1.

ANEXA
FIXAREA
PRELUCRAREA HISTOPATOLOGICA
Deshidratare
Clarificare
Impregnare parafina
INCLUDEREA IN PARAFINA
SECTIONAREA LA MICROTOM
ETALAREA SECTIUNILOR PE LAME
COLORAREA LAMELOR
MONTAREA LAMELOR
ETICHETARE

PROTOCOL DE LUCRU

1 . Verificarea documenter de inspire a

materialului bioptic
2 . Verificarea materialului bioptic
3 . Inregistrare /. Acordare nr caz
4 . Orientarea macroscopica / fasonarea
( descrierea si sectionarea)
5 . Fixarea in formol 10 %
6 . Decalcifierea
7 . Prelucrarea histopatologica in baterie
manuala sau procesare automata
8 . Includerea in parafina
9 . Sectionarea
10 . Etalarea sectiunilor pe lame
11 . Deparafinarea si rehidratarea lamelor
( bai deparafinare cu benzen , xilen , alcool)
12 . Colorare
13 . Deshidratare ( uscare ) clarificare benzen
, toluen, xilen.
14 . Montare
15 . Etoichetare

PROTOCOLO DE LUCRU —CITILOGII

(Lichee sinovial,urina ,sputa ,lichee pleural,
de ascot etc)

EXAMEN CITOLOGIC CONVENTIONAL

1. Uscare
2 . Fixare cu alcool
3 . Uscare
4 . Colorare GIEMSA , HE , PAPANICOLAU

EXAMEN CITOLOGIC IN MEDIU LICHID

-recipient cu produs patologic-
1 . Centrifugare
2 . Intindere frontiuri
3 . Uscare
4 . Fixare cu alcool
5 . Uscare
6 . Colorare GIEMSA , HE
 2.
FIXATORII

A doua operatiune dupa recoltare

Scopul:
Oprirea fenomenelor vitale
Impiedicarea alterarii
Previne autoriza / intarirea
Pregatirea pentru colorare

Fixarea - cu solutie sau lichid fixatoare

simple sau compuse
2-4 fixatori simultan
Amestec : CARNOY //// BOUIN
Volumul lichidului fixator de 50 de ori mai
mare
Piesele in borane cu dop rodiat 100-250cm3
…saculete tifon..cutii plastic/metal
Durata fixarii variata de la minute /// zile
Oprirea fixarii prin spalare cu alcool

FORMOLUL
/. Universal .. 1-3zile
Prima zi de 20%
Dupa 10-15%
Sol apoasa formaldehina 40%
In sticle de culoare inchisa
Dupa fixare spalare cu alcool 70%

ACETONA
Prelucrari rapide
1-3 ore
Direct in parafina

ACID TRICLORACETIC 1-2 mm pe ora

Muschi striati
Sol apoasa 5-10%
Decalcifiant
30-60 min —1mm
4 ore —3mm
12-24 ore —6mm

ALCOOLUL ETILIC penetrare 1 mm/ora

Sistemul nervos
Metoda NISSL
Fibre .elemente conjunctive.vase.glande
Alcool 80-90 % sau absolut

ALCOOLUL METILIC
Numai pentru frontiuri de sange

ACIDUL OSMIC —cel mai bun

1-2%
Piece 2-3 mm—2-3 zile
Spalare cu apa curgatoare

Amestec fixator apos

AMESTECUL BOUIN

Universal. topografic. decalcifiant

1 ml acid acetic glacial

5 ml formol neutru
15 ml acid picric

Durata fixarii 2-24-48 ore

Piesele nu se retracta decat 2,5%

AMESTECUL BOUIN - HOLLANDE

AMESTECUL FEEMMING
AMESTECUL MAXIMOU

Amestec fixator pe baza de alcool

AMESTECUL CARNOY
Fixarea: nucleilor. glicogenului. acizilor
.granulatiilor NISSL

6 ml alcool etilic absolut

3 ml cloroform
1 ml acid acetic glacial

Durata 1/2 - 3 ore

Scimbare fixator de 2-3 ori
2 - 3 bai de alcool absolut

3.
DECALCIFIEREA

Piese mici:
Amestecul Bouin
SUSA HEIDENHAIN
ROMEIS
ESKENASY

Fixarea cu formol previne decalcifierea

Spalarea cu apa / alcool dupa decalcifiere
Cantiate lichid decalcificator 100-200 ori mai
mare decat piesa
Lichidul schimbat de mai multe ori
Decalcifierea mai usoara cu piesa
suspendata de un fir de nyeon
Verificare prin palpare / intepare cu ac
E finalizat daca se poate sectiona
Prelucrare piese decalcifiate

