Sunteți pe pagina 1din 13

Capitolul 4

4.1 Introducere

ENZIME

Enzimele sunt proteine globulare care catalizeaz reaciile biologice i permit desfurarea reaciilor chimice necesare vieii i multiplicrii celulare. Enzimele au o aciune specific i determin desfurarea reaciilor cu o vitez foarte mare ( de 103 106 ori fa de reacia necatalizat), fr produi secundari i cu randamente cantitative. Specificitatea i eficiena catalitic a enzimelor este mult mai mare raportat la catalizatorii uzuali de sintez. Istoria biochimiei este stns legat de studiul enzimelor: 1833 S-a izolat amilaza impur din extractul apos de mal. 1835 Berzelius a emis prima teorie general a catalizei chimice i a dat primul exemplu de cataliz enzimatic: hidroliza amidonului n prezena diastazei din mal, evideniind c este mai eficient dect cu acid sulfuric. 1837 Liebig i Wler au separat emulsina din extractul apos de migdale amare. 1877 S-a utilizat pentru prima dat termenul de enzim sau ferment n procesul de fermentaie a fructelor dulci n prezen de drojdie. 1882 S-a izolat ureaza impur de ctre Musculus. 1897 E. Bchner i H. Bchner au izolat din drojdie enzimele care produc fermentaia alcoolic i au stabilit c ele pot aciona independent de celula din care au fost extrase. 1926 Sumner a obinut ureaza pur prin extracie cu ap din fasolea soia i precipitare cu etanol. ntre anii 1929 1936 s-au obinut n stare pur: pepsina, tripsina i chimotripsina din tractul gastrointestinal (pepsina fusese izolat din 1836, iar tripsina din 1848, dar n stare impur). n prezent sunt cunoscute ~ 3000 de enzime, dar numai ~ 200 sunt izolate n stare pur, cristalizate.

100

4.2 Clasificarea enzimelor. Nomenclatura Clasificarea enzimelor n funcie de reacia pe care o catalizeaz este prezentat n Tabelul 4.1. Tabelul 4.1: Clasificarea enzimelor n funcie de tipul reaciei pe care o catalizeaz Numele enzimei Dehidrogenaze Hidroxilaze Kinaze Mutaze Oxidaze Oxigenaze Fosfataze Sintetaze Transferaze Reacia catalizat Dehidrogenarea unui substrat cu transferul hidrogenului la o molecul diferit de oxigen Hidroxilarea unui substrat la care particip oxigen molecular ca donor Transferul unei grupe fosfat de la o trifosfatnucleotid (ATP) la un substrat Migrarea unei grupe fosfat de la o poziie la alta n aceeai molecul Oxidarea unui substrat cu oxigen molecular ca donor Incorporarea unei molecule de oxigen cu ruperea oxidativ a unei legturi C - C Hidroliza unui ester fosforic Condensarea a dou molecule simultan cu hidroliza unei trifosfonucleotide (ATP) Transferul unei grupe funcionale de la un substrat la altul

Nomenclatura enzimelor se face n mai multe moduri: a) Denumire comun Se pstreaz denumirile comune dei acestea nu precizeaz aciunea enzimei ntr-un anumit tip de reacie. Exemplu: pepsina, tripsina, ureaza, etc. b) O alt denumire puin mai precis const n folosirea numelui substratului + numele reaciei catalizate + sufixul az: Exemplu: malatdehidrogenaza
101

c) In 1961 Comisia de Enzime a Uniunii Internaionale de Biochimie i Biologie Molecular a stabilit o clasificare i o nomenclatur sistematic a enzimelor, mult mai riguroas, care cuprinde ase clase, divizate n subclase, care la rndul lor sunt mprite n sub-subclase. Fiecare enzim are un numr de cod format din patru cifre: EC a b c d, unde: a = clasa; b = subclasa; c = sub-subclasa; d = numrul de ordine al enzimei respective n sub-subclas (nr. propriu pentru fiecare enzim). 1. Oxido- reductaze (catalizeaz procese de oxido-reducere)
1.1

