disparan una cascada de sealizacin que llega hasta el ncleo. El gen lefty2, miembro de la familia de TGF- , se expresa en la mitad izquierda de embriones de vertebrados durante la gastrulacin, induciendo el establecimiento morfolgico de la asimetra de los rganos en un individuo, que es esencial para un desarrollo normal y para la correcta yuxtaposicin funcional de los rganos. Lefty 2 tambin se expresa en el oviducto de ratas durante la preez temprana, cuando los embriones se encuentran en el oviducto y se preparan para pasar al tero. No se conoce la funcin de la protena Lefty2 en el oviducto, pero junto a otros miembros de la familia de TGF- podran tener un papel importante sobre el desarrollo embrionario temprano en el oviducto. Con la finalidad de disponer de una protena recombinante que permita determinar el significado fisiolgico de la expresin de Lefty2 en el oviducto, el objetivo de este trabajo fue obtener una construccin con la secuencia que codifica el dominio activo de Lefty2 fusionada a la que codifica a la protena fluorescente EGFP. La expresin de protenas en sistemas heterlogos representa una herramienta de gran utilidad para la produccin de protenas de inters. Las protenas recombinantes pueden ser expresadas con fines biotecnolgicos o bien pueden ser utilizadas para estudios bsicos funcionales y/o produccin de anticuerpos. Los sistemas procariotas han resultado efectivos para la expresin de protenas recombinantes eucariotas; sin embargo, en muchos casos las protenas eucariotas sintetizadas en bacterias resultan inestables o bien carecen de actividad biolgica debido a la falta de modificaciones post-traduccionales. La EGFP constituye una herramienta muy importante cuando se quiere obtener informacin sobre la funcin, localizacin e interaccin molecular de una protena particular con otras protenas mediante tcnicas clsicas de microscopa de
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fluorescencia multicolor en clulas vivas. La fluorescencia que generan espontneamente estas protenas al ser sintetizadas por diferentes tipos celulares, permite que puedan estudiarse en clulas vivas sin necesidad de fijacin y tincin. En este trabajo se ha clonado un fragmento de ADNc que codifica para el dominio activo de lefty2 de rata en el vector pEGFP-C2 que contiene el promotor del citomegalovirus (CMV) y el gen que codifica a una variante de la protena fluorescente verde (EGFP). Se determinaron los sitios de corte de furina y se compararon las posiciones de estos sitios de procesamiento proteoltico entre Lefty2 y los otros TGF-, a partir de los datos obtenidos se encontr que el dominio activo de lefty2 tiene un tamao mayor (230 aminocidos) a lo propuesto para la familia de TGF-. Utilizando el programa DeepView/Swiss-PdbViewer 3.7(SPS), se predijo la estructura tridimensional del dominio activo de Lefty2; el modelo obtenido est de acuerdo con la estructura general de los miembros de la familia TGF-. Se realiz una transfeccin ex vivo, mediante un procedimiento muy sencillo y econmico descrito previamente por McNeil y col. en el ao 1984, el mismo result eficiente ya que se observ fluorescencia debida a EGFP en las clulas transfectadas, mientras que tambin, se realiz una trasfeccin in vivo en clulas musculares mediante inyeccin intramuscular de ADN plasmdico recombinante en donde tambin se obtuvieron resultados favorables. Se realiz una inmunizacin gnica de un conejo con un plsmido recombinante construido a tal efecto, que permite expresar la protena quimrica EGFP porcin del dominio activo de Lefty2 de rata, con la finalidad de producir anticuerpos contra una porcin del extremo carboxilo terminal de la protena Lefty2 de origen humano.

AISLAMIENTO DE BACTERIAS CON POTENCIAL EN LA BIODEGRADACIN DE (HAPs) HIDROCARBUROS AROMTICOS POLICCLICOS (HAPs) A PARTIR DE SEDIMENTOS DE LA COSTA PATAGNICA Nombre del alumno, Email: Paula Isaac, pauisaac86@yahoo.com.ar Nombre del director (lugar de trabajo, email): Dra. Marcela Alejandra Ferrero, PROIMI, mferrero@proimi.org.ar Lugar donde realizaron el trabajo (con la direccion completa): PROIMI- CONICET Av. Belgrano y Pje. Caseros CP:4000. San Miguel de Tucumn RESUMEN: En el presente trabajo se realizaron estudios relacionados a la degradacin de hidrocarburos aromticos policclicos en cuatro muestras de sedimento tomadas de distintos puntos de la provincia de Chubut en la Patagonia Argentina, con propiedades variadas y diferentes grados de contaminacin. A partir de las muestras provenientes de Comodoro Rivadavia y Muelle Piedrabuena se aislaron 450 cultivos puros, 32 de los cuales expresaron actividad naftaleno dioxigenasa en la prueba de transformacin del indol a ndigo. Las cepas seleccionadas crecieron en placas de medio mnimo slido con naftaleno, antraceno, pireno, fenantreno, acenafteno, fluoranteno, y bifenilo como nica fuente de carbono y energa.
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Se examin la diversidad microbiana en las cepas seleccionadas mediante tcnicas moleculares de RFLP. Un patrn de bandas idntico en todas las cepas ensayadas con dos enzimas de restriccin, sugiri que un nico gnero fue capaz de expresar actividad de naftaleno dioxigenasa. Dicho aislado fue identificado como Arthrobacter crystallopoietes (99% de similaridad) y se comprob su capacidad de metabolizar naftaleno como fuente de carbono y energa, aumentando la biomasa obtenida en aproximadamente 45% de los valores obtenidos en los controles sin la adicin de naftaleno. Se analiz la presencia de genes catablicos implicados en la degradacin de HAPs mediante amplificacin por PCR. Los resultados de amplificacin negativos, sugirieron la posibilidad de encontrarnos ante genes, enzimas o rutas metablicas diferentes a las ya estudiadas. En las muestras de sedimento de Caleta Crdova y Playa Fracasso se estudi y compar la biodiversidad bacteriana en los sedimentos y en los respectivos enriquecimientos con naftaleno, mediante PCR seguida por electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (PCR-DGGE). Los gneros encontrados fueron Pseudomonas, Formosa, Olleya, Polaribacter y Pseudoalteromonas. Muchos de los gneros aislados pueden llegar a ser potenciales degradadores de HAPs, considerndose de inters para procesos de biorremediacin en sitios contaminados. - Palabras clave (tres, que ayuden a ampliar una bsqueda y consideren un poco ms de lo que est incluido en el ttulo): Biorremediacin, HAPs, naftaleno dioxigenasa

GENTICO POSTFRUTILLA SILENCIAMIENTO GENTICO POST-TRANSCRIPCIONAL EN FRUTILLA (FRAGARIA X ANANASSA DUCH.) Alumna: Mara Elena Iezzi. Email: meiezzi@gmail.com Lugar de realizacin de la tesina: Seccin Biotecnologa Estacin Experimental Agroindustrial Obispo Colombres. Av. William Cross 3150 - Las Talitas Director: Juan Carlos Daz Ricci. Email: juan@fbqf.unt.edu.ar Lugar de trabajo: INSIBIO. Chacabuco 461. Telfono: 0381-4248921 Codirector: Gabriel Ricardo Vellicce Email: vellicce@yahoo.com Lugar de trabajo: Seccin Biotecnologa Estacin Experimental Agroindustrial Obispo Colombres. Telfono: 0381- 452 1000 Palabras claves: Agrobacterium tumefaciens, transformacin estable, transformacin transitoria, GFP, dsRNA. RESUMEN: El silenciamiento gnico es un mecanismo de regulacin de la expresin gnica a nivel post-transcripcional, observado de manera universal en los organismos eucariotas. Este mecanismo, especfico de secuencia, es inducido y dirigido por RNA de doble cadena (dsRNA). En este trabajo se analiz el silenciamiento gnico en plantas de frutilla. Se obtuvieron plantas de frutilla transformada en forma estable con el gen sgfp, que codifica para la protena verde fluorescente (GFP), utilizando el mtodo de transformacin mediado por Agrobacterium tumefaciens. El silenciamiento de este gen se analiz mediante la
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infiltracin (transformacin transitoria) de las plantas transgnicas con una horquilla adecuada para silenciar a GFP. No se observ silenciamiento del gen endgeno de GFP al observar las plantas bajo luz azul. El silenciamiento tambin se analiz en plantas de frutilla no transgnicas mediante co-infiltracin del gen sgfp y la horquilla para su silenciamiento. Se logr silenciar en un 50% al gen de GFP.

DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE LAS ISOFLAVONAS DAIDZENA Y GENISTENA Y FENOLES TOTALES EN DISTINTOS CULTIVARES DE SOJA DEL NOA Alumno: Karina Andrea Guzzetti, karina_guzzetti@hotmail.com Directora. Carola Schuff de Heluani, Lugar de trabajo: Ctedra de Qumica Orgnica II de Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, y el Instituto de Nacional de Tecnologa Agropecuaria ( INTA), Centro Regional NOA. Ruta Provincial 301- km 32, C P 4132- Famaill. RESUMEN Glycine max (L.) Merrill, conocida como soja o soya es una leguminosa que pertenece a la familia Fabaceae. En los ltimos aos se ha relacionado su consumo con la baja incidencia de algunos tumores como as tambin con un efecto positivo en trastornos relacionados con la menopausia. Los productos de mayor consumo de la soja son el grano, el aceite y harinas proteicas. No obstante en pases asiticos se consumen bajo otras formas: tof, leche de soja, harina, miso y salsa de soja. El grano de soja, adems de protenas y aceites contiene un gran nmero de fitoqumicos bioactivos tales como isoflavonas, saponinas, fitoesteroles, cido fenlicos. En particular las isoflavonas son llamadas fitoestrgenos por su estructura fenlica similar al estrgeno con probable actividad estrognica y potencial efecto protector contra ciertos tipos de cncer de colon, mama y prstata. Las principales isoflavonas en soja son la genistena y daidzena, adems de otras formas; glicitena y sus derivados glucosilados y metoxilados. Hasta el momento, en nuestro pas no han sido reportados estudios en relacin a la variacin del contenido de isoflavonas en soja, ni los porcentuales de esta variabilidad basados en efectos genticos y ambientales. En el presente trabajo se aislaron e identificaron las isoflavonas (daidzena y genistena) en 16 cultivares de soja sembrados en dos fechas en las localidades de Salta y Tucumn. La extraccin de las mismas se realiz con HCl y acetonitrilo. La identificacin se realiz por comparacin del espectro UV de las mismas con el de los estndares comerciales y por el tiempo de retencin al ser procesadas por HPLC. Se determin variacin en la concentracin de las isoflavonas en distintos cultivares para la misma fecha de siembra de 84,7 a 13,8 para daidzena y de 28,8 a 14,6 g g1 para genistena. Mientras que para un mismo cultivar la fecha de siembra gener variacin en los contenidos de la isoflavonas estudiadas, al comparar ocho cultivares de soja en el mismo ambiente (Salta).
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Por otro lado se compararon ocho cultivares de soja de Tucumn en los cuales tambin se observ variacin en el contenido de las isoflavonas de 49,7 a 10,9 para daidzena y de 22,7 a 4,8 g g-1 para genistena. Estos resultados fueron coincidentes con los informados por otros autores con respecto a la variacin en la concentracin de isoflavonas que depende de efectos ambientales (temperatura, radiacin, precipitaciones, suelo), factores genticos, ao, sitio, genotipo, segn la regin donde se desarrolla el cultivo. Debido a la naturaleza fenlica de las isoflavonas reportadas en soja es que se abord el anlisis del contenido de polifenoles utilizando el reactivo de FolinCiocalteu, cuyo resultado fue significativo para cada cultivar. Se determin variabilidad para contenidos de fenoles en los cultivares de soja. Palabras: Glicine Max, Fitoesteroles, Folin-Cicolteau

FISIOLGICOS ASPECTOS FISIOLGICOS Y TECNOLGICOS DE LACTOCOCCUS LACTIS RANICULTURA CRL 1584, POTENCIAL PROBITICO PARA RANICULTURA Tesinista: Marcos Gabriel Guidoli, marcosguidoli@hotmail.com Director: Mara Claudia Otero, Ctedra de Biologa Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia UNT, CERELA-CONICET mcotero70@yahoo.com.ar Co Director: Sergio Enrique Pasteris, Ctedra de Biologa Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia UNT-CONICET spasteris@hotmail.com Lugar de realizacin del trabajo: Ctedra de Biologa Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas (INSIBIO) Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia UNT. Chacabuco 461 San Miguel de Tucumn, Tucumn, Argentina RESUMEN En el presente trabajo se estudiaron aspectos fisiolgicos y tecnolgicos de Lactococcus lactis subsp lactis CRL 1584, microorganismo aislado de ranario y seleccionado por sus propiedades de superficie e inhibitorias frente a microorganismos patgenos asociados a Sndrome de la Pata Roja (SPR) y contaminantes de alimentos. En la etapa inicial se evalu la capacidad de L. lactis CRL 1584 para producir cido lctico, H2O2 y una sustancia tipo bacteriocina, observndose cinticas y condiciones ptimas de produccin diferentes para cada metabolito. Posteriormente se realizaron co-cultivos de L. lactis CRL 1584 y Citrobacter freundii CFb en condiciones estticas y de agitacin. En los mismos, el patgeno fue inhibido por la bacteria lctica (BL) de forma ms rpida en condiciones de agitacin que en co-cultivos estticos. Para profundizar en los mecanismos asociados al efecto inhibitorio se expuso C. freundii a sobrenadantes de cultivos de L. lactis CRL 1584 crudo, neutralizado, tratado con catalasa o con -quimiotripsina. La presencia de un medio cido fue necesaria para que los otros metabolitos antagnicos puedan ejercer su efecto inhibitorio, evidenciando un efecto sinrgico entre los tres metabolitos estudiados. Estos hallazgos se corroboraron cuando C. freundii se enfrent a medio LAPTg adicionado con los metabolitos. Asimismo, los daos en la ultraestuctura celular del patgeno se correlacionaron con las modificaciones en el nmero de clulas viables cuantificadas
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en los diferentes ensayos. Modificaciones estructurales extremas fueron detectadas en la bacteria patgena al enfrentarse a sobrenadantes crudos de L. lactis CRL 1584. Adems se observ que cada metabolito produjo modificaciones particulares a diferentes niveles de la ultraestructura celular. Con respecto a las propiedades tecnolgicas de L. lactis CRL 1584, se ensayaron seis combinaciones como medios crioprotectores, de las cuales la que permiti una mayor sobrevida y el mantenimiento de la capacidad inhibitoria de la BL durante la liofilizacin fue el concentrado proteico de suero al 10% adicionado con sacarosa al 5%. La utilizacin de este medio de liofilizacin nos permiti concluir que es el que mejor preserva la viabilidad y el mantenimiento de las propiedades de L. lactis CRL 1584 cuando las clulas son conservadas a 4C postliofilizacin. En estas condiciones, se evalu la potencial administracin de la BL con el alimento balanceado, en las condiciones como ste es preparado cuando es suministrado a los animales. Se observ que L. lactis, no solo mantuvo su viabilidad en el alimento, sino que increment el nmero de clulas viables y adems fue capaz de conservar sus propiedades inhibitorias frente a C. freundii en esas condiciones. Los resultados presentados en este trabajo sientan las bases para la inclusin de Lactococcus lactis subsp lactis CRL 1584 en un producto probitico de aplicacin veterinaria destinado a la prevencin de epizootias en criaderos de Rana catesbeiana. Los cultivos secos de este microorganismo pueden obtenerse empleando medios de bajo costo y administrarse a los animales de una forma prctica, conjuntamente con el alimento. Por lo expuesto, se propone la utilizacin de esta cepa de BL como una alternativa para mejorar la rentabilidad de una actividad productiva no convencional como es la ranicultura. Palabras clave: Bacterias lcticas, probiticos, ranicultura

