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TTULO: Phytophthora: Caractersticas, diagnstico y daos que provoca en algunos cultivos tropicales. Medidas de control.

Autor: Yamil Echemendia Medina.

Instituto de Investigaciones en Fruticultura Tropical.

INTRODUCCIN. Anualmente son considerables los gastos econmicos que se producen a escala internacional por concepto de prdidas en diversos cultivos debido al ataque de diferentes plagas y enfermedades, as como tambin por el uso de productos qumicos destinados a prevenirlas y controlarlas. Es importante resaltar el papel que ocupan las enfermedades fungosas dentro del conjunto de afecciones que producen daos en las plantaciones, debido fundamentalmente a su diversidad y a lo difcil que resulta su control (15). Un problema fitosanitario bien reconocido lo constituyen las enfermedades causadas por los hongos del gnero Phytophthora, entre las cuales se destacan: en los ctricos, la podredumbre del cuello de la raz y parte basal del tallo, la gomosis y el aguado o podredumbre marrn de los frutos, producidas fundamentalmente por P. citrophthora y P. parasitica; en el aguacatero, la pudricin de las races causada por P. cinnamomi y el cncer del tronco producido al menos por tres especies de Phytophthora (P. cinnamomi, P. heveae y P. citricola); P. palmivora es la causa de la pudricin de las yemas en el cocotero, lo cual es un problema comn en muchas reas donde se practica este cultivo (Oeste de la India, Amrica Central, Asia y las Filipinas); en el caso de la guayaba P. parasitica provoca la pudricin de los frutos, aunque tambin han sido aisladas P. heveae (India) y P. citricola (Hawaii); en el mango han sido reportadas dos especies de Phytophthora como agentes causales de enfermedades, como es el caso de P. heveae (India) y P. palmivora (Ivory Coast), siendo tambin esta ltima la responsable de considerables daos en el cultivo de la papaya, en varias reas tropicales (Hawaii, Australia, Costa Rica y Mxico) conjuntamente con P. cinnamomi (reportada en Per) (52). Numerosos han sido las investigaciones encaminadas al estudio de las caractersticas de estas especies, su morfologa y fisiologa, su ubicacin taxonmica, su epidemiologa y medidas de control y sin embargo actualmente los hongos del gnero Phytophthora continan siendo un problema fitosanitario en muchos de los cultivos tropicales anteriormente mencionados. Lo anteriormente expuesto justifica nuestro inters en desarrollar esta revisin bibliogrfica la cual tiene el objetivo de resumir los antecedentes existentes en la investigacin de estos patgenos y las enfermedades que provocan en algunos cultivos, sentando las bases que nos permitan proyectar investigaciones futuras, con el objetivo ampliar el conocimiento alcanzado sobre los mismos, as como el adecuado control y manejo de las enfermedades que provocan, y la posterior aplicacin de los estudios que se realicen para fortalecer la agroindustria frutcola en Cuba. .

RESEA HISTRICA. El gnero Phytophthora (del griego Phyton: planta; phthora: destructor) fue creado por de Bary en 1876 con P. infestans de Bary como especie tipo. Este investigador reconoci a dicho hongo como causante del blight tardo en la patata, en Europa (1840), previamente identificado como Botrytis infestans Montagne y luego como Peronospora infestans (Montagne) Caspary (18). Los primeros reportes de la presencia de Phytophthora en Cuba fueron dados a conocer por Cook y Horne en 1908, quienes la observaron en limones franceses (Citrus limon Burn), bergamotos (Citrus limettioides Tan.), naranja china (Citrus sinesis Osb.), toronja (Citrus paradisi Macf.) y limn silvestre (Citrus aurantifolia Swing. Var. Mexicana) que fue sealado como muy susceptible(50). Posteriormente en 1915, Fawcett dio a conocer la presencia de Phytophthora citrophthora (Sm & Sm) Leonian en la Isla de Pinos, actualmente municipio especial Isla de la Juventud y en Santiago de las Vegas, sobre tangelo (Citrus paradisi Macf. x Citrus reticulata Blanco) y toronja respectivamente(50). En 1918 Jonhston y Bruner confirmaron la presencia de P. citrophthora (Sm & Sm) Leonian y localizaron, adems, P. parasitica Dastur sobre plantas citricas afectadas por gomosis(50). Cook, en 1939 defini a P. parasitica Dastur como el agente causal de la pudricin del pie y la gomosis en las plantaciones citrcolas del pas (3). Sin embargo, no fue hasta 1975 que Rodrguez y Cabrera mostraron la amplia distribucin de Phytophthora en Cuba, afectando distintas especies y variedades de ctricos en las cuales provocaba lesiones de gomosis en el tronco, y pudricin del pie y las races, sin observar ataque a los frutos. En 1977, Rodrguez y cols. identifican las cepas aisladas en las diferentes zonas del pas como P. parasitica Dastur, sealando su presencia en Guantnamo, Contramaestre, Banes, Sola, Ceballos, Morn, Arimao, Motembo, Jagey Grande, Ceiba del Agua, Tapaste, Gira de Melena, Ciudad de La Habana, Municipio especial Isla de la Juventud, Herradura y Guane (50).

