Cromatografa en columna En la cromatografa en columna la separacin se consigue haciendo fluir la mezcla a travs de una columna de adsorbente.

Los compuestos emergen de la columna a tiempos diferentes, y pueden ser recogidos en fracciones separadas. En una columna cromatogrfica se deben tener en cuenta los siguientes trminos:

matriz de la columna. Sustancia que est empapada de solvente y que se empaqueta en la columna. Tambin se denomina el lecho de la columna. longitud de la columna. Longitud del dispositivo en el que se empaqueta la columna. volumen de la columna. Volumen total de gel que se empaqueta en una columna cromatogrfica. volumen muerto de la columna. Cantidad de solvente que tiene que atravesar la columna para asegurar que se ha reemplazado completamente.

Comnmente se suele usar como adsorbente almina o slice. Las fases mviles se usan en funcin de la polaridad de los compuestos a separar. A continuacin se enumera una lista de menor a mayor polaridad de las fases mviles comnmente usadas:

Hexano Tolueno Diclorometano Cloroformo Dietil ter Acetato de etilo Acetona 1-Propanol Etanol Metanol Agua

REALIZACIN DEL EXPERIMENTO (tiempo total 2h aprox.)

MATERIALES Y EQUIPOS

Columna de cromatografa Dos pinzas Embudo alemn Varilla de vidrio Matraces erlenmeyer Pipetas Pasteur Algodn Arena Aire comprimido Guantes Gafas de seguridad

REACTIVOS

Silica gel (SiO2) (30 gr) Hexano (600 ml aprox.) Se prepara una disolucin problema para todo el grupo (9 personas) debido a las pequeas cantidades con las que trabajamos. Esta disolucin est compuesta por 500 mg de ferroceno y 100 mg de 4,6,8-trimetilazuleno en 20-25ml de hexano

PROPIEDADES FSICAS Y SEGURIDAD

FERROCENO

Frmula: (C5H5)2Fe Pm = 186,04 uma Aspecto: Slido naranja. Punto de ebullicin : 249C Punto de fusin : 172176C Temperatura de auto ignicin : >150 Presin de vapor: 3,4 HPa (100C) Densidad aparente: 0,5 Solubilidad: Insoluble en agua. Soluble en alcohol y ter.

Para consultar la hoja de seguridad pincha aqu

http://www.sciencelab.com/x MSDS-Ferrocene-9924047

4,6,8-TRIMETILAZULENO

Frmula: C13H14

M=170.26

Punto de fusin: 80-82C

Para consultar la hoja de seguridad pincha aqu

http://notes.ump.edu.my/fkksa/FKKSA/Archive/Technical%20Unit/Warehouse %20Unit/Chemical/MSDS/MERCK_EN/8145/814544.pdf

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL (tiempo total 2h aprox.)

Cromatografa en capa fina

Utilizaremos placas de aluminio recubiertas de gel de slice. La fase mvil ser hexano. Se inocula la disolucin problema, previamente diluida, en la placa con la ayuda de un capilar. Introduciremos la placa en la cubeta con disolvente, en nuestro caso hexano y dejaremos que ascienda por la placa por capilaridad, sin que llegue hasta el final. Debido a la coloracin de los compuestos no har falta utilizar ningn sistema de revelado. Gracias a la placa comprobamos la

separacin entre ambas manchas y la validez del disolvente utilizado.

Preparacin de la Columna

Colocamos una bolita de algodn en el fondo de la columna con ayuda de una varilla para evitar que se desprenda el gel de slice cuando abramos la llave.

Sujetamos la columna con dos pinzas y nos aseguramos de que esta recta.

Mezclamos, en la campana, gel de slice (30g) y hexano en un erlenmeyer hasta formar una pasta fluida.

Con ayuda de un embudo, vertemos la pasta con decisin en la columna asegurndonos de que la llave est cerrada. Quedarn partculas de slice en las paredes de la columna por lo que las podemos arrastrar con hexano con una pipeta Pasteur y un hbil movimiento de mueca.

Tenemos que compactar la slice que quedar en el fondo de la columna. Para ello podemos utilizar una goma dando unos ligeros golpecitos sujetando la columna con la otra mano. Una vez bien compactada, abrimos la llave para que el disolvente caiga hasta que queden unos 5 mm por encima de la slice. (Se debe evitar que la slice no debe secarse nunca).
Echamos una pizca de arena que cubra la superficie de la slice para que no se remueva sta ltima cuando aadamos la muestra.

Ahora ya podemos aadir la muestra. Con ayuda de una pipeta Pasteur echamos con cuidado la muestra resbalando por las paredes de la columna (con una pipeta Pasteur llena de muestra nos bastar para realizar esta prctica, 2ml aprox).
Tenemos que cerciorarnos de que la muestra se introduce en la slice, para ello abrimos la llave de la columna con cuidado sin que llegue a secarse la slice (no importa que la arena se seque).

Procedemos a llenar la columna con el disolvente (hexano), primero con una pipeta Pasteur para evitar que se remueva la slice y luego con un erlenmeyer resbalando el lquido por las paredes.

Ya podemos abrir la llave y los compuestos empezarn a avanzar por la columna en forma de anillos. El primero en eluir ser el ferroceno (amarillo) y luego el trimetilazuleno (morado).

Recogemos los dos diferentes erlenmeyers.

compuestos

en

El hexano libre de los compuestos puede volver a introducirse en la columna.

Para que el disolvente y los compuestos corran ms rpido por la columna podemos utilizar aire comprimido creando un aumento de presin en la columna. (esta operacin debe hacerse con precaucin).

Una vez eludos los dos compuestos, deberemos secar la columna. Lo podemos hacer con ayuda de una trompa de vaco conectada a la boca de la columna.

El gel de slice no lo podemos reutilizar para otra prctica, pero el hexano se puede destilar y volver a utilizar. La gel de slice se depositar en el contenedor destinado al efecto.

CONCLUSIN
En este ejemplo de separacin por columna hemos utilizado dos compuestos coloreados de forma que se vean a simple vista puesto que el objetivo de esta prctica es conocer el procedimiento a seguir en una columna. Con la cromatografa por columna se consigue una efectiva separacin utilizando muy poca cantidad de la muestra. Como se ve en las imgenes estos dos compuestos con hexano se separan lo suficientemente bien como para distinguir dos aillos diferenciados. Lo que cambia respecto a cualquier otra separacin en columna es la recogida de la muestra a la salida de la columna, que deber hacerse en tubos de ensayo y haciendo cromatografa en capa fina a los tubos para conocer su contenido.