Biotehnologia mediului

Biotehnologia are ca obiect utilizarea integrat a biochimiei, microbiologiei i ingineriei pentru obinerea de bunuri industriale, agricole, protecia sntii sau protecia mediului folosind potenialul microorganismelor, celulelor animale sau vegetale cultivate sau unor pri ale acestora

Obiective: 1. Eliminarea polurii existente n mediu (ap, sol, aer), prin detecia contaminanilor i bioremediere.
Etapele reducerii polurii: - determinarea naturii compuilor chimici poluani - determinare concentraiei acestora - alegerea metodei de bioremediere - tratamentul i ndeprtarea poluanilor din mediu prin metoda aleas Monitorizarea polurii: bioindicatori, biomarkeri

2. Tratarea poluanilor rezultai din procese industriale, agricole sau casnice cror prezen nu poate fi prevenit.
Bioremedierea poate fi inclus ca etap tehnologic distinct nainte ca apele sau gazele rezultate s fie eliminate n mediu. Exemple: - epurarea biologic a apelor reziduale casnice i a celor provenite din anumite industrii (alimentar) - degradarea cu microorganisme a hidrocarburilor care ar putea polua mediul - eliminarea prin bioremediere a poluanilor de natur gazoas: bioxid de sulf, oxizi de azot, bioxid de carbon reducerea efectului de ser!

3. Reducerea sau eliminarea surselor de ageni poluani

Este de preferat s fie aplicate procese care s nu fie nsoite de formarea unor compui poluani asupra mediului dect s fie necesar dup aceea degradarea poluanilor respectivi

Exemple de tehnologii nepoluante sau cu poluare redus Procese biocatalitice: folosirea enzimelor sau bacteriilor pentru a obine anumite produse chimice: peniciline, aminoacizi, medicamente Avantaje: - folosirii unor materii prime rennoibile - reducerea energiei necesare procesului - enzimele sau bacteriile sunt biodegradabile, spre deosebire de catalizatorii chimici. Biopolimeri obinui cu ajutorul microorganismelor Reducerea emisiilor de CO2 prin folosirea surselor alternative bazate pe biotehnologii pentru a nlocui resursele fosile de energie

Microorganisme utilizate n biotehnologii

Condiii pentru ca o structur s poat fi considerat form de via:
s posede o membran celular care s o diferenieze de mediul nconjurtor s fie capabil s se reproduc s fie capabil s realizeze nite activiti biochimice cunoscute sub denumirea de metabolism s conin ADN, ARN i proteine

Microorganisme - acele organisme a cror mrime este mai mic de 0,1 mm i nu sunt vizibile cu ochiul liber 1. Procariote - nu au nucleu individualizat i nici membran nuclear virui, bacterii alge albastre, arheobacterii 2. Eucariote -organisme mai evoluate care au nucleu i membran nuclear strict individualizate fungii, drojdii

Bacterii
Organisme unicelulare formate dintr-o mas protoplasmatic, mrginit de o membran rigid, fr a avea un nucleu definit. Forma: sfere (coci), bastonae (bacili), spirale (spirili) Dimensiuni: 0,5-10 m, uzual n jur de 2 m

Structura celular a unei procariote

Fungii (mucegaiuri)
Organisme eucariote filamentoase Caracteristici: au aparat vegetativ (tal) bine difereniat n membran, citoplasm i nucleu formeaz micelii (reele de hife) se dezvolt prin nmugurire n mod nelimitat, iar nmulirea are loc prin sporulare

Hif Conidii de Penicillium

Drojdii
Ciuperci unicelulare, care se gsesc mai ales n sol Caracteristici: se pot nmuli prin diviziune (nmugurire) i prin spori. form rotund, eliptic sau alungit dimensiuni cuprinse ntre 4-20m

Celul de drojdie (imagine microscopic)

Alge

Alge verzi

Alge roii

Selectarea i ameliorarea microorganismelor

Etapele selectrii i ameliorrii microorganismelor Izolarea microorganismului sau alegerea sa din coleciile de culturi Testarea microorganismului prin realizarea unor culturi pure sau mixte Ameliorarea microorganismului prin mutagenez sau inginerie genetic Factorii de care depinde dezvoltarea microorganismelor Factori fizici: temperatura, lumina, umiditatea, presiunea hidrostatic, agitarea, radiaiile electromagnetice Factori chimici: concentraia substanelor nutritive anorganice i organice din mediu, aciditatea mediului, prezena oligoelementelor i factorilor de cretere, concentraia metaboliilor i substanelor toxice Factori biologici: organismele inferioare sau superioare existente n mediul respectiv Relaiile posibile cu alte organisme: simbioz, metabioz, antagonism, neutralism