ESTUDIO DE COMPONENTES DE LA VA DE SEALIZACIN DE LAS (BMPs) PROTENAS MORFOGENTICAS SEAS (BMPs) EN EL OVIDUCTO BOVINO Nombre del alumno, Elina Vanesa Garcia, e-mail: e.vanesagarcia@gmail.com Nombre del director : Dr. Pablo A. Valdecantos. Instituto de Biologa Dr. Francisco Barbieri Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumn. pvaldecantos@fbqf.unt.edu.ar , pabloav99@yahoo.com Lugar donde realizaron el trabajo: Instituto de Biologa Dr. Francisco Barbieri Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumn. Chacabuco 461 - CP 4000 San Miguel de Tucumn ARGENTINA. RESUMEN Las protenas morfogenticas seas (BMPs) son protenas multifuncionales pertenecientes a la superfamilia de los Factores de Crecimiento Transformante Beta (TGF-). Las rutas de sealizacin en las que participan estas molculas son importantes en el desarrollo embrionario, en el desarrollo de rganos, en la formacin del esqueleto y del sistema nervioso central, y cumplen un papel crucial en la reproduccin de mamferos dado que regulan la remodelacin de los tejidos reproductivos, el desarrollo folicular en el ovario, la implantacin y el desarrollo del embrin en el tero. Sin embargo, an cuando se reconoce la importancia de las

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BMPs en la reproduccin, no existen estudios sobre la funcin y expresin de BMPs en el oviducto de mamferos. El objetivo del presente trabajo final fue demostrar que miembros de la familia BMP y componentes que intervienen en su va de sealizacin se expresan en el oviducto bovino. Para ello, mediante la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa acoplada a la transcripcin reversa (RT-PCR), se evalu la expresin de los genes que codifican para 10 miembros de la familia BMP (BMP2,-3,-4,-5,-6,-7,10,-12,-13,-15) y para 3 componentes de su va de sealizacin (ALK2, ACTRIIA y SMAD1) en: a) muestras de oviductos completos, b) fracciones de la regin del mpula y del istmo, c) clulas epiteliales de ambas regiones y d) cultivos in vitro de clulas epiteliales de la regin del istmo. Los resultados obtenidos revelaron por primera vez que en el oviducto bovino se expresan los ARNm de BMP2, BMP3, BMP4, BMP5, BMP7, BMP15, ALK2, ACTRIIA y SMAD1. Dicho perfil de expresin se conserva tanto en trozos de oviductos como en clulas epiteliales de la regin del mpula y del istmo, a excepcin de BMP5 cuya expresin solamente se detect en las muestras de istmo, por lo que sera el nico miembro de la familia que se expresara especficamente en esta regin. La expresin de BMPs en las clulas epiteliales del oviducto nos permite considerar la posibilidad de que dichos factores sean secretados y formen parte del fluido oviductal, pudiendo actuar de manera autocrina sobre las mismas clulas que los producen o de manera paracrina sobre el ovocito o el embrin pre-implantacional durante su trnsito por el oviducto. Adicionalmente, en los dos sistemas de cultivos in vitro desarrollados: a) cultivo de vesculas esferoidales y b) cultivo primario en monocapa, se conserva la expresin de los genes detectados anteriormente, a excepcin de Bmp3 y Bmp5 cuya ausencia puede estar asociada a la falta de algn componente en el medio de cultivo que est naturalmente en el oviducto regulando la expresin de los mismos. As mismo, la estimulacin hormonal de los cultivos de vesculas esferoidales con 17 -estradiol y progesterona mostr que slo en presencia de ambas hormonas los niveles de expresin de los genes detectados tenderan a aumentar, sugiriendo que exista una posible regulacin hormonal. En base a las funciones descriptas en otros rganos, la expresin de BMPs y de componentes de su va de sealizacin en el oviducto bovino, sugiere que estos factores estn presentes en el microambiente oviductal y acten regulando los procesos que ocurren en el oviducto tales como la remodelacin tisular y el desarrollo embrionario pre-implantacional. Esto llevara a incorporar dichos factores en medios de cultivo con el objeto de optimizar las tcnicas in vitro de maduracin de ovocitos, fecundacin y produccin de embriones, empleadas en el rea de la biotecnologa reproductiva. - Palabras clave (tres, que ayuden a ampliar una bsqueda y consideren un poco ms de lo que est incluido en el ttulo): BMP - OVIDUCTO BOVINOS FACTORES DE CRECIMIENTO

MARCADORES OBTENCIN DE MARCADORES GENTICOS PARA EL ESTUDIO DE LA VICUAS DIVERSIDAD GENTICA DE POBLACIONES DE VICUAS DEL NOROESTE ARGENTINO Nombre del alumno: Daniela Celeste Garca. Email: dani.c.garcia@gmail.com
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Nombre del director: Dra. Mariela Roldn Olarte. INSIBIO, Ctedra de Biologa Celular; emroldanolarte@fbqf.unt.edu.ar Lugar donde realizaron el trabajo: Ctedra de Biologa Celular. Instituto de Biologa. Fac. de Bqca, Qca y Fcia. UNT. Chacabuco 461. San Miguel de Tucumn RESUMEN La vicua es el camlido silvestre ms pequeo que habita las zonas altoandinas de nuestro pas. Posee la fibra ms fina del mundo, caracterstica que le confiere gran valor econmico. Es un animal muy protegido en Argentina, por el peligro de su extincin; pero gracias a un buen proyecto de conservacin, la poblacin de vicuas aument y ha cambiado su estatus a vulnerable. En este trabajo se emple ADN de vicua, que fue extrado a partir de muestras de sangre de individuos del INTA Abra Pampa (Jujuy) mediante el mtodo de precipitacin fraccionada. Se llev a cabo, la tcnica de Amplificacin al Azar de ADN polimrfico o RAPD (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) que propone la utilizacin de cebadores arbitrarios aplicando la tcnica de PCR en condiciones poco restrictivas. Se amplificaron muestras de vicuas mediante el uso de 10 cebadores de 9-10 bases de longitud (A01, A02, A03, A04, A05, A06, A07, A08, A09 y A10) y slo dos de ellos, A09 y A10, originaron bandas de amplificacin polimrficas. Tambin se emplearon cebadores de 19-20 bases de longitud (V01, V02, V03, V06, V07 y V011) observando que slo el cebador V03 genera polimorfismos entre los individuos analizados. Por ello, se amplificaron 50 muestras de vicuas usando el cebador A09, 50 con el cebador A10 y 54 utilizando el cebador V03. En base al anlisis de las bandas polimorficas en tablas de presencia/ausencia, se establecieron los perfiles genticos generados con cada cebador. A partir de los geles de agarosa obtenidos, se seleccionaron 4 bandas polimrficas: 2 bandas originadas con el cebador A10: A10-600 y A10-700 (de 583 y 731 pb) y 2 bandas con el cebador V03: V03-1000 y V03-1100 (de 990 y 1085 pb), se clonaron y secuenciaron. Al realizar un alineamiento de secuencias entre los fragmentos polimrficos derivados de la amplificacin mediante el cebador V03, se observ que la secuencia de V03-1100 es idntica a V03-1000, exceptuando una regin interna de 95 pb y 3 nucletidos diferenciales. A partir de ello, se disearon cebadores especficos, con el objetivo de obtener regiones amplificadas de secuencias caracterizadas o SCAR (Sequence Characterized Amplified Regions), dando lugar a marcadores nicos y de fcil interpretacin. Se obtuvo un marcador SCAR que posee 2 variantes: SCARV03-1100 y SCARV03-1000, originados a partir de bandas de amplificacin polimrficas del RAPD que utiliz el cebador V03. Se estudiaron y compararon 49 muestras de vicuas con este marcador, calculndose luego la frecuencia genotpica de los perfiles polimrficos analizados. Los marcadores determinados en este trabajo, identifican y diferencian los individuos de la poblacin de Abra Pampa, y considerando que es el primer estudio utilizando marcadores RAPD y SCAR en vicuas de nuestro pas, seran una importante herramienta para estudiar los caracteres genticos en otras poblaciones de vicuas. El conocimiento de estos marcadores podra contribuir a la toma de decisiones tendientes a la preservacin de los recursos genticos y a maximizar la diversidad en la poblacin de vicuas que habitan en el noroeste argentino. - Palabras clave: vicua, marcadores, diversidad, RAPD
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SQUAMULOSA PRODUCTOS NATURALES DE VERNONANTHURA SQUAMULOSA PARA EL AGRCOLA CONTROL DE INSECTOS DE IMPORTANCIA AGRCOLA EN EL NOA. Nombre del alumno: Roco del Mar Fernndez. E-mail: rocfernandez@hotmail.com Nombre del director: Lic. Susana Popich (Qumica Orgnica III. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Mail: sbp@fbqf.unt.edu.ar) Co- directora: Dra. Elena Cartagena (Qumica Orgnica III. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Mail: ecartagena@fbqf.unt.edu.ar) Lugar donde realizaron el trabajo: Qumica Orgnica III. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Ayacucho 474. San Miguel de Tucumn. Tucumn. RESUMEN Los insectos-plaga, revisten gran importancia en Amrica Latina y el mundo, debido a que ocasionan importantes prdidas en la produccin. El impacto ambiental provocado por los pesticidas, afecta no slo a las denominadas plagas, sino tambin a todos los seres vivos. La formulacin de plaguicidas a partir de compuestos qumicos, aislados de plantas, permitira el desarrollo de productos ms seguros, selectivos y ecolgicamente aceptables debido a su rpida biodegradabilidad y bajo impacto ambiental. El gnero Vernonia, est ampliamente estudiado e, incluye ms de mil especies en todo el mundo y alrededor de 54 en Argentina. Los estudios qumicos de algunas especies americanas, revelaron la presencia de lactonas sesquiterpnicas (LS) oxigenadas, como Glauclidos e Hirsutinlidos. En este trabajo se aborda el estudio de la especie nativa V. squamulosa como fuente de productos activos para el control de O. surinamensis y S. frugiperda. Se pusieron a punto los bioensayos para evaluar toxicidad y repelencia. Al reemplazar agroqumicos sintticos de alto impacto ambiental por productos de origen natural, fcilmente biodegradables, estaramos contribuyendo con herramientas biotecnolgicas novedosas, para el control de plagas de granos almacenados y, cultivos extensivos del NOA. Con lo cual, podremos evitar la contaminacin de sistemas de aguas, suelos, aire y, por sobre todo, disminuir el riesgo de incorporar dentro de las redes trficas, productos muy txicos a los seres vivos. -Palabras clave : Oryzaephylus surinamensis, Control biolgico, Spodoptera frugiperda. PARA ESTUDIO Y ANLISIS DE DIFERENTES TCNICAS UTILIZADAS PARA EL DIAGNSTICO DE VIROIDES DE CTRICOS. Nombre del alumno: Cecilia Escobar Ponce de Len. e-mail: sissiesco@hotmail.com Nombre del director: Ing. Agr. Beatriz Stein. e-mail: bstein@sinectis.com.ar Lugar donde realizaron el trabajo: Estacin Experimental Agroindustrial Obispo Colombres (EEAOC) Av. Willian Cross 3150 Las Talitas RESUMEN En nuestro pas se encuentran en vigencia las Normas para la produccin, comercializacin e introduccin de plantas ctricas de vivero y sus partes (Res
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149/98 de la SAGPyA), que establecen la obligatoriedad de uso de material de propagacin certificado saneado por medio de la tcnica de microinjerto de pices caulinares y comprobado su estado sanitario como libre de enfermedades. Para cumplir con la reglamentacin nacional, el Centro de Saneamiento de Citrus de EEAOC, realiza las tareas de limpieza y diagnstico de enfermedades para proveer al sector productivo material de propagacin libre de plagas y enfermedades transmisibles por injerto. Debido a que los viroides afectan a los ctricos, se desarroll un plan de trabajo destinado al estudio y anlisis de diferentes tcnicas utilizadas para el diagnstico de viroides de ctricos para su aplicacin y como alternativa en los programas de saneamiento y certificacin. Para esto, se recolectaron muestras de plantas de quintas ctricas comerciales de las provincias de Salta, Jujuy, Tucumn y Entre Ros, de la coleccin de ctricos de la EEAOC y del banco de virus del Centro de Saneamiento. Estas fueron sometidas a tcnicas diagnstico que consistieron en un mtodo biolgico y dos moleculares: s-PAGE y RT-PCR. Con el diagnstico biolgico se obtuvieron sntomas caractersticos causados por viroides, lo que puso de manifiesto la presencia de estos patgenos en la mayora de las muestras recolectadas. En este trabajo, se optimizaron dos tcnicas moleculares de diagnstico de viroides en ctricos, las cuales quedan disponibles para trabajo de rutina en el laboratorio. Se optimiz la tcnica de s-PAGE, que permiti determinar el nmero de viroides presentes en plantas ctricas y se corrobor que la mayora de las infecciones estn ocasionadas por mezclas de estos patgenos. Adems la aplicacin de esta tcnica permiti que se identificara con seguridad al viroide de la exocortis. Se optimiz la tcnica RT-PCR y la aplicacin de la misma permiti identificar la presencia de exocortis (CEVd) y del viroide del grupo dos (CVd-II) mediante el uso de cebadores especficos para cada uno de estos viroides. Palabras clave: VIROIDES RNA CITRICOS

