DEFINICIONES Y ABREVIATURAS 1.1. Agentes biolgicos.

- Todo organismo viviente capaz de causar infeccin, enfermedad o muerte en el ser humano con inclusin de los genticamente modificados y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad. 1.2. Antispticos.- Se definen como agentes germicidas para ser usados sobre la piel y los tejidos vivos. Aunque algunos germicidas especficos pueden ser utilizados como desinfectantes y antispticos (alcohol 70 - 90%), su efectividad no es necesariamente la misma en cada caso, un buen antisptico puede no ser eficaz como desinfectante y viceversa. 1.3. Area de trnsito restringido.- Area en las que el trnsito est permitido solo al personal adecuadamente protegido y autorizado, debido a la presencia de agentes de los grupos III y IV. 1.4. Bioseguridad.- Conjunto de medidas preventivas reconocidas internacionalmente orientadas a proteger la salud y la seguridad del personal que trabaja en salud y su entorno. Complementariamente se incluye normas contra riesgos producidos por agentes fsicos, qumicos y mecnicos. 1.5. Campana de Gases.- Tambin denominada campana extractora de gases, es un recinto ventilado que captura los humos y vapores procedentes de la manipulacin de los productos qumicos en el laboratorio 1.6. Cabinas de Flujo Laminar.- Son recintos que emplean un ventilador para forzar el paso del aire a travs de un filtro HEPA (acrnimo del trmino anglosajn High Efficiency Particulate Air) barriendo la superficie de trabajo. 1.7. Cabinas de Seguridad Biolgica (CBS).- Son recintos ventilados diseados para limitar al mximo el riesgo del personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos. Ello es especialmente importante si se tiene en cuenta que muchas de las operaciones realizadas en un laboratorio implican la formacin de aerosoles. Estos equipos tienen como objetivo principal proporcionar un rea de trabajo que reduzca la probabilidad que una partcula transportada por el aire pueda escapar hacia el exterior de la cabina y contaminar as al operario y a la zona que le rodea. 1.8. Desinfeccin.- Es un proceso que compromete medidas intermedias entre limpieza y esterilizacin, se utilizan sobre objetos inanimados. Utilizan agentes qumicos en estado lquido, la pasteurizacin a 75C y la irradiacin ultravioleta. 1.9. Esterilizacin.- Es un proceso que tiene por objeto la destruccin de toda forma de vida. Se realiza por medio del vapor saturado a presin (autoclave), por calor seco (horno), incineracin (mechero de gas), y mediante el uso de agentes qumicos determinados en forma de lquido o de gas.

1. CLASIFICACION DE LOS AGENTES BIOLOGICOS POR GRUPOS DE RIESGO

Agente biolgico del grupo 1. Es poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Es decir, los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los antimicrobianos. Ejemplo: E. coli K12, Saccharomyces cerevisiae, microorganismos que se utilizan en la industria de la alimentacin para la elaboracin de quesos, embutidos, entre otros. Agente biolgico del grupo 2. Puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Como algunos que, perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa infecciosa humana de gravedad moderada o limitada. Ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp., entre otros. Agente biolgico del grupo 3. Puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Implican patologa grave, de difcil y largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. El mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fludos biolgicos. Ejemplo: M. tuberculosis, Brucella sp. , Coxiella burneti, entre otros. Agente biolgico del grupo 4. Aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento eficaz. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Ejemplo: Arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa, Machupo, Ebola, Hantavirus, etc.

2. NIVELES DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS

Se consideran cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten en la combinacin, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad biolgica descritos: tcnica de laboratorio, equipos de seguridad y diseo arquitectnico de las instalaciones de laboratorio. Cada combinacin est especficamente dirigida al tipo de actividades que realizan, las vas de transmisin de los agentes infecciosos y la funcin o actividad de laboratorio.

De forma general, los cuatro Niveles de Bioseguridad definen la contencin necesaria para proteger al personal y al medio ambiente: Nivel de Bioseguridad 1.- Es el nivel de seguridad requerido para trabajar con agentes biolgicos del grupo de riesgo 1. Es el utilizado habitualmente en los laboratorios de prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas. Nivel de Bioseguridad 2.- Es el nivel obligado para trabajar con agentes del grupo de riesgo 2. Considera personal especializado para el manejo de stos microorganismos y es el que corresponde a algunos Laboratorios de Microbiologa Clnica y de Control de Calidad Sanitaria (tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa). Nivel de Bioseguridad 3.- Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo de riesgo 3. El material biolgico slo puede ser procesado por personal calificado y en una zona con la infraestructura apropiada para el nivel de contencin 3, es decir, con aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de bioseguridad, entre otras caractersticas, propias de algunos Laboratorios de Microbiologa Clnica, de Produccin de Biolgicos y de Control de Calidad Sanitaria. Nivel de Bioseguridad 4.- Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente biolgico de riesgo 4, especialmente patgeno infecto - contagioso, extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe tratamiento o es poco fiable. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados por microorganismos del grupo de riesgo 4. Adems, deben incluirse en este nivel de contencin los microorganismos propios del grupo 3 que adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4. Ejemplo: Mycobacterium bovis multidrogoresistentes que puede causar fallecimiento por fracaso teraputico. Los laboratorios que realicen trabajos que impliquen la manipulacin de agentes biolgicos de los grupos 2, 3 4 con fines de investigacin, desarrollo, produccin, enseanza o diagnstico debern establecer medidas de contencin que se aplicaran segn la naturaleza de las actividades, la evaluacin del riesgo para los trabajadores y las caractersticas del agente biolgico de que se trate.

3. NIVEL DE BIOSEGURIDAD CUANDO SE TRABAJA CON ANIMALES

Se describen cuatro niveles de bioseguridad relacionadas a actividades que impliquen el manejo de animales experimentales potencialmente infectados. NB 1 Es apropiado para el mantenimiento de la mayor parte de los animales utilizados despus de la cuarentena (excepto primates no humanos) y para los animales que son sometidos a inoculacin deliberada con agentes de riesgo 1.

El empleo de animales de laboratorio con fines experimentales y de diagnstico impone al usuario adoptar todas las medidas necesarias para evitar que aquellos padezcan dolores o sufrimientos innecesarios. NB 2 Es apropiado para los trabajos con animales que son sometidos a inoculacin deliberada con agentes del grupo de riesgo 2. Precauciones: Colocarn seales de advertencia del riesgo biolgico en las puertas y en otros lugares apropiados. El local estar diseado de modo que facilite la limpieza y el mantenimiento. La calefaccin, la ventilacin y el alumbrado deben ser apropiados. El acceso es restringido. Las superficies de trabajo habrn de ser descontaminadas despus de su uso utilizando desinfectantes eficaces. NB 3 Es apropiado para los trabajos con animales que son sometidos a inoculacin deliberada con agentes del grupo de riesgo 3. Deben aplicarse todos los requisitos correspondientes a instalaciones para animales (niveles de bioseguridad 1 y 2). NB4 Los trabajos en esta instalacin guardarn normalmente relacin con los del laboratorio de contencin mxima. Deben aplicarse todos los requisitos de las instalaciones para animales en los niveles 1, 2 y 3. Ninguna persona debe trabajar sola. El personal habr recibido el mximo posible de conocimientos y tendr claro los riesgos que involucra su trabajo Este laboratorio debe ubicarse en edificaciones separadas. La instalacin debe estar ventilada por un sistema de salida de aire sin filtros HEPA, destinado a asegurar una presin negativa.

4. NIVELES DE CONTENCIN
El elemento ms importante de la contencin es el cumplimiento estricto de las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar de procesamiento de las muestras de laboratorio. Cuando las prcticas de laboratorios no son suficientes para controlar los riesgos asociados a un agente o a un procedimiento de laboratorio particular, es necesario aplicar medidas adicionales. Estas medidas adicionales corresponden a los equipos de seguridad diseados para la proteccin de personal y prcticas de manejo adecuados (barrera primaria) y un diseo de la instalacin y caractersticas de ingeniera (barrera secundaria).

4.1.

BARRERA PRIMARIA

Consiste en la proteccin del personal y de medio ambiente inmediato contra la exposicin a agentes infecciosos y/o productos qumicos de riesgo. Constituyen la primera lnea de defensa cuando se manipulan materiales biolgicos, qumicos y/o fsicos. Se considera que las barreras de proteccin primaria son: Equipos de proteccin personal (epp): Cuando no es posible el aislamiento del foco de contaminacin, la actuacin va encaminada a la proteccin del trabajador mediante el empleo de equipos o prendas de proteccin personal (EPP). Actualmente existen equipos que ofrecen un altsimo grado de proteccin, pero eso no significa que el EPP sea un substituto de una buena prctica de trabajo. La utilizacin de un equipo equivocado crear un riesgo adicional al operario al generar en ste un falso sentido de seguridad. El EPP se seleccionar en funcin del mximo nivel de riesgo que se espera encontrar al desarrollar la actividad. Cualquier EPP exige una limpieza y un mantenimiento adecuados. El personal debe utilizar rutinariamente los elementos de proteccin de barrera apropiados cuando deban realizar actividades que los pongan en contacto directo con agentes biolgicos.

a) Proteccin de las manos y los brazos (guantes) Los guantes tienen un amplio uso en el laboratorio pues, se utilizan para evitar riesgos biolgicos y qumicos, tambin se emplean como proteccin frente a riesgos fsicos, como el calor o el fro en determinadas manipulaciones. Mascarillas Proteccin ocular y Proteccin respiratoria Se emplearn en aquellos casos en los que, por la ndole del procedimiento a realizar, se prevea la produccin de salpicaduras de sangre u otros fluidos corporales que afecten las mucosas de ojos, boca o nariz. Los anteojos para la correccin de problemas de visin no proporcionan proteccin alguna a los ojos, por lo que no se recomienda su utilizacin durante el trabajo en el

Laboratorio. En el caso de que una persona necesitara llevarlas por prescripcin facultativa, estar obligada a llevar tambin, siempre que estuviera expuesta a un riesgo biolgico y/o qumico, unas gafas de seguridad. Las pantallas faciales, que ofrecen proteccin frente a impactos y salpicaduras. Son elementos indispensables para protegerse frente a radiaciones, como es el caso de la luz ultravioleta. Las mascarillas en general tienen utilidad en el Laboratorio especialmente para proteccin frente a polvo (partculas), aerosoles, gases y vapores qumicos. La mscara, ya sea media mscara o mscara facial, puede resultar til en caso de proteccin a accidentes de consideracin. Los diferentes filtros que se pueden acoplar hay que desecharlos como material contaminado. No debern usarse lentes de contacto. Lentes de seguridad Pantallas faciales Lentes con pantallas faciales

Tipos de Respiradores (mascarillas de proteccin respiratoria) b) Proteccin auditiva Es la menos considerada en el ambiente de un Laboratorio, siendo habitual que el personal acepte como normal un nivel de ruido, procedente de aparatos y/o determinadas operaciones, por encima de los lmites tolerables. Una reduccin importante de estos niveles se consigue con un buen mantenimiento de los equipos. c) Mandiles y Vestuario como equipo de proteccin En principio es imprescindible hacer una clara distincin entre la ropa que es parte de un uniforme y las prendas del vestuario que actan como elementos de proteccin individual.

