Espectrometra

La espectroscopia surgi con el estudio de la interaccin entre la radiacin y la materia como funcin de la longitud de onda (). En un principio se refera al uso de la luz visible dispersada segn su longitud de onda, por ejemplo por un prisma. Ms tarde el concepto se ampli enormemente para comprender cualquier medida en funcin de la Dispersin de luz en un prisma triangular longitud de onda o de la frecuencia. Por tanto, la espectroscopia puede referirse a interacciones con partculas de radiacin o a una respuesta a un campo alternante o frecuencia variante (). Una extensin adicional del alcance de la definicin aadi la energa (E) como variable, al establecerse la relacin E=h para los fotones. Un grfico de la respuesta como funcin de la longitud de onda (o ms comnmente la frecuencia) se conoce como espectro. La espectrometra es la tcnica espectroscpica para tasar la concentracin o la cantidad de especies determinadas. En estos casos, el instrumento que realiza tales medidas es un espectrmetro o espectrgrafo. La espectrometra a menudo se usa en fsica y qumica analtica para la identificacin de sustancias mediante el espectro emitido o absorbido por las mismas. La espectrometra tambin se usa mucho en astronoma y deteccin remota. La mayora de los telescopios grandes tienen espectrmetros, que son usados para medir la composicin qumica y propiedades fsicas de los objetos astronmicos, o para medir sus velocidades a partir del efecto Doppler de sus lneas espectrales.

Mtodos espectromtricos
Segn la naturaleza de la excitacin medida
El tipo de espectrometra depende de la cantidad fsica medida. Normalmente, la cantidad que se mide es una intensidad de energa absorbida o producida. Se pueden distinguir estos tipos de espectrometra segn la naturaleza de la excitacin:

* Electromagntica. Interacciones de la materia con radiacin electromagntica como la luz. * De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia Auger implica inducir el efecto Auger con un haz de electrones. En este caso la medida implica la energa cintica del electrn como variable. * De masa. Interaccin de especies cargadas con campos magnticos y/o elctricos, dando lugar a un espectro de masas. El trmino "espectroscopia de masas" est anticuado, ya que la tcnica es principalmente una forma de medida, aunque produzca realmente un espectro para la observacin. Este espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida es esencialmente de la energa cintica de la partcula. * Acstica. Frecuencia de sonido. * Dielctrica. Frecuencia de un campo elctrico externo. * Mecnica. Frecuencia de un estrs mecnico externo, por ejemplo una torsin aplicada a un trozo de material.

Segn el proceso de medida

La mayora de los mtodos espectroscpicos se diferencian en atmicos o moleculares segn si se aplican a tomos o molculas. Junto con esta diferencia, se pueden distinguir los siguientes tipos de espectrometra segn la naturaleza de su interaccin: * De absorcin. Usa el rango de los espectros electromagnticos en los cuales una sustancia absorbe. Incluye la espectrometra de absorcin atmica y varias tcnicas moleculares, como la espectrometra infrarroja y la resonancia magntica nuclear (RMN). * De emisin. Usa el rango de espectros electromagnticos en los cuales una sustancia irradia (emite). La sustancia primero debe absorber la energa. Esta energa puede ser de una variedad de fuentes, que determina el nombre de la emisin subsiguiente, como la luminescencia. Las tcnicas de luminescencia moleculares incluyen la espectrofluorimetra. * De dispersin. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas longitudes de onda, ngulos de incidencia y ngulos de polarizacin. El proceso de

dispersin es mucho ms rpido que el proceso de absorcin/emisin. Una de las aplicaciones ms tiles es la espectroscopia Raman.

Tipos de espectrometra
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN
La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz de luz se mide antes y despus de la interaccin con una muestra. Cuando se realiza con lser de diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de absorcin con lser de diodo ajustable. Tambin se combina a menudo con una tcnica de modulacin, como la espectrometra de modulacin de longitud de onda, y de vez en cuando con la espectrometra de modulacin de frecuencia a fin de reducir el ruido en el sistema.

ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA
La espectrometra de fluorescencia usa fotones de energa ms elevada para excitar una muestra, que emitir entonces fotones de inferior energa. Esta tcnica se ha hecho popular en aplicaciones bioqumicas y mdicas, y puede ser usada con microscopa confocal, transferencia de energa entre partculas fluorescentes, y visualizacin de la vida media de fluorescencia.

ESPECTROMETRA DE RAYOS X
Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una sustancia, los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a orbitales vacos externos, o bien son eliminados completamente, ionizndose el tomo. El "agujero" de la capa interior se llena entonces con electrones de los orbitales externos. La energa disponible en este proceso de excitacin se emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros electrones menos enlazados del tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de emisin (energas) son caractersticas de cada tomo especfico. Adems, para un tomo especfico se producen pequeas variaciones de frecuencia (energa) que son caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden medirse estas frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones Auger. La absorcin de rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en qumica y ciencias de los materiales para determinar la composicin elemental y el enlace qumico. La cristalografa de rayos X es un proceso de dispersin. Los materiales cristalinos dispersan rayos X en ngulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X

incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre planos de tomos dentro del cristal. Las intensidades de los rayos X dispersados dan informacin sobre las posiciones atmicas y permiten calcular la organizacin de los tomos dentro de la estructura cristalina.

ESPECTROMETRA DE LLAMA
Las muestras de solucin lquidas son aspiradas en un quemador o una combinacin de nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrnico de energa ms alta. El uso de una llama durante el anlisis requiere combustible y oxidante, tpicamente en forma de gases. Los gases combustibles comunes que se usan son el acetileno (etino) o el hidrgeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido nitroso. Estos mtodos son a menudo capaces de analizar elementos metlicos en partes por milln, billones, o posiblemente rangos ms bajos de concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con informacin que viene de la llama. * Espectrometra de emisin atmica. Este mtodo usa la excitacin de la llama; los tomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este mtodo suele usar un quemador de consumo total con una salida de incineracin redonda. Se utiliza una llama de temperatura ms alta que la usada en la espectrometra de absorcin atmica para producir la excitacin de tomos de analito. Ya que los tomos de analito estn excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lmpara elemental especial. Puede usarse un policromador de alta resolucin para producir una intensidad de emisin contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de onda que muestran lneas de excitacin de elementos mltiples. O bien puede usarse un monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el anlisis de un solo elemento en una cierta lnea de emisin. La espectrometra de emisin de plasma es una versin ms moderna de este mtodo. * Espectrometra de absorcin atmica (a menudo llamada AA). Este mtodo usa un nebulizador pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una niebla de la muestra, y un quemador en forma de ranura que da una llama de longitud de ruta ms larga. La temperatura de la llama es lo bastante baja como para no excitar los tomos de la muestra de su estado basal. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos de analito se realiza mediante lmparas que brillan a travs de la llama en varias longitudes de onda para cada tipo de analito. En la absorcin atmica, la cantidad de luz absorbida despus de pasar por la llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito para calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor sensibilidad. El mtodo del horno de grafito

tambin puede analizar algn slido o muestras mezcladas. A causa de su buena sensibilidad y selectividad, es un mtodo que todava se usa para el anlisis de ciertos microelementos en muestras acuosas (y otros lquidos). * Espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo usa un quemador con una salida de incineracin redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y una lmpara emite luz a una longitud de onda especfica en la llama para excitar los tomos de analito. Los tomos de ciertos elementos pueden entonces fluorescer, emitiendo luz en diferentes direcciones. La intensidad de esta luz fluorescente sirve para cuantificar la cantidad del elemento analizado en la muestra. Tambin puede usarse un horno de grafito para laespectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo no es tan comn como el de absorcin atmica o el de emisin de plasma.