ANTIMICROBIANA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Y ANTIBIOFILM DE DRIMANOS AISLADOS Y HIERBA POLYGONUM PURIFICADOS DE LA HIERBA NATIVA POLYGONUM PUNCTATUM Autor: Mnica Gabriela Escobar. Director: Mario Eduardo Arena Co-Director: Elena Cartagena Lugar de Trabajo: Ctedra de Qumica Orgnica III, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Ayacucho 471, San Miguel de Tucumn (4000). Palabras claves: Polygonum punctatum, polygodial, isopolygodial, biofilm. gabrielaescobar56@hotmail.com arename@fbqf.unt.edu.ar RESUMEN Polygonum punctatum Elliot es una especie herbcea nativa de Amrica. En Argentina, se distribuye en las provincias del centro y norte, en lugares de suelo hmedo, arenoso, al borde de charcos, lagunas y ros. En Tucumn, crece
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abundantemente en la zona de las Yungas. La especie conocida vulgarmente, como picantilla o ca-tay (guaran) se usa en medicina popular como antidiarreico, para curar lcera drmica, diurtica, antisptica, astringente y parasiticida. En cuanto a la composicin qumica de una planta existe una gran influencia del medio ambiente. Estudios previos, demostraron que P. punctatum contiene sesquiterpenos del tipo drimano, como el dialdehdo insaturado polygodial y su estreoismero isopolygodial. Polygodial posee un sabor picante pero no as su ismero. Algunas propiedades atribuidas a la planta parecen deberse a estos constituyentes. Existe una tendencia mundial en la bsqueda de nuevas sustancias antibiticas y/o antipatognicas, es decir compuestos que inhiban los mecanismos de patogenicidad tales como la formacin de biofilm. Este trabajo tiene como objetivo el aislamiento e identificacin de los drimanos polygodial e isopolygodial y la determinacin de la actividad antibacteriana y antibiofilm frente a cepas de coleccin (ATCC) y aislados clnicos con resistencia antibitica de las especies: Staphylococcus aureus (Gram +) y Pseudomonas aeruginosa (Gram -) Polygonum punctatum Elliot se recolect racionalmente de su ambiente natural, en la zona de las Yungas-Tucumn. Se prepar un extracto etreo a partir de las hojas secas de la especie. Los constituyentes del extracto se separaron por cromatografa en columna, utilizando gradiente. Los drimanos se purificaron por HPLC en fase normal. Se analizaron por CG-MS y se elucidaron estructuralmente por RMN 1H y de 13C. El crecimiento bacteriano y la formacin de biofilm fueron determinados espectrofotomtricamente. Ambos compuestos inhiben el crecimiento de las bacterias Gram (+) estudiadas, siendo polygodial inactivo para bacterias Gram (-). Isopolygodial produce una inhibicin total o superior al 75% para todas las cepas estudiadas, indicando un amplio espectro de accin antibitica. Encontramos un importante efecto antibiofilm de isopolygodial, con una inhibicin superior al 80% en ambas cepas de Staphylococcus aureus y entre el 31 y 52% para las cepas de Pseudomonas aeruginosa. Estos resultados sugieren un efecto selectivo en cuanto a la inhibicin del biofilm, siendo ms sensibles las bacterias Gram (+). Esta mayor selectividad se pone de manifiesto por la inhibicin parcial del biofilm en presencia del isopolygodial, fraccin de columna picante, extracto etreo y polygodial, esta selectividad sera promisoria como teraputica. Cabe resaltar, que este es el primer trabajo, en el que se investiga las propiedades antibiofilm, sobre bacterias Gram (+) y Gram (-) de drimanos sesquiterpnicos aislados de P. punctatum. El hecho de que un compuesto natural sea efectivo frente a diferentes tipos de bacterias resistentes a ATB y frente a las principales especies bacterianas relacionadas con infecciones intra-hospitalarias, abre un nuevo camino a futuros estudios de esta hierba autctona de la Yunga tucumana.

BIOEMULSIFICANTES SINTETIZADOS PRODUCCIN DE BIOEMULSIFICANTES SINTETIZADOS POR CULTIVADOS MICROORGANISMOS DEL GNERO BACILLUS CULTIVADOS EN MEDIOS DEFINIDOS. Nombre del alumno: Evelyn Alejandra Dip Email: evelyndip@gmail.com
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Nombre del director: Dr. Mario Baigor Lugar de trabajo: Planta piloto de procesos microbiolgicos industriales (PROIMI) Tucumn, email: baigori@proimi.org.ar Lugar donde se realiz el trabajo: Planta piloto de procesos microbiolgicos industriales (PROIMI), Av. Belgrano y Pje. Caseros San Miguel de Tucumn RESUMEN Los bioemulsificantes de bacterias, levaduras y hongos filamentosos, son molculas anfipticas como glucolpidos, lipopptidos, lipoprotenas, fosfolpidos y polmeros. Las condiciones de cultivo afectan la produccin y composicin del bioemulsificante. Es importante conocer el rol de nutrientes, (concentracin de la fuente de carbono, nitrgeno, fsforo), as como la proporcin entre ellos para estimular la produccin. En el presente trabajo mostramos un aislamiento del gnero Bacillus caracterizado como Bacillus subtilis EM 11 (EU571103), mediante la tcnica de secuenciacin del ADNr 16S. El mismo posee capacidad emulsificante y surfactante en presencia de kerosn y distintos compuestos hidrofbicos. El medio de produccin se optimiz en las siguientes concentraciones: Glucosa 1%, MgSO4 0,02%, KH2PO4 0,6%, K2HPO4 1,4% y NH4NO3 0,5%. La caracterizacin parcial del producto dio como resultado que es de naturaleza proteica. Los ensayos de estabilidad indicaron que el compuesto con actividad emulsificante es termoestable, activo en pH neutro y hasta con 10% de NaCl. La cintica de produccin est asociada al crecimiento. Palabras claves: capacidad emulsificante, biosurfactante, Bacillus subtilis

GENTICAMENTE USO DE BACTERIAS LCTICAS MODIFICADAS GENTICAMENTE PRODUCTORAS DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES (CATALASA Y SUPERXIDO DISMUTASA) EN LA PREVENCIN DE LA INFLAMACIN INTESTINAL Nombre del alumno: Silvina Andrea del Carmen, silvidc@hotmail.com; delcarmen@cerela.org.ar Director: Jean Guy LeBlanc (CERELA, leblanc@cerela.org.ar ) Co-director: Alejandra de Moreno de LeBlanc (CERELA, demoreno@cerela.org.ar). Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET) Chacabuco 145, San Miguel de Tucumn, Tucumn, Argentina. RESUMEN Las Bacterias lcticas (BL) constituyen microorganismos muy importantes tecnolgicamente ya que son muy usados en la produccin de diferentes alimentos fermentados. Su importancia en la salud es cada vez mayor, dado que muchas cepas presentan caractersticas probiticas. Las especies reactivas de oxgeno (ROS) son pequeas molculas (iones superxidos, radicales libres y perxidos) y estn involucradas en el desarrollo de la inflamacin intestinal. Las enzimas antioxidantes catalasa (Cat) y superxido dismutasa (SOD) pueden detoxificar ROS slo en los sitios alcanzados luego de su

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administracin, por lo que se puede utilizar BL como vehculos para la distribucin de estas enzimas en el intestino. En este trabajo se examinaron los efectos anti-inflamatorios de BL productoras de Cat y SOD usando un modelo de enfermedad de Crohn inducida por TNBS en ratn. Se evalu el peso corporal, la translocacin microbiana a hgado, la morfologa e histologa intestinal, las actividades enzimticas y la concentracin de citoquinas en los fluidos intestinales. Los animales alimentados con las cepas de Lb. casei BL23 productoras de Cat o SOD mostraron mayor recuperacin de la prdida de peso, una actividad enzimtica de vida corta en el intestino y menor extensin en la inflamacin en comparacin con los animales que recibieron cepas no productoras de estas enzimas o que no recibieron suplementacin bacteriana. Este estudio sugiere que cepas de BL modificadas genticamente productoras de enzimas antioxidantes podran usarse para prevenir o disminuir la severidad de patologas intestinales causadas por ROS. Palabras claves: bacterias lcticas; antioxidantes; enfermedades inflamatorias intestinales.

PLANTARUM PIE BACTERIOTERAPIA CON LACTOBACILLUS PLANTARUM EN LCERAS DE PIE PRELIMINAR RESPUESTA INFLAMATORIA DIABTICO. ESTUDIO PRELIMINAR DE LA RESPUESTA INFLAMATORIA Y EL REPARACIN PROCESO DE REPARACIN TISULAR Alumna: Mara Raquel Cerezo e-mail: yaquicerlov17@hotmail.com Director: Mirta Mara Rachid e-mail: mmrachid@yahoo.es Lugar de trabajo: Ctedra de Inmunologa, Instituto de Microbiologa Luis C. Verna, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Realizacin del trabajo: Ctedra de Inmunologa, Instituto de Microbiologa Luis C. Verna, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Ayacucho 471. RESUMEN: El trmino pie diabtico se aplica a una variedad de condiciones patolgicas en el pie de los pacientes diabticos que en la mayora de los casos se asocia a la presencia de una lcera (ruptura de la barrera cutnea). Esta se produce como consecuencia de la interaccin de factores neuropticos, vasculares e infecciosos y puede estar acompaada por celulitis, fascetis necrotizante, abcesos, gangrena u osteomielitis. Una alteracin en los mecanismos de reparacin tisular en el paciente diabtico pueden llevar a un retraso marcado en el proceso de cicatrizacin con tendencia a la cronicidad de las heridas. Las infecciones del pie son la principal causa de hospitalizacin del paciente diabtico y conducen con frecuencia a la amputacin de uno o dos de sus miembros. Las maniobras quirrgicas necesarias oscilan desde un desbridamiento de la lcera hasta una amputacin menor o mayor. El factor ms importante que predispone a la infeccin en el pie de los pacientes diabticos es la prdida de la integridad de la barrera cutnea. Como consecuencia de la neuropata diabtica, se pierde la sensacin protectora, lo que favorece la aparicin de lesiones en la piel, principalmente de origen traumtico y se produce la infeccin con microorganismos. Junto a la neuropata, con frecuencia hay un factor isqumico que contribuye a dificultar la curacin de la herida y de la infeccin. Las alteraciones en la funcin
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leucocitaria, como ser disminucin de su capacidad quimiotctica, fagoctica y citotxica, pueden conducir a una respuesta anormal del organismo frente a los estmulos patgenos, lo que aumenta el riesgo de infeccin. En la ltima dcada se ha progresado mucho en el manejo clnico de estas infecciones y se ha intentado dar una solucin a estas patologas buscando terapias alternativas como ser: aplicacin local de factores de crecimiento, terapia con oxigeno hiperbrico, apsitos de hidrocoloides, alginatos y espumas, terapia con cido hialurnico, biociruga o bioterapia con larvas, entre otras. A pesar de los muchos avances en el cuidado de las heridas, el tratamiento y manejo de las lceras de pie diabtico sigue siendo un problema mdico de enorme magnitud en todo el mundo ocasionando, junto a otras heridas crnicas enormes gastos a los sistemas de salud. En este trabajo se propone el uso de suspensiones de Lactobacillus plantarum ATCC 10241 en fase log, como teraputica alternativa para la curacin de las lceras de pie diabtico. Se obtuvieron resultados muy prometedores en cuanto a reduccin de carga bacteriana en las heridas tratadas, al mismo tiempo que se observ un aumento de tejido de granulacin maduro y de cicatrizacin. Los niveles de expresin de IL-8 y TGF-1, ambos protagonistas en los procesos de reparacin de los tejidos, se incrementaron a medida que transcurrieron los das de tratamiento; al igual que los porcentajes de clulas endoteliales maduras, indicando un avance de la cicatrizacin de las heridas por progreso de la angiognesis. Palabras clave: pie diabtico bacterioterapia cicatrizacin

CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y BIOQUMICA DE AISLAMIENTOS DE ARGENTINA CERCOSPORA ZEAE- MAYDIS EN ARGENTINA ZEAEAE Nombre del alumno, Email: Cejas, Romina Andrea - rocejas@hotmail.com Nombre de la directora: Daz, Cecilia Gladys Nombre Co-Directora: Ramallo, Ana Carolina. Ctedra de Fitopatologa. Facultad de Agronoma y Zootecnia. Finca Manantial. Lugar donde realizaron el trabajo: Ctedra de Fitopatologa. Facultad de Agronoma y Zootecnia. Finca Manantial. Palabras Claves: Cercospora zeae- maydis, mancha gris, cercosporina. RESUMEN La cercosporiosis del maz inicialmente causada por Cercospora zeaemaydis fue considerada por mucho tiempo el nico agente causal de la mancha gris, sin embargo, recientes investigaciones moleculares muestran que tambin es ocasionada por C. sorghi var.maydis y C. zeina. A partir del 2003, la incidencia y la severidad han aumentado significativamente en la provincia de Tucumn, razn por la cual es considerada una de las principales enfermedades foliares del cultivo de maz. En Argentina no se dispone informacin acerca del comportamiento in vitro ni de los agentes fsicos capaces de inducir o inhibir su crecimiento y desarrollo, por lo tanto los objetivos de este trabajo fueron: 1- Obtencin de aislamientos del agente causal a partir de las lesiones tpicas que se presentan en maces hbridos infectados provenientes de diferentes regiones productoras del pas; 2-Caracterizacin de los
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aislamientos morfobiomtricamente a partir del signo de la enfermedad y crecimiento in vitro; 3-Caracterizacin de los mismos analizando el grado de produccin de cercosporina; 4- Evaluacin de la sensibilidad in vitro de C. zeae maydis frente a dos fungicidas con diferentes modos de accin, uno qumico (azoxistrobina + cyproconazole) y el otro de origen biolgico (Bacillus subtillis (QST 713). Todos los datos obtenidos fueron analizados segn esquema factorial 4x2 (medios de cultivo por luminosidad), totalizando 8 tratamientos con 3 repeticiones, en diseo totalmente aleatorizado. El anlisis de los resultados indic que hubo dos grupos con crecimiento diferencial al evaluar la curva de crecimiento, lo que permiti distinguir a cada uno de los aislamientos de acuerdo a su tasa de crecimiento. Con respecto a la medicin de conidios se determinaron diferencias significativas para aquellos procedentes de diferentes localidades. Se demostr tambin que los mejores medios de cultivo para el desarrollo micelial fueron jugo de tomate y V8 bajo rgimen de fotoperiodo de 12/12 h (luz / oscuridad). Con los valores correspondientes de inhibicin se obtuvieron las CE50 para cada fungicida observndose mayor sensibilidad de C. zeae maydis frente a la mezcla azoxistrobina + cyproconazole.

