Sunteți pe pagina 1din 110

1

Cuprins


Capitolul 1 - Metode spectrometrice de analiz 7
1.1. INTRODUCERE N SPECTROMETRIA DE EMISIE I
ABSORBIE 7
1.1.1. Natura radiaiei electromagnetice. Spectrul
electromagnetic 7
1.1.2. Tipuri de interacii ale radiaiei electromagnetice i
corpusculare cu proba de analizat 9
1.1.3. Emisia i absorbia atomic a radiaiei 13
1.1.3.1. Emisia i absorbia atomic a radiaiei n domeniul
ultraviolet i vizibil 13
1.1.3.2. Emisia i absorbia razelor X 15
1.1.4. Absorbia, emisia i difuzia molecular a radiaiei 18
1.1.4.1. Absorbia radiaiei de ctre molecule 18
1.1.4.1.a. Tranziii electronice moleculare 19
1.1.4.1.b. Tranziii de vibraie molecular 22
1.1.4.2. Emisia radiaiei de ctre molecule 24
1.1.4.3. Difuzia radiaiei, efectul Raman 28
1.2. APARATURA UTILIZAT N SPECTROMETRIA DE
ABSORBIE N DOMENIILE ULTRAVIOLET, VIZIBIL
I INFRAROU 31
1.2.1. Schema general a unui spectrometru 31
1.2.2. Surse de radiaii 33
1.2.3. Sisteme de separare a radiaiilor n funcie de lungimea
de und 34
1.2.4. Detectori de radiaii 38
1.2.5. Sisteme de evaluare 40
1.3. SPECTROMETRIA DE EMISIE ATOMIC N ARC,
SCNTEIE ELECTRIC I PLASM 43
1.3.1. Principiul aparaturii 43
1.3.2. Analiza calitativ i semicantitativ 49
1.3.3. Analiza cantitativ 51
1.4. SPECTROMETRIA DE EMISIE N FLACR 53
1.4.1. Flacra ca sistem de atomizare i excitare 53
1.4.2. Principiul aparaturii 57
2

1.4.3. Analiza cantitativ 58
1.5. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE ATOMIC 59
1.5.1. Absorbia radiaiilor de ctre atomi 60
1.5.2. Principiul aparaturii 63
1.5.3. Analiza cantitativ 65
1.6. SPECTROMETRIA DE RAZE X 67
1.6.1. Principiul aparaturii 68
1.6.2. Metode directe de analiz cu raze X 71
1.6.3. Analiza prin fluorescen de raze X 72
1.7. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE
MOLECULAR N DOMENIUL VIZIBIL I
ULTRAVIOLET 74
1.7.1. Legea fundamental a absorbiei radiaiei 74
1.7.2. Eroarea fotometric. Condiii pentru o eroare minim la
determinarea absorbanei 79
1.7.3. Corelarea spectrelor electronice de absorbie cu structura
molecular 82
1.7.4. Analiza cantitativ 87
1.7.5. Titrri spectrometrice 89
1.8. SPECTROMETRIA DE FLUORESCEN I
FOSFORESCEN MOLECULAR 90
1.8.1. Relaia ntre intensitatea radiaiei de fluorescen (sau
fosforescen) i concentraie 91
1.8.2. Principiul aparaturii 92
1.8.3. Factorii structurali care determin fluorescena 93
1.8.4. Analiza cantitativ 93
1.9. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE N INFRAROU I
RAMAN 99
1.9.1. Pregtirea probelor n vederea nregistrrii spectrului n
IR 99
1.9.2. Corelarea spectrelor n IR cu structura molecular 101
1.9.3. Spectrometria Raman 104
1.10. SPECTROMETRIA DE MAS 109
1.10.1. Principiul aparaturii utilizate n spectrometria de mas 110
1.10.1.1. Metode de ionizare 110
1.10.1.2. Metode de separare a ionilor. Analizorul de ioni 117
3

1.10.1.3. Detectorul de ioni. Schema unui spectrometru de mas.
Rezoluia 124
1.10.2. Spectrul de mas, aplicaii analitice 125
1.10.3. Cuplarea cromatografiei cu spectrometria de mas 133
1.11. SPECTROMETRIA DE REZONAN MAGNETIC
NUCLEAR 135
1.11.1. Proprietile magnetice ale nucleului 135
1.11.2. Interaciunea momentului de spin al nucleului cu un
cmp magnetic 137
1.11.3. Principiul aparaturii RMN 142
1.11.4. Poziia semnalelor n spectrul RMN. Deplasarea
chimic 144
1.11.5. Cuplarea spin-spin 151
1.11.6. Spectrometria RMN cu iradiere n pulsuri i
transformat Fourier 155
BIBLIOGRAFIE 157
RESURSE INTERNET N DOMENIUL METODELOR
SPECTROMETRICE DE ANALIZ 158
Capitolul 2 - Metode electroanalitice 161
2.1. INTRODUCERE N METODELE ELECTROANALITICE 1
2.1.1. Electrozi utilizai n celulele electrochimice 162
2.1.2. Celule electrochimice 164
2.1.2.1. Energia liber i fora electromotoare a unei celule
electrochimice 168
2.1.2.2. Efectul concentraiilor asupra forei electromotoare a unei
celule. Ecuaia Nernst 169
2.1.3. Potenialul de electrod 170
2.1.3.1. Potenialul standard de electrod 172
2.1.3.2. Potenialele de electrod n prezena unor reactivi de
precipitare sau de complexare 173
2.1.3.3. Limitri n utilizarea potenialelor standard de electrod 175
2.1.4. Poteniale de jonciune lichid 177
2.1.5. Efectul curentului asupra forei electromotoare a unei
celule. Cinetica proceselor de electrod. Curbe curent-
potenial 178
2.1.5.1. Cderea de potenial datorit rezistenei ohmice a celulei
electrochimice 179
2.1.5.2. Polarizarea electrozilor 179
4

2.1.5.3. Cinetica transferului de sarcin la electrozi 182
2.1.5.4 Curbele curent-potenial pentru o concentraie constant a
speciilor care particip la reacia de electrod. Limitarea
curentului datorit transferului de sarcin 185
2.1.5.5. Curbele curent-potenial pentru concentraii variabile ale
speciilor care particip la reacia electrod. Limitarea
curentului datorit transferului de mas 187
2.1.5.5.a. Forma curbelor curent-potenial (voltamograme) pentru
curenii de difuzie 190
2.1.5.5.b. Ecuaiile curbelor curent-potenial pentru curenii de
difuzie 192
2.1.6. Clasificarea metodelor electroanalitice 195
2.2. METODE POTENIOMETRICE DE ANALIZ 198
2.2.1 Metode poteniometrice directe 198
2.2.1.1. Electrozi de spea I-a 198
2.2.1.2. Electrozi de spea a II-a 202
2.2.1.3. Electrozi de spea a III-a 204
2.2.1.4. Electrozi redox 205
2.2.1.5. Electrozi cu membran 206
2.2.1.5.a. Clasificarea electrozilor cu membran 206
2.2.1.5.b. Celule electrochimice folosite la efectuarea de
determinri cu electrozi ion-selectivi cu membran.
Coeficientul de selectivitate al elec-trozilor ion-selectivi 208
2.2.1.5.c. Electrozi ion-selectivi cu membran solid 211
2.1.5.5.d. Electrozi cu membran lichid i polimeric 216
2.2.1.5.e. Electrozi cu membran sensibili pentru gaze 220
2.2.1.6. Electrozi cu semiconductori 222
2.2.1.6.a. Tranzistori cu efect de cmp sensibili chimic 227
2.2.1.7. Electrozi chimic modificai 232
2.2.1.8. Biosenzori poteniometrici 238
2.2.1.9. Microelectrozi ion-selectivi i determinri
poteniometrice in vivo 243
2.2.1.10. Practica determinrii poteniometrice directe 245
2.2.1.10.a. Determinarea poteniometric a pH-ului cu electrodul
de sticl 247
2.2.2. Titrri poteniometrice 252
2.2.2.1. Deducerea formei curbelor de titrare poteniometric cu
ajutorul curbelor curent-potenial (voltamograme) 253
2.2.2.2. Titratoare poteniometrice automate 258


5

2.3. METODE CONDUCTOMETRICE DE ANALIZ 260
2.3.1. Conductana electrolitic 260
2.3.2. Practica determinrilor conductometrice 263
2.3.3. Titrri conductometrice 266
2.4. METODE VOLTAMETRICE I POLAROGRAFICE DE
ANALIZ 270
2.4.1. Componente ale celulelor electrochimice i aparatura
utilizat n voltametrie 271
2.4.2. Polarografia convenional (n curent continuu) 278
2.4.2.1. Principii ale polarografiei convenionale 278
2.4.2.2. Aspecte teoretice privind polarografia convenional 280
2.4.2.3. Ecuaiile undelor polarografice 284
2.4.2.4. Curentul rezidual n polarografie 287
2.4.2.5. Maximele curenilor polarografici 290
2.4.2.6. Cureni catalitici ai hidrogenului 292
2.4.2.7. Cureni limit datorit unor procese de suprafa 293
2.4.2.8. Efectul reaciilor chimice 295
2.4.2.9. Efectul cineticii transferului de sarcin la electrod 297
2.4.2.10. Aspecte ale practicii polarografiei convenionale 298
2.4.3. Metode polarografice avansate (neconvenionale) 303
2.4.3.1. Metode polarografice avansate, n curent continuu 306
2.4.3.1.a. Polarografia rapid n curent continuu 306
2.4.3.1.b. Tast-polarografia (polarografia cu msurarea intermitent
a curentului) 306
2.4.3.1.c. Polarografia substractiv n curent continuu 308
2.4.3.1.d. Polarografia derivat n curent continuu 308
2.4.3.1.e. Polarografia cu baleiaj liniar, rapid de potenial 309
2.4.3.1.f. Polarografia cu pulsuri (pulspolarografia) 311
2.4.3.2. Metode polarografice n curent alternativ 319
2.4.3.2.a. Polarografia n curent alternativ sinusoidal 319
2.4.3.2.b. Polarografia n curent alternativ cu unde ptrate 325
2.4.3.2.c. Polarografia oscilografic n curent alternativ 328
2.4.4. Voltametrie hidrodinamic 331
2.4.4.1. Voltametria hidrodinamic cu electrozi rotitori 332
2.4.4.2. Voltametrie cu ali electrozi hidrodinamici 334
2.4.4.3. Electrodul de oxigen 335
2.4.4.4. Biosenzori amperometrici 337
2.4.4.5. Titrri amperometrice 339
2.4.5. Voltametrie n soluie staionar 342
2.4.5.1. Voltametria ciclic 343
6

2.4.5.2. Voltametrie cu trepte de potenial 348
2.4.5.3. Voltametria cu pulsuri de potenial 351
2.4.5.4. Cronopoteniometrie 353
2.4.5.5. Voltametrie de stripping (cu redizolvare) 358
2.5. METODE COULOMETRICE DE ANALIZ 364
2.5.1. Relaii de baz n coulometrie 365
2.5.2. Metode coulometrice la potenial controlat 367
2.5.3. Metode coulometrice la curent constant 369
BIBLIOGRAFIE 372
RESURSE INTERNET N DOMENIUL METODELOR
ELECTROANALITICE 373
BIBLIOGRAFIE GENERAL 374
RESURSE INTERNET N NUMEROASE DOMENII ALE
CHIMIEI ANALITICE 376




7


Capitolul 1
Metode spectrometrice de analiz


1.1. INTRODUCERE N SPECTROMETRIA DE EMISIE
I ABSORBIE


1.1.1. Natura radiaiei electromagnetice. Spectrul
electromagnetic.

Radiaia electromagnetic este o form de energie radiant care prezint
proprieti att de und ct i de particul. Dei undele i particulele par s fie
incompatibile, natura radiaiei electromagnetice, ca i comportarea electronilor, nu
poate fi explicat dect pe baza dualitii particul-und.
Proprieti de und. Dup cum se vede din fig. 1.1, o und
electromagnetic are o component electric i una magnetic. Cele dou
componente oscileaz n planuri perpendiculare unul fa de altul i fa de direcia
de propagare a radiaiei.



Fig. 1.1. O und electromagnetic.

O und electromagnetic este caracterizat de lungimea de und i de
frecven. Lungimea de und este distana dintre dou puncte corespunztoare de
pe curb (fig. 1.1). Frecvena, , reprezint numrul de uniti de lungimi de und
8

care trec printr-un anumit punct, n unitatea de timp. Frecvena se exprim n hertzi
(Hz), cicli pe secund sau s
-1
. Lungimea de und i frecvena sunt raportate la
viteza luminii prin relaia:

= c/n (1.1)

unde c este viteza luminii n vid (2,9976 10
10
cm/s) i n este indicele de refracie
(raportul vitezei luminii n vid i al vitezei sale n mediul respectiv). n unele cazuri
este mai avantajos de a folosi numrul de und, ,,, care reprezint numrul de
lungimi de und pe 1 cm. Se exprim n cm
-1
.

c
n
~
v

v = =
1
(1.2)
Intensitatea undei electromagnetice, I, reprezint energia care trece prin
unitatea de suprafa n unitatea de timp i este dat de relaia:

t 8
2
c A
I =
(1.3)

unde A este amplitudinea undei electromagnetice.
Proprieti de particul. Pentru a descrie modul n care interacioneaz
radiaia electromagnetic cu materia, este util de a imagina fasciculul de radiaii ca
o succesiune de fotoni (un tren de fotoni). Energia fiecrui foton este proporional
cu frecvena radiaiei i este dat de relaia:

E = h = hc / n (1.4)

unde E este energia fotonului n ergi, este frecvena radiaiei electromagnetice n
hertzi, h este constanta lui Planck, 6,624 10
-27
ergs i n este indicele de refracie al
mediului.

Spectrul electromagnetic
Radiaiile electromagnetice care sunt de interes pentru chimie variaz de la
radiaiile care au energie foarte mare, la undele radio ce au energie foarte mic.
Prin spectru electromagnetic se neleg radiaiile de toate lungimile de und
cuprinse n acest interval.
n tabelul 1.1 se prezint, n funcie de lungimile de und, frecvene i
energie, radiaiile ce constituie spectrul electromagnetic, tipurile de tranziii ce pot
avea loc i metodele de analiz corespunztoare. Diferitele regiuni ale spectrului
constituie domeniile spectrale, pentru fiecare domeniu utilizndu-se un anumit tip
ov
9

de aparat pentru a genera sau detecta radiaii, de exemplu: infrarou, raze X, vizibil
etc. ntre domeniile spectrale nu sunt limite nete, ci limite difuze, fiind, de fapt, o
ntreptrundere a acestora. Fiecrui domeniu spectral i corespund interacii
specifice ale radiaiei cu proba de analizat.

1.1.2. Tipuri de interacii ale radiaiei electromagnetice i
corpusculare cu proba de analizat
Interaciile radiaiei electromagnetice i corpusculare cu proba de analizat pot
fi neelastice i elastice (cvasielastice).
n cazul interaciilor elastice, spre deosebire de cele neelastice, nu are loc o
transformare de energie mecanic n alte forme de energie.
Interacii neelastice. Interaciile neelastice stau la baza celor mai multe
metode de analiz n care au loc interacii ale radiaiei electromagnetice i
corpusculare cu proba de analizat. Prin interacii neelastice are loc un schimb de
energie bine definit ntre radiaie i particulele din prob (atomi, ioni, molecule)
care poate fi descris pe baza legilor mecanicii cuantice. La efectuarea analizei se
obin semnale corespunztoare unor tranziii ntre anumite stri energetice, care,
ordonate n funcie de energie ( sau ), ne dau spectrul probei de analizat. n
domeniul de energii larg care reprezint spectrul electromagnetic, vor aprea
anumite discontinuiti caracteristice.
Spectrele pot fi de emisie sau de absorbie. Spectrele de emisie se obin n
urma trecerii particulelor probei n stri cu energie mai mare (stri excitate), de
exemplu, prin excitare termic, dup care revin la starea cu energie mai mic,
starea fundamental, prin emisie de radiaii. Spectrele de absorbie se obin la
iradierea probei cu radiaii a cror frecven (sau ) variaz continuu, din care vor
fi absorbite anumite poriuni caracteristice, n urma trecerii particulelor respective
n stri excitate. Pentru aceeai prob, spectrele de emisie i absorbie sunt unul
fa de altul ca imaginea pozitiv i cea negativ din fotografie.
n tabelul 1.1 se prezint alturi de domeniile spectrului electromagnetic,
tipuri de tranziii energetice ce pot avea loc i metodele de analiz corespunztoare.
Toate aceste metode poart numele general de metode spectrometrice de analiz.
Spectrele conin codificat informaia analitic furnizndu-ne att date
calitative ct i cantitative pe baza tranziiilor ntre diferitele stri energetice ale
atomilor, ionilor sau moleculelor.
Frecvenele, respectiv lungimile de und ale semnalelor nregistrate sunt
caracteristice pentru natura probei sau a elementelor sale structurale, n timp ce
intensitile corespunztoare ne dau informaii cantitative. Informaii structurale
calitative pot fi date i de ntregul spectru care, n raport cu natura probei studiate
poate fi frecvent considerat ca o amprent a acesteia.


10

Tabelul 1.1.
Domeniile spectrului electromagnetic, tipuri de tranziii ce pot avea loc i
metodele de analiz corespunztoare [22].
log

(m)
log (cm )
log (s )
-1
-1
logE
logE


Forma semnalului spectrometric
n mod obinuit, acesta are forma unei funcii de tip Gause sau Lorentz (fig.
1.2). Limea semnalului ar trebui s tind spre zero. n realitate, s-au observat
anumite liri ale benzilor, liri care, uneori, pot s ia valori considerabile.
Mai nti, fiecare linie spectral are o anumit lime care poate fi explicat
cu ajutorul principiului de incertitudine al lui Heisenberg, conform cruia
determinarea simultan a energiei unei tranziii cuantice i a timpului necesar
transmiterii energiei nu poate fi cunoscut mai exact de h/2. Se poate scrie:


t
> ot o
2
h
E (1.5)

unde E este variaia de energie ntre dou stri, iar este durata de via a
strii excitate. Aceasta determin o lire natural a liniei spectrale, dat de relaia:

tot
ov
2
1
>
N
(1.6)
11

Lirea va fi cu att mai mare cu ct va
fi mai mic. Lirea natural n cazul gazelor va
fi dependent de presiune. Liniile spectrale vor
fi cu att mai nguste cu ct presiunea este mai
mic, datorit reducerii numrului de ciocniri.
Ciocnirile reduc durata de via a strii excitate,
ceea ce determin o lire a liniilor spectrale.
Ali factori importani care determin
lirea liniilor spectrale sunt:
- viteza relativ de micare a
particulei, v, n raport cu radiaia emis,
ceea ce determin o lire prin efect
Doppler:

m
kT
c c
D
3 v
= v = ov
v
(1.7)
unde m este masa particulei.
- lirea datorit structurii fine nerezolvate
F

- lirea datorit aparatului ntrebuinat, n primul rnd a
monocromatorul i a sistemul de nregistrare,
A

Limea unei linii spectrale observate experimental va fi deci dat de relaia:

ovexp
.
= ovN ovD
+ ovF
+ ovA
+
(1.8)
Intensitatea unei linii spectrale depinde de densitile de ocupare ale
nivelurilor de energie considerate (de populaiile nivelurilor respective) i de
probabilitatea tranziiilor ntre ele. Probabilitatea tranziiilor este dat de regulile de
selecie. Raportul densitilor de ocupare ale nivelurilor energetice este dat de o
repartiie de tip Boltzmann:


|
.
|

\
|

=
kT
E E
exp
g
g
N
N
0 1
0
1
0
1
(1.9)

unde:
N
1
i N
0
sunt numrul de particule din strile energetice E
1
respectiv E
0
, la
temperatura T; g
1
i g
0
reprezint ponderile statistice ale nivelurilor respective; k
este constanta lui Boltzmann. Pentru strile energetice nedegenerate, g
1
/g
0
= 1.
Raportul densitilor de ocupare a unor niveluri energetice pentru o anumit
temperatur va fi influenat de diferena E = E
1
E
0
, ntre energiile
corespunztoare acestora. La temperatur obinuit starea fundamental (starea cu
energia cea mai mic) este n general mult mai populat dect celelalte stri
energetice.

Fig. 1.2. Profilul unei linii
spectrale
12

Interacii elastice (cvasielastice)
n urma interaciilor elastice ale radiaiei electromagnetice i corpusculare cu
particulele probei de analizat, nu au loc modificri ale energiei cinetice a radiaiei
i deci a frecvenei sale, ci numai o schimbare a direciei de propagare, care este
funcie de natura probei. Energia intern i structura probei nu se modific n urma
acestor interacii. Interaciile elastice pot fi descrise pe baza proprietilor de und
ale radiaiei electromagnetice. Din interaciile elastice fac parte reflexia, refracia,
difuzia, difracia etc.
n tabelul 1.2 sunt date unele interacii elastice ce pot avea loc ntre radiaia
electromagnetic i corpuscular i particulele probei de analizat i metodele de
analiz corespunztoare:

Tabelul 1.2. Interacii elastice i metodele de analiz corespunztoare.
Radiaia electromagnetic sau corpuscular Metode de analiz


Radiaii din domeniul vizibil
Microscopie optic
Refractometrie
Nefelometrie
Turbidimetrie
Polarimetrie
Radiaii X Difracia razelor X
Electroni

Difracia
electronilor
*Microscopie
electronic
Ioni

Reflexia ionilor
*Microscopie
ionic
Neutroni Difracia
neutronilor
*Microscopia electronic i ionic se bazeaz pe interacii cvasielastice ale particulelor
probei cu fascicule de electroni sau ioni.

Metodele de analiz bazate pe interacii elastice ale radiaiei cu proba de
analizat nu fac parte din cadrul metodelor spectrometrice de analiz, neavnd loc
practic un schimb de energie ntre acestea.







13

1.1.3. Emisia i absorbia atomic a radiaiei
1.1.3.1. Emisia i absorbia atomic a radiaiei n domeniul ultraviolet i
vizibil

Emisia i absorbia radiaiei de ctre atomi n domeniul ultraviolet (abreviat
UV) i vizibil se datoreaz unor tranziii ntre stri energetice ale electronilor
periferici. Energia radiaiilor emise sau absorbite are valori discrete. Frecvena
acestor radiaii este funcie de diferena, E, ntre strile energetice ntre care are
loc tranziia:
v

v A
~
hc
c
h h E = = = (1.10)
unde:
c este viteza luminii (n vid ~ 3 10
10
cm/s) i v
~
, este numrul de und
exprimat n cm
-1
.
Fiecare tranziie corespunde unei anumite linii spectrale att pentru absorbie
ct i pentru emisie.
Micarea unui electron n jurul nucleului i n jurul axei sale este
caracterizat prin cele patru numere cuantice: n, 1, m i s; n, numr cuantic
principal, 1, numr cuantic secundar, m, numr cuantic magnetic i s, numr
cuantic de spin. Se mai folosete i numrul cuantic intern, j = 1 + s, care nu are
un caracter de sine stttor.
La atomii cu mai muli electroni n nveliul exterior are loc o nsumare
vectorial a momentelor cinetice orbitale i de spin. Aceasta datorit interaciei
spin-orbit i interaciei dintre electroni. Starea energetic a atomului va fi
caracterizat prin numerele cuantice totale L, S i J. L este numrul cuantic
secundar total rezultnd din nsumarea numerelor cuantice care caracterizeaz
momentele cinetice orbitale ale electronilor i corespunde momentului cinetic
orbital total al atomului. S, numrul cuantic de spin total, se obine prin nsumarea
algebric a spinilor tuturor electronilor i corespunde momentului cinetic de spin
total al atomului. J este dat de L + S i reprezint numrul cuantic intern total,
corespunznd momentului cinetic total al atomului. Diferitele valori ale lui J vor
determina scindarea nivelurilor energetice ale atomului; aceste niveluri, ce au
energii diferite, se numesc termeni spectrali.
Regulile de selecie ne dau posibilitile tranziiilor electronice, ele nu au
caracter absolut, ci ne indic tranziiile care au loc cel mai probabil i deci vor da
natere liniilor celor mai intense. Regulile de selecie sunt:

L = + 1 i J = 0, + 1 (tranziia 0 0 interzis)

n diagramele Grotrian sunt prezentate schematic nivelurile energetice ale
unui atom i tranziiile electronice ce pot avea loc.
14

n fig. 1.3 este prezentat mult simplificat diagrama Grotrian pentru
magneziu. Pe vertical este reprezentat energia. Nivelurile energetice sunt figurate
sub forma unor linii orizontale. n partea superioar sunt trecute simbolurile prin
care sunt notate strile energetice ale termenilor spectrali. Literele S, P i D
corespund lui L = 0, 1 i 2. n partea din stnga sus a literelor este trecut valoarea
2S + 1 numit multiplicitatea liniei spectrale, iar n dreapta jos valoarea lui J.
Emisia unei linii spectrale se datoreaz
unei tranziii de la un nivel de energie
mai mare la unul cu energie mai mic.
Absorbia reprezint fenomenul invers.
Liniile spectrale pentru care unul
din nivelurile energetice este starea
fundamental se numesc linii de
rezonan. Din punct de vedere analitic,
de mare importan sunt liniile de
rezonan ce apar n urma tranziiilor
ntre starea fundamental i primul nivel
excitat, ele fiind, n general, cele mai
intense. Pentru excitarea liniilor de
rezonan este nevoie de o energie destul
de mare, astfel c numai puini atomi ce
au electroni de valen labili pot emite
sau absorbi n domeniul vizibil, cum este
cazul metalelor alcaline.
Pentru majoritatea metalelor este
ns nevoie de o energie mai mare pentru
a excita liniile de rezonan, linii
caracteristice unor energii ce corespund
domeniului UV al spectrului. Pentru
metale este nevoie de energii i mai mari, corespunznd domeniului UV de vid, <
200 nm, domeniu spectral mai greu accesibil. Din acest motiv, spectrometria de
emisie sau absorbie atomic se aplic n special pentru analiza elementelor cu
caracter metalic.
Numrul de linii spectrale pentru un element depinde de numrul tranziiilor
electronice, care evident este dat de numrul i aezarea electronilor periferici (de
valen). Atomii cu un numr redus de electroni periferici, de exemplu metalele
alcaline, prezint spectre cu un numr redus de linii, elementele cu structur
complex a nveliului de electroni exterior, de exemplu metalele tranziionale, vor
prezenta spectre bogate n linii.
Un atom nu poate absorbi dect radiaiile pe care, n anumite condiii, le
poate emite. Emisia atomic se datoreaz atomilor aflai n stare excitat. Acetia,
prin revenire la stri cu energie mai mic, emit radiaii caracteristice. Aceleai
radiaii pot fi absorbite de ctre aceleai specii atomice aflate n stri cu energie
Fig. 1.3. Diagrama Grotrian pentru
magneziu. Lungimile de und ale
radiaiilor emise sau absorbite sunt
date n nm.
15

mai mic, acestea trecnd astfel n stri excitate.
Emisia atomic n vizibil i UV st la baza spectrometriei de emisie n
flacr i plasm, precum i la baza spectrometriei de emisie n arc i scnteie
electric, iar absorbia radiaiei st la baza spectrometriei de absorbie atomic.
1.1.3.2. Emisia i absorbia razelor X
Razele X se obin n urma unor interacii neelastice ntre atomi i fascicule de
particule (de obicei electroni) sau radiaii (eventual tot raze X) care au o energie
mai mare dect cea necesar expulzrii unor electroni din straturile interne ale
atomilor. Locurile rmase libere sunt apoi ocupate de electroni mai ndeprtai de
nucleu. Aceste tranziii sunt nsoite de emisie de raze X, ce au o energie, E = h,
reprezentnd diferena ntre cele dou niveluri energetice ale electronilor. La
emisia de raze X variaz n primul rnd numrul cuantic principal. Lungimile de
und ale acestor radiaii sunt cuprinse ntre 0,01 i 10 nm.
Spectrele de raze X ale elementelor au mai puine linii, sunt mai simple i
mai uor de interpretat dect spectrele corespunztoare din domeniul vizibil i UV.
Aceasta se explic prin numrul mai redus de electroni care populeaz nivelurile
energetice ntre care au loc tranziii cu emisie de raze X, straturile interioare de
electroni ale atomilor avnd o structur mai simpl dect cele exterioare.
Dup cum se vede din fig. 1.4 din punct de vedere energetic, exist un
singur nivel K, electronii L sunt grupai n trei niveluri (subniveluri) iar electronii
din stratul M (complet) n 5 subniveluri.