Sectionare la microtomul cu congelare

Includerea in celoidina ( parafina intareste

piesele )

Piesele fragile + includere in parafina-> 24

ore spalare apa curgatoare

AGENTI DECALCIFIANTI

Acid AZOTIC FUMANS

Acid SULFUROS
Acidul TRICLORACETIC
Sarea DISODICA

PRELUCRAREA TESUTURILOR DURE

Dupa fixare/ decalcifiere urmeaza spalarea

cu alcool 70%
Urmeaza 2 bai de glicerina anhidra pura 24h
2 bai alcool absolut
Clarificator : alcool butilic sau esenta de
cedru
Includerea in parafina
 4.
INCLUDEREA IN PARAFINA

1. DESHIDRATAREA
2. CLARIFICAREA
3. PARAFINAREA parafina fluida
4. TURNAREA BLOCULUI

1. Deshidratarea
Indepartarea apei
Borane BORREL
Bai alcool
Benzen

2. Clarificarea
La temp laboratorului
In recipiente de sticla , inalte, inguste , cu
dop
Reactiv clarificator de 20 de ori mai mult
decat piesa
Agitarea periodica a continutului
Schimbarea lichidului de 2 -3 ori
Clarificatori — BENZEN .XILEN — toxice
— esenta de cedru ,,
cloroform

3.parafinarea
Patrunderea pieselor in parafina topita
Solidificarea in bloc prin racire
Operatie la cald in etuva sau termostatul
pentru parafina 55-56 grade
Recipiente sticla //. Portelan piese 2-3 cm..
diamentru 5-8 cm .

4.Turnarea blocurilor - includerea

propriu zisa
Inglobare in bloc de parafina solidificata
Turnare in cutii carton , hartie, staniol,
portelan. — barele LEUCKART
Eliminare bule de aer cu spatula incalzita la
flacara

5.
SECTIONAREA BLOCURILOR DE
PARAFINA

Microtoame —4 tipuri—

1 MICROTOMUL CU CULISA VERTICALA —

MINOT

>> 1 si 2 pentru sectionarea la parafina

carbowax si esterwax
2 . MICROTOMUL CU BASCULA “ROCKING”

3 . MICROTOMUL CU CULISA ORIZONTALA

——celoidina (se lipeste numai pe lemn ,
grilaj )
4. MICROTOMUL CU CONGELARE ———
piese neincluse sau incluse in gelatina

In functie de profilul latei cutitele sunt de 4

tipuri

cutiful cu profil biconcav

Cutitul cu profil plan concav————piese moi
Cutitul cu profil biplan. ——piese dure
Cutitul cu profil biplan oblic

-Prima operatie este pregatirea blocului

pentru sectionare

-Daca sunt mai multe piese intr un bloc

trebuie separate cu ajutorul unui fierastrau
de traforaj / bisturiu incalzit

-Lipirea blocului pe port obiect :

-Se pun pe port obiect cateva bucatele de

parafina
-Le topim cu spatula dupa care aplicam rapid
blocul

Sectionarea
Microtomul asezat pe masa robusta
Materiale :
Bisturiu
Penel cu par fin
2 ace de disociere
O sticla cu dop picurator continand apa
distilata
Flacon cu amestec de albumina -glicerina-
MAYER
O platina incalzitoare cu temp reglabila
O planseta de carton 20-30 cm avand lipite
pe una din fete hartie neagra iar pe cealalta
coala alba
Lame port object curate
O planseta cu santuri

Fixarea port-obiectului in suportul sau :

- se aduce suportul in pozitia superioara
-se introduce coda port-obiectului in lacasul
sau
-se manevreaza roata volanta pana cand
blocul ajunge aproape de cutit
-slabim maneta sau suruburile de fixare ale
suportului cutitului si deplasam suportul
-taisul cutitului sa ajunga la 1/2 mm de
suprafata de sectionare a blocului
-orientare port-obiect;fata dinspre cutit a
blocului sa fie in planul de sectionare
-iar marginea lui inferioara paralela perfect
cu taisul cutitului
-se fixeaza solid port-obiectul si suportul
cutitului