Adems, existen recomendaciones generales como: El usuario debe llevar la prenda de manera que se beneficie de su utilizacin. Las prendas han de ser de una talla/tamao adecuada a la del usuario. Como parte del vestuario de proteccin se incluyen los mandiles (que se prefieren abrochadas a la espalda y con los puos elsticos) y los delantales. A veces, tambin resultan tiles los cubrezapatos. La ropa protectora de las reas con nivel de contencin 2 y 3 (cubremandil) nunca debe ser usada fuera del rea de trabajo. No se utilizarn en el rea de trabajo: collares largos, brazaletes, relojes y todo lo que pueda ser un riesgo potencial para el manejo de equipos. Debe usarse un mandil limpio, de mangas largas, mientras se realice todo trabajo. Los mandiles deben ser lavados por lo menos una vez a la semana. No usar el mandil del laboratorio fuera del laboratorio en las reas "limpias" de la institucin. El personal con cabello largo deber protegerlo, amarrndolo y usando un gorro, para evitar accidentes, por ejemplo frente al mechero. El personal deber usar calzado apropiado, antideslizantes (zapatillas). No usar tacones, ni sandalias. Uso del uniforme impermeable y gorro o sombrero para la estacin invernal al tener que manipular forraje verde y hmedo (caballerizas) frecuentemente en plena lluvia en prevencin de problemas respiratorios. La ropa del laboratorio debe ser lavada considerando medidas de Bioseguridad.

4.1.1. CABINAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA (CSB)

Son cmaras de circulacin forzada que, segn sus especificaciones y diseo, proporcionan diferentes niveles de proteccin. Son fundamentales en un laboratorio y se clasifican segn el nivel y tipo de proteccin. Cuando una CSB es utilizada por personal debidamente formado y consciente de las limitaciones de sta, se convierte en un equipo de contencin muy efectivo para reducir el posible escape de contaminacin biolgica. Sin embargo, es conveniente tener muy en cuenta que una cabina no es nunca un substituto de una tcnica microbiolgica adecuada. Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminacin: las barreras de aire y los filtros. Las barreras de aire se crean permitiendo que ste fluya en una sola direccin y a una velocidad constante dando lugar a una verdadera cortina de aire que se conoce como flujo de aire laminar. Es por definicin, un flujo con ausencia de turbulencias. Los filtros tienen como finalidad atrapar las partculas contenidas en este flujo de aire y los empleados habitualmente son los HEPA, que retienen con una eficacia del 99,97% partculas de hasta 0,3 micras de dimetro.

Recomendaciones generales para el uso de CSB: a) Instalacin de la cabina. Debe situarse lo ms lejos posible de las rejillas de aire acondicionado, campanas de gases, puertas y zonas de mucho trfico de personas, que claramente interfieren en el flujo laminar. Las ventanas del laboratorio han de permanecer siempre cerradas. Debe existir al menos 0,3 m entre la salida de aire de la cabina y el techo del laboratorio. Se instalar sobre una superficie slida y nunca mvil. Si es posible, en un recinto cerrado o en una zona de acceso restringido.

b) Al iniciar el trabajo Poner en marcha la cabina durante 5 - 10 minutos, a fin de purgar los filtros y lavar la zona protegida. Comprobar que el manmetro situado en la parte superior del frontal se estabiliza e indica la presin adecuada (vara con el modelo de cabina). Apagar la luz ultravioleta (si estuviera encendida) y encender la luz fluorescente. Limpiar la superficie de trabajo con un producto adecuado (ejemplo: alcohol etlico 70%). Antes y despus de haber trabajado en una cabina deben lavarse con cuidado manos y brazos, prestando especial atencin a las uas. Es recomendable el empleo de mascarilla y en determinados casos, usar respiradores con los filtros adecuados. c) Durante la manipulacin: Slo el material a utilizar se sita en la zona de trabajo antes de empezar. Es aconsejable haber descontaminado el exterior del material que se ha introducido en la cabina. Este material debe ser colocado con un orden de acuerdo al procedimiento, de manera que el material contaminado se site en un extremo de la superficie de trabajo y el no contaminado en el extremo opuesto de la misma. En general, se recomienda trabajar a unos 5-10 cm por encima de la superficie y alejado de los bordes de la misma. Especial atencin se prestar a no obstruir las rejillas del aire con materiales o residuos. Si es imprescindible la introduccin de nuevo material a la cabina, se recomienda esperar 2-3 minutos antes de reiniciar la tarea. As se permite la estabilizacin del flujo de aire. A mayor cantidad de material en la cabina, la probabilidad de provocar turbulencias de aire se incrementa. La actividad dentro del laboratorio en el que se localiza la cabina en uso y dentro de la cabina misma, debe ser mnima, a fin de evitar corrientes de aire que alteren el flujo laminar. Al igual que en el resto del laboratorio, no debe utilizarse el mechero Bunsen, cuya llama crea turbulencias en el flujo y adems puede daar el filtro HEPA. Cuando deban emplearse asas de platino es aconsejable el incinerador elctrico o mejor an, asas desechables. Si se produce un derrame accidental de material biolgico se recoger inmediatamente, descontaminado la superficie de trabajo y todo el material que en ese momento exista dentro de la cabina. No se utilizar nunca una cabina cuando est sonando alguna de sus alarmas.

d) Al finalizar el trabajo Limpiar el exterior de todo el material que se haya contaminado. Vaciar la cabina por completo de cualquier material. Limpiar y descontaminar con alcohol etlico al 70% o producto similar la superficie de trabajo. Dejar en marcha la cabina durante al menos 15 minutos. Conectar si fuera necesaria la luz ultravioleta (UV). Conviene saber que la luz UV tiene poco poder de penetracin por lo que su capacidad descontaminante es muy limitada. e) Limpieza y desinfeccin de la CSB Se realizar con vapores de formaldehdo y siempre por personal debidamente entrenado y con las prendas de proteccin personal adecuadas. Es conveniente una vez a la semana levantar la superficie de trabajo y limpiar y descontaminar por debajo de ella. Nunca se debe utilizar la cabina como almacn transitorio de equipo o material de laboratorio. Esta mala prctica conduce a una acumulacin de polvo totalmente innecesaria. Evitar introducir en la cabina materiales que emitan partculas fcilmente como algodn, papel, madera, cartn, lpices. f) Mantenimiento de la CSB Semanalmente se limpiar la superficie de trabajo y el resto del interior de la cabina. Semanalmente se pondr en marcha a fin de comprobar la medida que da el manmetro. Mensualmente, con un pao mojado, se limpiarn todas las superficies exteriores con objeto de eliminar el polvo acumulado. Mensualmente se revisar el estado de las vlvulas interiores con que vaya equipada. Anualmente debe certificarse por una entidad calificada.

4.1.2. LASIFICACION DE LAS CABINAS DE SEGURIDAD BIOLOGICA

Cabinas de Seguridad Biolgica Clase I
Cmaras cerradas con una abertura al frente para permitir el acceso de los brazos del operador. El aire ingresa por este frontal, atraviesa la zona de trabajo y todo l sale al exterior a travs de un filtro HEPA La velocidad de flujo de aire es de unos 0,40 m/s No proporciona proteccin al material de trabajo

B A
Cabinas de Seguridad Biolgica Clase II
FLUJO DE AIRE A = Abertura frontal B = Ventana C = Escape con filtro HEPA D = Rejilla posterior E = Filtro HEPA adicional F = Recirculador de aire Adems de proteger al operario y su entorno, protegen al producto

B A

Cabinas de Seguridad Biolgica Clase III

FLUJO DE AIRE A= Abertura frontal B= Ventana C= Escape con filtro HEPA D= Rejilla posterior E= Filtro HEPA adicional F= Recirculador de aire Adems de proteger al operario y su entorno, protegen al producto.

4.2.3. TECNICAS DE LABORATORIO ESTANDAR Y NORMAS DE HIGIENE PERSONAL

Las tcnicas de laboratorio estndar se refieren al seguimiento estricto de las buenas prcticas de laboratorio y tcnicas de laboratorio. Como parte de estas prcticas esta el desarrollo en cada laboratorio de procedimientos escritos de rutina, en el que se especifiquen los procedimientos para minimizar riesgos biolgicos, qumicos y fsicos. A continuacin se resme un conjunto de normas de higiene personal: - El lavado de manos debe realizarse al comenzar y terminar la jornada y despus de realizar cualquier tcnica que puede implicar el contacto con material infeccioso. Dicho lavado se realizar con agua y jabn lquido. - En situaciones especiales se emplearn sustancias antimicrobianas. Tras el lavado de las manos stas se secarn con toallas de papel desechables o corriente de aire. - No comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos ni guardar o almacenar alimentos o bebidas en el rea de trabajo del laboratorio. - No pipetear con la boca. - Desarrollar el hbito de mantener las manos lejos de la boca, nariz, ojos y cara. Esto puede prevenir la auto inoculacin. - El ingreso a las zonas restringidas deben efectuarse nicamente a travs de las instalaciones de cambio de ropa y ducha.

4.2.4. INMUNIZACION DEL PERSONAL (VACUNACION)

El personal de laboratorio est sometido a numerosos riesgos biolgicos, producidos por bacterias, hongos, virus, etc frente a algunos de los cuales se dispone de vacunas que hacen posible su prevencin. La inmunizacin activa frente a enfermedades infecciosas ha demostrado ser junto con las medidas generales de prevencin una de las principales formas de proteger a los trabajadores. Deber vacunarse todo el personal que desarrolle su labor en ambientes que tengan contacto, tanto directo como indirecto, con la sangre u otros fludos biolgicos de otras personas infectadas (por ejemplo, la vacuna contra la Hepatitis B para el personal que desarrolle su labor en ambiente que tenga contacto directo o indirecto con la sangre u otros fluidos de los pacientes).

4.2.5. DESINFECCIN SUPERFICIES

ESTERILIZACIN

DE

INSTRUMENTALES

a) Desinfeccin: El empleo de productos qumicos permite desinfectar a temperatura ambiente los instrumentos y superficies que no resisten el calor seco o la temperatura elevada. Para llevar a cabo una desinfeccin del tipo que sea, es necesario tener en cuenta: - La actividad desinfectante del producto. - La concentracin que ha de tener para su aplicacin. - El tiempo de contacto con la superficie que se ha de descontaminar. - Las especies y el nmero de grmenes que se han de eliminar. El producto desinfectante debe tener un amplio espectro de actividad y una accin rpida e irreversible, presentando la mxima estabilidad posible frente a ciertos agentes fsicos, no debiendo deteriorar los objetos que se han de desinfectar ni tener un umbral olfativo alto ni especialmente molesto. Una correcta aplicacin de los desinfectantes ser, en general, aquella que permita un mayor contacto entre el desinfectante y la superficie a desinfectar. En el manejo de desinfectantes se debern adoptar las medidas de proteccin y prevencin adecuadas y seguir siempre las instrucciones para su aplicacin, contenidas en la etiqueta y en las fichas de seguridad. Los desinfectantes que se utilicen deben estar adecuadamente etiquetados, tanto si se han adquirido comercialmente, como si son de preparacin propia. Al adquirir productos qumicos, debe exigirse siempre la entrega de la ficha de seguridad correspondiente. La eficacia de los desinfectantes est limitada por la presencia de materia orgnica, por lo que los tiempos de aplicacin de los mismos disminuir cuando el instrumental que se deba desinfectar est limpio. Hay que tener en cuenta que las frmulas de los productos desinfectantes comerciales presentan grandes diferencias, por lo que es esencial seguir las indicaciones del fabricante.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS HABITUALMENTE COMO DESINFECTANTES

Conc. Utilizadas

PRODUCTOS

QUMICOS

EMPLEADOS

Tipo

Accin B, F, V

Mecanismo Desnaturalizacin de Protenas Incremento en la permeabilidad celular

Alcoholes 60 90 % etanol, isopropanol) Compuestos de 0,4 1,6 % Amonio Cuaternario

B*, F, V*

Compuestos Fenlicos Iodforos

0,4 0,5 %

B, F, V, Desnaturalizacin de (T) Protenas B, F, V, T Iodacion y oxidacin de proteinas B, F, V, Entrecruzamiento de T, E protenas

75 p.p.m.