Nivelurile L
Nivelurile M
Nivelurile N

Fig. 1.4. Diagrama nivelurilor energetice ale cadmiului pentru tranziii de raze X.
(a) emisie de raze X; (b) absorbie de raze X.

Frecvena radiaiilor X emise de un element poate fi calculat pe baza relaiei
16

dat de Moseley:
( )
|
|
.
|

\
|
o = v
2
2
2
1
2
1 1
n n
Z R (1.11)

unde R este constanta lui Rydberg, Z numrul de ordine al elementului respectiv,
este o constant de ecranare (datorit nveliurilor exterioare de electroni), iar n
2

i n
1
sunt numerele cuantice principale ale nivelurilor ntre care are loc tranziia.
Relaia (1.11) ne indic faptul c radiaiile X emise de elementele grele au energii
mai mari, frecvena radiaiilor X corespunznd unui anumit tip de tranziie
crescnd cu ptratul numrului de ordine.
Emisia de raze X n care pentru excitare se folosesc fascicule de electroni are
mai puine aplicaii analitice; mult mai utilizat este fluorescena de raze X n care
pentru excitare se folosesc radiaii X cu energie mare, pe baza spectrelor obinute
putndu-se face att o analiz calitativ, ct i una cantitativ.
La absorbia radiaiilor X de ctre atomi nu vor aprea linii de absorbie, cum
se ntmpl la absorbia radiaiilor din domeniul vizibil i UV. n spectru apar
numai anumite discontinuiti, la anumite lungimi de und, caracteristice atomului
respectiv.
Aceasta se datoreaz faptului c la o tranziie de raze X electronul este
complet ndeprtat din atom, locul rmas liber fiind ocupat de electroni cu numere
cuantice mai mari (deci mai ndeprtai de nucleu). Pe msur ce energia radiaiilor
incidente crete, sunt ionizai electroni din straturi din ce n ce mai apropiate de
nucleu. Pentru fiecare nivel i subnivel ocupat cu electroni va exista o energie
limit a radiaiei incidente, sub care nu se va putea expulza electroni din acesta
(fig.1.4b). Peste aceast limit radiaia va fi absorbit n mod accentuat, aprnd o
discontinuitate n spectrul de absorbie (fig. 1.5). Poziia discontinuitii n spectru
este caracteristic unui element i corespunde energiei minime a radiaiei ce
expulzeaz electronul din nivelul sau subnivelul respectiv. Vor putea fi absorbite i
radiaii cu energie mai mare, surplusul de energie fiind cedat electronului expulzat
sub form de energie cinetic.
Absorbia unui fascicul monocromatic de radiaii X este dat de relaia de
mai jos (care este discutat pe larg n cap. 1.7.1):


l
e I I

=
0
(1.12)
unde:
I este intensitatea radiaiei transmise printr-o prob omogen de grosime l,
exprimat n cm, I
0
este intensitatea radiaiei incidente, iar este coeficientul liniar
de absorbie exprimat n cm
-1
. Coeficientul liniar de absorbie depinde de lungimea
de und a razelor X i de atomii ce absorb radiaia.
Coeficientul de absorbie de mas,
m
, se obine prin mprirea lui la ,
care este densitatea materialului respectiv:

17


(1.13)


Valoarea lui
m
este dat de relaia:


A
CNZ
m
3 4

= (1.14)

unde C este o constant caracteristic pentru un domeniu cuprins ntre dou
discontinuiti dintr-un spectru de absorbie, N este numrul lui Avogadro, Z este
numrul de ordine, A este masa atomic a elementului absorbant iar este
lungimea de und a radiaiei absorbite.
Este de remarcat faptul c
m
nu depinde de starea fizic sau chimic a
speciei absorbante. El este o mrime aditiv pentru un compus sau amestec, fiind
dat de relaia:
... w w
m m mt
+ + =
2 2 1 1
(1.15)

unde
mt
reprezint coeficientul de absorbie de mas total,
m1
,
m2
, ... coeficieni
de absorbie pentru componenii individuali, iar w
1
, w
2
etc. sunt fraciile
corespunztoare de greutate. Reprezentnd log
m
funcie de lg nu vom obine o
dreapt, ci o serie de segmente de dreapt cu aceeai pant, legate prin
discontinuitile caracteristice, dup cum se vede n fig. 1.5.


Fig. 1.5. Absorbia radiaiilor X de ctre o specie atomic.

Aceste discontinuiti sunt corespunztoare nivelurilor energetice ale
electronilor din straturile K, L, M, .... Pe baza poziiei acestora n spectrul de
absorbie se poate face o analiz calitativ, iar pe baza nlimii lor se poate face o
analiz cantitativ. Metodele de analiz bazate pe absorbia razelor X nu au
aplicaii prea largi. Pot fi utilizate ns cu bune rezultate pentru determinarea unor
m
=

log
m
log

18

elemente cu numr atomic mare ntr-o matrice ce conine elemente uoare. Astfel,
poate fi determinat plumbul prezent sub form de tetraetil plumb sau bromul
prezent sub form de derivai bromurai n benzine.

1.1.4. Absorbia, emisia i difuzia molecular a radiaiei
La interacia moleculelor cu un fascicul de radiaii pot s aib loc mai multe
fenomene dintre care discutm urmtoarele:
Absorbia radiaiei
n urma absorbiei de energie se poate modifica direcia sau mrimea
momentului de dipol electric al moleculei care interacioneaz. Vor avea loc
tranziii ntre stri energetice de rotaie, vibraie sau electronice, al cror studiu
constituie baza spectrometriei moleculare.
Emisia radiaiei
Din strile excitate aprute n urma interaciei moleculelor cu radiaii
electromagnetice, o parte dintre acestea pot reveni la stri cu energie mai mic prin
emisie de energie. Acesta constituie fenomenul de fluorescen i fosforescen.
Difuzia radiaiei i difuzia combinat a radiaiei (efectul Raman)
Prin spectrometrie molecular optic se nelege de obicei spectrometria
electronic i de vibraie i este studiat prin metode ale spectrometriei de emisie
i de absorbie n domeniul UV, vizibil i infrarou (abreviat IR) al spectrului.
n urma absorbiei radiaiei de ctre molecule pot avea loc tranziii nsoite de
o modificare a momentului magnetic al electronilor sau nucleelor, de studiul
acestor fenomene ocupndu-se spectrometria de rezonan magnetic.
Pentru energii mari ale radiaiei absorbite poate s aib loc o ionizare sau o
fragmentare a moleculelor, separarea i identificarea moleculelor ionizate sau a
fragmentelor acestora constituind baza spectrometriei de mas.
n continuare vom discuta absorbia, emisia i difuzia molecular a radiaiilor
n domeniul UV, vizibil i IR al spectrului, principiile spectrometriei de rezonan
magnetic i ale spectrometriei de mas urmnd s fie discutate n capitole
separate.
1.1.4.1. Absorbia radiaiei de ctre molecule
Absorbia radiaiei electromagnetice de ctre molecule este mult mai
complex dect absorbia de ctre atomii individuali. Starea energetic a unei
molecule include componente electronice, de vibraie i rotaie. Toate aceste
componente energetice sunt cuantificate.
Diferenele de energie ntre nivelurile electronice moleculare sunt mult mai
mari dect ntre strile de vibraie i diferenele de energie ntre strile de vibraie
sunt semnificativ mai mari dect ntre strile de rotaie. n mod obinuit, la
19

absorbia radiaiei electromagnetice de ctre molecule, aceasta interacioneaz prin
componenta sa electric. Pentru ca radiaia s poat fi absorbit, ea trebuie s aib
energia egal cu diferena ntre dou niveluri energetice ale moleculei i n plus,
tranziia molecular trebuie s fie nsoit de o modificare a poziiei centrului ei
electric, a momentului de dipol. Numai astfel, molecula poate interaciona cu
componenta electric a radiaiei electromagnetice.
Energiile necesare pentru a provoca tranziii ntre stri energetice ale
electronilor din orbitalii moleculari sunt cele mai mari i corespund domeniului
vizibil, 400-800 nm i UV 100-400 nm. Pentru a putea provoca tranziii ntre stri
energetice de vibraie sunt necesare energii mai mici, deci vor fi absorbite radiaii
cu lungimi de und mai mari, corespunznd domeniului IR. Tranziiile ntre stri
energetice de rotaie vor fi excitate de radiaii cu energie mai mic,
corespunztoare domeniului IR ndeprtat i microundelor. Spectrele pure de
rotaie au aplicaii analitice reduse i din acest motiv nu vor fi discutate n
continuare.
1.1.4.1.a. Tranziii electronice moleculare
Atunci cnd doi atomi formeaz o legtur covalent, electronii ce particip
la legatura dintre cei doi atomi ocup un nou orbital, un orbital molecular. Are loc
o combinare a doi orbitali atomici pentru a forma un orbital molecular de
legtur de energie mic i un orbital molecular de antilegtur cu energie
mult mai mare. Astfel, conform teoriei orbitalilor moleculari, fiecare orbital de
legtur trebuie s aib un orbital corespunztor de antilegtur * i fiecare orbital
de legtur trebuie s aib un orbital corespunztor de antilegtur *.
Electronii de valen care nu particip la legturi chimice n molecul sunt
numii electroni de nelegtur n. Electronii n se gsesc de exemplu n orbitalii
atomici ai azotului, oxigenului, sulfului etc.
Tranziiile electronice pentru molecule au loc la absorbia radiaiei din
domeniul vizibil sau ultraviolet de ctre electroni aflai n orbitali n, sau .
Acetia sunt trecui n orbitali de antilegtur care au energii mai mari. Pot s aib
loc urmtoarele tranziii: *, n *, n * i * (fig. 1.6). Valorile
E pentru aceste tranziii cresc n
ordinea: n * < * < n * <<
*. Energiile necesare pentru
tranziii * sunt cele mai mari.
Compui ca de exemplu hidrocarburile
saturate care nu au electroni n i numai
legturi nu absorb radiaia dect n UV
ndeprtat (de vid). Astfel, propanul
absoarbe radiaie la 135 nm.
Dintre compuii care prezint
tranziii de tipul n * putem
meniona clorura de metil (
max
= 173
nm) i trimetilamina (
max
= 227 nm).
Fig. 1.6. Nivelurile de energie ale
orbitalilor moleculari
20

Tranziiile cu energia cea mai mic sunt n *. De exemplu cetonele i
aldehidele saturate prezint absorbie datorit unei tranziii n * la aproximativ
285 nm.
Este de reinut ns faptul c tranziiile electronice sunt nsoite n cele mai
multe cazuri de tranziii ntre stri energetice de vibraie i rotaie (fig. 1.7) ceea ce
confer o structur fin benzilor de absorbie electronic. Aceast structur nu se
poate observa dect pentru anumite tipuri de molecule. Frecvent, benzile de
absorbie datorit vibraiei i rotaiei (ce nsoesc o tranziie electronic) se
contopesc, dnd natere unei benzi de absorbie late. Tranziia electronic
determin poziia acestei benzi n spectru, iar tranziiile de vibraie i rotaie
limea ei.


Fig. 1.7. Tranziii ntre stri energetice de rotaie, vibraie i electronice n
molecule.

Frecvent, n urma unei tranziii electronice se modific n mare msur
geometria moleculei fa de starea iniial, aceasta datorit slbirii legturii la care
particip electronul ce a trecut pe nivelul excitat.
Tranziiile electronice au loc ntr-un timp foarte scurt (10
-15
s) corespunznd
perioadei de oscilaie a radiaiei electromagnetice, perioad n care fotonul i
molecula sunt n contact. Acest timp este mult mai scurt dect perioada de vibraie
a atomilor (10
-10
10
-13
s). Se poate considera deci, c n timpul tranziiei
electronice nucleele nu-i schimb practic poziia, iar moleculele excitate
21

electronic pot fi considerate imediat dup tranziie ntr-o geometrie practic identic
cu a strii lor fundamentale. Din acest motiv, tranziiile electronice pot fi
reprezentate sub forma unor linii verticale ntr-o diagram energetic (fig. 1.8).
Principiul Frank-Condon ne indic probabilitile tranziiilor de vibraie care
nsoesc tranziiile electronice. Tranziiile sunt cele mai probabile n momentele n
care molecula adopt n cursul vibraiilor o geometrie comun strii fundamentale
i a celei excitate.
S considerm o molecul n stare fundamental. Deoarece aceasta vibreaz
chiar cnd se afl pe nivelul de vibraie cel mai cobort, trebuie considerat un
domeniu al distanei internucleare. Se poate considera c cea mai probabil
distan internuclear va fi ns cea corespunztoare poziiei de echilibru,
amplitudinea vibraiilor fiind mic. Pentru stri vibraionale cu energie mai mare,
cea mai probabil poziie a nucleelor este la sfritul vibraiilor, cnd atomii se
opresc i i schimb direcia.





Fig. 1.8. Tranziii electronice nsoite de tranziii de vibraie conform principiului
Frank-Condon i spectrele de absorbie corespunztoare: (a) cu slbirea
legturii; (b) fr slbirea legturii.

Dup cum se vede n fig. 1.8b, atunci cnd nu se modific distana ntre
nuclee n urma excitrii electronice (nu se modific tria legturii) sunt mai
22

probabile tranziiile pe nivelul de vibraie fundamental. n cazul slbirii legturii n
urma excitrii electronice, fig. 1.8a, vor fi mai probabile tranziiile pe niveluri de
vibraie mai nalte.

1.1.4.1.b. Tranziii de vibraie molecular
Atomii n molecule nu sunt statici. n mod normal sunt o multitudine de
vibraii asociate acestora. Frecvenele de vibraie depind de masele atomilor i tria
legturilor. Toate sunt vibraii normale la care particip toi atomii dintr-o
molecula. La unele vibraii energia este concentrat n anumite legturi ceea ce le
face caracteristice pentru anumite grupri de atomi.
Exist dou tipuri principale de vibraii:
- de ntindere, numite i vibraii de valen ntruct au loc de-a lungul
legturii. Se noteaz cu .
- de deformare, prin care se deformeaz unghiul valenelor.Se noteaz cu
.
Vibraiile de ntindere sunt fie vibraii izolate (de ex. n gruparea carbonil),
fie sunt vibraii cuplate (de ex. n gruparea metilen). Vibraiile cuplate sunt
simetrice sau antisimetrice, dup cum se vede n fig. 1.9.


Fig. 1.9. Vibraii de ntindere (a) i (b) i de deformare (c), (d), (e) i (f).

Vibraiile de ntindere necesit, n general, energii mai mari dect vibraiile
de deformare i n consecin, absorbia radiaiilor electromagnetice are loc pentru
frecvene mai mari.
Pentru o molecul poliatomic, fiecare tip de vibraie are o frecven definit.
Energiile corespunztoare vibraiilor moleculare sunt cuantificate. Atunci cnd o
radiaie electromagnetic cu aceeai frecven cu cea corespunztoare vibraiei
unor atomi ntr-o legtur vine n contact cu aceasta, poate s aib loc absorbia
radiaiei. Absorbia are loc numai dac atomii care vibreaz n cadrul legturii
determin apariia unui moment de dipol oscilant care poate interaciona cu cmpul
electric al radiaiei. Vor absorbi radiaii n domeniul IR al spectrului numai acele
vibraii pentru care are loc o variaie a momentului de dipol.
n procesul de absorbie are loc o mrire a amplitudinii uneia dintre vibraiile
moleculare. Cnd molecula revine la starea fundamental energia absorbit este
disipat sub form de cldur.
23

Vibraiile pe care le execut o molecul n ansamblul ei cu pstrarea imobil
a centrului su de mas se numesc vibraii normale sau fundamentale. O molecul
neliniar, avnd n atomi, are un numr de 3n-6 vibraii normale. O molecul liniar
cu n atomi are 3n-5 vibraii normale. Numrul real de benzi de absorbie din
spectru poate fi mai mare sau mai mic (de obicei este mai mic) dect cel rezultat
din relaia de mai sus. Creterea numrului de benzi fa de cel teoretic se
datoreaz armonicelor, benzilor de combinare sau rezonanei Fermi. Armonicele
sunt benzi de intensitate mic ce apar la un numr de und dublu, triplu etc. fa de
banda fundamental. Benzile de combinare sunt benzi de intensitate mic care apar
la numere de und egale cu diferena sau cu suma a dou vibraii fundamentale.
Rezonana Fermi const n scindarea unei benzi fundamentale atunci cnd n
imediata ei vecintate se gsete o armonic sau o band de combinare.
Frecvena corespunztoare unui sistem format din doi atomi care vibreaz n
cadrul legturii poate fi calculat pe baza legii micrii armonice simple i este
dat de relaia:

(1.16)


unde: f este constanta de for i masa redus a sistemului = m
A
m
B
/(m
A
+ m
B
)
unde m
A
i m
B
reprezint masele nucleelor celor doi atomi. Pe baza legilor
mecanicii cuantice se obin pentru un oscilator armonic urmtoarele stri
energetice discrete:


( )
|
.
|

\
|
+ =
|
.
|

\
|
+ =
|
.
|

\
|
+ =
2
1
2
1
~
;
2
1
2 2
1
v v v v
t
v
t
v
f
c
f h
h E (1.17)

v = 0, 1, 2, ... numere cuantice de vibraie. Regula de selecie va fi: v = + 1.












Fig. 1.10. Curbe de energie potenial pentru un oscilator armonic, (a), i
nearmonic, (b). D energia de disociere; r
0
distana de echilibru ntre atomi.
v =
1
2t
f


a) b)
V
24


n cazul moleculelor nu este ndeplinit o condiie esenial a unui oscilator
armonic: valoarea lui f nu este constant n raport cu elongaia iar energia de
vibraie a unei legturi este dat de relaia:

( )
2
2 2
2
1
4 2
1
|
.
|

\
|
+
v

|
.
|

\
|
+ v = v v v
D
h
h E (1.18)

unde D este energia de disociere.
n fig. 1.10 se prezint curbele de energie potenial pentru un oscilator
armonic i un oscilator nearmonic. Datorit nearmonicitii oscilatorului, regula de
selecie v = + 1 nu se mai respect strict, pe lng vibraia de baz fiind posibile
vibraii pentru care v = + 2, + 3, ...
Absorbia molecular n domeniul UV i vizibil este utilizat n special
pentru determinri cantitative pe baza legii Lambert Beer, informaiile calitative i
structurale care pot fi obinute fiind destul de reduse.
Absorbia molecular n domeniul IR este utilizat n special pentru
determinri calitative, de structur a moleculelor, dar pot fi fcute i determinri
cantitative.

1.1.4.2. Emisia radiaiei de ctre molecule
n mod asemntor cu atomii, moleculele pot emite radiaii care au aceleai
lungimi de unda cu cele ale radiaiilor pe care moleculele respective le pot absorbi.
La temperatura camerei, moleculele se gsesc, de obicei, n starea fundamental.
Prin nclzirea unei probe la temperaturi n jur de 100
0
C are loc trecerea
moleculelor n stri vibraionale excitate ale strii electronice fundamentale, de pe
care pot reveni n stri cu energie mai mic prin emisie de energie. Se obine astfel
un spectru de emisie n IR. Radiaiile emise sunt foarte slabe iar ridicarea
temperaturii poate duce uor la descompunerea moleculelor. Din acest motiv
aceast metod de obinere a spectrelor de emisie ale moleculelor este mai puin
utilizat.
Drept surse de excitare pentru obinerea spectrelor de emisie ale moleculelor
se pot folosi cu bune rezultate fascicule de radiaii cu energie suficient de mare
(fenomenul de fluorescen sau fosforescent molecular).

Fluorescena i fosforescena
Fluorescena i fosforescena molecular constau n emisia de radiaii de
ctre o molecul, n urma unui fenomen de absorbie. Absorbia este o condiie
necesar dar nu suficient pentru a avea loc acest fenomen. Excitarea se face cu
radiaii de o energie mai mare, folosind, de exemplu, radiaii din domeniul UV al
spectrului iar emisia are loc de obicei n domeniul vizibil. Pentru a explica
fluorescena i fosforescena, s considerm o parte din strile energetice ale unei
25

molecule, prezentate schematic n fig. 1.11(I) (diagrama Jablonski):

Fig. 1.11. (I) Diagrama nivelurilor de energie electronic i de vibraie ale unei
molecule cu o stare fundamental de singlet S
o
i stri excitate de singlet, S
1
i
triplet T
1
. Tranziiile neradiative sunt figurate prin linii ondulate: (a) absorbia
radiaiei, (b, b) relaxare vibraional i conversie intern, (c) fluorescen, (d)
fosforescen. (II) (a) spectru de absorbie; (c) spectru de fluorescen; (d)
spectru de fosforescen (la temperatur joas).

La temperatura obinuit, cea mai mare parte dintre molecule se gsete pe
cel mai cobort nivel de vibraie al strii electronice fundamentale de singlet, S
o
.
De asemenea, molecula mai prezint strile electronice excitate de singlet S
1
i
triplet, T
1
.
n starea de singlet, toi electronii dintr-o molecul sunt cuplai, iar n starea
de triplet molecula prezint doi electroni al cror spin nu este cuplat.
Starea fundamental a unei molecule este aproape totdeauna o stare de
singlet. Deoarece doi electroni necuplai au o energie ceva mai mic dect doi
electroni cuplai, starea de triplet are o energie ceva mai mic dect starea
corespunztoare de singlet, dup cum se vede din fig. 1.11(I).
S considerm un proces de absorbie a radiaiei (n fig. 1.11 notat cu (a)).
Vor avea loc tranziii de pe cel mai cobort nivel de vibraie al strii electronice
fundamentale S
o
, pe diferite niveluri de vibraie ale strii electronice excitate (S
1
).
n continuare, molecula poate pierde energia absorbit n mai multe moduri.
Alegerea unei anumite ci depinde de cinetica diferitelor procese competitive. Va
fi aleas calea pentru care timpul de via al strii excitate va fi cel mai scurt. De
26

exemplu, molecula ce se afl pe un nivel de vibraie excitat al strii electronice
excitate poate reveni la starea fundamental emind o cuant de energie egal cu
diferena ntre cele dou stri energetice. n soluie, acest proces este foarte puin
probabil n comparaie cu procesul competitiv de relaxare vibraional (n fig.
1.11(I) notat cu (b)) care este un proces neradiativ. ntr-un timp de ordinul 10
-12
s,
molecula ajunge pe nivelul de vibraie cel mai cobort al strii electronice excitate,
fie prin cedarea energiei vibraionale altor molecule, prin ciocniri, fie prin excitarea
altor moduri posibile de vibraie sau rotaie ale moleculei excitate. n faza gazoas,
relaxarea vibraional este mai puin eficient, frecvent avnd loc emisia de radiaii
cu energie egal cu cea absorbit. Acest proces se numete fluorescen de
rezonan i este important n cazul fluorescenei atomice.
Datorit vitezei mari a procesului de relaxare vibraional, cele mai multe
molecule excitate n soluie vor ajunge la nivelul de vibraie cel mai cobort al
strii excitate de singlet. Din aceast stare, molecula poate reveni la starea
fundamental n mai multe moduri, printre care este i emisia de energie radiant.
Pierderea radiativ de energie prin revenirea pe diferite niveluri de vibraie ale
strii electronice fundamentale se numete fluorescen. Acest proces decurge ntr-
un timp foarte scurt, 10
-7
pn la 10
-9
s. ntruct revenirea la starea fundamental se
face de pe cel mai cobort nivel de vibraie al strii electronice excitate, forma
benzii de fluorescen nu va depinde practic de lungimea de und a radiaiei
excitatoare, dei intensitatea radiaiei de fluorescen este determinat de
intensitatea radiaiei excitatoare.
O serie de alte forme de pierdere de energie pot fi competitive cu
fluorescena i din acest motiv este necesar s folosim un factor de corecie numit
randament cuantic de fluorescen.
Deoarece fluorescena aproape ntotdeauna apare dup o anumit pierdere de
energie, lungimile de und ale radiaiilor de fluorescen vor fi mai mari dect ale
radiaiilor absorbite, dup cum se vede din fig. 1.11(II)(c). Pentru un mare numr
de molecule, banda de fluorescen este imaginea n oglind a benzii de absorbie,
curbele (II)(c) i (II)(a) din fig. 1.11. Intensitatea radiaiilor absorbite sau emise
depinde de probabilitatea tranziiilor ntre nivelurile energetice ale moleculei. Din
fig. 1.8b se poate constata c atunci cnd la excitarea electronic nu are loc o
modificare a triei legturii, probabilitatea tranziiilor de absorbie din starea
fundamental scade n ordinea: 0 0 > 0 1 > 0 2 > 0 3. Probabilitatea
pentru tranziiile de fluorescen care au loc de pe cel mai cobort nivel de vibraie
al strii electronice excitate de singlet 0, pe diferite niveluri de vibraie a strii
electronice fundamentale, va descrete n ordinea: 0 0 > 0 1 > 0 2 > 0
3. Aceasta va determina un aspect al benzilor de absorbie i emisie ca cel
prezentat n fig. 1.11(II)(c) i (II)(a), pentru care maximele de absorbie i de
emisie sunt la aceeai lungime de und.
Dac ns n urma excitrii electronice se modific tria legturii, deci i
distana ntre nuclee, atunci cea mai probabil tranziie de absorbie va fi cea din
starea fundamental (v=0) pe un anumit nivel de vibraie (de exemplu v = 3) al
27

strii electronice excitate, dup cum se vede din fig.1.8a, toate celelalte tranziii
avnd o probabilitate mai mic.
Tranziia de fluorescen cea mai probabil, deci cu intensitatea cea mai
mare, va avea loc de pe nivelul v = 0 a strii electronice excitate, pe un anumit
nivel de vibraie cu numrul cuantic v = v al strii electronice fundamentale, dat
de intersecia verticalei ce unete mijlocul segmentului ce ne indic valoarea
energiei pentru v = 0 i curba de energie potenial pentru starea electronic
fundamental.
Toate celelalte tranziii vor avea o probabilitate mai mic. Notnd cu a
respectiv cu a nivelurile de vibraie ale strii electronice excitate i fundamentale,
putem spune c tranziiile de absorbie 0 a vor avea aceeai probabilitate cu
tranziiile de emisie 0 a, ceea ce va face ca spectrul de emisie s fie imaginea n
oglind a spectrului de fluorescen. Maximul benzii de fluorescen va fi ns
deplasat la lungimi de und mai mari fa de cel de absorbie.
Din starea excitat de singlet, molecula poate reveni la starea fundamental i
prin conversia intern a energiei n energie termic, proces neradiativ, sau prin
conversia intersistem, prin schimbarea spinului unui electron din starea excitat de
singlet, ducnd la o alt stare excitat, de triplet, T
1
. n starea de triplet, relaxarea
vibraional va fi, de asemenea, foarte rapid. Deoarece conversia intersistem este
un proces de spin interzis, deci relativ puin probabil, va fi competitiv cu
fluorescena i conversia intern, numai pentru anumite molecule. Orice tranziie
din starea de triplet T
1
la starea fundamental este de asemenea, un proces de spin
interzis. Din acest motiv, durata de via a strii de triplet este relativ lung, 10
-6