CARACTERISTICAS GENERALES DEL GNERO Phytophthora. A.- Ubicacin Taxonmica. El gnero Pythophthora pertenece a (45): Divisin: Eumycota Subdivisin: Phycomycotina Clase: Oomycetes Orden: Peronosporales Subfamilia: Phythiae Gnero(s): Phythophthora y Pytium B.- Caracteres Pythophthora. B.1.- Micelio. Todas las especies del gnero poseen un micelio hialino, continuo, de paredes paralelas o irregularmente calibrado, donde pueden observarse abundantes gotas oleaginosas. El micelio es cenoctico, observndose solo raramente la presencia de algunos tabiques que normalmente se encuentran separando las partes viejas carentes de protoplasma (1,49). Existen algunas especies en las cuales, bajo ciertas condiciones de cultivo, el micelio se presenta toruloso, con protuberancias y vesculas como por ejemplo en P. cinnamomi, P. cactorum y P. cryptogea (1,49). En los medios de cultivo el micelio se presenta areo, el cual puede ser marcadamente radiado o ligeramente estrellado, presentndose los bordes de la colonia redondeados o sinuosos y sumergido en el medio siendo precisamente en este ltimo en el que pueden diferenciarse las protuberancias y engrosamientos, ms o menos notable (45). El micelio es capaz de vivir de forma saprfita sobre las partculas de materia orgnica del suelo en ausencia del husped (13,16). Sin embargo segn otros autores (51) existe una invasin muy pobre de la materia orgnica por parte del micelio, y el movimiento de este travs del suelo es muy pequeo o nulo. Es importante sealar que en el cultivo in vitro se pueden originar variaciones del aspecto del micelio en algn sector de la colonia, las cuales pueden ser relevantes tanto macroscpica como microscpicamente en cuanto a la morfologa, as como desde el punto de vista fisiolgico y parasitario, debido a la posibilidad de producirse nuevas razas ms virulentas (1). morfolgicos generales de las especies de

Cuando las especies del gnero Pythophthora son cultivadas in vitro el desarrollo del micelio se ve condicionado por varios factores tales como la composicin del medio, la temperatura, los nutrientes, la tensin de oxgeno y de CO2, el pH y en menor escala la luz (7,45). El tipo de medio ejerce una influencia muy importante en la velocidad de crecimiento, el cual se ve favorecido en aquellos ricos en hidratos de carbono. Es importante resaltar el papel que ocupa la temperatura entre los factores que limitan el crecimiento vegetativo, razones por las cuales constituye un parmetro de elevada relevancia en la taxonoma. El margen de temperatura en el cual est comprendido el desarrollo del micelio va desde 1 C de temperatura mnima hasta los 37 C como mxima temperatura de crecimiento activo, situndose entre los 20 28 C la temperatura ptima para la mayora de las especies, teniendo en cuenta que este valor es especfico para cada una de ellas (Anexo. 2) (1). En el caso del pH el rango permisible para el cultivo in vitro de estas especies se encuentra entre 3.5 y 10, siendo el crecimiento ptimo especfico para la mayora de las especies, encontrndose en un rango entre 4.5 y 5.5. Generalmente, los valores de pH que permiten el mejor desarrollo del micelio, tambin son favorables para la produccin de esporangios, clamidosporas y oosporas (1). B.2- Reproduccin. Las especies del gnero Phytophthora presentan dos tipos de reproduccin: asexual (con la formacin de clamidosporas y esporangios, que contienen las zoosporas) y sexual (mediante la formacin de oosporas). Reproduccin asexual. El esporangiforo no se diferencia normalmente de las hifas, aunque en algunas ocasiones este puede ser ms ancho o delgado que stas y puede presentar hinchamientos. La presencia de esporangios es comn para todas las especies del gnero, son incoloros o de color amarillo tenue y de manera general se insertan terminalmente en el esporangiforo, aunque tambin puede n estar intercalados. El esporangio muchas veces presenta vacuolas y al microscopio se observa un aspecto granuloso en su interior.

Existen caractersticas del esporangio que son muy importantes para la taxonoma de las especies como su forma y tamao, la presencia o no de la papila y sus dimensiones (Anexo. 1), la manera en que estos se producen, as como la mayor o menor facilidad de este para desprenderse del esporangiforo (esta ltima caracterstica permite clasificarlos en caedizos: si se desprenden fcilmente del esporangiforo y no caedizos: si se desprende difcilmente) siendo tambin importante desde el punto de vista taxonmico la longitud del pedicelo que va unido al esporangio cuando este se desprende del esporangiforo (1, 52). Existen factores que afectan la produccin y el desarrollo de los esporangios como son: la humedad, la tensin de oxgeno, la luz, la temperatura y la nutricin. La presencia de humedad es fundamental para la formacin de esporangios, aunque la cantidad necesaria de la misma vara para cada especie. En la mayora de las especies los esporangios se producen ms abundantemente en presencia de luz, aunque el efecto de la misma es muy variable, llegando a estimularla en algunos caso e inhibindola en otros. El factor temperatura, que como se indic anteriormente ejerce una gran influencia en el desarrollo vegetativo del hongo, tambin influye grandemente en el desarrollo y formacin del esporangio. La temperatura ptima para la produccin de esporangios es diferente y especfica para cada especie, por lo que juega un papel destacado en la taxonoma, las mismas estn comprendidas entre los 20 y los 28 C (1, 52). Las zoosporas se forman dentro del esporangio, para lo cual es necesaria la presencia de agua libre. La formacin de estas puede estimularse in vitro cuando se incuba un cultivo con esporangios durante pocos minutos a temperaturas entre 5 y 10 C. La exposicin ms prolongada a estas temperaturas (10 15 minutos) provoca que las zoosporas sean liberadas, lo cual constituye la forma de germinacin indirecta de estos hongos. Las especies de este gnero presentan adems una forma de germinacin directa, en la cual el tubo germinativo se origina, principalmente, a partir de la papila del esporangio, este a su vez puede dar lugar rpidamente al micelio o producir un nuevo esporangio, todo lo cual depende de las condiciones del medio de cultivo (1, 52). Las zoosporas son las estructuras primarias que causan una nueva infeccin de las races. Estas esporas pueden nadar cortas distancias en el suelo con elevada humedad, as como tambin pueden ser transportadas grandes distancias en el agua de irrigacin o por las lluvias. Adems de