Primele miscari de sectionare la 20-25

microni
Daca totul decurge bine se trece la
sectionari de 5-7 microni

ETALAREA SI LIPIREA SECTIUNILOR

Lame port-obiect perfect curate si degresate

Etalarea :
-intr un cristalizator
-pe suprafata unor lichide incalzite
-pe lama port-obiect

O portiune de panglica 15-20 cm se aseaza

pe plansa de carton
-pe fata neagra daca e albicioasa
-pe fata alba daca e colorata
 6.
Examenul
EXTEMPORANEU
Sectionarea la microtomul de congelare

Pentru anumite tehnici

-neurohistologie
-evidentiere histochimica lipide
-examen rapid biopsii
-organe dure
-urgente

LIPIREA PIESELOR PE PORT OBIECTUL

MICROTOMULUI

-Rondela partie de filtru inbibata in apa

-se aseaza piesa
-deschideri scurte robinet gaz -piesa adera
puternic prin congelare
-acoperire cu pahar de sticla/ plastic
-deschideri sacadate robinet gaz - zapada
carbonica adopera piesa
-se fac section subtiri ,uniforme Prin taiere
50-100 microtomi
-Se iau sectiunile de pe lama cu varful
degetului si se pun in apa distilata
-pastrare maxim 1-2 zile in formol 10%
-piesele fragile maxim 1-12h in solutie apoasa
GUMA ARABICA sau sirop APATHY

Piesele de dimensiuni foarte mici(ganglioni

nervosi,piese biopsice) se inglobeaza intr un
organ fragment mai mare ( creier,ficat)
pentru suport

*Procedeul J.F. WILSON

Cateva sec in alcool 70%

Bloc cristalizator de apa distilata
Sectiunile plutesc
Se aplica peste ele harte de filtru
O lama port object cu glicerina sub sectiune
si se scoate
Se mai pune o hartie peste cealalta
Sub bec BUNSEN 1-2h
Se scoate hartia

Colorare

1g amidon
10ml apa rece
20ml apa clocotita
2 pic CIH
5 min se fierbe totul
1 cristal de TYMOL dupa racire

*LIPIREA LA RECE
*LIPIREA PE LAME PORT OBIECT
GELATINIZATE
*LIPIREA PRIN COLODINARE

Protocol de lucru
Examenul EXTEMPORANEU

Se verifica documentele insotire

fragment
Se inregistreaza cazul
Se orienteaza macroscopic piesa
Se congeleaza fragmentul .se
ingheata la sub -40
Se sectioneaza la criomicrotom
Se etaleaza sectiunile pe lame
Se coloreaza lamele cu tesut
histopatologic cu H.E. Albastru de
toluidina .Scarlach (lipide)
Se monteaza in apa / glicerina /

7.
COLORAREA SECTIUNILOR
HISTOLOGICE

Coloratia pe sectiuni—dupa sectionare pe

sectiuni libere
Coloratia prin montare —rapid prin montarea
sectiunii intre lama si lamela intr o pic de sol
colorata
Coloratie in masa sau pe bloc — pe piese
intregi inaite de sectionare

Coloratii directe —colorant se fixeaza pe

anumite structuri fara sa fi fost prep in acest
scop
Coloratii indirecte prin mardansare—inainte
de colorant agent chimic MORDANT
Coloratii regressive —supracolorare + agent
chimic diferentiator

Coloratii simple — o sigura subst

Coloratii combinate —2,3 sau mai multe

Coloration ortocromatica —se colorata

precum colorantul
Coloration metacromatica —anumite
structuri alta culoare decat cea a
colorantului
Coloratura panoptica —se obtine o gama
bogata de culori