Acioneaz asupra R2 CH-OH

1.1.1 cu NAD+ sau NADP+ ca acceptor de hidrogen Exemplu: - EC 1.1.1.1 (alcool dehidrogenaza) este enzima care catalizeaz oxidarea etanolului, acceptorul de hidrogen fiind NAD+:
+ CH3CH2OH + NAD

CH3CHO + NADH, H

Aceast enzim nu este specific pentru etanol, ea putnd oxida i ali alcooli. - EC 1.1.1.27 (L-lactat-NAD-oxidoreductaza sau L-lactat dehidrogenaza) este enzima care catalizeaz transformarea L- lactatului n piruvat: _ _ + CH3CHCOO + NAD CH3COCOO + NADH + H+ OH - EC 1.1.1.28 (D-lactat-NAD-oxidoreductaza sau L-lactat dehidrogenaza) este enzima care catalizeaz transformarea D- lactatului n piruvat. 1.1.2 cu citocrom ca acceptor de hidrogen Exemplu: L-lactat-fericitocrom-c-oxidoreductaza

102

1.1.3 cu oxigen ca acceptor de hidrogen Exemplu: EC 1.1.3.4 ( -D-glucoza:oxigen oxidoreductaza sau glucoz-oxidaza); EC 1.1.3.9 ( D-galactoza:oxigen oxidoreductaza sau galactoz-oxidaza. 1.2 1.3 1.4 1.5 Acioneaz asupra grupei carbonil ( C =O) Acioneaz asupra grupei R2CH CHR2 Acioneaz asupra grupei R2CH NH2 Acioneaz asupra grupei R2CH NHR, etc.

2. Transferaze (catalizeaz transferul unor grupe funcionale) 2.1 Tranfer grupe monocarbonate 2.1.1 Metiltransferaze 2.1.2 Hidroximetiltransferaze 2.2 Transfer grupe aldehidice sau cetonice 2.3 Aciltransferaze 2.4 Glicoziltransferaze Exemplu: EC 2.4.1.19 ( -1,4-glucan 4-glicoziltransferaza sau ciclodextrin glicoziltransferaza) 2.5 Alchiltransferaze 2.6 Transfer grupe azotate Exemplu: EC 2.6.1.2 (alanin aminotransferaza) este enzima care transfer grupa amino de la alanin la -cetoglutarat: _ _ _ _ COO COO COO COO + + H3N C H H3N C H CO + + CO (CH2)2 CH3 CH3 (CH2)2 _ _ COO COO

2.7 2.8

Fosforiltransferaze Transfer grupe cu sulf


103

3. Hidrolaze (catalizeaz reacii de rupere a unor legturi cu ajutorul apei) 3.1 Scindeaz legturi esterice 3.1.1 Scindeaz esteri ai acizilor carboxilici Exemplu: - EC 3.1.1.3 (glicerol-esterhidrolaza) sau lipaza; - EC 3.1.1.11 (pectin pectilhidrolaza) sau pectinesteraza 3.1.2 Scindeaz tioesteri 3.1.3 Scindeaz monoesteri ai acidului ortofosforic, etc. 3.2 Scindeaz legturi glicozidice

Exemplu: - EC 3.2.1.1 ( -1,4-glucan glucanohidrolaza) sau -amilaza - EC 3.2.1.2 ( -1,4-glucan maltohidrolaza) sau -amilaza - EC 3.2.1.4 ( -1,4-glucanglucanohidrolaza) sau celulaza - EC.3.2.1.20 ( -glucozid-glucohidrolaza) sau maltaza sau glucozidaza 3.4 Scindeaz legturi peptidice Exemplu: - EC 3.4.21.4 sau tripsina - EC 3.4.22.2 sau papaina - EC 3.4.23 cuprinde poteinaze acide care acioneaz la pH <5: - pepsina ( EC 3.4.23.1) care acioneaz la pH = 1.5 2 -renina (EC 3.4.23.4) din stomacul ierbivorelor este implicat n coagularea laptelui
3.5

Scindeaz alte legturi: C = N

Exemplu: - EC 3.5.1.1 (L- asparagin-aminohidrolaza) sau asparaginaza; - EC 3.5.1.5 (ureo-amidohidrolaza) sau ureaza.