esta forma de dispersin las especies de Phytophthora pueden dispersarse en la naturaleza por el aire o siendo transportadas por la actividad de los humanos y algunos invertebrados (32). Los miembros de este gnero producen adems clamidosporas, las cuales constituyen un rgano de conservacin y supervivencia (9). Generalmente son de forma redondeada con una pared bien definida (ms de 2 micras de espesor), siendo comnmente intercalares aunque tambin pueden encontrarse en el extremo terminal de la hifa. Al principio las clamidosporas son hialinas, tornndose de un color amarillo o ligeramente marrn con la edad. Es importante sealar que no se forman en todas las especies, por lo cual su presencia es importante para la taxonoma de las mismas (1,45). Las clamidosporas pueden germinar dando lugar a numerosos tubos germinativos o a la produccin de esporangios, lo cual depender de la cantidad de nutrientes presentes en el medio de cultivo (Anexo. 3). En cuanto a la influencia de la temperatura se plantea que un rango entre 18 30 C es ptimo para que ocurra la germinacin de las clamidosporas, aunque tambin se ha producido germinacin entre 9 12 C y a 33 C. El pH ptimo para que ocurra este proceso est comprendido entre 5 y 7, aunque a valores de pH de 3 y 9 tambin se ha producido germinacin de las clamidosporas (1, 52). Adems es importante mencionar que las clamidosporas que persisten en el suelo constituyen tambin unidades infectivas (13). Reproduccin sexual. Los rganos sexuales constituyen el elemento taxonmico ms constantes y por tanto son de gran valor en la clasificacin de las especies. No todas las especies los producen o se muestran inconstantes en cuanto a su formacin, por lo que en algunos casos se requieren medios de cultivo especiales. Incluso en la naturaleza existen casos, como por ejemplo P. citrphthora, donde no se ha observado la produccin de estos rganos de reproduccin (1,45). Oogonio (rgano sexual femenino): Es de forma esfrica o ligeramente ahusada, usualmente se encuentra en el pice de una hifa, aunque tambin puede aparecer intercalado, separado del resto de la hifa por un grueso tabique. En cultivos jvenes es hialino pero posteriomente, con el envejecimiento, se torna amarillo o

ligeramente marrn. En la mayora de las especies es suave y puede presentar ligeras protuberancias o berrugas en algunos casos (1,52). Anteridio (rgano sexual masculino): Presenta una forma variable, puede ser esfrico, oval, en forma de clavo o cilndrico. Observndose de manera habitual solitario, hialino y con una pared externa delgada. Su disposicin respecto al oogonio puede ser anfgino o paragino, o ambas a la vez, siendo importante tener en cuenta esta disposicin para realizar la clasificacin taxonmica de las especies (1, 52). Oospora: Siempre se presenta de manera individual, ocupando relativamente toda la cavidad del oogonio. Es de forma esfrica, lisa o moderadamente verrugosa, y su coloracin puede ser hialina o ligeramente amarillo oscuro. El medio de cultivo ejerce una influencia considerable en la formacin de la oospora, segn Grente (1961), los medios naturales ricos, tales como el maz y la avena, son los ms favorables. No producindose en medios lquidos. Es importante sealar tambin que existen ciertas sustancias que favorecen su formacin, como son los extractos de plantas, ciertas vitaminas y algunos esteroles. Entre otros factores que tambin influyen en la formacin de la oospora podemos citar la tensin de oxgeno y CO2 , la presencia de luz, la temperatura cuyo ptimo est entre 20- 22 C, as como tambin los cultivos asociados de diferentes especies y razas que facilitan la produccin de oosporas entre las especies heterotlicas (especies auto estriles) . Dentro de las especies heterotlicas se encuentran: P.cinnamomi P. palmivora P. citrophthora P. parasitica P. arecae P. cambivora P. capsici P. colocasiae

P. cryptogea P. drechsleri P. infestan P. meadii P. mexicana La formacin de la oospora es el resultado de la fertilizacin de una oosfera uninucleada, la cual tiene lugar de diferentes formas segn la posicin del anteridio. Una vez que se ha formado la oospora esta entra en un perodo de reposo en el cual se distinguen dos estados: Latencia constitutiva y Latencia exgena. Una vez terminado este perodo la oospora germina dando lugar a un tubo germinativo, que a su vez deriva en la formacin de un esporangio, o con la formacin del talo micelial (1, 45). Es importante mencionar que todos los procesos de reproduccin, ya sean sexual o asexual, juegan un papel fundamental en el ciclo de vida del hongo (Anexo. 4). SNTOMAS DE LAS ENFERMEDADES PROVOCADAS POR Phytophthora spp EN ALGUNOS CULTIVOS TROPICALES. MEDIDAS DE CONTROL. Ctricos: Dentro de las especies de Phytophthora que provocan enfermedades en los ctricos se encuentran: P. citrophthora, P. parasitica y en un porciento menor de las infecciones se han aislado P. hibernalis, P. syringae y P. citricola. (37, 38, 46, 52). Adems existen reportes (en la Florida, la India y Sur Amrica, entre otros pases) donde se ha aislado P. palmivora como patgeno de los ctricos (34). Las enfermedades que estas especies producen en los ctricos se conocen como (34, 46, 52): 1. Gomosis. 2. Podredumbre del cuello de la raz y parte basal del tallo. 3. Aguado o podredumbre marrn de los frutos. Pudiendo causar adems Damping off y Blight en plntulas de semillero (46, 52).

