Prctica 4: Aislamiento de microorganismos en cultivos especficos

Instituto Tecnolgico de Chihuahua

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Prctica 4. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVOS ESPECFICOS. Microbiologa.

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4.1. OBJETIVO.
Confirmar la preparacin de medios de cultivos estriles, y aprender a diferenciarlos segn su composicin qumica y caractersticas fsicas con el objeto de optimizar su utilizacin en funcin de la naturaleza de la muestra y de la interaccin del anlisis de la misma.

4.2 INTRODUCCIN.
En esta prctica se tomara en consideracin todos los conocimientos adquiridos en prcticas anteriores: como fue la preparacin de agares, la esterilizacin, el uso de equipos, etc. para si lograr un estudio diferencial de las diferentes colonias en cultivos especficos, as como tambin una posible prediccin de los microorganismos presentes en los cultivos basados en la informacin que nos presenta el cultivo en cuestin.

4.3 MARCO TERICO.

Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.1 Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales
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que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.2 Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias. 4.3.1 Medios para aislamientos primarios:3 Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc) Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina) Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein). 4.3.2 Medios para identificacin:4 Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin)
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4.4 MATERIALES.
Mecheros de bunsen Asa de nicromio Isips Porta objetos Cubre objetos Caja petil

Azul violeta Yodo lugol Alcohol- cetona Safanina Azul de metileno Agua

4.6 EQUIPOS
Microscopio binocular, VELAB

4.5 REACTIVOS.
Aceite de inmersin

Microscopes model BE-B1 Solucin salina .85% Incubadora rio rocha S.A modelo ec-33

4.7 MTODO.
S introdujo una asa de nicromio estril por la superficie de un alimento en descomposicin y s sembr la muestra en las placas de agar Mc Conkey, agar nutritivo, agar sal-manitol. Haciendo el estriado como se indica en el anexo 1. S incubo por 24 horas a 32 C. S froto un hisopo en la garganta de Griselda y s sembr la muestra en cada uno de los agares, realizando la primera estra con el hisopo y el resto con el asa de nicromio estril. S incub por 24 horas a 32 C.

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Se observ y describi las colonias formadas en cada uno de los agares (como lo indica el anexo 2) realizando tincin de gram a las colonias procediendo de la siguiente manera: o o o o Tomar la muestra del agar con el asa de nicromio Colocar en portaobjetos una gota de solucin salina al .85% Espaciar la muestra en la gota Dejar secar, fijar y teir.

4.8 RESULTADOS Y OBSERVACIONES.

4.8.1 Observacin de las colonas microbianas en el agar nutritivo de la pera.

Figura 1. Colonias microbianas de pera en Tabla 1. Anlisis colonial del agar nutritivo. de la pera Morfologa Colonia 1 colonial menor a Tamao 1mm Color crema Forma circular Margen filamentosa Elevacin elevada Luz trasmitida opaca Luz reflejada opalescente Observacin esporas y microscpic hifas a ceptadas

agar nutritivo Colonia 2 menor a 1mm crema circular entero pulvirada transparente Brillante no se observo nada

Figura 2. Observacin microscpica a 40x de hongo de la pera colonia 1. 4.8.1.1 Observacin: no s

pudo

realizar la segunda observacin debido a que se realizo tincin de gram y se perdi la muestra del hongo, es por ello que se nota una coloracin diferente en la observacin

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Posible microorganis mo

4.8.2 Observacin de colonias microbianas en el agar Mc Conkey para la pera.

Figura 4. Observacin microscpica a 100x de la colonia 1 en el agar Mc Conkey de la pera.

Figura 3. Colonias microbianas de pera en el agar Mc Conkey. Figura 5. Observacin microscpica a 100x des pudo 4.8.2.1 Observacin: la colonia 2 en el agar Mc observar un crecimiento pobre de los Conkey de la pera microorganismos y una coloracin en el agar que es debida a un pH diferente colonias. caracterstico de las

Tabla 2. Anlisis colonial del agar Mc Conkey de la pera Morfologa Colonia 1 Colonia 2 colonial menor a menor a Tamao 1mm 1mm Color Forma Margen Elevacin caf filamentosa filamentosa plana crema circular entero plana

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Luz trasmitida transparente Luz reflejada opalecente

Transparente Opalecente basilos gram (+)

Observacin basilos gram Microscpic (+) a Posible microorganis mo

4.8.3 Observacin de colonias microbianas en un cultivo de garganta en el agar nutritivo

Figura 7. Observacin microscpica a 100x de la colonia 1 en el agar nutritivo de cultivo de garganta.

