MEDIOS DE CULTIVO

1.Elaborar cinco tablas de medios de cultivo indicado la funcin de sus componentes, siguiendo el ejemplo a continuacin, considera la fuente de carbono (C), fuente de nitrgeno(N), fuente de vitaminas (vit. ), componentes buffer (pH), reguladores de presin osmtica () Agar endo Peptona K2HPO4 Lactosa Fucsina bsica Sulfito de sodio Agar Agua destilada Elementos o factor de crecimiento c n vit ph cantidad I 10.0g 3.5g 10.0g 0.5g 2.5g 15.0g 100.0ml

Agar fenilalanina Extracto de levadura Fenilalanina Na2HPO4 Cloruro de sodio Agar Agua destilada

Elementos o factor de crecimiento c n vit ph

cantidad I 3.0g 2g 1.0g 5g 12g 1000ml

Caldo lactosado Peptona Extracto de carne Lactosa Agua destilada

Elementos o factor de crecimiento c n vit ph

cantidad I 5.0g 3.0g 5.0g 1000.0ml

Caldo nitrato Peptona de carne Cloruro de sodio KNO2 Agua destilada

Elementos o factor de crecimiento c n vit ph

cantidad I 7.0g 5.0g 5.0g 1000.0ml

Caldo nutricio Peptona Extracto de carne Agua destilada

Elementos o factor de crecimiento c n vit ph

cantidad I 5.0g 3.0g 1000.0ml

2. Por qu no se recomienda emplear agua de cao en la preparacin de medios de cultivo? Ya que el agua de cao contiene microorganismos bacterias coliformes, microorganismos patgenos como larvas, protozoos que pueden contaminar ese medio de cultivo; an el agua sea destilada puede llegar a contaminar ya que puede contener hormonas y residuos de productor transgnicos, etc.

3. Qu funcin tiene el buffer en un medio de cultivo? Mencione algunos ejemplos de buffer usando en medios de cultivo. La funcin buffer es evitar que el pH del cultivo vare mucho y el microorganismo cultivado no muera. Los ms usados son: peptonas Las peptonas son fuente de nitrgeno y, en ausencia de hidratos de carbono en el medio de cultivo complejo, cumplen la funcin de fuente de carbono y energa. Aportan vitaminas del grupo B, trazas de metales y fosfatos que dan carcter buffer al medio. , fuentes de fosforo como fosfato del diamonio(NH4)2HPO4., cloruro de sodio, fosfato disdico, K2HPO4, suelen agregar fosfatos de sodio o potasio que tambin confieren poder buffer al medio de cultivo (pH cercano a 7). 4. Por qu se invierten las placas Petri con medio de cultivo luego de enfriarse? Se invierten por que como es una solucin caliente se va a condensar el vapor y se crear gotas en la parte superior si es que no se mueve podra contaminar o alterar el cultivo, por eso si cambiamos de posicin no se crearan gotas. 5. Mencione cuatro fuentes de carbono, fuentes de nitrgeno, inhibidores e indicadores empleados usualmente en los medios de cultivo, mencionando al menos un medio del cual son componentes cada uno? Por ejemplo en Medio definido (tambin medio enriquecido) para el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans, una bacteria litoautotrfica. fuente de C.. C02 fuente de N.. NH4Cl Otras fuentes son: Pepton fuente de nitrgeno. Acidos Casamino fuente de nitrgeno. Citrato trisdico fuente de carbono. Glucosa fuente de carbono. Inhibidores: NaCl inhibidor para no haloflicas, Medio selectivo enriquecido para el crecimiento de haloflicas extremas.

Sales biliares inhibidor Rojos neutros inhibidor Cristal violeta inhibidor Indicadores: Azul de bromotimol Eosina Fucsina acida Verde malaquita 6. Mencione un medio de cultivo especfico para bacterias de BAAR y para cianobacterias respectivamente, citando la composicin de cada uno? Un medio de cultivo para una BAAR : como la tuberculosis es usada el medio de cultivo ms usado y ms adecuado es el de Lowenstein Jensen. Tambin se est utilizando el medio Ogawa. La bacteria requiere por lo menos de 15 dis para presentar un desarrollo visible macroscpicamente sobre el medio de cultivo y necesita hasta 8 semanas de incubacin debindose incubar un promedio de 30 das; sus colonias son de color blanco cremoso, son esfricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y de dimensiones variables. Los laboratorios especializados, realizan pruebas de susceptibilidad antibitica (antibiograma) de las cepas aisladas y que ofrecen resistencia al tratamiento convencional. Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento. Medio de cultivo para cianobacterias: El medio utilizado para el cultivo de las cianobacterias de la coleccin es el BG11, descrito por RippKa et al, (1979), cuya composicin es: Na2CO3, 0,2 mM; MgSO4, 0,3 mM; CaCl2, 0,24 mM; K2HPO4, 0,2 mM; cido ctrico, 28,5 M; citrato frrico-amnico (17% Fe), 6 mgl-1; Na2-EDTA, 2,4 M; H3BO3, 46 M; MnCl2, 9,1 M; Na2MoO4, 1,6 M; ZnSO4, 0,8 M; CuSO4, 0,3 M y CoCl2, 0,2 M. El medio se prepara a partir de un concentrado 100x que carece del K2HPO4 y de la fuente de nitrgeno, los cuales se aaden antes de esterilizar en el autoclave. La fuente de nitrgeno es el NaNO3 a una concentracin final de 17,6 mM (medio BG11). Aquellas estirpes capaces de fijar N2 en condiciones aerbicas se cultivan en medio sin nitrgeno aadido. 7. Describa otros mtodos utilizados para la esterilizar medios de cultivo ? Mtodo por vapor a presin (Autoclave): El vapor por si solo no es esterilizante. Se somete en el interior a una presin mayor que la atmosfrica, que aumenta la temperatura del vapor, siendo de esta forma como se consigue la destruccin de todos los microorganismos. Este vapor saturado debe estar sometido a una temperatura determinada y durante un tiempo necesario.

