ENZIMAS II

Inhibiciones irreversibles:

Los inhibidores irreversibles o también conocidos como venenos enzimáticos tienen este nombre debido a
que lo que hacen es unirse a la enzima de forma covalente y así la enzima no puede volver a actuar nunca
más, ya tiene que ser degradado. Esto uds lo van a usar mucho para detener la reacción cuando hagan
actividades enzimaticas, como en el caso de la ureasa que se utiliza cloruro de mercurio, donde los grupos
mercurio de estos compuestos reaccionan con los grupos SH de ciertas enzimas uniendose el Hg de forma
covalente a estos grupos SH e impidiendo que la enzima pueda actuar.

Para que esto ocurra pueden darse dos cosas: una puede ser que el inhibidor se una a la enzima
directamente o que se una ya al complejo enzima-sustrato, pero independientemente de cómo sea se va a
dar una inhibición irreversible. Como lo muestra la figura:

Algunos ejemplos es como el de la figura inferior donde se utiliza el p-cloromercuribenzoato que tiene la
misma acción que el cloruro de mercurio porque el que va a actuar es el mercurio, este se va a unir a los
grupos SH de las enzimas, en el caso de la ureasa y de otras enzimas el SH es un grupo importante del AA
cisteína el cual es indispensable para su actividad, esto no quiere decir necesariamente que esos SH se
encuentren en el sitio catalítico sino que tambien puede ser que estos sean necesarios para que se de la
conformación ideal para que actue la enzima. De todas formas siempre son grupos SH.

Estos dos compuestos que después los vamos a ver cuando veamos metabolismo de nucleótidos púricos y
pirimídicos que son el 5-fluorouracilo y la 6-mercaptopurina reaccionan de esta forma como inhibidores
irreversibles a la hora de actuar, sin embargo ellos por si solos no tienen la actividad sino que tienen que
ser transformados; la célula cree que el mercapto es una purina y el otro un uracilo y los usa como bases
haciendolos nucleotidos pero entonces los lugares donde ellos van a actuar es donde tienen ese grupo ya
sea el fluor o ese grupo SH que eso hace que reaccione con las enzimas a la cuales va a inhibir de forma
irreversible, obviamente estos compuestos por ellos solos no tienen la accion solo cuando la célula los
convierte en nucleótidos pensando que son bases puricas o pirimidicas.
Después otra acción tambien importante de este tipo es el de la aspirina, el ácido acetil-salicílico actua
sobre la cicloxigenasa, este tema se vera más adelante en sangre con el doctor Alvarado, este mecanismo
ocurre ya que la aspirina lo que hace es acetilar a la enzima y de esta forma la inactiva, esta es otra forma
en la que el inhibidor se une covalentemente a la enzima, lo cual la inhibe de forma irreversible. Esta
enzima participa en la formación de eicosanoides a partir de ácido araquidónico, o sea ayuda a la
fromación de prostaglandinas y tromboxanos, en el caso de la aspirina actua sobre la producción de
tromboxanos y vitaminas.

Aplicaciones Clínicas
En cuanto a lo de aplicaciones clínicas vamos a ver solamente estas enzimas que aparecen en la figura de
abajo, las cuales son muy importantes ya que generalmente cuando alguien llega con síntomas o
clínicamente parece que esta sufriendo un infarto o ya le dio un infarto al miocardio, lo que se hace es
tomar una prueba de estas enzimas, generalmente se hace más rápidamente con la creatina kinasa y la
lactato deshidrogenasa, el sentido de esto es que hay ciertas enzimas en nuestro organismo que cumplen
su función como tal en una vía metabólica pero que en el momento en que ese organo o ese tejido sufre
algun problema de tal forma que las células pueden romperse, las enzimas que están en esas células
pueden salir al plasma y ahí las podemos detectar lo que puede contribuir para el diagnóstico de ciertas
enfermedades, como es el caso de las anteriores las cuales se incrementan en el plasma luego de un
infarto.
En el gráfico anterior se muestran los días y los valores normales de la enzima en el plasma, se puede
observar como al dia siguiente del infarto se incrementa 6 veces mas de lo normal la CPK, mientras que
la LDH y la HBDH tardan un poco mas de tiempo en incrementarse pero se mantienen por mas tiempo.

