Elaboracin de una planta transgnica: Tcnica de Biobalstica Si bien en la actualidad es posible obtener plantas transgnicas de diferentes especies con

Agrobacterium, el rango natural de hospedantes de la bacteria se constituy en un importante factor limitante en los primeros intentos por transformar monocotiledneas y algunas dicotiledneas que no eran susceptibles a la misma. En consecuencia, se desarrollaron mtodos alternativos de transferencia directa de ADN basados en procedimientos de naturaleza qumica, fisicoqumica, o mecnica. Estos nuevos mtodos, permiten transferir ADN desnudo (sin mediacin de vectores biolgicos), y el ms ampliamente utilizado en la transformacin gentica de plantas es el bombardeo con micropartculas tambin conocido como biobalstica. El desarrollo de este mtodo tuvo grandes implicancias en lo que se refiere al mejoramiento gentico de plantas de inters agronmico como arroz, maz o soja, que hasta entonces no se haban podido transformar con Agrobacterium. Qu es la Biobalstica? El trmino biobalstica deriva de la conjuncin de biologa y balstica o balstica biolgica. Este es un mtodo muy original ideado y refinado en la dcada de 1980 por un grupo de investigadores de la Universidad de Cornell (EE.UU.), que permite introducir ADN a virtualmente cualquier tipo de clula. En este procedimiento el ADN es introducido en las clulas por medio de partculas microscpicas (micropartculas) aceleradas a velocidades supersnicas, que atraviesan la pared y la membrana celular. Las partculas son aproximadamente esfricas (de 0.4 a 2.0 micrmetros de dimetro), estn hechas de materiales densos como oro o tungsteno y se recubren con el ADN que se desea transferir a las plantas. Para que las micropartculas puedan atravesar las membranas celulares y llegar al ncleo de las clulas blanco, son impulsadas a gran velocidad por explosin de plvora seca, liberacin de gas comprimido a alta presin (aire, helio, CO2 o N2 ), o por una descarga elctrica de una gota de agua. Una vez dentro del tejido vegetal el ADN se desprende de las micropartculas debido a las modificaciones del entorno inico.

Si las partculas atraviesan las membranas y son atrapadas en el ncleo, el ADN puede integrarse de forma estable en los cromosomas mediante un proceso de recombinacin al azar, lo que se considera como transformacin estable. La transformacin estable ocurre a muy baja frecuencia, por lo que es necesario utilizar un sistema de seleccin in vitro que permita distinguir clulas transformadas y no transformadas. En este mtodo de transformacin las construcciones genticas son ms simples e incluyen los genes de inters y de seleccin con sus secuencias regulatorias respectivas. El ADN

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para ser clonado es incluido en plsmidos que son transferidos completos durante el bombardeo a las clulas, o bien de forma de molcula lineal (el plsmido cortado en un punto), a diferencia de los plsmidos utilizados con Agrobacterium (plsmido ti desarmado). Tambin es muy comn que una vez obtenida la construccin gentica dentro de un plsmido (en el cual se clona y se obtienen muchas copias para trabajar), luego se la extrae del mismo para slo tener la secuencia con los genes de inters y de seleccin (incluidas las secuencias regulatorias) y as reducir el fragmento de ADN a transferir. La primera demostracin de que el sistema funcionaba se realiz en 1987 al introducir ADN en clulas epidrmicas de cebolla. Poco despus, el mtodo fue probado en diferentes organismos con xito. As el mtodo de bombardeo de micropartculas se constituy en el segundo mtodo de transformacin gentica de plantas ms empleado, luego del de Agrobacterium. Cules son las aplicaciones de la Biobalstica? El bombardeo de micropartculas es considerado un mecanismo universal, ya que, por su naturaleza fsica, permite introducir ADN (sin necesidad de vectores) en cualquier tipo de tejido o clula. Ha sido utilizado para introducir y expresar material gentico no slo en plantas sino tambin en bacterias, protozoarios, algas, hongos, clulas y tejidos animales (insectos, peces, aves y mamferos) y an animales y plantas in vivo. Al elegir un tejido blanco para la transformacin por biobalstica debe tenerse en cuenta la capacidad de la especie de inters para regenerar in vitro. Entre los explantos vegetales utilizados con mayor xito, se encuentran las hojas, suspensiones celulares, meristemas, embriones, primordios foliares, cotiledones y callos. Adems en la actualidad, constituye el nico medio que permite transformar organelas celulares, como mitocondrias y cloroplastos de modo reproducible. Este mtodo a su vez es sumamente til para analizar la funcin y regulacin gnica, transferir ARN viral y estudiar vas metablicas. Los logros ms destacados en la generacin de plantas transgnicas por medio de este mtodo, incluyen especies de gran importancia econmica como son la soja, el maz, el arroz, el sorgo, la papaya, la caa de azcar, el trigo y el esprrago.

"El Cuaderno de PorquBiotecnologa. Edicin n 28

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