PRUEBA PCR LATEX Referencia - Presentacin CRP/010 Estuche por 50 pruebas CRP/012 Estuche por 100 pruebas USO

La prueba de PCR en Ltex Plasmatec sirve para la determinacin cualitativa y semicuantitativa de la Protena C reactiva (PCR) en muestras de suero humano. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso In-Vitro nicamente. Solamente para uso profesional. Advertencias de Salud y Seguridad Todas las muestras de los pacientes y los reactivos deben ser tratados como potencialmente infecciosos y el usuario debe utilizar guantes protectores, careta y batas de laboratorio cuando la prueba este siendo realizada. Los elementos que no sean desechables deben ser esterilizados despus de su uso a travs de un mtodo apropiado. Los elementos desechables deben ser tratados como desechos altamente peligrosos y deben ser incinerados. Si alguno de estos materiales se derrama, estos deben ser absorbidos y destruidos como se ha explicado anteriormente. El sitio donde se vierte debe ser esterilizado con un desinfectante o con alcohol al 70%. Los reactivos de control contienen suero humano. El suero humano utilizado ha sido analizado y encontrado VIH, VCH y HbsAg Negativos. Sin embargo el reactivo debe ser tratado como potencialmente infeccioso y las precauciones apropiadas deben tomarse en cuenta cuando se utilicen. El producto tambin contiene sales buffer que incluyen sodio azido como preservativo. Ver hoja sobre material de de seguridad. Precauciones Analticas No modifique el procedimiento de esta prueba. De ninguna manera diluya o modifique los reactivos. Permita que todos los reactivos y las muestras estn a temperatura ambiente (18 30 C) antes de usarlos No intercambie reactivos de diferentes lotes. COMPOSICION Cada estuche contiene: Reactivo Ltex: Suficiente para 50 o 100 pruebas en lamina (Etiqueta amarilla). El reactivo ltex debe agitarse bien antes de usar para asegurar su homogeneidad. Control Positivo: (Etiqueta Roja). Este es suero humano con PCR positivo. Este reactivo es listo para usar y dar resultados positivos cuando se analice con PCR Ltex. Control Negativo: (Etiqueta Azul). Este es un suero de control negativo para PCR. Este reactivo es listo para usar y dar un resultado negativo cuando se pruebe con el PCR Ltex.

10x Buffer Diluyente concentrado de glicina. (Etiqueta Verde). Adicione una parte por cada nueve partes de agua destilada antes de su uso. Diluido, el diluyente tiene un pH entre 8.0 y 8.2. Pipetas/ Mezcladores/ Laminas para aglutinacin reutilizables. Instrucciones ALMACENAMIENTO Y DURABILIDAD Almacene los reactivos entre 2 8 C. NO CONGELE NINGUNO DE LSO REACTIVOS No utilice los reactivos despus de la fecha de vencimiento de la etiqueta. Deseche los reactivos si recontaminan o no muestran una correcta actividad con los controles. MATERIALES Y EQUIPO REQUIRO PERO NO PROVISTO. Vidrio pequeo o tubos de pruebas en plstico / pipetas serolgicas. PREPARACION DE LA MUESTRA Utilice suero fresco obtenido por centrifugacin de los tejidos sanguneos. La muestra puede ser almacenada entre 2 oC - 8 oC por 48 horas antes de realizar la prueba. Para periodos ms largos de tiempo el suero debe ser congelado. El suero haematico, lipaemico o contaminado debe ser desechado. PROCEDIMIENTO Principio: En presencia de Protena C reactiva (PCR) en suero de pacientes, la anti- CRP IgG unida a partculas de ltex se unen por reaccin inmunoqumica resultando en una aglutinacin visible. Protena C reactiva (PCR) es un suero constituido originalmente por su habilidad al precipitar el polisacrido C del neumococo. Caractersticamente la Protena C reactiva aparece en el suero de individuos en respuesta a varias condiciones inflamatorias o necrosis tisular y desaparece como ceden las condiciones que la causan. Es de rutina encontrarla en casos de infeccin bacteriana, fiebre reumtica activa o al g u n a s enfermedades m al i g n a s y es frecuentemente vista asociada con casos de artritis reumatoidea, infecciones virales y tuberculosis. La Protena C reactiva ha sido tambin detectada en pacientes seguida una transfusin sangunea y operaciones quirrgicas, as como en pacientes con quemaduras. METODO CUALITATIVO. 1. Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente. 2. Mezclar el reactivo de ltex para dispersar las partculas. 3. Los controles POSITIVO y NEGATIVO deben ser corridos para asegurar el apropiado desempeo del ltex. Ponga una gota de cada uno de los reactivos en el centro del crculo de reaccin. 4. Ponga una gota de aproximadamente 35 ul de suero SIN DILUIR en el centro del rea de