Figura 6. Crecimiento microbiano de cultivo de garganta en agar nutritivo. Tabla 3. Anlisis colonial del agar nutritivo de la garganta Morfologa Colonia 1 Colonia 2 colonial menor a menor a Tamao 1mm 1mm Color Forma Margen Elevacin caf circular entera convexa Crema Circular Ondulada Elevada

Figura 8. Observacin microscpica a 100x de la colonia 2 en el agar nutritivo de cultivo de 4.8.3.1 garganta. Observacin: s colonias bacteriano, en el s agar pero

pudo un dos

observar una buena distribucin de crecimiento pobre en cuanto al grosor encontraron colonias diferentes bien definidas.

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Luz trasmitida transparente Luz reflejada brillosa

Opaca Brillosa basilos gram (+)

Observacin cocos gram Microscpic (-) a Posible microorganis mo

4.8.4 Observacin de colonias microbianas en un cultivo de garganta en el agar Mc Conkey.

Figura 9. Crecimiento microbiano en el agar Mc Conkey de la garganta. Tabla 4. Anlisis colonial del agar Mc Conkey de la garganta Morfologa Colonia 1 colonial Tamao Color Forma Margen Elevacin Luz trasmitida Luz reflejada Observacin Microscpica 1 mm caf lenticular entera convexa transparente opalescente basilos gram (+)

Figura 10. Observacin microscpica a 100x de la colonia 1 en el agar Mc Conkey de la garganta.

4.8.4.1 Observacin: s observa que en

este agar tambin se presento una coloracin distinta en el agar debido al cambio de pH, y un crecimiento ms numeroso en cuanto a los microorganismos bien definidos.

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Posible microorganismo

4.8.5 Observacin de colonias microbianas en un cultivo de garganta en el agar salmanitol.

Figura 11. Crecimiento microbiano en agar salmanitol de la garganta. Tabla 5. Anlisis colonial del agar salmanitol de la garganta Morfologa Colonia 1 colonial Tamao Color Forma Margen Elevacin Luz trasmitida Luz reflejada Observacin Microscpica Posible microorganismo menor a 1mm blanca circular entera pulvinada opaca brillantes cocos gram (+)

Figura 12. Observacin microscpica a 100x de la colonia 1 de la garganta en agar sal-manitol 4.8.5.1 Observacin: en este crecimiento microbiano pH, as se como logro tambin observar unas una decoloracin en el agar debido al cambio de colonias individuales bien definida y una morfologa microscpica bien definida tambin.

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4.9 CONCLUSIONES.
S concluye que en esta prctica el pobre crecimiento microbiano fue debido a la baja temperatura que se dej en la incubadora y el poco tiempo que se dej. Se logr reafirmar los conocimientos obtenidos en prcticas anteriores. Logrando un estudio diferencial de las diferentes colonias obtenidas con xito logrando as una posible prediccin de los microorganismos presentes en las muestras analizadas basado en las caractersticas morfolgicas y microscpicas del mismo.

4.10 REFERENCIAS.
1

Mark

B.,

2006,

Tcnicas

de

microbiologa,

http://www.solociencia.com/biologia/microbiologia-tecnicas.htm, 2/10/2011, 9:36 am.

2

Roberto

T.,

2000,

Micro

mundo,

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm, 2/10/2011, 9:50 am

3

Maria

B.,

2008,

Medios

de

cultivo, 2/10/2011,

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html, 10:14 am.

4

Antonie W., 2010, Microbiologa, www.uprm.edu/biology/cursos/.../MRlab3.ppt -

Puerto Rico, 2/10/2011, 10:30 am.

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Anexo 1.

Figura A1. Estriado de cultivo.

Anexo 2.

Figura A2. Morfologa colonial

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