10 s.
Dac pierderea de energie se face n continuare radiativ, molecula revenind
la starea fundamental pe diferite niveluri de vibraie ale strii electronice
corespunztoare acestei stri, are loc fenomenul de fosforescen. Fosforescena se
studiaz la temperaturi foarte joase de ex. la temperatura azotului lichid, la aceste
temperaturi crescnd probabilitatea tranziiilor radiative. Revenirea la starea
fundamental se poate face i neradiativ, prin conversie intern. Din cauza
caracterului de spin interzis, fosforescena are loc ntr-un timp mai lung, egal cu
timpul de via al strii de triplet.
Lungimile de und ale radiaiilor emise n urma fenomenului de
fosforescen vor fi mai mari dect cele ale radiaiilor de fluorescen (fig.
1.11(II)(d)) deoarece starea de triplet are o energie mai mic dect starea de
singlet.
Pentru anumite tipuri de molecule se poate reveni din starea de triplet T1 pe
nivelul S1 (prin ocuri termice) emindu-se apoi cu ntrziere spectrul de
fluorescen. Radiaiile de fosforescen emise n acest mod vor avea aceeai
lungime de und ca cele de fluorescen. i n cazul fosforescenei putem vorbi de
un randament cuantic de fosforescen care, n general, este cu att mai mare cu ct
temperatura este mai mic. Din acest motiv, probele de analizat se rcesc frecvent
la temperatura azotului lichid.
28


1.1.4.3. Difuzia radiaiei, efectul Raman
Spre deosebire de absorbie i emisie, difuzia radiaiei nu implic tranziii
ntre stri cu energie cuantificat ale unei particule.
Dac un fascicul de radiaii electromagnetice vine n contact cu o particul
(atom, ion sau molecul) care este mic n comparaie cu lungimea de und a
radiaiei, aceasta va fi supus unei perturbaii puternice, determinat de cmpurile
oscilante, magnetic i electric ale radiaiei. In timp ce radiaia trece, particula se va
gsi ntr-un cmp puternic a crui polaritate alterneaz cu frecvena oscilaiei. Dac
particula este polarizabil, sarcina indus va oscila de asemenea. Dipolul oscilant
indus n particul va produce un cmp propriu care oscileaz cu aceeai frecven
cu cea a radiaiei incidente. Acest cmp acioneaz el nsui ca o surs de radiaii,
astfel c o radiaie de aceeai lungime de und ca a celei incidente este emis ntr-o
direcie aleatoare (radiaiile difuzate fiind emise n toate direciile posibile). Acest
tip de mprtiere se numete difuzie (mprtiere) Rayleigh i este caracteristic
pentru particule de dimensiuni mici, ca de exemplu atomi i molecule.
Pentru ca o radiaie s fie difuzat prin efect Rayleigh este necesar ca
polarizabilitatea particulei s rmn constant. Dac polarizabilitatea particulei
variaz n timpul difuziei radiaiei frecvena radiaiei difuzate se va modifica.
S presupunem c o molecul sufer o schimbare de polarizabilitate n
timpul unei vibraii normale. Un asemenea mod de vibraie constituie baza pentru
efectul Raman, iar vibraia respectiv este Raman activ. De exemplu, la vibraia
simetric de ntindere a legturilor n molecula de CO
2
nu va fi nici o variaie a
momentului de dipol, deci molecula nu va putea absorbi radiaii n domeniul IR.
Totui, norul de electroni din jurul moleculei se ntinde i contract alternativ ceea
ce determin o variaie a polarizabilitii.
Dac radiaia incident este monocromatic radiaia mprtiat prin efect
Raman i pierde acest caracter, aprnd n plus o serie de linii (linii Raman) de o
parte i de alta a liniei corespunztoare lungimii de und a radiaiei incidente.
S considerm o molecul aflat iniial n starea fundamental de vibraie, v
0
,
dup cum se vede din fig. 1.12. La interacia cu radiaia electromagnetic,
molecula va fi polarizat, intrnd n oscilaie. Energia primit suplimentar este E
0
,
energia radiaiei incidente. Molecula nu va fi ns ntr-o stare excitat n sensul
convenional, dei energia ei a crescut n urma interaciei cu radiaia incident.
Molecula nu a fost excitat pe nici un nivel cuantificat de energie i rmne cu
energia suplimentar numai atta timp ct trece unda electromagnetic. Dup
trecerea undei, molecula polarizat revine pe un nivel cuantificat de energie
vibraional, ncetnd s oscileze. Dac nivelul cuantificat este altul dect cel
ocupat iniial de molecul, v
0
, pierderea de energie E
R
va fi mai mic dect energia
primit, E
0
. Dup cum se vede din fig. 1.12A, diferena E
0
E
R
este egal cu
diferena de energie ntre starea de vibraie fundamental i starea de vibraie
excitat. E
v
este extras din radiaia incident, astfel nct radiaia difuzat va
conine o component cu frecvena
R
egal cu diferena ntre frecvena
0
a
29

E
0
radiaiei incidente i
v
a vibraiei moleculare active n Raman.
















Fig. 1.12. Reprezentarea nivelurilor energetice ale unei molecule i
a tranziiilor corespunztoare la difuzia radiaiei prin efect Raman.

Difuzia Raman de ctre moleculele aflate deja n stri vibraionale excitate
este prezentat n fig. 1.12B. n acest caz, molecula se afl pe un nivel de excitare
vibraional (de exemplu v
1
). Interacionnd cu radiaia incident, energia ei crete
cu valoarea E
0
, egal cu h
0
. Dac molecula revine la nivelul de vibraie
fundamental, energia pierdut va fi E
R
= E
0
+ E
v
. Frecvena
R
a acestei radiaii
difuzate va fi egal cu suma frecvenelor radiaiei incidente
0
i a vibraiei
moleculare
v
.
Deoarece la temperatura obinuit cele mai multe molecule sunt n stare
fundamental de vibraie, procesul prezentat n fig. 1.12A este mult mai probabil,
dect cel prezentat n fig. 1.12B. Liniile Raman cu frecven mai mic
0

v
, sunt
deci mai intense; ele se numesc linii stokesiene, iar liniile Raman
0
+
v
, cu
frecvena mai mare, se numesc antistokesiene,
aceasta n conformitate cu regula lui Stokes.
Efectul Raman este aplicabil nu numai
tranziiilor de vibraie ci i altor tranziii care
implic o schimbare n polarizabilitate, ca de
exemplu tranziii de rotaie sau electronice.
Deplasarea Raman a liniilor spectrale este
independent de frecvena radiaiei incidente
folosite, dup cum se poate vedea din fig. 1.13.
Intensitatea radiaiei mprtiate variaz ns cu
puterea a patra a frecvenei radiaiei incidente.
Spectrul Raman este, n general,
asemntor cu spectrul n IR pentru moleculele
complexe. Apar diferene mari ntre cele dou
Fig. 1.13. Poziia n spectru a
liniilor Raman pentru diferite
frecvene ale radiaiei
excitatoare.
30

tipuri de spectre n cazul moleculelor cu un centru de simetrie. n spectrul Raman
vor fi active vibraiile simetrice (variaie a polarizabilitii) iar n spectrul IR,
vibraiile antisimetrice (variaie a momentului de dipol).



































31

1.2. APARATURA UTILIZAT N SPECTROMETRIA DE
ABSORBIE N DOMENIILE ULTRAVIOLET,
VIZIBIL I INFRAROU


1.2.1. Schema general a unui spectrometru

Principiile optice i electronice pe baza crora funcioneaz spectrometrele
utilizate n domeniul ultraviolet, vizibil i infrarou sunt, n general, aceleai.
Totui, sunt unele diferene importante n ceea ce privete componentele specifice
ale acestora i aceasta n funcie de domeniile spectrale n care sunt utilizate.
Frecvent se execut operaia de fotometrare. Prin fotometrare se nelege
determinarea raportului intensitilor a dou radiaii sau o funcie a acestui raport.
Aparatele folosite se numesc fotometre. n spectrometria de absorbie se msoar
raportul dintre intensitatea radiaiei transmise de prob i a radiaiei incidente.
Dac radiaia folosit are o band spectral foarte ngust, este practic
monocromatic, aparatele respective se numesc spectrofotometre sau, folosind o
denumire mai general, spectrometre.
n fig. 1.14 se prezint schema bloc a unui spectrometru de absorbie. Prile
eseniale sunt: 1) surs stabilizat de radiaii electromagnetice, 2) monocromator,
care separ radiaiile n funcie de lungimea de und, 3) celule transparente care
conin proba de analizat i proba de referin, 4) detector, 5) sistemul de evaluare.
Celula ce conine proba este plasat de obicei dup monocromator pentru
instrumentele care opereaz n domeniul UV i vizibil, pentru a diminua o
eventual descompunere sau fluorescen a probei datorit radiaiilor cu energie
mare neseparate din fasciculul incident. Pentru instrumentele n IR, proba este
plasat naintea monocromatorului pentru a permite o mai bun focalizare a
radiaiei pe detector i a reduce cantitatea de radiaie parazit.
n fig. 1.14 se prezint schematic sursele spectrale, sistemele de separare a
radiaiilor, detectorii de radiaii i materialele pentru celule, ferestre sau lentile
utilizate la construcia spectrometrelor care opereaz n UV, vizibil i IR.
Schema bloc a unui spectrometru de emisie difer de schema unui
spectrometru de absorbie prin aceea c lipsete compartimentul ce conine celula
cu proba de analizat i de referin. Proba constituie ea nsi sursa de radiaii,
radiaii care trec prin monocromator, ajung la detector, iar rspunsul detectorului
este redat de sistemul de evaluare.




32





Fig. 1.14. Schema bloc a unui spectrometru de absorbie.


(c m )
-1



Fig. 1.15. Domenii de utilizare ale surselor, sistemelor de separare i detectorilor
de radiaii folosii n spectrometria de absorbie n UV, vizibil i IR. Materiale
folosite pentru celule etc.



CsI
Filtre
33

1.2.2. Surse de radiaii

n spectrometria de absorbie atomic n domeniul UV i vizibil se
utilizeaz drept surse de radiaii lmpi cu catod cavitar i lmpi cu descrcare fr
electrozi. n fig. 1.16 se prezint schema unei lmpi cu catod cavitar. Ea este
constituit dintr-un tub de sticl cu o fereastr transparent pentru radiaiile emise.
n interior se gsesc catodul, prevzut cu o cavitate i anodul, constituit, de
exemplu, dintr-un fir metalic, plasat alturi de catod.



Fig. 1.16. Schema unei lmpi cu catod cavitar.

n interiorul lmpii se gsete un gaz inert ultrapur, de obicei neon, la
presiune sczut, de civa torri. ntre electrozi se aplic o tensiune de pn la
300 V, curentul avnd valori de pn la 30 mA. Lampa funcioneaz ca un tub de
descrcare n gaze la presiune sczut. Ionii pozitivi ai gazului inert rezultai n
urma descrcrii sunt accelerai de cmpul electric i bombardeaz catodul. n
interiorul cavitii catodului se realizeaz o concentraie mare de ioni ce lovesc
peretele interior al acestuia, determinnd smulgerea unor atomi din catod.
Cavitatea din catod are deci rolul de a concentra descrcarea n interiorul ei.
Atomii smuli sunt antrenai n plasma format de descrcare. Ei sunt excitai prin
ciocnire cu atomi excitai ai gazului inert, emind spectrul atomic caracteristic.
Datorit acestui proces, lmpile cu catod cavitar au o via limitat, catodul
consumndu-se, atomii smuli din catod depunndu-se n lamp.
Pentru fiecare element de analizat este necesar o lamp cu catod cavitar,
ceea ce poate constitui un dezavantaj al spectrometriei de absorbie atomic. S-au
realizat i lmpi cu catod cavitar multielement, n acest caz catodul fiind realizat de
obicei dintr-un aliaj. Radiaiile emise vor proveni de la toate elementele ce
constituie aliajul. Au dezavantajul c intensitatea radiaiilor emise este mai mic,
comparativ cu cele emise de o lamp monoelement.
Lmpile cu descrcare fr electrozi sunt constituite din tuburi de cuar
(aproximativ 1 cm diametru, 7 cm lungime) nchise ermetic, ce conin un gaz inert
(argon) la presiune sczut, cteva miligrame din elementul respectiv i o cantitate
mic de iod. Excitarea se realizeaz introducnd lampa n cavitatea unui generator
de microunde (2450 MHz, 200 W). Va avea loc o descrcare n gaz datorit
accelerrii ionilor i electronilor de ctre cmpul electromagnetic. Nu sunt necesari
34

electrozi pentru realizarea descrcrii.
Lmpile cu descrcare fr electrozi sunt realizate n special pentru
elementele mai volatile: arsen, plumb, cadmiu, staniu etc. Ele sunt mai scumpe
dect cele cu catod cavitar, dar intensitatea radiaiilor emise i timpul de via al
acestora sunt mai mari.
Surse de radiaii utilizate n spectrometria de absorbie molecular
Aceste surse constau dintr-un material care este excitat la stri cu energie
ridicat printr-o descrcare electric la tensiune mare sau prin nclzire electric.
Prin revenirea materialului la stri cu energie mai mic sau la starea fundamental
are loc o emisie de radiaie electromagnetic. Unele materiale au niveluri
energetice att de numeroase i care sunt att de apropiate unele de altele nct
radiaia emis se prezint ca o radiaie continu ntr-un anumit domeniu de lungimi
de und.
Pentru domeniul UV al spectrului, cele mai utilizate surse sunt lmpile de
hidrogen sau deuteriu. Ele sunt lmpi cu descrcare n gaze i emit o radiaie
continu n domeniul 180-350 nm.
Pentru domeniul vizibil i infrarou apropiat se utilizeaz lmpi cu filament
de wolfram, filament care este alimentat de o surs stabilizat de curent continuu.
Radiaia continu emis este n domeniul 350-2500 nm.
Pentru domeniul infrarou al spectrului sunt utilizate: sursa Globar, o baghet
de carbur de siliciu (6-8 mm diametru i aproximativ 5 cm lungime), sursa Nernst
constituit dintr-un amestec de oxizi de zirconiu, ytriu i toriu sinterizai sub forma
unei baghete (1-3 mm diametru i 2-5 cm lungime) goal n interior i avnd un fir
de platin pentru amorsare, sursa Nicrom realizat sub forma unor spire foarte
apropiate din srm de aliaj nichel-crom.
n toate aceste surse, emisia are loc datorit efectului termic produs la
trecerea curentului electric prin materialul din care sunt constituite. Ele emit
radiaii utilizabile n anumite zone caracteristice ale domeniului IR (fig. 1.15).


1.2.3. Sisteme de separare a radiaiilor n funcie de lungimea
de und

Separarea radiaiilor de mai multe lungimi de und ale unei surse n benzi
nguste sau chiar n radiaii monocromatice se poate face utiliznd filtre sau
monocromatoare.
Filtrele sunt de absorbie sau interfereniale. Filtrele de absorbie permit
selectarea unei anumite benzi spectrale prin absorbia radiaiilor de alte lungimi de
und. Absorbia se realizeaz de ctre substane colorate fixate n gelatin, sticl,
material plastic sau care sunt sub form de soluie.
Un filtru este caracterizat prin limea efectiv a benzii ce reprezint
domeniul de lungimi de und pentru care transmitana este cel puin jumtate din
35

valoarea maxim. Filtrele colorate permit transmiterea radiaiilor cu o lime a
benzii spectrale efective cuprins n mod obinuit ntre 20 i 50 nm.
Filtrele interfereniale constau din unul sau mai multe straturi alturate de
dielectric transparent acoperite pe ambele fee cu un film metalic semitransparent
i parial reflectant de obicei argint. Grosimea stratului de dielectric este bine
determinat, fiind de , 1 sau 3/2 din lungimea de und a radiaiei transmise; o
parte din radiaie va trece prin filtru neafectat, iar o alt parte va suferi mai nti o
reflecie ntre cele dou straturi de film metalic ce acoper dielectricul. Cele dou
radiaii vor interfera constructiv sau distructiv. Va fi transmis numai radiaia cu
lungimea de und ce permite o interferen constructiv. Lrgimea efectiv a benzii
spectrale transmise de filtrele interfereniale este de ordinul 5-10 nm iar pentru cele
cu un numr mare de straturi poate ajunge chiar la fraciuni de nm.
Monocromatoarele separ radiaiile policromatice n funcie de lungimea de
und permind obinerea unor radiaii cu o band spectral foarte ngust, practic
monocromatic. Componentele unui monocromator sunt: 1) o fant de intrare prin
care ptrunde radiaia monocromatic de la surs, 2) un colimator cu una sau mai
multe lentile, sau cu o oglind concav, 3) un sistem de dispersie, prism sau reea
de difracie care separ radiaiile n funcie de lungimea de und, 4) un sistem de
focalizare alctuit din una sau mai multe lentile, sau o oglind concav i 5) o fant
de ieire care izoleaz banda spectral dorit blocnd toate celelalte radiaii. n fig.
1.17 se prezint schemele unor monocromatoare cu prism i reea.





Fig. 1.17. Schemele unor monocromatoare: A) cu prism; B) cu reea.

Banda efectiv a radiaiei ce prsete monocromatorul depinde n principal
de elementul dispersiv utilizat i de lrgimea fantelor att de la intrarea ct i de la
ieirea acestuia. Folosirea unor fante nguste izoleaz benzi spectrale nguste,
practic monocromatice. Dar acestea limiteaz i intensitatea radiaiei ce ajunge la
detector, care nu poate funciona satisfctor dect peste o anumit valoare a
energiei primite. Limea minim a benzii spectrale este deci limitat de
sensibilitatea detectorului. Se mresc de obicei limile fantelor pn la o valoare
36

satisfctoare att din punct de vedere al lrgimii benzii spectrale ct i a
funcionrii n bune condiii a detectorului. Un optim se obine la egalitatea celor
dou fante.
Sistemele de dispersie sunt caracterizate de: dispersia unghiular, dispersia
liniar i puterea de rezoluie.
Dispersia unghiular este dat de raportul d/d, d fiind unghiul pe care l
fac ntre ele dou radiaii ce prsesc sistemul de dispersie i d fiind diferena de
lungime de und dintre ele.
Dispersia liniar se definete n planul de focalizare al spectrului fiind dat
de raportul dl/d, dl fiind distana ntre dou linii spectrale i d diferena de
lungime de und dintre ele.
Puterea de rezoluie este dat de raportul /d, fiind lungimea de und
medie a dou linii spectrale plasate alturat i pentru care se mai obine o imagine
distinct i d diferena dintre lungimile de und ale acestor linii.
Drept elemente de dispersie se utilizeaz prisme i reele de difracie.
Prisme. Dispersia n prism se realizeaz datorit variaiei indicelui de
refracie al radiaiilor n funcie de lungimea de und. Frecvent, indicele de
refracie scade cu lungimea de und, deci unghiul de deviere al radiaiei este mai
mare la lungimi de und mai mici.
n fig. 1.18 se prezint modul n care se realizeaz separarea unei radiaii
policromatice colimate, cu ajutorul unor prisme.

Suprafa
aluminizat
(oglind)


Fig. 1.18. Dispersia unei radiaii policromatice de ctre o prism: A) cu un unghi de
60
o
; B) de ctre o prism Littrow.

Dispersia unghiular a prismei este mai mare pentru lungimile de und
apropiate de benzile sale de absorbie. Dac materialul unei prisme absoarbe
radiaii din domeniul UV, dispersia crete cu scderea lungimii de und. n
domeniul IR prismele absorb de obicei radiaii la lungimi de und mai mari i n
mod corespunztor dispersia crete cu lungimea de und.
Puterea de rezoluie a prismelor este dat de relaia:

37

R
p
=

d
= t
dn
d
(1.19)


unde t este baza prismei, iar dn/d este dispersia indicelui de refracie.
Puterea de rezoluie este limitat de lungimea bazei prismei i de puterea de
dispersie a materialului dn/d care nu este constant, fiind funcie de lungimea de
und.
Utilizarea unei prisme ntr-un montaj de tip Littrow (fig. 1.19B) prezint
avantajul unui grad mai mare de dispersie, i n plus, este evitat dubla refracie
atunci cnd se folosete un material anizotropic, cum este cuarul. Oglinda din
montajul de tip Littrow poate fi constituit dintr-un material metalic dispus chiar
pe prism (dup cum se vede din fig. 1.19B).
Materialele din care sunt realizate prismele depind de domeniul spectral n
care acestea se utilizeaz. Ele trebuie s fie transparente i s aib o dispersie
suficient de mare.
Pentru domeniul UV se utilizeaz prisme din cuar sau dioxid de siliciu topit,
care sunt transparente pn la aproximativ 200 nm. Fluoritul (CaF
2
) este
transparent pn la 125 nm putnd fi utilizat n ultravioletul de vid. Pentru
domeniul vizibil i IR apropiat prismele se fac din sticl de diferite caliti.
n domeniul infrarou se utilizeaz materiale cristaline ionice. n fig. 1.15
sunt prezentate cteva dintre aceste materiale i domeniile de numere de und (cu
aproximaie) n care acestea pot fi utilizate cu cele mai bune rezultate: fluoritul,
CaF
2
, ntre 1600 i 1250 cm
-1
, clorura de sodiu ntre 625 i 4000 cm
-1
, bromura de
potasiu ntre 700 i 400 cm
-1
, KRS-5 (un cristal mixt de bromur i iodur de taliu)
i bromura de cesiu n domeniul 425-280 cm
-1
, iodura de cesiu este utilizabil pn
la 180 cm
-1
. Sub aceast valoare de obicei se folosesc reele de difracie ca sisteme
de dispersie.
Reele de difracie. Reelele de difracie pot fi prin transmisie sau prin
reflexie. n fig. 1.20 se prezint drumul parcurs de radiaii n cazul unei reele de
difracie prin reflexie.
Suprafaa reelei este puternic reflectorizant i prezint un mare numr de
anuri (zgrieturi) echidistante, n mod obinuit 600-2000 pe mm, n funcie de
domeniul spectral n care se utilizeaz.Radiaiile reflectate de reeaua de difracie
sufer un fenomen de interferen pozitiv sau negativ n funcie de lungimea de
und a acestora i de diferena de drum strbtut. Diferena de drum este dat de
diferena BC AD = d(sin i sin ). Totui, este considerat un unghi negativ
astfel c diferena de drum este d(sin i + sin ).
38


Fig. 1.19. Drumul parcurs de radiaii pentru o reea de difracie prin reflexie.

Pentru o interferen constructiv a radiaiei reflectate este necesar ca:

( ) u sin i sin d n + = (1.20)

unde n este un numr ntreg. O radiaie de o anumit lungime de und care este
reflectat de o reea de difracie pentru un unghi de inciden i, poate suferi o
interferen constructiv pentru mai multe unghiuri , formndu-se astfel spectre
de diferite ordine. Cele mai intense radiaii aparin ordinului nti, intensitatea
radiaiilor scznd cu ordinul spectrului.
Separarea radiaiilor se face prin rotirea reelei de difracie. n faa fantei de
ieire a monocromatorului fiind aduse radiaiile de diferite lungimi de und ce
aparin spectrului de ordinul 1.
Reelele de difracie prezint, spre deosebire de prisme, o dispersie
unghiular liniar pe ntreg domeniul de lungimi de und utilizat, ceea ce constituie
un avantaj.
1.2.4. Detectori de radiaii
Un detector de radiaii absoarbe energia fotonilor recepionai i o transform
ntr-o cantitate msurabil, ca de exemplu nnegrirea unei plci fotografice sau un
curent electric. Orice detector trebuie s genereze un semnal care s poat fi corelat
cantitativ cu intensitatea radiaiei recepionate.
Zgomotul de fond al unui detector se refer la rspunsul detectorului,
nregistrat chiar n absena unei radiaii recepionate i la fluctuaiile aleatoare ale
rspunsului detectorului.
39

Cerinele cele mai importante pentru un detector sunt: 1) sensibilitate mare i
un zgomot de fond ct mai mic, 2) timp scurt de rspuns, 3) stabilitatea rspunsului
n timp, 4) dependen liniar ntre rspunsul detectorului i intensitatea radiaiei
recepionate. Este preferat rspunsul electric al detectorului, care este mai uor de
amplificat.
Detectori utilizai n domeniul UV i vizibil
n domeniul ultraviolet i vizibil, drept detectori de radiaii se pot utiliza
detectori fotoelectrici, detectori fotografici i, n domeniul vizibil, ochiul omenesc.
n aparatele moderne nu se mai utilizeaz ochiul omenesc drept detector de
radiaii. Detectorii fotografici nu sunt utilizai n spectrometria de absorbie, ei i
gsesc utilizri n spectrometria de emisie i vor fi prezentai la acel capitol.
Detectori fotoelectrici
Fotonii radiaiilor din domeniul ultraviolet i vizibil au o energie suficient
pentru a determina o emisie de electroni (efect fotoelectric) atunci cnd ei lovesc o
suprafa tratat cu anumii compui specifici. Absorbia acestui tip de fotoni poate
determina de asemenea pentru anumii semiconductori, deplasarea electronilor
legai, neconductivi, n benzi conductive. Ambele procese genereaz sau permit
trecerea unui curent electric care este funcie de intensitatea radiaiei absorbite.
Detectorii care funcioneaz pe baza acestor principii se numesc detectori
fotoelectrici. Acetia sunt de urmtoarele tipuri: celule fotovoltaice, celule
fotoemisive, celule fotoconductive (fotodiode) i tuburi fotomultiplicatoare.
Celulele fotovoltaice sunt cele mai simple, la iluminare ele genereaz un
curent electric care poate aciona direct, fr amplificare, un instrument de msur.
Rspunsul lor nu este prea stabil i timpul de rspuns este destul de lung.
Celulele fotoemisive constau dintr-un tub de sticl vidat n care se gsesc un
anod i un catod fotoemisiv pe care cade radiaia a crei intensitate o msurm.
ntre cei doi electrozi se aplic o diferen de potenial. Electronii smuli din catod
prin efect fotoelectric determin trecerea curentului prin celul, la iluminarea
acesteia.
Un tub multiplicator, prezentat n fig. 1.20, const dintr-un catod fotoemisiv
i o succesiune de electrozi (dinode) care prezint capacitatea emisiei secundare de
electroni.
ntre electrozii adiaceni se aplic o diferen de potenial de ordinul 75-100
V. Radiaia incident smulge fotoelectroni din catod. Electronii smuli sunt
focalizai de cmpul electrostatic i sunt accelerai spre primul electrod acoperit cu
un compus (BeO, CsSb) care permite emisia mai multor electroni pentru fiecare
electron incident. Procesul se repet pentru ceilali electroni. Electronii rezultai
sunt colectai apoi de anod.