104

3.6 Scindeaz anhidride acide, etc. 4. Liaze sau sintaze (catalizeaz reacii de adiie sau de eliminare) 4.1 Liaze pentru legtura dubl C = C Exemplu: - EC 4.1.1.1 (piruvat decarboxilaza) - EC 4.1.3.6 (citrat-oxaloacetatliaza) sau citratliaza sau citraza. 4.2 Liaze pentru legtura dubl C = O Exemplu: - EC 4.2.1.1 (anhidraza carbonic): este enzima care catalizeaz hidratarea dioxidului de carbon n celula vie: CO2 + H2O H2CO3

4.3 Liaze pentru legtura dubl C = N, etc. 5. Izomeraze ( catalizeaz reacii de izomerizare) 5.1 Racemaze (enzime care catalizeaz procese de racemizare sau epimerizare): Exemplu: - EC 5.1.2.1 (lactatracemaza) care catalizeaz reacia: _ _ COO COO HO C H H C OH CH3

CH3

- alanin racemaz transform L-alanina n D-alanin: _ _ COO COO + + H C NH3 H3N C H CH3
105

CH3

5.2

Izomeraze cis trans

Exemplu: maleat cis-trans izomeraza: _ _ COO H OOC C H C COO _ H

H C C COO _

5.3 Cetoizomeraze intramoleculare Exemplu: glicerinaldehid-3-fosfat cetoizomeraza sau triozfosfatizomeraza: CH=O H C OH


2_

CH2OH CO CH2OPO3
2_

CH2OPO3

glicerinaldehid-3-fosfat 5.4 Transferaze intramoleculare, etc.

dihidroxiacetonfosfat

6. Ligaze sau sintetaze (catalizeaz reacii de sintez prin condensarea a dou molecule simultan cu hidroliza unei legturi fosforice din ATP sau din alt compus macroergic din care rezult energia necesar desfurrii acestei reacii) 6.1 Formare de legturi C O 6.2 Formare de legturi C S Exemplu: - EC 6.2.1.1 (acetat-CoA-ligaza) sau acetil-CoA sintetaza; - EC 6.2.1.4 (succinat-CoA-ligaza) sau succinat-CoA-sintetaza.
6.3

Formare de legturi C N

106

6.4

Formare de legturi C C

Exemplu: - EC 6.4.1.1 (piruvat-CO2-ligaza) sau piruvat carboxilaza - EC 6.4.1.2 (acetil-CoA-CO2-ligaza) sau acetil-CoA carboxilaza. 4.3 Proprietile enzimelor Enzimele prezint particulariti structurale numite situsuri, care determin activitatea biologic (catalitic). Situsul catalitic este o parte a moleculei proteinei format din cteva resturi de aminoacizi (de regul neconsecutivi) care sunt responsabili de trasformarea propriu-zis a substratului. Situsul alosteric este acea parte a proteinei care, n urma legrii specifice a unui modulator (efector alosteric) extern, modific activitatea caracteristic a proteinei (care este determinat de situsul catalitic). n cazul unei enzime, activitatea enzimatic este controlat n mod direct de situsul catalitic i indirect de situsul alosteric (de care se leag un efector care poate mri sau micora activitatea catalitic). O enzim (E) acioneaz asupra unui substrat (S) cu care poate forma un complex (ES) prin legarea specific de situsul su catalitic: E + S ES P + E