AZOSPIRILLUM PARA SELECCIN DE AZOSPIRILLUM BRASILENSE PARA INCREMENTAR LA GERMINACIN SEMILLAS. VELOCIDAD DE GERMINACIN Y SANIDAD DE SEMILLAS. Nombre del alumno: Cabrera de la Rosa, Carlos Matas. Email: matiascabreradelarosa@hotmail.com Nombre del director: Bellone, Carlos Hugo lugar de trabajo: Ctedra de microbiologa agrcola de la facultad de agronoma y zootecnia, telfono: (0381)4390003 interno: 212, Email: chbellone@herrera.unt.edu.ar) Lugar donde se realiz de trabajo: Ctedra de microbiologa Agrcola, Finca el Manantial, direccin: Florentino Ameghino s/n. B Mercantil. Campo Experimental, de la Facultad de Agronoma y Zootecnia de la Universidad Nacional de Tucumn RESUMEN La utilizacin de microorganismos del suelo en asociaciones con plantas constituye un vasto campo de la Biotecnologa, donde bacterias rizosfricas como Azospirillum brasilense, se han empleado para promover el crecimiento e incrementar el rendimiento de diferentes especies vegetales. La posibilidad adicional que estas bacterias puedan proteger a vegetales ante situaciones de estrs bitico, es una nueva variante de esta lnea de pensamiento. La informacin disponible en relacin con los eventuales efectos mejoradores del estrs por factores biticos y abiticos que pueda ejercer A. brasilense en la germinacin y el crecimiento de semillas inoculadas es escasa. Diferentes semillas de especies gramneas como (maz, trigo, avena, cebada, arroz, Lolium perenne, Eragrostis curvala, Setaria italica, Cynodon dactylon, Poa pratensis), leguminosas (poroto, arveja, soja, lenteja, garbanzo), hortcolas (tomate, pimiento, rabanito, colza, acelga, lechuga, papa, sandia, meln, berenjena, zanahoria, cebolla, achicoria, zapallo, zapallito, apio), fueron inoculados con A. brasilense con una densidad 106 bacterias durante el proceso de imbibicin.
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Todas las semillas de gramneas, hortcolas y leguminosas inoculadas con aislados de A. brasilense presentaron valores favorables, incrementando el porcentaje germinacin y disminuyendo el tiempo de germinacin con respecto a las semillas que no presentaron inoculo. Las semillas de gramneas que presentaron buen porcentaje de germinacin con un valor de TVR: 60 y menor tiempo de germinacin con un TVR: 36 fueron las semillas de maz demostrando la variabilidad respecto al testigo tanto en el porcentaje de germinacin como en el tiempo de germinacin. En el caso de semillas de hortcolas presentaron buen porcentaje de germinacin con un TVR: 43 fueron semillas de colza y las que presentaron menor tiempo de germinacin con un TVR: -50 fueron semillas de pimiento. En semillas de leguminosas que presentaron buen porcentaje de germinacin con un TVR: 46 fueron semillas de arveja y las que presentaron menor tiempo de germinacin con un TVR:-44 fueron semillas de poroto. Todos los aislados de A. brasilense presentaron accin antagnica con respecto a los testigos. En semillas de especie gramneas el aislado de A. brasilense que present mayor accin antagnica fue el de caa de azcar A (C1) con un promedio de 100% semillas germinadas mientras que el testigo present un 45% de semillas germinadas. En semillas de especie hortcolas el aislado de A. brasilense que present mayor accin antagnica fue el de caa de azcar A (C1) con un promedio de 95% semillas germinadas mientras que el testigo present un 17% de semillas germinadas. En semillas de especie leguminosas el aislado de A. brasilense que present mayor accin antagnica fue el de A (C4) con un promedio de 97% semillas germinadas mientras que el testigo present un 31% de semillas germinadas. Palabras clave: Azospirillum brasilense, semillas, antagonismo

DEGRADACIN ESTUDIO DE LA DEGRADACIN DE CLORDANO Y METOXICLORO POR ACTINOMYCETES ACTINOMYCETES AUTCTONOS Nombre del alumno: Natalia Bourguignon. natyb37@hotmail.com Nombre del director: Prof. Dr. Sergio Antonio Cuozzo - Investigador Asistente Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiolgicos PROIMI-CONICET Av Belgrano y Pje Caseros T4001 MVB San Miguel de Tucumn Tucumn scuozzo@proimi.org.ar, scuozzo@uspt.edu.ar Lugar donde realizaron el trabajo: Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiolgicos PROIMI-CONICET Av Belgrano y Pje Caseros T4001 MVB San Miguel de Tucumn Tucumn RESUMEN El metoxicloro (MTX) y clordano (CLD) son plaguicidas organoclorados (POs) que fueron empleados ampliamente en el pasado con fines agrcolas, industriales y como insecticidas domiciliarios. Actualmente su uso est prohibido y/o restringido debido a su toxicidad, persistencia ambiental, bioacumulacin en la
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cadena alimentaria y por ser biomagnificables, sin embargo aun se encuentran altas concentraciones en suelos, aire, agua y sedimentos. La necesidad de remediar estos sitios contaminados ha llevado al desarrollo de nuevas tecnologas como los procesos de biorremediacin, los cuales presentan ventajas frente a mtodos tradicionales. Los actinomycetes son bacterias Gram (+), constituyen la poblacin mayoritaria de suelos, debido a su gran diversidad metablica y a su asociacin con el medio ambiente, en la actualidad se los consideran microorganismos adecuados para llevar a cabo procesos de biotransformacin y/o biodegradacin de plaguicidas presentes en suelos contaminados. El objetivo de este trabajo fue estudiar la degradacin de MTX y CLD por actinomycetes aislados de zonas contaminadas capaces de crecer en presencia de los plaguicidas como nica fuente de carbono y energa. Se aislaron 12 colonias de actinomycetes provenientes de suelos de la localidad de Argentina-Santiago del Estero, antiguo depsito ilegal de POs, se seleccionaron 6 aislamientos para MTX y 6 para CLD por su capacidad de crecer y remover los POs en cultivos sumergidos. La caracterizacin molecular de los aislamientos realizada mediante el anlisis de las secuencias de ADNr 16S y los criterios morfolgicos observados permitieron determinar que pertenecen al gnero Streptomyces. Se seleccion el aislamiento A14 debido a que alcanz el mximo valor de biomasa en presencia de MTX (0,39 mg mL-1), presentando un 100% de remocin del plaguicida y liberacin de iones cloruros a partir de su molcula. Para la biodegradacin de CLD se seleccion el aislamiento A5 como el ms promisorio ya que present la mayor capacidad de crecimiento a expensas del plaguicida (0,29 mg mL-1), su mxima remocin 99,8% y niveles altos de liberacin de iones cloruros al medio. Las condiciones fsico-qumicas ptimas para la remocin de ambos POs fueron: temperatura de incubacin de 30 C y un pH inicial de 7. En los estudios sobre el efecto de la variacin de la concentracin inicial de los POs en el medio de cultivo, se observ que el aumento de la concentracin de 1,66 a 16,60 mg L-1, tuvo lugar un incremento del crecimiento y se lograron remociones de 97,6% y 99,6% de MTX y CLD, respectivamente; lo que puso en evidencia que la presencia del plaguicida en las concentraciones evaluadas no provoc toxicidad ni inhibicin del crecimiento microbiano. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que los aislamientos A14 y A5 poseen un gran potencial para la biodegradacin de MTX y CLD, respectivamente, en ambientes contaminados con estos plaguicidas. - Palabras clave: Biorremediacin, Plaguicidas organoclorados (POs), actinomycetes

AISLAMIENTO Y SELECCIN DE HONGOS FILAMENTOSOS DE LA SELVA PEDEMONTANA DE LAS YUNGAS (TUCUMN ARGENTINA) PRODUCTORES DE LIPASA Nombre del alumno: Romina Priscila Bertani. Email: ro_bertani@hotmail.com Nombre del director: Julia Ins Faria. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiologicos (PROIMI). jifarina@yahoo.com
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RESUMEN Una de las aplicaciones ms comunes de la biotecnologa es la produccin y utilizacin de enzimas. Entre stas se encuentran las lipasas (triacilglicerol ster hidrolasas) que catalizan de forma natural la hidrlisis de triglicridos, para obtener como productos finales cidos grasos libres y glicerol, o sus productos intermedios como mono- y diglicridos. Adems intervienen en otras reacciones muy interesantes, dada su capacidad de catalizar la reaccin inversa que permite la sntesis de steres, la transesterificacin y la interesterificacin. Las Yungas son selvas de montaa que se extienden desde Venezuela hasta el noroeste argentino. Es uno de los ecosistemas con mayor biodiversidad de Argentina y uno de los ms amenazados del mundo. En este contexto, han surgido esfuerzos enfocados hacia la restauracin de la diversidad y es nuestra contribucin a la valoracin de la misma, el descubrimiento de microorganismos con potencial biotecnolgico, con un particular inters en los hongos filamentosos de dicha ecorregin. Los hongos filamentosos representan una fuente importante de lipasas, las cuales poseen aplicaciones biotecnolgicas en diversas industrias (ej. alimentaria, farmacutica, cosmtica). En este trabajo se aislaron 242 hongos de la zona pedemontana de Las Yungas (Tucumn), y se seleccionaron aquellos con actividad lipasa positiva en medio de cultivo MYSA-aceite de oliva-rodamina B. El 45% de los aislamientos mostr actividad en medio slido, y 28 de ellos presentaron actividad en sobrenadantes de cultivo en medio lquido con aceite de oliva. Cuatro de los 28 aislamientos exhibieron los mayores valores de lipasa segn la cuantificacin con palmitato de p-nitrofenilo (pNPP) (hasta 73,8 U/ml). Se evaluaron las mejores condiciones y mtodos para cuantificar la actividad lipasa de los aislamientos fngicos seleccionados (LY 32.1, LY 33.4, LY 43.1 y LY 45.2) durante la fermentacin, empleando tcnicas de titulacin y ensayos colorimtricos, ya sea con pNPP o con 5,5-ditiobis (2-cido nitrobenzoico) (DTNB). Los valores hallados de productividad volumtrica 5,27 y 8,01 U/ml.da (pNPP) y 1,10 y 1,53 U/ml.da (titulacin) para LY 32.1 y LY 45.2, respectivamente, permitieron seleccionar a estos dos hongos. Las relaciones entre las producciones y productividades de lipasa en ambos hongos con las tcnicas de pNPP y titulacin fueron similares; lo mismo ocurri con las actividades especficas. Los resultados obtenidos de acuerdo a la tcnica colorimtrica con DTNB mostraron grandes discrepancias respecto a los obtenidos con las otras dos tcnicas, descartando esta metodologa analtica. Se identificaron taxonmicamente los aislamientos seleccionados; LY 32.1 present un 100% de identidad con Rhizomucor variabilis, mientras que el aislamiento LY 45.2 mostr 99% de identidad con microorganismos del gnero Hypocrea sp. Con el fin de optimizar el medio de produccin de lipasas para el aislamiento LY 45.2 (el de mayor productividad volumtrica) y realizar posteriormente el escalamiento, se utiliz la tcnica de diseo factorial. De esta manera, fue posible identificar cules factores (presencia de glucosa, concentracin de peptona, concentracin de aceite de oliva y concentracin de aceite de girasol) seran
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determinantes para obtener niveles promisorios de actividad lipasa. Esto permiti seleccionar la peptona como fuente de carbono y nitrgeno, y reemplazar el aceite de oliva por el aceite de girasol, otorgando beneficios econmicos al proceso debido a su menor costo. Los anlisis estadsticos tambin revelaron que la glucosa podra ser eliminada del medio de cultivo, contribuyendo as tambin a la disminucin de costos del proceso. Las mejores condiciones para la produccin de lipasas en cultivo sumergido fueron ensayadas en forma preliminar para el trabajo a escala fermentador, confirmando la posibilidad de escalar el proceso a fermentador con mejoras a nivel de productividad, pudiendo reducir el tiempo de fermentacin de 72 a 24 h. Palabras clave: Hongos filamentosos, Las Yungas, Lipasas