40




Fig.1.20. Schema unui tub fotomultiplicator.

Tuburile fotomultiplicatoare prezint marele avantaj c permit o amplificare
a semnalului de ordinul 10
6
, chiar n interiorul lor, amplificare ce poate fi reglat
pe baza diferenei de potenial dintre electrozi.
Celulele fotoconductive sunt de fapt semiconductori (germaniu dopat cu aur,
telurur de plumb, sulfur de plumb). Prin absorbia unor radiaii cu lungimi de
und adecvate, electronii semiconductorului sunt trecui n benzi conductive.
Rezistena electric a celulei va scdea, iar sub influena unei diferene de potenial
va avea loc o cretere accentuat a curentului ce trece prin celul.

Detectori utilizai n domeniul IR
n acest domeniu spectral se utilizeaz n special detectori termici. Energia
radiaiilor este transformat n energie termic, msurndu-se apoi variaiile de
temperatur. Pentru aceasta se utilizeaz termocuple, termorezistene (termistori) i
celule pneumatice (Golay).
Funcionarea termocuplelor se bazeaz pe apariia unei diferene de potenial
funcie de temperatur, ntre doi conductori din metale diferite pui n contact.
Termorezistenele sunt rezistene care prezint un coeficient mare de variaie al
rezistivitii cu temperatura, putnd astfel sesiza variaii foarte mici de
temperatur. n cazul celulelor pneumatice se msoar variaia unui volum nchis
de gaz sub influena temperaturii. Partea activ a oricrui detector termic trebuie s
fie ct mai mic pentru ca variaiile de temperatur s fie ct mai mari la absorbia
radiaiei infraroii. Principalul lor dezavantaj este timpul de rspuns lung
(milisecunde) i sensibilitatea redus n comparaie cu alte tipuri de detectoare.


1.2.5. Sisteme de evaluare

Semnalul electric furnizat de un detector poate fi msurat fr amplificare,
dar de cele mai multe ori este necesar o amplificare a acestuia.
Se poate citi direct valoarea semnalului msurat pe scala instrumentului de
msur, sau instrumentul de msur poate aciona numai ca instrument de nul,
realizndu-se o compensare a semnalului dat de detector fie pe cale electric (cu
41

ajutorul unui poteniometru), fie pe cale optic (cu ajutorul unei pene optice sau a
unei diafragme reglabile); n acest caz, mrimea se msoar n uniti de
compensare pe scala poteniometrului sau a sistemului optic.
n aparatele moderne sistemul de evaluare se bazeaz n mare msur pe
utilizarea calculatoarelor care pot prelua semnalul de la amplificator, l compar cu
semnalele corespunztoare ale unor probe etalon, stocate n memorie, iar apoi ne
dau direct datele analitice.

Sisteme monofascicul i cu dou fascicule utilizate n spectrometria de
absorbie
Dei toate aparatele spectrometrice de absorbie au prile componente
prezentate n fig. 14, totui sunt multe deosebiri ntre ele, depinznd de productor,
domeniul spectral pentru care a fost concepute, rezoluia acestora etc. Fr a intra
n detalii, vom discuta n continuare numai modurile generale de operare ale unui
spectrometru de absorbie.
Sisteme monofascicul
Un fascicul de radiaii de la o surs ptrunde n monocromator, unde este
dispersat de prism sau reea. Prin rotirea sistemului de separare a radiaiilor, n
faa fantei de ieire a monocromatorului sunt focalizate radiaii de diferite lungimi
de und. n cazul spectrometriei de absorbie, nainte de a ajunge la detector,
radiaiile trec prin proba de analizat. Absorbia radiaiei de ctre prob se
determin fie msurnd intensitatea fasciculului transmis n prezena i absena
probei, fie fa de o prob de referin (de comparaie) care conine de obicei toi
componenii probei cu excepia aceluia a crui absorban o msurm.
In cazul spectrometriei de emisie radiaiile emise de prob sunt separate de
monocromator iar apoi ajung direct la detector unde li se msoar intensitatea.
Sisteme cu dou fascicule
n instrumentele cu dou fascicule se realizeaz cu ajutorul unui dispozitiv
optic o separare a radiaiilor provenite de la surs n dou fascicule. Un fascicul
este trecut prin proba de referin, iar cellalt prin proba de analizat. Intensitile
celor dou fascicule sunt apoi comparate, fie continuu, fie alternativ, de mai multe
ori pe secund. Astfel, n cazul instrumentelor cu dou fascicule are loc o
compensare a fluctuaiilor intensitii sursei, a rspunsului detectorului i a
amplificrii, msurndu-se numai diferena celor dou semnale.
n fig. 1.21 se prezint schema unui instrument cu dou fascicule ce
funcioneaz pe baza principiului prezentat:

42


Fig. 1.21. Schema unui spectrometru cu dou fascicule.

Fasciculele de radiaii ce trec prin proba de referin i proba de analizat
ajung alternativ la detector la intervale de timp care depind de frecvena de rotaie a
oglinzilor. Instrumentul nregistreaz raportul celor dou semnale. Dac
intensitatea celor dou fascicule este identic, amplificatorul nu genereaz nici un
semnal. Atunci cnd cele dou intensiti sunt diferite, semnalul amplificat poate
aciona un servomotor care pune n micare un nregistrator poteniometric; acesta
este astfel calibrat nct s ne indice transmitana sau absorbana corespunztoare
probei de analizat. Cu ajutorul unui dispozitiv mecanic ce rotete sistemul de
dispersie i totodat deplaseaz banda de hrtie a nregistratorului se poate obine
spectrul de absorbie al probei. Aparatele cu dublu fascicul permit obinerea ntr-un
timp scurt a spectrului de absorbie al probei.
In ultimii ani s-au realizat progrese foarte mari in construcia de aparatur
analitic. Spectrometrele moderne cu unul sau dou fascicule sunt controlate de un
calculator care uureaza foarte mult operarea acestora, spectrele de absorbie sau
valorile msurate fiind afiate pe monitor.













43

1.3. SPECTROMETRIA DE EMISIE ATOMIC N ARC,
SCNTEIE ELECTRIC I PLASM


Principiul metodei const n vaporizarea i excitarea atomilor probei de
analizat, separarea radiaiilor emise n funcie de lungimea de und, nregistrarea
lor, urmat de interpretarea semnalelor obinute.
Vaporizarea i excitarea atomilor se poate face n arc electric, n scnteie
electric, n plasm (cea mai utilizat fiind cea de argon cuplat inductiv) sau cu un
fascicul laser.
Dup separarea radiaiilor emise cu ajutorul unui monocromator, acestea sunt
focalizate pe detectorul de radiaii care este de obicei un detector fotoelectric, dar
care poate fi i o plac fotografic.
Analiza calitativ se face pe baza poziiilor n spectru (a lungimilor de und)
a radiaiilor emise, fiecare element emind un spectru caracteristic. Analiza
cantitativ se face prin msurarea intensitii radiaiilor emise.
Acest tip de analiz se aplic n primul rnd la determinarea unor metale. La
folosirea arcului sau scnteii electrice ca surs de vaporizare sau excitare, sunt
analizate n special probe solide iar la folosirea plasmei, probe lichide.


1.3.1. Principiul aparaturii

Surse de vaporizare i excitare
Arcul electric
Poate fi de curent continuu de joas tensiune (10-25 V, 5-30 A) sau de nalt
tensiune (1200 V, 0,2-0,3 A). Vaporizarea se produce datorit nclzirii ce are loc
la trecerea curentului electric. Temperatura arcului de curent continuu este de
ordinul 4000-6500
o
C. Excitarea atomilor probei se datoreaz att energiei termice,
ct i energiei electrice i este rezultatul unor ciocniri ntre atomi, ioni, electroni de
mare energie.
n arcul electric de curent continuu electrozii nu se consum uniform. De
asemenea, arcul electric nu este stabil i aceasta face ca intensitatea radiaiilor
emise s nu fie constant. ntr-un spectru de arc intensitile relative ale radiaiilor
emise de atomii diferitelor elemente nu sunt constante, aceasta deoarece
volatilizarea este selectiv, substanele cu temperatur de topire ridicat
volatilizndu-se dup cele cu temperatur de topire cobort.
n anumite cazuri, aceasta poate constitui un avantaj, putndu-se determina
selectiv din aceeai prob elemente cu volatiliti diferite.
Arcul de curent alternativ ca surs de vaporizare i excitare se aseamn n
multe privine cu arcul de curent continuu. n acest caz, schimbarea polaritii
electrozilor n ritmul frecvenei curentului alternativ permite o ameliorare sensibil
44

a reproductibilitii excitrii. n arc electric se obin spectrele atomilor i n mai
mic msur spectrele ionilor. Datorit instabilitii lor, ele se folosesc mai ales la
analiza cantitativ i semicantitativ.
Intensitatea emisiei atomice n arcul electric depinde de matricea probei (de
prezena celorlali componeni ai probei). Din acest motiv, probele de analizat i
standardele trebuie s fie ct mai asemntoare nu numai n privina compoziiei
chimice ct i a constituiei fizice. Acest lucru este valabil i pentru alte surse de
vaporizare i excitare.
Dac arcul este produs ntre electrozi de carbon, n aer, se formeaz i
molecule de dician care sunt excitate de arc, emind radiaii sub forma unor benzi
moleculare n domeniul 360-420 nm care se suprapun peste spectrul probei.

Scnteia electric
Este o descrcare scurt i oscilant ntre doi electrozi aflai la o mare
diferen de potenial (10.000-50.000 V). Temperatura scnteii electrice este de
ordinul 10.000-30.000
o
C. Scnteia electric se poate realiza cu un montaj
prezentat n fig. 1. 22.





Fig. 1.22. Schema montajului Feussner de alimentare a scnteii electrice.

Frecvena oscilaiilor scnteii este dat de relaia:

LC
1
2
1
t
v = (1.21)

unde L i C reprezint inductana, respectiv capacitatea din circuit.
Oscilaiile sunt amortizate i determin o schimbare a polaritii electrozilor
n timpul unor impulsuri foarte scurte (10
-4
10
-5
s) care se produc de 1000-2000
ori/s. Durata unei singure scntei este foarte mic iar timpul ntre descrcri este
relativ lung. Aceasta permite electrozilor s se rceasc ntre descrcri,
temperatura lor crescnd foarte puin fa de temperatura ambiant. Fenomenul de
45

volatilizare fracionat a diferitelor elemente va fi mult mai redus comparativ cu
arcul electric.
Pentru a asigura o mai mare stabilitate a emisiei spectrale, Feussner a
introdus n circuit un ntreruptor mecanic acionat de un motor sincron. Circuitul
este nchis numai pentru scurt timp la valoarea maxim a intensitii curentului
pentru fiecare semiperioad. Condensatorul se va descrca la aceeai tensiune de
ncrcare, iar scnteia va avea un caracter mult mai reproductibil.
Energia mare a scnteii determin o populare i a nivelurilor energetice cu
energie nalt ale atomilor. Din acest motiv, n scnteie se obin att spectrele
atomilor ct i ale ionilor, spectrele fiind mai complexe dect cele obinute n arc
electric.
Scnteia electric este o surs de excitare care ne d o mai mare precizie i
stabilitate dect arcul electric, putnd fi folosit cu rezultate bune n analiza
cantitativ.
Electrozii ntre care are loc arcul sau scnteia electric sunt constituii chiar
din proba de analizat atunci cnd aceasta este bun conductoare de electricitate
(fig. 1.23a i 123b). Pentru analiza unor soluii se pot utiliza electrozi de forma
celor prezentai n fig. 1.23c i 1.23d. Dac proba nu este bun conductoare de
electricitate, ea este transformat n pulbere, apoi este amestecat cu un liant i este
introdus n cavitatea unui electrod de grafit (fig. 1.23e). Grafitul are avantajul c
are un spectru simplu i creeaz o atmosfer reductoare ce nu permite formarea
oxizilor.



Fig. 1.23. Tipuri de electrozi folosii la utilizarea arcului sau scnteii electrice ca
surs de vaporizare i excitare. (a) i (b) analiza unor probe bune conductoare de
electricitate; (c) i (d) analiza unor probe lichide; (e) analiza unor probe care au
conductibilitate electric mic.

Un fascicul laser
Poate fi folosit la analiza unor zone foarte mici de pe suprafaa unei probe.
Fasciculul laser, focalizat cu ajutorul unui microscop n zona de analizat,
vaporizez o cantitate mic de prob, dnd natere unui crater semisferic cu
46

diametrul de ordinul 50 m. Atomii din vaporii rezultai sunt apoi excitai cu
ajutorul unei scntei electrice produs ntre doi electroni plasai deasupra probei.
Aceast tehnic poart numele de microanaliz spectral cu laser. Metoda permite
analiza interiorului celulelor individuale chiar n organismele vii. Se pot analiza de
asemenea incluziuni n metale i minereuri.
Plasma
Ca surs de excitare a atomilor probei, plasma prezint avantaje fa de arcul
sau scnteia electric. Temperatura plasmei este de ordinul 9000 K. Spectrul
obinut este foarte bogat n linii deoarece tranziiile electronice ce pot avea loc sunt
foarte numeroase. Aceasta ns face s creasc posibilitatea interferenelor
spectrale. Din acest motiv, spectrometrul utilizat trebuie s aib o rezoluie nalt.
Sensibilitatea i exactitatea sunt foarte bune. Intensitatea radiaiei emise de un
element este funcie liniar de concentraie ntr-un interval larg (4 sau mai multe
ordine de mrime). Pot fi analizate probe gazoase sau lichide (n unele cazuri i
probe solide pulverulente).
Tora de plasm de argon cuplat inductiv
Este un tip special de plasm care este alimentat cu energie prin inducie de
la un cmp magnetic de nalt frecven (radiofrecven). Plasma care este un gaz
parial ionizat este format electromagnetic, n urma cuplrii prin inducie a
argonului ionizat cu un cmp de nalt frecven.
n fig. 1.24 se prezint schematic o tor de plasm de argon cuplat inductiv.
Ea este constituit din trei tuburi concentrice de cuar, tuburile interioare fiind mai
scurte. n jurul tubului exterior n partea superioar, sunt dou spire de inducie
(rcite cu ap) ale unui generator de radiofrecvena (pn la 2 kW i n jur de 25
MHz). Prin tubul central se introduce proba sub form de aerosol.
Pentru a pune n funciune tora se introduce un flux de argon ntre tuburile
concentrice. Apoi se iniiaz ionizarea argonului cu ajutorul unor scntei electrice.
Ionii i electronii rezultai vor interaciona cu cmpul magnetic oscilant (notat cu
H) produs de spirele de inducie. Plasma de argon conine muli electroni liberi, ea
este un conductor electric bun i va interaciona uor cu cmpul magnetic. Aceasta
va induce circulaia unor cureni electrici turbionari n plasma format, ceea ce va
avea ca rezultat creterea temperaturii. Transferul energetic ntre spirele de inducie
i plasm este asemntor cu transferul de energie dintr-un transformator electric,
cele dou spire de inducie corespunznd nfurrii primare iar curenii turbionari
din plasm corespunznd unei singure spire a secundarului.
Plasma format are aspectul unei flcri n partea superioar a tubului de
cuar. Deoarece temperatura acesteia este foarte ridicat, aprox. 9000 K, este
necesar ca ea s fie izolat de tubul de cuar. Aceasta se realizeaz printr-un curent
de argon care circul tangenial ntre tuburile concentrice (fig. 1.24) ceea ce
determin totodat o modificare a formei sferice a plasmei prin aplatizarea bazei
sale.
47



Fig. 1.24. Schema unei tore de plasm cuplat inductiv.

Introducerea probei prin tubul central schimb de asemenea aspectul plasmei,
din centrul acesteia formndu-se o flacr ngust i nalt, bine definit, care
constituie sursa de radiaii propriu-zis.
Radiaiile emise n sursele de excitare sunt separate n funcie de lungimea de
und utiliznd monocromatoare cu prism sau reea (prezentate n capitolul 1.2.3).
Detectori de radiaii
Se pot folosi detectori de radiaii fotoelectrici (prezentai la capitolul 1.2.4)
sau detectori fotografici (ce vor fi prezentai mai jos).
Aparatele ce utilizeaz drept detectori de radiaii plci fotografice se numesc
n general spectrografe, iar cele ce utilizeaz detectori fotoelectrici se numesc n
general spectrometre.
Detectori fotografici
Acetia servesc att la detecia ct i la nregistrarea radiaiilor. Se utilizeaz
plci fotografice, care constau dintr-o plac de sticl sau material plastic pe care s-a
depus o emulsie fotosensibil de halogenur de argint.
Spectrele de emisie atomic vor aprea sub forma unor linii cu o nnegrire
mai puternic sau mai slab n funcie de intensitatea lor. Ca o msur a acestei
nnegriri se folosete densitatea de nnegrire, D, definit prin relaia:

T
log
I
I
log D
o
1
= = (1.22)
48

n care:
I
0

este intensitatea unui fascicul luminos incident produs de o surs (lumin
alb produs de un bec cu incandescen) iar I este intensitatea aceluiai fascicul
dup trecerea prin regiunea plcii pe care s-a nregistrat radiaia. Densitatea de
nnegrire se msoar cu ajutorul unor dispozitive optice numite microfotometre.
Produsul dintre intensitatea radiaiei ce determin formarea unei imagini
fotografice i timpul ct aceasta acioneaz se numete expunere, notat cu E:

(1.23)

Reprezentnd D funcie de log E obinem curba caracteristic de nnegrire a
plcii fotografice (fig. 1.25).
D
0
este nnegrirea corespunztoare voalului plcii i se obine la developare
pe poriunea unde placa nu a fost iluminat.
Pentru determinri cantitative este necesar s ne situm pe poriunea liniar a
curbei caracteristice de nnegrire a plcii fotografice pentru care este o dependen
liniar ntre D i log E, dat de relaia:

g E log D = (1.24)

unde = tg este panta dreptei iar g este ineria emulsiei.
D
e
n
s
i
t
a
t
e
a

d
e

n
n
e
g
r
i
r
e

D
Domeniu de
supraexpunere
Domeniu de
subexpunere
Domeniu de
lucru
log E

Fig. 1.25. Curba caracteristic de nnegrire a unei plci fotografice.

Schema unui spectrograf cu prism este prezentat n fig. 1.26.




E = It
49



Fig. 1.26. Schema unui spectrograf cu prism.

Radiaiile emise de sursa de excitare sunt focalizate de lentila L
1
pe fanta de
intrare a aparatului, apoi sunt transformate ntr-un fascicul paralel de lentila
colimatoare L
2
, sunt separate n funcie de lungimea de und de ctre prism i
sunt focalizate de lentila L
3
pe placa fotografic.
Spectrometrele se deosebesc de spectrografe prin faptul c nu se face o
nregistrare simultan a ntregului spectru, ci se msoar numai anumite radiaii cu
frecvene caracteristice emise de ctre atomii probei de analizat. Pentru aceasta, n
planul focal al monocromatorului, n dreptul unor fante, este plasat pentru fiecare
lungime de und caracteristic cte un detector fotoelectric. In acest mod se pot
nregistra simultan intensitile radiaiilor emise de un numr mare de specii
atomice (de ordinul zecilor) care pot fi astfel determinate simultan.


1.3.2. Analiza calitativ i semicantitativ

Analiza calitativ
Se face pe baza faptului c radiaiile emise la anumite lungimi de und i
ansamblul de radiaii ce constituie spectrul sunt caracteristice pentru un anumit
element.
La utilizarea plcii fotografice drept detector de radiaii, spectrul nregistrat
este format dintr-o multitudine de linii, fiecrei linii corespunzndu-i o radiaie de
o anumit lungime de und, emis de un anumit element din proba de analizat.
Cea mai simpl metod de a face o analiz calitativ const n compararea
spectrului probei de analizat cu un spectru cunoscut, ambele nregistrate alturat,
pe o plac fotografic. Drept spectru fa de care se determin liniile elementelor
de analizat se folosete spectrul fierului, care este foarte bogat n linii i constituie
un bun etalon pentru lungimile de und.
Cu ajutorul unui dispozitiv optic numit spectroproiector se obine pe un ecran
imaginea mrit a spectrelor nregistrate. n continuare, cu ajutorul unor atlase n
care este figurat spectrul fierului i poziiile liniilor diferitelor elemente intercalate
50

ntre liniile fierului se pot atribui liniile spectrale ce apar n proba necunoscut.
O a doua metod de efectuare a unei analize calitative se bazeaz pe
determinarea exact a lungimilor de und ale radiaiilor emise de elementele din
proba de analizat. n acest scop se ntrebuineaz un microscop mobil cuplat cu o
scal micrometric (sau un microscop fix i o plac mobil cuplat cu un urub
micrometric) care permite observarea direct a spectrului probei i a spectrului
cunoscut. Acest instrument se numete microscop comparator. Lungimile de und
ale radiaiilor determinate astfel vor fi atribuite elementelor de analizat folosind
atlase de spectre.

Analiza semicantitativ
Permite determinarea ordinului de mrime al concentraiilor unor elemente.
La utilizarea plcii fotografice ca receptor de radiaii se poate face o analiz
semicantitativ prin compararea vizual a spectrului probei cu o serie de spectre
etalon, obinute de la probe sintetice de concentraie cunoscut i cu o compoziie
asemntoare cu a probei de analizat. Prezentm n continuare urmtoarele metode
de analiz semicantitativ:
- Metoda spectrelor de comparaie: se nregistreaz pe aceeai plac
fotografic mai multe spectre ale unor probe etalon alturi de spectrul probei de
analizat i se compar vizual. Concentraia unui element n proba necunoscut va fi
aproximativ egal cu concentraia unui element din etalon, pentru care liniile
elementului de analizat prezint nnegriri asemntoare.
- Metoda diluiei: se nregistreaz spectrul probei de analizat diluat cu praf
de grafit n raport cunoscut (de exemplu 1/10, 1/100, 1/1000) i se compar cu
spectrele obinute pentru anumite probe etalon.
- Metoda sectorului logaritmic: se nregistreaz spectrul probei n condiiile
n care un disc dintr-un material opac ce are marginea tiat dup o curb
logaritmic se rotete n faa fantei de intrare a spectrografului (fig. 1.27).
Deoarece densitatea de nnegrire a plcii fotografice este funcie logaritmic de
intensitatea radiaiei (relaiile (1.23) i (1.24)), liniile spectrale vor aprea n acest
caz sub forma unor pene a cror nlime va fi proporional cu concentraia
elementului de analizat. Comparnd nlimea liniilor spectrale astfel nregistrate
pentru un etalon i proba de analizat, se poate evalua semicantitativ concentraia n
proba necunoscut.

51


Fig. 1.27. Sectorul logaritmic (a), i aspectul unei linii nregistrate pentru
diferite concentraii (b).


1.3.3. Analiza cantitativ

Se face determinnd intensitatea radiaiilor emise n funcie de concentraia
speciei de analizat. Se aleg liniile cele mai intense, mai sensibile i mai
caracteristice ale elementelor de analizat. Intensitatea radiaiei emise este dat de
relaia:

b
ac I = (1.25)
unde I este intensitatea radiaiei emise, c este concentraia elementului care emite
radiaiile, a este un factor legat de natura elementului i condiiile de excitare iar b
este un factor datorat autoabsorbiei liniei spectrale (b < 1). Cu ct autoabsorbia
unei linii spectrale este mai mare cu att b ia valori mai mici. Autoabsorbia unei
linii spectrale crete cu concentraia elementului din vaporii atomici care emit linia
spectral respectiv.
Deoarece intensitatea radiaiilor emise este funcie de o serie de parametri ai
surselor de excitare, greu de reprodus i de controlat, intensitatea unei linii
spectrale se msoar fa de intensitatea liniei unui element numit standard sau
etalon intern, coninut de proba de analizat. Condiiile de excitare fiind aceleai
pentru ambele elemente, ele nu vor influena valoarea raportului ntre intensitile
celor dou linii.
Elementul de analizat ales drept standard intern trebuie s ndeplineasc o
serie de condiii. Astfel, este necesar s fie n concentraie constant (de obicei
mare) att n etaloane, ce conin cantiti cunoscute din elementul de analizat, ct i
n probele de analizat. Linia standardului intern trebuie s fie n vecintatea celei a
elementului de analizat, pentru a evita erorile ce pot aprea datorit variaiei
sensibilitii detectorului n funcie de lungimea de und. Standardul intern trebuie
s aib volatilitate i condiii de excitare ct mai apropiate de ale elementului de
analizat.
Raportul dintre intensitatea unei radiaii emise la o anumit lungime de und
52

de ctre elementul de analizat, I
x
, i a radiaiei emise de standardul intern, I
st
, va fi
dat de relaia:

(1.26)


notnd a
x
/a
st
cu A i logaritmnd, obinem:

k c log b
I
I
log
x x
st
x
+ = (1.27)
unde k = log A b
st
log c
st

Relaia (1.27) ne arat c ntre log I
x
/I
st
i log c
x
este o dependen liniar.
Lucrnd cu probe etalon ce au concentraii cunoscute n elementul de analizat, vom
putea trasa un grafic de calibrare reprezentnd log I
x
/I
st
funcie de log c
x
pe baza
cruia vom putea determina concentraiile elementului de analizat din probe
necunoscute.
La utilizarea sistemelor de detecie fotoelectrice, radiaiile emise la anumite
lungimi de und de elementul de analizat i standardul intern sunt convertite n
curent electric care ncarc un circuit de integrare format dintr-un condensator i o
rezisten. Tensiunea la care ajunge condensatorul dup un anumit timp (sau
cantitatea de electricitate nmagazinat) va fi funcie de intensitatea radiaiei.
n cazul spectrometrelor performante, prin aceast metod se msoar
simultan intensitile corespunztoare radiaiilor emise de un mare numr de
elemente. Aceste intensiti sunt apoi convertite n concentraii pe baza unor curbe
de etalonare de ctre un calculator, rezultatul fiind dat ntr-un timp foarte scurt.
Precizia determinrilor este bun, eroarea relativ fiind de ordinul 0,5%.
La utilizarea plcii fotografice ca receptor de radiaii, se msoar densitatea
de nnegrire D a liniilor spectrale cu ajutorul microfotometrelor. Dac ne vom
plasa pe domeniul liniar al curbei caracteristice de nnegrire a plcii fotografice
(fig. 1.25) vom putea scrie:

g E log D
x x
= (1.28)

g E log D
st st
= (1.29)

st
x
st x
E
E
log D D D A = = (1.30)

Dar timpul de expunere este acelai pentru linia elementului de analizat i
linia standardului intern, fiind coninute n acelai spectru, deci:
I
x
I
st
=
a
x
c
x
b
x
a
st
c
st
b
st
53

st
x
st x
I
I
log D D D A = = (1.31)

nlocuind pe log I
x
/I
st
cu valoarea dat de relaia (1.27), obinem:

k c log b
D
x x
+ =

A
(1.32)

Reprezentnd D/ n funcie de log c, pentru probe de concentraie
cunoscut, se va obine un grafic de etalonare pe baza cruia se vor putea
determina concentraiile unor probe necunoscute.