ESPECTROMETRA DE EMISIN DE PLASMA

Es similar a la emisin atmica por llama, y la ha sustituido en gran parte. * Espectrometra de plasma de corriente contnua (DCP). Un plasma de corriente contnua se crea por una descarga elctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de apoyo al plasma, y el ms comn es el argn. Las muestras pueden ser depositadas en uno de los electrodos. * Espectrometra de emisin ptica por descarga luminiscente (GD-OES)

* Espectrometra de emisin plasma-atmica acoplada inductivamente (ICP-AES) * Espectrometra de ruptura inducida por lser (LIBS), espectrometra de plasma inducida por lser (LABIOS) * Espectrometra de plasma inducida por microondas(MIP) tambin llamada

ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el anlisis de elementos metlicos en muestras slidas. Para materiales no conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los mtodos de espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra slida que es destruida durante el anlisis. Un arco elctrico o chispa se pasan por la muestra, calentndola a alta temperatura para excitar los tomos. Los tomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de onda que pueden ser detectadas mediante mtodos espectroscpicos comunes. Ya que las condiciones que producen la emisin por arco no son controladas cuantitativamente, el anlisis de los elementos es cualitativo. Hoy da, las fuentes de chispa con descargas controladas bajo una atmsfera de argn permiten que este mtodo pueda ser considerado

eminentemente cuantitativo, y su uso est muy extendido en los laboratorios de control de produccin de fundiciones y aceras.

ESPECTROMETRA VISIBLE
Muchos tomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal fino, los tomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El espectro se estudia en absorcin o emisin. La espectroscopia de absorcin visible a menudo se combina con la de absorcin ultravioleta (espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco comn al ser el ojo humano un indicador similar, todava se muestra til para distinguir colores.

ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA
Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones son bastante energticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce la fotoionizacin. La espectrometra UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y concentracin de ADN, as como para la proporcin de protenas y ADN en una solucin. En las protenas se encuentran generalmente varios aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razn, la proporcin de absorbancia 260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una solucin en trminos de estas dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de la concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.

ESPECTROMETRA INFRARROJA
La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de vibraciones en los enlaces atmicos a frecuencias diferentes. En qumica orgnica, el anlisis de los espectros de absorcin infrarroja indica qu tipo de enlaces estn presentes en la muestra.

ESPECTROMETRA RAMAN
La espectrometra Raman usa la dispersin inelstica de la luz para analizar modos vibracionales y rotatorios de las molculas. Las "huellas digitales" que resultan son una ayuda para el anlisis.

ESPECTROMETRA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometra de resonancia magntica nuclear analiza las propiedades

magnticas de ciertos ncleos atmicos para determinar diferentes ambientes locales electrnicos del hidrgeno, carbono, u otros tomos en un compuesto orgnico u otro compuesto. Se usa para determinar la estructura del compuesto.

ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN
La fotoemisin puede referirse a: * Emisin de electrones a partir de la materia despus de la absorcin de fotones energticos (efecto fotoelctrico). * Emisin de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones que fluyen en el material pierden energa mediante deceleracin o recombinacin.

ESPECTROMETRA MSSBAUER
La espectrometra de transmisin o conversin electrnica (CEMS) de Mssbauer prueba las propiedades de los ncleos de istopos especficos en ambientes atmicos diferentes, analizando la absorcin resonante de rayos gamma de energa caracterstica, lo que se conoce como efecto de Mssbauer.

OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRA

* Fotoacstica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorcin de radiacin. * Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorcin de radiacin. * De dicroismo circular. * De actividad ptica Raman. Usa los efectos de la actividad ptica y la dispersin para revelar informacin detallada sobre los centros quirales de las molculas. * De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometra infrarroja y por debajo de las microondas o medidas de onda milimtricas. * De dispersin inelstica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con neutrones en vez de fotones. * De tnel de electrones inelsticos. Usa los cambios de corriente debidos a la interaccin de vibraciones electrnicas inelsticas a energas especficas que tambin pueden medir transiciones pticamente prohibidas. * Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa en relacin con la microscopa de electrones.

* De cavidad en anillo. * De transformacin de Fourier. La transformacin Fourier es un mtodo eficiente para tratar datos de espectros obtenidos usando interfermetros. Casi toda la espectrometra infrarroja (FTIR) y la resonancia magntica nuclear (RMN) se realizan con la transformacin de Fourier. * De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el tiempo. * Mecnica. Implica interacciones con vibraciones macroscpicas, como los fotones. Un ejemplo es la espectrometra acstica, que implica ondas sonoras. * De fuerza. Usa una tcnica analtica basada en AFM. * Dielctrica. * Infrarroja termal. Mide la radiacin termal emitida por materiales y superficies, y se usa para determinar el tipo de enlaces presentes en una muestra, as como su ambiente reticular. Estas tcnicas son muy usadas por los qumicos orgnicos, mineralogistas y gelogos.

Espectrmetros
Un espectrmetro (tambin llamado espectroscopio o espectrgrafo) es un instrumento ptico que se usa para medir las propiedades de la luz sobre una porcin especfica del espectro electromagntico. Su utilidad es realizar anlisis espectroscpicos para identificar materiales. La variable medida es generalmente la intensidad de la luz, pero tambin podra ser, por ejemplo, el estado de polarizacin. La variable independiente es, por lo general, la Espectrmetro longitud de onda de la luz, que suele expresarse como una fraccin de metro, aunque a veces se expresa como una unidad directamente proporcional a la energa del fotn, tales como el nmero de onda o los voltios de los electrones (que tiene una relacin recproca a la longitud de onda). Un espectrmetro se usa en espectroscopia para producir lneas espectrales y medir sus longitudes de onda e intensidades. Son instrumentos que funcionan en una amplia variedad de longitudes de onda, desde rayos gamma y rayos X hasta el

infrarrojo lejano. Si la regin de inters est restringida a un rango cercano al espectro visible, el estudio se llama espectrofotometra. En general, cada espectrmetro funcionar sobre una pequea porcin de este rango total debido a las diferentes tcnicas usadas para medir las distintas porciones del espectro. Por debajo de las frecuencias pticas (es decir, en el rango de las microondas y radiofrecuencias), el analizador de espectro es un dispositivo electrnico estrechamente relacionado.

Espectroscopios
Los espectroscopios se usan a menudo en astronoma y en algunas ramas de la qumica. Los primeros aparatos de este tipo eran simplemente un prisma con graduaciones que marcaban las longitudes de onda de la luz. Los espectroscopios modernos, como los monocromadores, generalmente usan una rejilla de difraccin, una hendidura mvil y una especie de fotodetector, adems de estar automatizados y controlados por un ordenador. El espectroscopio fue inventado por Gustav Robert Georg Kirchhoff y por Robert Wilhelm Bunsen.

Comparacin de diferentes espectrmetros basados en la difraccin: reflexin ptica, refraccin ptica y fibra ptica.

Cuando un material se calienta hasta la incandescencia emite una luz que es caracterstica de la composicin atmica del material. Las frecuencias de luz particulares dan lugar a bandas bruscamente definidas en la escala, que son similares a huellas digitales. Por ejemplo, el elemento sodio tiene una doble banda amarilla muy caracterstica, conocida como lneas D del sodio a 588.9950 y 589.5924 nanmetros, cuyo color ser familiar a quien haya visto una lmpara de vapor de sodio de baja presin. En el diseo del espectroscopio original, a principios del siglo XIX, la luz entraba en una hendidura y una lente colimadora transformaba la luz en un haz delgado de rayos paralelos. La luz pasaba entonces por un prisma (en espectroscopios porttiles, por lo general un prisma Amici) que refractaba el haz de luz en un espectro, debido a que las diferentes longitudes de onda eran refractadas en cantidades diferentes por la dispersin. Esta imagen se vea entonces a travs de un tubo con una escala que se transpona sobre la imagen espectral, permitiendo su medida directa. Con el desarrollo de la pelcula fotogrfica, se cre el espectrgrafo, que era ms exacto. Estaba basado en el mismo principio que el espectroscopio, pero tena una

cmara en lugar del tubo de inspeccin. En aos recientes, la cmara ha sido sustituida por circuitos electrnicos construidos alrededor del tubo fotomultiplicador, permitiendo el anlisis espectrogrfico en tiempo real con mucha ms exactitud. En los sistemas espectrogrficos tambin se usan series de fotosensores en lugar de la pelcula. Tal anlisis espectral, o espectroscopia, se ha convertido en un importante instrumento cientfico para analizar la composicin de material desconocido, y para estudiar fenmenos y teoras astronmicas. El espectrmetro mide longitudes de onda.

