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INTRODUCCIN El DNA no existe como molcula libre en las clulas, por el contrario se encuentra asociado con protenas y RNA.

Es por esto, que los procesos de extraccin y aislamiento de DNA de una clula y de otras molculas es el primer paso para muchos procedimientos de laboratorio en biotecnologa, biologa molecular, gentica e inmunologa entre otras ciencias. Estos procesos involucran generalmente, rompimiento de las clulas, desnaturalizacin de protenas y la precipitacin del DNA como material fibroso. Una vez obtenido el DNA puede ser sometido a diferentes procedimientos como: estudios de paternidad, trabajos forenses para captura de criminales, la amplificacin mediante PCR de secuencias especficas con fines comerciales o teraputicos, el estudio de expresin de genes entre otros procedimientos
Los cidos nucleicos son sustancias que como su nombre lo indica, fueron aisladas en el ncleo celular, pero se an encontrado cidos nuclecos en citoplasma as como en mitocondrias y en cloroplastos. El Aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos de: Ingeniera gentica, Medicina forense, Bioinformtica, Nanotecnologa de ADN, Historia y antropologa. Transformacin Secuenciacin Mapeo fsico Mutagnesis 1. 2.

Donde se intenta realizar un proceso que retrase la separacin.

Una mezcla uniforme de las sustancias con similares fases. 3. La lisis celular es la rotura de la membrana celular MTODOS FSICOS MTODOS QUMICOS 4. o Tratamiento con alcalis o Tratamiento con lisozima + EDTA o Empleo de detergentes 5. o Sonicacin o Choque osmtico o Congelacin/descongelacin o Homogeneizacin con abrasivos o Cizalla liquida o Cizalla solida 6. La protelisis es la degradacin de protenas ya sea mediante enzimas especficas, llamadas proteasas , o por medio de digestin intramolecular , que catalizan la ruptura de slo una o de pocas uniones peptdicas. 7. o Se utilizan enzimas proteolticas como la pronasa, la cual es activa contra un amplio espectro de protenas naturales. La pronasa se debe auto digerir a 37C por lo menos una hora antes de utilizarla Una vez concluida la digestin con proteasa, se realiza una digestin de Rnasa para eliminar la presencia de RNA. 8. Se eliminan las protenas de la muestra utilizando solventes orgnicos como el fenol. El fenol utilizado en la extraccin de las protenas debe ser bidestilado o ultra puro , y se utiliza a una relacin 1:1 volumen por volumen con la muestra que se pretende limpiar.

9.

Generalmente se recomienda realizar 1 extraccin con fenol seguida de 1 extraccin de fenol:cloroformo (1:1), y por lo ultimo una ultima extraccin con cloroformo para limpiar toda traza de fenol. 10. o Para poder concentrar el ADN despus de la eliminacin de las protenas, se utiliza una serie de sales entre las que se encuentra el acetato de sodio, acetato de potasio acetato de amonio y cloruro de litio entre las mas usadas . 11. Una vez que el ADN ha estado en contacto con los cationes seleccionados se precipita con 2 volumenes de etanol absoluto o 1 volumen de isopropanol bajo las siguientes condiciones :mayor a 2 h a 20 centgrados de 15 a 30 min a menos 70 centgrados, o 10 o 15 min en hielo seco con etanol. 12. o Se re suspende en un Tapon que puede ser de tris-EDTA El EDTA ayuda al agotamiento de iones que se utiliza comnmente para inactivar enzimas dependientes de metal que podran daar el ADN o las protenas