1.4. SPECTROMETRIA DE EMISIE N FLACR


Principiul metodei const n transformarea n vapori atomici a elementelor de
determinat i excitarea acestora prin introducerea probei de analizat ntr-o flacr i
separarea radiaiilor emise n funcie de lungimea de und, urmat de nregistrarea
i interpretarea acestora.
Prin aceast metod sunt analizate n special probe lichide care sunt
introduse n flacr sub form de aerosoli.
Analiza calitativ se face prin determinarea lungimilor de und ale radiaiilor
emise, care sunt caracteristice diferitelor specii atomice, iar analiza cantitativ se
face prin msurarea intensitii acestor radiaii.
Spectrometria de emisie atomic n flacr se aplic n special pentru analiza
unor elemente cu energie de excitare mic, cum ar fi metalele alcaline i alcalino-
pmntoase, aceasta deoarece flcrile au temperaturi mai mici dect ale celorlalte
surse de excitare folosite n spectrometria de emisie atomic (arcul electric,
scnteia electric sau plasma); totui, prin perfecionarea aparaturii i prin folosirea
unor flcri calde, spectrometria de emisie atomic a fost extins la determinarea
unui numr mare de elemente (aproximativ 40).
1.4.1. Flacra ca sistem de atomizare i excitare
Proba de analizat este transportat n flacr sub forma unui aerosol. Se poate
proceda n dou moduri: 1) comburantul (gazul care ntreine arderea) i
carburantul sunt preamestecate nainte de a ajunge la arztor (transportnd proba
de analizat sub form de aerosol); 2) cele dou gaze vin n contact chiar n
flacr, n care este pulverizat proba de analizat.
54

n fig. 1.28 se prezint schemele unor arztoare bazate pe cele dou
modaliti de lucru; n tabelul 1.3 se prezint civa dintre carburanii i
comburanii folosii pentru obinerea flcrilor utilizate n spectrometrie i
temperaturile acestora.

Tabelul 1.3. Caracteristici ale unor flcri utilizate n spectrometria de
emisie atomic
Carburant Comburant Temperatura
o
C
Acetilen aer 2400
N
2
O 2800
oxigen 3140
Hidrogen aer 2050
N
2
O 2700
oxigen 2700
Propan aer 1900




Prob
Prob



Fig. 1.28. Schemele unor arztoare folosite n spectrometria de emisie: a) fr
preamestecarea gazelor, b) cu preamestecarea gazelor.

S considerm o soluie apoas a unei sri MX. La pulverizarea soluiei n
flacr pot s aib loc urmtoarele procese:

[M
+
X
-
]
soluie
[M
+
X
-
]
aerosol
(pulverizare)
[M
+
X
-
]
aerosol
[M
+
X
-
]
solid
(evaporare)
Prob netransfor-
mat n aerosol
55

[M
+
X
-
]
solid
[M
+
X
-
]
lichid
(topire)
[M
+
X
-
]
lichid
[M
+
X
-
]
gaz
(vaporizare)
[M
+
X
-
]
gaz
M
o
gaz
+ X
o
gaz
(disociere)

Procesele care pot avea loc pentru atomii M
o
n faza gazoas sunt:

M
o
+ h M
o
* (absorbie)
M
o
+ energie M
+
+ e (ionizare)
M
o
+ O
o
MO (oxidare)
M
o*
M
o
+ h (emisie)
M
o
+ Y
o
MY (combinare)

unde O reprezint oxigenul iar Y un atom strin.
Radiaiile sunt emise de atomii excitai M
o
* prin revenire la starea
fundamental. Este de dorit ca flacra s produc o populaie ct mai mare de
atomi neutri care s poat fi apoi excitai.
Ionizarea, oxidarea i combinarea sunt fenomene nedorite, deoarece acestea
reduc sau chiar elimin populaia de atomi liberi a elementului respectiv. Folosirea
unei flcri cu temperatura ridicat va determina ionizarea unui numr mare de
atomi, n cazul unor elemente uor ionizabile (ca metalele alcaline) i din acest
motiv, pentru acestea se recomand folosirea unei flcri cu temperatura mai
cobort.
Oxidarea i combinarea apar n special la utilizarea unor flcri cu
temperaturi mici i n cazul unor elemente ce formeaz oxizi refractari (aluminiu,
vanadiu, titan etc.). Pentru determinarea acestor elemente se utilizeaz flcri cu
temperatura ridicat (ca acetilen protoxid de azot) cu exces de combustibil
(atmosfer reductoare).

Interferene ce pot aprea n flcri
n principiu, la utilizarea flcrilor apar aceleai interferene, att n cazul
spectrometriei de absorbie atomic, ct i n cazul spectrometriei de emisie
atomic. Astfel, apar interferene datorit:
1) suprapunerii pariale sau totale a unor linii de emisie sau absorbie a
unor elemente;
2) absorbiei de fond, sau emisiei de fond;
3) efectelor de ionizare;
4) vaporizrii.
Interferenele datorit suprapunerii liniilor spectrale pot fi reduse prin
utilizarea unor monocromatoare cu rezoluie mai bun. Acest tip de interferene
este cel mai frecvent ntlnit n spectrometria de emisie atomic, deoarece
numeroase specii atomice aflate ntr-o flacr emit radiaii. Aceasta d natere unui
spectru complex care trebuie rezolvat. Probabilitatea suprapunerii liniilor spectrale
n emisie va fi mai mare dect n absorbie.
56

Spectrele de absorbie atomic sunt mai simple dect cele de emisie, iar
aceasta face ca i interferenele spectrale s fie mai reduse.
Absorbia de fond apare n spectrometria de absorbie atomic, drept urmare
a absorbiei moleculare i a difuziei radiaiei de ctre particulele solide
nevaporizate prezente n flacr, care provin din proba de analizat.
Absorbia molecular se datoreaz unor compui ce constituie matricea
chimic a probei i care sunt vaporizai mpreun cu elementul de analizat. O parte
din radiaia dat de lampa cu catod cavitar va fi absorbit nespecific de aceti
compui.
Se poate face o corecie a absorbiei de fond i datorit difuziei radiaiei
msurnd semnalul total de absorbie i scznd din el valoarea care nu se
datoreaz absorbiei de ctre atomi. Aceasta este posibil deoarece atomii absorb
radiaii ce corespund unor benzi spectrale mult mai nguste dect benzile de
absorbie molecular. De asemenea, difuzia radiaiei este practic constant pentru
radiaii din benzi spectrale mult mai largi dect cele pe care le absorb atomii.
Rezult deci c la lungimi de und apropiate de cele absorbite de atomi, absorbia
radiaiei de ctre acetia va fi practic zero, n timp ce scderea intensitii radiaiei
datorit absorbiei moleculare sau difuziei va fi aceeai cu cea de la lungimea de
und absorbit de atomi.
n spectrometria de emisie atomic poate aprea o radiaie de fond ce
nsoete radiaia emis de atomii de analizat. Radiaia de fond se poate datora
flcrii sau celorlali componeni ai probei de analizat. Pentru a determina
intensitatea radiaiei emise numai de atomii de analizat, din intensitatea total
emis la o lungime de und de o specie atomic se scade valoarea fondului msurat
n apropierea liniei spectrale respective.
Efecte de ionizare. n flacr poate s aib loc i o ionizare a atomilor unor
elemente. Metalele alcaline sunt n mod deosebit ionizate. Ionizarea reduce
populaia de atomi neutri aflai att n stare fundamental ct i n stare excitat i
deci va reduce sensibilitatea determinrilor.
Pentru a reduce ionizarea atomilor n flacr se adaug probelor un exces de
element uor ionizabil, ca de exemplu potasiu sau cesiu.
Interferene datorit vaporizrii. O serie de fosfai, silicai i aluminai ai
unor elemente sunt termic stabili. Pentru a aduce la stare de vapori atomici
elementul respectiv trebuie utilizate flcri suficient de calde, de exemplu o flacr
protoxid de azot/acetilen. Variaii ale temperaturii flcrii vor determina deplasri
ale echilibrului de disociere. Aceasta duce la o variaie a populaiei de atomi i a
sensibilitii att n cazul spectrometriei de emisie, ct i de absorbie atomic.
Metale ca: aluminiul, titanul i lantanul formeaz oxizi refractari care sunt foarte
stabili. Pentru a obine o populaie de atomi suficient de mare n cazul acestor
elemente este necesar s lucrm n flcri calde n exces de carburant, cu scopul de
a crea o atmosfer reductoare. Pentru a reduce interferenele datorit vaporizrii,
la probele de analizat se adaug elemente care se pot combina uor cu anionii ce
formeaz compui puin volatili.
57

Dezavantajele atomizrii i excitrii n flacr
Flacra ca sistem de atomizare i excitare prezint unele dezavantaje pe care
le prezentm n continuare:
La utilizarea unui arztor pentru care gazele sunt preamestecate nainte de a
ajunge n flacr, numai o mic parte din proba de analizat (aproximativ 10%)
ajunge n flacr sub form de aerosol, restul de prob separndu-se sub form
lichid.
Timpul n care atomii se gsesc efectiv n drumul optic al spectrometrului
este deosebit de scurt (aproximativ 10
-3
s), depinznd de viteza gazelor n flacr.
Are loc o diluare a vaporilor atomici formai, de ctre gazele transportoare.
Instabilitatea flcrii duce la un zgomot de fond destul de mare ce limiteaz
determinarea elementelor la concentraii mici.
n flacr se formeaz radicali liberi care se pot combina cu atomii, reducnd
numrul acestora.
1.4.2. Principiul aparaturii
Schema unui spectrometru de emisie atomic n flacr este prezentat n fig.
1.29. Proba de analizat n stare lichid este introdus sub forma unui aerosol n
flacr, n care are loc vaporizarea solventului, disocierea moleculelor,
transformarea elementului de analizat n atomi i excitarea acestora. Radiaiile
emise de atomi prin revenirea la stri electronice cu energie mai mic sunt trecute
printr-un sistem de separare (monocromator sau filtre) care izoleaz radiaia dorit.
Intensitatea acesteia este apoi msurat cu ajutorul detectorului. Semnalul furnizat
de detector (amplificat sau nu) ajunge la sistemul de evaluare care const de obicei
ntr-un instrument de msur sau un nregistrator.






Fig. 1.29. Schema unui spectrometru de emisie atomic n flacr.

58

1.4.3. Analiza cantitativ
n condiii de echilibru termic, raportul ntre numrul de atomi aflai n stare
excitat, N*, i numrul de atomi aflai n stare fundamental, N
o
, este dat de
relaia:

kT
E
o
*
o
*
e
g
g
N
N
A

= (1.33)
unde:
g* i g
o
sunt ponderile statistice ale nivelurilor respective, E, diferena de
energie ntre cele dou stri, k, constanta lui Boltzmann i T, temperatura absolut.
n tabelul 1.4 se dau valorile unor raporturi N*/N
o
pentru liniile de rezonan
ale unor elemente:

Tabelul 1.4. Valorile N*/N
o
pentru liniile de rezonan ale unor elemente
Element
Linii de
rezonan
E (eV)
N
*
/N
o


2000 K 3000 K
Na 589 2,10 9,86 10
-6
5,88 10
-4

Cs 852,1 1,45 4,44 10
-4
7,24 10
-3

Ca 422,7 2,93 1,21 10
-7
3,69 10
-5

Cu 324,8 3,82 4,82 10
-10
6,65 10
-7

Zn 213,9 5,80 7,45 10
-15
5,50 10
-10


Analiza cantitativ se face cu ajutorul unor curbe de calibrare obinute cu
soluii de concentraie cunoscut. n fig. 1.30 se prezint aspectul unei curbe de
calibrare obinute n spectrometria de emisie atomic. Curba de calibrare este
liniar numai pentru un anumit domeniu de concentraii. La concentraii mari,
curba se aplatizeaz datorit fenomenului de autoabsorbie. Autoabsorbia se
datoreaz faptului c atomii elementului de analizat din zona mai rece a flcrii
absorb radiaiile emise de ctre atomii din zona mai cald.
La concentraii mici se accentueaz influena fenomenului de ionizare care
duce la micorarea intensitii semnalului emis de atomi.
Pentru un debit constant al gazelor ce alimenteaz flacra, vor fi transportate
aceleai volume de soluie n flacr, iar semnalul nregistrat va depinde de
concentraia elementului de analizat din prob.
Pentru a elimina erorile ce pot aprea datorit efectelor de matrice, etaloanele
trebuie s aib o compoziie ct mai asemntoare cu a probelor de analizat sau se
poate utiliza metoda adausurilor.


59



Fig. 1.30. Aspectul unei curbe de calibrare obinute n spectrometria de emisie
atomic.

Spectrometria de emisie atomic n flacr se aplic cu cele mai bune
rezultate pentru determinarea elementelor alcaline, alcalino-pmntoase i a unor
lantanide pentru care sensibilitatea este mai mare dect n cazul absorbiei
atomice. Pentru celelalte elemente, cu puine excepii, sensibilitatea determinrilor
prin spectrometrie n flacr este mai mic sau cel mult egal cu a absorbiei
atomice. n ambele metode, deviaia relativ standard este de ordinul 0,5-1%.
Totui, spectrometria de emisie atomic n flacr prezint avantajul, fa de
spectrometria de absorbie atomic, prin faptul c permite determinarea simultan a
unui numr mare de elemente din aceeai prob.




1.5. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE ATOMIC


Fenomenul de absorbie a radiaiilor de ctre atomi a fost utilizat de ctre
fizicieni nc din prima parte a secolului al nousprezecelea, cnd Fraunhofer a
observat un numr de linii ntunecate n spectrul soarelui. Prima aplicaie analitic
a absorbiei atomice a fost la determinarea mercurului, de ctre Mller (n anul
1930); dar numai n 1955, cnd Walsh, n Australia i independent de acesta,
Alkemade i Milatz, n Olanda, au descoperit aplicabilitatea general a
fenomenului de absorbie atomic la determinarea unor elemente, a aprut practic
noua metod analitic, spectrometria de absorbie atomic.
Pentru efectuarea unei determinri prin absorbie atomic, radiaia de la sursa
de excitare, de obicei o lamp cu catod cavitar, este trecut prin vaporii atomici ai
elementului de determinat, obinui pe cale termic i se msoar atenuarea
intensitii radiaiei transmise.
Pentru a avea loc absorbia, energia radiaiei trebuie s fie egal cu diferena
de energie ntre starea cu energie mai mic, n care atomul se gsete i o stare cu
energie mai mare, corespunztoare unei stri excitate. Deoarece starea
60

fundamental este aproape ntotdeauna cu populaia cea mai numeroas, cel mai
important proces este absorbia de rezonan.
O parte din radiaia absorbit va fi emis spontan la aceeai lungime de und,
prin revenirea atomului la starea cu energie mai mic, dar, deoarece aceast
radiaie este emis izotropic, fraciunea ce ajunge la detectorul de radiaii este
practic nesemnificativ.
n fluorescena atomic, radiaia de la o surs de excitare este trecut prin
vaporii atomici, dar detectorul nu primete radiaia primar, ntre direcia de
observare i a fasciculului incident fiind un unghi, de obicei de 90
o
. O parte din
atomii excitai prin absorbie revin la starea fundamental prin emisie spontan de
fotoni. Astfel, fluorescena atomic difer de emisia atomic numai prin modul de
excitare.
n cazul spectrelor de emisie atomic, care sunt produse de obicei termic,
utiliznd flcri, arcuri sau scntei electrice, pentru un anumit element, numai o
mic parte din atomi trec n stare excitat i pot deci emite radiaii, iar aceast parte
este puternic influenat de temperatura sursei de excitare. Din acest motiv, mici
fluctuaii ale temperaturii determin variaii apreciabile ale intensitii radiaiilor
emise.
n cazul absorbiei atomice, important este populaia de atomi aflat n stare
fundamental, care este mai puin influenat de mici fluctuaii de temperatur.
Spectrul de emisie este de obicei mai complex dect cel de absorbie,
deoarece numeroase specii atomice prezente n sursa de excitare emit radiaii.
Aceste radiaii trebuie separate utiliznd un monocromator de rezoluie nalt.
Probabilitatea suprapunerii liniilor spectrale n emisie este mult mai mare dect n
absorbie.
Spre deosebire de spectrele de emisie, spectrele de absorbie sunt mai simple,
pentru rezolvarea lor necesitnd utilizarea unui monocromator mai puin
pretenios.
1.5.1. Absorbia radiaiilor de ctre atomi
La trecerea unui fascicul de radiaii de diferite lungimi de und printr-o
celul ce conine vapori atomici ai unui element, radiaia transmis va arta o
distribuie n funcie de frecven dup cum se vede n fig. 1.31.
Specia atomic posed deci o linie de absorbie la frecvena
o
, unde
o
este
frecvena centrului liniei.
Intensitatea radiaiei transmise de ctre atomi (sub form de vapori) la o
anumit frecven, , este dat de relaia:


( )
l k
o
e I I
v

v v
=
(1.34)
61

}
k
v
d
v
=
t
e
2
mc
N
v
f

Fig. 1.31. Profilul de absorbie al unei linii spectrale.

unde I
o()
i I

reprezint intensitatea radiaiei incidente, respectiv transmise, de


frecven , k

este coeficientul de absorbie al vaporilor atomici pentru radiaia de


frecven , iar l este grosimea stratului absorbant.
Absorbia integral a liniei spectrale este dat de relaia:


(1.35)


unde N

este numrul de atomi pe cm


3
care pot absorbi n domeniul de frecven
corespunztor liniei spectrale, f este tria oscilatorului (numrul mediu de
electroni pe atom ce pot fi excitai de radiaia incident), e este sarcina unui
electron, c este viteza luminii i m masa unui electron.
Limea natural a unei linii spectrale este de ordinul 10
-5
nm. n realitate
limea unei linii spectrale de absorbie a atomilor aflai ntr-o flacr sau alt sistem
de atomizare este mai mare, ajungnd la 0,01-0,001 nm. Lirea liniei apare
datorit autoabsorbiei, efectului Doppler i proceselor de coliziune, lire Lorentz
(capitolul 1.1.2).
n majoritatea cazurilor, cel mai important factor ce contribuie la lirea
liniilor spectrale se datoreaz ciocnirii atomilor de analizat cu atomii gazelor
strine.
Spre deosebire de linia de absorbie a atomilor ntr-o surs de atomizare, care
funcioneaz la presiunea atmosferic, linia de emisie a unei lmpi cu catod cavitar
este mult mai ngust, presiunea n interiorul acesteia fiind de ordinul 1 torr i deci
numrul de ciocniri este mult mai redus.
n fig. 1.32 se prezint, pentru acelai element, profilul unei linii de absorbie
n flacr i respectiv al unei linii de emisie provenite de la o lamp cu catod
cavitar:


62





Fig. 1.32. Profilul unei linii de
absorbie (1) n flacr i al unei
linii de emisie (2) de la o lamp cu
catod cavitar.





Din relaia (1.35) rezult c absorbia radiaiei este proporional cu numrul
de atomi din sursa de atomizare, deci cu concentraia. Determinarea absorbiei
integrate este ns foarte dificil, deoarece necesit msurarea valorilor I

, pentru
un mare numr de frecvene, corespunznd liniei spectrale de absorbie, deci
utilizarea unui spectrometru cu o rezoluie foarte nalt.
Se poate proceda, ns, n mod mult mai simplu, determinnd absorbia unei
radiaii cu o band spectral foarte ngust, plasat exact la maximul benzii de
absorbie de ctre atomi. O astfel de radiaie este furnizat de lampa cu catod
cavitar, ce are catodul din acelai element cu elementul de analizat. Se va msura
n acest caz coeficientul de absorbie maxim, k
o
, la centrul liniei de absorbie,
care este proporional cu numrul de atomi capabili s absoarb radiaia, aflai n
sursa de atomizare.


v v
KN k
o
=
(1.36)

deci absorbana:


( )
c ' K
log
l KN
I
I
log A
o
o
o
= = =
10
v
v
v
(1.37)

unde I
o
i I reprezint intensitatea incident, respectiv transmis a radiaiei
provenite de la lampa cu catod cavitar, iar C este concentraia elementului de
analizat n vaporii atomici ai sursei de atomizare (C fiind proporional cu N

).
Radiaiile emise de lampa cu catod cavitar vor trebui s aib o band
spectral mai mic de 0,001 nm, care este limea unor linii nguste de absorbie,
care exist n spectrele de absorbie ale unor atomi.




63

1.5.2. Principiul aparaturii

n fig. 1.33 este prezentat schema bloc i principiul de funcionare al unui
spectrometru de absorbie atomic. Pentru simplificarea reprezentrii s-a
considerat c linia de emisie a lmpii cu catod cavitar i linia de absorbie a
radiaiei de ctre atomi au aceeai lime a benzii spectrale.
Prin msurarea intensitii radiaiei transmise I = (1 x)I
o
, se poate
determina absorbana ce are valoarea A =log I
o
/I i este proporional cu
concentraia speciei atomice n sistemul de atomizare (relaia (1.37)).


Spectrul de emisie al lmpii
cu catod cavitar. I
o

intensitatea liniei de
rezonan emise
Absorbia liniei de rezonan
de ctre atomi

Spectrul dup trecerea prin
sistemul de atomizare
Banda spectral a
monocromatorului
Linia de rezonan ce ajunge
la detector



Fig. 1.33. Schema bloc i principiul de funcionare ale unui spectrometru
de absorbie atomic.

Cel mai utilizat sistem de atomizare este flacra, fiind uor de folosit. Acest
sistem de atomizare precum i interferenele care pot aprea la utilizarea lui au fost
discutate n cadrul cap. 1.4.1. Pentru evitarea unora dintre deficienele flcrilor ca
sisteme de atomizare, s-au propus sistemele de atomizare electrotermice. Dintre
acestea menionm cuptoarele de grafit tip Lvov i Massmann i filamentul de
crbune tip West.
La utilizarea unui sistem de atomizare electrotermic toi atomii de analizat
dintr-o prob sunt transformai n vapori atomici practic n acelai timp i rmn n
sistemul de atomizare putndu-se msura absorbia de ctre acetia a radiaiei date
de ctre lampa cu catod cavitar. Din acest motiv, sensibilitatea determinrilor este
mare (10
-8
10
-11
g). Pentru efectuarea unei determinri sunt necesare probe
lichide cu volum foarte mic (5-10 L) sau se pot analiza chiar probe solide.
64

Efectele de matrice sunt ns mai importante dect n flacr, iar eroarea relativ a
determinrilor este de 5-10% (mai mare dect n flacr).
Cel mai utilizat sistem de atomizare electrotermic este cuptorul de tip
Massmann, prezentat n fig. 1.34.



Fig. 1.34. Seciune transversal printr-un cuptor de grafit de tip Massmann.

Cuptorul de grafit este de fapt un tub de grafit cu lungimea de aproximativ 30
mm i diametrul de 8 mm plasat orizontal, astfel ca radiaia de la lampa cu catod
cavitar s poat trece prin el. n interior, tubul este acoperit cu grafit pirolitic,
pentru ca probele lichide sau vaporii rezultai n urma descompunerii termice s nu
ptrund n el. Acesta este conectat la capete la o surs electric de tensiune mic i
intensitate mare. Probele lichide sunt introduse cu o sering printr-un orificiu n
partea central a tubului, prin ndeprtarea ferestrei mobile (fig. 1.34). Probele
solide pot fi introduse pe la capetele acestuia n micronacele de tungsten. Un
sistem de rcire cu ap, plasat n jurul tubului, permite revenirea acestuia la
temperatura ambiant n scurt timp dup efectuarea unei analize. Un flux de gaz
inert (argon sau azot) este introdus pe la capetele tubului, avnd rolul de a
ndeprta din interiorul acestuia componentele matricei vaporizate din prob n
etapa de calcinare i care, n etapa de atomizare, ar putea da natere unei absorbii
de fond pronunate. Un al doilea flux de gaz inert circul ntre tubul de grafit i
mantaua exterioar, aceasta avnd rolul de a evita oxidarea grafitului la
temperatura de lucru cu oxigenul din aer.
Pentru efectuarea unei analize se introduce o cantitate de prob n cuptorul de
grafit i acesta este nclzit dup un anumit program de temperatur. Programul de
temperatur este stabilit n funcie de natura probei i const din trei etape: uscare,
calcinare i atomizare.
65

n prima etap, proba este nclzit la 110-125
o
C, timp de 20-30 s pentru
evaporarea solventului i a componentelor mai volatile ale matricei.
n etapa a doua, temperatura este mrit, avnd loc volatilizarea unor
compui i piroliza componenilor ce constituie matricea probei, ca de exemplu,
compuii organici.
n etapa a treia, proba este nclzit la temperaturi nalte (2000-3000
o
C),
cnd are loc transformarea n vapori atomici a elementului de analizat. n aceast
etap se nregistreaz absorbia radiaiei emise de lampa cu catod cavitar de ctre
vaporii atomici, n funcie de timp.
Durata total a atomizrii este de ordinul 4-8 s. Semnalul nregistrat este sub
forma unui maxim de absorbie a crui nlime (sau suprafa pentru determinri
mai precise) este proporional cu cantitatea din elementul de analizat.
Limita de detecie pentru absorbia atomic fr flacr este cu 2-3 ordine de
mrime mai cobort (deci concentraiile determinate sunt mai mici) dect pentru
absorbia atomic n flacr, atomii volatilizai rmnnd un timp mult mai lung n
drumul optic al radiaiei provenite de la lampa cu catod cavitar.

1.5.3. Analiza cantitativ
n fig. 1.35 se prezint tipuri de grafice de calibrare pe baza crora se pot
face determinri cantitative prin absorbie atomic. Domeniul de concentraii
pentru un element care poate fi determinat este de 4-5 ordine de mrime.



Fig. 1.35. Tipuri de grafice de calibrare n spectrometria de absorbie atomic.
Explicaii n text.