Espectrgrafos
Un espectrgrafo es un instrumento que transforma una forma de onda de dominio temporal entrante en un espectro de frecuencia, o generalmente en una secuencia de tales espectros. Hay varias clases de mquinas a las que se llama espectrgrafos, segn la naturaleza precisa de las ondas. Los primeros espectrgrafos usaban papel fotogrfico como detector. La clasificacin espectral de estrellas y Esquema de un espectrmetro de rejilla el descubrimiento de la secuencia principal, la ley de Hubble y la secuencia de Hubble, se hicieron con espectrgrafos que usaban papel fotogrfico. El pigmento vegetal fitocromo fue descubierto con un espectrgrafo que usaba plantas vivas como detectores. Los espectrgrafos ms recientes usan detectores electrnicos, como cmaras CCDs que pueden usarse tanto para luz visible como para luz ultravioleta. La eleccin exacta del detector depende de las longitudes de onda de la luz que va a ser registrada. El prximo Telescopio Espacial de James Webb contendr un espectrgrafo cercano al infrarrojo (NIRSpec) y un espectrmetro en mitad del infrarrojo (MIRI). Un espectrgrafo de escala usa dos rejillas de difraccin, giradas 90 grados una respecto a la otra y colocadas cerca. Por lo tanto, se usa un punto de entrada y no una hendidura, mientras que un segundo chip CCD registra el espectro. Con este pequeo chip se consigue un espectro muy fino, y tiene como ventaja que la ptica colimadora no tiene que ser optimizada para coma o astigmatismo, ya que la aberracin esfrica puede ser establecida a cero. A veces al espectrgrafo se le llama policromador, como analoga de monocromador.

Espectro electromagntico
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el rango de todas las radiaciones electromagnticas posibles. El espectro de un objeto es la distribucin caracterstica de la radiacin electromagntica de ese objeto. El espectro electromagntico se extiende desde las bajas frecuencias usadas para la Diagrama del espectro electromagntico (ampliar) radio moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma (extremo de la onda corta), que cubren longitudes de onda de entre miles de kilmetros y la fraccin del tamao de un tomo. Se piensa que el lmite de la longitud de onda corta est en las cercanas de la longitud Planck, mientras que el lmite de la longitud de onda larga es el tamao del universo mismo, aunque en principio el espectro sea infinito y continuo.

Rango del espectro

El espectro cubre la energa de ondas electromagnticas que tienen longitudes de onda diferentes. Las frecuencias de 30 Hz y ms bajas pueden ser producidas por ciertas nebulosas estelares y son importantes para su estudio. Se han descubierto frecuencias tan altas como 2.9 * 1027 Hz a partir de fuentes astrofsicas. La energa electromagntica en una longitud de onda particular (en el vaco) tiene una frecuencia asociada f y una energa fotnica E. As, el espectro electromagntico puede expresarse en trminos de cualquiera de estas tres variables, que estn relacionadas mediante ecuaciones. De este modo, las ondas electromagnticas de alta frecuencia tienen una longitud de onda corta y energa alta; las ondas de frecuencia baja tienen una longitud de onda larga y energa baja. Siempre que las ondas de luz (y otras ondas electromagnticas) se encuentran en un medio (materia), su longitud de onda se reduce. Las longitudes de onda de la radiacin electromagntica, sin importar el medio por el que viajen, son, por lo general, citadas en trminos de longitud de onda en el vaco, aunque no siempre se declara explcitamente.

Generalmente, la radiacin electromagntica se clasifica por la longitud de onda: ondas de radio, microondas, infrarroja y regin visible, que percibimos como luz, rayos ultravioleta, rayos X y rayos gamma. El comportamiento de la radiacin electromagntica depende de su longitud de onda. Las frecuencias ms altas tienen longitudes de onda ms cortas, y las frecuencias inferiores tienen longitudes de onda ms largas. Cuando la radiacin electromagntica interacciona con tomos y molculas, su comportamiento tambin depende de la cantidad de energa por cuanto que transporta. La radiacin electromagntica puede dividirse en octavas (como las ondas sonoras). La espectroscopia puede descubrir una regin mucho ms amplia del espectro que el rango visible de 400 nm a 700 nm. Un espectroscopio de laboratorio comn puede descubrir longitudes de onda desde 2 nm a 2500 nm. Con este tipo de aparatos puede obtenerse informacin detallada sobre las propiedades fsicas de objetos, gases o incluso estrellas. La espectrometra se usa sobre todo en astrofsica. Por ejemplo, muchos tomos de hidrgeno emiten ondas de radio que tienen una longitud de onda de 21.12 cm.

Tipos de radiacin
Aunque el esquema de clasificacin suele ser preciso, en realidad existe algo de trasposicin entre tipos vecinos de energa electromagntica. Por ejemplo, las ondas de radio a 60 Hz pueden ser recibidas y estudiadas por astrnomos, o pueden ser conducidas a lo largo de cables como energa elctrica. Tambin, algunos rayos gamma de baja energa realmente tienen una longitud de onda ms larga que algunos rayos X de gran energa. Esto es posible porque "rayo gamma" es el nombre que se le da a los fotones generados en la descomposicin nuclear u otros procesos nucleares y subnucleares, mientras que los rayos X son generados por transiciones electrnicas que implican electrones interiores muy energticos. Por lo tanto, la diferencia entre rayo gamma y rayo X est relacionada con la fuente de radiacin ms que con la longitud de onda de la radiacin. Generalmente, las transiciones nucleares son mucho ms energticas que las transiciones electrnicas, as que los rayos gamma suelen ser ms energticos que los rayos X. Sin embargo, hay transiciones nucleares de baja energa (p.ej. la transicin nuclear de 14.4 keV del Fe-57) que producen rayos gamma que son menos energticos que algunos de los rayos X de mayor energa.

Radiofrecuencia Las ondas de radio suelen ser utilizadas mediante antenas del tamao apropiado

(segn el principio de resonancia), con longitudes de onda en los lmites de cientos de metros a aproximadamente un milmetro. Se usan para la transmisin de datos, a travs de la modulacin. La televisin, los telfonos mviles, las resonancias magnticas, o las redes inalmbricas y de radio-aficionados, son algunos usos populares de las ondas de radio. Las ondas de radio pueden transportar informacin variando la combinacin de amplitud, frecuencia y fase de la onda dentro de una banda de frecuencia. El uso del espectro de radio est regulado por muchos gobiernos mediante la asignacin de frecuencias. Cuando la radiacin electromagntica impacta sobre un conductor, se empareja con l y viaja a lo largo del mismo, induciendo una corriente elctrica en la superficie de ese conductor mediante la excitacin de los electrones del material de conduccin. Este efecto (el efecto piel) se usado en las antenas. La radiacin electromagntica tambin puede hacer que ciertas molculas absorban energa y se calienten, una caracterstica que se utiliza en en los microondas. Microondas La frecuencia super alta (SHF) y la frecuencia extremadamente alta (EHF) de las microondas son las siguientes en la escala de frecuencia. Las microondas son ondas los suficientemente cortas como para emplear guas de ondas metlicas tubulares de dimetro razonable. La energa de microondas se produce con tubos klistrn y tubos magnetrn, y con diodos de estado slido como los dispositivos Gunn e IMPATT. Las microondas son absorbidas por la molculas que tienen un momento dipolar en lquidos. En un horno microondas, este efecto se usa para calentar la comida. La radiacin de microondas de baja intensidad se utiliza en Wi-Fi. El horno microondas promedio, cuando est activo, est en un rango cercano y bastante poderoso como para causar interferencia con campos electromagnticos mal protegidos, como los que se encuentran en dispositivos mdicos mviles y aparatos electrnicos baratos. Rayos T La radiacin de terahertzios (o Rayos T) es una regin del espectro situada entre el infrarrojo lejano y las microondas. Hasta hace poco, este rango estaba muy poco estudiado, ya que apenas haba fuentes para la energa microondas en el extremo alto de la banda (ondas submilimtrica o tambin llamadas ondas terahertzios). Sin embargo, estn apareciendo aplicaciones para mostrar imgenes y comunicaciones. Los cientficos tambin buscan aplicar la tecnologa de rayos T en las fuerzas armadas, donde podran usarse para dirigirlas a las tropas enemigas, ya que las ondas de alta frecuencia incapacitan los equipos electrnicos. Radiacin infrarroja