Otras enzimas que son utiles en el diagnstico de enfermedades pueden ser las transaminasas en lo que es
daño hepático ya que estas aparecen aumentadas, tambien pasa que las transaminasas pueden aumentar
cuando hay un infarto al miiocardio porque estas tambien se encuentran en el tejido cardiaco pero
obviamente hay que relacionar los síntomas clinicos con las pruebas de enzimas. Otra enzima que se
puede aumentar en sangre en caso de pancreatitis es la amilasa pancreática o la lipasa pancreatica, pero en
costa rica la que mas se detecta es la amilasa porque para la lipasa el método es más complicado y no todo
el mundo lo hace. Es por esto que todas estas enzimas pasan a ser marcadores porque se incrementan en
sangre en determinado momento cuando hay algún daño en cierto organo o tejido.
Es importante considerar que por ejemplo en el caso de la CPK hay isoenzimas, por lo tanto podría
determinarse si efectivamente la que esta aumentada es la que se encuentra en el músculo cardiaco para
que sea mucho más específico pero sin embargo en los hospitales no se hace de esta forma porque el
diagnostico debe ser rápido.

Regulación de la actividad enzimática

Si uno dice que la actividad enzimática es regulable puede sonar a que todas las enzimas pueden ser
enzimas reguladoras y no. Si tenemos una vía metabolica de A que va hasta F en cada una de las
reacciones vamos a tener una enzima diferente pero entonces para regular la formación de F no
necesariamente tenemos que decirle a las enzimas 1,2,3,4,5 ahora si actívense todas porque vamos a ir a
formar F sino que con solo que activemos a la enzima 1 o bien en ciertas vías se activan 2 enzimas por
decir algo la 1 y la 4; entonces ahí con solo tener dos enzimas reguladoras es suficiente.

Ahora ¿Cómo se puede regular esa enzima? Lo más característico que nosotros vamos a estar viendo en
las diferentes vías metabólicas y todos los metabolismos es que muchas veces el producto final me regula
su formación por ejemplo con los nucleotidos puricos y pirimidicos donde esto va a ser casi la regla
general, los mismos nucleotidos van a regular que tanto vamos a tener de ellos y ese es el mecanismo que
generalmente se va a llevar a cabo.
Pero tambien no necesariamente se tiene que dar de esta forma sino que en algunos casos la actividad
enzimática puede ser regulada por otros compuestos externos que vienen de otras vias que estan
relacionadas con esta y entonces tambien me pueden activar o desactivar (estimular o inhibir) a las
enzimas reguladoras. En este caso que vamos a ver esta inhibiendo pero tambien podria ser que se viera
estimulada:

Activación de zimógenos
¿Cómo se regularía esas enzimas? Hay varios mecanismos y vamos a empezar por el más simple que es la
activación de zimógenos.
Los zimógenos son enzimas que traen grupos extra que evitan que se pueda formar bien el sitio catalítico,
generalmente porque evitan que se de la conformación adecuada de la enzima para que esta se una a su
sustrato, recordemos que el sitio catalitico se forma en ese estado tridimensional, en ese estado
conformacional que van a tener las enzimas. Entonces si yo tengo una enzima X cuando esta adopta su
estructura tridimensional se forma el sitio catalitico o bien si tiene estructura cuaternaria eventualmete se
podria formar en esa estructura cuaternaria. Supongamos que solo tiene estructura terciaria entonces
cuando esta hace su cambio conformacional a su estructura tridimensional se forma el sitio catalítico,
pero si le añadimos otra cantidad de AA extra ya el arreglo tridimensional no puede ser el mismo y
entonces desaparece el sitio catalítico, hasta el momento en que le quite esos AA extra se va a dar la
conformación adecuada para que aparezca el sitio catalítico, ya que sin este la enzima no se puede unir al
sustrato o sea esta inactiva.