PROTENA CLONADO MOLECULAR Y EXPRESIN DE UNA PROTENA QUIMRICA FLUORESCENTE DEL GEN NP63 Y RASTREO DE GENES EXPRESADOS EMBRIONARIA DIFERENCIALMENTE EN LA EPIDERMIS EMBRIONARIA Alumna: Mara Guadalupe del Valle Barrionuevo. Email: gbarrionuevo@fbqf.unt.edu.ar Director: Celeste Trbulo. Email: celtrib@fbqf.unt.edu.ar Co-Director: Manuel Javier Aybar. Email: mjaybar@fbqf.unt.edu.ar Lugar de Trabajo: Dpto. Biologa del Desarrollo, INSIBIO, CONICET. Instituto de Biologa Dr Francisco D. Barbieri, Universidad Nacional de Tucumn, Chacabuco 461, 4000. San Miguel de Tucumn, Tucumn. Palabras claves: Xenopus, Epidermis, Np63. RESUMEN Durante el desarrollo embrionario de los animales vertebrados, numerosas molculas de sealizacin comunican las poblaciones celulares entre s, activando o reprimiendo la expresin de un gran nmero de genes, los que a su vez, actan coordinadamente generando una gran cantidad de procesos que llevan a cabo la construccin de un organismo complejo. Al presente, es mucho an lo que resta por conocer y entender acerca de estos procesos. Una de las nuevas reas de aplicacin de la Biologa del Desarrollo es la ingeniera de tejidos, la cual ha tomado un lugar de suma importancia en la Biotecnologa, ya que ofrece un enorme potencial para el abastecimiento de clulas y tejidos necesarios para la medicina reparativa, que tiende a lograr la reparacin, reemplazo o mejora de diferentes funciones orgnicas. Existen varios ejemplos recientes en los que a travs de la manipulacin de la actividad de vas de sealizacin celular o de la funcin de genes especficos se logr dirigir a voluntad la diferenciacin de clulas madre totipotentes (stem cells) en diferentes poblaciones celulares especficas. Las clulas ectodrmicas juegan un rol crtico en la produccin del epitelio estratificado de la piel, por lo tanto, establecer a nivel molecular cuales son los genes y seales celulares involucradas en este proceso ser de importancia para conocer con mayor profundidad los procesos que son vitales para el correcto desarrollo de la piel, la cual constituye el rgano ms grande del cuerpo humano y fundamentalmente, la primera barrera que poseemos para protegernos del ambiente externo. Para ello, la informacin obtenida en cada uno de los modelos experimentales animales ha demostrado ser de aplicabilidad directa para la
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comprensin de los otros modelos y finalmente tambin para la comprensin del desarrollo y la formacin del cuerpo humano. La epidermis embrionaria del anfibio Xenopus laevis es un epitelio bilaminar que se genera por divisiones celulares orientadas. La capa superficial sirve para proteccin y la capa profunda aloja las clulas madre basales. Estas dos poblaciones celulares difieren en su destino durante el desarrollo, en la metamorfosis la capa de clulas superficiales se pierde y la mayora de las clulas basales o internas proliferan y se diferencian para producir una epidermis estratificada. En nuestro laboratorio se demostr que Np63 es un gen que presenta expresin en la capa ms profunda de la epidermis en embriones de Xenopus y es capaz de promover la diferenciacin temprana a ectodermo no neural. En este trabajo, con el propsito de obtener una forma de Np63 con capacidad para actuar como dominante negativo se dise y construy mediante metodologa de ADN recombinante una protena quimrica fluorescente basada en la secuencia del gen Np63 de Xenopus. Se demostr experimentalmente in vivo en embriones su capacidad de atenuar la actividad del gen endgeno, provocando un aumento en la expresin del gen marcador de cresta neural FoxD3 y la disminucin de XK81a, gen marcador de clulas epidrmicas. Con el propsito de identificar nuevos componentes moleculares involucrados en el control gnico del destino celular hacia la capa interna o externa de la epidermis, se escogi un gen entre un grupo de candidatos con expresin diferencial en este tejido. Se analiz su secuencia y se estableci que se trata del gen rexp52, un gen nico, sin ortlogos ni funcin conocida. Se analiz la expresin espacio-temporal completa de rexp52, realizando tambin anlisis comparativos con genes marcadores de otros destinos celulares. Se observ que rexp52 durante estadios de neurula se expresa en la capa interna de la epidermis, en la regin ms ventral de los territorios de cresta neural y como dos finas lneas de expresin en el borde de la placa neural. En estadios de brote caudal, su expresin se mantiene en la epidermis y se restringe a la vescula tica, arcos branquiales y notocorda. Finalmente, en el presente trabajo se demostr que modificaciones experimentales en los destinos celulares del ectodermo llevan a variaciones en la expresin de

rexp52.

De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente trabajo, los dos genes analizados, aparecen como buenos candidatos para el control de la especificacin y diferenciacin de los precursores celulares de los tejidos epidrmicos.

EXTRACTOS FRUTILLAS MANEJO EVALUACIN DE EXTRACTOS DE HOJAS DE FRUTILLAS PARA EL MANEJO VEGETALES DE ENFERMEDADES VEGETALES Alumna: Mara Araceli Barbieri Director de Tesis: Dra. Mara Paula Filippone Codirector de Tesis: Dr. Juan C. Diaz Ricci Lugar donde se realizo el trabajo: Este trabajo se ha realizado en la Seccin Biotecnologa de la Estacin Experimental Agroindustrial Obispo Columbres (EEAOC) de Tucumn Unidad Asociada al INSIBIO, y en el Instituto de Qumica Biolgica Facultad de Bioqumica, Qumica y
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Farmacia (UNT) Departamento de Bioqumica de la Nutricin, Instituto Superior de Investigaciones Biolgicas (CONICET-UNT). RESUMEN: Las enfermedades fngicas constituyen la principal causa de prdidas de poscosecha en frutilla. El uso de fungicidas de sntesis qumica trae aparejado innumerables efectos negativos sobre la salud y el medio ambiente, por lo que la bsqueda de alternativas de bajo riesgo toxicolgico y ambiental, resulta de imperiosa necesidad. En ese contexto, el uso de compuestos y/o extractos vegetales con actividad antifngica, constituyen una alternativa de mximo inters. El objetivo del trabajo fue evaluar la capacidad de extractos de hojas de frutilla para disminuir la incidencia de las enfermedades fngicas en poscosecha de frutilla. Se aislaron e identificaron los agentes fngicos de mayor incidencia en poscosecha, determinndose a Botrytis cinerea y Penicillum digitatum en mayor proporcin y Ryzopus stolonifer, Aspergillus nger y Colletotrichum accutatum en menor frecuencia. Se caracterizaron extractos obtenidos a partir de distintos tipos de hojas de frutilla, utilizando diferentes modos de procesamiento del material y medios de extraccin, y se determin que el extracto obtenido con agua acidificada a partir de una mezcla de hojas de diferentes edades y secadas en estufa (EA), fue el que present mayor actividad antimicrobiana in vitro contra los principales hongos de poscosecha de frutilla. Se estudi el efecto del EA en el desarrollo de patgenos en frutos conservados a 25C y 80-90 % HR. Se realizaron tratamientos de tipo curativo y preventivo mediante aplicaciones en fruto (poscosecha), y en plantas a campo (precosecha). En los tratamientos de poscosecha, el EA redujo la incidencia y severidad de B. cinerea, Colletorichum acutatum, Aspergillus niger y Penicillum digitatum, inoculados artificialmente. La efectividad del extracto fue igualmente positiva tanto en tratamientos de tipo curativos como en los de tipo preventivo. En los ensayos de precosecha, el tratamiento de plantas con el EA aplicado entre floracin y cosecha, fue efectivo para controlar el desarrollo de los patgenos que la fruta traa desde el campo, extendiendo la vida til del fruto con respecto al control sin tratamiento. Adems se observ que las plantas tratadas con el EA mostraron un mayor desarrollo, evidenciado por un incremento en el tamao de planta y en el rendimiento de fruta de aproximadamente un 45% con respecto al control sin tratamiento. El extracto no alter el aspecto ni la calidad de la fruta. Palabras Claves: Frutilla; extractos vegetales; enfermedades fngicas

IDENTIFICACIN DISEO Y VALIDACIN DE SONDAS PARA IDENTIFICACIN DE PROPIONIBACTERIAS HIBRIDACIN LCTEAS POR HIBRIDACIN FLUORESCENTE IN SITU (FISH). Nombre: Jaime Daniel Babot. Director: Adriana Perez Chaia. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Direccin de e-mail: apchaia@cerela.org.ar Co-Director: Mara Cristina Apella. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Direccin de e-mail: mapella@cerela.org.ar
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Lugar de realizacin del trabajo final: Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET), Chacabuco 145, San Miguel de Tucumn. RESUMEN: Las propionibacterias son responsables de la apertura de la masa, del sabor y aroma de quesos tipo suizo y variedades similares. La fermentacin propinica ha sido explorada, adems, para la manufactura de pan, vegetales fermentados y productos probiticos. Para identificar estas bacterias se han aplicado por aos criterios bioqumicos, limitados a bacterias cultivables, y tcnicas de biologa molecular que requieren equipamiento costoso. La Hibridacin Fluorescente In Situ (FISH) detecta secuencias de cidos nucleicos utilizando sondas, marcadas con un compuesto fluorescente, que hibridan a su secuencia blanco complementaria dentro de una clula intacta. Esta metodologa, que permite identificar y cuantificar las bacterias en una comunidad compleja por microscopa de fluorescencia, no se ha descrito an para propionibacterias lcteas. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue disear sondas especficas, establecer las condiciones ptimas de FISH para propionibacterias y validar las sondas mediante tcnicas de uso corriente. Se disearon tres sondas: Pap446, Pj446 y Pfr435 para Propionibacterium acidipropionici, P. jensenii y P. freudenreichii, respectivamente. La tcnica incluy: fijacin, permeabilizacin, hibridacin y lavado. En el primer paso se evalu la fijacin con y sin p-formaldehdo. En el paso siguiente, se estudiaron distintas concentraciones de lisozima (0,1; 0,5; 1 y 5 mg/mL), tiempos (5, 10 y 15 min) y temperaturas de incubacin (4, 25 y 37 C). En la etapa de hibridacin, se probaron diversas temperaturas (37, 45, 50, 55, 60 y 70 C) y tiempos (1, 2, 3, 6, 9, 12, 15 y 18 h). Las condiciones ptimas para la metodologa utilizada son las que incluyen p-formaldehdo, incubacin con lisozima 1 mg/mL durante 10 min a 25 C y temperatura de hibridacin de 45 C para P. acidipropionici y P. freudenreichii, y 50 C para P. jensenii, durante 3 horas. Se determin tambin que la hibridacin es ms especfica en la etapa de crecimiento exponencial, e inespecfica durante la fase estacionaria. Para validar las sondas diseadas, se identificaron mediante FISH dos cultivos, de un total de nueve aislamientos, como P. acidipropionici. La identidad de estas cepas se comprob mediante PCR especfica de especie. El estudio de las cepas con API 50 CH no permiti su identificacin certera, mientras que mediante el anlisis de los productos de fermentacin por HPLC, se comprob la produccin de cido propinico y actico por las dos cepas identificadas en relaciones molares coincidentes con las descritas en la literatura (Stackebrandt y col., 2006). Palabras clave: propionibacterias lcteas - sondas fluorescentes - biologa molecular

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ALELOPTICA GRACILE MICROORGANISMOS ACTIVIDAD ALELOPTICA DE FUNASTRUM GRACILE SOBRE MICROORGANISMOS FITOPATGENOS, MALEZAS Y ESPECIES MONO Y DICOTILEDNEAS DE MALEZAS INTERS AGRCOLA Alumno: Jos Mara Alvarez Gimnez. e-mail: josemaria_alvarezgimenez@yahoo.com.ar Director: Dra. Elmira Contreras Maraon de Riscala. e-mail: eycriscala@arnet.com.ar Co-director: Dr. Antonio Mario Fortuna. e-mail: mariofortuna590@yahoo.com.ar Lugar de trabajo: Ctedra de Qumica Organica FAZ-UNT. Av. Roca 1800 Instituto de Biotecnologia FBQyF-UNT. Ayacucho 471 RESUMEN El objetivo de esta tesina, fue evaluar la actividad aleloptica de diferentes extractos, subextractos y fracciones de Funastrum gracile (Decaisne) Schlechter (Asclepiadaceae), sobre semillas de diferentes especies vegetales, y la actividad germicida contra bacterias fitopatgenas. Los extractos y subextractos se lograron en dos etapas. En la primera etapa se obtuvieron: extracto metanlico (EM), subextracto hexnico (SEH) y subextracto clorofrmico (SEC). En la segunda etapa se obtuvo el extracto acuoso (EA). El SEC fue fraccionado por cromatografa en columna, obtenindose 10 fracciones de ste. Para evaluar la actividad aleloptica, las semillas fueron depositadas sobre cajas de Petri, estas tenan como soporte agar al 1 % conteniendo diferentes concentraciones de cada compuesto a ensayar en el orden de g.mL-1. Las cajas fueron incubadas y al cabo de 96 horas se ponder el nmero de semillas germinadas, se considero inhibicin significativa en aquellos tratamientos que presentaban un 20 % de semillas no germinadas. A los tratamientos que tuvieron germinacin significativa, se les determin longitud de la radicula y del hipoctilo, como as tambin, conductividad del eflujo celular y actividad deshidrogenasa. Para el estudio de la actividad germicida se utilizaron tcnicas de difusin en agar (determinacin cualitativa), y de microtitulacin en caldo nutritivo, determinndose cuantitativamente Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) y Concentracin Bactericida Mnima (CBM) sobre Xanthomonas axonopodis pv. citri y Pseudomonas syrigae pv. phaseolicola. Los resultados muestran que el SEC y el EA produjeron inhibiciones en la germinacin superiores al 20 % a 100 a 500 y a 1000 g.mL-1 sobre Triticum aestivum L, Lactuca sativa L., Bidens pilosa L. y Brasica rapa L. El EM inhibi completamente la germinacin de la maleza Bidens pilosa en todos sus tratamientos. En Brasica rapa produjo inhibicin significativa a 100 g.mL1 y a 500 g.mL-1 (segn TVR). Las longitudes de radicula e hipoctilo de Brasica rapa no mostraron diferencias significativas con respecto al testigo en todos sus tratamientos. Los ensayos sobre la conductividad de eflujo celular en esta especie, demostraron un dao en las membranas celulares a 500 g.mL-1 de EM. La actividad deshidrogenasa fue inhibida a 100 y a 500 g.mL-1. Los estudios de actividad antimicrobiana, revelaron que Xanthomonas axonopodis pv. citri y Pseudomona syringae pv. phaseolicola fueron afectadas por el EA y por la fraccin nmero 8 (F8) del SEC. Esta fraccin demostr una mayor actividad germicida ya que su CIM y CBM fueron considerablemente mas bajas que las del EA sobre Xanthomonas axonopodis pv. citri.
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En conclusin SEC, EM y EA demostraron tener excelentes propiedades herbicidas contra las especies vegetales en ensayo. Mientras que F8 y EA tuvieron propiedades germicidas frente a Xanthomonas axonopodis pv. citri. Por lo tanto todos estos derivados de Funastrum gracile poseen potenciales aplicaciones agronmicas como plaguicidas naturales no contaminantes.