Pentru concentraii mari, frecvent apare o curbur a dreptei spre axa de
concentraii (curb B). Mai puin frecvent, graficul de calibrare este curb pe
ntregul domeniu de concentraii (curba D). Curba A nu trece prin origine datorit
absorbiei nespecifice, adic absorbiei radiaiei date de lampa cu catod cavitar nu
numai de ctre atomii probei de analizat, ci i de alte specii prezente n flacr.
66

Aceasta determin existena unei absorbii de fond.
Legea Lambert-Beer este respectat pentru o radiaie cu o band spectral
foarte ngust practic monocromatic, dac ns monocromatorul nu separ o
radiaie practic monocromatic, va rezulta o curb de calibrare nelinear (curbele B
i D). Radiaia poate fi nemonocromatic datorit faptului c prin monocromator
trec mai multe linii cu coeficieni de absorbie diferii (multiplei nerezolvai sau
linii care nu sunt absorbite). De asemenea, se obine o curb de calibrare de tip D
atunci cnd limea liniei de emisie este egal sau mai mare dect a liniei de
absorbie (aceasta datorit variaiei lui k cu frecvena.
Procesele de ionizare n sursa de atomizare determin o curbare a dreptei de
calibrare spre axa absorbanelor (curba C). Aceasta deoarece ionizarea atomilor
crete la concentraii mici i descrete la concentraii mari.
Interferenele care pot avea loc la atomizarea probelor n flacr au fost
discutate n capitolul 1.4.1. Din cauza limii reduse a liniilor atomice de absorbie
ale elementelor, numai n puine cazuri apare o suprapunere a acestora.
Interferenele datorit blocrii atomilor de analizat n compui care nu sunt
volatilizai i descompui n atomi (interferene chimice) i interferenele datorit
ionizrii pot fi eliminate prin introducerea n proba de analizat a unui element ce se
combin cu specia ce formeaz compusul greu disociabil i/sau a unui element
uor ionizabil.
Prin absorbie atomic se pot determina aproximativ 60 elemente.
Sensibilitatea i limita de detecie
Prin sensibilitate n cazul acestei metode de analiz se nelege concentraia
unui element n g/mL (sau ppm) care produce un semnal cu valoarea de 99% n
transmitan, deci o scdere a transmitanei cu 1% (la care corespunde o valoare a
absorbanei de 0,0044, A = log (1/0.99)).
Limita de detecie se definete drept concentraia elementului care produce
un semnal de dou ori (sau de trei ori) mai mare dect deviaia standard a
zgomotului de fond al aparatului. Limita de detecie este mai cobort dect
sensibilitatea, dar la aceste concentraii nu se pot face determinri cantitative.
n tabelul 1.5 se prezint sensibilitatea determinrii unor elemente prin
absorbie atomic n flacr i cu atomizare electrotermic.
Valorile prezentate n tabelul 1.5 nu trebuie luate n mod absolut, ele
depinznd de o serie de factori cum ar fi limea benzii spectrale a
monocromatorului, temperatura sursei de atomizare, sensibilitatea detectorului
aparatului etc.
La utilizarea cuptorului de grafit drept sistem de atomizare, att sensibilitatea
ct i limita de detecie sunt n general cu aproximativ dou-trei ordine de mrime
mai coborte (deci sensibilitatea determinrilor este mai mare) dect la utilizarea
flcrii.



67

Tabelul 1.5. Sensibilitatea determinrii unor elemente prin absorbie atomic
n flacr i cu atomizare electrotermic
Element AA n flacr (ppm)
AA cu atomizare
electrotermic (ppm)
As 0,1 0,0002
Ba 0,2 0,00006
Ca 0,02 0,0004
Cd 0,01 0,000003
Co 0,07 0,00006
Cu 0,04 0,00004
Fe 0,06 0,000008
Hg 2,20 0,0005
Mg 0,003 0,000007
Pb 0,1 0,00005
Zn 0,009 0,000002

Dei selectivitatea determinrilor prin absorbie atomic este bun, n unele
cazuri pot s apar efecte de matrice. Pentru ca efectele de matrice s nu
denatureze rezultatul analizei, este necesar ca etaloanele i probele de analizat s
aib o compoziie ct mai asemntoare. De asemenea, se poate aplica i metoda
adaosurilor.



1.6. SPECTROMETRIA DE RAZE X


Razele X pot fi utilizate n chimia analitic pentru analize calitative,
cantitative i de structur.
ntr-o prim categorie de metode, analiza se face pe baza razelor X emise de
atomii probei. Prin determinarea lungimilor de und ale radiaiilor emise se poate
face o analiz calitativ, iar prin determinarea intensitii acestora, o analiz
cantitativ.
ntr-o a doua categorie de metode, analiza se face pe baza razelor X absorbite
de atomii probei de analizat. n spectrele de absorbie a razelor X apar
discontinuiti caracteristice la anumite lungimi de und, pentru care energia
acestora este suficient pentru a smulge un electron de pe un strat interior al
68

atomului (capitolul 1.1.3.2). Pe baza poziiei acestor discontinuiti se poate face
analiza calitativ. Prin msurarea coeficientului de absorbie de mas se poate face
analiza cantitativ.
Spectrele de emisie i absorbie a razelor X pentru un anumit element sunt
mult mai simple dect cele de emisie i absorbie n domeniul vizibil i ultraviolet.
Aceasta deoarece spectrele de raze X apar n urma unor tranziii ntre stri
energetice ale electronilor din straturile interne ale atomului, numrul de electroni,
de stri energetice i de tranziii permise fiind mai redus pentru aceste straturi.
Cea de a treia categorie de metode se bazeaz pe difracia razelor X de ctre
planurile de atomi ale unor cristale. Aceast metod se utilizeaz n special pentru
analize de structur i pentru determinarea fazelor cristaline, dar poate fi utilizat i
pentru determinri cantitative. Difracia razelor X nu aparine metodelor
spectrometrice de analiz i va fi discutat ntr-un capitol separat.


1.6.1. Principiul aparaturii

Pentru efectuarea unor determinri utiliznd raze X sunt necesare: o surs de
radiaii, un sistem de separare a radiaiilor i un detector.
O surs de raze X (numit i tub de raze X) const dintr-o incint vidat n
care se gsete un catod nclzit (ce emite electroni) i un anod (fig. 1.36).
Electronii emii de catod sunt accelerai de un cmp electric de nalt tensiune spre
anod. ntre catod i anod se aplic o diferen de potenial de ordinul 10.000-
100.000 V. Electronii transfer energia lor cinetic atomilor anodului. O parte din
energia primit este emis sub forma unui spectru continuu, aa numita radiaie de
frnare (fig. 1.37). Ea se datoreaz interaciunii electronilor accelerai cu
nveliurile de electroni ale atomilor.











Fig. 1.36. Schema unui tub de raze X.

fascicul de electroni
69



Fig. 1.37. Spectrul emis de un tub de raze X.

Dac electronii care bombardeaz anodul au o energie suficient ei pot
smulge electroni de pe straturile interioare ale atomilor anodului. Locul rmas liber
va fi ocupat imediat de un electron de pe un strat mai ndeprtat de nucleu, care va
fi ocupat n continuare de un electron de pe un strat i mai ndeprtat (procesul
repetndu-se).
Atomul ionizat revine la starea normal ntr-o serie de etape, n cazul
fiecreia emindu-se radiaii. n ultimele etape ns, fiind vorba de electroni din
nveliurile exterioare, se vor emite radiaii din domeniul vizibil i UV. Radiaiile
emise se vor suprapune peste spectrul continuu dnd natere spectrului de raze X
caracteristic atomilor anodului.
Spectrul de raze X al unui element poate fi obinut i prin iradierea probei
cu un fascicul de raze X ce provine de la o surs primar ce emite radiaii cu o
energie suficient pentru a ndeprta electroni de pe nveliurile interne ale
atomilor. Fenomenul se numete fluorescen de raze X.
Razele X mai pot fi produse i prin excitarea atomilor de ctre radiaii ce
provin de la surse radioactive, ca de exemplu
55
Fe sau
238
Pu.
Din razele X emise de o surs se obine un fascicul paralel folosind
colimatoare constituite din mai multe plci metalice plasate paralel la mic
distan, care nu vor lsa s treac dect radiaiile paralele cu acestea.
Separarea razelor X n funcie de lungimea de und se face cu cristale
analizoare. n fig. 1.39 se prezint drumul parcurs de razele X la reflexia pe
planurile unui cristal. Vor fi separate radiaiile cu acele lungimi de und care
prezint o interferen constructiv i pentru care este respectat relaia lui Bragg:

u sin d n 2 = (1.38)


unde:
70

d este distana dintre planurile cristalului, este unghiul de inciden iar n este un
numr ntreg reprezentnd ordinul de difracie.


Fig. 1.38. Reflexia razelor X pe planurile unui cristal.

Din fig. 1.38 se vede c radiaia reflectat de ctre al doilea plan al cristalului
analizor parcurge o distan CBDn plus fa de radiaia reflectat de primul plan.
Unghiurile CAB i BAD sunt egale cu . Deci u sin AB BD CB = = , iar AB
este distana interplanar d. u sin d CBD 2 = va trebui s fie un multiplu ntreg
al lungimii de und a razelor X reflectate pentru ca acestea s fie n faz i s
interfere constructiv. Radiaiile cu alte lungimi de und vor suferi o interferen
distructiv.
Unghiul ntre prelungirea direciei fasciculului incident i a celui reflectat este
de 2. Pentru a separa razele X emise de prob n funcie de lungimea de und,
cristalul analizor este montat pe un gonimetru (instrument ce msoar unghiuri) i
este rotit aa cum se prezint n fig. 1.40. n tabelul 1.6 se prezint mai multe
cristale analizoare i caracteristicile acestora.

Tabelul 1.6. Cristale analizoare
Cristal Distana interplanar
d, (nm)
Domeniul de utilizare (nm)
Maximum Minimum
Topaz 0,136 0,262 0,0189
Fluorur de Li 0,201 0,389 0,0281
Aluminiu 0,234 0,452 0,0326
Clorur de Na 0,282 0,545 0,0393
Cuar 0,334 0,646 0,0466
71

Grafit pirolitic 0,671 1,296 0,0936
Mic 0,996 1,925 0,139
Palmitat de
plumb
4,560 7,830 0,639

Detectorii utilizai pentru razele X pot fi: camere de ionizare, contori
Geiger-Muller, contori proporionali, detectori cu scintilaie, cu semiconductori i
emulsii fotografice.

1.6.2. Metode directe de analiz cu raze X

Se pot face analize calitative i cantitative pe baza spectrului de raze X emis
de o prob plasat pe anodul unui tub de raze X. Metoda are ns dezavantaje:
tubul de raze X trebuie vidat la efectuarea fiecrei analize, este necesar un anod
demontabil, la interacia cu fasciculul de electroni proba se poate topi sau se poate
volatiliza selectiv etc. Aceast metod de analiz are o utilizare restrns.
Microsonda electronic. n cazul acestei metode, pe o suprafa foarte mic
a probei de analizat, cu diametru de aproximativ 1 m, este focalizat un fascicul de
electroni. Bombardamentul cu electroni excit atomii, care emit spectrul
caracteristic de raze X.
Limita de detecie este de ordinul 10
-14
g. Exactitatea relativ este 1-2% cu
condiia ca elementul de analizat s fie n concentraie mai mare (de cteva
procente). Prin aceast metod se pot analiza straturi foarte subiri, fasciculul de
electroni ptrunznd numai la 1-2 m n proba de analizat.
n fig. 1.39 se prezint schema unei microsonde electronice. Fasciculul de
electroni este focalizat cu ajutorul unor lentile magnetice pe suprafaa probei.
Incinta n care se gsete proba este vidat.
Tot din cadrul metodelor directe de analiz cu raze X fac parte i metodele
bazate pe absorbia razelor X, pe care ns nu le vom discuta, avnd o utilizare
destul de restrns.



72



Fig. 1.39. Schema unei microsonde electronice.



1.6.3. Analiza prin fluorescen de raze X

Metoda const n producerea spectrului de raze X caracteristic probei de
analizat, folosind drept surs de excitare un fascicul de raze X. Fasciculul incident
trebuie s aib o intensitate mare deoarece radiaiile X de fluorescen sunt
aproximativ de 1000 de ori mai puin intense dect cele obinute prin bombardarea
direct cu electroni. De asemenea, pentru a excita fluorescena unui element,
radiaiile primare trebuie s aib o lungime de und mai mic (energie mai mare)
dect cele ale discontinuitilor ce apar n spectrul de absorbie al elementului
respectiv.
n fig. 1.40 se prezint schema unui spectrometru de fluorescen de raze X.
Razele X de fluorescen sunt colimate pe suprafaa cristalului analizor care
realizeaz separarea acestora n funcie de lungimea de und, conform relaiei lui
Bragg. Radiaiile reflectate de planurile cristalului trec printr-un al doilea colimator
i ajung la detectorul de radiaii. La rotirea cristalului cu unghiul detectorul se
rotete cu unghiul 2. n acest fel se obine spectrul de raze X, n care se reprezint
intensitatea radiaiilor X n funcie de unghiul 2.
Analiza calitativ se face pe baza poziiei picurilor de fluorescen n spectru.
Analiza cantitativ se face determinnd intensitatea radiaiilor caracteristice emise
de un element. Pentru obinerea unor rezultate corecte, de mare importan este
pregtirea probelor pentru analiz. La analiza unor probe solide, acestea trebuie s
fie ntr-o stare fizic ct mai asemntoare cu a standardelor.
73




Fig. 1.40. Schema unui spectrometru de fluorescen de raze X.

Este important forma i mrimea particulelor, deoarece acestea determin
gradul n care razele X incidente sunt absorbite sau mprtiate. Pulberile sunt
presate sub forma unor pastile pentru care se face analiza. Erorile sunt mult mai
reduse dac se lucreaz cu probe lichide.
Pentru a reduce efectele de matrice, proba se poate dilua cu un material ce
are o absorbie redus, ca de exemplu: amidon, carbonat de litiu, borax etc. Efectul
elementelor ce constituie matricea este micorat apreciabil datorit dilurii, avnd
loc totodat o scdere corespunztoare a intensitii radiaiilor de fluorescen. O
alt metod pentru a reduce efectele de matrice onst n folosirea unui standard
intern, fa de care se msoar intensitatea radiaiiilor de fluorescen. Este ns
necesar ca efectele de matrice s aib aceeai influen asupra radiaiilor emise de
standardul intern i de elementul de analizat.
Fluorescena de raze X este o metod precis de analiz. Pentru componenii
aflai n concentraie mare, precizia este de acelai ordin de mrime cu a metodelor
chimice de analiz. n general, pentru a putea fi determinat prin aceast metod, un
element trebuie s fie n concentraie mai mare de 0,01-0,1%. Limita absolut de
detecie prin fluorescen cu raze X este ns 10
-8
g.
Metoda este selectiv, aprnd foarte puine interferene spectrale datorit
simplitii relative a spectrului de raze X. Alt avantaj este acela c metoda este
nedistructiv.





74

1.7. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE
MOLECULAR N DOMENIUL VIZIBIL I
ULTRAVIOLET


1.7.1. Legea fundamental a absorbiei radiaiei

n studiile cantitative de absorbie, un fascicul al radiaiei este trecut prin
proba de analizat i se msoar intensitatea radiaiei transmise. S considerm c
radiaia folosit este monocromatic i c scderea intensitii radiaiei transmise
se datoreaz numai absorbiei. Proba de analizat se introduce ntr-o celul cu fee
plan paralele. Determinrile se fac de obicei fa de o prob de referin, de
comparaie, coninut ntr-o celul de aceleai dimensiuni cu cea n care se afl
proba de analizat. Proba de referin conine n mod obinuit solventul i
constituenii probei, cu excepia speciei a crei absorban o msurm. Cu o
asemenea soluie de referin n celul, intensitatea radiaiei transmise reprezint
intensitatea radiaiei incidente minus cea pierdut prin difuzie, reflecie i orice
absorbie datorat altor constitueni.
S notm intensitatea radiaiei incidente cu I
0
i cea a radiaiei transmise prin
proba de analizat cu I
t
.
Referindu-ne la fig. 1.41, dI reprezint scderea intensitii radiaiei n stratul
infinit mic dl. dI este proporional cu I, unde I, este intensitatea radiaiei n acel
punct. Scriem -dI deoarece este vorba de o scdere a intensitii radiaiei.

(1.39)

unde k este o constant de proporionalitate caracteristic speciei absorbante i
energiei fotonilor. Rearanjnd relaia (1.39) obinem:


(1.40)


Integrnd ecuaia (1.40) pentru ntreg drumul parcurs de radiaii, l:


} }
=
t
I
I
dl k
I
dI
0
1
0
(1.41)

obinem:

dI = kIdl
dI
I
= kdl
75


kl
I
I
t
=
0
ln sau
kl
t
e I I

=
0
(1.42)

care este legea Lambert.











Fig. 41. Procesul de absorbie al radiaiei.

Trecnd de la logaritmi naturali la cei n baza 10, obinem:

kl
I
I
t
=
0
log 303 , 2 sau l k
I
I
t
' log
0
= (1.43)

unde k' = 0,4343 k. Foarte frecvent intensitatea radiaiei transmise se noteaz cu I
(fr indicele t) notaie pe care o vom folosi n continuare.
Beer a stabilit c atunci cnd absorbia radiaiei se datoreaz unei specii
dizolvate, constanta de proporionalitate k' este funcie de concentraia acesteia:

ac ' k = (1.44)

cele dou legi combinate devin:

acl
I
I
log =
0
(1.45)

care este expresia legii Lambert-Beer. Dac grosimea probei este exprimat n cm
i concentraia n grame de substan pe litru de soluie, constanta a este numit
absorbtivitate specific i se exprim n L g
-1
cm
-1
. Frecvent c se exprim n moli/L
iar l n cm, n aceste condiii constanta a se noteaz cu , care se numete
absorbtivitate molar sau coeficient molar de absorbie. Ecuaia (1.45) devine:
76

A cl
I
I
log = = c
0
(1.46)

unde A se numete absorban.
se exprim n L mol
-1
cm
-1
. Valoarea este caracteristic unei specii absorbante,
ntr-un mediu (solvent) anumit i pentru o anumit lungime de und. Valoarea
este independent de concentraie.
Raportul I/I
0
se numete transmitan (notat cu T) care este fraciunea din
intensitatea radiaiei incidente ce este transmis de prob. Transmitana
procentual este definit ca T x 100 i se noteaz cu T%:

A cl
I
I
log T log = = = c
0
(1.47)

n deducerea legii Lambert-Beer, exprimat prin relaia (1.46) s-a considerat
c:
- radiaia incident este monocromatic,
- speciile absorbante acioneaz independent una de alta n procesul de
absorbie.
Ecuaia (1.46) ne indic faptul c, msurnd absorbana sau transmitana se
poate determina concentraia dac se cunosc i l.
Relaiile dintre absorban, transmitan i concentraie la o anumit lungime
de und sunt ilustrate n fig. 1.42.




Fig. 1.42. Absorbana i transmitana
reprezentate n funcie de concentraie la o
lungime de und i grosime de strat date.





n fig. 1.43 este prezentat relaia ntre transmitana la sut i absorban.




Fig. 1.43. Relaia ntre T% i A.
77

Sisteme multicomponente
Pentru sisteme cu mai multe componente absorbante se poate considera c, n
procesul de absorbie, acestea acioneaz independent una de alta i absorbanele
lor sunt aditive. O asemenea situaie este prezentat n fig. 1.44:

Fig. 1.44. Spectrele a dou componente care se suprapun parial i spectrul
amestecului.

n general, dac sunt n componente, expresia absorbanei amestecului la o
lungime de und se poate scrie astfel:

(1.48)


n principiu, sunt necesare n msurtori de absorban la n lungimi de und
pentru a determina concentraia a n componente ntr-un amestec. Lungimile de
und trebuiesc astfel alese nct s fie diferene ct mai mari ntre absorbtivitile
molare ale diferitelor specii la respectiv. Se obine un sistem de n ecuaii cu n
necunoscute (concentraiile c
n
) prin a crui rezolvare se afl concentraiile
compuilor de analizat.

Abateri de la legea Lambert-Beer
Legea Lambert-Beer se aplic pentru orice mediu solid, lichid sau gazos cu
condiia ca radiaia folosit s fie monocromatic i ca scderea intensitii acesteia
s se datoreasc numai absorbiei. Abaterile de la legea Lambert-Beer sunt de trei
tipuri: reale, instrumentale i chimice.
Abateri reale apar pentru sistemele n care concentraia speciei absorbante
este prea mare i are loc o modificare a indicelui de refracie al soluiei de analizat
fa de cel al probei de comparaie (o situaie similar apare i la utilizarea unor
amestecuri de solveni organici cu ap). Din acest motiv, n general, concentraia
A

n
A
n

n
c
n

c
n
l
78

speciei de analizat trebuie s fie mai mic de 10
-2
M.
Abaterile instrumentale se datoreaz n primul rnd faptului c nu se
utilizeaz o radiaie strict monocromatic pentru efectuarea msurtorilor, aa cum
s-a avut n vedere la deducerea legii Lambert-Beer. Este practic imposibil de a
separa o radiaie perfect monocromatic dintr-o surs continu. Se obine o band a
crei lime depinde de elementul dispersiv i de limea fantelor.
Cu excepia cazului cnd absorbtivitatea molar este aceeai pentru diferitele
lungimi de und din cadrul benzii spectrale utilizate, absorbana msurat ar trebui
s fie o medie a absorbanelor din cadrul benzii spectrale. Datorit ns naturii
logaritmice a absorbanei, aceasta nu este o adevrat medie. Vor aprea erori
atunci cnd absorbtivitile molare variaz semnificativ pentru radiaiile de diferite
lungimi de und din cadrul benzii spectrale, deci atunci cnd determinrile nu se
fac la un maxim de absorbie ci pe poriunea nclinat a curbei de absorbie (fig.
1.45).

c/2


Fig. 1.45. Efectul utilizrii unei benzi spectrale. (a) Un component la dou
concentraii, (b) Curb de calibrare liniar la
1
,
(c) Curb de calibrare
nelinear la
2


Este de dorit s lucrm cu benzi spectrale nguste pentru exactitate mare, dar
pe msur ce banda se ngusteaz, la detector ajunge o energie din ce n ce mai
redus, ceea ce face mai dificile determinrile. Abaterile de la legea Lambert-Beer
sunt mai mari pentru benzi spectrale largi dect pentru benzi spectrale nguste.
Alte cauze de natur instrumental ce determin abateri de la legea Lambert-
Beer includ: 1) variaia n sensibilitatea detectorului; 2) variaia n timp a
intensitii radiaiei emise de surs; 3) radiaia parazit a aparatului care ajunge la
detector.
Celulele n care se fac determinrile de absorban trebuie s fie perfect
79

calibrate i foarte curate, de asemenea, soluiile utilizate nu trebuie s conin
suspensii, care ar conduce la scderea intensitii fasciculului incident prin difuzia
radiaiei.
Abateri chimice. Sunt determinate de deplasarea unui echilibru chimic n
care sunt implicate speciile absorbante.
S considerm cazul unui acid slab HA care, n soluie apoas poate disocia.
Absorbana soluiei la o anumit lungime de und va fi dat de relaia:

( ) cl cl A
A HA
o c o c + = 1

c este egal cu [HA] + [A
-
],
A
-
HA
, iar este gradul de disociere. La diluarea
soluiei acidului respectiv, va varia, fiind funcie de concentraie, ceea ce face s
nu fie o dependen liniar ntre absorban i concentraie, deci s nu se respecte
legea Lambert-Beer.
O soluie apoas de bicromat ne ofer un alt exemplu de nerespectare a legii
Lambert-Beer. n acest sistem sunt prezente speciile CrO
4
2
-
, HCrO
4
-
, Cr
2
O
7
2
-
care,
toate absorb radiaii, avnd ns absorbtiviti molare diferite la o anumit lungime
de und. Concentraia relativ a celor trei specii depinde de concentraia total a
Cr(VI) i de pH. n soluie sunt prezente echilibrele:

2CrO
4
2-
+ 2H
3
O
+
2HCrO
4
-
+ 2H
2
O Cr
2
O
7
2-
+ 3H
2
O

La diluarea soluiei cu ap, vor aprea abateri de la legea Lambert-Beer. n
mediu puternic acid, practic tot Cr(VI) este trecut n Cr
2
O
7
2-
iar n mediu puternic
bazic, Cr(VI) este prezent sub forma CrO
4
2-
. n ambele cazuri, legea Lambert-Beer
se va respecta.
Temperatura influeneaz valorile absorbanei i n general creterea ei are un
efect batocrom asupra maximelor de absorbie. Totui, nu este necesar de a se lucra
n regim termostatat dect pentru determinri foarte precise, fluctuaii mici ale
temperaturii probelor (+1-2
o
C) influennd n mic msur valorile absorbanelor.



1.7.2. Eroarea fotometric. Condiii pentru o eroare minim la
determinarea absorbanei

Exist ntotdeauna o eroare n determinarea absorbanei sau transmitanei.
Avem astfel o eroare de citire a scalei instrumentului de msur, care depinde de
un numr de factori instrumentali i de zona scalei n care se face citirea. Aceste
erori sunt mai pronunate pentru valori mari ale absorbanei. Erorile datorit citirii
scalei instrumentului de msur pot fi reduse mult prin extensia scalei pe cale
optic, mecanic sau electronic. La valori mici ale absorbanei, intensitile
80

radiaiilor incidente i transmise sunt foarte apropiate, din acest motiv va fi o
eroare relativ mare n determinarea absorbanei pe care instrumentul o determin
ca logaritmul raportului celor dou intensiti (relaia 1.46)). Pe de alt parte, la
valori mari ale absorbanei, intensitatea radiaiei ce ajunge la detector este prea
mic pentru a putea fi msurat exact.
Pentru instrumentele moderne, factorul principal care limiteaz precizia
determinrilor cantitative este zgomotul de fond al aparatului, aceasta chiar n
condiiile unui mod de operare foarte atent. Zgomotul de fond reprezentnd de fapt
fluctuaiile aleatoare ale semnalului ce ajunge la detector i ale rspunsului
detectorului.
S discutm influena zgomotului de fond al rspunsului detectorului asupra
preciziei determinrilor. Zgomotul de fond al rspunsului detectorului poate fi
independent de intensitatea radiaiei ce ajunge la el, cum este cazul detectorilor
termici (termocuple, bolometre, celule pneumatice Golay) sau s fie proporional
cu rdcina ptrat a intensitii radiaiei ce ajunge la el, cum este n cazul
detectorilor fotoemisivi (fotocelule, tuburi fotomultiplicatoare).
S considerm cazul n care zgomotul de fond n rspunsul detectorului este
independent de intensitatea radiaiei ce ajunge la el. Eroarea relativ n
determinarea unei concentraii c, este c/c, unde c reprezint eroarea absolut i
va fi determinat de fluctuaiile n rspunsul detectorului. Din legea Lambert-Beer
obinem:

I
I
log
l
c
o
c
1
= (1.49)



I
dI
l ,
dc
c

=
3 2
1
(1.50)

sau:
AI ,
I
c
c
3 2
A A
= (1.51)

Astfel, eroarea relativ n concentraie, c/c, este invers proporional cu
produsul absorbanei i al intensitii radiaiei transmise. S presupunem c I,
eroarea n msurarea intensitii radiaiei (datorit zgomotului de fond) este
constant. Valoarea minim a erorii relative se determin punnd condiia ca
derivata s fie egal cu 0.