Aquí muchas veces se habla de proenzimas o sea una enzima que esta ya sintetizada pero que no tiene
actividad y la importancia de estos zimógenos es que actuen solamente donde deben actuar y que sea de
forma rápida porque la enzima ya esta sintetizada. Como por ejemplo en el caso de los factores de
coagulación donde la mayoria son zimogenos, y lo que pasa es que si tengo una ruptura en una vaso y de
repente diría el organismo bueno empecemos a sintetizar en el hígado los factores de la coagulación, ¿no
verdad? Sino que es necesario que esten ahí listos y que inmediatamente empiecen a activarse. Y lo
mismo ocurre con el tripsinogeno y quimiotripsinogeno que son proenzimas que se sintetizan en el
páncreas y son enzimas que actuan sobre la digestión de prots, por lo tanto estos tienen que estar
inactivos para que puedan viajar desde el páncreas hasta el lugar donde tienen que actuar. Porque si
vinieran activos todo el camino estarían degradando todas las proteínas que se encontraran y eso no nos
interesa, nos interesa que degrade las prots que ingerimos y eso solamente ocurre hasta el momento que
llegue al duodeno. Lo mismo ocurre con los factores de coagulación que andan ahí inactivos porque si no
estariamos coagulados pero que en el momento en que se necesitan son activados para que cumplan su
función. Estos son algunos ejemplos de la importancia de la presencia de zimógenos.

• Es importante recordar que los zimogenos son un proceso de regulación rápida.

 Inducción o represión enzimática

Hay hormonas que inducen la síntesis de determinada proteína que tenga actividad enzimática, por lo
tanto en determinado momento hay ciertas vías que se ven estimuladas porque hay aumento en la síntesis
de estas enzimas y entonces puede ser que haya inducción que sería aumento en la síntesis o bien
represión pero todo esto es a nivel del gen, que se aumente la transcripción del gen o que se inhiba la
transcripción de ese gen, pero esto es un mecanismo de regulación un poco más lento que lo anterior
porque aquí si lo que queremos es hacer inducción de una enzima tenemos que esperar cierto tiempo
mientras que se sintetiza para que aumenten las concentraciones en la célula o bien si nosotros lo que
hacemos es una represión, que no haya transcripción del gen que va a dar origen a esa enzima, entonces
tenemos que esperar a que esas enzimas que estaban ahí dando vueltas en la célula tengan que ser
degradadas para llegar a sentir que ya no hay más porque ya no estan sintetizando mas. Entonces este
mecanismo de inducción o represión enzimática es lento.

Fijación no covalente de ligandos

La fijación no covalente es algo reversible que viene se une pero el cual puede separarse y ya entonces
cambian las cosas y un ejemplo clásico de esto es la activación de las protein kinasas por el AMPc.
Entonces recuerden que todas las enzimas que uds le llamen kinasas es porque van a fosforilar, entonces
las protein kinasas en este caso como son dependientes de AMPc se llamam PKA, estas protein kinasas
tienen característico que poseen dos unidades reguladoras y dos unidades catalíticas y normalmente
cuando se sintetizan lo hacen la reguladora y la catalítica si la enzima esta ahí con su regulador, en el
momento que llegue el AMPc se lleva por decirlo asi a sus partes reguladoras cuando este se une a la
parte reguladora, estas sueltan las catalíticas, y las catalíticas felices porque ya ellas pueden ir a hacer su
acción porque ya estan activas, estan solas sin su parte reguladora. Entonces vamos a tener que esa
defición es no covalente porque resulta que eso es reversible, el AMPc se une y esta con las partes
reguladoras pero igual el AMPc se puede separar y entonces las reguladoras vuelven a capturar a las
catalíticas entonces estas últimas pierden su acción. Como el ejemplo de los novios que dio la profe de
que se comportan de manera diferente cuando esta o no con la novia (o).

