OS GENES SO FEITOS DE DNA

1- OS CROMOSSOMOS SO FEITOS DE PROTENAS E DNA

- Em 1920, a tcnica experimental, CITOQUMICA, revelou que os cromossomos continham dois compostos biolgicos: PROTENAS e DNA. - A propriedade mais fundamental exigida para o material gentico a infinidade de formas variadas: * Cada clula contm um grande nmero de diferentes genes; * Carctersticas herdveis diferentes; * Estrutura um pouco diferente da de outros genes na clula. - Aceitava-se que a protena era o material gentico e no o DNA. * O DNA foi tido como uma molcula invarivel, relativamente pequena, com peso molecular de 1.227 e considerada todas iguais. G T C A

* As protenas eram conhecidas como macromolculas, ou seja, polmeros de aminocidos, com 20 aminocidos diferentes.

Aminocidos 2 PROVA EXPERIMENTAL DE QUE O DNA O MATERIAL GENTICO -Em 1930, tornou-se aparente que o DNA era na verdade um longo polmero e poderia existir em infinitas formas variadas. 2.1- PRINCPIO TRANSFORMANTE - Bactrias que causam doenas, para uma determinada espcie, pode incluir tanto formas virulentas quanto no virulentas. Ex: Streptococcus pneumoniae a) A descoberta da transformao bacteriana

- Eram conhecidos trs tipos de sorotipos de S. Pneumoniae:

Tipos I, II e III- Diferenciadas pela natureza qumica das cpsulas. - As diferentes cpsulas so constitudas de diferentes Polissacardeos - as cpsulas d s colnias de S. Pneumoniae uma aparncia suave e brilhante. Da, sua designao de forma S (do ingls, SMOOTH). - A forma inofenciva, no virulenta distinta da virulenta pela ausncia da cpsula e por um aspecto rugoso das colnias. As no virulentas so conhecidas como R. - Sabia-se que um determinado sorotipo podia mudar sua forma (p. Ex., Tipo IS pode mudar para Tipo IR), naturalmente. - Griffith em 1928, publicou os resultados de quatro experimentos: 1- Um camundongo foi injetado com sorotipo IS= contraiu pneumonia e morreu 2- Um segundo camundongo foi injetado com sorotipo IIR= continuou saudvel 3- Um amostra de bactrias Tipo IS foi morta por aquecimento 60C por trs horas e injetada no camundongo= continuou saudvel 4- Uma amostra de bactrias Tipo IS mortas por aquecimento, foram misturadas com bactrias avirulentas do Tipo IIR vivas e injetadas em um camundongo= contraiu pneumonia e morreu, e alm disso, foram isoladas bactrias do Tipo IS vivas.

b) O princpio transformante o material gentico - Aconcluso tinha que ser de que um componente das bactrias Tipo IS mortas por aquecimento tinha transformado as clulas TIPO IIR no sorotipo virulento IS. II R II II R IS R IS IS

- O princpio transformante, quando introduzido em bactrias do Tipo IIR, confere a estas clulas uma caracterstica nova, permanente e herdvel.

IIR

IIR

IS

c) O princpio transformante o DNA - Griffith no tentou identificar o princpio transformante. - Avery, Colin MacLeod e Maclyn McCarty (Rockefeller Institute de Nova Iorque) - Preparam filtrados de clulas IS mortas, contendo o princpio transformante e ento digerir os componente com enzimas especficas Ainda transforma transforma Enzima SIII quimiotripsina (Degradar polissacardeo) Protenas) Ainda Tripsina, (Degradar

(Degradas RNA) (Degradar DNA) Ribonuclease Desoxirribonuclease Ainda transforma transformao Filtrado de clulas S mortas 2.2- OS GENES DE BACTERIFAGOS SO FEITOS DE DNA - Em 1951-52, foi totalmente estabelecido o uso de bacterifagos como instrumento experimental para o estudo da gentica molecular. Sem

a) Os bacterifagos so vrus que infectam bactrias - Os bacterifagos ou Fagos, so vrus que infectam especificamente bactrias.