Todas las especies de citricos son ms o menos susceptibles a estas enfermedades. La tolerancia o resistencia de las plantas al ataque de estos hongos se debe fundamentalmente a factores genticos, aunque es importante la influencia que ejercen muchos otros factores como: la edad, la composicin qumica y el vigor de los tejidos de la planta, la temperatura ambiental, la humedad relativa, las cantidades aportadas de agua y nutrientes minerales u orgnicos, as como la textura del terreno (47). Gomosis: En un inicio la e nfermedad se manifiesta en la base del tronco donde aparece una abundante exudacin de goma en la superficie de la corteza, la cual toma un color oscuro. Los tejidos internos mueren hasta el leo, el cual en algunos casos aparece de color marrn debido a las infiltraciones de una delgada capa de goma. Las zonas infectadas pueden tener una amplitud y una forma variable, observndose que progresan ms rpidamente en sentido longitudinal que lateral. Los tejidos muertos de la corteza se secan gradualmente, por lo que al poco tiempo la corteza aparece deprimida y resquebrajada, mientras que en el rea lmite de la lesin los tejidos se observan sanos, formndose un tpico chancro. La exudacin de goma depende de varios factores, tales como el tipo de suelo, las condiciones ambientales, la especie de ctrico y del proceso infectivo (37 ,46, 52). Podredumbre del cuello de la raz y parte basal del tallo: Produce la deshidratacin y muerte de la corteza, sin que ocurra la exudacin de goma. La lesin frecuentemente es visible junto a la superficie del suelo, pudindose observar a unos centmetros por debajo de este que la corteza aparece podrida igual que la de las races principales. Cuando las afectaciones en la base del tallo son considerables las plantas enfermas comienzan a mostrar en su parte area los efectos de la alteracin. Se observan hojas de color verde plido, encontrndose a menudo los nervios con una coloracin amarillenta; las brotaciones son escasas, con los limbos de las hojas reducidos confirindole a la planta un aspecto general de tristeza foliar. La produccin de frutos tambin se ve afectada, siendo escasa y con frutos de menor tamao que lo normal (37, 46, 52).

Aguado de los frutos: Como resultado de la infeccin de los frutos ctricos por especies de Phytophthora aparecen manchas pardas, ms o menos circulares y firmes (semejantes al cuero en apariencia y consistencia), adems de la presencia de un olor aromtico caracterstico (8, 37, 52). En condiciones de elevada humedad atmosfrica el hongo esporula en la superficie de las manchas formando un moho blanquecino que puede observarse a simple vista. Los frutos afectados generalmente se desprenden en un estado prematuro (37). Las especies de Phytophthora que causan la pudricin parda de los frutos son las mismas que producen gomosis y podredumbre de las races en los ctricos. Sin embargo P. citrophthora es la que ms frecuentemente se asocia con esta enfermedad, lo cual puede explicarse debido a que esta especie produce esporas ms rpido y abundantemente en los frutos infectados que P. parasitica (8). Control y manejo de estas enfermedades: Los mtodos de lucha contra el ataque de Phytophthora se dividen en dos: los mtodos indirectos y los mtodos directos (46). Mtodos indirectos: Consisten en colocar a las plantas en las mejores condiciones de cultivo para que estas puedan resistir los ataques de los hongos. Entre estos mtodos podemos mencionar: v Utilizar como porta-injerto la especie de ctricos que posee mayor resistencia o tolerancia a estos hongos. Entre los que podemos citar el naranjo trifoliado (Poncirus trifoliata), los hbridos del naranjo trifoliado (citrange Troyer y Citrange Carrizo), hbridos de pomelo y mandarina y el naranjo agrio. v Injertar la variedad comercial, normalmente sensible a esta enfermedad, a una altura del suelo no menor de los 30 cm, con el objetivo de impedir que el agua que se acumula en las parcelas (procedente de la lluvia o del riego) tenga contacto con esta parte del rbol, y as evitar que las zoosporas puedan fijarse en la corteza. v Facilitar un adecuado drenaje del suelo eliminando los encharcamientos. v Evitar que debido a las prcticas culturales se produzcan heridas, ya que estas constituyen una puerta de entrada para estos patgenos (37, 47).

Mtodos directos: Se basan en la aplicacin de productos qumicos para detener el desarrollo del hongo. Dentro de estos mtodos se encuentran: v Aplicacin directa en la base del tronco de una suspencin de un fungicida o de una mezcla de fungicidas, ya sea mediante la utilizacin de un pulverizador o con un pincel. Esta tcnica generalmente se aconseja en plantaciones jvenes como una medida preventiva, aunque tambin se utiliza en el caso de ataques pequeos o al comienzo de su desarrollo. Una variante de esta tcnica consiste en aplicar, en lugar de un fungicida, un mstico alquitranado, el cual limita la tensin de oxgeno que llega al hongo, evitando de esta manera que contine su crecimiento (haciendo 2 3 aplicaciones al ao). v Raspado de la goma y de los tejidos deshidratados, aplicando luego una suspencin concentrada de uno o de una mezcla de fungicidas. v Eliminacin completa de todo el tejido de la corteza afectada mediante ciruga y aplicar posteriormente el fungicida seguido de un mstico alquitranado (Tcnica de Fawcett) (37, 47). Son varios los fungicidas existentes en el mercado que pueden ser empleados en estas tcnicas. La actividad de los mismos se define como exoterpica pudiendo mencionar (37, 47): Oxicloruro de cobre y caldo bordels. Ditiocarbamatos (Zineb; Mancozeb; Maneb; Metiran; etc.). Ofetalimdicos (Captan; Folped; Captafol; etc.).