Modificación covalente

Esta modificación covalente indica que algo se le va a unir covalentemente a la enzima, lo que más
vamos a ver es el ejemplo que se presenta abajo de la fosforilación o desfosforilación pero hay otros tipos
de modificaciones covalentes donde se pueden unir otros grupos no necesariamente el P pero en fin
pueden regular la actividad de una enzima, nosotros lo vamos a ver como fosforilación/ desfosforiñación
porque esto es lo que generalmente ocurre en las diferentes vías metabólicas y en el tipo de regulación
que vamos a ver.
Cuando hay fosforilación quien hace las fosforilaciones se llaman kinasas y quienes desfosforilan se
llaman fosfatasas. Los grupos blanco para fosforilar o para quitarles el grupo fosfato son la serina, la
treonina y la tirosina, ya que estos son tres AA que tienen grupos OH y en esos grupos es donde pueden
actuar las kinasas o las fosfatasas. Igual aquí no hay una regla general uno no puede decir que todas la
enzimas cuando se fosforilan se activan o todas cuando estan desfosforiladas estan inactivas, NO, ya que
esto depende de la enzima hay algunas que cuando se fosforilan se activan y otras que se inactivan y esto
es lógico porque si tenemos una hormona que quiere que se de determinada acción metabólica por
ejemplo que se de degradación de glucógeno pero entonces tenemos de un lado la degradación y por otro
la síntesis del glucógeno en la misma célula; entonces necesitamos regular que si yo quiero que se de la
degradación del glucogeno que no se la síntesis xq sino estariamos en un círculo vicioso, entonces para
regular esas vías la hormona dice ahora si a fosforilar, entonces se fosforilan las enzimas y unas se activan
mientras que otras se inactivan al fosforilarse. De manera contraria luego llegan las fosfatasas a
desfosforilar y entonces inactivan a aquellas que se activaron por la fosforilación y activan a las otras que
antes de habian inactivado.

Este es un ejemplo, mas adelante vamos a ver en el metabolismo de carbohidratos con la enzima del
metabolismo del glucogeno que era la que decía; la glucigeno fosforilasa que cuando se fosforila se hace
más activa que como se aprecia en la figura de abajo cambia un poco su conformación y se hace más
activa pero obviamente cuando se desfosforila por medio de una fosfatasa vuelve a tener muy poca
actividad.
 Mecanismos alostéricos

El hecho de que un compuesto que sea el producto final de una vía metabólica o bien que sea un producto
de otra vía metabólica o que sea un sustrato de otra vía metabólica o un sustrato de esa misma vía
metabólica pueda afectarme la actividad de una enzima la forma en que lo hace es por medio de
mecanismos alostéricos. Hasta este momento hemos visto enzimas que tiene el sitio catalítico como sitio
activo y en todo lo demás no tienen nada, entonces pueden unirse a estas otras enzimas que se les llama
tipo Michaelis y Menten que si tenemos en una grafica como la de abajo (a) una velocidad de reacción y
la concentración del sustrato la cinetica es que llega un momento en que se satura y que a bajas
concentraciones aumenta y aumenta hasta que después se mantiene. En cambio en las enzimas alostericas
que son otro tipo de enzimas y son reguladoras ya que van a tener el sitio catalítico pero tambien otros
sitios en donde se van a unir compuestos que puedan estimular o bien compuestos que me pueden inhibir
la actividad de la enzima al unirse a ella. Entonces por ejemplo tenemos una enzima que tiene un poco
actividad y tenemos una parte reguladora y otra catalítica y tambien los moduladores como en la figura b,
estos moduladores pueden aumentarme o disminuirme la actividad de la enzima, dependiendo de esto se
les llama moduladores alostericos positivos o negativos, respectivamente. Entonces lo que sucede es que
cuando se une un modulador alosterico positivo a la enzima entonces hay un cambio conformacional que
hace que esta sea más afín al sustrato lo cual quiere decir que la Km de esa enzima por el sustrato
disminuye, igual se habla de Km aunque estas enzimas no sean del tipo Michaelis y Menten.

a) b)