PRODUCCION DE NARINGINASA Y NARINGENINA POR Aspergillus niger USANDO RESIDUOS AGROINDUSTRIALES Nombre del alumno: TERESA LEONOR ALURRALDE. Email: tere3_03@hotmail.com Nombre del director : Dra. MARIA CRISTINA RUBIO. INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA, FACULTAD DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA, UNT. Email: m1rubio25@hotmail.com Lugar donde realiz el trabajo : INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA, FACULTAD DE BIOQUIMICA, QUIMICA Y FARMACIA, UNT. Palabras clave: PULPA DE LIMON, NARINGINASA, NARINGENINA RESUMEN En este trabajo de tesis se dise un proceso biotecnolgico para la produccin de naringinasa a partir de A. niger. La pulpa de limn fue seleccionada como el mejor sustrato y se determin que el medio con pulpa debe ser suplementado con las siguientes sales: K2HPO4, NaNO3, KCl, MgSO4. 7 H2O. En estas condiciones se obtuvo mayor rendimiento de producto con respecto al sustrato, Yp/s, 0,373 U/mg; y a la biomasa Yp/x, 0,535 U/mg y Pdv, 0,051 U/mg h, que en medios de naringina, glucosa y melaza. Se demostr que la mxima produccin de la enzima se obtiene en las siguientes condiciones culturales: volumen de inculo 10 %; pH 5; temperatura 30 C y velocidad de agitacin de 250 revol / min. Se compar la produccin de naringenina, usando naringinasa, parcialmente purificada, con la obtenida por A. niger. Con el proceso enzimtico se obtuvo una Eficiencia del 94 %, en la transformacin de naringina a naringenina, respecto al obtenido con el microorganismo (85%). Con estos resultados se consigui disminuir los pasos para la purificacin de naringenina, flavonoide con importantes aplicaciones en la industria farmacutica. El proceso biotecnolgico presentado resulta beneficioso porque utiliza un residuo agroindustrial, de bajo costo con el cual se obtiene naringinasa, una enzima de importancia industrial, y aporta una solucin parcial a un problema de contaminacin que ellos ocasionan al medio ambiente.

ENTOMOPATGENO PRODUCCIN DE CEPAS DEL HONGO ENTOMOPATGENO METARHIZIUM NATURAL ANISOPLIAE (METSCH.)SOROKIN EN UN SUSTRATO NATURAL (METSCH.)SOROKIN EN Alumno: Mirta del Valle Agero. E- mail: miriyamk@hotmail.com
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Director: Dra. Marta Yasem de Romero. Lugar de trabajo: Facultad de Agronoma y Zootecnia. UNT. E-mail: romeroyasem@arnet.com.ar Lugar de trabajo: Facultad de Agronoma y Zootecnia. UNT. Finca El Manantial. Florentino Ameghino s/n B Mercantil. Campo Experimental (4105). El Manantial. Tucumn. Argentina. RESUMEN Las plagas agrcolas han sido controladas durante aos mediante el empleo de plaguicidas qumicos de fuerte impacto negativo sobre la naturaleza. Por esta razn se han intensificado los esfuerzos para utilizar agentes biolgicos ya que son seguros, no desarrollan resistencia con la misma facilidad que un producto qumico, son compatibles con otros plaguicidas y pueden emplearse combinados. Los hongos entomopatgenos son especies especficas o de amplio espectro de hospedantes, dentro de ellos, el hongo Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin es un entomopatgeno que se caracteriza por atacar un gran nmero de especies de insectos, incluidas plagas importantes. En Brasil y Guatemala se lo utiliza para el manejo de las plagas que afectan el cultivo de la caa de azcar. Adems es producido comercialmente en Alemania y artesanalmente en Cuba. En Tucumn se detect la presencia de M. anisopliae en larvas invernantes del gusano perforador de la caa de azcar Diatraea saccharalis F., lo que puede abrir las puertas al uso del control biolgico para combatir a la plaga ms importante de la caa de azcar en la provincia. En el presente trabajo se realiz un estudio destinado a evaluar la produccin artesanal de diferentes cepas de M. anisopliae, entre ellas cepas autctonas, utilizando arroz humedecido como sustrato. Los resultados indican que cuatro cepas lograron multiplicarse masivamente con esta tcnica, obteniendo valores de produccin en el orden de 108 a 10 10 conidios por gramo de sustrato y viabilidad de entre un 78 % a un 84 %. Se determin que existen diferencias significativas de produccin y viabilidad entre cepas autctonas y extranjeras y entre cepas aisladas de distintos hospedantes. Con vistas a una futura formulacin y mejores condiciones de almacenamiento se compararon muestras de arroz esporulado seco y hmedo, en donde los resultados revelaron que existe una marcada disminucin de estos mismos parmetros especialmente para las cepas ms productivas. Adems debido a la gran variabilidad caracterstica de este hongo, se ensay un mtodo de conservacin por reduccin de metabolismo usando vaselina de alta densidad que result efectivo; y se realiz el pasaje por el insecto husped de las cepas autctonas con el fin de revigorizarlas. En base a los resultados obtenidos se concluy que la tcnica de multiplicacin en arroz en condiciones de humedad result altamente productiva y viable para cepas de M. anisopliae lo que justificara su uso para la multiplicacin masiva de este hongo como alternativa para el control de plagas .Se impulsa adems el uso de un sustrato natural. Palabras Claves: Metharizium anisopliae, control biolgico, sustrato natural.

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POMADAS ANTIOXIDANTES UTILIZANDO DESARROLLO DE POMADAS ANTIBITICAS Y ANTIOXIDANTES UTILIZANDO BACCHARIS COMO ACTIVO TINTURAS DE ESPECIES DE BACCHARIS QUE CRECEN EN LA PUNA ARGENTINA.
Nombre del alumno: Gabriela Nuo. e-mail: gabrielanuno83@hotmail.com Nombre del director: MAGISTER Myriam Elizabeth Arias. Lugar de trabajo: Ctedra de Farmacotecnica II e-mail: marias@fbqf.unt.edu.ar; myriama@arnet.com.ar Lugar donde se realiz el trabajo: Ctedra de Fitoqumica, Instituto de Estudios Vegetales Dr. Antonio R. Sampietro, Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumn, Ayacucho 471, 4000. San Miguel de Tucumn, Argentina.

RESUMEN El hombre est sometido constantemente al efecto de los radicales libres, principalmente especies de oxgeno reactivas (ERO). Los tejidos ms afectados por las ERO son la piel y los ojos debido a su exposicin directa con el medio exterior. Las ERO son las responsables de mltiples procesos degenerativos. De all la importancia de identificar productos naturales capaces de proteger contra el estrs oxidativo. Otro importante problema por resolver a nivel mundial es la mltiple resistencia desarrollada por los microorganismos debido al uso indiscriminado de antibiticos. Entre los patgenos ms comunes aislados de infecciones de piel y tejidos blandos estn bacterias Gram positivas, incluyendo Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SARM), Staphylococcus coagulasa negativo resistentes a varias clases de antibiticos, Enterococcus spp y bacterias Gram negativas como Pseudomonas aeruginosa. Debido a ello se plantea la bsqueda de nuevos compuestos que tengan actividad frente a stas bacterias. Las plantas constituyen una importante fuente natural de compuestos (compuestos fenlicos, terpenos y alcaloides entre otros) con actividades farmacolgicas variadas, de inters para el ser humano. El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo de la capacidad antioxidante y antimicrobiana de tinturas en etanol 60 de dos especies de Baccharis para su posterior incorporacin en formas farmacuticas. Las especies seleccionadas para este estudio, Baccharis incarum y Baccharis boliviensis, crecen en La Puna Argentina a mas de 3000 msnm, zona de condiciones extremas, elevada radiacin ultravioleta, sequa y salinidad. A partir de partes areas de estas especies se elaboraron tinturas en etanol 60, se realizaron perfiles fitoqumicos y ensayos autogrficos y bioautogrficos para evaluar cualitativamente la capacidad antioxidante y antibacteriana de las tinturas. Posteriormente se determinaron los valores de concentracin depuradora del 50 % (CD50) de radicales ABTS+ y DPPH y la concentracin inhibitoria mnimas (CIM) de los extractos frente a bacterias patgenas humanas antibitico resistentes aisladas de infecciones de piel y partes blandas. Se determin que ambas tinturas presentaban actividad antimicrobiana y antioxidante, convirtindolas en una fuente potencial de compuestos activos. Las tinturas se incorporaron a distintas formulaciones farmacuticas (crema-gel e hidrogel). Las formas farmacuticas (fitoterpicos) obtenidas mantuvieron la estabilidad fsica, biolgica y microbiolgica durante tres meses a temperatura ambiente. Palabras clave: Baccharis; formulaciones farmacuticas; actividades biolgicas.
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LCTEO SEMIDISEO Y EVALUACIN DE UN PRODUCTO LCTEO SEMI-FLUIDO PARA LA PROTECCIN DE PROPIONIBACTERIUM FREUDENREICHII DURANTE LA PROPIONIBACTERIUM FREUDENREICHII GASTROINTESTINAL. DIGESTIN GASTROINTESTINAL. Nombre alumno: Vernica Hael Conrad. E-mail: v.hael.conrad@hotmail.com Nombre director: Adriana Beatriz Perez Chaia. Lugar de trabajo: Ctedra de Microbiologa General - Instituto de Microbiologa - Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia - Universidad Nacional de Tucumn Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA) - CCT-CONICET Telfonos:UNT: 381 4247752 int 7067 - CERELA: 381 4310465 int 117 E-mail: apchaia@cerela.org.ar / aperezchaia@arnet.com.ar Lugar donde se realiz el trabajo: Ctedra de Salud Pblica - Instituto de Farmacia Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia - Universidad Nacional de Tucumn. Ayacucho 471. RESUMEN: En la actualidad las propionibacterias lcteas son muy estudiadas y utilizadas como probiticos ya que ejercen numerosos efectos benficos en el hospedero. Cuando son administradas por va oral, resulta fundamental que toleren las condiciones adversas del tracto gastrointestinal, para llegar viables, metablicamente activas y en cantidad suficiente al intestino. Adems, tambin es importante que tengan la capacidad de adherirse al epitelio intestinal, lo que ayuda a prolongar el tiempo de residencia en dicho rgano. Se trabaj con Propionibacterium freudenreichii CRL 757, y se demostr que la bacteria sufre daos a diferentes niveles de la clula luego del tratamiento de digestin gastrointestinal in vitro. Los daos en la permeabilidad e integridad de la membrana y pared celular fueron determinados mediante la tcnica de tincin con ioduro de propidio y recuento de clulas daadas al microscopio de fluorescencia, y por determinacin de la actividad -galactosidasa (enzima intracelular asociada a membrana), respectivamente. El efecto adverso a nivel de los componentes de la superficie celular se determin a travs el mtodo de adhesin microbiana a solventes (MATS). Se utiliz hexano, cloroformo y acetato de etilo, lo que permiti evaluar daos que provocaron cambios en la hidrofilicidad, carcter bsico y cido de la superficie celular. Finalmente, se registr un efecto adverso en el metabolismo microbiano: los cultivos tratados presentaron una mayor fase de latencia y de aceleracin y retrasos durante el crecimiento exponencial, requirieron un mayor tiempo para alcanzar la fase estacionaria, y tuvieron una menor cosecha celular final, con respecto al control sin digestin. Luego de determinar el tipo de dao celular que produjo la digestin gastrointestinal in vitro en P. freudenreichii CRL 757, se dise un producto a base de leche, gelificado con gelatina. Para evaluar el efecto protector de la leche gelatinizada se utiliz los mismos parmetros de evaluacin estudiados previamente. El producto diseado protegi de los daos que llevaron al aumento de basicidad de la superficie celular cuando las clulas no estaban protegidas; protegi de los daos a nivel de la integridad de las envolturas celulares y tuvo un efecto positivo en el metabolismo del cultivo. De esta manera, el trabajo realizado muestra que algunos productos de elaboracin sencilla, como la leche gelatinizada, pueden ejercer un efecto protector parcial de los microorganismos probiticos.
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Palabras clave: Leche gelatinizada, propionibacterias, digestin gastrointestinal, propiedades superficiales, metabolismo microbiano.

ESTUDIO DE LA CONSERVACIN DE PROBITICOS LCTICOS DESECADOS SIN CADENA DE FRO.

Nombre: Mara Lourdes Cruz Pintos. Email: loucp_4@hotmail.com Nombre del director: Graciela Font de Valdez (CERELA CONICET, gfont@cerela.org.ar) Lugar de realizacin del trabajo: CERELA, Chacabuco 145- 4000, S.M. Tucuman, Argentina. RESUMEN: En este trabajo de investigacin se disearon y desarrollaron nuevas estrategias de conservacin de probiticos (PB) lcticos a temperatura ambiente. Se propuso como objetivo general, la estandarizacin de metodologas para obtener biomasa desecada a bajo costo y biolgicamente activa y conservable a temperaturas superiores a 4C, partiendo de la formulacin medios de cultivos econmicos para el desarrollo de cepas probiticas previamente seleccionadas (L. casei CRL 731 y L. reuteri CRL 1098). Los mejores resultados se obtuvieron con medios constituidos con glucosa como fuentes de carbono, extracto de levadura, triptena y peptona de carne como fuente de nitrgeno y MnSO4 como sal esencial. Los medios se denominaron M1 y M2 para L. reuteri CRL 1098 y L. casei CRL 731, respectivamente. La diferencia entre ambos medios radica en la fuente de nitrgeno, peptona de carne en el medio M1 y extracto de levadura para M2, estando presente la triptena en ambos medios. Se estandariz la produccin de biomasa activa de ambas cepas en los medios M1 y M2 utilizando un fermentador de 2 L. El desarrollo ptimo de las cepas probiticas se realiz a 37C con agitacin constante (100 rpm) y a pH controlado (5,5 y 6,0 para CRL 1098 y CRL 731, respectivamente). El proceso de liofilizacin se estandariz evaluando diferentes soportes: leche descremada en polvo (10 y 20 % p/v) y bebibles A y B a base de harina de soja al 10 % (p/v) y glutamato monosdico al 5 % (p/v) como lioprotector. Los mejores resultados se obtuvieron con leche descremada en polvo al 20% y bebible de soja B al 10% (harina de soja saborizada) como soporte. La implementacin de un bebible a base de harina de soja como soporte de liofilizacin constituye un importante aporte, no solo por ser un sustrato ms econmico sino que, al no contener lactosa, resultara apropiado para el desarrollo de alimentos fermentados destinados a individuos intolerantes a este disacrido. Fracciones de microorganismos liofilizados fueron envasados en envases metalizados bilaminados de polister con polietileno y sellados al vaco y almacenadas a 22 2C (temperatura ambiente). La viabilidad de L. casei CRL 731 en dichas condiciones se mantuvo durante 14 das en ambos soportes siendo su recuento del orden del 108 UFC/ml. L. reuteri CRL 1098 present diferencias entre los soportes de liofilizacin utilizados encontrndose 107 UFC/ml a los 42 das de almacenamiento en los liofilizados usando leche y recuentos del orden de 106 UFC/ml hasta los 56 das cuando se us como soporte bebible de soja B. Estos
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resultados resultan muy alentadores considerando que el requerimiento mnimo BAL para ejercer su efecto en el husped oscila entre de 106- 107 UFC/ml. Poder contar con fermentos probiticos que no requieran cadena de fro, constituye un interesante propuesta desde el punto de vista econmico y tecnolgico. Palabras claves: PB a Temp. Ambiente.