Ameliorarea microorganismelor prin mutagenez i inginerie genetic

Mutanii - indivizi care difer de populaia speciei prin una sau mai multe caracteristici, care se transmit ereditar. Mutagenez indus - folosirea de ageni mutageni fizici (radiaiile ultraviolete) sau chimici (etilenimina) Ingineria genetic - modificarea materialului genetic (ereditar) al organismului n scopul eliminrii unor caracteristici nedorite i inducerii altora dorite Tehnica ADN recombinat - una sau mai multe gene ale unui organism sunt izolate i introduse ntr-un alt organism Acidul dezoxiribonucleic (ADN) - macromolecul cu schelet polinucleotidic i form de dublu helix care conine ntr-o form codificat informaia necesar sintezei proteinelor i enzimelor, ct i pe cea privind replicarea materialului genetic necesar asigurrii reproducerii. Gena - un segment din macromolecula de ADN care acioneaz ca unitate funcional i conine informaia necesar sintezei unei catene polipeptidice

Structura ADN

Obiectivele ingineriei genetice

1. Inserarea unei singure gene strine ntr-un alt organism, pentru a-i conferi acestuia o caracteristic nou 2. Alterarea modului n care acioneaz o gen existent n organismul dat, avnd ca rezultat modificarea anumitor caracteristici ale organismului respectiv 3. Inserarea unei gene n organismul gazd astfel ca acesta s produc un compus anumit, n general o protein

Organisme modificate genetic (GMO)

Mediul de cultur i dezvoltarea microorganismelor

a. Apa
disponibilitatea apei n sistem - activitatea apei pH-ul srurile coninute posibilii contaminani prezeni

b. Oxigenul
Clasificarea microorganismelor n funcie de comportarea lor fat de oxigen: aerobe anaerobe Variante intermediare - microaerofile - anaerobe facultative

c. Surse de energie i nutrieni

Tipuri de metabolism celular Metabolism - totalitatea reaciilor care au loc n celule avnd ca scop generarea energiei i formarea componentelor necesare celulei - catabolism - anabolism Fotoautotrofie - folosirea energiei solare ca surs de energei i a bioxidului de carbon pentru construirea celulelor Ex: plantele i algele Fotoheterotrofie - folosirea ca surs de energie tot a energiei solare, ns componentele celulei sunt construite pe seama unei surse de carbon organic Ex: bacteriile verzi nesulfuroase Chemoautotrofie - organismele care i procur energia din substane anorganice iar ca surs de carbon folosesc bioxid de carbon Ex: bacteriile nitrifiante Chemoheterotrofie - utilizarea compuilor organici att ca surs de carbon ct i de energie. Ex: majoritatea bacteriilor i eucariotelor (fungii, drojdii, animale)

Metabolismul microorganismelor chemoheterotrofe

Degradarea catabolic a hidrailor de carbon cu structur mai complex la glucoz, care este apoi degradat la rndul ei la bioxid de carbon i ap, cu eliberare de energie. Energia metabolic rezultat este nmagazinat sub form de ATP

Metabolismul aerob substraturile organice sunt transformate in procese care au loc n mai multe etape ntr-o serie de produse cu structur mai complex: acid citric, acid glutamic, lizin, proteine bioactive, antibiotice, biostimulatori, etc. sunt intens exoterme Metabolismul anaerob (fermentaii) n general sunt nsoite de degajarea unui gaz (bioxid de carbon) produc mai puin energie dect n cele aerobe produii de fermentaie obinui au n general cifr de oxidare mic i pot fi obinui pe mai multe ci metabolice: - fermentaie alcoolic - rezult alcool etilic i bioxid de carbon - fermentaie homolactic - rezult acid lactic - metanogenez - rezult metan (i bioxid de carbon)

d. Temperatura
Optimul de temperatur al majoritii microorganismelor: 30-37C Microorganisme mezofile - au temperatura optim de cretere ntre 15-45C: Microorganisme capabile s triasc n condiii de temperatur extreme: psichrofile - au optimul de temperatur la 15C i pot crete la 0C sau chiar mai jos dac au la dispoziie ap lichid termofile - au optimul de temperatur ntre 45-60C hipertermofile - capabile s creasc la temperaturi de 80-110C.

e. pH-ul
Valoarea optim de pH pentru creterea microorganismelor se situeaz n domeniul neutru (in jur de 7,0) Tipuri care prefer condiii acide sau alcaline: acidofile - nu pot crete dect la valori de pH cuprinse ntre 1 i 4 alcalifile - cresc la valori pH de peste 9

