Los medios de cultivo sirven para el desarrollo, propagacin, multiplicacin de microorganismos.

La muestra biolgica tiene poca cantidad de microorganismo lo que se quiere con los medios de cultivo es aumentar la cantidad de organismo para estudiarlos, identificarlos, ver sus caractersticas culturales, caractersticas bioqumicas, investigacin y sobre todo para su diagnostico. Presencia de los microorganismos en las colonias no se miran microorganismo individuales como en el microscopio si no que agrupados en colonias. 1. Requerimientos nutricionales de los microorganismo ( de todo ser vivo en general)
Fuentes de carbono: nos sirve para dar energa. Ejemplo: dextrosa,

lactosa, sacarosa, galactosa, glucosa, almidn.

Fuentes de nitrgeno : nos sirve para sintetizar protenas tanto para su

estructura como para su funcionamiento necesitan alas protenas Fuentes de nitrgeno inorgnicos : urea , amonio , nitratos Fuentes de nitrgeno orgnicos : caldo peptonado (pptidos) peptona bacteriolgica , peptona de casena , peptona de soya
Sales minerales : sirve para tener el equilibrio de la presin osmtica

Ejemplos : cloruro de sodio , sales de potasio , magnesio sulfato Factores de crecimiento: permiten a las bacterias salir de la fase latente y comenzar con la fase de crecimiento exponencial. pueden ser factores de crecimiento.
Factores inhibidores: permite el crecimiento de un grupo pequeo , mas

Ejemplo: sangre,

suero sanguneo, extractos de levaduras, algunas aminocidos tambin

especifico inhibiendo un grupo gran de microorganismos no todos los medios de cultivos lo tiene pero entre ms especfico un medio tendr de

todas maneras los factores inhibidores. Ejemplo : cristal violeta , azul de bromotimol , sales biliares, antibiticos 2. Clasificacin de medios de cultivos

Slidos: los que tienen agar y siempre van a estar en las placas petr., tubos de ensayo en cualquier lado : ejemplo: agar champam

Semislidos :ejemplo: El medio sim solo se dan en los tubos de ensayo Lquidos : caldo peptonado , caldo tioglicolato solo se dan en los tubos de ensayo

3. Tipos de medios d cultivos

Medios enriquecidos: o Tienen sustancias altamente nutritivas o No tiene sustancias inhibidoras o Crecen la mayora de microorganismos : Nutricionalmente exigentes: requieren de sustancias altamente nutritivas ( muy ricas nutricionalmente ) , si no no crecen . No fastidiosos : No son exigentes y crecen si hay o no sustancias ricas Ejemplo : Agar sangre ( crecen streptoccos) (nutricionalmente exigentes) , Agar TCA , Agar chocolate (neisserias) (nutricionalmente exigentes)

Medios Comunes : No tiene sustancias inhibidoras y los nutrientes que tienen en su composicin permiten el desarrollo de el comn de los microorganismos (microorganismo que no exigen muchos nutrientes que se alimentan con nutrientes sencillos , no son muy complejos ) Ejemplo: Agar cuenta colonias( contar que cantidad de microorganismos hay en una muestra) , Agar mueller hinton( para hacer el antibiograma,

prueba de suseptibilidad a los antibiticos ) , Caldo o agua peptonada ( estudiar la fermentacin de carbohidratos)

Medios diferenciales : Tiene un indicador de Ph , colorantes , sustancias inhibidoras , sirven para detectar o estudiar el metabolismo microbiano. Diferenciar grupos de microorganismos Ejemplo : Agar macconkey (bacterias lactosa positivo de lactosa negativo; gram negativas ), Agar EMB( diferenciacin de bacterias gram negativas ) , Medio tioglicolato ( diferenciar bateras aerobias de anaerobias ) , Medio SIM (sulfuro indol movilidad ) ( diferenciar grupos de bacterias mviles de inmviles ) Agar saburol ( para cultivar hongos) Agar papa dextrosa ( para hongos)

Medios de transporte : Sirve para transportar a microorganismos de un lugar otro , distancias largar por tiempos, largos Ejemplo medio caliber , caldo o agua peptonado Ingredientes : Bacto agar , es agar solo solidifica el medio Dextrosa , ingrediente mas glucosa

Medios selectivos : es mas especifico , se cultivan grupos pequeos de microorganismos ejemplos : familias ,
Agar TSI (Agar triple azcar hierro) : sirven para pruebas de

diferenciacin bioqumica para identificar Para familias de las enterobacterias ( bacilos gram negativos)