Acest complex se va transforma ulterior n produsul de reacie (P) punnd n libertate enzima netransformat (E). Substratul trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii: - s aib o conformaie bine definit care s-i permit accesul la situsul catalitic; - s aib particulariti structurale care s satisfac necesitatea de specificitate a enzimei; - s se asocieze cu enzima pe baza unei orientri strict specifice. Enzima trebuie s aib proprietile unui catalizator: - s se regseasc neschimbat la sfritul reaciei; - s nu modifice natura (echilibrul sau bilanul termodinamic) reaciei pe care o catalizeaz; - s permit atingerea echilibrului ntr-un timp foarte scurt, mrind vitezele ambelor reacii care au loc simultan, dar n direcii opuse; Enzimele au i proprieti care le deosebesc de catalizatorii obinuii:
107

- acioneaz, n general, n condiii blnde, la temperaturi de ~ 37 oC i pH neutru. Exist ns i enzime care acioneaz la temperaturi ridicate (n bacteriile termofile) sau la pH-uri acide (pepsina) sau bazice (tripsina, chimotripsina). - scad mai mult energia de activare a unei reacii comparativ cu catalizatorii obinuii. Exemplu: Descompunerea apei oxigenate: - energia de activare fr catalizator : 18 kcal/mol - energia de activare n prezena platinei coloidale: 11,7 kcal/mol - energia de activare n prezena catalazei (EC 1.11.1.6): 2 kcal/mol O molecul de catalaz descompune 5x106 molecule de ap oxigenat ntr-un minut n condiii optime de temperatur i pH. - sunt de natur proteic i prezint o specificitate foarte mare deoarece situsul catalitic are o geometrie bine determinat care-i permite fixarea unui substrat cu structur complementar; - activitatea lor poate fi reglat i autoreglat; - acioneaz n concentraie foarte mic (~10-6 moli); - timp de reacie foarte scurt (cele mai rapide reacii fiind de ordinul picosecundelor,10-12 s); - randamentul reaciilor catalizate enzimatic este de 100%. Enzimele pot aciona singure sau n prezena unor cofactori, care le determin specificitatea. Enzima care poate cataliza singur o reacie se numete apoenzim, iar cea care formeaz cu cofactorul un complex activ catalitic se numete holoenzim. 4.3.1 Cofactori enzimatici Cofactorii sunt molecule neproteice, relativ mici, cu structur diferit, care se leag covalent sau necovalent de enzime,iar prezena lor condiioneaz activitatea enzimatic. Ionii metalici sunt cei mai simpli cofactori (vezi Tabelul 4.2):

108

Tabelul 4.2: Exemple de enzime care au nevoie de un ion metalic pentru activare Enzima alcooldehidrogenaza catalaza fosfotransferaze piruvatfosfokinaza arginaza anhidraza carbonic Numrul EC 1.1.1.1 1.11.1.6 2.7.2.2.7.1.40 3.5.3.1 4.2.1.1 Ionul metalic Zn Fe2+ sau Fe3+ Mg2+, Mn2+ K+, Mg2+ Mn2+ Zn2+
2+

Unele enzime au nevoie de doi cofactori, un ion metalic i o molecul organic. Ionii metalici au activitate catalitic care poate fi mrit foarte mult de o enzim: Exemplu: ionul de fier catalizeaz descompunerea apei oxigenate, dar catalaza i mrete foarte mult activitatea. Enzimele i cofactorii sunt inactivi catalitic dac nu se afl mpreun. Numai sub form de complex enzim-cofactor ei prezint activitate catalitic. Cei mai importani cofactori sunt coenzimele, molecule organice mici n raport cu enzimele, care rmn ferm legate de protein n cursul purificrii acesteia. Denumirea de coenzime nu este proprie pentru toate cazurile: - o categorie de molecule organice care fac parte din situsul catalitic, asistnd catenele laterale ale proteinei n procesul de cataliz, sunt coenzime propriu-zise: Exemplu: fosfatul de piridoxal, derivat al vitaminei B6 este coenzima transaminazelor: CH=O HO H3C CH2OPO3 N
2_

- a doua categorie de coenzime sunt de fapt cosubstrate:

109

Exemplu: NAD+ i flavinnucleotidele, acceptoare/donoare de hidrogen n reaciile de oxido-reducere: H + N R NAD+ CONH2 + SH2 H CONH2 + + H + S