Colorant se prepara cu ALCOOL ETILIC sau

APA DISTILATA

COLORAREA SECTIUNILOR LA PARAFINA

DEPARAFINAREA
-dizolvarea parafinei se face cu hidrocarburi
benzenice—BENZEN .TUOLEN.XILEN.
COLODINAREA
-acoperirea sectiunii cu o pelicula fina de
celoidina
HIDRATAREA
-trecerea preparatelor din ultimul alcool in
apa distilata
ELIMINAREA PRECIPITATELOR MERCURICE
-(piese fixate in amestecuri cu sublimat)
tratarea sectiunilor cu LUGOL
ELIMINAREA ACIDULUI PICRIC
-solutie alcoholica de carbonaat de litiu
COLORAREA sau IMPREGNAREA
DESHIDRATAREA
-eliminare apa
CLARIFICAREA
-eliminare alcool

8.
Substante toxice si periculoase
1 . FIXATORII

FORMALDEHINA gaz cu biros inceptor

FORMOLUL - aldehida formica
GLUTARALDEHIDA
FENOLUL- cristallo translucide
ACIDUL PICRIC - crystal premium nisipul
umed
BICROMATUL DE POTASIU

2 . SOLVENTI

BENZENUL —solvent parafina .si omologii

acestuia TOLUEM , XILEN ,etc —lichid incolor
TOLUEN -- solvent si clarificator—soluble in
alcool
XILEN - -solvennt si clarificator—
soluble in agenti organici
ETER — solvent si anestezic—inflamabil
METANOL —solvent si fixator
ACETONA —solvent si deshidratant
PIRIDINA —-solvent si colorant

3 . METALE ACIZI SI SARURILE LOR

ACIDUL ACETIC GLACIAL
ACIDUL CROMIC. —
fixator sau colorant
ACETATUL DE PLUMB ——fixator
sau colorant
MERCURUL ——
fixator sau colorant
PERMAGANATUL DE POTASIU——fixator sau
colorant
NITRAT DE ARGINT. —
colorant sau antiseptic
ACETATUL DE URANIU —
colorant

4 . COLORANTII

ANILINA
COLORANTI ACRIDINICI
AURAMINA 0

5 . AAGENTI EXPLOZIVI

BENZEN
ETER
GLICEROL
METANOL
ACIDUL PICRIC
NITRATUL DE ARGINT
NITROCELULOZA
GLICEROLUL
ACIDUL PERCLORIC

9.
PREPARATUL HISTOLOGIC

1.Recoltare / prelevare

Cat mai Durand dupa:

- deces.
- Actul chirurgical

Materiale :
Placa de lema mola-brad
Lumina adecvata\
Ventilatie
Apa curentxa
 Recipiente
Balanta-cantar
Lupa
Microscop ranversat
Rigla gradata transparenta
Sonda butonata
Pense anatomice / chirurgicale
Cutie de disectie cu lama lunga
Bisturie. Lame ras
Orientarea sectiunilor
Grosimea si suprafetele
prezenta si intinderea leziunii
Mentinerea raporturilor anatomice si
histologice cat mai aproape de starea. “ In
vivo”

Grosimea sectiunilor sub 5 mm

Suprafata maxim 4 - 5 cm3

Piesa prelevata va fi notata ( locul de

prelevarea, regiunea anatomica,grosime, plan
de sectiune)

2 FIXAREA

Clasificare fixatori
 ALDEHIDE
FORMALDEHIDA
PARAFORMALDEHIDA
GLUTARALDEHIDA

AGENTI OXIDANTI
BICROMAT DE POTASIU
PERMAGANAT DE POTASIU
TETRAOXID DE OSMIU

AGENTI COAGULANTI
ACID ACETIC
ALCOOL METILIC
ALCOOL ETILIC

ALTI FIXATORI
ACETONA
ACID PICRIC
ACID TRICLORACETIC
CLORURA DE MERCUR

Factori fizici implicati in fixare

TEMPERATURA
VALOAREA pH ULUI
DIFUZIBILITATEA
OSMOLARITATEA
DURATA FIXARII

FIXATORI PT INDEPARTAREA PIGMENTULUI

Piesele fixate in formalina dupa deparafinare
si deshidratare din sol alcool 95% ->alcool
picric 5 minute ->>>spalare apa la robinet 10
min.
Piesele fixate in sol ZENKER dupa
deparafinare si hidratare piénsele se spala
10min in apa dupa care se tree prin sol GRAN
10 mina poi sol TIOSULFAT DE SODIU 5%pana
tesuturile sunt clare si se spala la robinet 10
min.