La parte infrarroja del espectro electromagntico cubre el rango desde aproximadamente los 300 GHz (1 mm) hasta los 400 THz (750 nm). Puede ser dividida en tres partes: * Infrarrojo lejano, desde 300 GHz (1 mm) hasta 30 THz (10 m). La parte inferior de este rango tambin puede llamarse microondas. Esta radiacin es absorbida por los llamados modos rotatorios en las molculas en fase gaseosa, mediante movimientos moleculares en los lquidos, y mediante fotones en los slidos. El agua en la atmsfera de la Tierra absorbe tan fuertemente esta radiacin que confiere a la atmsfera efectividad opaca. Sin embargo, hay ciertos rangos de longitudes de onda ("ventanas") dentro del rango opacao que permiten la transmisin parcial, y pueden ser usados en astronoma. El rango de longitud de onda de aproximadamente 200 m hasta unos pocos mm suele llamarse "radiacin submilimtrica" en astronoma, reservando el infrarrojo lejano para longitudes de onda por debajo de los 200 m. * Infrarrojo medio, desde 30 a 120 THz (10 a 2.5 m). Los objetos calientes (radiadores de cuerpo negro) pueden irradiar fuertemente en este rango. Se absorbe por vibraciones moleculares, es decir, cuando los diferentes tomos en una molcula vibran alrededor de sus posiciones de equilibrio. Este rango es llamado, a veces, regin de huella digital, ya que el espectro de absorcin del infrarrojo medio de cada compuesto es muy especfico. * Infrarrojo cercano, desde 120 a 400 THz (2500 a 750 nm). Los procesos fsicos que son relevantes para este rango son similares a los de la luz visible. Radiacin visible (luz) La frecuencia por encima del infrarrojo es la de la luz visible. Este es el rango en el que el Sol y las estrellas similares a l emiten la mayor parte de su radiacin. No es probablemente una coincidencia que el ojo humano sea sensible a las longitudes de onda que el sol emite con ms fuerza. La luz visible (y la luz cercana al infrarrojo) son absorbidas y emitidas por electrones en las molculas y tomos que se mueven desde un nivel de energa a otro. La luz que vemos con nuestros ojos es realmente una parte muy pequea del espectro electromagntico. Un arco iris muestra la parte ptica (visible) del espectro electromagntico; el infrarrojo (si pudiera verse) estara localizado justo a continuacin del lado rojo del arco iris, mientras que el ultravioleta estara tras el violeta. La radiacin electromagntica con una longitud de onda entre aproximadamente 400 nm y 700 nm es detectado por el ojo humano y percibida como luz visible. A otras longitudes de onda, sobre todo al infrarrojo cercano (ms largo de 700 nm) y al ultravioleta (ms corto que 400 nm) tambin se les llama luz a veces, sobre todo cuando la visibilidad para los humanos no es relevante.

Si la radiacin que tiene una frecuencia en la regin visible del espectro electromagntico se refleja en un objeto, como por ejemplo un plato hondo de fruta, y luego impacta en nuestros ojos, obtenemos una percepcin visual de la escena. El sistema visual de nuestro cerebro procesa la multitud de frecuencias reflejadas en diferentes sombras y matices, y a travs de este fenomeno psicofsico que todava no se entiende completamente, es como percibiramos los objetos. En la mayor parte de las longitudes de onda, sin embargo, la informacin transportada por la radiacin electromagntica no es directamente descubierta por los sentidos humanos. Las fuentes naturales producen radiacin electromagntica a travs del espectro, y nuestra tecnologa tambin puede manipular un amplio rango de longitudes de onda. La fibra ptica transmite luz que, aunque no es adecuada para la visin directa, puede transportar datos que luego son traducidos en sonido o imagen. La codificacin usada en tales datos es similar a lo que se usa con las ondas de radio. Luz ultravioleta La siguiente frecuencia en el espectro es el ultravioleta (o rayos UV), que es la radiacin cuya longitud de onda es ms corta que el extremo violeta del espectro visible. Al ser muy energtica, la radiacin ultravioleta puede romper enlaces qumicos, haciendo a las molculas excepcionalmente reactivas o ionizndolas, lo que cambia su comportamiento. Las quemaduras solares, por ejemplo, estn causadas por los efectos perjudiciales de la radiacin UV en las clulas de la piel, y pueden causar incluso cncer de piel si la radiacin daa las molculas de ADN complejas en las clulas (la radiacin UV es un mutgeno). El Sol emite una gran cantidad de radiacin UV, lo que podra convertir rpidamente la Tierra en un desierto estril si no fuera porque, en su mayor parte, es absorbida por la capa de ozono de la atmsfera antes de alcanzar la superficie. Rayos X Despus del ultravioleta vienen los rayos X. Los rayos X duros tienen longitudes de onda ms cortas que los rayos X suaves. Se usan generalmente para ver a travs de algunos objetos, as como para la fsica de alta energa y la astronoma. Las estrellas de neutrones y los discos de acrecin alrededor de los agujeros negros emiten rayos X, lo que nos permite estudiarlos. Los rayos X pasan por la mayor parte de sustancias, y esto los hace tiles en medicina e industria. Tambin son emitidos por las estrellas, y especialmente por algunos tipos de nebulosas. Un aparato de radiografa funciona disparando un haz de

electrones sobre un "objetivo". Si los electrones se disparan con suficiente energa, se producen rayos X. Rayos gamma Despus de los rayos X duros vienen los rayos gamma. Son los fotones ms energticos, y no se conoce el lmite ms bajo de su longitud de onda. Son tiles a los astrnomos en el estudio de objetos o regiones de alta energa, y son tiles para los fsicos gracias a su capacidad penetrante y su produccin de radioistopos. La longitud de onda de los rayos gamma puede medirse con gran exactitud por medio de dispersin Compton. No hay ningn lmite exactamente definido entre las bandas del espectro electromagntico. Algunos tipos de radiacin tienen una mezcla de las propiedades de radiaciones que se encuentran en las dos regiones del espectro. Por ejemplo, la luz roja se parece a la radiacin infrarroja en que puede resonar algunos enlaces qumicos.

Espectrometra de absorcin
La espectrometra de absorcin se refiere a una variedad de tcnicas que emplean la interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. En la espectrometra de absorcin, se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y despus de la interaccin con una muestra. Las palabras transmisin y remisin se refieren a la direccin de viaje de los haces de luz medidos antes y despus de la absorcin. Las descripciones experimentales por lo general asumen que hay una nica direccin de incidencia de la luz sobre la muestra, y que un plano perpendicular a esta direccin pasa por la muestra. En la transmisin, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector en el lado opuesto de la muestra. En la remisin, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector en el mismo lado de la muestra. La radiacin remitida puede estar formada por dos clases de radiacin: reflexin especular (cuando el ngulo de reflexin es igual al ngulo del frecuencia) y reflexin difusa (en todos los dems ngulos). Otro descriptor asociado con la espectrometra de absorcin es la variedad de longitudes de onda de radiacin que se usa en el haz de luz incidente. Por ejemplo, se habla deespectrometra infrarroja o de microondas, que son a su vez ejemplos de espectrometra de absorcin. Por otra parte, tambin se encuentran referencias a otros rangos de longitud de onda, como la espectrometra de rayos X, que por lo general denotan una espectrometra de emisin. Este artculo trata principalmente de la espectrometra ultravioleta-visible.