Es importante sealar que la actividad de estos productos se dirige fundamentalmente a impedir la germinacin de las zoosporas que llegan a la corteza y su efectividad sobre el micelio que se ha introducido en el interior de la misma es relativamente pobre. Con disponibilidad en el mercado, existen productos fungicidas que son absorbidos en cantidad suficiente a travs de las races y las hojas, y una vez en el sistema vascular de la planta son trasladados por los vasos llegando a los tejidos. Esto ha hecho posible desarrollar una lucha curativa inhibiendo el desarrollo de la parte vegetativa del hongo. El movimiento de estos fungicidas en el interior de la planta puede ser en dos direcciones: a.- En sentido ascendente o acrpeto (desde las races hasta las hojas, a travs del xilema conjuntamente con la savia bruta). b.- En sentido descendente o baspeto (desde las hojas a las races, a travs del floema, mezclado con la savia elaborada).

El momento de aplicacin de estos productos es cuando las plantas estn en crecimiento activo y siempre al comienzo de la infeccin y antes de que los chancros y exudados gomosos se hagan bien patentes. Dentro de este grupo se encuentran el fosetil aluminio (Aliett), con actividad ambimvil, el Metalaxil y el Cyprofuran con actividad ascendente (2, 3, 23). Aguacateros: El aguacate es un cultivo tropical o subtropical nativo de las Amricas. Son cuatro las especies de Phytophthora que causan enfermedaes en este cultivo: P. cinnamomi, P. citricola, P. palmivora, P. heveae, provocando la pudricin de las races, el cncer del tronco en California, el declinamiento de las plantas de semillero, y cncer del tronco en Guatemala, respectivamente (52). Pudricin de las races: P. cinnamomi fue descrito por primera vez en 1922 por Rands, en plantas de canela y desde entonces ha sido encontrado aproximadamente en 70 pases de las regiones tropicales y subtropicales, causando enfermedades en diferentes cultivos. La incedencia de este patgeno sobre el aguacate se describi por primera vez en 1927, en Puerto Rico, y actualmente podemos encontrarlo como agente causal de la pudricin de las races del aguacate en casi todas las reas del mundo donde se practica este cultivo (por ejemplo: Estados Unidos, Mxico, Amrica Central y Amrica del Sur , el Caribe, Australia, Nueva Zelandia, frica, Israel, Espaa, Marruecos, etc.)(52). La incidencia de esta enfermedad en las plantaciones provoca grandes prdidas en la industria del aguacate y constituye un problema serio en la mayora de las regiones tropicales donde se practica este cultivo. La pudricin de las races por P. cinnamomi provoca un declinamiento progresivo del rbol, en el cual se observan hojas ms pequeas que lo normal, usualmente de color verde plido o amarillentas y a menudo marchitas. Las ramas mueren regresivamente producto del avance de la enfermedad y los frutos son de corteza brillante. Como consecuencia de esta enfermedad el rbol muestra un aspecto general de marchitez y la copa del mismo se va desfoliando, llegando a secarse completamente en estados avanzados de la enfermedad. Como resultado la fructificacin va decayendo, aunque a veces se puede producir

una fructificacin excesiva, con frutos de pequeo tamao que no llegan a engordar. Producto del ataque del hongo las races alimenticias (o races absorbentes) mueren, observndose ennegrecidas y quebradizas, siendo posible no encontrarlas en estados avanzados de la infeccin, sin embargo la infeccin raramente se extiende hacia las races principales (13). Esta enfermedad puede producirse bajo un amplio rango de temperaturas del suelo que va desde 21 hasta 30 C, producindose muy poca o ninguna infeccin a 33 C y muy poca a temperaturas entre los 9-10 C (8, 13, 31, 52). Se presenta mayormente en los suelos con un drenaje deficiente, siendo la presencia del hongo y el exceso de humedad los dos factores que potencian el rpido desarrollo de la enfermedad (11,12). En el caso de la pudricin de las races del aguacatero las zoosporas son atradas por las races mediante un proceso de quimiotctico, luego germinan y penetran las races inicindose la pudricin de las mismas. Cncer del tronco: Al menos tres especies de Phytophthora provocan cncer del tronco en el aguacate: P.cinnamomi, P.heveae y P.citrcola. Esta enfermedad se caracteriza por la aparicin de una zona decolorada en la parte baja del tronco y la exudacin de grandes cantidades de un polvo blanco (un azcar hepta-carbonado comn en el aguacate) (31, 52). Control de la enfermedad: Virtualmente es imposible erradicar P. cinnamomi una vez que este se ha instalado en el suelo plantado. Sin embargo los cultivadores de aguacate emplean un conjunto de medidas practicas para reducir el dao a las races y lograr evitar el declinamiento del rbol. Algunos autores plantean que el control sobre P. cinnamomi puede lograrse aplicando un conjunto de medidas que forman parte de un programa integral el cual abarca la prevencin, las buenas practicas culturales, medidas de control biolgico, el control qumico y el uso de patrones resistentes. Dentro de estas medidas se encuentran plantar en suelos con un adecuado drenaje inte rno, producir patrones libres de la enfermedad en semilleros certificados y prevenir el movimiento de suelo o de agua de las reas infectadas hacia las reas con un crecimiento saludable.