Agar LIA ( agar lisina hierro ) : sirven para pruebas de diferenciacin bioqumica para identificar enterobacterias

Agar citrato de Simmons : sirven para pruebas de diferenciacin bioqumica para identificar enterobacterias

Caldo lactosado: tambin para enterobacterias , se aplica para muestras biolgicas que sean alimentos o aguas , crecen bacterias

lactosa positivos , no crecen la lactosa negativo es decir crecern las bacterias que son capaces de degradar a la lactosa ejemplo lactosa positivo : escherichia coli

Medios de un propsito : Son mas especficos , tienen factores inhibidores Menos especficos Agar S S , crecimiento de salmonela y shigela

Agar selectivo de streptoccos crecimiento streptoccos (un solo genero bacteriano)

Agar chapmam crecimiento de staphylococos (un solo genero

bacteriano) Agar base urea para organismo ureasas positivos , es decir se puede hidrolizar la urea Ejemplo : Proteus Agar T C B S es virus Ejemplo cholerae ,helicobacter pilori Agar Tricophyton , hongos dermatgenos tricophyton Ms especficos Medio base G C , aislar gonococos (Especies )

Medio loeffler , es medio nada mas corynebacterium diphtheriae (Especies ) Agar mitis salivarius , estrectococos mitus ,

estrectococossalivarius , estrectococos mutans 0

1. Procedimientos realizados en la practica Agar de papa dextrosa (50ml)

Agar TSI (Agar triple azcar hierro) (20 ml)

Medio tioglicolato (30 ml)

 Agar TSA (Tripticasa Soya Agar) (100ml)

Agar Mc Conkey (100ml)

Caldo Peptonado (30 ml)

Desarrollar:

Agar de papa dextrosa (50ml) FORMULA : Infusin de Papa200.0 Dextrosa20.0 Agar Bacteriolgico15.0 pH 5.6 0.2

Agar TSI (Agar triple azcar hierro) (20 ml)

Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g Glucosa 1g Lactosa 10g Sacarosa 10g Sulfato de hierro 0,20 Cloruro sdico 5g Tiosulfato de sodio 0,30g Rojo fenol 0,024g Agar 12g

Medio tioglicolato (30 ml)

FORMULA

Agar TSA (Tripticasa Soya Agar) (100ml) FORMULA Digerido pancretico de caseina 15.0 g Digerido papaico de haba de soja 5.0 g

Cloruro Sdico 5.0 g Agar 15.0 g Factores de crecimiento 1.5 g Sangre desfibrinada de carnero 50.0 ml

Agar Mc Conkey (100ml) FORMULA Digerido pancretico de gelatina 17.0 g Digerido pancretico de caseina 1.5 g Digerido pptico de tejido animal 1.5 g Cloruro Sdico 5.0 g Agar 13.5 g Lactosa10.0 g Sales biliares 1.5 g Rojo neutro 0.03 g Cristal violeta 0.001 g

Caldo Peptonado (30 ml) FORMULA

10.0g Peptona 5.0g NaCl (cloruro de sodio) 3.5g Na2HPO4 (fosfato de sodio dibsico o fosfato de sodio) 1.5g KH2PO4 (fosfato de sodio monobsico o fosfato monopotsico) pH ajustado a 7.2 0.2 a 25C

Cuestionario

Fundamento del agar chapman y como se diferencias las colonias de staphylococos areus , staphylococos, saporophyticus , en este medio.
1.

Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de los otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: as se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus, ya que este grmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas).

2.

Cul es el Fundamento del Agar Mitis Salivarius y para que sirve?

Mitis salviarius agar se utiliza para diferenciar entre las especies de Streptococcus y muy cerca del gnero Enterococcus (antes en el gnero Streptococcus), que son la flora en la boca. Estos organismos son muy comunes en la boca, y se han asociado con la caries dental, as como los agentes de la endocarditis. Los azcares en este medio son sascharose y glucosa, as como los tintes de azul tripn y cristal violeta. El azul tripn es absorbido por el coolonies bacteriana, causando que se vuelvan azules. El cristal violeta, junto con el telurito 1% aadido a este medio, inhibe bacterias Gram -, as como muchas otras bacterias gram +. Estreptococo salivarius utiliza los azcares para producir una goma levan-como, produciendo pegajosa, mucosa, la cada de la goma-colonias. Estreptococo mitis colonias ser pequeo, azul plano, la luz. Estreptococos mutans se undule en forma de colonias, con un granulado de vidrio esmerilado aspecto (lo que dextrano de azcar) Enterococcus producir oscuro, azul-negro colonias.