La espectrometra UV-visible se refiere a tcnicas donde se mide cunta luz de una longitud de onda particular (color) es absorbida por una muestra. Ya que el color a menudo puede correlacionarse con la presencia y/o la estructura de una sustancia qumica particular, y ya que la absorbancia es una medida fcil y barata de hacer, la espectrometra de absorbancia se usa ampliamente en clculos cualitativos, cuantitativos y estructurales. Por ejemplo, el ADN absorbe luz en el rango ultravioleta (por eso la luz del sol es peligrosa), y por tanto la cantidad de ADN en una muestra puede ser determinarse midiendo la absorbancia de la luz ultravioleta. La relacin entre el color visible y el color de absorbancia es complicada; una muestra que parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe en otras longitudes de onda (colores) de modo que la luz que pasa por la muestra se enriquece en rojo. La palabra "color" se usa para indicar que la espectrometra de absorbancia no slo trata con la luz en rango visible (fotones con una longitud de onda de aproximadamente 400 a 700 nanmetros), sino tambin con longitudes de onda que estn fuera del rango de la visin humana (infrarrojo, ultravioleta, rayos X). Sin embargo, los principios son bastante similares tanto para la luz visible como para la no visible. Tcnicamente, la espectrometra de absorcin se basa en la absorcin de fotones por una o ms sustancias presentes en una muestra (que puede ser un slido, lquido, o gas), y la promocin subsiguiente del electrn (o electrones) desde un nivel de energa a otro en esa sustancia. La muestra puede ser una sustancia pura, homognea o una mezcla compleja. La longitud de onda en la cual el fotn incidente se absorbe es determinada por la diferencia en los niveles de energa disponibles de las diferentes sustancias presentes en la muestra. Esta es la selectividad de la espectrometra de absorbancia, la capacidad de generar fuentes de fotones (luz) que son absorbidas slo por algunos componentes en una muestra. Tpicamente, los rayos X se usan para revelar la composicin qumica, mientras que las longitudes de onda cercanas al ultravioleta y el infrarrojo se usa para distinguir las configuraciones de diversos ismeros detalladamente. En la espectroscopia de absorcin, los fotones absorbidos no son emitidos de nuevo (como en la fluorescencia) sino que la energa que se transfiere al compuesto qumico en la absorbancia de un fotn se pierde por medios no radiantes, como la transferencia de energa por calor a otras molculas. Aunque la intensidad relativa de las lneas de absorcin no vara con la concentracin, a cualquier longitud de onda dada la absorbancia medida ( log (I / I0)) es proporcional a la concentracin molar de las especies que absorben y el grosor de la muestra por la que la luz pasa. Esto se conoce como ley de BeerLambert. El grfico de la cantidad de radiacin absorbida respecto a la longitud de onda para un compuesto particular se conoce como espectro de absorcin. El

espectro de absorcin normalizado es caracterstico para cada compuesto particular, no cambia con la concentracin y es como la "huella digital" qumica del compuesto. En las longitudes de onda correspondientes a los niveles de energa resonantes de la muestra, se absorben algunos de los fotones incidentes, lo que provoca una cada en la intensidad de transmisin medida y una pendiente en el espectro. El espectro de absorcin puede medirse usando un espectrmetro. Conociendo la forma del espectro, la longitud de ruta ptica y la cantidad de radiacin absorbida, se puede determinar la estructura y la concentracin del compuesto. Los espectros de absorcin de luz visible pueden tomarse en cualquier material que sea visiblemente claro. El poliestireno, el cuarzo, y las clulas de borosilicato (Pyrex), son los materiales ms usados. La luz ultravioleta es absorbida por la mayor parte de cristales y plsticos, por lo que se usan clulas de cuarzo. El Si-O presente en el cristal y el cuarzo, y el C-C en el plstico absorben la luz infrarroja. Los espectros de absorcin infrarrojos se realizan generalmente con una delgada pelcula de la muestra sostenida entre platos de cloruro de sodio. Otros mtodos implican suspender el compuesto en una sustancia que no absorba en la regin de estudio. Las emulsiones de aceite mineral (Nujol) y los cristales de bromuro de potasio suelen ser los ms comunes. El NaCl y KBr, al ser inicos, no absorben el infrarrojo de forma significativa, y el Nujol tiene un espectro infrarrojo relativamente sencillo.

Espectrometra como instrumento analtico

A menudo es de inters conocer no slo la composicin qumica de una muestra dada, sino tambin las concentraciones relativas de varios compuestos de una mezcla. Para hacer esto debe construirse una escala, o curva de calibracin, usando varias concentraciones conocidas para cada compuesto de inters. El grfico que resulta de la concentracin respecto a la absorbancia se hace a mano o usando un software de ajuste de curvas apropiado, que usa una frmula matemtica para determinar la concentracin en la muestra. La repeticin de este proceso para cada compuesto en una muestra da un modelo de varios espectros de absorcin que en conjunto reproducen la absorcin observada. De esta manera es posible, por ejemplo, medir la composicin qumica de los cometas sin tener muestras de ellos en la Tierra. Un ejemplo simple: un cianuro estndar a 200 partes por milln da una absorbancia con un valor arbitrario de 1540. Una muestra desconocida da un valor de 834. Ya que esta es una relacin lineal y pasa por el origen, el valor desconocido se calcula fcilmente como 108 partes por milln. Con este mtodo de proporcin no es necesario conocer los valores de los coeficientes gobernantes, o cromforos, o la longitud de clula experimental.

En la prctica, el uso de una curva de calibracin, ms que un solo punto de comparacin, reduce la incertidumbre en la medida final por exclusin de la interferencia aleatoria (ruido) en la preparacin de los estndares.

Espectrometra de fluorescencia
La espectrometra de fluorescencia (tambin llamada fluorometra o espectrofluorimetra) es un tipo de espectroscopia electromagntica que analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las molculas de ciertos compuestos y provoca que emitan luz de una menor energa, generalmente luz visible (aunque no necesariamente). Una tcnica complementaria es laespectrometra de absorcin. Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o fluormetros.

TEORA DE LA FLUORESCENCIA
Las molculas tienen diferentes estados llamados niveles de energa. La espectrometra de fluorescencia se refiere principalmente a estados vibracionales y electrnicos. En general, las especies objeto de examen tendrn un estado electrnico basal (un estado de baja energa) de inters, y un estado electrnico excitado de mayor energa. Dentro de cada uno de estos estados electrnicos hay diferentes estados vibracionales. En la espectroscopia de fluorescencia, primero se excita la muestra mediante la absorcin de un fotn de luz, desde su estado electrnico basal a uno de los distintos estados vibracionales del estado electrnico excitado. Las colisiones con otras molculas causan que la molcula excitada pierda energa vibracional hasta que alcanza el estado vibracional ms bajo del estado electrnico excitado. La molcula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibracin del estado electrnico basal, emitiendo un fotn en el proceso. Como las molculas pueden caer a cualquiera de los diferentes niveles de vibracin en el estado basal, los fotones emitidos tendrn diferentes energas y, por lo tanto, frecuencias. As pues, mediante el anlisis de las diferentes frecuencias de luz emitida por espectrometra de fluorescencia, junto con sus intensidades relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de vibracin. En un experimento tpico, se miden las diferentes frecuencias de luz fluorescente emitida por una muestra, manteniendo la luz de excitacin a una longitud de onda constante. A esto se le llama espectro de emisin. Un espectro de excitacin se mide mediante el registro de una serie de espectros de emisin utilizando luz de diferentes longitudes de onda.

