Zebrafish (Danio rerio): O rato de hoje o peixe de amanh.

O zebrafish (Danio rerio) conhecido como paulistinha ou peixe-zebra, um pequeno peixe telesteo, tropical, de gua doce, da famlia dos Ciprindeos. Nos ltimos anos, ele tem atrado a ateno da comunidade cientfica mundial como um promissor modelo experimental para estudos comportamentais, fisiolgicos, genticos, toxicolgicos e como modelo para desvendar o mecanismo de diversas doenas humanas. A utilizao deste modelo na cincia j ultrapassou a linha de "tpicos aquticos" e tem se tornado uma realidade na medicina translacional. Este peixe apresenta admirveis semelhanas fisiolgicas, celulares, moleculares e bioqumicas com os seres humanos e estas descobertas estimularam o aprofundamento da sua utilizao na pesquisa mdica (1). Os primeiros estudos com o zebrafish ocorreram em meados de 1970. O bilogo, professor da Universidade de Oregon, George Streisinger considerado o introdutor do zebrafish como modelo animal na pesquisa cientfica. Ele percebeu as vantagens de utilizar este animal como plataforma para estudos genticos e em 1981 publicou com seus colaboradores o primeiro trabalho utilizando o zebrafish (2). Streisinger desenvolveu mtodos para gerar linhagens homozigotas e animais com mutaes genticas. O grupo de Oregon, juntamente com grupos de pesquisadores mundo a fora, tm descrito de maneira detalhada as etapas de desenvolvimento, a fisiologia, as mutaes genticas, modelos transgnicos e as linhagens descobertas. Estes achados esto disponveis para toda a comunidade cientfica na internet nos seguintes endereos eletrnicos: http://zfin.org/; http://ncbi.nlm.nih.gov/genome/guide/D_rerio.html. Outras bases de dados tambm podem ser consultadas. A partir da dcada de 80, comearam a crescer os estudos com o zebrafish abrangendo reas da biologia, medicina, farmacologia, psicologia e nutrio. As tcnicas e mtodos laboratoriais para a procriao e manuteno deste animal j foram descritos e publicados (3, 4) e tambm excelentes publicaes de referncia sobre sua anatomia e gentica (5, 6, 7). No Brasil diversos grupos j se interessaram em desenvolver estudos utilizando o zebrafish. Podemos citar como exemplos a Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), a Pontificia Universidade Catlica (PUC-RS), a Universidade Federal do Rio Grande (FURG),a Universidade Federal de So Paulo (USP), a Universidade Federal de So Carlos (UFSC-SP) e a Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Os assuntos pesquisados nestes centros so to diversos como hepatologia, neurocincias, obesidade e processos fisiolgicos de desenvolvimento. O LAZEN (Latin American Zebrafish Network), sociedade recm formada que rene grupos de pesquisadores da Amrica Latina, atualmente envolve participantes do Brasil, Chile, Uruguai e Argentina. O LAZEN pretende promover encontros regulares destes pesquisadores a fim de discutir os desafios da pesquisa com o zebrafish, diagnosticar as dificuldades enfrentadas em seus diferentes pases e encontrar estratgias comuns para resolv-las. Aumentar o nmero de participantes, abrangendo mais pases da Amrica Latina e promover encontros entre eles tambm uma das metas do LAZEN. O primeiro encontro desta sociedade ocorreu em dezembro de 2010 em Montevido, contando com um significativo nmero de representantes latino-americanos (8).