Se dice que la enzima esta en dos estados conformacionales R y T como en la figura de abajo, cuando esta
en R significa que esta en el estado relajado, en ese estado relajado esta activa y el otro estado T se dice
que es el estado tenso donde la enzima esta inactiva. El modificador alosterico negativo se une al estado
conformacional T y hace que el equilibrio se desplace hacia ese estado conformacional haciendo que la
parte de la enzima que todavía estaba en R pase a T inactivando la enzima. Cuando esta en el estado
relajado es cuando se une el sustrato y entonces si se le une ese modificador alosterico positivo a la
enzima hace que el equilibrio se desvie hacia ese estado relajado y ahí es donde se une el sustrato porque
en ese estado relajado es donde tiene actividad. Si uno hace la cinética de estas enzimas se ve que tiene un
comportamiento diferente a las de Michaelis y Menten, ya que estas enzimas alostericas tienen una
cinética sigmoide, en forma de S, y tiene la característica de que a pequeñas concentraciones aumenta un
poco pero después con muy pequeños cambios en la concentración aumenta mucho la velocidad, se dice
que esto es porque cuando viene una de estas enzimas alostericas que se une a un sustrato hace que se
aumente su actividad, o sea la unión de ese sustrato hace que aumente la actividad de la enzima y esté
más disponible a unir otros sustratos con más afinidad y así sucesivamente, obviamente hasta alcanzar un
punto en que por más sustrato que haya ya vamos a alcanzar una velocidad máxima porque igual las
enzimas se van a saturar por más afín que sea por el sustrato tiene cierta eficiencia. Entonces en la gráfica
se puede observar lo que es el efecto de un modificador alosterico positivo y uno negativo y estos
modificadores inclusive pueden cambiar hasta la cinética de la enzima de sigmoide a tipo hiperbole en el
caso del modificador positivo. En cambio un modificador alosterico negativo lo que hace es desviarme la
S hacia la derecha demostrando como la Km va a aumentar. Obviamente los tres siempre van a tener una
misma velocidad máxima pero la alcanzan a diferentes concentraciones de sustrato.
Entonces tenenmos que un inhibidor alosterico se une a un sitio diferente al sitio catalítico pero afecta el
valor de Km, lo aumenta ya que disminuye la actividad, mientras que un inhibidor no competitivo que al
igual que este se une a la enzima en otro sitio dsiminuye la velocidad maxima pero no me afecta la Km
porque no me afecta la afiniadad de la enzima por el sustrato.

Por ultimo vemos un ejemplo de por decirlo así dos vías metabólicas, una que va desde la A hasta la J y
otra que va desde la A hasta la F y en estas hay un momento en que el A pasa a B, este a C y el C puede
convertirse en D o en G y esto es lo que separa ambas vías metabólicas; y lo que pasa es que el hecho de
que el compuesto C se convierta hasta J o bien hasta F depende de la regulación que ejerzan J y F sobre la
enzima que me esta convirtiendo a C en D o en G, y esto es muy importante en nuestras vías metabólicas
porque todo esta en una maraña y un compuesto que sea de una vía puede afectar otras vías.

Quiz
(ese quiz no tiene las respuestas super completas pero tal vez nos sirva de algo).
1) Mencione dos clases de enzimas y explique cual es su función.
Clase 1: oxidorreductasas, participan en reacciones de oxido-reducción y requieren de la presencia de
coenzimas como el NAD+ y NADP.

Clase 2: transferasas, se encargan de transferir grupos como los fosfatos utilizando la energía de ATP.

Clase 3: hidrolasas, se encargan del rompimiento hidrolítico de enlaces.

Clase 4: liasas, se encargan del rompimiento de enlaces C-C, C-O, C-N por medios diferentes a la
hidrólisis y la oxidación.

Clase 5: isomerasas, se encargan de la interconversión de isómeros como de L a D o de aldehido a

ceto.

Clase 6: ligasas, condensación de dos sustancias diferentes la energia de obtiene del ATP.

2) Grafique el efecto del pH sobre la velocidad de la reacción, indique donde hay

desnaturalización y donde hay pH óptimo.

3) Grafique el efecto de un inhibidor competitivo, indique cual es el valor de la Vmax y de Km

en presencia y ausencia del inhibidor.

4) ¿Cuales diferencias hay entre un inhibidor no competitivo y uno acompetitivo y cuales

semejanzas?
Semejanzas: El inhibidor se une a un sitio diferente al sitio catalítico.
El inhibidor no tiene semejanza estructural con el sustrato.
Diferencias: En la acompetitiva el inhibidor se une solo al complejo enzima sustrato.
En la no competitiva disminuye el valor de velocidad max.
En la acompetitiva se da una aparente mayor afinidad de la enzima por el sustrato.