reaccin. Usando las pipetas desechables provistas. 5. Agregue una gota de la suspensin de ltex bien mezclada a cada rea de reaccin. 6. Usando el otro extremo de la pipeta desechable mezcle el reactivo y el suero sobre el rea del crculo de reaccin. 7. Mezcle la lmina de reaccin hacia adelante y atrs cada dos segundos por dos minutos. Lea y apunte los resultados usando los controles negativo y positivo como referencia para la aglutinacin. 8. Despus de la lectura de los resultados, enjuague la lmina con desinfectante como hipoclorito de sodio. Enjuague con agua destilada y seque. Las precauciones normales del laboratorio deben mantenerse durante el manejo de las muestras de pacientes. RESULTADOS. POSITIVO: Aglutinacin de las partculas de ltex dentro de los dos minutos, indica niveles de CRP iguales o mayores a 6 mg/L NEGATIVO: Ninguna aglutinacin de las partculas de ltex indica niveles de CRP Menores de 6 mg/L en la muestra. PROCEDIMIENTO SEMICUATITATIVO. El mtodo semicuantitativo puede ser ejecutado de la misma forma que el cualitativo usando diluciones del suero en buffer fosfato salino o glicina salina como sigue: Dilucin Suero ul Buffer salino ul uL ______\ 100uL uL ______\ 100uL _ _ 1/8 100 ul 1/16

Niveles elevados por encima del normal de CRP indican dao tisular, inflamacin o ambos con gran confiabilidad. El ltex CRP ha sido estandarizado para detectar niveles de CRP hasta o sobre 6 mg/dl, que es considerada la concentracin mnima de significancia clnica. El resultado obtenido por este ensayo debe ser considerado una parte del diagnostico diferencial y de la historia clnica del paciente. No existe relacin entre la fuerza de reaccin y los niveles de CRP. La vigilancia regular de los niveles de CRP es frecuentemente usada a manera de estimacin de la actividad de la enfermedad y gua de terapia. La determinacin de CRP es considerada de gran significacin como otro indicador de enfermedad inflamatoria. La V.S.G. por ejemplo, puede encontrarse elevada como resultado de condiciones no inflamatorias. En esas circunstancias la enfermedad inflamatoria puede excluirse si la CRP est ausente. CARACTERISTICAS DEL FUNCINAMIENTO Sensitividad Analtica: 6 (5-10) mg/L Efecto Prozona: El efecto prozona no fue detectado hasta 1600 mg/L Sensitividad del Diagnostico: 95.6% Especificidad del Diagnostico: 96.2% LIMITACIONES DEL METODO Las muestras con alta concentracin de PCR pueden dar resultados negativos (efecto prozona). Ejecute la prueba nuevamente usando una muestra de 20 L. Haemoglobina (10 g/L), bilirrubina (20 mg/dL) y lipemia (10 g/L), no interfieren. Factores Reumatoideos (100 IU/mL), interfieren. Otras sustancias pueden interferir. Los diagnsticos clnicos no se deben interpretar como un resultado nico pero deben integrar ambos datos, clnicos y de laboratorio. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Los sueros de control incluidos deben ser utilizados para verificar el procedimiento de la prueba. REFERENCIAS 1. Tillet, W.S., and Francis, T., J. Exp. Med. 52:561 (1930) 2. Dawson, S.E., Arch. Dis. Child 32:454 (1957) 3. Anderson,H.C., and McCarthy, M., Am. J. Med. 8:445 (1950) 4. Crockson, R.A., at al., Clin. Chrim. Acta 14: 435 (1966) 5. Hayashi, H., and Loggrippo, G.A., H. Ford Hosp. Med. J. 20:90 (1972) PCRP.V2 3/4/02

uL 100 uL ______\ __ \

Vol. muestra uL 6 Factor Dil 2 mg/dL

35uL 35uL 6x4 8 12 24 48 96 x 16 35uL

NIVELES NORMALES. Adultos: menor de 6 mg/L

(< 6 mg/dL)

RESULTADOS. El titulo esta expresado por la mayor dilucin que muestre aglutinacin macroscpica. INTERPRETACIN DE RESULTADOS. Reacciones ledas dentro de los dos minutos de reaccin son vlidas.