Realizarea de condiii sterile de cultivare

Sterilizarea termic: se face cu abur sau aer fierbinte Sterilizarea cu radiaii (UV, raze X, etc.): sterilizarea aerului din laboratoare biologice sau unele secii de fabricaie Sterilizarea prin filtrare: mai ales pentru aerul destinat aerrii culturilor de microorganisme aerobe Sterilizarea chimic: pentru utilaje, rezervoare, hale de fabricaie - substane antiseptice - substane dezinfectante

Dezvoltarea culturilor de microorganisme

nmulirea microorganismelor prin diviziune transversal

Fazele dezvoltrii unui microorganism

Faza de adaptare la mediu (sau lag = ntrziere n lb. englez) - celulele cresc n volum i sintetizeaz proteinele i materialul genetic, dar nc nu se nmulesc. Faza creterii exponeniale (sau log) - celulele se divid i are loc o cretere constant a populaiei celulare care se dubleaz la intervale regulate, dup fiecare timp de generaie. Populaia este format din celule tinere, dar foarte sensibile la factori nocivi. Faza staionar (post-log) - datorit srcuirii mediului n resurse nutritive creterea este mult ncetinit. Numrul diviziunilor scade mult i pe ansamblu numrul de celule rmne constant. Celulele sunt ns mai mature, mai rezistente la factori nocivi i unele ncep s sporuleze. Faza de declin - majoritatea celulelor mor, celulele sunt btrne i sporuleaz intens.

Cinetica creterii microorganismelor

Calculul vitezei de cretere

X t = X 0 2N
Xt - numrul de celule prezente dup un anumit timp t X0 - numrul iniial de celule N - numrul de dublri n intervalul de timp

t N= td
td - timpul de dublare (timpul de generaie)
t Xt = ln 2 t ln X 0
d

ln X t ln X 0 ln 2 0,693 = = t td td

Ecuaia Monod

v = v max

CS KS + CS

vmax - viteza maxim de cretere n condiii optime Cs - concentraia substratului Ks - constant care exprim afinitatea microorganismului pentru substratul
respectiv (concentraia de substrat pentru care viteza de cretere este jumtate din cea maxim)

Bioremedierea
Definiia bioremedierii: procesul n care deeuri de natur organic sau anorganic sunt degradate n condiii controlate, pe cale biologic, pn la o form netoxic sau la un nivel de concentraie admis de legislaia in vigoare.

Contaminani importani
Clase de contaminani
Solveni Pesticide Ierbicide Fungicide Insecticide Substane petrochimice

Exemple reprezentative
cloroform, tetraclorur de carbon tricloretilen DDT, lindan atrazin, araclor, acid 2,4-diclorfenoxiacetic pentaclorfenol compui organofosforici benzen, toluen compui aromatici polinucleari

Surse posibile
uzine chimice curtorii chimice agricultur agricultur, uzine chimice tratamentul lemnului agricultur, uzine chimice, tratamentul lemnului aeroporturi, instalaii portuare, uzine petrochimice instalaii de gazeificare a crbunilor, instalaii de producere i utilizare a gudroanelor zone miniere, zone militare uzine chimice uzine de prelucrare a minereurilor

Explozivi Fenoli i clorfenoli Metale grele

trinitrotoluen nitrofenol, clorfenol cadmiu, plumb, mercur

Evoluia poluanilor care ajung n mediu

POLUANTI

nevolatili

volatili

solubili in apa

insolubili in apa

se adsorb

nu se adsorb nedegradabil

solubili in lipide nedegradabil

insolubili in lipide

nereactivi

reactivi

Acumulare in sol

Acumulare in apa

Biodegradare

Acumulare in lantul trofic

Biodegradare

Acumulare in sol

Acumulare in atmosfera

Degradare

Decontaminarea solului
Metode tradiionale:
ndeprtarea stratului contaminat i transportarea lui ntr-un deponeu special izolarea i acoperirea stratului contaminat

Metode fizico-chimice:
incinerarea descompunerea chimic (Ex: declorurarea catalizat de baze, oxidarea catalizat de radiaii UV)

Bioremediere
Controlul i optimizarea unui proces de bioremediere - identificarea populaiei microbiene capabile s degradeze poluanii respectivi, - identificarea accesibilitii poluanilor pentru degradare - asigurarea condiiilor pentru biodegradare (compoziia i umiditatea solului, temperatur, pH, factori nutrieni, concentraie de oxigen, concentraii metale grele)