Ex: O fago T2 especfico da bactria Escherichia coli - Quando inseridas em um meio de cultura contenco E. Coli, as clulas se tornaram infectadas e iro produzir quantidades de novas partculas de fago. Fago T2 Os genes do Fago entram na clula. E. coli

Novos fafos so liberados

Os genes do fago orientam a sntese dos novos fagos. b) A protena e o DNA do fago podem ser marcadas com marcadores radioativos - A Proteina pode ser macada pelo elemento Metionina).
35

S (Cistena e

- O DNA pode ser marcado pelo elemento 32P, que no sero incorporados s protenas, pois as mesmas no possuem P. Protenas S S

DNA P P P P P P P P P

- As amostras de DNA e protenas podem ser diferenciadas umas das outras, pois os dois radioistopos 32P e 35S emitem radiao com energias caracteristicamente diferentes. c) O experimento de Hershey-Chase (Experimento do liquidificador)

- Prepararam uma amostra radioativa de Fago T2, com protenas contendo 35S eo DNA com com 32P, de uma cultura de E. coli infectadas por T2 que tinham sido cultivadas com nutrientes marcados pelos respectivos istopos. - Os T2 marcados forma usados para infectar uma nova cultura de E. Coli no radioativa, sendo interrrompido o processo infeccioso aps alguns minutos de inoculao agitando-se as clulas em um liquidificador. - Em seguida, as clulas foram centifugadas de modo que as bactrias relativamente pesadas, contendo os genes do T2, fossem coletadas na parte inferior do tubo, deixando as partculas vazias do T2 em suspenso.
Centrifuga
Esperar alguns minutos e agitar a cultura
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Adio de T2 marcados Cultura de E. Coli.

Partculas do T2

Bacterifago Partcula do T2 Bactria Genes do T2

Genes do T2 e da bactria no pellet

NOES DO CILCO CELULAR

O Ciclo Celular conveniente dividido em quatro fases:

1- Fase G1. Esta a fase geralmente mais longa do ciclo celular e, para algumas clulas pode durar at semana ou mesmo meses. G vem da palavra gap (espao). o perodo quando a clula est crescendo, metabolizando , dentro dos organismos multicelulares, realizando sua funo especializada. Sendo assim, esta fase se caracteriza pela alta taxa de sntese de protenas.

2- Fase S. Durante a fase S, ou de sntese, as molculas de DNA cromossmico se . No comeo da fase S, as origens de replicao so ativadas, e uma sntese bidirecionada de DNA progride ao longo das molculas lineares at que a replicao esteja completa. Esta fase apresenta taxa de sntese protica suficiente para a replicao e manuteno da clula. 3- Fase G2. uma segunda fase gap, embora a clula agora j esteja comprometida com a multiplicao e G2 raramente dure mais que 3 a 4 horas. Durante G2, a clula efetivamente tetraplide, pois cada cromossomo (que est presente aos pares) se replicou e, portanto, contm duas molculas de DNA. Ao final de G2, os cromossomos iniciam sua condensao para formar estruturas metafsicas 4- Fase M. quando ocorrem as divises nucleares e celulares. Podem ocorrer dois tipos distintos de diviso nuclear: mitose e meiose. (a) Mitose: origina dois ncleos filhos, cada um contendo o mesmo complemento cromossmico que o parental, e padro de diviso das clulas Somticas ou Vegetativas (no reprodutivas). (b) Meiose: Resulta na reduo do nmero de cromossomos pela metade, de modo que a meiose de uma clula diplide em G1, tetraplide em G2, origina quatro clulas filhas haplides. Resultando assim nas clulas reprodutivas ou germinativas (gametas). Durante a meiose o cromossomos homlogos podem se recombinarem (crossing over) F