Tcnicas de Laboratorio usadas en inmunologa

OBJETIVOS
Comprender y entender las tcnicas basadas en el uso de anticuerpos. Comprender y entender las tcnicas basadas en la biologa molecular.

Saber los fundamentos tericos de las diferentes tcnicas mencionadas.

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos monoclonales sueros policlonales Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Anticuerpos monoclonales

Reconocen un slo eptopo

Son altamente especcos para el antgeno.

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Cuanticacin de antgenos por inmunoensayos Radioinmunoensayo (RIA) radioactividad colorimetra

Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Puricacin e identicacin de protenas Inmunoprecipitacin

Cromatografa de anidad

Western Blot

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Marcaje y deteccin de antgenos en clulas y tejidos Citometra de ujo y FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting)

Inmunouorescencia e inmunohistoqumica

Identicacin del tipo celular en un tejido

Detalle de la localizacin subcelular

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Medida de las interacciones antgeno-anticuerpo
Mide la anidad de un anticuerpo por un antgeno pequeo (normalmente un hapteno) La tcnica se denomina dilisis de equilibrio.

Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Anlisis de la estructura gnica y de la expresin Southern y Northern Blot
M. musculus
Sty I Kb 19.0 7.7 6.2 4.2 3.4 2.7 1.9 1.5
Eco RI Hind III Pst I Bam HI

R. norvegicus
Eco Hind RI III Pst Bam I HI

O. cuniculus
Hind III Pst Bam I HI

H. sapiens
Hind III Pst I Bam HI

0.9

0.4

dpn

10 12 14 15 16 17 18 19 20 22 Ad

4.2 Kb 2.8 Kb

-actina

Ensayo de proteccin de RNasa

Reaccin en cadena de la polimerasa

Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Ratones transgnicos y Knockout de genes dirigido. Ratones transgnicos Ver expresin ectpica de un gen determinado Ver sobreexpresin de un gen determinado Anular la expresin de un gen Introducir una mutacin en un gen determinado

Cruce de ratones

Obtencin de embriones

Cultivo de embriones

Microinyeccin de embriones

Cultivo de embriones toda la noche Transferencia a madres pseudopreadas

y ......... a los 19 das...................

Knockout de genes dirigidos Recombinacin homloga

Knockout de genes dirigidos Knock-in de genes dirigidos

OBJETIVOS
Comprender y entender las tcnicas basadas en el uso de anticuerpos. Comprender y entender las tcnicas basadas en la biologa molecular.

Saber los fundamentos tericos de las diferentes tcnicas mencionadas.

LECTURA FUERTEMENTE SUGERIDA: APNDICE III LIBRO ABAS 5th ED.