ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA Nº 12
Determinación de Especies del
Género Vibrio
ASIGNATURA :

Microbiología de los Alimentos I

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo

ALUMNO :

Rómulo Aycachi Inga

CICLO :

2007 - II

Lambayeque, 13 de marzo de 2008.

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 PRÁCTICA Nº 12
DETERMINACIÓN DE ESPECIES DEL GÉNERO
Vibrio.

I. Introducción:

La Familia Vibrionaceae agrupa diferentes géneros de bacilos Gram negativos con un

hábitat primario acuático. Se los encuentra en el mar en aguas frescas y en relación con
animales acuáticos. Diversas especies son patógenas para el hombre, peces, así como
otros vertebrados e invertebrados.
Aunque la Familia fue definida inicialmente en un intento de agrupar especies oxidasa
positivas y móviles por flagelos polares para diferenciarlas de los integrantes de la
Familia Enterobacteriaceae, se vio que todos estos microorganismos comparten
atributos distintivos que sugieren un origen evolutivo común.
Son bacilos Gram negativos, rectos o curvos. Móviles por flagelos polares. No forman
esporos. Quimioorganotrofos, desarrollan en medios simples, son anaerobios
facultativos, capaces de tener un metabolismo fermentativo o respiratorio. La mayoría
oxidasas positivo. La mayoría de las especies requiere 2-3% de NaCl o agua marina
para desarrollar. El % G + C del ADN va de 38 a 63%.
Por muchos años la única especie que interesó a los microbiólogos fue V. cholerae,
agente del Cólera epidémico. Otras especies tales como V. parahemolyticus pueden
causar toxiinfecciones alimentarias en el hombre luego de la ingestión de productos del
mar, es la primera causa de diarrea en el Japón, donde se consume pescado crudo. Otras
especies de Vibrio y Plesiomonas shigelloides también están relacionadas con
gastroenteritis. Por otra parte, Aeromonas hydrophila es responsable de infecciones de
heridas que han sido expuestas a aguas poluidas, y ocasionalmente, puede provocar
infecciones sistémicas en enfermos inmunodeprimidos.
El género Vibrio comprende varias especies de importancia médica, relacionadas
muchas de ellas con enfermedad gastrointestinal y en particular con enfermedades
trasmitidas por alimentos de origen marino. De todas ellas merece especial atención
Vibrio cholerae responsable del Cólera epidémico, una enfermedad infecciosa con un
cuadro clínico caracterizado por vómitos y diarrea intensa, que puede llevar a la
deshidratación grave. Dicha bacteria ingresa al organismo con el agua o los alimentos
contaminados. La enfermedad es endémica en por lo menos 80 países con epidemias
que ocurren en varias regiones, incluyendo África, Sudamérica y el sur y sudeste de
Asia.
V. cholerae O1, biotipo El Tor es el responsable de la séptima pandemia que se inicio en
1961 cuando apareció la bacteria como causa de epidemia de cólera en Celebes
(Sulawesi), Indonesia. La enfermedad se propagó rápidamente a otros países de Asia del
este y llegó a Bangladesh en 1963, a India en 1964, y a la URSS, Irán e Irak en 1965-
1966. En 1970 el cólera invadió el oeste de África, la cual no había experimentado la
enfermedad por más de 100 años. La enfermedad se dispersó rápidamente a varios
países de Africa y se convirtió en endémica en casi todo el continente. En 1991 el cólera
golpeó a Latinoamérica, en donde también había estado ausente por más de un siglo. Su
ingreso fue por Perú. En el primer año se propagó a 11 países, y subsecuentemente a
través del continente.

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II. Objetivos:

- Investigar la presencia de V. cholerae y V. parahaemoliticus en aguas marinas.

- Aislar e identificar V. cholerae y V. parahaemoliticus mediante pruebas
bioquímicas.