0 4343 0
3 2 3 2
0
2
0
1
0
=
|
.
|

\
|

|
.
|

\
|
=
|
.
|

\
|
=
|
.
|

\
|

,
I
I
log
I
I
log I
,
I
I
I
log I
dI
d
,
I
c
c
dI
d A A A
(1.52)

81


Aceast condiie va fi satisfcut dac:






respectiv:


Din fig. 1.46 rezult c eroarea relativ n determinarea concentraiei este
minim i practic constant n domeniul de absorban 0,3-0,7, domeniu n care
este indicat s facem msurtorile.
n al doilea caz, zgomotul de fond n rspunsul detectorului este proporional
cu radicalul intensitii radiaiei ce ajunge la el, I = kI
1/2
, unde k este o constant
de proporionalitate.
nlocuind n relaia (1.51) I cu kI
1/2
obinem expresia erorii relative n
concentraie:


1
0 2
1
3 2

|
|
.
|

\
|

=
I
I
log I
,
k
c
c A
(1.53)

Difereniind:

( ) 0 4343 0
2
1
3 2
1
2
1
0 2
1
2
0 2
1
=
|
|
.
|

\
|

|
|
.
|

\
|

=
|
.
|

\
|

I , I
I
I
log I
I
I
log I
dI
d
,
k
c
c
dI
d A
(1.54)


Eroarea relativ minim va fi la acea concentraie creia i corespunde o
intensitate a radiaiei transmise pentru care avem:

8686 0 4343 0 2
0
, ,
I
I
log A = = =

% , ,
I
I
T 5 13 135 0
0
= = =


A = lg
I
o
I
= 0,4343
T =
I
I
o
=
1
e
= 0,3679 = 36,8%
82



Fig. 1.46. Eroarea relativ, c/c, n procente, n funcie de absorban, pentru care
eroarea n evaluarea transmitanei este constant, de 1% ([21] p. 74.

Din fig. 1.46 se poate vedea c domeniul de absorbane pentru care eroarea
relativ n determinarea concentraiei este mic este mult mai larg n cazul
detectorilor fotoemisivi fa de cei termici.


1.7.3. Corelarea spectrelor electronice de absorbie cu
structura molecular

Spectrele de absorbie molecular n domeniul vizibil i UV se datoresc
tranziiei unor electroni din orbitali moleculari de legtur sau nelegtur aflai n
stare fundamental, n orbitali moleculari de antilegtur care corespund unor stri
excitate. Energiile electronilor din strile moleculare fundamentale i strile
excitate sunt determinate de structura moleculei. Peste tranziiile electronice se
suprapun tranziii ntre stri energetice de vibraie i rotaie. Din acest motiv,
spectrele obinute au maxime de absorbie late.
Poziia benzilor de absorbie electronic este caracteristic unei anumite
dispoziii a electronilor n molecul. Spectrul va fi determinat ns n primul rnd
de ntreaga structur a moleculei i mai puin de prezena unor anumite legturi.
Informaiile calitative i structurale date de un spectru molecular n domeniul
vizibil i ultraviolet sunt mult mai reduse dect cele oferite de un spectru n
domeniul IR.
n domeniul spectral cuprins ntre 200 i 800 nm, cele mai obinuite tranziii
sunt cele de la un orbital sau n la orbitali de antilegtur *, notate cu * i
83

n *.
Termenii uzuali folosii la discutarea spectrelor electronice sunt: cromofor,
auxocrom; efecte: batocromic, hipsocromic, hipercromic i hipocromic.
Cromoforii sunt grupri de atomi care absorb radiaii din ultravioletul
apropiat, > 200 nm sau din domeniul vizibil, atunci cnd ei sunt legai de un
schelet neabsorbant saturat care nu posed electroni neparticipani (de exemplu un
lan de hidrocarbur). Cei mai muli cromofori au legturi duble sau triple.
Auxocromii sunt grupri de atomi, ca de exemplu -OH, -NH
2
, -Cl etc., care
au electroni de valen de nelegtur (neparticipani) i care nu absorb radiaii la
> 200 nm (prezint ns absorban intens n UV ndeprtat, prin tranziii
n *).
Atunci cnd un auxocrom este ataat la un cromofor, banda de absorbie a
cromoforului se deplaseaz de obicei la lungimi de und mai mari (efect
batocromic) i are loc o intensificare a absorbiei, efect hipercromic (crete
valoarea absorbtivitii molare , la
max
).
Efectul auxocromic este determinat aparent de interacia electronilor de
nelegtur, electroni liberi de valen, cu norul de electroni delocalizai, ca
urmare stabilizndu-se starea excitat *.
Efectul hipsocromic const n deplasarea benzilor de absorbie la lungimi de
und mai mici, iar efectul hipocromic n micorarea absorbiei radiaiei (micorarea
lui , la o anumit lungime de und).
n tabelul 1.7 se prezint maximele de absorbie pentru unii cromofori.
Benzile de absorbie mai intense corespund unor tranziii cu probabilitate mai
mare, *, iar benzile de intensitate mai mic sunt datorare unor tranziii cu
probabilitate mai redus.
Moleculele cu doi sau mai muli cromofori izolai, de acelai tip, separai
prin mai multe legturi simple, vor absorbi radiaia practic la aceeai lungime de
und ca i moleculele cu un singur cromofor. Intensitatea absorbiei va fi ns
proporional cu numrul cromoforilor.
Cnd doi cromofori sunt separai printr-o legtur simpl, apare conjugarea
electronilor, ceea ce duce la o schimbare important a spectrului de absorbie.










84


Tabelul 1.7. Benzi caracteristice pentru unii cromofori comuni
Cromofor Tipul de
compus
Exemplu Solvent Benzi de absorbie

max
(nm)
max
(L mol
-1
cm
-1
)
0 1 2 3 4 5
Carbonil
R
C = O
R
Aceton Hexan 189 900
Carbonil
(aldehid)
O
R C
H
Acetaldehid Hexan
180
290
10000
17
Carboxil
O
R C
OH
Acid acetic Etanol 95% 208 32
Amido
O
R C
NH
2

Acetamid Ap 220 63
Nitro
R NO
2

Nitrometan Metanol 201 5000
Nitrozo R N = O Nitrozobutan Eter etilic
300
665
100
20
Azo R N = N R' Azometan Etanol 95% 338 4

n sistemele conjugate, distribuia electronilor este delocalizat pe cel puin
patru atomi ceea ce determin o descretere n energia tranziiilor *.
Absorbia radiaiei va crete datorit unei probabiliti mai mari a tranziiei. Pe
msur ce lungimea sistemelor conjugate crete, benzile de absorbie se deplaseaz
la lungimi de und mai mari.
Compuii carotenoizi prezeni n plante conin un mare numr de duble
legturi alchenice conjugate. -carotenul (cu o structur asemntoare cu a dou
molecule de vitamina A
1
cuplate cap la cap) este un carotenoid cu 11 duble legturi
conjugate. Maximul su de absorbie, foarte intens, datorat unei tranziii *,
este complet deplasat n domeniul vizibil,
max
= 451 nm,
max
= 13800
L mol
-1
cm
-1
(tranziia * apare pentru etilen la 165 nm). Structura i
85

spectrul de absorbie al trans--carotenului sunt prezentate n fig. 1.47.



Fig. 1.47. Structura i spectrul de absorbie al trans--carotenului

Spectrometria n UV permite diferenierea izomerilor geometrici ai unor
acizi grai nesaturai n lipide (fig. 1.48) [1]:



Fig.1.48. Spectrele izomerilor geometrici ai acidului octadeca-9, 11, 13-trienoic
n ciclohexan. A) acid -elaeostearic (trans-trans-trans); B) acid -elaeostearic
(cis-trans-trans); C) acid punicic (cis-cis-trans)

Prin spectrometria n UV poate fi studiat conformaia unei proteine. Poziia,
intensitatea i structura fin de absorbie a gruprii amid depind de forma n care
este aranjat lanul polipeptidic (fig. 1.49)[2]. Apare un pronunat efect hipocromic,
un efect hipsocromic de intensitate redus i se formeaz un umr la aproximativ
205 nm. La formarea structurii , apar efecte hipercromice i batocromice de


86

intensitate redus.



Fig. 1.49. Spectrele de absorbie ale legturii peptidice n poli L-lizin pentru
diferite conformaii: A) lanul peptidic distribuit ntmpltor, B) structur ,
C) -elice.

Spectrometria n UV i vizibil este utilizat i pentru a studia legarea
grupelor proteice i a substratului la enzime. De obicei, aceasta determin deplasri
n spectrele proteinei sau a moleculei care interacioneaz.
Atunci cnd o coenzim flavinic se leag la o protein, maximul de
absorbie se deplaseaz de obicei la lungimi de und mai mari dect al moleculei
libere [3] (fig. 1.50):



Fig. 1.50. Structura molecular i spectrul de absorbie al riboflavinei.

Uneori poate aprea o nou band de absorbie, de exemplu la interacia
gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenazei cu nicotinamidadenin dinucleotidul.
Spectrometria de absorbie n UV i vizibil i gsete numeroase aplicaii n

NH
87

biochimie.

1.7.4. Analiza cantitativ

Se poate face o determinare cantitativ a proteinelor pe baza absorbiei de la
190-220 nm datorat legturii peptidice, dar foarte multe alte substane pot
interfera, absorbind radiaii la aceast lungime de und.
Dintre aminoacizi, cei aromatici absorb la lungimi de und mai mari de
230 nm, iar spectrele lor sunt suficient de diferite ntre ele pentru a se putea
determina spectrometric cantitatea prezent din fiecare ntr-o protein. Se poate
face i o caracterizare a moleculei de protein pe baza structurii fine a benzilor de
absorbie datorate ciclurilor aromatice, deoarece aceasta difer de la o protein la
alta, n special n cazul fenilalaninei.
n fig. 1.51 se prezint spectrele de absorbie ale tirozinei, fenilalaninei i a
unei proteine ce conine tirozin. Se constat c maximul de absorbie datorit
aminoacidului este deplasat n protein dar aceasta nu mpiedic efectuarea unei
determinri cantitative.



Fig. 1.51. Spectrele de absorbie ale: 1) tirozinei, 2) fenilalaninei i 3) unei
proteine ce conine tirozin.

Proteinele pot fi determinate cantitativ pe baza complexului pe care l
formeaz cu ionul de cupru(II) prin gruprile -NH- din legtura peptidic (reacia
biuretului). Complexul prezint maxime de absorbie la 330 nm i 540 nm (fig.
1.52):
88



Fig. 1.52. Spectrul de absorbie al complexului format de cupru cu proteine
(reacia biuretului).

Metoda este simpl i destul de sensibil. Toate proteinele reacioneaz ntr-
un mod asemntor, fiind foarte mici diferene de la o protein la alta.
Prin spectrometrie n vizibil proteinele mai pot fi determinate cantitativ, pe
baza proprietii pe care o au de a lega anumii colorani, cum ar fi verde de
bromcrezol i purpura de bromcrezol. Pentru efectuarea determinrilor este necesar
un foarte strict control al pH-ului. n fig. 1.53 se prezint spectrele de absorbie ale
verdelui de bromcrezol i al compusului format cu albumina.
Cnd compusul de analizat nu absoarbe radiaii din domeniul n care se
lucreaz, se obine mai nti un derivat colorat al acestuia. De exemplu, creatinina
din snge reacioneaz cu ionul picrat, n mediu alcalin, pentru a forma un produs
colorat ce absoarbe la 490 nm, acidul uric este oxidat cu fosfotungstat n mediu
alcalin i absorbana produsului de reacie a fosfotungstatului de culoare albastr
este msurat la 680 nm.



Fig. 1.53. Spectrele de absorbie ale: 1) verde de bromcrezol; 2) compusul su cu
albumina.

Un mare numr de ioni metalici formeaz cu o serie de reactivi organici
compleci colorai pe baza crora pot fi determinai (astfel de reactivi sunt:
ditizona, oxina, dietilditiocarbamatul de sodiu etc.).
89

Multe reacii enzimatice pot fi urmrite pe baza unor determinri de
absorban, acestea vor fi ns discutate la capitolul de metode enzimatice de
analiz.
Metodele spectrometrice n vizibil i UV i gsesc largi aplicaii i la studiul
unor echilibre de extracie sau de complexare ale unor ioni metalici cu o
multitudine de reactivi.


1.7.5. Titrri spectrometrice

Toate titrrile implic transformarea unor specii chimice n altele, de aceea
gradul de avansare al unei titrri poate fi urmrit i prin msurarea absorbanei
soluiei n cursul procesului de titrare. Deoarece ceea ce se urmrete este de fapt
variaia absorbanei i nu valoarea absolut a acesteia, erorile care pot aprea
datorit refleciei, refraciei sau difuziei radiaiei de ctre pereii celulei sau de
ctre prob sunt diminuate.
Prin folosirea unei reacii chimice de dozare crete mult specificitatea
determinrii, aceasta deoarece vor interfera, n general, numai acele substane (mai
reduse la numr) care intervin n reacia de dozare i mai puin cele care pot
absorbi radiaia.
Se poate efectua o titrare spectrometric cu condiia ca substana care se
titreaz, substana format n timpul titrrii, sau titrantul s prezinte proprieti
absorbante caracteristice. n aceste cazuri, curba de titrare spectrometric (care se
obine prin reprezentarea absorbanei n funcie de volumul de titrant) const din
dou segmente de dreapt, punctul lor de intersecie corespunznd volumului de
echivalen.
S considerm o reacie general de titrare:

A + T C

unde A este specia titrat, T titrantul i C compusul format n reacia de titrare. n
fig. 1.54 se prezint aspectele curbelor de titrare spectrometric ce se pot obine n
funcie de proprietile absorbante ale lui A, T i C.

90



Fig. 1.54. Curbe de titrare spectrometric pentru reacia A + T C. (a) absoarbe
numai A; (b) absoarbe numai T; (c) absoarbe numai C; (d) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui C este mai mare dect a lui T; (e) A nu absoarbe dar
absorbtivitatea molar a lui T este mai mare dect cea a lui C; (f) C nu absoarbe
dar absorbtivitatea molar a lui T este aproximativ aceeai cu cea a lui A.

Pentru a obine corect cele dou segmente de dreapt dintr-o curb de titrare,
este necesar ca legea Lambert-Beer s se respecte. Pentru exactitatea mai mare a
determinrilor se poate face o corecie a absorbanei msurate, innd seama de
diluarea probei n cursul procesului de titrare.



1.8. SPECTROMETRIA DE FLUORESCEN I
FOSFORESCEN MOLECULAR


Fluorescena i fosforescena constau n reemisia de energie radiant ce are
loc dup un proces de absorbie. Determinrile fluorimetrice se fac de obicei la
temperatura obinuit pentru probe dizolvate. Fosforescena este studiat n cele
mai multe cazuri la temperaturi foarte sczute n medii rigide (ngheate).
Intensitatea radiaiilor emise prin fluorescen i fosforescen (dar nu i poziia
spectrului emis) depinde de lungimea de und a radiaiei excitatoare. Emisia de
fosforescen are loc de obicei la lungimi de und mai mari dect emisia de
fluorescen. Spectrele de fluorescen i fosforescen, pentru o anumit
substan, sunt frecvent imaginea n oglind a spectrului de absorbie. Prezentarea
principiilor fenomenelor de fluorescen i fosforescen s-a fcut la capitolul
1.1.4.2.
91

Metodele fluorimetrice de analiz sunt utilizate mai mult n practic dect
cele fosforimetrice, necesitnd o aparatur mai simpl.


1.8.1. Relaia ntre intensitatea radiaiei de fluorescen (sau
fosforescen) i concentraie

ntre intensitatea radiaiei emise prin fluorescen (sau fosforescen) I
e
i
intensitatea radiaiei absorbite, I
a
, este o proporionalitate:

I
e
= I
a
(1.55)

unde este randamentul cuantic de fluorescen (sau fosforescen) o constant de
proporionalitate care ne indic fraciunea din radiaia absorbit care este convertit
n radiaie emis.
Dar I
a
= I
o
I, unde I
o
este intensitatea radiaiei incidente iar I intensitatea
radiaiei transmise.
nlocuind I, dat de legea Lambert-Beer (relaia (1.46)), obinem:


( )
cl
a
I I
c
= 10 1
0
(1.56)

Trecnd la baza e i dezvoltnd n serie exponenial, vom avea:

( ) ( ) ( )
|
|
.
|

\
|
c
+ +
c
+
c
c =
! n
cl ,
...
!
cl ,
!
cl ,
cl , I I
n
o a
303 2
3
303 2
2
303 2
303 2
3 2
(1.57)

Pentru soluii foarte diluate i pentru care termenul cl este mai mic de 0,05
(n cazul fluorescenei) sau 0,01 (n cazul fosforescenei) putem scrie:

I
a
= 2,303 I
o
cl (1.58)

Deoarece termenii superiori pot fi neglijai, avnd valori foarte mici, valoarea
lui I
e
va fi dat de relaia:

I
e
= 2,303 I
o
cl (1.59)

Obinnd ecuaia de mai sus, s-a presupus c radiaia de fluorescen s-a
msurat n aceeai direcie cu radiaia excitatoare. Totui, din motive practice,
radiaia de fluorescen se msoar la un unghi de 90
o
fa de cea excitatoare
92

(pentru a nu ajunge la detector i radiaia excitatoare mult mai intens dect cea de
fluorescen).
Valabilitatea relaiei (1.59) se pstreaz, dar l trebuie nlocuit cu l' ce
reprezint grosimea stratului de soluie n direcia detectorului de radiaii.
Relaia (1.59) ne indic faptul c pentru concentraii mici, intensitatea
radiaiei de fluorescen este direct proporional cu concentraia substanei de
analizat. Deoarece valoarea intensitii radiaiei provenite de la surs, I
o
, se poate
modifica n timp, intensitatea radiaiei de fluorescen nu este msurat n mod
absolut, ci relativ. Determinrile se fac fa de un standard de fluorescen de
concentraie cunoscut. Curba de calibrare se construiete reprezentnd
fluorescena relativ funcie de concentraie.
Relaia (1.59) este valabil pentru concentraii mici, pn la cteva pri per
milion, depinznd de substana analizat. La concentraii mai mari, intensitatea
radiaiei de fluorescen descrete cu creterea concentraiei.

1.8.2. Principiul aparaturii

Schema unui fluorimetru fotoelectric monofascicul cu filtre este prezentat
n fig. 1.55. Aceast schem este asemntoare cu a unui aparat utilizat pentru
msurarea absorbiei n domeniul vizibil i UV al spectrului, cu dou excepii: 1)
detectorul este rotit cu 90
o
fa de direcia radiaiei incidente; 2) un al doilea sistem
de separare a radiaiilor este plasat naintea detectorului.
Sursa de radiaii (1) const de obicei dintr-o lamp cu vapori de mercur sau o
lamp cu xenon. Ambele surse emit intens n domeniul UV al spectrului. Filtrul (2)
permite trecerea unor radiaii excitatoare de anumite lungimi de und, iar filtrul (4)
a radiaiei de fluorescen.
Semnalul produs de detector, care este un curent proporional cu intensitatea
radiaiei de fluorescen, este amplificat sau acioneaz direct sistemul de evaluare,
care este un instrument de msur, un nregistrator etc.
Aparatele n care separarea radiaiilor excitatoare i de fluorescen se face
cu ajutorul unor monocromatoare se numesc spectrofluorimetre.



Fig. 1.55. Schema unui fluorimetru fotoelectric monofascicul cu filtre. 1) lamp cu
vapori de mercur, 2) i 4) filtre, 3) celul ce conine proba de analizat, 5)
fotocelul, 6) instrument de msur
93

Pentru majoritatea aparatelor msurarea radiaiei de fluorescen se face la un
unghi de 90
o
fa de direcia radiaiei excitatoare, n aceste condiii obinndu-se
cel mai redus fond dat de radiaia excitatoare.
Un fosforimetru este asemntor cu un fluorimetru ns are n plus un
dispozitiv optic care permite alternativ excitarea probei la anumite intervale de
timp, excitri urmate de msurarea radiaiei de fosforescen. Pentru efectuarea
determinrilor, proba de analizat este rcit frecvent la temperatura azotului lichid.


1.8.3. Factorii structurali care determin fluorescena

Fluorescena apare n general pentru molecule aromatice i heterociclice sau
care conin mai multe duble legturi conjugate. Ambele clase de substane au
electroni delocalizai care pot fi trecui n stri excitate de singlet cu energie mic
(tranziii *).
Substituenii influeneaz accentuat fluorescena. Un substituent care
delocalizeaz electronii , ca de exemplu gruprile NH
2
, -OH, -F, -OCH
3
, deseori
mrete fluorescena, deoarece mrete probabilitatea tranziiei ntre starea de
singlet cu energia cea mai mic i starea fundamental. Gruprile atrgtoare de
electroni (-Cl, -Br, -I, -NO
2
sau -COOH) descresc sau sting fluorescena.
Rigiditatea moleculei are ca efect o cretere a fluorescenei acesteia,
reducnd amplitudinea vibraiilor care de fapt determin tranziiile neradiative. De
exemplu, fluoresceina i eozina sunt puternic fluorescente dar un compus
asemntor, fenolftaleina, care nu are o structur rigid i pentru care sistemul
conjugat este ntrerupt, nu este fluorescent.
Formarea chelailor cu ionii metalici determin frecvent apariia fenomenului
de fluorescen deoarece crete rigiditatea moleculei i micoreaz vibraiile
interne.
Factorii de mediu cei mai importani care determin fluorescena sunt:
pH-ul, temperatura, ionii metalici i oxigenul dizolvat. Pentru a obine bune
rezultate n determinrile de fluorescen trebuie utilizai solveni foarte puri. pH-ul
influeneaz fluorescena prin schimbrile mari pe care le poate produce n
structura anumitor molecule n urma unor fenomene de disociere sau protonare.
Oxigenul molecular dizolvat precum i unii ioni metalici pot determina fenomenul
de stingere a fluorescenei.
Scderea temperaturii determin de obicei o cretere a intensitii
fluorescenei. Aceasta deoarece procesele competitive neradiative (prin care se
pierde energia strii excitate) decurg cu o vitez mai mic la temperaturi coborte.




94

1.8.4. Analiza cantitativ

Metodele fluorimetrice i gsesc aplicaii deosebite n analiza biochimic, n
cercetri biomedicale i pentru analizele chimice obinuite ale unor probe de
origine biologic. Aceste metode prezint avantajul c pot fi aplicate frecvent fr
o separare prealabil a compuilor analizai din matricea n care se gsesc (separare
care poate fi destul de dificil).
De asemenea, metodele fluorimetrice pot fi utilizate cu rezultate foarte bune
pentru cercetarea proceselor celulare la nivel molecular ca i n studiul compuilor
activi biologic, ca acizii nucleici sau n studiul structurii i funciilor proteinelor.
Un mare numr de compui de interes biochimic pot fi determinai
fluorimetric, cum ar fi: aminoacizi, vitamine, steroizi, clorofile, medicamente,
droguri etc. Metoda se aplic i la determinarea unor insecticide, poluani i a altor
compui organici.
Unii compui prezint o fluorescen proprie i pot fi determinai direct, alii,
care nu prezint fluorescen, pot fi transformai folosind reactivi adecvai, n
compui fluoresceni. n acest mod pot fi analizai numeroi ioni metalici pe baza
unor compui fluoresceni pe care i formeaz.
Aminoacizi ca: fenilalanina, tirozina i triptofanul prezint fluorescen
proprie ce permite determinarea lor direct. n fig. 1.56 se prezint spectrele de
absorbie, de fluorescen i fosforescen ale triptofanului.
Unele vitamine, ca de exemplu vitamina A, pot fi determinate fluorimetric
direct, la concentraii de ordinul ppm i fraciuni de ppm.




Fig. 1.56. Spectrele de absorbie (1), de fluorescen (2) i de fosforescen (3)
ale triptofanului

95

Alte vitamine, ca de exemplu vitamina A i riboflavina, ce nu prezint
fluorescen proprie, pot fi convertite la fluorofori (compui ce prezint
fluorescen intens) printr-o reacie simpl, ceea ce permite determinarea lor cu o
mai mare sensibilitate. Astfel,

Tiamina Tiocrom (
ex.
= 368 nm;
em.
= 440 nm)
Riboflavina Lumiflavina (
ex.
= 440 nm;
em.
= 550 nm)

Adrenalina poate fi determinat fluorimetric prin formarea unui fluorofor
derivat de la indoxil:


Colesterolul, prin tratare cu acid sulfuric, formeaz un fluorofor ce permite
determinarea lui n cantiti de 0,1-2 g (
ex.
= 546 nm;
em.
= 590 nm) [4].
Multe purine, pirimidine i coenzime pot fi determinate fluorimetric,
prezentnd fluorescen proprie [5]. n fig. 1.57 se prezint spectrele de
fluorescen ale adeninei i ale nucleozidelor i nucleotidelor sale:




Fig. 1.57. Spectrele de fluorescen ale adeninei i ale nucleozidelor i
nucleotidelor sale n 7N H
2
SO
4
. Excitarea s-a fcut la 265 nm. Concentraiile sunt
n toate cazurile de 5 g/mL.

Porfirinele sunt printre compuii naturali ce prezint cea mai intens
96

fluorescen. Porfirinele sunt excitate n vizibil i emit radiaii de fluorescen la
lungimi de und mari ale spectrului vizibil i n IR. Din cadrul porfirinelor naturale
fac parte hemoglobina, mioglobina, citocromii, clorofilele precum i ali pigmeni.
Fluorescena a fost folosit cu rezultate foarte bune pentru determinarea
mecanismului fotosintezei, deoarece diferitele clorofile: a, b, c, d etc.,
protoclorofila i ali produi implicai n fotosintez sunt fluoresceni la anumite
lungimi de und.
Metodele fluorimetrice sunt aplicate la analiza unor medicamente sau droguri
(tabelul 1.8).
Datorit sensibilitii i specificitii, metodele fluorimetrice i gsesc largi
aplicaii n enzimologie. Pentru determinarea activitii unei enzime, se msoar
fluorimetric viteza reaciei catalizate de aceasta. De exemplu, NADH i NADPH,
formele reduse ale nicotinamidadenin dinucleotidului (NAD
+
) i
nicotinamidadenin dinucleotidfosfatului (NADP
+
), au o fluorescen intens.
Astfel, toate reaciile depinznd de NAD
+
i NADP
+
implicate n analiza
enzimatic pot fi studiate fluorimetric. Sensibilitatea este ns cu dou-trei ordine
de mrime mai mare dect n cazul metodelor de analiz bazate pe absorbia
radiaiei.

Tabelul 1.8. Metode fluorimetrice pentru determinarea unor medicamente i
droguri.
Substana Condiii de lucru
ex.

em.

Sensibilitate
(ppm)
Actinomicin D H
2
O
2
- HO


370 420
0,10
Antimicin pH = 1 285 355 0,10
Aspirin CHCl
3
HOAc
280 335
0,01
Codein pH = 1 285 350 0,10
Estrogeni pH = 13 490 546 0,10
LSD pH = 7 325 365 0,002
Morfin Fericianur 250 440 0,10
Fenobarbital pH = 13 265 440 0,50
Procain pH = 11 275 345 0,01
Chinin pH = 1 350 450 0,002
Tetraciclin pH = 11 390 515 0,02

Dehidrogenazele, o important clas de enzime care efectueaz
97

dehidrogenarea hidroxicompuilor n prezena unui acceptor de hidrogen, pot fi
determinate fluorimetric. Se msoar viteza iniial de formare sau de
descompunere a NADH i aceasta este corelat cu concentraia dehidrogenazei,
substratului sau coenzimei.
De exemplu, lactatul este transformat n piruvat la pH = 9 de ctre lactat
dehidrogenaza (LDH) n prezen de NAD
+
. Reacia invers se efectueaz la
pH = 7.