INSTRUMENTOS
En la espectrometra de fluorescencia se utilizan dos tipos generales de instrumentos: * Fluormetros de filtro. Utilizan filtros para aislar la luz incidente y la luz fluorescente. * Espectrofluormetros. Usan monocromadores de retculo de difraccin para aislar la luz incidente y la luz fluorescente. Ambos tipos de instrumentos utilizan el siguiente esquema. La luz de una fuente de excitacin pasa a travs de un filtro o monocromador, e incide sobre la muestra. Una parte de la luz incidente es absorbida por la muestra, y algunas de las molculas de la muestra producen una fluorescencia. La luz fluorescente es emitida en todas las direcciones. Parte de esta luz fluorescente pasa a travs de un segundo filtro o monocromador y llega a un detector, el cual muy a menudo se encuentra a 90 con respecto al haz de luz incidente para minimizar el riesgo de que la luz incidente reflejada o transmitida llegue al detector. Diversas fuentes de luz pueden ser utilizadas como fuentes de excitacin, incluyendo el lser, fotodiodos y lmparas; arcos de xenn y lmparas de vapor de mercurio. Un lser slo emite luz de alta irradiancia en un intervalo muy estrecho de longitudes de onda, por lo general a 0,01 nm, lo que hace innecesario el monocromador de excitacin o el filtro. La desventaja de este mtodo es que la longitud de onda de un lser no se puede cambiar mucho. Una lmpara de vapor de mercurio es una lmpara lineal, lo que significa que emite luz cerca del pico de longitudes de onda. Por el contrario, un arco de xenn tiene un espectro de emisin continuo con intensidad casi constante en el rango de 300-800 nm, y una irradiancia suficiente para las mediciones hasta justo por encima de 200 nm. En los fluormetros pueden usarse filtros y/o monocromadores. Un monocromador transmite luz de una longitud de onda y tolerancia ajustables. El tipo ms comn de monocromador utiliza un retculo de difraccin; es decir, la luz colimada entra en una rejilla y sale con un ngulo diferente dependiendo de la longitud de onda. El monocromador puede entonces seleccionar qu longitudes de onda transmite. Para permitir mediciones de anisotropa se aaden dos filtros de polarizacin: uno despus del monocromador de excitacin o filtro, y otro antes del monocromador de emisin o filtro. Como se mencion antes, la fluorescencia se mide ms a menudo en un ngulo de 90 en relacin a la luz de excitacin. Esta geometra se utiliza en lugar de colocar el sensor en la lnea de la luz de excitacin en un ngulo de 180 a fin de evitar la interferencia de la luz de excitacin transmitida. El monocromador no es perfecto y

transmitir la luz con otras longitudes de onda diferentes a las establecidas. Un monocromador ideal slo transmite luz en el rango especificado y tiene una transmisin independiente de la longitud de onda. Al medir en un ngulo de 90, slo la luz dispersa por la muestra provoca luz. Esto se traduce en una mejor relacin seal-ruido, y reduce el lmite de deteccin a un factor de aproximadamente 10000, si se compara con la geometra de 180. Por otra parte, la fluorescencia tambin puede ser medida desde la parte delantera, procedimiento que se utiliza a menudo para las muestras turbias. El detector puede ser de un solo canal o de mltiples canales. El detector de un nico canal slo puede detectar la intensidad de una longitud de onda en cada momento, mientras que el de mltiples canales detecta la intensidad en todas las longitudes de onda simultneamente, con lo que el monocromador de emisin o filtro es innecesario. Los diferentes tipos de detectores tienen sus ventajas y desventajas. El fluormetro ms verstil, con monocromadores dobles y una fuente de luz de excitacin continua, puede registrar tanto un espectro de excitacin como un espectro de fluorescencia. Al medir los espectros de fluorescencia, la longitud de onda de la luz de excitacin se mantiene constante, de preferencia en una longitud de onda de alta absorcin, y el monocromador de emisin escanea el espectro. Para medir los espectros de excitacin, la longitud de onda que pasa a travs del filtro o monocromador de emisin se mantiene constante y el monocromador de excitacin va escaneando. El espectro de excitacin generalmente es idntico al espectro de absorcin, ya que la intensidad de la fluorescencia es proporcional a la absorcin.

ANLISIS DE LOS DATOS

A bajas concentraciones, la intensidad de fluorescencia es, por lo general, proporcional a la concentracin del fluorforo. A diferencia de la espectrometra visible o ultravioleta 'estndar', los espectros independientes del dispositivo no son fciles de alcanzar. Son varios los factores que influyen y distorsionan los espectros, y son necesarias correcciones para lograr el espectro 'verdadero', es decir, independiente de la mquina. Los distintos tipos de distorsiones se pueden clasificar en relacin al instrumento o a la muestra. En primer lugar, veamos las distorsiones derivadas del instrumento. Como punto de partida, la intensidad de las fuentes de luz y las caractersticas de la longitud de onda varan con el tiempo durante cada experimento. Por otra parte, ninguna lmpara tiene una intensidad constante en todas las frecuencias. Para corregir esto, se puede aplicar un haz separador despus del filtro o monocromador de excitacin, para dirigir una porcin de luz a un detector de referencia.

Adems, debe tenerse en cuenta el rendimiento de transmisin de los monocromadores y los filtros, ya que tambin puede cambiar con el tiempo. La eficacia de la transmisin del monocromador vara dependiendo de la longitud de onda. Esta es la razn por la que debe colocarse un detector de referencia despus del filtro o monocromador de excitacin. El porcentaje de fluorescencia recogido por el detector tambin depende del sistema. Por otra parte, la eficiencia cuntica del detector, es decir, el porcentaje de fotones detectados, vara entre los diferentes detectores, segn la longitud de onda y el tiempo. La correccin de todos estos factores instrumentales para conseguir un "estndar" del espectro es un proceso tedioso, que slo se aplica en la prctica cuando es estrictamente necesario. Es el caso de las mediciones de rendimiento cuntico o cuando se encuentra la longitud de onda con la mayor intensidad de emisin, por ejemplo. Como se mencion anteriormente, tambin surgen distorsiones de la muestra. Por lo tanto, algunos aspectos de la muestra deben tenerse en cuenta tambin. En primer lugar, la fotodescomposicin puede disminuir la intensidad de fluorescencia con el tiempo. La dispersin de la luz tambin debe tenerse en cuenta. Los tipos ms importantes de dispersin en este contexto son la dispersin de Rayleigh y la de Raman. La luz dispersa por dispersin de Rayleigh tiene la misma longitud de onda que la luz incidente, mientras que en la dispersin Raman la luz cambia a longitudes de onda ms largas. La dispersin de Raman es el resultado de un estado electrnico virtual inducido por la luz de excitacin. A partir de este estado virtual, las molculas pueden volver a un nivel vibracional distinto del estado basal. En los espectros de fluorescencia siempre se observa una diferencia de nmero de onda constante en relacin con la excitacin; por ejemplo, en el agua el pico aparece a un nmero de onda 3600 cm-1 inferior a la luz de excitacin. Otros aspectos a considerar son los efectos del filtro interior. Estos incluyen la reabsorcin, que ocurre porque otra molcula o parte de una macromolcula absorbe las longitudes de onda en la que el fluorforo emite radiacin. Si este es el caso, una parte o la totalidad de los fotones emitidos por el fluorforo pueden ser absorbidos de nuevo. Otro efecto del filtro interno se produce a causa de las altas concentraciones de absorcin de las molculas, incluyendo el fluorforo. El resultado es que la intensidad de excitacin de la luz no es constante a lo largo de la solucin. Como resultado, slo un pequeo porcentaje de la luz de excitacin llega a los fluorforos que son visibles para el sistema de deteccin. Los efectos del filtro interior cambian el espectro y la intensidad de la luz emitida y, por tanto, deben ser considerados al analizar el espectro de emisin de luz fluorescente.

APLICACIONES
La espectrometra de fluorescencia se utiliza en anlisis bioqumicos, mdicos, qumicos y de investigacin de compuestos orgnicos. Tambin se ha utilizado para diferenciar los tumores malignos de piel de los benignos. La fluorescencia tambin puede utilizarse para reorientar los fotones.

Fluorescencia del triptfano

Este tipo de fluorescencia es una prueba importante que puede ser usada para estimar la naturaleza del microambiente del triptfano (un aminocido). Cuando se realizan experimentos con desnaturalizantes, surfactantes u otras molculas anfiflicas, el microambiente del triptfano puede cambiar. Por ejemplo, si una protena que contiene un nico triptfano en su ncleo "hidrofbico" se desnaturaliza con el aumento de temperatura, aparece un cambio de color en el espectro de emisin del rojo. Esto se debe a la exposicin del triptfano a un medio ambiente acuoso en contraposicin a una protena hidrofbica interior. En contraste, la adicin de un tensioactivo a una protena que contiene triptfano, que se encuentra expuesto al solvente acuoso, causar un cambio al espectro azul de emisin si el triptfano est incrustado en la vescula o micela de surfactante. Las protenas que carecen de triptfano puede ser enlazadas a un fluorforo. A 295 nm, el espectro de emisin del triptfano es dominante sobre la fluorescencia ms dbil de la tirosina y fenilalanina.

Espectrometra de rayos X
La espectrometra de rayos X es un conjunto de tcnicas espectroscpicas para la determinacin de la estructura electrnica de materiales mediante el uso de excitacin por rayos X.