Glutaraldehdo

2,0 %

Hipoclorito

500 p.p.m. B, F, V, T Inactivacin (Cloro libre) enzimtica

Perxido de 3,0 % B, F, V, Radicales libres Hidrgeno T, E F: funguicida, B: Bactericida, V: Virucida, T: Tuberculicida, E: Esporicida, *: Efectividad limitada, ( ): No todas las formulaciones.

Efectos Ventajas Inconvenientes sobre humanos No mancha ni Inactivado por ... irrita materia orgnica, inflamable Barato No Bacterias Gram (- Irritante, ), puede actuar como txico. fuente de N, inactivacin materia orgnica. Barato Txico, corrosivo, Irritante, residuos. txico, corrosivo. Estable, Caro, inactivados por Irritante de accion materia organica piel y residual. mucosas. No corrosivo, Vapores irritantes, Txico, inafectado txicos. irritante. por otros compuestos. Barato Txico, corrosivo, Txico, inactivado por corrosivo. materia orgnica. Estable Corrosivo, caro. ...

b) Esterilizacin: Proceso que elimina toda forma de vida. Existen diferentes tipos de esterilizacin los cuales a continuacin se explican: Esterilizacin por calor hmedo bajo presin (autoclave): Es el mtodo de eleccin, por ser el ms fiable, eficaz y de fcil empleo. Se introduce el material a esterilizar en bolsas adecuadas y cerradas, dejndose durante 20 minutos a 121C (para algunos agentes pueden ser necesarias otras condiciones), teniendo la precaucin de que la atmsfera del autoclave est a saturacin y desprovista de aire. En este sentido es recomendable disponer de un manual de procedimiento para el trabajo con el autoclave siguiendo las instrucciones del fabricante. Si no se dispone de autoclave para instrumental de pequeo volmen recurrir a ebullicin del agua, preferentemente conteniendo bicarbonato sdico durante 30

minutos o bien al empleo de una olla a presin al nivel mximo de presin de trabajo. Esterilizacin por calor seco: Debe mantenerse por dos horas a partir del momento en que el material ha llegado a los 170C. Radiaciones ionizantes: Basan sus efectos en la capacidad de destruccin celular. Debido a su poder de penetracin, la radiacin es la empleada en la esterilizacin del material sanitario, sobre todo en el mbito industrial. La instalacin de esterilizacin por rayos ha de cumplir unos requisitos especiales como instalacin radiactiva, lo que limita totalmente su aplicacin en los laboratorios, a menos que estn dentro de una institucin (por ejemplo, un hospital) que disponga de una instalacin adecuada para ello. Esterilizacin con vapores qumicos: Los agentes gaseosos, tales como el formaldehdo o el xido de etileno, tienen una actividad bactericida y esporicida en el intervalo de 30 - 80C. La esterilizacin, en este caso, se lleva a cabo en esterilizadores diseados especficamente, que tambin se llaman autoclaves, y que permiten obtener las condiciones de presin, de temperatura y de humedad adecuadas. Funcionan de manera automtica, por ciclos, e incluyen la evacuacin de los fluidos. Esterilizacin por xido de etileno: Este tipo de esterilizacin slo debe aplicarse a aquel material que no pueda ser esterilizado al vapor y debe llevarse a cabo por personal cualificado, informado de los riesgos que presenta su utilizacin, disponiendo de un protocolo de actuacin bien establecido y cuando el caso lo requiera, de los equipos de proteccin individual adecuados. Actualmente se estn desarrollando sistemas denominados de Plasma de baja temperatura basados en el empleo de perxido de hidrgeno y radiofrecuencias, como alternativa al empleo de xido de etileno y formaldehdo, considerados como compuestos peligrosos para la salud.

4.3.

BARRERAS SECUNDARIAS

El diseo y construccin de un laboratorio, lo que en seguridad biolgica se conoce como contencin o barrera secundaria, contribuye a la proteccin del personal de laboratorio, personas que se localizan fuera del laboratorio y protege a las personas de la comunidad frente a posibles escapes accidentales de agentes infecciosos. La magnitud de las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso que se manipule en el laboratorio, implica la proteccin del medio ambiente externo contra la exposicin de material infeccioso. Se logra por una combinacin de las caractersticas de la edificacin y prcticas operacionales. En la evaluacin de riesgo se debe tener en cuenta las siguientes consideraciones generales: a. Localizacin Es aconsejable que el laboratorio se localice fuera del rea de trnsito que no sea un lugar de paso para otras dependencias en las que no exista restriccin para su acceso. El rea contaminada debe estar ubicado en un lugar alejado de la puerta de entrada al laboratorio y de los lugares donde se producen corrientes de aire, disponer de los medios necesarios para la comunicacin necesaria, como por ejemplo en el laboratorio de rabia se debe realizar por cmara de seguridad (air lock). b. Acceso de personal En general, debe ser restringido al personal autorizado y formadas para el manejo de agentes infecciosos. No deben entrar en el mismo familiar ni amigo. Para un nivel 2 de contencin es suficiente que la puerta del laboratorio pueda cerrarse con llave, mientras que para el nivel 3 la puerta ha de ser doble, adems de recomendarse un cambio de ropa.

c. Lavatorios Debe existir uno en el mismo laboratorio. Estar dotado de grifos que puedan accionarse sin utilizar las manos y situado preferiblemente cerca de la puerta de salida. Debe existir instalaciones para cambiarse de ropa y ducharse.

d. Lavaojos Se recomienda que exista uno dentro del laboratorio como equipo de emergencia. Superficies interiores Los techos, paredes y suelos deben ser lisos y fcil de lavar, impermeables a los lquidos y resistentes a las acciones de las sustancias qumicas y productos desinfectantes utilizados de ordinario en el laboratorio de forma que permitan una limpieza a fondo y una posterior decontaminacin. En el nivel 3 de contencin, adems, todas las penetraciones deben ir selladas. Superficies de trabajo. Las mesas y bancos de trabajo deben ser resistentes al calor moderado, a disolventes orgnicos, cidos y lcalis. Sealizacin. Todas las reas estarn debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Siempre que el trabajo est en marcha, debe colocarse en la puerta del laboratorio la seal reglamentaria de peligro biolgico. Presin negativa Se recomienda que el laboratorio se mantenga a una presin negativa con respecto al exterior del mismo, es decir, con respecto a los pasillos u otras zonas del edificio, de manera que exista un flujo de aire desde las zonas menos contaminadas hacia las de mayor riesgo de contaminacin. Las puertas y ventanas del laboratorio han de permanecer cerradas si se quiere mantener esa presin negativa. No es aconsejable la recirculacin de aire. Filtros HEPA No existe legislacin en cuanto a sistema y frecuencia para su comprobacin pero, siguiendo directrices de otros pases, parece aconsejable hacerla cada 6 meses o, al menos, no dejar pasar ms de 14 meses. Deber ser revisada siempre por personal especializado.

 Residuos Adems de la normativa general establecida, en funcin de la legislacin vigente, en materia de residuos biosanitarios, en un nivel 3 se recomienda que en el mismo laboratorio (o dentro de la instalacin) exista algn sistema (por ejemplo, esterilizacin por autoclave) para el tratamiento de los residuos producidos. De no ser as, el transporte de estos residuos ha de realizarse en envases sellados.

5. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
De forma general los cuatros niveles de bioseguridad definen la contencin necesaria para proteger al personal y al medio ambiente. Para este efecto las normas de bioseguridad utilizadas en cada uno de los niveles combinan: A. B. C. D. Prcticas Microbiolgicas Estndar. Prcticas Especiales. Barreras Primarias (Equipos de Seguridad y Cabinas de Seguridad). Barreras Secundarias (Instalaciones del Laboratorio).

5.1.

EL NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1: (BSL - 1)

El personal de laboratorio cuenta con una capacitacin especfica acerca de los procedimientos realizados en el laboratorio y es supervisado por una persona con capacitacin general en microbiologa o una ciencia relacionada. Adecuado para agentes del grupo 1. Las siguientes prcticas estndar y especiales, equipos de seguridad e instalaciones se aplican a los agentes asignados al Nivel de Bioseguridad 1: A. Prcticas Microbiolgicas Estndar BSL 1 1. Cuando se estn llevando a cabo experimentos o trabajos con cultivos y especmenes; el acceso al laboratorio ser limitado o restringido a criterio del jefe del laboratorio 2. El lavado de manos del personal de laboratorio debe realizarse luego de manipular materiales, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. 3. No est permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en reas de trabajo. 4. Los alimentos se almacenan fuera del rea de trabajo en gabinetes o refrigeradores designados y utilizados con este nico fin. 5. Est prohibido pipetear con la boca; se utilizan dispositivos mecnicos. 6. Se instituyen polticas para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes.

7. Todos los procedimientos se llevan a cabo con precaucin a fin de minimizar la creacin de salpicaduras o aerosoles. 8. Las superficies de trabajo se descontaminan como mnimo una vez por da y luego de todo derrame de material viable. 9. Todos los cultivos y otros desechos biolgicos se descontaminan antes de ser desechados mediante un mtodo de de contaminacin aprobado como autoclave. 10. Se debe colocar una seal de advertencia de riesgo biolgico en la entrada el laboratorio cuando se encuentren presentes agentes infecciosos. 11. Se encuentra en vigencia un programa de control de roedores e insectos. a. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) BSL 1 1. En general, no se requieren dispositivos o equipos de contencin o equipamientos especiales. 2. Se recomienda el uso de mandiles o uniformes de laboratorio a fin de evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar. 3. Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta alguna erupcin. Deben existir alternativas disponibles al uso de guantes de ltex empolvados. 4. Se debe utilizar proteccin ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de microorganismos u otros materiales peligrosos. b. Instalaciones del Laboratorio (Barreras Secundarias) BSL 1 1. 2. 3. 4. Los laboratorios deben tener puertas para el control de acceso. Cada laboratorio contiene una pileta para el lavado de manos. El laboratorio ha sido diseado para que su limpieza sea sencilla. Las superficies de las mesas de trabajo son impermeables al agua y son resistentes al calor moderado, solventes orgnicos, cidos, lcalis y productos qumicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. 5. Los muebles de laboratorio deben tener la capacidad de soportar cargas y usos previstos. Los espacios entre las mesas de trabajo, cabinas y equipos deben ser accesibles para su limpieza. 6. Si el laboratorio tiene ventanas que se abren hacia el exterior, estn provistas de mallas protectoras.

5.2. EL NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2: (BSL- 2) Se aplican normas similares al nivel de bioseguridad 1 y es adecuado para trabajos que involucren agentes de riesgo 2 con potencial moderado para el personal y el medio ambiente. Difiere del BSL - 1 en que: 1. El personal del laboratorio cuenta con una capacitacin especfica en la manipulacin de agentes patognicos y est dirigido por cientficos competentes. 2. El acceso al laboratorio es limitado cuando se estn desarrollando actividades. 3. Se toman precauciones extremas con elementos cortantes contaminados y ciertos procedimientos que pueden generar aerosoles o gotitas infecciosas se llevan a cabo en cabinas de seguridad biolgica o en otros equipos de contencin fsica. Las siguientes prcticas estndar y especiales, equipos de seguridad e instalaciones se aplican a los agentes asignados al nivel de bioseguridad 2: A. Prcticas Microbiolgicas Estndar BSL- 2 Se aplican las normas establecidas para el nivel de bioseguridad 1. B. Prcticas Especiales BSL- 2 1. El jefe del laboratorio limita o restringe el acceso al laboratorio cuando se estn realizando trabajos con agentes infecciosos. El jefe de laboratorio tiene la responsabilidad final de evaluar cada circunstancia y determinar quin puede ingresar o trabajar en el laboratorio o sala de animales.