TEHNICI DE INCUDERE

ALCOOL ETILIC 80% —2 H

ALCOOL 95% 3-4 bai
ALCOOL ABSOLUT 3 bai
XILEN 2bai
XILEN PARAFINA 1H
PARAFINA 2-3 bai

10.
COLORATII NUCLEARE

COLORANTII NUCLEARI
HEMATOXILINA. —— cel mai utilizat
TIONINA
ALBASTRU DE METILEN
CARMINUL. Etc

Hematoxilina devine colorant daca este

oxidata la hemateina

Tipuri de colorati nucleare ; progressive si

regressive

1g de hematoxilina va lega 0,15g de aluminiu

Hemalaunul acid MAYER. 2,8g Al / g

hematoxilina
Hemalaunul acid EHRLICH. 0.08g
Hemalaunul HARRIS. 0,6g
Hemalaunul DELAFIELD. 0,6g
Hemalaunul HANSEN. 1,1g

Hemalaunul MAYER
1g. Hematoxilina cristalizata
1000ml. Apa distilata
0,2g iota de sodiu
50g. Alaun de aluminiu
1g acid citric
50g cloral hidrat
Tehnica de colorare

DEPARAFINARE SI HIDRATARE
COLORARE CU HEMALAUNUL HARRIS
SPALARE scurta in apa distilata
DIFERENTIERE in acid alcool
SPALARE rapida in apa distilata
CONTRASTAREA in apa amoniacala
SPALARE in apa curgatoare la robinet
COLORARE cu euzina floxina
DESHIDRATARE
CLARIFICARE
MONTARE

Alte coloratii nucleare

CARMINUL
CARMALAUNUL MAYER
PARACARMINUL
CARMINUL CROMALAUN
COLORATIA CU ROSU NUCLEAR
COLORATIA CU CRESYL VIOLET
COLORATIA NUCLEARA CU VERDE DE METIL
PIRONINA
COLORATIA NUCLEARA CU ACRIDIN
COLORATIA NUCLEARA GIEMSA
11.
COLORATIA
HEMALAUN-EOZINA
Pentru colorarea progresiva a nucleilor si
citoplasmei
Cooratia reuseste dupa orice fixator

solutii folosite:
HEMALAUNUL MAYER acid

1g Hematoxilina cristalizata
1000ml apa distilata
0,2g. iodat de sodiu
50g alaun de amoniac sau potasiu
1g de acid citric
50g cloralhidrat

Preparare
Se dizolva hematoxilina in apa distilata
Se fierbe 15 min
Se läsa la racit
Se adauga iodatul de sodiu
Se adauga celelalte subst
La final solutia trebuie sa fie rosie spre violet
Se poate utiliza dupa 3-4 zile

tehnica de colorare

DEPARAFINAREA 3bai BENZEN

HIDRATARE 3bai alcool absolut 95%
Indepartarea pigmentului HEMOSIDERMIC
COLORARE cu hemalaum MAYER 10-20min
SPALARE apa curgatoare 15-20 min
COLORARE cu eozina floxina 15sec
SPLARE scurta in apa
DESHIDRATARE ACLOOL 1-80%,2-95%
CLARIFICARE alcool absolut xilen1/1 si bai de
xiol
MONTARE

REZULTATE
NUCLEII albastru
CITOPLASMA. Roz
 12.
COLORATIE
VAN GIESON

Uzuala ,tricroma,tesuturi conjunctive

Coloranti si reactivi

HEMATOXILINA WEIGERT sau

GROAT
a. 1g hematoxilina.
a.50ml apa distilata
100ml alcool etilic 95%.
1. g alaun fier

Acid sulphuric concentrate

B .1,5g clorura ferica anhidra

b.50 ml alcool etilic 95%
100ml Apa distilata
0,5g hematoxilina
1ml acid clorhidric concentrat

Tehnica de colorare
DEPARAFINARE
HIDRATARE
COLODINARE faclultativ
SUPRACOLORAREA NUCLEILOR cu
hematoxilina WEIGERT sau GROAT
DIFERENTIERE cu alcool acidulat
VIRAREA colorati nucleare timp de 20-30 min
in apa curenta
DIFERENTIEREA in apa acidulata
CLARIFICAREA cu XILOL-FENOL-XILOL
MONTAREA in balsam de Canada