ESPECTROMETRA DE EMISIN POR RAYOS X

Karl Manne Georg Siegbahn de Uppsala, Suecia (Premio Nobel 1924), fue uno de los pioneros en el desarrollo de rayos X espectrometra de emisin (tambin llamado Xespectroscopa de fluorescencia de rayos). Midi las longitudes de onda de los rayos X en muchos elementos de alta precisin, utilizando electrones de alta energa como fuente de excitacin.

Los rayos X intensos y de longitud de onda sintonizable son tpicamente generados con sincrotrones. En un material, los rayos X pueden sufrir una prdida de energa en comparacin con el haz de luz que entra. Esta prdida de energa del haz reemergente refleja una excitacin interna del sistema atmico, de forma anloga a la conocida espectrometra Ramanque se utiliza ampliamente en la regin ptica. En la regin de los rayos X hay suficiente energa para producir cambios en el estado electrnico (transiciones entre orbitales, lo que contrasta con la regin ptica, donde la prdida de energa es a menudo debida a los cambios en el estado de rotacin o los grados de libertad vibracionales). Por ejemplo, en la regin ultraligera de los rayos X (por debajo de aproximadamente 1 k eV), las excitaciones de los campos cristalinos dan lugar a la prdida de energa. Podemos pensar en el proceso fotn-dentro-fotn-fuera como un evento de dispersin. Cuando la energa del rayo X corresponde a la energa de enlace de un nivel electrnico bsico, este proceso de dispersin potencia su resonancia en muchos rdenes de magnitud. Este tipo de espectrometra de emisin de rayos X se conoce a menudo como dispersin inelstica resonante de rayos X (RIXS). Debido a la amplia separacin de energas orbitales de los niveles bsicos, es posible seleccionar un determinado tomo de inters. As, se puede obtener informacin valiosa sobre la estructura electrnica local de sistemas complejos, y los clculos tericos son relativamente sencillos de realizar.

Instrumentos
Existen varios diseos eficientes para analizar un espectro de emisin de rayos X en la regin de los rayos X ultra ligeros. La cifra de valor para estos instrumentos es el rendimiento espectral, es decir, el producto de la intensidad detectada y el poder de resolucin espectral. Por lo general, es posible cambiar los parmetros dentro de un cierto rango, mientras se mantiene su producto constante.

Espectrmetros de rejilla Normalmente, los rayos X que emergen de una muestra deben pasar una hendidura que define la fuente, y luego los elementos pticos (espejos y/o rejillas) los dispersan por difraccin segn su longitud de onda y, por ltimo, se coloca un detector en sus puntos focales. Monturas de rejilla esfrica

Henry Augustus Rowland (1848-1901) desarroll un instrumento que permita el uso de un solo elemento ptico que combina la difraccin y la concentracin: una rejilla esfrica. La reflectividad de los rayos X es baja, independientemente del material utilizado y, por tanto, la incidencia sobre la rejilla es necesaria. Imaginemos un crculo con la mitad del radio R tangente al centro de la superficie de la rejilla. Este pequeo crculo se llama crculo de Rowland. Si la hendidura de entrada estn en cualquier parte de este crculo, un haz de luz que pase por la hendidura y golpee la rejilla se dividir en un haz reflejado especularmente, y en haces de todos los rdenes de difraccin, que van a concentrarse en determinados puntos en el mismo crculo. Monturas de hendidura plana Los espectrmetros de hendidura plana son similares a los espectrmetros pticos. En primer lugar necesita una ptica que convierta los rayos divergentes emitidos por la fuente de rayos X en un haz paralelo. Esto puede lograrse mediante la utilizacin de un espejo parablico. Los rayos paralelos que salen de este espejo golpean una rejilla plana (con una distancia de ranura constante) en el mismo ngulo, y son difractados en funcin de su longitud de onda. Un segundo espejo parablico, a continuacin, recoge los rayos difractados en un cierto ngulo y crea una imagen en un detector. Un espectro dentro de un determinado rango de longitud de onda puede ser registrado simultneamente usando un detector sensible de posicin bidimensional tal como una placa fotomultiplicadora de microcanal o un chip CCD sensible a los rayos X (tambin se pueden utilizar placas de pelcula fotogrfica). Interfermetros En lugar de utilizar el concepto de interferencia de haz mltiple que producen las rejillas, se puede dejar simplemente que dos rayos interfieran. Registrando la intensidad de dos de esos rayos co-lineales en algn punto fijo y cambiando su fase relativa, se obtiene una intensidad delespectro en funcin de la diferencia de longitud de ruta. Se puede demostrar que esto es equivalente a una transformada de Fourier del espectro en funcin de la frecuencia. La mayor frecuencia registrable de dicho espectro depende del tamao mnimo de paso elegido en la exploracin y de la resolucin de frecuencia (es decir, cmo de bien una cierta onda puede definirse en trminos de su frecuencia). Esta ltima caracterstica permite un diseo mucho ms compacto para lograr alta resolucin que para un espectrmetro de rejilla, porque las longitudes de onda de los rayos X son pequeas en comparacin con las diferencias de longitud de ruta alcanzables.

Espectrometra de absorcin atmica

En qumica analtica, la espectrometra de absorcin atmica es una tcnica para determinar la concentracin de un elemento metlico determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de 62 metales diferentes en una solucin. Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del siglo XIX, la forma moderna fue desarrollada en gran medida durante la dcada de los 50 por un equipo de qumicos de Australia, dirigidos por Alan Walsh.

PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASA

La tcnica hace uso de la espectrometra de absorcin para evaluar la concentracin de un analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley de Beer-Lambert. En resumen, los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser promovidos a orbitales ms altos por un instante mediante la absorcin de una cantidad de energa (es decir, luz de una determinada longitud de onda). Esta cantidad de energa (o longitud de onda) se refiere especficamente a una transicin de electrones en un elemento particular, y en general, cada longitud de onda corresponde a un solo elemento. Como la cantidad de energa que se pone en la llama es conocida, y la cantidad restante en el otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la ley de Beer-Lambert, calcular cuntas de estas transiciones tienen lugar, y as obtener una seal que es proporcional a la concentracin del elemento que se mide.

INSTRUMENTOS
Para analizar los constituyentes atmicos de una muestra es necesario atomizarla. La muestra debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es transmitida y medida por un detector. Con el fin de reducir el efecto de emisin del atomizador (por ejemplo, la radiacin de cuerpo negro) o del ambiente, normalmente se usa un espectrmetro entre el atomizador y el detector. Tipos de atomizadores Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden usarse otros atomizadores como el horno de grafito o los plasmas, principalmente los plasmas de acoplamiento inductivo.

Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo lateralmente (10 cm) y no en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza del quemador se puede controlar mediante un ajuste del flujo de mezcla de combustible. Un haz de luz pasa a travs de esta llama en el lado ms largo del eje (el eje lateral) e impacta en un detector. Anlisis de los lquidos Una muestra de lquido normalmente se convierte en gas atmico en tres pasos: 1. Desolvacin. El lquido disolvente se evapora, y la muestra permanece seca. 2. Vaporizacin. La muestra slida se evapora a gas. 3. Atomizacin. Los compuestos que componen la muestra se dividen en tomos libres. Fuentes de luz

La fuente de luz elegida tiene una anchura espectral ms estrecha que la de las transiciones atmicas. * Lmparas de ctodo hueco. En su modo de funcionamiento convencional, la luz es producida por una lmpara de ctodo hueco. En el interior de la lmpara hay un ctodo cilndrico de metal que contiene el metal de excitacin, y un nodo. Cuando un alto voltaje se aplica a travs del nodo y el ctodo, los tomos de metal en el ctodo se excitan y producen luz con una determinada longitud de onda. El tipo de tubo catdico hueco depende del metal que se analiza. Para analizar la concentracin de cobre en un mineral, se utiliza un tubo catdico de cobre, y as para cualquier otro metal que se analice. * Lsers de diodo. La espectrometra de absorcin atmica tambin puede ser llevada a cabo mediante lser, principalmente un lser de diodo, ya que sus propiedades son apropiadas para la espectrometra de absorcin lser. La tcnica se denomina espectrometra de absorcin atmica por lser de diodo (DLAAS o DLAS), o bien, espectrometra de absorcin por modulacin de longitud de onda.