Un factor que debe ser cuidadosamente controlado es la irrigacin del terreno plantado, tratando de evitar que el suelo se torne demasiado hmedo ya que esta enfermedad se ve favorecida en los suelos con un exceso de humedad. Pueden utilizarse productos fungicidas tales como el Ridomil (metalaxil) y el Alitte (fosetil Al), sin embargo el tratamiento qumico es muy costoso. Trabajos previos sobre el uso de patrones resistentes al ataque del hongo indican que este podra ser el mtodo ms satisfactorio para controlar la pudricin de las races del aguacatero por P. cinnamomi. Estudios realizados en California reportan como relativamente resistentes a los patrones: Duke 6, Duke 7, G 22, G 6, Huntalis, Barr Duke y Thomas (9, 10, 31, 33, 48). Cocotero: La pudricin de la yema causada por especies del gnero Phytophthora. fue reportada por primera vez Grand Cayman en 1834 y descrita subsecuentemente en Cuba, India, Filipinas, Jamaica, frica, Sri Lanka, etc (29) y constituye una de las enfermedades ms devastadoras del cultivo del coco. Esta enfermedad es causada por Phytophthora palmivora Butl, sin embargo en algunos pases se han encontrado otras especies de Phytophhtora como agente etiolgico de dicha enfermedad, por ejemplo: P. faberi en Filipinas, P. heveae en Ivory Coast y La Polinesia Francesa, P. parasitica en Costa Rica y P. nicotianae en Indonesia (29, 30). El primer sntoma visible de esta enfermedad es la marchitez de la hoja ms tierna sin abrir, tornndose parda y encorvada. Un tiempo despus las hojas jvenes ms cercanas a la espiga comienzan a mostrar sntomas similares hasta que queda afectado todo el conjunto. Producto de la podredumbre del cogollo la hoja principal puede ser fcilmente removida de la yema producindose en este momento un fuerte olor caracterstico y desagradable. La pudricin inicial de la yema causada por estos patgenos es firme y seca en estados tempranos, sin embargo rpidamente el tejido enfermo es invadido por bacterias y otros microorganismos tornndose blanda y humeda, en este momento resulta bastante difcil poder aislar P. palmivora. Los rboles ms susceptibles son aquellos entre 15 y 45 aos de edad. Entre otros factores que favorecen el desarrollo la infeccin por parte del

hongo y el desarrollo de la enfermedad se encuentran la alta humedad relativa y las lluvias, debido a que el hongo puede permanecer en un estado de dormancia en la base de la hoja durante el perodo de seca y una vez llagadas las lluvias es lavado hacia la yema. Dentro de las especies de palmas que son afectadas comnmente por esta enfermedad se encuentran el cocotero (Cocos nucifera), la areca (Areca catechu) y la palmira (Borassus flabellifer) (28, 29, 30). Control de la enfermedad: El control sobre la pudricin de la yema es bastante difcil, se plantea que las medidas curativas solo pueden salvar a la planta cuando la enfermedad es diagnosticada en un estado temprano, o sea, justo cuando la espiga comienza a mostrarlos primeros sntomas de marchitez. Dentro de estas medidas se encuentra el tratamiento de las plantas con fungicidas tales como el Aliette, el Ridomil o el cido fosfrico en forma de injeccin del tronco y las races o la utilizacin del Fenil mercurio urea, en forma de polvo, aplicndolo en las axilas de las hojas. Sin dejar de mencionar que todos estos tratamientos son bastante caros. Por lo que algunos autores sugieren emplear mediadas que contribuyan a prevenir indirectamente la enfermedad, tales como mejorar el drenaje del suelo y el adecuado control de la maleza lo cual puede reducir la humedad relativa (28, 29).

TCNICAS DE DIAGNSTICO. El gnero Phytphthora ha sido histricamente uno de los grupos de hongos fitopatgenos cuyo aislamiento es muy difcil. Varios han sido los investigadores que han estudiado y desarrollado medios de cultivo selectivos para estos hongos. La base nutritiva que se utiliza en la preparacin de estos medios debe ser preferiblemente medios naturales (Ej. chcharo, papa, harina de cereales, etc.) que permiten un crecimiento ms rpido de Phytophthora, aunque tambin puede emplearse una base totalmente artificial, con la condicin de que contenga tiamina. A esta base nutritiva, sea natural o artificial, se le adicionan inhibidores para eliminar las bacterias y hongos no deseados. Entre estos medios podemos citar: v Medio 3P (4). Pimaricina Penicilina Polimixina 100 ppm 50 ppm 50 ppm

Este medio permite un aislamiento rpido de las Pythiaceaes a partir de tejido infectado, sin embargo no es til para el aislamiento a partir del suelo. Es muy uitlizado para el aislamiento de P. parasitica, P. citrophthora y P. cryptogea. Otros autores plantean que la penicilina y la polimixina tienen actividad sobre Phytophthora, por lo que deben reemplearse por la vancomicina que no afecta a las Pythiaceaes (1). v Medio PV Pimaricina Vancomicina 100 ppm 200 ppm

Sin embargo estos mismos autores plantean que la presencia de elevadas concentraciones de pimaricina, la cual tiene actividad inhibitoria sobre la germinacin de las esporas, en los medios anteriormente mencionados, los hace poco efectivos para realizar aislamiento a partir del suelo. Por esta razn se han propuestos variantes en las cuales las dosis de pimaricina empleadas son menores:

a.- Pimaricina Penicilina Polimixina PCNB

2 ppm 80 U/mL 370 U/mL 10 ppm

b.- Pimaricina Vancomivcina PCNB

10 ppm 200 ppm 100 ppm

Como se ha planteado el aislamiento de las especies de Phytophthora a partir del suelo infectado es bastante difcil, debido fundamentalmente a la interferencia que ejercen otros hongos de crecimiento ms acelerado, como es el caso de las especies del gnero Pythium. Para solucionar este problema Masago H. et al, 1977 idearon un medio selectivo para Phytophthora capaz de inhibir el crecimiento de las especies de Pythium. v Medio BNPRA + Hymexazol PDA Agar Benomyl (50%) Nistatina (2000 U/mg) PCNB Rifampicina Ampicillin Hymexazol 1% 10 g/mL 25 g/mL 25 g/mL 10 g/mL 500 g/mL 25 50 g/mL