Microorganisme capabile s degradeze compuii poluani

Aerobe exemple: Pseudomonas, Alcaligenes, Sphingomonas, Rhodococcus i Mycobacterium. Pot degrada pesticide, alcani, sau hidrocarburi aromatice i de multe ori pot utiliza asemenea compui drept singura surs de carbon i energie. Anaerobe - Nu sunt la fel de mult folosite ca cele aerobe, dar exist anumite tipuri care au trezit mare interes. Exemplu: microorganismele care pot degrada compui bifenilici policlorurai care se gsesc n sedimentele unor ruri. Fungii lignilolitice - Exemplu Phanaerochaete chrysosporium - pot crete pe substraturi foarte comune ca paie sau coceni de porumb i pot degrada o mare varietate de contaminani persisteni

Strategii de bioremediere
1. Folosirea de microorganisme indigene 2. Stimularea creterii microorganismelor indigene
Modaliti de stimulare favorizarea degradrii aerobe asigurarea unei cantiti suficiente de oxigen temperatura mai ridicat va avea efect favorabil. adugarea unor substane fertilizante cu coninut de azot pH-ul solului - influeneaz att viteza de cretere a microorganismelor ct i solubilitatea i prin aceasta accesibilitatea compusului care trebuie degradat. controlul coninutului de metale grele

3. Bioaugmentare 4. Utilizarea de microorganisme manipulate genetic

Tehnici de bioremediere
Tehnici in situ (adic la faa
locului) Aratul solului - nivelul de oxigenare al solului crete i contaminanii vor fi dispui n mod mai uniform Bioventilaia - favorizarea ptrunderii aerului sau oxigenului n sol pentru a crete activitatea biologic, concomitent cu evacuarea substanelor volatile

Tehnici de bioremediere - in situ

Biobarbotarea - injectarea de aer sub presiune sau oxigen pur n zona contaminat, care poate fi sol sau ap

Tehnici de bioremediere - ex situ

Excavarea i ndeprtarea solului contaminat Compostarea - combinarea solului contaminat excavat cu diferite deeuri agricole sau forestiere uor biodegradabile i compostare conform tehnicii cunoscute Utilizarea bioreactoarelor Variante constructive: cu agitare, cu strat fix, cu strat fluidizat, cu nmol activ, vase cilindrice (tobe) rotative

Schema flux a bioremedierii solului contaminat prin folosirea unui bioreactor

Mediu de cultur (ap, nutrieni)

sol poluat

excavarea solului

sterilizare aer

abur

transportul solului la bioreactor

dezvoltarea culturii

cultur starter de microorganisme

aer

bioremedierea n bioreactor

ap, nutrieni

sol depoluat

Fitoremedierea
Definiie: utilizarea plantelor pentru ndeprtarea
contaminanilor i metalelor grele din sol i ap

Avantaje
Poate fi utilizat pentru eliminarea anumitor compui toxici pe care microorganismele nu le pot degrada. Este considerat cu 50-80% mai ieftin dect alte alternative, Este superioar estetic Solul nu trebuie excavat

Dezavantaje
Durata mai mare a procesului, care necesit cteva cicluri de vegetaie, Prezena contaminailor poate reduce considerabil viteza de cretere a plantelor Plantele care au acumulat compuii toxici pot reprezenta un pericol pentru vietile slbatice i pot ajunge n lanul trofic.

Factor de bioconversie
Condiii ca o plant s poat fi utilizat pentru fitoremediere
s tolereze poluantul respectiv s aib vitez mare de cretere i un randament ridicat pe hectar de cultur s acumuleze compusul toxic (n general un metal) de preferin n partea care se poate recolta s aib un factor de bioconversie ridicat

Definiia factorului de bioconversie: concentraia poluantului n plant

raportat la cea din mediu. Condiia ca o contaminare s fie redus la mai puin de 50% din valoarea iniial n 10 recolte: planta respectiv s aib un factor de bioconversie de cel puin 20.

Hiperacumulatori: plante care pot acumula de 50-100 ori mai multe metale
dect plantele obinuite (aproximativ 400 de specii cunoscute). Exemplu: Thlaspi caerulescens poate acumula 10-15.000 mg/kg Zn, dar produce numai 2-5 t biomas/ha

Modaliti pentru realizarea fitoremedierii

Fitoextracie (Fitoacumulare) ndeprtarea contaminanilor sau

metalelor din sol i stocarea lor n plante Fitodegradare preluarea de ctre plante a compuilor organici din sol, sedimente sau ape i degradarea lor Fitovolatilizare trecerea poluantului prin corpul plantei, fiind apoi volatilizat prin frunze Fitostabilizare transformarea unor specii moleculare n altele mai puin toxice Fixarea unor poluani gazoi din atmosfer de ctre plante

Biofiltre pentru poluani gazoi

Biotehnologiile ca alternative de tehnologii curate

Tehnologii curate - acele tehnologii care permit reciclarea substanelor, deeurilor sau valorificarea poluanilor ca materii prime secundare.

