Ascaridia galli: Nuevas tecnologas para el control de una antigua parasitosis.

Javier Ramrez(1), Teresa Arangena(1), Jos Ramn Martn-Pacheco(2), Fernando Simn(2). (*') 1. Ibrica de Tecnologa Avcola (Ibertec). 2. Laboratorio de Parasitologa, Facultad de Farmacia, Universidad de Salamanca. El Ascaridia galli, parsito responsable de la ascaridiasis aviar, es un nematodo que se localiza en el tracto intestinal de diversas especies de aves y se considera uno de los vermes ms extendidos, tanto en las poblaciones silvestres como domsticas de todo el mundo. Los sntomas y signos de esta infectacin, como enteritis, diarrea y perdida de sangre, estn asociados con la presencia de vermes en el tubo digestivo. El descenso del contenido en glucgeno y protenas del msculo -Ramadan y col., 1991- se debe a la capacidad del parsito para sustraer metabolitos del hospedador. No es de extraar, por tanto, que se haya descrito un descenso del ritmo de crecimiento y prdida de peso en las aves infectadas. En nuestra regin existan datos de prevalencias del 13 ,5% en gallinas de la provincia de Salamanca en la dcada de los aos 50 -Simn Vicente, 1956-. Ms recientemente, en otras partes de Espaa, se ha constatado que el 2,97% de las palomas de Crdoba estaban infectadas por A. galli, y el 8,91% por A. columbae -Martnez-Moreno y col., 1989. Diversos estudios epizootiolgicos publicados en aos recientes muestran la presencia del parsito en distintas partes del mundo -Tabla 1 -: en Europa se han observado prevalencias cercanas al 64% -Permin, 1999; Hohenberger, 2000-; en Africa las prevalencias estimadas oscilan entre el 24 y el 69% -Magwisha y col., 2002; Eshetu y col., 2001; Poulsen y col., 2000; Permin y col., 1997; Mpoame & Agbede, 1995-; en India A. galli es la especie parsita ms prevalente en los pavos domsticos, segn Yadav y Tandonh -1991-; en Arkansas -EE. UU.- la presencia de A. galli se observ en el 37,3% y 3,9% de las gallinas de dos explotaciones de compaas dedicadas a la produccin de aves para el consumo -Wilson y col.; 1994.

La modalidad de mantenimiento en bateras, implantada en muchos pases desde hace dcadas, hace muy difcil la diseminacin de la infeccin por lo que, durante aos, esta parasitosis no se han tenido en consideracin, dada su baja incidencia en las explotaciones avcolas. La normativa europea actual sobre cra de gallinas ponedoras tiende a que stas sean mantenidas en condiciones similares a las del suelo-jaulas enriquecidas-; incluso normativas locales de algunos pases europeos prohibirn el uso de cualquier tipo de jaula y, en ltimo caso, una creciente tasa de consumidores demanda huevos de gallinas mantenidas en el suelo y al aire libre, con espacio para moverse libremente, eliminando su hacinamiento. Este retorno a la forma de explotacin clsica implica un considerable incremento del riesgo de infecciones por agentes cuyas fases infectantes se encuentran en el suelo, como lo demuestran los resultados obtenidos por Permin y col. -I999- en diversos sistemas de explotacin; estos autores observaron slo una prevalencia de A. galli del 5% en gallinas mantenidas en bateras, mientras que en sistemas de cama de paja apreciaron un 41,9%, y en explotaciones al aire libre un 63,8%. Actualmente se considera a A. Galli un importante problema econmico en las explotaciones avcolas de todo el mundo Gauly y col., 2000. Puesto que durante varias dcadas el tipo de explotacin en bateras haca muy difcil la diseminacin de la infeccin, no se han producido avances en el diagnstico de esta parasitosis. Su deteccin rutinaria se realiza exclusivamente identificando los huevos del parsito en las heces de las aves. Esto implica que cuando se tiene conocimiento de la presencia del parsito, los vermes adultos se encuentran localizados en el intestino de las aves y los daos ms importantes ya se han producido o estn en curso y, lo que es ms importante desde el punto de vista epizootiolgico, ya se est produciendo la difusin del mismo entre la poblacin de la explotacin. Por esta razn, el primer paso en el control de la ascaridiasis aviar es desarrollar unos mtodos de diagnstico precoz que permitan la deteccin de la presencia del parsito antes de que ste sea capaz de reproducirse y extenderse a otras aves sanas.

A lo largo de dos aos, en colaboracin con la Universidad de Salamanca y el Laboratorio de Patologa de IBERTEC hemos realizado diversos estudios con el fin de determinar la situacin epizootiolgica de la ascaridiasis aviar en nuestra regin, y evaluar la posibilidad de desarrollar un mtodo de diagnstico inmunolgico que permitiera detectar la presencia del parsito en una fase temprana de la infeccin. Estudio epizootiolgico.Se llev a cabo en 7 granjas espaolas en las que las gallinas se mantienen en el suelo -tabla 2-. Se analizaron heces frescas individuales recogidas en tres explotaciones y mezcla de heces de diversas aves en otras cuatro, mediante la tcnica de flotacin con sulfato de zinc. En las granjas en las que se pudieron recoger heces individuales se midi la prevalencia y la abundancia de huevos del parsito, mientras que en aquellas en las que se consiguieron muestras sin individualizar se evalu la presencia o ausencia de huevos y su abundancia.