2. Se debe colocar una seal de advertencia de riesgo biolgico en la entrada del laboratorio cuando se estn utilizando agentes etiolgicos. La informacin adecuada que debe colocarse incluye el agente o agentes que se estn utilizando, el nivel de bioseguridad, las inmunizaciones requeridas, el nombre del investigador y su nmero de telfono, todo equipo de proteccin que deba utilizarse en el laboratorio y todos los procedimientos requeridos para retirarse del laboratorio. 3. El personal del laboratorio debe someterse a las inmunizaciones o a los anlisis de los agentes manejados o potencialmente presentes (por ejemplo, vacuna contra la Hepatitis B, evaluacin cutnea de Tuberculosis).

4. Considerando los agentes manipulados, se recogern y almacenarn las muestras de suero de basales del personal del laboratorio y otros equipos de trabajo en riesgo. Se pueden recolectar peridicamente otros especmenes de suero, dependiendo de los agentes manipulados o la funcin de las instalaciones. 5. Se incorporan los procedimientos de seguridad de los procedimientos operativos estndar o del manual de bioseguridad adoptado o preparado especficamente para las actividades especficas de laboratorio por el jefe del laboratorio. Se le advierte al personal sobre los riesgos especiales y se le exige que lea y siga las instrucciones sobre prcticas y procedimientos. 6. El jefe del laboratorio debe garantizar que el personal de laboratorio y de asistencia o soporte reciba la capacitacin adecuada sobre los posibles riesgos asociados con el trabajo en cuestin. 7. Se debe siempre tener un alto grado de precaucin con los artculos punzantes o cortantes contaminados. 8. Los cultivos, tejidos, fludos corporales, o desechos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con tapa que evita las filtraciones durante la recoleccin, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envo. 9. Se descontaminan los equipos y las superficies de trabajo regularmente con un desinfectante efectivo despus de trabajar con el agente infeccioso, y especialmente cuando se producen derrames evidentes, salpicaduras u otra contaminacin por materiales infecciosos. Se deben descontaminar los equipos conforme a las normas establecidas antes de enviarlos para su reparacin o mantenimiento o embalarlos para transporte de conformidad con la reglamentacin establecida antes de retirarlos de las instalaciones Se deben informar de inmediato al comit de bioseguridad y al jefe de la institucin los derrames y accidentes que deriven en exposiciones evidentes a los materiales infecciosos. Se ofrece la evaluacin, el control y tratamiento mdico necesario y se guardan registros escritos. 10. No se permite la presencia en el laboratorio de animales que no se estn utilizando en el trabajo que se est realizando. C. Equipo de Seguridad (Barreras Primarias) BSL - 2 1. Se utilizan cabinas biolgicas mantenidas de manera adecuada, preferentemente de Clase II, u otros equipos de proteccin personal o dispositivos de contencin fsica adecuados. 2. Se utiliza una proteccin facial (anteojos, mscaras, protecciones faciales u otra proteccin) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u otros materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular los microorganismos fuera de la cabina de bioseguridad. 3. Se deben usar delantales, batas o uniformes de laboratorio de proteccin adecuados para el laboratorio durante la permanencia en el mismo. Se debe retirar y dejar esta

ropa de proteccin en el laboratorio antes de dirigirse a otras reas (por ejemplo, cafetera, biblioteca, oficinas administrativas). La institucin desecha toda la ropa de proteccin en el laboratorio o se ocupa de lavarla; el personal no debe llevarla a su casa por ningn motivo. 4. Se deben usar guantes cuando es posible que las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados. 5. Puede ser apropiado el uso de dos pares de guantes. Se descartan los guantes cuando estn manifiestamente contaminados y se retiran cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o cuando est comprometida la integridad del guante. Los guantes descartables no se lavan, no se vuelven a usar ni se utilizan para tocar superficies limpias (teclados, telfonos, entre otras) y no se deben usar fuera del laboratorio.

D. Instalaciones del Laboratorio (Barreras secundarias) BSL - 2 1. Proveer puertas con llave para las instalaciones que contengan agentes restringidos 2. Cada laboratorio contiene un lavatorio para el lavado de manos. Se recomiendan los lavatorios controlados con los pies, las rodillas o los que operan automticamente. 3. El laboratorio est diseado para que pueda limpiarse fcilmente. Es inadecuado el uso de alfombras y felpudos en los laboratorios. 4. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y resistentes al calor moderado y a los solventes orgnicos, cidos, lcali y sustancias qumicas empleadas para descontaminar las superficies y equipos de trabajo. 5. Los muebles del laboratorio pueden soportar las cargas y usos anticipados. Los espacios entre las mesas de trabajo, cabinas y los equipos son accesibles para su limpieza. Las sillas y otros muebles utilizados en el trabajo de laboratorio deben estn cubiertos por material que pueda ser limpiado fcilmente. 6. Instalar cabinas de seguridad biolgica de tal manera que las fluctuaciones del aire de entrada y escape de la sala no hagan funcionar a los cabinas de bioseguridad fuera de sus parmetros para contencin. Coloque los cabinas de seguridad biolgica lejos de las puertas, ventanas que se pueden abrir de las reas del

laboratorio de mucho trnsito y de otros equipos potencialmente interruptores a los fines de mantener los parmetros del flujo de aire para contencin de los cabinas de seguridad biolgica. 7. Se debe disponer de una estacin para el lavado de ojos. 8. La iluminacin es adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que puedan molestar la visin. 9. No existen requisitos de ventilacin especficos. Sin embargo, la planificacin de nuevas instalaciones debe considerar los sistemas de ventilacin mecnica que ofrezcan flujo de aire hacia el interior sin la recirculacin a espacios fuera del laboratorio. Si el laboratorio tiene ventanas que se abren al exterior, deben colocarse mosquiteros.

5.3.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3 (BSL - 3)

El Nivel de Bioseguridad 3 es aplicable a las instalaciones clnicas, de diagnstico, enseanza, investigacin o produccin en las que se llevan a cabo trabajos con agentes de riesgo 3 que pueden producir una enfermedad grave o potencialmente letal como resultado de la exposicin por va de inhalacin. El laboratorio tiene caractersticas de diseo e ingeniera especiales. Sin embargo, se reconoce que algunas instalaciones existentes pueden no presentar todas las caractersticas recomendadas para el nivel de bioseguridad 3 (por ejemplo, zona de acceso con doble puerta y penetraciones selladas). En esta circunstancia, se puede lograr un nivel de seguridad aceptable para la prctica de procedimientos de rutina. La decisin de implementar esta modificacin a las recomendaciones del nivel de bioseguridad 3 debe solamente tomarla el director del laboratorio. A. Prcticas Microbiolgicas Estndar BSL 3 1. Queda limitado o restringido el acceso al laboratorio a discrecin del jefe del laboratorio cuando se estn llevando a cabo los experimentos. 2. El personal debe lavarse las manos despus de manipular materiales infecciosos, despus de retirarse los guantes y cuando se retira del laboratorio. 3. No se permite comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto y maquillarse en el laboratorio. Las personas que usan lentes de contacto en laboratorio tambin deben usar anteojos o proteccin facial. Los alimentos se deben guardar en cabinas o refrigeradores fuera del rea de trabajo designados a estos fines solamente. 4. Se prohibe el pipeteo con la boca; se utilizan dispositivos pipeteadores mecnicos. 5. Se instituyen polticas para la manipulacin segura de objetos punzantes. 6. Todos los procedimientos se realizan con cuidado para minimizar la generacin de aerosoles.

7. Las superficies de trabajo se descontaminan por lo menos una vez por da y despus de todo derrame de material viable. 8. Se descontaminan todos los cultivos, materiales y otros desechos regulados antes de su disposicin por algn mtodo de decontaminacin aprobado, como autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera de las instalaciones del laboratorio inmediato se colocan en un recipiente duradero a prueba de filtraciones cerrado para su transporte desde el laboratorio. Se deben descontaminar los desechos infecciosos de los laboratorios BSL- 3 antes de retirarlos para desecharlos fuera de las instalaciones. 9. Se encuentra en vigencia un programa de control de roedores e insectos. B. Prcticas Especiales BSL 3 1. Las puertas del laboratorio se mantienen cerradas cuando se estn practicando experimentos. 2. El jefe del laboratorio controla el acceso al laboratorio y restringe el acceso a las personas que deben estar en laboratorio a los fines del programa o asistencia. No se permite la presencia en el laboratorio o en las salas de animales de las personas que corren riesgo mayor de contraer infecciones o para quienes una infeccin podra tener consecuencias graves. El director tiene la responsabilidad final de evaluar cada circunstancia y determinar quin puede ingresar o trabajar en el laboratorio. No se permite el acceso de menores de edad al laboratorio. 3. El jefe del laboratorio establece polticas y procedimientos por medio de los cuales slo las personas que han sido advertidas sobre los riesgos biolgicos posibles que cumplan con los requisitos de ingreso especficos (por ejemplo, inmunizaciones) y que cumplan con los procedimientos de entrada y salida podrn ingresar al laboratorio o salas de animales. 4. El personal del laboratorio debe someterse a las inmunizaciones o a los anlisis de los agentes manejados o potencialmente presentes (ejemplo: vacuna contra la Hepatitis B, evaluacin cutnea de tuberculosis y a estudios peridicos segn las recomendaciones para el agente que se est manipulando). 5. El personal del laboratorio y de asistencia o soporte recibe la capacitacin apropiada sobre los posibles riesgos asociados con el trabajo en cuestin, las precauciones necesarias para evitar exposiciones y los procedimientos de evaluacin de la exposicin El personal recibe las actualizaciones anuales o la instruccin adicional segn sea necesario, conforme a las modificaciones de los procedimientos. 6. El director del laboratorio es responsable de garantizar que, antes de trabajar con organismos en el Nivel de Bioseguridad 3, todo el personal demuestre pericia en las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar, y en las prcticas y operaciones especficas del laboratorio. Esto podr incluir experiencia previa en la manipulacin de patgenos humanos o cultivos celulares o un programa de capacitacin

especfico presentado por el jefe del laboratorio u otro cientfico competente hbil en las prcticas y tcnicas microbiolgicas seguras. 7. Se debe siempre tener un alto grado de precaucin con los artculos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas y jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos. 8. El uso de agujas y jeringas y otros instrumentos punzantes o cortantes debe quedar restringido en el laboratorio para cuando no haya otra alternativa, como inyeccin parenteral, flebotoma, aspiracin de fluidos de los animales de laboratorio o botellas con diafragma. El material de vidrio se debe reemplazarse por el de plstico, siempre que sea posible. 9. Se utilizan solamente jeringas con trabas de agujas o unidades de jeringa y aguja descartables (es decir, la aguja est integrada a la jeringa) para las inyecciones o aspiracin de materiales infecciosos. Las agujas descartables utilizadas no se deben doblar, cortar, romper, recubrir, retirar de las jeringas descartables, o de otra forma manipular manualmente antes de su disposicin; ms bien, se deben colocar con cuidado en recipientes resistentes a punciones para la disposicin de objetos punzantes ubicados en un lugar conveniente. Los objetos punzantes o cortantes no descartables se deben colocar en un recipiente de paredes duras para su transporte al rea de procesamiento para su decontaminacin, preferentemente en autoclave. 10. Se deben utilizar jeringas que re-enfunden las agujas, sistemas sin agujas y otros dispositivos seguros cuando sea conveniente. 11. No se debe manipular directamente con las manos los artculos de vidrio rotos, sino que deben retirarse por medios mecnicos como un cepillo y pala, pinzas o frceps. Los recipientes de agujas contaminadas, objetos punzantes y vidrio roto deben descontaminarse antes de desecharlos y se deben descartar de acuerdo a las reglamentaciones existentes. 12. Toda manipulacin abierta de materiales infecciosos se practica en cabinas de seguridad biolgica u otros dispositivos de contencin fsica dentro del mdulo de contencin. No se realizan trabajos en recipientes abiertos sobre la mesa de trabajo. La limpieza se facilita usando toallas de papel con base de plstico sobre las superficies de trabajo no perforadas dentro de los cabinas de seguridad biolgica. 13. Se deben descontaminar los equipos de laboratorio y las superficies de trabajo de manera rutinaria con un desinfectante efectivo, despus de finalizar el trabajo con materiales infecciosos, y especialmente despus de derrames, salpicaduras u otra forma de contaminacin manifiesta con materiales infecciosos. 14. Los derrames de materiales infecciosos son descontaminados, contenidos y limpiados por personal profesional idneo u otros con instruccin adecuada y equipados para trabajar con el material infeccioso concentrado. Se desarrollan y anuncian los procedimientos de derrame.