Domenii de aplicaie obinerea de compui chimici (de tonaj mare i de sintez fin) realizarea de procese industriale mai puin poluante obinerea de energie tratarea apelor reziduale i bioremedierea monitorizarea mediului agricultur

Direcii de dezvoltare
1. Utilizarea componentelor plantelor ca materii prime pentru produse chimice sau ca mediu nutritiv pentru cultivarea microorganismelor: hidrai de carbon, proteine, grsimi - 70 mil. t produse chimice se obin anual pe baz de plante 2. Obinerea de compui chimici care sunt metabolii ai microorganismelor: etanol, glicerin, aceton, butanol, 1,3-propandiol, acid lactic, acid citric 3. Obinerea de polimeri biodegradabili de origine microbian: acid polilactic, xantan, polihidroxialcanoai - Anual se produc 150 mil. t mase plastice, din care 25 mil. t sunt nedegradabili i se acumuleaz n mediu

Produse chimice obinute prin procedee biotehnologice

Etanolul - se obine prin fermentaia zaharurilor cu drojdii - materie prim de baz n industria chimic, practic orice compus chimic putndu-se obine pornindu-se de la etanol. - bioetanol Glicerina - produs secundar al fermentaiei alcoolice - pentru a obine cantiti mari de glicerin, calea de metabolizare anaerob a zaharurilor trebuie modificat pentru a se produce cantiti mari de glicerin i nu de alcol etilic Acetona i butanolul - au fost produse prin fermentaie nc din anul 1914, cu bacterii din specia Clostridium acetobutylicum pe baz de zaharuri, prin fermentaie aerob. Avantaje comparativ cu obinerea petrochimic: - folosete materii prime regenerabile - prin inginerie genetic au fost create noi varieti de microorganisme care pot crete pe reziduuri - cantitatea mare de ape reziduale care se formeaz nu mai reprezint un dezavantaj - procesul de fermentaie poate avea loc la 60C, iar solvenii produi pot fi izolai din mediul de fermentaie prin evaporare pe msur ce se formeaz.

Produse chimice obinute prin procedee biotehnologice

1,3-Propandiolul - reprezint o materie prim important pentru obinerea unor polimeri, dar are i utilizri de solvent i lubrifiant. - obinerea pe cale biotehnologic a 1,3-propandiolului: din glucoz, cu o tulpin de Escherichia coli recombinat

Acidul lactic - se fabric industrial prin fermentaie cu bacterii lactice, din substraturi ca glucoz, zaharoz (din melas), maltoz - este folosit ca materie prim pentru lacuri i diverse mase plastice. Acidul citric - se obine din culturi de Aspergillus niger prin fermentaie pe substraturi de glucoz sau zaharoz - este utilizat n industria alimentar i n industria chimic

Polimeri de origine microbian

Xantanul polizaharid produs de microorganismul Xanthomonas campestris -se produce la un nivel de peste 20.000 tone anual i este utilizat mai ales n industria alimentar.

Polihidroxialcanoaii de diverse tipuri, de exemplu polihidroxibutiraii, produi de un foarte mare numr de specii bacteriene (ca Bacillus megaterium) - se acumuleaz intracelular, ajungnd la un coninut de pn la 90% din greutatea n substan uscat a celulei - pot fi produi din resurse regenerabile ( zaharoz, amidon, celuloz, trigliceride), produse secundare (melas, zer, glicerin) sau chimicale (acid propionic, acid 4-hidroxibutiric). - au dezavantajul c sunt casani i au stabilitate termic sczut, de aceea se utilizeaz sub form de copolimeri, care au proprietti mai bune

Procese industriale curate realizate cu ajutorul biotehnologiilor

Decontaminarea unor materii prime - desulfurizarea petrolului - desulfurizarea crbunilor Procedee biocatalitice - industria detergenilor - hidroliza amidonului la glucoz i alte zaharuri fermentescibile cu -amilaz i amiloglucozidaz - industria maselor plastice: hidroliza acrilonitrilului la acrilamid (materia prim pentru fabricarea poliacrilamidei) cu enzima nitrilaz Degradarea i reciclarea deeurilor - epurarea biologic a apelor reziduale i obinerea de biogaz