III. Materiales:

- Muestras: Agua de mar (Caleta - Tubos de dilución

San José), pescados y mariscos - Placas de Petri
frescos. - Asa bacteriológica
- Medios: Caldo peptonado - Mechero bunsen
alcalino con 3% de NaCl y Agar - Frascos estériles
TCBS - Gradillas

IV. Procedimiento:

 Muestra de agua de mar:

- El grupo de mesa recogió muestras de agua de mar de la Caleta de San José. Se

recogió muestras cada 20 m. y se las guardo en frascos de vidrio estériles.
- Luego se tomó 1 mL de la muestra homogenizada previamente y se le pasó a
Caldo peptonado alcalino con 3% de NaCl para su enriquecimiento. Este se lo
deja incubando a 37 ºC por 6 – 8 h.
- Pasado el tiempo, se siembra una alícuota de la muestra enriquecida en placas
con Agar TCBS (medio selectivo para crecimiento de bacterias tipo Vibrio).
Estas se incuban a 35 – 37 ºC por 24 horas.
- Pasado el tiempo se escogen las colonias características: Colonias amarillas
pueden ser V. cholerae; Colonias verde-azuladas puede ser V. parahaemoliticus;
colonias amarillas grandes puede ser V. alginolyticus.
- De las colonias seleccionadas se las pasa a vial con medio TCBS para su
asilamiento.
- A las cepas obtenidas se les realiza las diferentes pruebas bioquímicas para su
identificación (caldo con NaCl al 0, 3, 7, 10%, TSI, catalasa, prueba del cordón
o String Test).

 Muestra de pescado:

- El grupo de mesa trató como muestra un pescado “fresco”.

- A la muestra se le procedió a sacar las agallas, las vísceras y la piel y se las
depositó en un frasco estéril.
- Luego se le agregó Caldo peptonado alcalino al 3% de NaCl, se le hizo un ligero
homogenizado y se lo dejó incubar por 6 – 8 horas a 35 – 37 ºC.
- Pasado el tiempo se sembró una alícuota de la muestra enriquecida en placas con
agar TCBS. Estas placas se las incubó a 35 – 37 ºC por 24 h.
- Pasado el tiempo de incubación se leen las placas. Se escogen las colonias
características (amarillas o verde azuladas con String test positivo) y se las pasa
a viales con medio TCBS, estas se las incuba a 37 ºC por 24 h.
- Luego, las cepas obtenidas son sometidas a las pruebas bioquímicas pertinentes
para su identificación respectiva.

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V. Resultados:

- De la muestra de pescado trabajada se sembró en placas con agar TCBS.

- Éstas se dejaron incubar a 37 ºC por 24 h.
- Luego se pasó a escoger la colonia con la cual se iba a trabajar.

- Se escogió una colonia String test positiva, la cual primero se aisló en vial y a la
cual luego se le realizó las pruebas bioquímicas correspondientes:

Catalasa Positiva
Crecim. NaCl 0% Positiva
Crecim. NaCl 3% Positiva
Crecim. NaCl 8% Negativa

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 Crecim. NaCl 10% Negativa
LIA Positiva
TSI A/A, +, -
String test Positiva

- De las pruebas realizadas se logró identificar a Vibrio cholerae.

- En lo que respecta a las muestras traídas de las playas de San José, se procedió
casi de la misma manera, se escogió, de las colonias obtenidas en el agar TCBS,
las String test positivas, sólo una colonia, y se la pasó a vial con agar TCBS.
- Luego, se le realizaron las pruebas respectivas:

Catalasa Positiva
Crecim. NaCl 0% Positiva
Crecim. NaCl 3% Positiva
Crecim. NaCl 8% Negativa
Indol Positiva
LIA Positiva
TSI A/A
- De los resultados obtenidos, se puede afirmar que obtuvimos en cepa a Vibrio
cholerae.

VI. Referencias:

- ALGORTA, G. (2005). Bacilos Gram Negativos No Exigentes:

Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Pseudomonas. Obtenido el 15 de febrero de
2008 en http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2022.pdf
- Vibrio (2005) Obtenido el 7 de marzo de 2008 en
http://www.bvsops.org.uy/pdf/vibrio.pdf
- FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en
Microbiología: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3º Edic. Lima.
- L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de Alimentos:
Investigación y recuento de B. cereus. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en
http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_m
icrolimentos.htm