15. Se deben descontaminar los equipos contaminados antes de retirarlos de las instalaciones para su reparacin o mantenimiento o embalarlos para su transporte conforme a las normas establecidas. 16. Se colocan los cultivos, tejidos, especimenes de fluidos corporales o desechos en un recipiente a prueba de filtraciones durante la recoleccin, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envo. 17. Se descontaminan todos los materiales de desecho potencialmente contaminados (ejemplo: guantes, ambos de laboratorio, entre otros) de los laboratorios antes de desecharlos o reutilizarlos. 18. Los derrames o accidentes que representen una exposicin manifiesta o potencial a los materiales infecciosos deben informarse de inmediato al comit de bioseguridad y al jefe de la institucin. Se ofrece la evaluacin, el control y tratamiento mdico necesario y se guardan registros escritos. 19. No se permite la presencia de animales o plantas no relacionadas con el trabajo practicado en el laboratorio. C. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) BSL-3 1. El personal que ingresa al laboratorio debe usar delantales envolventes o con la delantera lisa o trajes de limpieza o mamelucos. No se debe usar la ropa de proteccin fuera del laboratorio. La ropa no descartable se descontamina antes de lavarse. Se cambia la ropa cuando se encuentra manifiestamente contaminada. 2. Se deben usar guantes cuando se manipulen materiales infecciosos, animales infectados y equipos contaminados. 3. Se recomienda el cambio frecuente de guantes acompaado del lavado de las manos. No se deben volver a usar los guantes descartables. 4. Todas las manipulaciones de materiales infecciosos, necropsia de animales infectados, recoleccin de tejidos o lquidos de los animales infectados o cosecha de huevos embrionados, etc. se realizan en un gabinete de seguridad biolgica Clase II o Clase III. 5. Cuando no se puede practicar un procedimiento o proceso dentro de un gabinete de seguridad biolgica, se utilizan las combinaciones adecuadas de equipos de proteccin personal (por ejemplo, respiradores, mscaras faciales) y dispositivos de contencin fsica (por ejemplo, cubetas de seguridad para centrfugas o rotores sellados). 6. Se utilizan protectores faciales y de respiracin dentro de las salas con animales infectados.

D. Instalaciones de Laboratorio (Barreras Secundarias) BSL-3 1. El laboratorio est separado de otras reas abiertas al flujo de trfico irrestricto dentro del edificio, y el acceso al laboratorio est restringido. El pasaje a travs de una serie de puertas que se cierran automticamente es el requisito bsico de ingreso al laboratorio desde los corredores de acceso. Las puertas se pueden cerrar con llave. Se puede incluir un vestuario en el camino. 2. Cada sala de laboratorio contiene un lavadero de manos. El lavadero se opera automticamente o sin manos y est ubicado cerca de la puerta de salida. 3. Las superficies interiores de paredes, pisos y cielorrasos de las reas donde se manipulan agentes de BSL-3 estn construidas para facilitar la limpieza y descontaminacin. Si existen bordes, deben sellarse. Las paredes, cielorrasos y pisos deben ser lisos, impermeables a los lquidos y resistentes a las sustancias qumicas y desinfectantes normalmente utilizados en el laboratorio. Los pisos deben ser monolticos y antideslizantes. Se debe considerar el uso de cobertores de pisos acanalados. Se sellan las penetraciones en los pisos, paredes y cielorrasos. Las aberturas alrededor de los ductos y los espacios entre puertas y marcos se pueden sellar para facilitar la decontaminacin. 4. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y resistentes al calor moderado y a los solventes orgnicos, cidos, lcalis y sustancias qumicas empleadas para descontaminar las superficies y equipos de trabajo. 5. Los muebles del laboratorio pueden soportar las cargas y usos anticipados. Los espacios entre las mesas de trabajo, cabinas y los equipos son accesibles para su limpieza. Las sillas y otros muebles utilizados en el trabajo de laboratorio deben estar cubiertos por otro material que no sea tela que se pueda limpiar fcilmente. 6. Se deben cerrar y sellar todas las ventanas en el laboratorio. 7. Se cuenta con un mtodo de decontaminacin de los desechos de laboratorio en las instalaciones y se utiliza, preferentemente, dentro del laboratorio (por ejemplo, autoclave, desinfeccin qumica, incineracin, u otro mtodo de decontaminacin aprobado). Se deben considerar los mtodos de decontaminacin de los equipos. Si se transportan los desechos fuera del laboratorio, se debe sellar de manera adecuada y no transportar por los corredores pblicos. 8. Es necesario que se coloquen los cabinas de seguridad biolgica lejos de las puertas, de las rejillas de ventilacin de la sala y de las reas de laboratorio muy transitadas. 9. Se prev un sistema de ventilacin de aire escape por conductos. Este sistema crea un flujo de aire direccional que toma el aire para el laboratorio de reas limpias y lo elimina en reas contaminadas. El aire de escape no se recircula a ninguna otra parte del edificio. Es probable que no se exija el filtrado y otros tratamientos de aire de escape, pero puede considerarse sobre la base de los requisitos del centro y las

manipulaciones de agentes especficos y condiciones de uso. El aire viciado debe dispersarse lejos de las reas ocupadas y de las entradas de aire o se debe filtrar con HEPA. El personal del laboratorio debe verificar que la direccin del flujo de aire (en el laboratorio) sea la adecuada. Se recomienda la colocacin de un dispositivo de monitoreo visual que indique y confirme el flujo de aire direccional hacia adentro en la entrada del laboratorio. Se debe considerar la instalacin de un sistema de control HVAC para evitar la presurizacin positiva constante del laboratorio. Se debe considerar la instalacin de alarmas audibles para notificar al personal las fallas del sistema HVAC. 10. El aire de escape viciado por HEPA desde un gabinete de seguridad biolgica Clase II puede recircularse en el laboratorio si se controla y certifica el gabinete por lo menos una vez por ao. Cuando se tenga que descargar el aire viciado de los cabinas de seguridad Clase II al exterior a travs de un sistema de aire de escape, se deben conectar los cabinas de tal forma que se evite interferir con el equilibrio de aire de los cabinas o el sistema de escape del edificio (por ejemplo, un espacio de aire entre el gabinete de escape y el ducto de escape). Si se conectan los cabinas Clase III al sistema de alimentacin o suministro, debe realizarse de manera tal que se evite la presurizacin positiva de los cabinas. 11. Las centrifugadoras de flujo continuo u otros equipos que pueden producir aerosoles deben estar contenidos en dispositivos que liberen el aire a travs de filtros HEPA, antes de descargarlo al laboratorio, estos sistemas HEPA se deben controlar por lo menos una vez por ao, de manera opcional se puede ventilar el escape de dichos equipos al exterior si se dispersa lejos de las reas ocupadas y de las entradas de aire. 12. Se protegen las lneas de vaco con trampas de desinfectante lquido y filtros HEPA o equivalentes. Se deben reemplazar los filtros segn sea necesario. Una alternativa es usar bombas de vaco porttiles (tambin adecuadamente protegidas con trampas y filtros). 13. Se dispone de una estacin para lavado de ojos dentro del laboratorio. 14. La iluminacin es adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que molestan la visin. 15. El diseo y los procedimientos operativos del establecimiento del nivel de bioseguridad 3 deben estar documentados. Se debe hacer una prueba para verificar si se ha cumplido con el diseo y con los parmetros operativos del establecimiento antes de comenzar a operar. Luego se deber hacer una reverificacin del establecimiento, por lo menos una vez al ao, sobre la base de estos procedimientos, segn hayan sido modificados por la experiencia operativa. 16. Se deber considerar la inclusin de proteccin ambiental adicional, si as lo recomienda el informe resumido del agente, segn se determine por la evaluacin del riesgo, las condiciones del lugar u otras normas establecidas.

5.4.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4 (BSL - 4)

El nivel de bioseguridad 4 debe aplicarse para trabajar con agentes peligrosos y exticos que poseen un riesgo individual alto de producir infecciones de laboratorio transmitidas por aerosoles y enfermedades mortales. Los miembros del personal de laboratorio poseen una capacitacin especfica y completa para manipular agentes infecciosos extremadamente peligrosos y conocen las funciones de contencin primaria y secundaria de las prcticas estndar y especiales, los equipos de contencin y las caractersticas de diseo del laboratorio. El laboratorio de nivel de bioseguridad 4 tiene caractersticas especiales de ingeniera y diseo para evitar la diseminacin de los microorganismos en el medio ambiente. 1. El jefe del laboratorio limita el acceso al mismo cuando se estn realizando los experimentos. 2. Se instituyen polticas para la manipulacin segura de objetos punzantes o cortantes. 3. Todos los procedimientos se llevan a cabo con cuidado para minimizar la generacin de aerosoles. 4. Las superficies de trabajo se descontaminan por lo menos una vez al da y despus de producirse cualquier derrame de material viable. 5. Todos los desechos se descontaminan antes de ser desechados utilizando un mtodo aprobado, como el de autoclave. 6. Se aplica un programa de control de insectos y roedores. A. Prcticas Especiales BSL 4 1. Slo se autoriza el ingreso a las personas cuya presencia en el establecimiento o salas individuales de laboratorio se requiere a los fines del programa o por razones de mantenimiento. 2. El acceso al establecimiento est limitado por medio de puertas seguras y cerradas. 3. Cuando hay materiales infecciosos o animales infectados en el laboratorio o en las salas de animales, se colocan en todas las puertas de acceso carteles de advertencia de riesgo en los que se incluye el smbolo universal de bioseguridad. 4. El jefe del laboratorio es responsable de asegurar que, antes de trabajar con organismos en el nivel de bioseguridad 4, todo el personal demuestre una gran habilidad para implementar las prcticas y tcnicas microbiolgicas estndar y las prcticas y operaciones especiales especficas del laboratorio.