Los resultados del estudio coprolgico se muestran en la tabla 3. Se detectaron huevos de A. galli en 5 de las 7 explotaciones estudiadas. La mayor abundancia de huevos -> 100/g de heces- se encontr en las gallinas de las explotaciones 4 y 7; en otra granja -la n 5-, se encontr una abundancia moderada de 50 a 100 huevos/g de heces-. Las granjas 1 y 2 estaban libres del parsito. En las granjas en las se consiguieron muestras de heces individuales- nmeros 2, 3 y 6- las prevalencias aumentaron paralelamente a la edad de las aves. Las gallinas de 28 semanas de edad no estaban parasitadas, mientras que las de 29 semanas presentaron prevalencias del 12% y las de 55 semanas del 25%.

Los resultados obtenidos muestran que la infeccin por A. galli es frecuente en las explotaciones avcolas nacionales que se han introducido el mantenimiento de las ponedoras en el suelo. Las diferencias de abundancia de huevos entre las distintas granjas estn, probablemente, relacionadas con la densidad de poblacin y la frecuencia con que se limpia el suelo en cada una de ellas. Por otra parte, los datos de las explotaciones en las que se analizaron heces individuales mostraron niveles de prevalencia menores que los obtenidos en estudios similares realizados en otros pases de Europa, lo que podra ser atribuido a que el mantenimiento en el suelo es de reciente introduccin en nuestras granjas.

Diagnstico inmunolgico.Se procesaron 140 muestras de sangre de aves de las mismas granjas en las que se realiz el estudio anterior. Se emple la tcnica de enzimoinmunoensayo -ELISA- para detectar la presencia de anticuerpos -lgG- contra el parsito. Los resultados del anlisis serolgico aparecen en la tabla 4. De las 140 muestras de sangre analizadas, 29 resultaron positivas, lo que supone una seroprevalencia del 21,8%. Al igual que en los anlisis coprolgicos, se observ una considerable variacin entre las distintas granjas estudiadas. En las granjas 1 y 2 -en las que no se observaron huevos del parsito-, tampoco se encontraron muestras de sangre positivas. En las explotaciones 3, 4, 5 y 6 aparecieron seroprevalencias medias entre 7,6% y 14,28%, en tanto que en la granja nmero 7 -en la que previamente se observo una gran abundancia de huevos- la seroprevalencia fue del 95%.

El hecho de que exista una clara correlacin entre los datos de prevalencia y abundancia obtenidos mediante coprologa y los obtenidos mediante ELISA en las mismas granjas, demuestra la abilidad del test de ELISA puesto a punto. En una segunda fase se realizaron experimentos para determinar la capacidad del test para detectar la infeccin antes de la maduracin de los vermes adultos y su localizacin denitiva en el intestino de las aves. Para ello, unos huevos de A. galli aislados de las heces de gallinas infectadas naturalmente se incubaron a 37 C con luz natural, hasta la aparicin de las larvas infectantes -L2-. Dosis de 150 huevos embrionados se administraron a gallinas jvenes por va oral. Estas gallinas fueron sangradas antes de la infeccin y semanalmente durante un perodo de 10 semanas. Adems se tomaron muestras de heces individuales con una frecuencia tambin semanal. Los resultados del anlisis de anticuerpos por ELISA y de huevos en heces mediante la tcnica de flotacin con sulfato de zinc, se 1 muestran en la gura 1. Se detectaron huevos del parsito a partir de la 7 semana post-infeccin, hecho que confirm el xito de las infecciones experimentales. Desde el punto de vista inmunolgico se observ un progresivo incremento del nivel de anticuerpos, que superan el limite de positividad establecido -0,85- hacia la 4-5 semanas post-infeccin. Por tanto, el test de ELISA permite la deteccin de la presencia del parsito 2-3 semanas antes de que los vermes adultos comiencen a poner huevos. Esto permitir aplicar las medidas preventivas que se consideren oportunas antes de que la parasitosis comience su diseminacin en la explotacin.

Perspectivas futuras.Aunque el sistema de deteccin precoz de la ascaridiasis puesto a punto es ecaz, mediante estudios electroforticos y de Western blot, se han identificado molculas marcadoras de infeccin en el complejo antignico de A. galli. Si los experimentos actual- mente en curso demuestran que dichas molculas, aplicadas a un ELISA, permiten el inmunodiagnstico de la

parasitosis sin detrimento de la sensibilidad, el mtodo actual ser modificado. Actualmente, nuestra investigacin se enfoca a la realizacin de estudios tendentes a determinar la posibilidad de inducir una respuesta inmune protectora en las gallinas que impida el desarrollo de los vermes adultos de A. galli en su intestino. Se evitara as la diseminacin en las explotaciones en las que aparezca el parsito. Este tipo de control tiene la ventaja de no contaminar con residuos qumicos del tratamiento los productos consumo.