3.

Qu es un medio de transporte y para que sirve?

Es un medio de cultivo que es capaz de mantener viva una cepa de microorganismos por un periodo prolongado manteniendo a los microorganismos vivos y sobre todo sin alterar su concentracin. Los medios de transporte deben cumplir con los siguientes criterios: Almacenamiento temporal de los especmenes que se transportan al laboratorio para su cultivo. Mantener la viabilidad de todos los organismos presentes en la muestra sin alterar su concentracin. Slo contienen buffers y la sal. Falta de carbono, nitrgeno, y factores de crecimiento orgnico con el fin de evitar la multiplicacin microbiana. Medios de transporte utilizados en el aislamiento de anaerobios deben estar libres de oxgeno molecular.

Ejemplos de medios de transporte son: Caldo de tioglicolato de anaerobios estrictos. Medio de transporte stuart- un gel no-nutriente de agar blando que contiene un agente reductor para evitar la oxidacin, y el carbn vegetal para neutralizar Inhibidores de ciertas bacterias gonococos, y solucin salina amortiguada de glicerol para bacilos entricos. Venkat-ramakrishnan (vr) medio para el v. Cholerae.

4. Qu medidas de control de calidad se deben tomar en cuenta para la preparacin de medios de cultivo ? Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos y la absorcin de agua del exterior, as como la formacin de agua dentro de la botella como consecuencia de

las fluctuaciones de temperatura en el ambiente, favorecen el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de nutrientes, variaciones de Ph y cambios en el color del medio. Adems la exposicin a la luz puede llevar a importantes alteraciones en los constituyentes del medio de cultivo. Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo deshidratado, con el nombre del producto, nombre y nmero telefnico de la casa proveedora, nmero de control del frasco, fecha de recibo, fecha de expiracin, nmero de lote y fecha en que se abri el frasco. Tomando en cuenta los factores antes sealados, los medios de cultivo deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambiente y protegidos contra la humedad y la luz. La mayora de los suplementos se guardan en refrigeracin. Utilizando condiciones de almacenamiento adecuadas, los medios elaborados en polvo tienen una vida til de al menos 3 aos. El material que ha sufrido cambios substanciales, tales como hidratacin, endurecimiento y cambio de color, deben descartarse. El grado de disolucin de un medio deshidratado, as como la eficacia del mismo ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado en la rehidratacin. Se recomienda utilizar agua recin destilada o completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del medio que se quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos, debe agitarse constantemente para asegurar una adecuada homogenizacin al momento de servirlos. Cuando se va a esterilizar, debe asegurarse en seguir las instrucciones de tiempo, presin y temperatura para la obtencin de medios de cultivo ptimos. Una temperatura de 121 C , presin de 15 libras y un tiempo de esterilizacin de 15 minutos, son suficientes para la mayora de los medios. El medio esterilizado debe ser enfriado a 45-60C en un bao mara, para evitar la formacin de agua de condensacin. Al ser vertidos en las placas Petri, evitar la formacin de burbujas y cogulos. Durante el proceso de servida, debe tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por esterilidad y eficiencia. El medio de cultivo reconstituido tiene una vida til limitada. Si no se emplea de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su utilidad durante un periodo de tiempo. El almacenamiento a 4C es el mejor para la mayora de los medios. Sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a temperatura ambiente. Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecacin se aconseja que se guarden en bolsas plsticas bien cerradas. Los platos Petri almacenados as, deben mantenerse con el fondo hacia arriba. aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibiticos en los que el exceso de agua puede afectar la dilucin de las colonias y por ende la lectura del halo de inhibicin.

Dado que los medios almacenados en refrigeracin, cuando pasan a temperatura ambiente tienden a formar agua de condensacin en la superficie, se recomienda poner los platos Petri en la incubadora a 35C por 2 horas, colocndolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca. Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las colonias en la eficiencia o calidad, mediante la inoculacin de microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas. Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domsticas o cepas control comerciales ( ATCC ). Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos. Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario Evite el congelamiento de los medios preparados o la sangre de carnero. Al colocar en la refrigeradora los medios preparados, debe colocar los de ms reciente preparacin al fondo y los ms viejos adelante. Rotular todos los medios preparados, tanto en platos Petri como en tubos, indicando adems, la fecha de preparacin y expiracin.