5. El personal del laboratorio recibe inmunizaciones disponibles para los agentes manipulados o que posiblemente puedan estar potencialmente presentes en el laboratorio. 6. Se toman y almacenan muestras de suero de base para todo el personal del laboratorio y dems personal de riesgo. Peridicamente, se pueden recolectar otras muestras de suero adicionales, dependiendo de los agentes que se manipulen o la funcin del laboratorio. 7. Se notifica al personal acerca de los riesgos especiales y se le ordena que lea y cumpla las instrucciones sobre prcticas y procedimientos. 8. El personal ingresa y sale del laboratorio slo despus de realizarse el cambio de ropa o de pasar por las duchas. 9. El personal se quita la ropa en la sala externa de cambio de ropa y la deja all. A todo el personal que ingresa al laboratorio se le suministra ropa completa de laboratorio, incluyendo ropa interior, pantalones, camisas o mamelucos, zapatos, guantes. Cuando sale del laboratorio y antes de pasar al rea de duchas, el personal se quita su ropa de laboratorio en la sala interna de cambio de ropa. La ropa sucia se pasa por autoclave antes de lavarla. 10. Los insumos y materiales necesarios son introducidos por medio de la autoclave de doble puerta, cmara de fumigacin o esclusa de aire. 11. Se debe tener precaucin con los instrumentos filosos contaminados, incluyendo las agujas y las jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos. 12. Los equipos de laboratorio son descontaminados rutinariamente despus de finalizado el trabajo con materiales infecciosos, y especialmente despus de derrames o salpicaduras directas o de otra contaminacin con materiales infecciosos. Los equipos son descontaminados antes de ser enviados para su reparacin o mantenimiento. 13. Miembros profesionales adecuados del personal u otras personas debidamente capacitadas y equipadas para trabajar con material infeccioso concentrado contienen y limpian los derrames de materiales infecciosos. Se desarrolla un procedimiento para derrames y se coloca un instructivo del mismo en el laboratorio. 14. Se establece un sistema para informar accidentes y exposiciones de laboratorio y ausentismo del personal, as como tambin para el control mdico de enfermedades potenciales asociadas al laboratorio. 15. No se permite que haya en el establecimiento materiales no relacionados con el experimento que se est realizando (por ejemplo, plantas, animales y ropa). B. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) BSL 4 Todos los procedimientos realizados dentro del establecimiento se llevan a cabo en el gabinete de seguridad biolgica Clase III o en cabinas de seguridad biolgica Clase II utilizados conjuntamente con trajes presurizados de presin positiva de una pieza.

C. Laboratorio (Barreras Secundarias) BSL 4 Hay dos modelos para los laboratorios de nivel de bioseguridad 4: (A) El Laboratorio donde toda manipulacin del agente es realizada en un gabinete de Seguridad Biolgica Clase III. (B) El Laboratorio en el que se requiere el uso de trajes especiales de seguridad donde el personal utiliza un traje de proteccin. Los laboratorios de nivel de bioseguridad 4 pueden estar basados en uno de estos modelos o en la combinacin de ambos en el mismo establecimiento.

MEDIDAS EN CASO DE ACCIDENTES. Los riegos en el laboratorio se dividen en: Riesgo no biolgicos: Quimicos.- Envenenamientos, inhalacin Fsicos. Heridas cortadas, punzadas, ingestiones, incendios Electronicos entre otros. (Estrs psicosocial) Riesgos biolgicos: desechos comunes. Accidentes con material sospechoso de poder contener virus de la hepatitis B o virus de la inmunodeficiencia humana, dengue, fiebre amarilla, influenza, etc... Toda muestra de suero, sangre o lquido biolgico de procedencia humana es sospechosa de contener estos virus. Despus que se ha producido un accidente con material potencialmente contaminado, se debe lavar la zona afectada con agua y jabn favoreciendo el sangrado de la lesin. Si es necesario, se cubre la herida con un apsito. Se informar inmediatamente al mdico de turno, quien debe examinar la herida y determinar el tipo y cul es su gravedad (puncin, laceracin superficial o profunda, contaminacin de la piel o mucosa no intacta) y hasta qu punto pudo contaminarse con sangre. Se reportar el accidente a la Jefatura del laboratorio y a la Direccin General del Centro. Se tomar una muestra de sangre inicial del trabajador, que ser examinada para serologa de hepatitis B y VIH, fiebre amarilla, dengue, etc. Se debe examinar de la misma manera una muestra del material con que se contamin el personal. Notificacin de accidentes. o Proporcionar atencin al accidentado, e informar que tipo de accidente es. MANEJO DE DESECHOS DE LABORATORIO. CLASIFICAION DE LOS RESIDUOS SEGN SU PELIGROSIDAD. 1. RESIDUOS BIOCONTAMINADOS a. Tipo A 1; Instrumentos y materiales utilizados en la toma de muestra de sangre, tejidos y otros. b. TIPO A 2; Materiales biolgicos. c. TIPO A 3; Sangre humana y derivados. d. TIPO A 4: Quirrgicos y anatomopatologicos. e. TIPO A 5; Animales contaminados. 2. RESIDUOS ESPECIALES. a. TIPO B 1; Qumicos peligrosos. b. TIPO B 2; Farmacuticos c. TIPO B 3; Radioactivos. 3. RESIDUOS COMUNES a. Cartones, papel, material de oficina, basura orgnica, etc. Los residuos biocontaminados lquidos orgnicos, secreciones pueden eliminarse por el desage con abundante agua o ponerlos en una solucin de hipoclorito de sdico o tratamiento en autoclave. Los residuos solidos se llevan a incineracin y esterilizacin por autoclave. Objetos punzocortantes y cortantes: Estos materiales pueden ser de riesgo de inoculacin accidental, estos materiales deben ser estar en recipientes especficos que sean resistentes a la puncin.

CLASIFICACION DE SUSTANCIAS QUIMICAS SEGN SU RIESGO

AGENTES QUMICOS Sustancias inocuas : aquellas sustancias que no implican riesgo para la persona que las manipula ni para el medio ambiente en que se desarrolla Sustancias txicas: Son agentes qumicos que al introducirse al organismo por va oral o por inhalacin o entrar en contacto con la piel, producen dao al ser humano por accin de mecanismos fsicos o qumicos (fisiolgicos o enzimticos), o por una combinacin de ambos. Sustancias irritantes: que provocan alteracin primaria sobre la piel, mucosas y ojos. Sustancias corrosivas: que causan destruccin visible o alteraciones irreversibles en el lugar de contacto con los tejidos. Sustancias alergizantes: que por contacto, inhalacin o ingestin, provocan una reaccin sensibilizante de tipo alrgico en un nmero significativo de personas. Sustancias inflamables: que producen gases o vapores que, a una temperatura dada, alcanzan una concentracin en aire que les permite inflamarse sobre el envase o recipiente. Sustancias explosivas: que, por una reaccin qumica exotrmica, producen, gases o vapores que involucran un rpido aumento de volumen y liberacin de energa. Como consecuencia se producen ondas expansivas de sonido y calor. Estas reacciones se desencadenan por percusin, inflamacin o chispa. Sustancias iatrognicas y carcinognicas: que pueden producir cambios a nivel de la informacin gentica celular que resultan en mutaciones (dao al feto en personal gestante) o cncer. EJEMPLOS Agua Etanol Sustancias irritantes, corrosivas, alergizantes Inflamables, explosivas, iatrognicas y carcinognicas. Acetona. Compuestos de Amonio cuaternario. Acetaldehdo. Acido clorhdrico. Formol. Acido actico glacial. Cloruro de amonio. Hidrxido de sodio. Acido clorhdrico. Compuestos de amonio Formaldehdo. Glutaraldehdo. cuaternario.

Acetonitrilo. Acido barbitrico. Cloruro de potasio. Cloruro de amonio. Metanol. Nitrato de sodio. Imidazol. Cloruro de potasio. Cloruro de amonio. Cloruro de magnesio. Acido citrco. Colorantes derivados del benceno. Acridina. Auramina. Rodamina. Naranja de acridina.

CLASIFICACIN DE MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO

GRUPO DE RIESGO I II MICROORGANISMO Observaciones

Acanthamoeba. Bacillus subtilis. B. cereus BACTERIAS, CHLAMYDIAS, MYCOPLASMAS Y RICKETTSIAS Actinobacillus spp. Actinomadura pelletieri Actinomyces spp. Bacillus cereus. Bacteroides spp. Bartonella spp. Bordetella pertussis (V), B. parapertussis, B. Bronchiseptica. Borrelia spp. Campylobacter spp. Cardiobacterium hominis, Chlamydia pneumoniae, C. psittaci (cepas no aviares), C. trachomatis. Clostridium botulinum (T), C. chauvoei, C. difficile, C. haemolyticum, C. histolyticum, C. novyi, C. perfringens, C. septicum , C. sordellii, C. tetani (T,V) Corynebacterium diphtheriae (T,V), C. minutissimum, C. pseudotuberculosis, Edwardsiella tarda Ehrlichia spp. Eikenella corrodens, Enterobacter spp., Enterococcus spp. Erysipelothrix rusiopathiae Escherichia coli (excepto las cepas no patgenas) Flavobacterium spp. Francisella tularensis (tipo B), F. Novocida Fusobacterium spp. Gardnerella vaginalis, Haemophilus spp. Helicobacter pylori Klebsiella spp., Legionella spp. Leptospira interrogans Listeria monocytogenes, Mycobacterium spp. (excepto M. tuberculosis, M. bovis (no BCG), M. africanum, M. leprae, M. microti y M.ulcerans), Mycoplasma spp., N gonorrhoeae, N. meningitidis (V) Nocardia asteroides, N. brasiliensis, N.farcinica Pasteurella spp. Peptostreptococcus spp. Plesiomonas shigelloides Porphyromonas spp. Prevotella spp. Proteus spp. Providencia spp. P aeruginosa, Pseudomona spp. Rhodococcus equi Rickettsia spp. Salmonella paratyphi A, B, C (V), Salmonella spp. (excepto S. typhi) Serpulina spp. Shigella boydii, S. Dysenteriae (excepto tipo 1), S. flexneri, S. Sonnei S aureus Streptobacillus moniliformis Streptococcus spp. Treponema carateum, T. pallidum, T. Vincentii Ureaplasma urealyticum Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus, V. vulnificus, Vibrio spp. Yersinia enterocolitica, Y. Pseudotuberculosis HONGOS Aspergillus fumigatus (A) Candida albicans (A), Candida spp. Cryptococcus neoformans (A) Emmonsia parva., Epidermophyton floccosum (A) Fonsecaea spp. Madurella spp. Microsporum spp. (A). Penicillium marneffei (A) Scedosporium apiospermum, S. prolificans., Sporothrix schenckii., Trichophyton spp. V: vacuna eficaz disponible T: produccin de toxinas

A: POSIBLES EFECTOS ALERGICOS

CLASIFICACION DE MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO GRUPO DE RIESGO II MICROORGANISMO Observaciones