LDH
L-lactat + NAD
+

piruvat + NADH + H
+


Viteza de formare a NADH la pH = 9 sau viteza de dispariie a acestei
substane la pH = 7 este funcie de activitatea lactat dehidrogenazei, NAD
+
(sau
NADH) i a substratului.
Colinesteraza poate fi determinat specific prin aciunea sa asupra unor
substraturi nefluorescente cum ar fi butirat de rezorufin i acetat de indoxil, care
sunt hidrolizate la compuii intens fluoresceni: rezorufina i indoxilul.
-glucuronidaza poate fi determinat pe baza reaciei de descompunere a
glucuronidelor [6]:






Umbeliferona format prezint fluorescen intens.
Metodele fluorimetrice sunt utilizate pentru determinarea unui mare numr
de ioni metalici, dup transformarea lor n chelai ce prezint fluorescen. Cteva
din aceste metode sunt prezentate n tabelul 1.9. Unele din acestea sunt cele mai
sensibile i selective metode analitice pentru determinarea ionilor respectivi.
Metodele fosforimetrice sunt utilizate pentru analiza unor aminoacizi,
proteine, acizi nucleici, nucleotide, nucleozide, purine, pirimide, enzime,
medicamente, poluani, pesticide etc.
Se poate spune c metodele fosforimetrice sunt mai selective dect metodele
fluorimetrice de analiz (aceasta deoarece mai puine substane prezint
fosforescen). n ceea ce privete sensibilitatea, aceasta este asemntoare cu a
metodelor fluorimetrice.



98


Tabelul 1.9. Metode fluorimetrice pentru determinarea unor elemente.
Elementul Reactiv Sensibilitate (ppm)
Al Saliciliden-o-aminofenol 0,0003
Au Rodamin B 0,02
B Dibenzoil metan 0,0005
Ca Calcein 0,20
Cr Triazinilstilbexon 0,004
Mg 8-hidroxichinolin 0,01
Mo Acid carminic 0,9
Zn 2,2'-metilen
dibenzotiazol
0,002


Avantajele i dezavantajele metodelor fluorimetrice de analiz
Metodele fluorimetrice de analiz prezint o foarte bun sensibilitate i
selectivitate. Pot fi determinai compui chiar la concentraii de 10
-10
g/mL, ceea ce
corespunde unei sensibiliti de 1000 ori mai mare dect cea a celor mai multe
metode bazate pe absorbia molecular.
Aceasta se poate explica n primul rnd pe baza faptului c n cazul
metodelor fluorimetrice se msoar direct radiaia emis, lucru destul de uor de
realizat, deoarece exist o diferen ntre lungimea de und a radiaiei excitatoare i
cea de fluorescen. n principiu, este totdeauna mai uor i mai precis s se
msoare direct un semnal mic dect o diferen (sau un raport) ntre dou semnale
mari, aa cum se face n spectrometria de absorbie molecular (unde se msoar
raportul ntre intensitatea radiaiei incidente i cea transmis).
Specificitatea metodelor fluorimetrice de analiz fa de cele bazate pe
absorbia radiaiei, se poate explica astfel: sunt mai puini compui fluoresceni
dect cei care absorb radiaii, n plus, compuii fluoresceni care absorb radiaii de
aceleai lungimi de und este probabil s emit radiaii la lungimi de und diferite,
putnd fi determinai selectiv. Diferenele ntre lungimile de und ale radiaiilor
excitatoare i de fluorescen sunt cuprinse ntre (aproximativ) 10-280 nm.
Pot fi determinate substane care prezint fluorescen ca atare, substane ce
pot fi convertite la compui fluoresceni sau cele care pot determina stingerea
fluorescenei.
Principalul dezavantaj al metodelor fluorimetrice de analiz l constituie
influena important a condiiilor experimentale asupra determinrilor:
temperatur, pH, trie ionic, solvent, care trebuie meninute constante. De
asemenea, radiaia excitatoare (din domeniul UV) poate produce descompuneri
99

fotochimice.
Metodele fluorimetrice nu sunt indicate pentru determinarea unor
constitueni majori ai probelor, deoarece la concentraii mari exactitatea este destul
de redus. Frecvent poate s apar fenomenul de stingere a fluorescenei, datorit
temperaturii, oxigenului dizolvat, prezenei unor impuriti etc.




1.9. SPECTROMETRIA DE ABSORBIE N INFRAROU
I RAMAN


Domeniul IR cuprinde radiaiile ntre 0,8 m i 200 m, sau, n numere de
und, ntre 12500 cm
-1
i 50 cm
-1
. Regiunea cea mai util din punct de vedere
analitic este cuprins ntre 3600 cm
-1
i aproximativ 300 cm
-1
(2,8-33 m). ntre
12500 cm
-1
i 4000 cm
-1
este domeniul IR apropiat, iar ntre aproximativ 4000 cm
-1

i 650 cm
-1
(400 cm
-1
dup unii autori) este domeniul IR mediu. Domeniul IR
ndeprtat este cuprins ntre 650 cm
-1
(400 cm
-1
) i 50 cm
-1
(200 m) i nu este
utilizat dect n mic masur n scopuri analitice. Sub 50 cm
-1
radiaiile aparin
domeniului microundelor.
Spectrul de absorbie n IR este un spectru de benzi care se datoresc unor
tranziii ntre stri energetice de vibraie ale atomilor care constituie moleculele,
peste care se suprapun tranziii ntre stri energetice de rotaie. Principiile teoretice
ale absorbiei radiaiei n IR au fost prezentate n capitolul 1.1.4.1.
Cea mai important utilizare a spectrometriei de absorbie n infrarou este la
identificarea i la determinarea structurii unor compui. Aceast metod se aplic
i pentru determinri cantitative, ns n mai mic msur.
Pentru trasarea unui spectru n infrarou, de mare importan este pregtirea
probelor pentru analiz.


1.9.1. Pregtirea probelor n vederea nregistrrii spectrului
n IR

Probleme deosebite se pun n privina materialului din care sunt
confecionate ferestrele celulelor n care se introduc probele. Nu exist un material
care s fie transparent i totodat inert pentru ntreg domeniul IR. Se utilizeaz pe
scar larg halogenurile alcaline dar acestea i pierd uor transparena n prezen
de mici cantiti de ap. Pentru probe ce conin ap se pot ntrebuina ferestre de
siliciu, germaniu, clorur de argint etc., care ns sunt mult mai scumpe,
prezentnd i alte inconveniente. Teflonul are un numr redus de benzi de
100

absorbie datorate numai vibraiei legturilor C-C i C-F. El poate fi utilizat cu
bune rezultate pentru obinerea ferestrelor, dac proba nu are benzi de absorbie n
zonele n care absoarbe acesta. Pentru v
~
< 600 cm
-1
se poate utiliza o celul de
polietilen. n tabelul 1.9 se prezint domeniile de lungimi de und n care diverse
materiale sunt transparente n IR:

Tabelul 1.10. Domeniul de transparen n IR al unor materiale.
Materialul
Domeniul de lungimi
de und, , m
Domeniul de numere
de und, v
~
, cm
-1

NaCl 0,5-16 20000-625
KBr 0,25-25 40000-400
AgCl 0,4-23 25000-435
CaF
2
0,15-9 6670-1110
CsBr 1-37 10000-270
CsI 1-50 10000-200 (180)
KRS-5 (T1Br-T1I) 0,5-35 20000-286
Ge 0,5-11,5 20000-870
Si 0,2-6,2 50000-1613
Al
2
O
3
, safir 0,2-6,5 50000-1538
polietilen 16-300 625-33

Dac proba de analizat este lichid la temperatura obinuit trasarea
spectrului se face utiliznd proba ca atare sau o soluie a acesteia. Concentraia
probei i grosimea de strat trebuie astfel alese nct transmitana s fie cuprins
ntre 15 i 70%.
La utilizarea probelor nediluate este necesar o grosime de strat foarte mic,
0,001-0,05 mm. Frecvent, drept solveni pentru prob se ntrebuineaz CCl
4

pentru domeniul 4000-1333 cm
-1
i CS
2
pentru domeniul 1333-650 cm
-1
, cei doi
solveni fiind complementari n cele dou domenii spectrale. Probele insolubile n
aceti solveni se pot dizolva n aceton, acetonitril, clorur de metilen, cloroform,
ciclohexan etc., care sunt transpareni n anumite domenii ale spectrului.
Solventul poate influena spectrul IR al substanei dizolvate. O atenie
deosebit trebuie acordat atunci cnd se pot forma legturi de hidrogen.
Legturile de hidrogen, prin gruprile OH sau NH alternd frecvenele
caracteristice de vibraie ale acestor grupri, cu ct sunt mai puternice legturile de
hidrogen, cu att scade frecvena fundamental de vibraie.
Aparatele cu dublu fascicul permit compensarea benzilor de absorbie ale
solventului, dar transmitana acestuia nu trebuie s scad sub 10%, la grosimea de
strat respectiv.
n cazul unor determinri cantitative ale compuilor, se lucreaz cu celule
etane cu grosimea fix de strat, n care se introduc probele prin injectare. S-au
realizat i celule cu grosime de strat variabil, ce poate fi reglat continuu ntre
101

0,005-5 mm cu ajutorul unui urub micrometric.
Probelor solide li se poate trasa spectrul fie dup dizolvare ntr-un solvent
adecvat, fie n urmtoarele moduri:
- se obine o past din proba fin mojarat i un mediu lichid cum ar fi ulei de
parafin (nujol), hexaclorobutadien, perfluorokerosen. Pasta se ntinde pe
o fereastr transparent i i se traseaz spectrul. Mediile lichide utilizate
avnd un numr redus de benzi de absorbie, deseori nu ngreuneaz
interpretarea spectrului de absorbie al probei. Metoda este rapid, dar este
indicat n special pentru o analiz calitativ.
- proba fin mojarat este amestecat cu pulbere de bromur de potasiu (sau
alt halogenur alcalin) i este presat la vid pn cnd se obine o pastil
transparent, pentru care este trasat spectrul. Prin aceast metod se pot
efectua uor analize cantitative deoarece se pot determina cu precizie
cantitile de prob i eventual de standard intern introduse ntr-o pastil.
Pentru analiza gazelor se ntrebuineaz celule cu grosime mare (10 cm).
Pentru determinarea unor componeni n cantitate mic drumul radiaiei prin celul
poate fi multiplicat utiliznd un sistem de oglinzi, drumul efectiv parcurs de
fasciculul de radiaii putnd ajunge la zeci de metri.
Deoarece spectrul de absorbie pentru aceeai substan poate fi diferit
funcie de modul n care a fost pregtit proba i de parametrii de lucru ai
aparatului, este necesar ca aceste date s fie totdeauna menionate.

1.9.2. Corelarea spectrelor n IR cu structura molecular
Spectrul de absorbie al unui compus n domeniul IR const, n principiu,
din benzile de absorbie caracteristice ale gruprilor de atomi ce constituie
molecula acestuia. Totui, deoarece molecula vibreaz ca un ntreg, au loc
interacii ntre diferitele grupri de atomi ce vibreaz, ceea ce confer o anumit
individualitate spectrului fiecrei substane.
n domeniul IR apropiat sunt prezente multe benzi de absorbie
corespunztoare armonicelor, benzilor fundamentale i benzilor de combinare,
asociate deseori atomilor de hidrogen (vibraii de ntindere a gruprilor O-H, N-H,
C-H). Regiunea IR apropiat este utilizat frecvent pentru determinri cantitative.
Astfel, se poate determina apa din glicerin, hidrazin, freon, aceton etc.
Domeniul infrarou mediu, cuprins ntre 4000-650 cm
-1
este constituit din
regiunea frecvenelor de grup 4000-1300 cm
-1
(2,5-7,7 m) i regiunea de
amprent 1300-650 cm
-1
(7,7-15,4 m). n regiunea frecvenelor de grup, benzile
principale de absorbie pot fi atribuite vibraiilor unor uniti constnd din doi
atomi ai moleculei, uniti care sunt determinate de gruprile funcionale prezente
n molecul i nu de ntreaga structur molecular. Totui, structura moleculei i
manifest influena deplasnd valorile frecvenelor de grup de la un compus la
altul.
102

n intervalul 4000-2500 cm
-1
(2,5-4,0 m) benzile de absorbie sunt
caracteristice vibraiilor de ntindere ale legturilor formate de hidrogen cu
elemente cu masa < 19.
Regiunea 2500-1540 cm
-1
(4,0-6,5 m) corespunde vibraiei unor legturi
triple (2500-2000 cm
-1
) sau duble (2000-1540 cm
-1
) (C=O, C=C, C=N, S=O).
n regiunea de amprent a spectrului (1300-650 cm
-1
) radiaia este
absorbit datorit vibraiilor de ntindere a unor legturi simple i a vibraiilor de
deformare ale sistemelor poliatomice (vibraii de schelet). Spectrul de absorbie n
acest domeniu este caracteristic ntregii molecule.
n regiunea 667- 50 cm
-1
(15-200 m) absorbia radiaiei se datoreaz
vibraiilor de deformare ale legturilor formate de carbon, azot, oxigen i fluor cu
atomi cu masa mai mare de 19 i unor moduri suplimentare de deformare a unor
sisteme ciclice sau nesaturate. Aceast regiune este deosebit de indicat pentru
studiul unor compui organometalici i anorganici.
n fig. 1.58 se prezint schematic zonele din spectrul IR n care au loc
vibraiile unor grupri de atomi n molecul.
Pe baza unui mare numr de spectre nregistrate (cteva mii) Colthup a
obinut grafice de corelare a frecvenelor de vibraie cu natura atomilor ce vibreaz
n cadrul legturii pentru un numr nsemnat de grupri de atomi.



Fig. 1.58. Corelaii simple ale vibraiilor de grup cu regiuni ale domeniului IR.

Funcia graficelor de corelare este de a sugera compuii i structurile
posibile, pentru investigaii suplimentare. n cazul unui compus pur, identificarea
acestuia va fi fcut prin compararea spectrului su cu spectrele unor compui
cunoscui, spectrul n IR fiind ca o amprent molecular unic, uor de difereniat
de a altor molecule. Suprapunerea exact a celor dou spectre ne confirm c
substana necunoscut este aceeai cu compusul pur a crui structur se cunoate.
103

n acest scop se utilizeaz colecii de spectre sau sisteme de refacere a
spectrelor. n cazul sistemelor de refacere a spectrelor se folosete un aranjament n
cod binar, care divide spectrul ntr-un numr de intervale de lime uniform (de
exemplu 0,1 m sau 100 cm
-1
). Prezena sau absena unor benzi de absorbie, a
grupurilor chimice sau alte informaii pot fi codificate n acest mod. Nu se codific
toate benzile de absorbie, ci numai cele ce depesc o anumit intensitate.
S-au realizat biblioteci de spectre care conin n memoria unui calculator
spectrele n IR a mii sau chiar zeci de mii de compui chimici i care uureaz mult
identificarea structurii unor compui de analizat.
n cazul unor amestecuri, spectrometria n IR ne permite determinarea
gruprilor de atomi prezente n proba de analizat, dar identificaea componenilor
individuali este destul de greu de fcut. n acest scop, datele obinute prin
spectrometria n IR sunt corelate cu date furnizate de analiza chimic,
spectrometria de rezonan magnetic nuclear, spectrometria de mas etc.
n general, se poate spune c interpretarea unui spectru n IR este destul de
dificil. Dei unele benzi de absorbie pot fi imediat corelate cu natura probei,
totui foarte multe spectre conin o cantitate de informaii att de mare, nct numai
o parte din aceasta este utilizabil chiar de un chimist experimentat.
Faptul c poziia maximelor de absorbie caracteristice pentru anumite
grupri nu este constant atunci cnd acestea sunt prezente n molecule diferite
poate fi considerat un dezavantaj. Aceasta face ns ca spectrele de absorbie n IR
s fie unice pentru diferitele molecule i astfel ele furnizeaz mai multe informaii
privind structura molecular dect dac poziia maximelor de absorbie ar fi
invariant.
Un dezavantaj al spectrometriei n IR la aplicarea n biochimie l constituie
faptul c apa prezint benzi de absorbie late i intense n acest domeniu spectral.
Foarte multe sisteme naturale au un mare coninut de ap, ceea ce limiteaz
aplicarea metodei numai la anumite zone spectrale n care apa nu absoarbe.
Au fost obinute spectrele n IR pentru membrane, esuturi, bacterii. Benzile
de absorbie pot fi corelate cu compoziia sistemului, indicnd prezena apei, a
proteinelor, lipidelor etc. i este posibil de a diferenia esuturile provenite din
diverse surse.
Prin spectrometrie n IR a fost studiat conformaia unor proteine,
polipeptide i acizi nucleici. Cele mai importante benzi de absorbie n IR ale
legturii peptidice sunt n jur de 1600 cm
-1
i se datoresc n principal ntinderii
legturii C=O i deformrii legturii N-H. Schimbri n structura secundar
determin deplasri mici (dar detectabile), variaii ale intensitii sau despicarea
benzilor care pot sugera structura.
Spectrometria n IR poate fi aplicat pentru studiul structurii secundare a
acizilor nucleici, absorbia de la 1700 cm
-1
putnd fi corelat cu structura
secundar a polimerului.
Spectrometria n IR se aplic n biochimie, mai ales pentru analiza unor
molecule relativ mici, cum ar fi cele de monozaharide i derivaii lor, steroizi,
104

lipide, baze nucleotidice etc. Pentru aceste molecule, spectrul n IR rmne
suficient de simplu pentru a putea fi utilizat la determinarea structurii.
Analiza prin reflecie n IR apropiat este aplicat pentru analize clinice
deoarece n acest domeniu spectral radiaia ptrunde n esuturile umane suficient
de adnc. n acest mod se pot face determinri spectrometrice in vivo. Dei benzile
de absorbie n IR apropiat sunt destul de slabe, ele sunt utile analitic deoarece
aproape toate moleculele de interes biologic au benzi de absorbie distincte n acest
domeniu. Aparatura modern permite msurarea unor absorbane foarte slabe fa
de un fond de radiaii mprtiate foarte mare, iar prin utilizarea unor tehnici
statistice pot fi interpretate benzile multiple care se suprapun.
1.9.3. Spectrometria Raman
Efectul Raman este aplicat pentru elucidarea structurii unor molecule,
pentru identificarea unor grupri funcionale sau legturi chimice i pentru analiza
cantitativ a unor amestecuri complexe.
Spectrul Raman apare n urma unor tranziii ntre stri energetice de
vibraie ale moleculelor, ns ntr-un mod cu totul diferit fa de spectrul n IR
(capitolul 1.1.4.3.). Aceasta face ca spectrometria Raman i spectrometria de
absorbie n IR s fie tehnici complementare.
La nregistrarea unui spectru Raman este important ca radiaia difuzat prin
efect Rayleigh s fie ndeprtat n ct mai mare msur. Radiaiile obinute prin
efect Raman fiind foarte slabe, acestea sunt msurate la un unghi de 90
o
fa de
radiaia excitatoare (fig. 1.59). n acest fel, radiaia excitatoare nu ajunge direct la
detector i perturb determinrile.



Fig. 1.59. Schema unui spectrometru Raman.

Pentru studierea efectului Raman se folosesc surse de radiaii intense, de
exemplu lmpi cu vapori de mercur. Proba de analizat este coninut ntr-un tub de
sticl prevzut cu o fereastr transparent. ntre tubul ce conine proba i lampa de
mercur se gsete un filtru ce permite trecerea radiaiilor de o anumit lungime de
und, de exemplu 435,8 nm.
Rezultate mult mai bune se obin utiliznd drept surs de excitare un
fascicul laser (de exemplu un laser He-Ne) care furnizeaz o radiaie
monocromatic foarte intens.
105

Drept detector de radiaii poate fi utilizat o plac fotografic, ns n
spectrometrele moderne ea a fost aproape total nlocuit cu detectori fotoelectrici.
Spectrul Raman se obine cel mai bine pentru probe lichide. Utilizarea
laserului ca surs de excitare permite ns obinerea spectrului Raman pentru
aproape orice stare a probei: lichid, soluie, solid transparent, pulbere, gaz etc. i
cu un volum foarte mic, de domeniul microlitrilor sau chiar nanolitrilor. Utilizarea
lmpii cu vapori de mercur drept surs de excitare necesit volume mult mai mari
de prob, de ordinul mililitrilor.
Cele mai intense linii n spectrul Raman corespund vibraiei unor atomi
legai prin legturi relativ nepolare, cu o distribuie simetric a sarcinii. n aceste
cazuri, se produc cele mai mari variaii de polarizabilitate n cursul vibraiei. Astfel
de grupri sunt:

Pentru moleculele care au un centru de simetrie, benzile de absorbie permise
n IR sunt interzise n spectrul Raman i invers. Pentru moleculele cu elemente de
simetrie altele dect centrul de simetrie, anumite benzi pot fi active n Raman, n
IR, n ambele sau n nici unul. Pentru moleculele complexe care nu prezint
simetrie, toate modurile normale de vibraie sunt active att n spectrul Raman ct
i n IR. n fig. 1.60 se prezint comparativ spectrele de absorbie n IR i Raman
ale acidului butiric; spectrul Raman a fost obinut folosind pentru excitare radiaia
de la 632,8 nm a unui laser He-Ne. Spectrul de absorbie n IR a fost obinut n
CCl
4
pentru v
~
>1330 cm
-1
i CS
2
pentru v
~
<1330 cm
-1
. Aceste spectre ne indic
clar diferenele de intensitate ale unor anumite benzi din spectrele IR i Raman.
Spectrometria Raman are multe avantaje fa de spectrometria de absorbie n
IR. n primul rnd, spectrometria Raman poate fi utilizat pentru a identifica i
analiza molecule care nu absorb n IR ca de exemplu molecule diatomice
homonucleare.
Un alt avantaj l constituie faptul c spectrele Raman pot fi obinute pentru
soluii apoase, spectrul Raman al apei fiind puin intens. n IR ns apa absoarbe
puternic mascnd numeroase benzi de absorbie ale compuilor studiai.
Spectrometria Raman poate fi astfel aplicat la studiul unor compui biologici, apa
nsoind foarte frecvent aceti compui.

106

Infraro u
C=O
C=O


Fig. 1.60. Spectrele de absorbie n IR i Raman ale acidului butiric [23].


Spectrometria Raman prezint ns i unele inconveniente. De obicei spectrul
Raman nu poate fi obinut pentru o prob care absoarbe radiaia excitatoare. De
asemenea, dac proba este fluorescent sau conine particule n suspensie spectrul
Raman va fi mascat de spectrul de fluorescen sau de radiaia difuzat prin efect
Tyndall.
Spectrul Raman permite obinerea unor informaii privind conformaia
acizilor nucleici i a proteinelor, precum i privind interaciile unor astfel de
molecule.
Orice acid nucleic purificat d 30 sau 40 de benzi Raman n domeniul
spectral 300-1700 cm
-1
. Ele sunt determinate n primul rnd de vibraiile bazei ce
intr n compoziia acidului nucleic. Dou benzi intense (la 1100 cm
-1
i 810 cm
-1
)
sunt atribuite lanului principal fosfat-riboz. Banda Raman de la 1100 cm
-1
este
atribuit unei vibraii de ntindere simetric a legturii O = P O
-

att frecvena,
ct i intensitatea acestei benzi sunt independente de conformaia lanului principal.
Banda Raman de la 810 cm
-1
corespunde unei conformaii de tip A. Atunci
cnd lanul polinucleotidic ia alt conformaie, aceast band nu se mai gsete n
domeniul 807-814 cm
-1
i n acelai timp devine mai slab.
Dubla elice a ARN are o conformaie a lanului principal de tip A, dar
aceast conformaie nu apare neaprat numai n poriunea cu dubl elice a structurii
ARN.
107

Procentul nucleotidelor ARN n conformaie A poate fi determinat prin
msurarea intensitii benzii Raman de la 810 cm
-1
folosind banda de la 1100 cm
-1

ca standard intern.
n regiunea corespunztoare vibraiilor de ntindere a legturii C = O (1750-
1650 cm
-1
) reziduul de uracil d dou benzi Raman intense. Reziduurile de citozin
i guanin dau dou benzi Raman foarte slabe.
n conformaia dubl elice a ADN sau ARN, reziduurile de baz sunt
aranjate cu planurile aproape perpendiculare pe axa elicei i paralele una cu alta,
astfel nct distana ntre planurile adiacente de baz este de 3,4 . O astfel de
mpachetare determin o reducere a intensitii benzii de absorbie n UV de la
260 nm, avnd loc de asemenea o micorare a intensitii unor benzi Raman
corespunztoare reziduului de baz.
O protein purificat d aproximativ 30 benzi Raman intense n regiunea
spectral 300-1700 cm
-1
. Lanul principal polipeptidic d natere urmtoarelor
benzi: amid I (1645-1680 cm
-1
), amid II (1235-1300 cm
-1
), ntindere C C (900-
960 cm
-1
). Aceste trei benzi sunt utile pentru estimarea procentului de protein ce
se gsete sub form de -elice, form , sau are o orientare ntmpltoare a
lanului peptidic.
Conformaia de -elice d o band Raman intens corespunztoare amidei I
n regiunea 1650-1655 cm
-1
, o band Raman slab corespunztoare amidei III n
regiunea 1260-1295 cm
-1
i o band medie corespunztoare ntinderii legturii
C C n domeniul 900-945 cm
-1
. Celelalte structuri dau benzi Raman diferite.
Pe lng efectul Raman obinuit, n care nu au loc tranziii ntre stri
energetice electronice ale moleculelor, n anumite condiii experimentale, poate
aprea efectul Raman de rezonan.
Acest efect const n trecerea unui electron din starea fundamental pe un
nivel excitat de vibraie al unei stri electronice excitate, fenomen urmat de o
tranziie pe un nivel de vibraie al strii electronice fundamentale (fig. 1.61).



Fig. 1.61. Prezentarea schematic a efectului Raman de rezonan.

n cazul efectului Raman de rezonan nu are loc o relaxare preliminar pe
cel mai cobort nivel de vibraie al strii electronice excitate, aa cum se ntmpl
108

n cazul fluorescenei. Emisia radiaiei este instantanee iar spectrul obinut este sub
forma unor benzi nguste.
Pentru a obine spectrul Raman de rezonan se folosete o radiaie laser a
crei frecven este egal sau apropiat de frecvena corespunztoare unei tranziii
electronice.
Avantajul efectului Raman de rezonan const n marea sensibilitate i
selectivitate cu care poate fi studiat structura cromoforilor. Liniile Raman de
rezonan pot avea intensiti de 10
2
-10
6
ori mai mari dect liniile Raman
obinuite, iar spectrul obinut este mai simplu, deoarece sunt intensificate numai
liniile corespunztoare vibraiilor cromoforilor. Se pot obine astfel informaii
detaliate privind modurile de vibraie ale cromoforilor ce au benzi de absorbie n
apropierea lungimii de und a radiaiei excitatoare. Aceast selectivitate apare, de
exemplu, n cazul proteinelor hemului, unde benzile Raman de rezonan se
datoresc numai vibraiilor cromoforului tetrapirolic.