MTODOS DE CORRECCIN DE FONDO

El estrecho ancho de banda de las lmparas catdicas huecas hace que sea raro el solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una lnea de absorcin de un elemento se solape con otra. La emisin molecular es mucho ms amplia, por lo que es ms probable que algunas bandas de absorcin molecular se superpongan con una

lnea atmica. Esto puede resultar en una absorcin artificialmente alta y un clculo exagerado de la concentracin en la solucin. Se utilizan tres mtodos para corregir esto: * Correccin de Zeeman. Se usa un campo magntico para dividir la lnea atmica en dos bandas laterales. Estas bandas laterales estn lo suficientemente cerca de la longitud de onda original como para solaparse con las bandas moleculares, pero estn lo suficientemente lejos como para no coincidir con las bandas atmicas. Se puede comparar la absorcin en presencia y ausencia de un campo magntico, siendo la diferencia la absorcin atmica de inters.

* Correccin de Smith-Hieftje (inventada por Stanley B. Smith y Gary M. Hieftje) - La lmpara catdica hueca genera pulsos de alta corriente, provocando una mayor poblacin de tomos y auto-absorcin durante los pulsos. Esta auto-absorcin provoca una ampliacin de la lnea y una reduccin de la intensidad de la lnea a la longitud de onda original. * Lmpara de correccin de deuterio. En este caso, se usa una fuente de amplia emisin (una lmpara de deuterio), para medir la emisin de fondo. El uso de una lmpara separada hace de este mtodo el menos exacto, pero su relativa simplicidad (y el hecho de que es el ms antiguo de los tres) lo convierte en el ms utilizado.

Espectrometra de emisin
La espectrometra de emisin es una tcnica espectroscpica que analiza las longitudes de onda de los fotones emitidos por los tomos o molculas durante su transicin desde un estado excitado a un estado de inferior energa. Cada elemento emite un conjunto caracterstico de longitudes de onda discretas en funcin de su estructura electrnica. Mediante la observacin de estas longitudes de onda puede determinarse la composicin elemental de la muestra. La espectrometra de emisin se desarroll a finales del siglo 19, y los esfuerzos tericos para explicar los espectros de emisin atmica condujeron a la mecnica cuntica. Hay muchas maneras en que los tomos pueden ser llevados a un estado excitado. El mtodo ms simple es calentar la muestra a una temperatura alta, producindose las excitaciones debido a las colisiones entre tomos de la muestra. Este mtodo se utiliza en la espectrometra de emisin de llama, y fue tambin el mtodo utilizado

por Anders Jonas ngstrm cuando descubri el fenmeno de las lneas de emisin discretas en 1850. A pesar de que las lneas de emisin estn causadas por una transicin entre estados energticos cuantizados, y pueden ser muy agudas a primera vista, tienen una anchura finita; es decir, se componen de ms de una longitud de onda de luz. Esta ampliacin de la lnea espectral tiene muchas causas diferentes. Las lneas de emisin en los gases calientes fueron descubiertas por ngstrm, y la tcnica fue desarrollada por David Alter, Gustav Kirchhoff y Robert Bunsen. La espectrometra de emisin suele llamarse a menudo espectrometra de emisin ptica, debido a la naturaleza de la luz que se emite.

TCNICA EXPERIMENTAL EN LA ESPECTROMETRA DE EMISIN POR LLAMA

La solucin que contiene la sustancia que va a ser analizada se conduce al quemador y se dispersa en la llama como un spray fino. El solvente se evapora en primer lugar, dejando partculas slidas finamente divididas que se desplazan a la regin ms caliente de la llama, donde se producen tomos e iones gaseosos. Los electrones son entonces excitados, tal como se describi ms arriba. Es comn usar un monocromador para permitir una deteccin fcil. En un nivel simple, la espectrometra de emisin por llama se puede observar utilizando slo un mechero Bunsen y muestras de metales. Por ejemplo, el metal sodio colocado en la llama se iluminar de amarillo, el metal calcio de rojo y el cobre crear una llama verde. Hay cuatro etapas principales durante la espectrometra de emisin por llama: 1. Evaporacin: La muestra que contiene partculas metlicas se deshidrata por el calor de la llama, y el disolvente se evapora. 2. Atomizacin: En esta etapa, los iones metlicos que se encontraban en el disolvente se reducen a tomos de metal. Por ejemplo, Mg2 + (aq) + 2e Mg (g). Los electrones en los tomos de metal absorben la energa del calor de la llama y pasan a niveles ms altos de energa. 3. Excitacin: Los electrones en estado basal de los tomos de metal son ahora capaces de absorber la energa del calor de la llama. El cuanto (cantidad) de energa absorbido depende de las fuerzas electrostticas de atraccin entre los electrones con carga negativa y el ncleo de carga positiva. Esto, a su vez, depende del nmero

de protones en el ncleo. Como los electrones absorben energa, se desplazan a niveles ms altos de la energa y pasan a estado excitado. 4. Emisin de radiacin: Los electrones en estado excitado son muy inestables y se mueven hacia un estado basal con bastante rapidez. Cuando lo hacen, emiten la energa que absorbieron. Para algunos metales, esta radiacin corresponde a longitudes de onda de luz en la regin visible del espectro electromagntico, y se observan como un color caracterstico del metal. Como los electrones de diferentes niveles de energa son capaces de absorber luz, el color de la llama ser una mezcla de todas las diferentes longitudes de onda emitidas por los distintos electrones en el tomo de metal que se investiga.

Espectrometra ultravioleta-visible
La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas. Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.

APLICACIONES
La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados.

Soluciones de iones metlicos de transicin Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una solucin diluida de sulfato de cobre

es muy azul; agregando amonaco se intensifica el color y cambia la longitud de onda de absorcin mxima. Compuestos orgnicos Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin, tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la polaridad de los disolventes. Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas. La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de una curva de calibracin. El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular se conoce como factor de respuesta.

LEY DE BEER-LAMBERT
La espectrometra UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para determinar las concentraciones de especies absorbentes en solucin, usando la Ley de Beer-Lambert:
-

donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una determinada longitud de onda, I es la intensidad de transmisin, L la longitud de ruta a travs de la muestra, y c la concentracin de las especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es una constante conocida como absortividad molar o coeficiente de extincin. Esta constante es una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una temperatura y presin particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a menudo, U/M * cm.

La absorbancia y extincin a veces son definidas en trminos de logaritmo natural en lugar de logaritmo de base 10.

La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos compuestos, pero no sirve como relacin universal para la concentracin y absorcin de todas las sustancias. En molculas complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la concentracin.

ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama espectrofotmetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de la muestra (Io). La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisin: A = - log (%T) Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lmpara de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difraccin o monocromador para separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o un CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difraccin se utilizan con CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en pxeles. Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseo, y todava est en uso en la enseanza y laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y el haz de referencia y el de la muestra se miden al mismo tiempo. En otros instrumentos, los dos haces pasan a travs de un bloqueador que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de muestra y la del haz de referencia. Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la absorbancia de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en una clula transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de Beer-Lambert. Tambin se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en algunos instrumentos. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda visibles.

ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un grfico de absorbancia de luz frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido directamente con los espectrofotmetros ms sofisticados, o bien pueden registrarse los datos de una sola longitud de onda con los instrumentos ms simples. La longitud de onda se representa con el smbolo . Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse un grfico estndar del coeficiente de extincin () frente a la longitud de onda (). Este grfico estndar sera efectivamente "la concentracin corregida" y, por tanto, independiente de la concentracin. Para una sustancia determinada, la longitud de onda en la cual se produce el mximo de absorbancia en el espectro se llama max, y se pronuncia "lambda-max". Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empricas que pueden utilizarse para predecir max, la longitud de onda de la absorcin UV-Vis, para compuestos orgnicos conjugados como dienos y cetonas. Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlace en una determinada molcula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales dentro de la molcula. La absorcin UV-Vis no es, sin embargo, una prueba especfica para ningn compuesto determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solucin, la temperatura, la concentracin de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros de absorcin

de los compuestos, as como las variaciones en la anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el espectrofotmetro.