REZULTATE

NUCLEII. Negrii
CITOPLASME ,MUSCHI ,HEMATII. Galbene
COLAGEN .MEMBRANE BAZALE rosii

13.
COLORATII SPECIALE
MUCOPOLIZAHARIDE
HIDRATII DE CARBON

CARBOHIDRATII
-monozaharide
-Diazaharide
-polizaharide

COLORATIA CU ACIDUL PERIODIC SCHIFF

Indicatii: MUCOZAHARIDE NEUTRE

Fixatorii:
-formol 10%
Solutiile BOUIN ,CARNOY , ZENKER

Solutii
REACTIVUL SCHIFF
1g pararozanilina
1,9g metabisulfit de sodiu
100ml acid clorhidric

ACID CLORHIDRIC 1N
83,5ml acid clorhidric concentrat
816,5ml apa distilata

METABISULFIT DE SODIU 0,5%

5g metabisulfit de sodiu
1000ml apa distilata

ACID PERIODIC 1%
1g acid periodic
100ml Ana distilata
TEHNICA DE COLORARE :

DEPARAFINARE
HIDRATARE
OXIDARE acid periodic
SPALARE 3bai apa distilata 2 min fiecare
COLORARE reactivul SCHIFF 10 min
TRECERE 3bai a cate 2 min in metabisulfit de
soda
SPALARE apa curgatoare 10-15min
COLORARE hematoxilina MAYER 3min
SPALARE apa curgatoare 15 min
DESHIDRATARE
CLARIFICARE

REZULTATE
Mucusul din cell calciforme NEGRU
Glicogenul ,membrane ,fibre ,piele, glicolipide
fosfolipide ROSU PURPURIU

14.
COLORATIA
 CU ALBASTRU ALCIAN
Mucopolizaharide acide
Oricare fixator

Sol cu acid acetic 3%

Sol cu albastru de alcian
Sol fosfat acid clorhidric
Sol albastru alcian
Kernechtrot

TEHNICA DE COLORARE

DEPARAFINAREA sectiunilor
HIDRATARE in apa distilata apoi acid acetic 3
% 3 minute pt PH2,5 si acid clorhidric pt Ph
0,4
COLORARE cu albastru de alcian 30min
SPALAREA apa curgatoare 10 min clatire apa
distilata
COLORAREA NUCLEILOR cu sol
KERNECHTROT dupa care se spala in apa
curgatoare
DESHIDRATARE rapid in alcool 95% si alcool
abolut
CLARIFICARE 2 bai de xilen
MONTAREA
REZULTATE

NUCLEII. Roz
SUBST MUCOIDE ACIDE Albastru turcuaz
deschis
LA PH 2,5
LA PH 1 SI 0,4

15.
COLORATIA PAS
ALBASTRU ALCIAN
Evidentierea mucopolizaharidelor acide si
intens acide

Solutia apoasa 1%avcid periodic

Reactive SCHIFF
Metabisulfit de sodiu 0,5%
Solutie albastru alcian 1% pH 2,5
Solutie. Albastru alcian 1% pH 1

TEHNICA DE COLORARE

DEPARAFINARE
HIDRATARE cu apa distilata
COLORARE cu albastru de alcian
SUGATIVARE. sectiuni cu hartie de filtru
OXIDARE cu acid periodic 1% 10 min
SPALARE cu apa distinkta 5min
TRECERE . In reaktiv SCHIFF 10min
TRECERE in bai de metabisulfit de
soda a cate 2 min
SPALARE cu apa curgatoare 10-15 mi
DESHIDRATARE
CLARIFICARE
MONTARE

Rezultate
pH 2,5 —Toate polizaharidele NEUTRE Rosu
magenta
Mucopolizaharide acide Turcuaz
albatstru
pH 1 —ALBASTRU

16.
PRELUCRAREA FRONTIURILOR

1.FIXAREA

a.fixarea umeda. In sol fixatoare.

B.fixarea umeda cu u
scare in aer ulterioara ;sol fixatoare si uscare
c.fixarea cu spray CARBOWAX

FIXATORII ALCOOLICI CEI MAI FOLOSITI :

ETANOL 95%
IZOPROPOL 80%
PROPANOL 80%
METANOL 100%
ALCOOL DENATURAT. 95%
ALCOOL PENTRU ANALIZA : metanol absolut,
izopropanol 80%. Acetona 90%.