Adems de los medios generales, anteriormente mencionados, utilizados para realizar el aislamiento de los hongos del gnero Phytophthora, existen trabajos realizados por algunos autores donde se reportan medios especficos para algunas de las especies del gnero (40): Medios selectivos para P. cinnamomi 100 U/mL 100 ppm 50 ppm 60 ppm 50 ppm 100 ppm 10 ppm

Nistatina PCNB Estreptomicina Rosa bengala Nistatina Vancomicina PCNB

Varias son las tcnicas que tradicionalmente se han empleado para el aislamiento de estos hongos, como son: 1. Realizar el aislamiento a partir de tejido infectado. Se toman partes del margen de la lesin las cuales se lavan con abundante agua destilada. Una vez secas se realiza una desinfeccin superficial mediante una solucin de hipoclorito sdico al 0.5 %, de cloruro de

mercurio al 1 % o alcohol al 96 %, durante 5 minutos. Inmediatamente las muestras son lavadas nuevamente con agua destilada estril y secadas con un papel de filtro previamente esterilizado. A continuacin, con el bistur flameado, se toman pequeas porciones que correspondan al margen de la lesin, y que estn constituidas por una cantidad suficiente de tejido sano, las cuales se colocan en las placas Petri o en los tubos inclinados, que contengan los medios de cultivo selectivos y se incuban a una temperatura comprendida entre los 20-25 C. Es necesario aclarar que si el tejido afectado es el fruto la desinfeccin se realiza directamente sobre este, tomando luego con el bistur flameado, partes del margen de la zona contaminada, las cuales se colocan directamente sobre los medios de cultivo selectivos (52). 2. Realizar el aislamiento a partir del suelo infectado. Se toman muestras de suelo que se colocan en un recipiente, dentro de las cuales se entierran hasta los dos tercios de su altura frutos (especficos para la especie de Phytophthora que se quiere aislar, por ejemplo un limn para Phytophthora spp de los ctricos, pimiento, aguacate, etc.)y se mantiene bien humedecida la tierra durante varios das (normalmente de 7-10 das). Transcurrido este tiempo a partir de los frutos que muestran afectacin por una podredumbre oscura de consistencia dura, se toman porciones siguiendo la misma metodologa mencionada en el punto 1. Esta tcnica se conoce como tcn ica del cebo en la cual adems frutos pueden utilizarse como cebo partes de plantas o plntulas semillero (33). En el caso especfico de P. cinnamomi comnmente utilizan como cebo plntuilas de semillero de eucalipto, agujas conferas y leguminosas del gnero Lupinus (5). de de se de

Para realizar el aislamiento a partir del suelo existen otras tcnicas descritas conocidas como mtodo de plaqueo de diluciones de suelo (soil dilution methods) y determinacin del punto final con diluciones seriadas (serial dilution end-point methods) (43), las cuales constituyen adems tcnicas para estimar el nmero de propgulos del patgeno en el suelo (7). Adems de las tcnicas convencionales anteriormente descritas para el aislamiento y cuantificacin de las especies de Phytophthora existen otras tcnicas descritas ms recientemente que hacen ms sensibles y reproducibles estos ensayos.

Existe un sistema de ELISA basado en un anticuerpo monoclonal que ha sido empleado satisfactoriamente para detectar la presencia de Phytophthora en las races, este sistema se ha aplicado para la deteccin de zoosporas del hongo en el agua de irrigacin as como de los niveles de Phytophhtora en el suelo, previo a que sea plantado. Demostrando ser altamente especfico y sensible, por lo que constituye una herramienta til que permite un diagnstico ms rpido que las tcnicas convencionales de cultivo (38). Actualmente la aplicacin de las tcnicas moleculares de diagnstico en la patologa vegetal ha mejorado grandemente la capacidad de los investigadores para detectar dichos patgenos y obtener mayores conocimientos sobre su ecologa y epidemiologa. Por ejemplo la comparacin de regiones ITS dentro de los patgenos fngicos (aplicable a Phytophthora) ha probado ser muy til para la taxonoma de las especies. Por ejemplo se han desarrollado sistemas de deteccin basados en la tcnica del PCR especficos para hongos, as como tambin se han aplicado mtodos basados en la combinacin de las tcnicas de ELISA y PCR para mejorar la sensibilidad en la deteccin de estos patgenos (25). Para P. cinnamomi se han desarrollado tcnicas de cuantificacin en las races de los rboles de aguacate mediante el uso de una sonda de DNA especie especfica, lo cual permite medir, incluso, bajos niveles de este hongo presente en las races. Adems esta sonda puede ser utilizada para la identificacin de especies, ya que en experimentos realizados muestra una reactividad cruzada insignificante con otros organismos e incluso con otras especie s de Phytophthora cercanamente relacionadas (21). CONTROL DE LAS ENFERMEDADES CAUSADAS POR Phytophthora MEDIANTE LA BSQUEDA DE RESISTENCIA EN EL HOSPEDERO. ASPECTOS GENERALES. Como se mencion anteriormente dentro de las medidas de control establecidas para las enfermedades causadas por los hongos de este gnero juega un papel fundamental la utilizacin de portainjertos resistentes, destacandose dentro del conjunto de medidas a adoptar , ya que brinda grandes posibilidades para lograr un manejo adecuado de estas enfermedades (24). En la actualidad han sido notables los adelantos alcanzados en el estudio de la interaccin parsito-hospedero, para las enfermedades provocadas por hongos y especficamente para los sistemas Phytophthorahospedero, todo lo cual est encaminado a obtener patrones resistentes y medidas ms efectivas para lograr el control de las enfermedades., basados