RECUPERACIN MTODOS DE RECUPERACIN DE ADN DE PAPILOMAVIRUS HUMANO (HPV) DE TEJIDOS FIJADOS, FRESCOS Y CONGELADOS PARA APLICACIN DE REACCIN DE (PCRPOLIMERASA EN CADENA - POLIMORFISMO DE FRAGMENTOS DE RESTRICCIN (PCRRFLP)

Nombre: Zareath Pamela Tern Baptista - z_pame@hotmail.com Directora: Dra Ada Mara Surez - Ctedra de Virologa 4247752 interno 7066 asuarez@tucbbs.com.ar Lugar de trabajo: Ctedra de Virologa - Instituto de Microbiologa Dr Luis Verna Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia - Universidad Nacional de Tucumn Ayacucho 471 RESUMEN Los Papilomavirus Humanos (HPV) son virus epiteliotropos pertenecientes a la familia Papilomaviridae. El gran impacto de estos virus en el campo sanitario surgi a travs de su asociacin etiolgica con tumores humanos, en particular con el cncer de cuello uterino. En base a estudios epidemiolgicos, los virus HPV han sido clasificados en virus de alto y bajo riesgo oncognico. El genotipo viral es uno de los factores de riesgo asociados a la infeccin que determinan la progresin maligna de lesiones cervicales. El principal obstculo para el diagnstico de laboratorio de estos virus es la incapacidad de propagarse en cultivos celulares convencionales por ello el laboratorio virolgico utiliza diversas tcnicas de biologa molecular para detectar y/o tipificar el HPV presente en clulas y tejidos, como la amplificacin gnica por medio de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y la tipificacin viral por el anlisis de los fragmentos obtenidos mediante endonucleasas de restriccin (RFLP) El objetivo de este trabajo fue seleccionar un mtodo que permita detectar y tipificar por PCR-RFLP el mayor nmero de tipos de HPV a partir de ADN extrados de tejidos fijados, frescos y congelados. Se estudiaron biopsias de crvix uterino producto de conizaciones y LEEPs (loop electrocautery excision procedure), cepillados endocervicales y tejido fijado y parafinado (material de archivo) de pacientes concurrentes al Instituto de Maternidad y Ginecologa Nuestra Seora de las Mercedes de Tucumn. A todas las muestras se les realiz el diagnstico cito-histolgico aplicando el criterio de Bethesda 2001. Se requiri del consentimiento individual de las participantes, todas completaron un cuestionario donde se relev informacin asociada segn la Agencia Internacional para la Investigacin en Cncer y la Organizacin Mundial de la Salud (IARC-OMS), acorde con la legislacin internacional (Declaracin de Helsinki).
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Se seleccionaron 4 protocolos para extraccin y purificacin de ADN. Todos ellos utilizaban proteinasa K para la digestin de la muestra. En tres de los mtodos se llev a cabo una etapa de purificacin con distintas metodologas: fenolcloroformo, precipitacin con acetato de amonio y columna de slice. La deteccin genrica del genoma viral fue realizada por PCR utilizando el sistema de cebadores consenso MY 09/11 que amplifican un fragmento de 450 pb del gen viral L1. Para esta reaccin se prepar un control positivo con ADN extrado de la lnea celular HeLa C 229, cultivada in vitro que contiene 10-50 copias de HPV18. La genotipificacin viral se realiz por RFLP. Los amplificados fueron sometidos a anlisis de restriccin con un panel con 7 enzimas, pudiendo de esta manera identificar ms de 40 genotipos de HPV mucosotropos.

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NMINA DE EVALUADORES QUE SE INTEGRARON AL NMINA DE EVALUADORES QUE SE INTEGRARON AL CIERRE DE ESTA EDICIN CIERRE DE ESTA EDICIN
VOLENTINI Dra SABRINA INS VOLENTINI - Doctor en Ciencias Biologicas. Dra.SUSANA BORKOSKY Dra.SUSANA ALICIA BORKOSKY - Magister en Ciencias Qumicas y Dra en Bioqumica. PASTORIZA DE TARIFA, ADRIANA DEL VALLE - Ingeniero Agrnomo - Magster en Desarrollo de Zonas ridas y Semiridas. DRA. CINTIA ROMERO - Dra. en Bioqumica. DRA. MARCELA FTIMA MEDINA - Dra. en Bioqumica. E. DR. ARQ. GUILLERMO E. GONZALO - Dr. en Arquitectura. DIEGO A. SAMPIETRO - Ingeniero Agrnomo - Doctor en Bioqumica. NGELES DRA. MARA DE LOS NGELES BULACIO - Doctora en Odontologa GAUFFIN DRA. MARA PAOLA GAUFFIN CANO Dra. en Bioqumica. GRAU DR. ALFREDO GRAU - Ingeniero Agrnomo (UNT) Doctor en Ciencias Naturales (U Hamburgo). MARTA ADRIANA CORREA ZEBALLOS - Magster en Estadstica Aplicada. Magster en Metodologa de la Investigacin Cientfica y Licenciada en Matemtica. DR SERGIO E. PASTERIS - Doctor en Bioqumica. PASTERIS MARIA JOSE RODRIGUEZ VAQUERO - Doctora en Bioquimica. DRA. SUSANA ALVAREZ - Dr. en Bioqumica. ING. QUIMICO SUSANA B. CHAUVET - Quality Engineer -Especialista en Higiene y Seguridad en el Trabajo - Especialista en Ingenieria Ambiental. GRAMAJO DRA. MNICA B. GRAMAJO - Doctora en Qumica - Licenciada en Qumica. DRA MIRTA SARA SANTANA - Dra en Estadstica. SANTANA CATIANA ZAMPINI - Dra. en Ciencias Biolgicas. MARCELA S. MEDINA - Dr. en Bioqumica. AGERO DRA MARIA GRACIELA AGERO - Dra en Bioquimica. ABREG ADELA VICTORIA ABREG - Dra. en Bioqumica. ALBERTO DRA MARA ROSA TucumnTO - Dra N 1 Ciencias Biolgicas. Arch. Bioq., Qum. y Farm. ALBER Tomo XXI en 2010-2011

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ADRIANA MARA SALES - Dra en Qumica. GONZLEZ SUSANA ESTELA GONZLEZ DE GALINDO - Magister en Enseanza de la Matemtica Superior MARGARITA DEL VALLE VELIZ DE ASSAF - Licenciada en Matemtica Magister en la enseanza de la Matemtica Superior. VILLALONGA PATRICIA MARA VILLALONGA DE GARCA - Licenciada en Matemtica y Magster en Enseanza de la Matemtica Superior. ING. FRANCO DAVOLIO - Ingeniero Qumico; Ingeniero Sanitario; Ingeniero Laboral. DANTUR LILIA CRISTINA DE LA CRUZ RODRGUEZ DE DANTUR - Dra en Bioqumica. DE DRA SILVIA COLOMBO DE HOLGADO - Doctora en Medicina. Medizinische Hochschule Hannover.ao 1981 Especialista en Anatoma Patolgica JUREZ MG. ANA MABEL JUREZ - Magister en la Enseanza de la Matemtica en el Nivel Superior . DRA. BETTINA BRAVO - Doctor por la Universidad Autnoma de Madrid DRA. SUSANA B. GENTA Dra. en Bioqumica. PROF. DRA. LILIANA FRACCHIA - Prof. Asociada a Cargo de Ctedra Metodologa FRACCHIA de la investigacin cientfica. Facultad de Medicina UNT. GRACIELA BENZAL - Doctorado en Matemtica Aplicada CARMEN M. TORRENTE - Magster en Sociologa Aplicada y Esp. en Metodologa de la Investigacin Cientfica. SERGIO ORLANDO GMEZ - Mdico especialista en Pediatra

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ARCHIVOS DE BIOQUMICA,, QUMICA Y FARMACIA TUCUMN ARCHIVOS DE BIOQUMICA QUMICA Y FARMACIA TUCUMN
NMEROS ANTERIORES Tomo I N 1 pg (1-138) N 2 pg (139-254) N 3 pg (255-361) N 1 pg (1-118) N 2 pg (119-238) N 3 pg (238-416) Tomo III Tomo IV N N N N N N N N N N N N N N 1 pg (1-144) 2 pg (145-297) 3 pg (299-466) 1 pg (1-104) 2 pg (105-196) 3 pg (197-316) 4 pg (317-422) 1 pg (1-262) 2 pg (263-392) 1 pg (1-119) 2 pg (121-270) 1 pg (1-118) 2 pg (119-265) 3 pg (267-471) 1943 1944 1945 1945 1945 1945 1946 1947 1947 1948 1948 1949 1950 1950 1951 1951 1953 1955 1955 1956 Tomo VIII Tomo IX Tomo X Tomo XI Tomo XII Tomo XIII Tomo XIV Tomo XV Tomo XVI Tomo XVII Tomo XVIII Tomo XIX Tomo XX N 1 (1-142) N 2 (143-286) N 1 N 2 N 1 N 2 N N N N N N N N N N N (1-113) (1-171) (1-181) (1-157) 1957/58 1957/58 1961 1961 1962 1962 1963/64 1965 1966 1967/68 1969 1970 1971 1973 1975 1976 1977/78

TomoII

Tomo V Tomo VI Tomo VII

1-2 (1-183) 1-2 (1-230) 1 (1-242) 1 (1-248) 1 (1-272) 1 (1-151) 1 (1-171) 1 (1-185) 1 (1-89) 2 (91-258) 1 (3-160)

El Tomo XXI N 1 2010/11 se termin de imprimir en Abril de 2011 en San Miguel de Tucumn Repblica Argentina.
Arch. Bioq., Qum. y Farm. Tucumn Tomo XXI N 1 2010-2011

CONTENIDO

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DIAGNSTICO DIFERENCIAL DE ANEMIA FERRPENICA Y RASGO BETA TALASMICO: VALOR PREDICTIVO DE LAS PRUEBAS DE CRIBADO Lazarte S., Leri de Nofal M., Rossi E, Jimnez C., Ledesma Achem E., Iss B. Instituto de Bioqumica Aplicada. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. UNT ACADEMIA USO REVISIONES DE LA ACADEMIA NORTEAMERICANA DE PEDIATRA DEL USO DE PROBIOTICOS Laurie Barclay, MD "CARACTERIZACIN DE SALIVARICINA CRL 1328 Y SU APLICACIN EN EL DISEO DE PRODUCTOS FARMACUTICOS PARA LA PREVENCIN DE INFECCIONES UROGENITALES." Lic. Esteban Vera Pingitore; Dra. Mara Elena Ftima Nader de Macas; Dr. Fernando Juan Manuel Sesma. REACCIONES ENZIMTICAS DE INTERS EN LA INDUSTRIA QUMICA Y/O FARMACUTICA Bioq. Cintia Mariana Romero: Dr. Mario Domingo Baigor ESTUDIOS DE COMPONENTES CELULARES Y EXTRACELULARES EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE INTOXICACIN CON PLOMO Bioq. Rossana Cristina Prez Aguilar; Dra. Sara Serafina Snchez. DETECCIN, PURIFICACIN BIODIRIGIDA Y ANLISIS ESTRUCTURAL DE METABOLITOS BIOACTIVOS DE ORIGEN VEGETAL Farm. Melina Araceli Sgariglia; Dra. Marta Amelia Vattuone. BIOACTIVOS CONSTITUYENTES BIOACTIVOS DE SMALLANTHUS CONNATUS Y PRUNUS TUCUMANENSIS. SNTESIS DEL POTENTE FUNGICIDA NATURAL VERNOLEPIN. Sandra Mnica Bach; Dr. Csar Atilio Nazareno Cataln. ENOLGICAS NOPROPIEDADES ENOLGICAS DE LEVADURAS NO-SACCHAROMYCES ASOCIADAS A BEBIDAS FERMENTADAS. Lic. en Biotec. Luca Margarita Mendoza; Dra. Marta Elena Faras COMPUESTOS FOTOPROTECTORES PRODUCCIN DE COMPUESTOS FOTOPROTECTORES (CAROTENOIDES Y LEVADURAS MICOSPORINAS) POR LEVADURAS Lic. Martn Molin; Dra. Mara Rosa Giraudo.