El vapor penetra en la cmara de esterilizacin y alcanza cierta presin: la deseada. Este vapor se condensa por contacto con los materiales fros. Esta condensacin libera calor humedeciendo y calentando simultneamente cada material. Por ello es necesario que no haya aire en el autoclave, lo que se consigue subcionando este por medio de un sistema de vaco e introduciendo el vapor de forma muy rpida, para as forzar la salida del aire Tindalizacin (nombre en honor de John Tyndall): Es un mtodo de esterilizacin fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a ms de 100C. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas cada uno: a) en la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas; b) en la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas. Durante las fases de tipo a) mueren todas las clulas vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para germinar. Durante las fases de tipo b) se produce la germinacin de las esporas activadas en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirn las clulas vegetativas procedentes de la germinacin en la fase anterior; y as sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningun microrganismo en la muestra. Como se puede ver, este mtodo es bastante engorroso y consumidor de tiempo, por lo que en los ltimos aos ha sido reemplazado por otro mtodo de esterilizacin, aunque ya no dependiente del calor: se trata de la esterilizacin por filtracin. Consiste de hacer pasar una solucin a travs de una membrana o filtro de un tipo de material (normalmente nitrato de celulosa) que presenta poros de un tamao inferior al de cualquier clula bacteriana (dimetro de poro =0,22 m). Mtodo de La pasteurizacin: La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la introdujo en los aos 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y envasa rpidamente. La pasteurizacin instantnea (tambin conocida por sus siglas en ingls HTST, de high temperature-short time) se logra calentando a 72C durante slo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente; mata mejor organismos ms resistentes; altera menos el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar grandes volmenes de leche). Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 97-99%. Los potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados fcilmente. La pasteurizacin tambin se emplea para la preparacin de vacunas a base de microorganismos inactivados por el calor. Mtodo a olla de presin: La olla a presin es el mejor mtodo de esterilizar completamente los frascos y cultivar as los hongos correctamente.

En muchas casas hay ollas de 6 litros pero en el mercado se consiguen hasta de 21 litros en que caben 20 frascos de 1/2 litro

Sin importar el tamao de la olla se hace as: - Poner un pedazo de tela en el fondo (un trapo cualquiera) para que los frascos no toquen el fondo de la olla y no se vayan a reventar con el calor. - Llenar con 2-3 cm's de agua - Colocar los frascos - Cerrar y calentar en un fogn hasta que la pesa comience a moverse y liberar vapor o el medidor marque 15 psi. - Dejar a 15 psi de 30-60 minutos dependiendo de la tecnica. (liquido 30 minutos, mezcla pf o arroz 45 minutos, alpiste u otros granos 60 minutos) -Apagar al tiempo deseado y esperar a que la presin baje y la olla enfre totalmente. No se debe abrir la olla antes porque la diferencia de presin o temperatura har que entre aire "no esteril" a los frascos creando un peligro de contaminacin. As mismo el sustrato debe estar a temperatura ambiente para incoular con las esporas. 8. Mencione un ejemplo de medio de cultivo para cada tipo segn la clasificacin describa en la primera pgina.

SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA). 1)Medios lquidos: por ejemplo, caldo Tarrozzi, caldo nutritivo. 2) Medios slidos: medios slidos selectivos: Baird Parker Medio, Manitol salado. 3) Medios semislidos: ejemplo: medio SS, medio Chapman, Sabouraud, etc.

Medio especiales:. 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimientoEn ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

4) Medios inhibidores:. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificacin: Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos. 7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios. 8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases peridicos de placa a placa, b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%. 9) Medios de transporte:). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart-Amies,CaryBlair, etc. ATENDIENDO A SU COMPOSICIN. 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados. 2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida. 3) Medios semisintticos: Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc. Segn su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente. b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. c) SEMISINTTICOS por ejemplo extracto de levadura. Por su composicin: 1) Medios minimo : Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados. 2) Medios comun: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida. 3) Medios exigentes: Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.