No mundo inteiro j ocorrem encontros regulares da "comunidade zebrafish". Estes encontros contam com um nmero cada vez maior de participantes o que demonstrado tambm pelo aumento da quantidade e da qualidade dos artigos cientficos publicados com este modelo (1). Recentemente ocorreu em Edimburgo, na Esccia, a 7 Conferncia Europia sobre o Zebrafish, reunindo centenas de pesquisadores do mundo inteiro. Neste encontro foram apresentados trabalhos brasileiros oriundos do Laboratrio Experimental de Gastroenterologia e Hepatologia, localizado no Centro de Pesquisa Experimental do Hospital de Clnicas de Porto Alegre, vinculado UFRGS. As principais vantagens para a utilizao do zebrafish encontram-se, entre outras, no fato de ele j possuir seu genoma completamente mapeado, os embries so transparentes e se desenvolvem fora do corpo materno, produz uma grande quantidade de ovos - a fmea chega a colocar 200 ovos e seu desenvolvimento bastante rpido (em 3 dias passa do estado de ovo para larva e se torna adulto aos 3 meses de vida). Outra virtude deste modelo a variedade de instrumentos disponveis para a pesquisa genmica, o potencial para investigao por mtodos pticos, a facilidade de manuteno e o baixo custo. Em um pequeno ambiente podem ser criados vrios peixes, a alimentao e os insumos para instalao do vivrios so razoavelmente baratos. Se comparado com o modelo murino, os custos so significativamente mais baixos. Atualmente eles so facilmente encontrados em lojas de aquarismo, porm os animais obtidos nestes estabelecimentos possuem alguns fatores limitantes: no possvel determinar a sua idade exata, estes animais devem passar por um perodo rgido de quarentena a fim de evitar o contgio de possveis doenas nos outros peixes do vivrio. Os mtodos para acasalamento e procriao j esto bem estabelecidos e neste caso possvel determinar o tempo de vida e realizar estudos com embries e controlar a linhagem. possvel distinguir os machos das fmeas com certa facilidade: os machos possuem o corpo em forma de torpedo e cor levemente dourada, por sua vez, as fmeas apresentam o abdomem mais abaulado e cor prateada. Eles chegam a alcanar em cativeiro cerca de 4 centmetros e vivem por volta de 3 anos. Devido ao curto ciclo de vida, os estudos metablicos que envolvam determinadas fases (infncia, juventude, maturidade e velhice) podem ser realizados com razovel rapidez. O zebrafish tem se estabelecido como um modelo muito interessante para o estudo de organognese, triagens moleculares, vigilncia ambiental e modelos de doenas humanas. Encontramos na literatura publicaes que mostram os efeitos de drogas nos embries. Por exemplo, a exposio ao lcool nos embries gera prejuzos bastante semelhantes ao da sndrome fetal alcolica, observados em seres humanos e em outros modelos mamferos (9, 10). Outra vantagem a ser destacada que a administrao das substncias de interesse pode ser realizada apenas dissolvendo-as diretamente na gua. Outros mtodos de administrao de drogas/medicamentos podem ser por injeo intraperitonial, intramuscular ou pela manipulao da rao. Estudos com substncias potencialmente cancergenas, psicotrpicos, etanol e outros so realizados com a simples adio no tanque dos peixes. Para a triagem de agentes qumicos e farmacolgicos e para observao dos efeitos de compostos potencialmente txicos estes animais apresentam um grande potencial. Nestes casos o zebrafish serve para monitorar os possveis eventos biolgicos, dos mais simples aos mais complexos. Estudos sobre o cncer tambm so alvo da pesquisa com este animal e modelos de alguns tipos de cncer j foram desenvolvidos (1, 11).

Como todo modelo animal o zebrafish tambm possui as suas limitaes, porm h um grande campo a ser explorado. Ainda visto com certa reserva por membros do meio cientfico, porm pouco a pouco tem se firmado nas mais diferentes esferas da pesquisa. Talvez, logo cheguemos concluso de que o rato de hoje o peixe de amanh! Referncias: 1) Lieschke JG & Currie PD. Animal Models of Human Disease: Zebrafish into View. Nature Reviews-Genetics, 2007; 8:353-367. 2) Streisinger G, Walker C, Dower N. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature, 1981; 291:293-296. 3) Westerfield M. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of the zebrafish (Danio rerio). 5.ed. Oregon, University of Oregon Press, 2007. 4) Schneider ACR, Maurer R., Matte U., et al. Implementao de um Novo Modelo de Experimentao Animal - Zebrafish. Revista HCPA, 2009; 29(2):100 -103. 5) Hinton, DE and JA Couch. Architectural pattern, tissue and cellular morphology in livers of fishes: relationship to experimentally-induced neoplastic responses. Exs; 86: 14164.1998. 6) Detrich HW, Westerfield M, Zon L. The Zebrafish: Biology. San Diego, Academic Press, Methods Cell Biology, 1999. 7) Detrich HW, Westerfield M, Zon L. The Zebrafish: Genetics and Genomics. San Diego, Academic Press, Methods Cell Biology, 1999. 8) Allende ML. Calcaterra NB, Vianna MR, et al. The First Meeting of the Latin American Network. Zebrafish, 2011; 8(1):31-33. 9) Bilotta J, Barnett JA, Hancock L, et al. Ethanol exposure alters zebrafish development: A novel model of fetal alcohol syndrome. Neurotoxicology and Teratology, 2004; 26:737-743. 10) Dlugos, CA and RA Rabin. Structural and functional effects of developmental exposure to ethanol on the zebrafish heart. Alcohol Clin Exp Res; 34(6): 1013-21.2010. 11) Liu S & Steven DL. Zebrafish Models for Cancer. Annu. Rev. Pathol. Mech. Dis. 2011. 6:7193.