CONTENIDO TRABAJOS ORIGINALES

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ARTICULOS ESPECIALES

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RESUMENES DE TESIS APROBADAS EN 2010

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SISTEMA ALIMENTACIN DESARROLLO DE UN SISTEMA DE ALIMENTACIN PROBITICA PARA PORCINO GANADO PORCINO Farm.Gloria Romina Ross; Dra. Silvia Nelina Gonzlez.
POLINUCLEARES TRANSICIN 4,4COMPLEJOS POLINUCLEARES DE METALES DE TRANSICIN CON 4,4-AZOBIS LIGANDO (PIRIDINA) COMO LIGANDO PUENTE Lic. Gaston Pourrieux; Dr. Nstor Eduardo Katz; Dra. Florencia Fagalde ANCHOTA (ENGRAULIS SALADA. FERMENTACIN DE ANCHOTA (ENGRAULIS ANCHOITA) SALADA. EFECTO DEL INVOLUCRADA STRESS SALINO SOBRE LA FLORA LCTICA INVOLUCRADA Lic. Carolina Belfiore; Dra. Graciela M. Vignolo; Dr. Ral R. Raya DISTINTAS LA ACTIVIDAD BIOLGICA DE PROPLEOS DE DISTINTAS REGIONES DE LA ARGENTINA Farm. Mara Ins Nieva Moreno; Dra. Mara Ins Isla BACTERIAS ALIMENTOS ESTERASAS DE BACTERIAS LACTICAS EN ALIMENTOS FERMENTADOS Lic. Mara Claudia Abeijn Mukdsi; Dra. Roxana B. Medina de Figueroa DEFENSA BIOQUMICA DE LA DEFENSA EN FRUTILLA (fragaria ananassa) Alicia Ins Mamani de Marchese; Dr. Juan C. Daz Ricci ; Dr. Atilio P. Castagnaro CARACTERIZACIN ACTIVAS AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE NUEVAS BIOMOLCULAS ACTIVAS MICROORGANISMOS EXTREMFILOS PRODUCIDAS POR MICROORGANISMOS EXTREMFILOS (EXTREMOCINAS) Lic. Leandro Arturo Snchez; Dr. Osvaldo Daniel Delgado; Dr. Faustino Sieriz

ESTRUCTURA STRUCTURADE MCCJ25: RELACIN ESTRUCTURA-FUNCIN Y GENES CROMOSMICOS DE ANTIBITICO RESISTENCIA AL ANTIBITICO Lic. Sergio Benjamn Socas; Dr. Ral A. Salomn ESTACIONARIA MCCJ25: RESISTENCIA EN FASE ESTACIONARIA Y APLICACIONES BIOTECNOLGICAS Lic. Mara Fernanda Pomares; Dr. Ricardo Norberto Faras; Dra. Paula Andrea Vincent FERMENTOS LCTICAS Y SUS BIOPOLMEROS: NUEVAS APLICACIONES AN FUNCIONALES ALIMENTOS FUNCIONALES Bqca. Mara Cecilia Rodrguez; Dra. Graciela Font de Valdez; Dra. Fernanda Beatriz Mozzi MICROCINA IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DEL BLANCO DE ACCIN DE MICROCINA J25 EN LA MEMBRANA CELULAR Lic. Miriam Carolina Chaln; Dra. Paula Andrea Vincent PRODUCTOS PROBITICOS PARA LA PREVENCIN DE INFECCIONES PROBITICOS PREVENCIN TERNEROS. BSICOS INTESTINALES EN TERNEROS. ESTUDIOS BSICOS Y APLICADOS. Bioq. Natalia Cecilia Maldonado; Dra Mara Elena Ftima Nader Macas; Dra Clara Silva de Ruiz MICROCINA MEMBRANAS ACCIN DEL PPTIDO ANTIBITICO MICROCINA J25 SOBRE MEMBRANAS INTERACCIN. BIOLGICAS: ESTUDIO TOPOLGICO DE LA INTERACCIN. Bioq. Fernando G. Dupuy; Dr. Roberto D. Morero; Dra. Rosana N. Chehn EXPRESIN DE METALOPROTEASAS DE MATRIZ EN EL OVIDUCTO DE LLAMA Renato Zampini; Dra. Silvana A. Apichela; Dr. Martin E. Argaaraz. ENZIMAS PRODUCCIN DE ENZIMAS AMILOLTICAS CON PICHIA PASTORIS Pablo Savoy ; Dra. Maria Ester Lucca. PLANTINES AZCAR RESPUESTA DE PLANTINES DE CAA DE AZCAR A INOCULACIN CON RIZOBACTERIAS AISLADAS DE ESPORAS DE ENDOMICORRIZA AISLADAS ENDOMICORRIZA Andrea Sarquiz; Dr. Carlos H. Bellone. LINDANO CONSORCIO BIODEGRADACIN DE LINDANO POR UN CONSORCIO DEFINIDO DE ACTINOMYCETES Juliana Mara Sez; Claudia S. Benimeli ; Mara Julia Amoroso. AISLAMIENTO, SELECCIN Y CARACTERIZACIN DE MICROORGANISMOS PERTENECIENTES AL GNERO BACILLUS BUENOS PRODUCTORES DE LIPASAS. OPTIMIZACIN DE UN MEDIO DE PRODUCCIN. Mariana Prez Ibarreche; Mario Domingo Baigor. BACTERICIDA INDUCIDA FOTOLISIS ACTIVIDAD BACTERICIDA INDUCIDA POR PROCESOS DE FOTOLISIS Y PRESENTES FOTOCATLISIS SOBRE BACTERIA PATGENAS PRESENTES EN AGUA. Cecilia Beatriz Paulino; Mara Cristina Apella. POTENCIAL BACTERIAS INTERS EVALUACIN DEL POTENCIAL EMPLEO DE BACTERIAS LCTICAS DE INTERS BIOTECNOLGICO EN LA RECUPERACIN DE LA RESPUESTA A INFECCIONES, EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE INMUNOSUPRESIN POR CICLOFOSFAMIDA. Victoria Pacheco; Dra. Gladis Susana lvarez. SEALIZACIN MECANISMOS DE SEALIZACIN INVOLUCRADOS EN LA MADURACIN DE DEL ARAQUIDNICO OVOCITOS DE ANFIBIO. ROL DE LA CASCADA DEL CIDO ARAQUIDNICO Mara Eugenia Ortiz ; Dra. Liliana Zelarayn. USO DE PRODUCTOS NATURALES PARA EL CONTROL DE PATGENOS DE CITRUS Negrillo Kovacevich, Lucas Fabian; Dr. Jorge Esteban Sayazo. ESTUDIO DE LA CAPACIDAD ANTAGNICA Y DEL EFECTO EN LA EMERGENCIA CAPACIDAD DEL SPP. DE PLNTULAS DE SOJA DE AISLAMIENTOS DE TRICHODERMA SPP. Marianela Maza; Dra. Ing. Agr. Marta Graciela Yasem de Romero. POLIFOSFATO NUEVOS ROLES DEL POLIFOSFATO EN CLULAS DE ESCHERICHIA COLI EN FASE ESTACIONARIA Andrea Mariana Lencina; Bioq. Mara Regina Rintoul; Dra. Viviana Andrea Rapisarda.

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RESUMENES DE TESINAS APROBADAS EN 2010

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ESENCIAL PRODUCTOS USO DEL ACEITE ESENCIAL DE ORGANO COMO ADITIVO DE PRODUCTOS LCTEOS FERMENTADOS Marcial Guillermo Emilio; Dra. Carola Schuff; Dra. Graciela Font de Valdez. CLONADO Y EXPRESIN DEL DOMINIO ACTIVO DE LEFTY2 FUSIONADO A LA FLUORESCENTE PROTENA FLUORESCENTE VERDE (GFP) Julin Horacio Jurez; Dr. Pablo Valdecantos. AISLAMIENTO DE BACTERIAS CON POTENCIAL EN LA BIODEGRADACIN DE HIDROCARBUROS AROMTICOS POLICCLICOS (HAPs) A PARTIR DE SEDIMENTOS DE LA COSTA PATAGNICA Paula Isaac; Dra. Marcela Alejandra Ferrero. GENTICO POSTFRUTILLA SILENCIAMIENTO GENTICO POST-TRANSCRIPCIONAL EN FRUTILLA (FRAGARIA X ANANASSA DUCH.) Mara Elena Iezzi; Juan Carlos Daz Ricci; Gabriel Ricardo Vellicce. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE LAS ISOFLAVONAS DAIDZENA Y TOTALES GENISTENA Y FENOLES TOTALES EN DISTINTOS CULTIVARES DE SOJA DEL NOA Karina Andrea Guzzetti; Carola Schuff de Heluani. FISIOLGICOS CRL ASPECTOS FISIOLGICOS Y TECNOLGICOS DE LACTOCOCCUS LACTIS CRL PROBITICO RANICULTURA 1584, POTENCIAL PROBITICO PARA RANICULTURA Marcos Gabriel Guidoli; Mara Claudia Otero; Sergio Enrique Pasteris. ESTUDIO DE COMPONENTES DE LA VA DE SEALIZACIN DE LAS PROTENAS MORFOGENTICAS SEAS (BMPs) EN EL OVIDUCTO BOVINO Elina Vanesa Garcia; Dr. Pablo A. Valdecantos. MARCADORES OBTENCIN DE MARCADORES GENTICOS PARA EL ESTUDIO DE LA GENTICA NOROESTE DIVERSIDAD GENTICA DE POBLACIONES DE VICUAS DEL NOROESTE ARGENTINO Daniela Celeste Garca; Dra. Mariela Roldn Olarte. SQUAMULOSA PRODUCTOS NATURALES DE VERNONANTHURA SQUAMULOSA PARA EL CONTROL DE INSECTOS DE IMPORTANCIA AGRCOLA EN EL NOA. AGRCOLA Roco del Mar Fernndez; Lic. Susana Popich; Dra. Elena Cartagena. ESTUDIO Y ANLISIS DE DIFERENTES TCNICAS UTILIZADAS PARA EL DIAGNSTICO DE VIROIDES DE CTRICOS. Cecilia Escobar Ponce de Len; Ing. Agr. Beatriz Stein. ANTIMICROBIANA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Y ANTIBIOFILM DE DRIMANOS AISLADOS Y PURIFICADOS HIERBA PUNCTATUM PURIFICADOS DE LA HIERBA NATIVA POLYGONUM PUNCTATUM Mnica Gabriela Escobar; Mario Eduardo Arena; Elena Cartagena. BIOEMULSIFICANTES SINTETIZADOS PRODUCCIN DE BIOEMULSIFICANTES SINTETIZADOS POR CULTIVADOS MICROORGANISMOS DEL GNERO BACILLUS CULTIVADOS EN MEDIOS DEFINIDOS. Evelyn Alejandra Dip; Dr. Mario Baigor. USO DE BACTERIAS LCTICAS MODIFICADAS GENTICAMENTE PRODUCTORAS DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES (CATALASA Y SUPERXIDO DISMUTASA) EN LA PREVENCIN DE LA INFLAMACIN INTESTINAL Silvina Andrea del Carmen; Jean Guy LeBlanc; Alejandra de Moreno de LeBlanc . PLANTARUM PIE BACTERIOTERAPIA CON LACTOBACILLUS PLANTARUM EN LCERAS DE PIE PRELIMINAR RESPUESTA DIABTICO. ESTUDIO PRELIMINAR DE LA RESPUESTA INFLAMATORIA Y EL REPARACIN PROCESO DE REPARACIN TISULAR Mara Raquel Cerezo; Mirta Mara Rachid. CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y BIOQUMICA DE AISLAMIENTOS DE ZEAEARGENTINA CERCOSPORA ZEAE- MAYDIS EN ARGENTINA Cejas, Romina Andrea; Daz, Cecilia Gladys; Ramallo, Ana Carolina. SELECCIN DE AZOSPIRILLUM BRASILENSE PARA INCREMENTAR LA AZOSPIRILLUM PARA GERMINACIN SEMILLAS. VELOCIDAD DE GERMINACIN Y SANIDAD DE SEMILLAS. Cabrera de la Rosa, Carlos Matas; Dr: Bellone, Carlos Hugo.

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DEGRADACIN ESTUDIO DE LA DEGRADACIN DE CLORDANO Y METOXICLORO POR ACTINOMYCETES AUTCTONOS AUTCTONOS

Natalia Bourguignon; Prof. Dr. Sergio Antonio Cuozzo.


AISLAMIENTO Y SELECCIN DE HONGOS FILAMENTOSOS DE LA SELVA YUNGAS PEDEMONTANA DE LAS YUNGAS (TUCUMN ARGENTINA) PRODUCTORES DE LIPASA Romina Priscila Bertani; Julia Ins Faria. PROTENA CLONADO MOLECULAR Y EXPRESIN DE UNA PROTENA QUIMRICA FLUORESCENTE DEL GEN NP63 Y RASTREO DE GENES EXPRESADOS EMBRIONARIA DIFERENCIALMENTE EN LA EPIDERMIS EMBRIONARIA Mara Guadalupe del Valle Barrionuevo; Celeste Trbulo; Manuel Javier Aybar. EXTRACTOS FRUTILLAS MANEJO EVALUACIN DE EXTRACTOS DE HOJAS DE FRUTILLAS PARA EL MANEJO DE VEGETALES ENFERMEDADES VEGETALES Mara Araceli Barbieri; Dra. Mara Paula Filippon; Dr. Juan C. Diaz Ricci. VALIDACIN IDENTIFICACIN PROPIONIBACTERIAS DISEO Y VALIDACIN DE SONDAS PARA IDENTIFICACIN DE PROPIONIBACTERIAS HIBRIDACIN LCTEAS POR HIBRIDACIN FLUORESCENTE IN SITU (FISH). Jaime Daniel Babot; Adriana Perez Chaia; Mara Cristina Apella. ALELOPTICA GRACILE MICROORGANISMOS ACTIVIDAD ALELOPTICA DE FUNASTRUM GRACILE SOBRE MICROORGANISMOS MALEZAS MONO FITOPATGENOS, MALEZAS Y ESPECIES MONO Y DICOTILEDNEAS DE INTERS AGRCOLA Jos Mara Alvarez Gimnez; Dra. Elmira Contreras Maraon de Riscala; Dr. Antonio Mario Fortuna. PRODUCCION DE NARINGINASA Y NARINGENINA POR Aspergillus niger USANDO RESIDUOS AGROINDUSTRIALES Teresa Leonor Alurralde; Dra. Mara Cristina Rubio. ENTOMOPATGENO PRODUCCIN DE CEPAS DEL HONGO ENTOMOPATGENO METARHIZIUM (METSCH.)SOROKIN SUSTRATO ANISOPLIAE (METSCH.)SOROKIN EN UN SUSTRATO NATURAL Mirta del Valle Agero; Dra. Marta Yasem de Romero. POMADAS UTILIZANDO DESARROLLO DE POMADAS ANTIBITICAS Y ANTIOXIDANTES UTILIZANDO BACCHARIS COMO ACTIVO TINTURAS DE ESPECIES DE BACCHARIS QUE CRECEN EN LA PUNA ARGENTINA. Gabriela Nuo; Mag. Myriam Elizabeth Arias. LCTEO SEMIDISEO Y EVALUACIN DE UN PRODUCTO LCTEO SEMI-FLUIDO PARA LA PROPIONIBACTERIUM FREUDENREICHII PROTECCIN DE PROPIONIBACTERIUM FREUDENREICHII DURANTE LA GASTROINTESTINAL. DIGESTIN GASTROINTESTINAL. Vernica Hael Conrad; Adriana Beatriz Perez Chaia. CONSERVACIN PROBITICOS DESECADOS ESTUDIO DE LA CONSERVACIN DE PROBITICOS LCTICOS DESECADOS SIN CADENA DE FRO. Mara Lourdes Cruz Pintos; Graciela Font de Valdez. RECUPERACIN MTODOS DE RECUPERACIN DE ADN DE PAPILOMAVIRUS HUMANO (HPV) DE TEJIDOS FIJADOS, FRESCOS Y CONGELADOS PARA APLICACIN DE REACCIN DE POLIMERASA EN CADENA - POLIMORFISMO DE FRAGMENTOS DE (PCRRESTRICCIN (PCR-RFLP) Zareath Pamela Tern Baptista; Dra Ada Mara Surez.

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