Metoda de liza a hematiilor

1.a. Fixare in etanol

B.fixare in solutie CARNOY
C.Introducere in etanol 95%

2.a, introducere in fixator CARNOY

B. Trecere in etanol 95%

3.a. fixare in etanol 95%

b.introducere in solutie de uree 2m—
30sec

4.a. fixare in etanol 95%

 b.trecere in sol de uree 2m —1 min

5.a. fixare in fix CLARKE 10-15 min

b.spalare in etanol 95%

UREE 2M = 120g de uree pubere intr un litru

de apa distilata

Metoda de colorare a frontiurilor

MAY-GRUNWALD- GIEMSA
PAPANICOLAU
H.E
PAS

Metoda MAY-GRUNWALD-GIEMSA

Indicatii

Tehnica diferentiala frontiu sange periferic si

maduva osoasa
Probe citologice sau histologice

Solutii:

-May GRUNWALD .eozinat de albastru de

metilen dizolvat in metanol absolut
-GIEMSA amestec de 2 coloratii .baza AZUR 2
si un colorant neutru AZUR 2 eozina dizolvat
in metanol absolut si glicerina

Tehnica de colorare
1

FIXARE alcool metilic 15 min

USCARE in aer 15 min
COLORARE cu MAY GRUNWALD buffer. 5 min
SPALARE sol tamponata 2 min
COLORARE sol GIEMSA tamponata 25 min
SPALARE sub jet de apa 5 min
USCARE

Sol tamponna de lucru ( 20 ml sol A 90,78g

fosfat monopotasiu / litru,,,,21 ml sol
B ..960ml apa distilata —pH7 )
Sol tamponata MAY GROUNWALD ( 50ml sol
MAY GRUNWALD …50ml sol tamponata )
Sol tamponata GIEMSA ( 10ml sol GIEMSA .90
ml sol tamponata)

MEDODA DE COLORARE
PAPANICOLAU

FIXAREA
COLORAREA NUCLEILOR
COLORAREA CITOPLASMEI
CLARIFICARE

TEHNICA DE COLORARE
PAPANICOLAU PROGRESIVA

FIXARE UMEDA a frontiurilor etanol 95% 10-

15min
HIDRATARE COLORARE CU HEMATOX
SPALARE IN APA TAMPONATA
DECOLORARE cu sol de acid clorhidric
DIFERENTIERE in substituent SCOTT
SPALARE in apa de robinet tamponata
DESHIDRATARE alcool etilic 95% 2 bai 10
scufundari in fiecare
COLORARE CU OG 6-1-2 min
SPALARE in alcool etici 3bai 10 scuf
COLORARE cu EA 2-6min
SPALARE in 2-3 bai alcool etici 95% 10-12
scuf
DESHIDRATARE 3 bai alcool etilic absolut 10
scuf fiecare
CLARIFICARE 3-4 bai XILEN
MONTARE
 IDEI
Hidratarea si deshidratarea ——cu
alcool
Clarificarea—— cu xilen
Dizolvarea parafinei ——cu xilen
Montare ——balsam de canada pe
lamela
Deparafinarea —— xilen benzen

Recoltarea —pe o placa de pvc

sau pluta cu pense fine
Fixarea —
Spalarea—apa / formaldehina.
Alcool /dicromat de potasiu.
Alcool absolut/fixatori alcool si
amestecul carnoy
Decalcifierea
Includerea—parafina
>>deshidratare -clarificare-
parafinarea- turnarea in bloc
Sectionarea
Aplicarea pe port obiect - o
picture de albumina mayer
Colorarea
Montarea
Etichetarea

-BOUIN. FORMOL 20 ACID

PICRIC 75 ACID ACETIC GLACIAL
5. ZILE
-CARNOY CLOROFORM 30 ALCOOL
ABSOLUT 60 ACID ACETIC GLACIAL 10.
1-3 ORE
-ALCOOL 96 FORMOL 10
24 ORE
-ZENKER

Coloranti naturali — hematoxilina carmin

Artificiali —acid- euzina ..bazic-
albastru de metilen .. neutri-sudan lll..