N R NADH

R H3C H3C N N FAD 4.3.2 Organizarea structural a enzimelor Enzimele fiind proteine pot avea structur diferit: N C O C O NH + 2[H] _ 2[H] H3C H3C

R N N H FADH2

H N C O

C O NH

a) Enzime monomere alctuite dintr-un singur lan polipeptidic n care este inclus situsul catalitic; au mase moleculare mici : 13.000 35.000 daltoni. Exemplu: tripsina - masa molecular = 23.800 daltoni; - ribonucleaza masa molecular = 13.700 daltoni.
-

Enzime oligomere formate din dou sau mai multe lanuri (protomeri) asociate ntr-un ansamblu cu proprieti catalitice; au mase moleculare ntre 35.000 cteva sute de mii de daltoni (vezi Tabelul 4.3). Este de remarcat faptul c majoritatea enzimelor implicate n metabolism sunt oligomere.
b) 110

Tabelul 4.3: Exemple de enzime oligomere Enzima Numrul Masa EC molecular Numrul alcoolhedidrogenaza catalaza aspartiltranscarbamilaz a -amilaza aldolaza 1.1.1.1 1.11.1.6 2.1.3.2 3.2.1.1 4.1.2.13 150.000 232.000 310.000 50.000 80.000 4 4 6 2 2 Subuniti Masa molecular 37.000 57.000 33.000 25.000 40.000

Izoenzime sau izozime - sunt forme moleculare multiple ale unei enzime care catalizeaz aceeai reacie. Se deosebesc ntre ele prin proprieti fizice i prin structura chimic: mobilitate electroforetic, compoziia aminoacizilor componeni, cinetica de reacie, tipul de inhibiie.
c)

Exemplu: lactatdehidrogenaza (LDH), care catalizeaz transformarea lactatului n piruvat, este cunoscut sub forma a cinci izozime, separabile electroforetic (vezi pag. 72): _ _ + + CH3COCOO + NADH, H CH3CHCOO + NAD OH Fiecare izozim este un tetramer, fiind format din patru lanuri polipeptidice. Cele cinci izozime LDH provin de la doi tetrameri de baz denumii: tipul H (se gsete n inim) i tipul M (din muchii scheletici): H4 H3M H2M2 H3M M4

LDH 1 LDH 2 LDH 3 LDH 4 LDH LDH 1 se gsete n inim, creier, rinichi particip la reacii oxidative
111

LDH 4 i LDH 5 se gsesc n muchii scheletici i intervin n glicoliz. d) Sisteme multienzimatice Sunt formate prin asocierea intim, prin interaciuni necovalente, a mai multor enzime care particip la o secven de reacii consecutive, n care produsul primei reacii devine substrat pentru cea de-a doua enzim i aa mai departe pn la obinerea produsului final. Enzimele sunt aezate ntr-un mozaic organizat n cadrul cruia fiecare enzim are un loc unic. In funcie de gradul de complexitate, sistemele enzimatice se clasific astfel: * simple sau disociate: enzimele unei secvene de reacii se afl ca entiti separate n citoplasm, nefiind asociate n orice moment al aciunii lor, iar moleculele substratelor intermediare difuzeaz rapid de la o enzim la alta. * propriu-zise: enzimele sunt asociate, funcioneaz mpreun i formeaz un complex enzimatic stabil, greu disociabil n componente. Disocierea complexului enzimatic determin inactivarea sa. In timpul desfurrii succesiunii de reacii, substratele intermediare nu difuzeaz n afara complexului enzimatic.

Schema 4.1: Reprezentarea unui complex multienzimatic cu 6 enzime * asociate cu structuri supramoleculare: funcioneaz cu mai multe coenzime diferite care mresc activitatea catalitic a enzimelor. Exemplu: n mitocondrii exist un asemenea sistem enzimatic care realizeaz transferul de electroni i de protoni de la substrate la oxigen, formnd o molecul de ap n procesul de respiraie. Aceste enzime sunt ataate intim de membrana intern a mitocondriilor.
112