en un mayor conocimiento sobre el desarrollo de los mecanismos de defensa en las plantas y la interaccin con el parsito. Una de las principales razones por las cuales los patgenos fngicos constituyen uno de los grupos que causan una variada gama de enfermedades en diversos cultivos es su habilidad de localizar y detectar superficies apropiadas en los hospederos y luego elaborar estructuras especializadas para desarrollar el proceso infeccioso. El evento inicial del ataque a la planta hospedera es la adhesin a la cticula y el crecimiento directo del tubo germinativo en la superficie de la planta. Luego en el sitio de penetracin se forma el apresorio el cual ejerce una marcada presin sobre la superficie del husped. Posteriormente crece la hifa de penetracin, la cual se diferencia a partir de la base del apresorio en contacto con la superficie del hospedero, la cual en muchos casos secreta una variedad de enzimas que degradan la pared y maceran los tejidos de la planta (ej. P. capsici y P. palmivora). Una vez que se ha producido la invasin del tejido por la hifa de penetracin, para que se produzca el crecimiento activo del hongo se requiere el establecimiento de una relacin parastica continuada con el hospedero que le proporciones al hongo los nutrientes necesarios para su crecimiento en la planta (27, 39, 44). Ante el ataque de los patgenos las plantas desarrollan mecanismos naturales de resistencia, siendo importante adems la influencia que ejercen los factores epidemilgicos y la predisposicin de las plantas en la determinacin de la infeccin. Los mecanismos de resistencia al ataque de Phytophthora se dividen en dos: aquellos que le confieren resistencia general (que es la resistencia de todas las especies de plantas a todos los patgenos, por ejemplo las reacciones de hipersensibilidad, la induccin de barreras estructurales y la produccion ede fitoalexinas) y aquellos que confieren resistencia especfica (aquella que es efectiva dentro de una especie de planta a ciertas razas de una nica especie de Phytophthora y que usualmente es controlada por genes individuales de resistencia en el hospedero (7, 17). La bsqueda consiente de resistencia a las enfermedades causadas por Phytophthora comenz tan pronto como sucedieron los serios problemas ocurridos en Europa (1845-1846) con la epidemia provocada por P. infestans en el cultivo de la patata. Existe abundante literatura publicada que demuestra que en los ltimos aos son considerables los trabajos realizados en la bsqueda de resistencia a varias especies de Phytophthora, por ejemplo el

mejoramiento del tomate para lograr la resistencia a P. infestans, en el cultivo de la fresa contra P. fragariae y en el cultivo del aguacate hacia P. cinnamomi, entre otras. Por ejemplo, actualmente con la aplicacin de las tcnicas de biologa molecular, especficamente las tcnicas de marcadores moleculares, se han identificado aproximadamente 19 genes dominantes simples (genes R) que le confieren a la patata resistencia a hongos, virus y nemtodos (14). La aplicacin futura de los genes R identificados (ms de 30 en diferentes especies de plantas) que le confieren a estas resistencia a una gama de patgenos puede incluir la transferencia entre gneros relacionados y la identificacin o construccin de genes que condicionan a las plantas con una resistencia perdurable en el tiempo (19). Sin embargo, en muchos casos la resistencia conferida no persiste en el tiempo como consecuencia de que se producen cambios en las poblaciones del patgeno (24). En el caso de las poblaciones de Phytophthora se conoce que existen varios mecanismos de variabilidad dentro de las mismas, lo cual condiciona el desarrollo satisfactorio o insatisfactorio de los esfuerzos realizados para lograr la resistencia en las plantas a estos patgenos. Dentro de los mecanismos de variacin de Phytophthora podemos mencionar la recombinacin sexual basada en la existencia de dos tipos sexuales A1 y A2, por lo que este mecanismo es solo efectivo en aquellas reas donde coexisten ambos tipos. La recombinacin somtica, como un mecanismo alternativo en aquellas reas donde no est presente uno de los tipos sexuales. Es importante tener en cuenta que conociendo la identidad de las especies de los patgenos, sus poblaciones, su modo de reproduccin y su comportamiento en el tiempo y en el espacio los fitopatlogos incrementan sus posibilidades de ejercer un mejor control de los mismos y de predecir su comportamiento en el futuro (7, 35).

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ANEXO. 1: Diferentes tipos de esporangios de las especies del gnero Phytophthora.

G. Descargando las zoosporas H. Elptico I. Ovalado sin papilas J. Ovalado con papilas K. Cuerpo esfrico y pice agudo L. Mltiple

A. B. C. D. E. F.

Irregular papilado Limoniforme Piriforme Trasovado Irregular con dos papilas Globoso

ANEXO. 2: Temperaturas cardinales de crecimiento de algunas especies del gnero Phytophthora.

Especie P. parasitica P. citrophthora P. palmivora P. citricola P. syringae P. hibernalis P. magasperma P cinnamomi P. drechsleri

Temp. mnima Temp.ptima Temp.mxima 10 C 30-32 C 37 C 5 C 26-27 C 32 C 11C 28-29 C 35 C 3 C 25-28 C 31 C 5 C 20 C 23 C 5 C 20 C 23 C 2 C 25 C 30 C 5 C 24-28 C 32-34 C 5 C 28-31 C 36-37 C

ANEXO. 3: germinacin

Clamidosporas

de

Phytophthora

spp.

Formas

de

A. B. C. D.

Clamidosporas intercalares Clamidosporas terminales Clamidosporas envejecidas con vacuolas Clamidosporas en proceso de germinacin

Anexo 4. Ciclo de vida de los hongos del gnero Phytophthora