VIRUS Adenoviridae: Adenovirus Arenaviridae: Complejos virales LCM - Lassa: virus de la coriomeningitis linfoctica (cepas no neurotrpicas), virus Mopeia, otros complejos virales LCM - Lassa.Complejos virales Tacaribe: otros complejos virales Tacaribe. Astroviridae Bunyaviridae: Virus Bunyamwera V de la encefalitis de California, Virus Germiston V. Bhanja virus Hantavirus V Puumala , V Prospect Hill Otros hantavirus Nairovirus Virus Hazara,Flebovirus Virus de los flebotomos V Toscana Otros bunyavirus de patogenicidad conocida. Caliciviridae: Virus Norwalk. Otros Caliciviridae Coronaviridae Herpesviridae: Citomegalovirus Virus Epstein - Barr Herpes simplex virus tipos 1 y 2 Herpes varicella - zoster Virus linfotrpico humano B (HBLV - HHV6) Herpes virus humano 7,Herpes virus humano 8 (D) Orthomyxoviridae: Virus de la influenza tipos A, B y C [V (c)] Ortomixovirus transmitidos por garrapatas: Virus Dhori y Thogoto. Papovaviridae: Virus BK y JC [D (d)] Virus del papiloma humano [D (d)] Paramyxoviridae: Virus del sarampin (V) Virus de las paperas (V) Virus de la enfermedad de Newcastle Virus de la parainfluenza tipos 1 a 4 Virus respiratorio sincitial Parvoviridae: Parvovirus humano (B 19) Picornaviridae: Virus de la conjuntivitis hemorrgica (AHC). Virus coxsackie. Echo Virus de la hepatitis A (enterovirus humano tipo 72) (V) Poliovirus (V) Rinovirus. Poxviridae: Buffalopox virus (e) Cowpox virus Elephantpox virus (f) Virus del ndulo de los ordeadores Molluscum contagiosum Orf virus Rabbitpox virus (g) Vaccinia virus Yatapox virus (Tana & Yaba) Reoviridae: Coltivirus Rotavirus humanos Orbivirus Reovirus, Rhabdoviridae:, Virus de la estomatitis vesicular Togaviridae: Alfavirus Virus Bebaru Virus Onyong - nyong Virus del ro Ross Virus del bosque Semliki Virus Sindbis Otros alfavirus conocidos Rubivirus (rubela) (V) Toroviridae PARSITOS Protozoos: Acanthamoeba castellani Babesia microti Babesia divergens, Balantidium coli Cryptosporidium spp. E histolytica,Giardia lamblia Leishmania spp. (excepto L. brasiliensis y L.donovani) Naegleria fowleri Plasmodium spp. humano y smico (excepto P. falciparum) Pneumocystis carinii, Sarcocystis suihominis Toxoplasma gondii, T. Spiralis, Trypanosoma brucei brucei, T. brucei gambiense Helmintos: Nemtodos Ancylostoma duodenale Angiostrongylus spp. Ascaris lumbricoides (A), A. suum (A) Brugia spp. Capillaria philippinensis Dracunculus medinensis Loa loa Mansonella ozzardi Necator americanus Onchocerca volvulus, Strongyloides spp. Toxocara canis Trichinella spp. Trichuris trichiura Wuchereria bancrofti Cstodos Hymenolepis diminuta, H. nana Taenia saginata Tremtodos Clonorchis sinensis, C. viverrini F hepatica, F. Gigantica,Fasciolopsis buski Opisthorchis spp. Paragonimus westermani Schistosoma haematobium, S. Intercalatum, S. japonicum, S. mansoni, S. Mekongi

V: vacuna disponible

eficaz

D: La lista de los trabajadores al agente debe conservarse durante mas de 10 aos despus de la ultima exposicin (c) Slo por lo que se refiere a los tipos A y B (d) : Recomendado para los trabajos que impliquen (e) : se identificar sobre este un gnero pox virus variante de virus pueden 2 virus epgrafe: 8 buffalo y una vaccinia

(f) : Variante de cowpox (g) : variante vaccinia de

A: Posibles efectos alrgicos

CLASIFICACION DE MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO GRUPO DE RIESGO III MICROORGANISMO OBSERVACIONES

BACTERIAS, CHLAMYDIAS Y RICKETTSIAS Bacillus anthracis, Brucella spp., Burkholderia mallei, B. Pseudomallei, Chlamydia psittaci (cepas aviares) Coxiella burnetii, Escherichia coli (cepas verocitotxicas como O157:H7 uO103) (T), Francisella tularensis tipo A, Mycobacterium tuberculosis (V), M.africanum (V), M. bovis (excepto la cepa BCG) (V), M. leprae, M. Microti (*), M. ulcerans (*) Rickettsia akari (*), R. canada (*), R.montana (*), R. conorii, R. mooseri, R. prowazekii, R. rickettsii, R.Tsutsugamushi, Salmonella typhi [V (*)], Shigella dysenteriae (tipo 1) [T (*)] Yersinia pestis (V) HONGOS Blastomyces dermatitidis Cladophialophora bantiana Coccidioides immitis (A) Histoplasma capsulatum. Paracoccidioides brasiliensis. VIRUS Arenaviridae: Complejos virales LCM-Lassa: virus de la coriomeningitis linfoctica (cepas neurotrpicas) Complejos virales Tacaribe: virus Flexal Bunyaviridae: Virus Oropouche Virus de la encefalitis de California, Virus Belgrade Virus sin nombre (Muerto Canyon) Hantavirus Virus Hantaan (fiebre hemorrgica de Corea), Virus Seoul Flebovirus, Virus de la fiebre del valle Rift (V) Caliciviridae: Virus de la hepatitis E (*) Flaviviridae: Virus de la encefalitis del valle Murray Virus de la encefalitis de las garrapatas de Europa Central [V (*)] Virus Absettarov Virus Hanzalova Virus Hypr Virus Kumlinge Virus del Dengue tipos 1-4 Virus de la hepatitis C [D (*)] Virus de la hepatitis G [D (*)] Virus de la encefalitis B japonesa (V) Virus del bosque de Kyasamur (V), Virus del mal de Louping (*) Virus Omsk [V (a)] Virus Powassan Virus Rocio Virus de la encefalitis de primavera-verano rusa [V (a)] Virus de la encefalitis de St. Louis Virus Wesselsbron (*) Virus del Nilo occidental Virus de la fiebre amarilla (V) Hepadnaviridae: Virus de la hepatitis B [V, D (*)] Virus de la hepatitis D [V, D (b) (*)] Herpesviridae: Herpesvirus simiae (virus B) Poxviridae: Monkeypox virus (V) Retroviridae: Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) [D (*)], Virus de las leucemias humanas de clulas T (HTLV) tipos 1 y 2 [D (*)] Virus S1V [(h) (*)] Rhabdoviridae: Virus de la rabia [V (*)] Togaviridae: Alfavirus Virus de la encefalomielitis equina americana oriental (V) Virus de la encefalomielitis equina americana occidental (V) Virus Chikungunya (*) Virus Everglades (*), Virus Mayaro Virus Mucambo (*) Virus Ndumu Virus Tonate (*) Virus de la encefalomielitis equina venezolana (V) Virus no clasificados Virus de la hepatitis todava no identificados [D (*)] Agentes no clasificados asociados a encefalopatas espongiformes transmisibles (TSE): Enfermedad de Creutzfeldt - Jakob [D(d) (*)] Variante de la enfermedad de Creutzfeldt - Jakob (CJD) [D (d) (*)] Encefalopata espongiforme bovina (BSE) y otras TSE de origen animal afines [D (d,i) (*)] Sndrome de Gerstmann Strussler-Scheinker [D (d) (*)] Kuru [D (d) (*)]

V: vacuna eficaz disponible T: produccin de toxinas (*): Normalmente no infecciosos a travs del aire

A: Posibles efectos alrgicos

PARSITOS Echinococcus granulosus (*), E.multilocularis (*), E. vogeli (*) Leishmania brasiliensis (*), L. donovani (*) Plasmodium falciparum (*) Taenia solium (*) Trypanosoma brucei rhodesiense (*), T. cruzi

(*): Normalmente no infecciosos a travs del aire V: vacuna eficaz disponible D: La lista de los trabajadores al agente debe conservarse durante mas de 10 aos despus de la ultima exposicin (a): Encefalitis transmitida por la garrapata (b) : El virus de la hepatitis D precisa de otra infeccin simultnea o secundaria a la provocada por el virus de hepatitis B , para poder ejercer su poder patgeno en los trabajadores. La vacuna contra el virus de la heaptitis B proteger por lo tanto , a los trabajadores no afectados por el virus de la hepatitis B contra el virus de la hepatitis D ( Delta) (c) Slo por lo que se refiere a los tipos A y B (d) : Recomendado para los trabajos que impliquen (h) : No existe actualmente ninguna prueba de enfermedad humana provocada por otro retrovirus de origen smico. Como medida de precaucin, se recomienda un nivel 3. (*): Normalmente no infecciosos a travs del aire

CLASIFICACION DE MICROORGANISMOS POR GRUPO DE RIESGO Grupo de riesgo

Microorganismo
BACTERIAS, CHLAMYDIAS, MYCOPLASMAS Y HONGOS

Observaciones

Grupo de RICKETTSIAS Riesgo IV Ninguno

.

Ninguno
PARSITOS Ninguno VIRUS Arenaviridae: Complejos virales LCM-Lassa: virus de Lassa Complejos virales Tacaribe: virus Junin, virus Machupo, virus Sabia, virus Guanarito Bunyaviridae: Nairovirus Virus de la fiebre hemorrgica de Crimea/Congo Filoviridae: Virus Marburg Virus Ebola Flaviviridae: Virus Kyasanur Poxviridae: Variola (major & minor) virus Whitepox virus (variola virus) Virus no clasificados Morbillivirus equino

BIOSEGURIDAD EN LAS INVESTIGACIONES QUE HACEN USO DE MOLECULAS DE ADN RECOMBINANTE. 1. Generalidades.El acelerado desarrollo que ha experimentado en los ltimos aos un conjunto de nuevas tcnicas de manipulacin de seres vivos y materiales biolgicos, a expensas de los avances de la biologa molecular, como la tecnologa del ADN recombinante, la electroporacion, la micro inyeccin nuclear, la fusin celular, etc. Ha planteado la necesidad de regulaciones y controles de la investigacin y de los productos producidos con estas tcnicas, ante la posibilidad de impactos negativos de ellos tanto en la salud como en los ecosistemas. Los objetivos generales de estas regulaciones con la proteccin de la salud y del medio ambiente y la ayuda ala investigacin y desarrollo en el campo de la biotecnologa. Para ello debe existir normativas reguladoras y estructuras organizativas, que garanticen un nivel razonable de seguridad, que permita el desarrollo de un clima de apoyo por parte de la comunidad cientfica y de la opinin publica en general, al continuo avance cientfico y tecnolgico en este campo. 2. Normas y barreras biolgica especificas.Los experimentos con ADN recombinante (ADN r) se puede dividir en 4 clases, en relacional control que sobre estos experimentos debe ejercerse. 1. Experimentos que requieren se sometidos a examen del CTNB (comit tcnico nacional de bioseguridad) y su aprobaron por la CIB, (comit institucional de bioseguridad) antes de su iniciacin. 2. Experimentos que solo requieren de aprobacin del comit institucional de BS de su iniciacin. 3. Experimentos que requieren solo de una notificacin al comit institucional de BS antes de su iniciacin. 4. Experimentos exentos. Experimentos que requieren el examen del CTNB y la aprobacin del CIB, antes de su iniciacin. Los experimentos que pertenecen a esta categora no pueden iniciarse sin la presentacin previa de la informacin pertinente sobre el experimento propuesto a las autoridades correspondientes, el examen del CTNB y la aprobacin especifica del CIB. Los organismos de control redactan un formulario para efectuar esta solicitud, que debe contener: a) Investigaciones propuesta, objetivos, justificacin de la solicitud de permiso. b) Antecedentes sobre el organismo modificado; Clasificacin taxonmica, ciclo de vida, capacidad de transferencia gnica. c) Genes introducidos; fuente y funcin del manipulado, caractersticas del organismo dador. d) Metodologa: descripcin de la metodologa para generar las molculas hibridas, mecanismo de introduccin del organismo en estudio. e) Estabilidad gentica y expresin de los genes manipulados. Contencin propuesta: fsica y/o biolgica. f) Para el caso de organismos librados al medio ambiente de debera tener en cuenta, adems aspectos como: Consideraciones ecolgicas; papel de organismo en el ecosistema Reproduccin y/o diseminacin del organismo modificado Interacciones biolgicas: efecto sobre competidores, hospederos, parasitos. Indicar las condiciones del ensayo de campo Monitoreo del experimento de campo. Evaluacin de riesgo. Las condiciones de contencin para tales experimentos sern las recomendaciones por estos comits, y establecidas por la autoridades correspondientes en el momento de aprobarse el experimento en cuestin. 1.

Dichos experimentos tambin requieren la aprobacin del CIB antes de su iniciacin. Estos experimentos comprenden: 1. Formacin de liberada de ADN recombinantes que contiene genes para la biosntesis de molculas toxicas de los experimentos a realizar la CTNB y CIB aprobaran y verificaran que tipo de contencin se debe de utilizar para estos tipos de experimentos. 2. La liberacin deliberada en el medio ambiente de cualquier organismo que contenga ADN recombinante , excepto ciertos organismos, cuya liberacin depender de las normas y condiciones que establezcan las autoridades del sector respectivo. 3. La transferencia deliberada de una caracterstica que confiera a los microorganismo resistencia a los medicamentos, la cual no sea adquirida en forma natural, y que comprometa el uso de medicamentos para el control de agentes patgenos en el campo de la medicina humana o veterinaria o en la agricultura. 4. La transferencia deliberada de ADN recombinante o de ADN o ARN a seres humanos. 2. Experimentos que requieren la aprobacin del CIB antes de su iniciacin. Los investigadores que lleven a cabo experimentos pertenecientes a esta categora, deben presentar al CIB correspondiente con anterioridad ala iniciacin de los experimentos un protocolo detallado que contenga la siguiente informacin; una descripcin de las fuentes del ADN; la naturaleza de las secuencia del ADN insertadas; los huspedes y vectores que se han de utilizar; si se har un intento deliberado de obtener la expresin de un extrao y en caso afirmativo que protena se producir; y las condiciones de contencin especificadas en estas normas. Este protocolo deber estas fechado y firmado por el investigador y se presentara solo al CIB local. el CIB examinara todas estas propuestas antes de comenzar los experimentos. Los pedidos para un grado menor de contencin en experimentos pertenecientes a esta categora, sern consideradas por al autoridades correspondientes. En este grupo estn comprendidos: 1) Experimentos en los que se emplean agentes patgenos humanos o animales (agentes de nivel de BS 2, 3, 4, y 5) Los experimentos en los que se introduce el ADN recombinante en los agente de Clase 2 pueden llevarse a cabo en condiciones de contencin de NBS-2 Los experimentos en los que se introduce ADN recombinante en agente de clase 3, pueden llevarse a cabo condiciones de contencin de NBS-3 Los experimentos en los que se introduce ADN recombinante en agentes de clase 4, pueden llevarse a cabo en condiciones de contencin de NBS-4 Las condiciones de contencin para los experimentos en los que se introduce ADN recombinante en agentes importantes al pas (NIVEL 5) se establecern para cada caso en particular y de acuerdo con el reglamento especifico de cada pas en los que respecta al manejo de agentes patgenos extraos a su territorio. Experimentos en los cuales ADN proviene de agentes patgenos de humanos o animales (niveles de BS 2, 3, y 4) se clona en sistemas de husped-vector procarioticos o eucaroticos inferiores no patgenos. Los experimentos con ADN recombinante en los que el ADN de agentes de clase o clase3 se transfieren a organismo procarioticos o eucaroticos inferiores no patgenos pueden llevarse a cabo en condiciones de contencin de NBS2. Los experimentos con ADN en los que el ADN de agentes de Clase 4 se transfiere a organismo procarioticos o eucarsticos inferiores no patgenos, pueden llevarse a cabo en condiciones de contencin de NBS2 despus de haberse demostrado que solo una fraccin total e irreversiblemente defectuosa del genoma del agente se halla presente en un recombinante dado. A falta de esta demostracin las condiciones de contencin ser de NBS 4. Muchos experimentos pertenecientes a NSB-1 o minimo estarn exentos de atenerse a estas normas. Las autoridades respectivas determinaran las condiciones de contencin correspondientes al os experimentos en los que el ADN de los agentes de clase 5 (agentes patgenos introducidos al pas) se transfiere a organismos procariotas o eucariotas inferiores no patgenos despus de examinar cada caso. Experimentos en los que se emplean virus infecciosos de ADN o de ARN animal o vegetal o virus defectuosos de ADN o de ARN animal o vegetal en presencia de virus auxiliares en sistema de cultivo de tejidos.

2)

3)

SEALES DE SEGURIDAD Y NORMAS DE USO 1.- Seales indicadoras Indicadores sobre dispositivos extintores

F
La seal roja F indica el lugar donde se encuentran los dispositivos para extinguir el fuego. La seal de extintores de mano contienen una sucinta instruccin de manejo que habra que grabarse en la memoria. Antes de comenzar a extinguir el fuego, debe de accionarse la alarma desde el dispositivo ms cercano.
2.- Seales de salvamento Ducha de urgencia Las duchas de urgencia se encuentran en todos los laboratorios en los que se manejan productos qumicos, el objetivo de la ducha de salvamento es de apagar la vestimenta que se est quemando o de lavar inmediatamente salpicaduras de productos qumicos peligrosos de la piel y de la ropa. El acceso hacia la ducha de urgencia, nunca debe de estar bloqueado y hay que comprobar regularmente el estado de funcionamiento de la misma.

3.- Seales obligatorias

3.1.- Va de salvamento y salida de socorroPara los casos de emergencia, las vas de salvamento y las salidas de socorro estn caracterizadas claramente con estas seales de salvamento. Ellas indican el camino hacia fuera o a un rea segura. Las vas de salvamento deberan de memorizarse, ya que en el caso de urgencia imperan a menudo condiciones difciles, como p. ej., pnico o desarrollo de humo. Las vas de salvamento deben de estar libres de cualquier obstculo.

3.2.- Primeros auxilios con indicacin de direccin La cruz blanca sobre fondo verde seala el lugar donde se pueden recibir primeros auxilios, p. ej., el botiqun el cual contiene el material para primeros auxilios, como p.ej ., vendajes para cortar hemorragias y para vendar las heridas, tijeras, agujas de seguridad, paos de limpieza, entre otros.

3.3.- Dispositivo para enjuague de ojos Esta seal permite encontrar rpido auxilio en caso de salpicaduras de sustancias qumicas en los ojos, por un sencillo efecto de palanca se pone en marcha un chorro de agua dirigido hacia arriba con el que se puede enjuagar a fondo ambos ojos. El acceso a este dispositivo de salvamento no debe de estar bloqueado. La persona que necesita de este auxilio rpido est en ese momento bastante limitada en su capacidad de orientacin, debe ser auxiliada.

3.4.- Portar proteccin respiratoria

En el manejo de gases o sustancias txicas que desarrollan vapores peligrosos, debe por principio trabajarse en campana de ventilacin. En casos especiales p. ej., cuando se produce rotura de vidrio con escape de vapores peligrosos, o al trasvasar mayores cantidades en el almacn, es tambin necesaria una proteccin respiratoria en forma de mscaras completas con filtros especiales. Esta medida de precaucin es sobre todo vlida, cuando es inevitable que pasen al aire en el lugar de trabajo sustancias nocivas que puedan as ser inhaladas.

3.5.- Portar guantes protectores Puesto que las manos son la parte del cuerpo ms amenazada. Hay que llevar guantes apropiados en muchos trabajos en el laboratorio y en el almacn.

3.6.- Portar calzado protector Mientras que en el laboratorio raramente se presenta la necesidad llevar calzado protector, ello es necesario en el almacn de productos qumicos durante ciertos trabajos, por ejemplo cuando existe el riesgo de salpicaduras, al trasvasar mayores cantidades de lquidos peligrosos o bien el peligro de la cada de envases mayores.

3.7.- Portar proteccin de ojos Por principio hay que llevar en el laboratorio, pero tambin en el almacn si se trabaja con productos qumicos peligrosos, gafas protectoras. Para los usuarios regulares de lentes hay tipos especiales de gafas protectoras.

4.- Seales de prohibicin 4.1.- Prohibido el fuego, luz abierta y fumar En el laboratorio y en el almacn se manejan a menudo lquidos combustibles cuyas mezclas de vapor - aire, dentro de ciertos lmites, pueden producir explosiones. Para evitar riesgos de incendio, (p.ej., por llama abierta, cigarrillos, etc.) se identifican estas reas con la seal de prohibicin. 4.2.- Prohibicin de extinguir fuegos con agua En general el agua es un buen medio extintor de incendios. Pero en algunos casos especiales, sobre todo en fuegos con metales alcalinos o alquilos metlicos, hay que evitar el agua rigurosamente. Para evitar este riesgo se identifican estas reas con la seal de prohibicin.

5.- Seales de peligro 5.1.- Advertencia sobre productos inflamables Esta seal de peligro se encuentra en la entrada de lugares de trabajo, en donde se manejan sustancias inflamables, pero tambin en puertas de recintos de almacn en donde se depositan este tipo de productos, (p.ej., lquidos inflamables y gases inflamables).

5.2.- Advertencia sobre productos corrosivos Esta seal de peligro se encuentra en las entradas de locales de almacenamiento en donde se manejan productos corrosivos, p.ej., cidos y bases. En estos recintos se debe entrar observando las medidas de proteccin, guantes, si necesario careta protectora, delantal y botas protectoras, a veces incluso tambin con proteccin respiratoria.

5.3.- Advertencia sobre productos txicos Donde se manipulan productos muy txicos o txicos, ya sea en el laboratorio o almacn, debe de encontrarse esta seal de advertencia. Los productos que poseen estas caractersticas estn ya clasificados segn la reglamentacin sobre productos peligrosos con el smbolo de riesgo correspondiente (calavera).

5.4.-

Advertencia

sobre

productos

explosivos

Donde se manejan productos que reaccionan explosivamente por golpes o sacudidas, se colocar esta advertencia, de peligro. Los productos que poseen estas propiedades llevan ya sobre la etiqueta el smbolo de riesgo explosivo. 5.5.- Advertencia sobre campos electromagnticos En el rea de laboratorio aparece esta seale advertencia raramente. Sin embargo se encuentra en sitios con aparatos de resonancia magntica nuclear. El riesgo que parte de all se basa en la perturbacin de instrumentos magnetizables. En este contexto estn amenazadas aquellas personas que llevan instalado un marcapasos. 5.6.Advertencia explosionable sobre Durante el manejo con lquidos inflamables, p.ej., al trasvasar atmsfera solventes en el almacn, se pueden producir peligrosas explosiones de polvo. Las reas expuestas a explosiones tienen por ello que estar sealizadas como rea ex con la seal de advertencia citada. Debe de evitarse aqu toda posibilidad de encendido; fumar, mechero luz abierta, tampoco los trabajos del soldado y cortado de material, dado el peligro de chispas. Los instrumentos elctricos que se utilicen en esta rea, solamente estn permitidos si llevan la seal protejidos contra explosiones.

5.7.- Advertencia sobre productos radioactivos o radiaciones ionizantes Las reas en las que se trabaja con sustancias radioactivas, tienen que estar aseguradas por amplias medidas de proteccin, sobretodo porque estos riesgos no son visibles. Los rayos X tienen que clasificarse bajo este punto de vista. El manejo descuidado de estas sustancias puede producir daos biolgicos graves, en algunos casos incluso efectos nocivos retardados, irreversibles. 5.8.- Advertencia sobre riesgos biolgicos Esta seal de advertencia se encuentra raramente en el rea de laboratorios de qumica usuales. A pesar de ello hay que aludir que los grupos de trabajo que laboran en biotecnologa moderna representan grupos de riesgo en este sentido. Los microorganismos, (p.ej.,bacterias, virus, hongos,etc.), pueden infectar a las personas por transmisin incontrolada y producir daos a la salud imprevisibles.

Smbolo empleado por el INS