IZOLAREA VIRUSURILOR IN CULTURI CELULARE

EFECTE CITOPATICE

AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALE SISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA

AVANTAJE ANIMAL DE LAB Infectie naturala

DEZAVANTAJE Cost / etica

O.G.E.

Cost

Susceptibilitate limitata Susceptibilitate variabila

CULTURI DE CELULE

Sensibilitate buna / disponibilitate

Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv

Mediu nutritiv
solutie salina tamponata - Earle, Hanks substane nutritive (SFV, lizate proteice)- Serul fetal de vitel (SFV) contineo serie de factori ce actioneaza pentru a stimula cresterea si diviziunea celular (hormoni nonpeptidici, factori de adeziune ce intervin n atasarea celulelor pe un substrat celular solid, factori de crestere) SFV este adugat n proportie de 10% n mediul de cretere si 2-5% n mediul de ntretinere vitamine si aminoacizi eseniali antibiotice i antifungice

Condiii necesare Asespsie riguroasa pH adecvat Temperatur constant atmosfer cu 5-10% CO2

CLASIFICAREA CULTURILOR DE CELULE

Culturi de organ Culturi de celule dispersate
Culturi primare- pot fi mentinute n vitro timp limitat (3-5 pasaje). Tulpini celulare pot fi mentinute n vitro timp de 50-60 de pasaje. - Cariotipul cromozomial este cel al tipului de origine - diploid - ceea ce certific netumorigenitatea culturii Linii celulare - CELULE TRANSFORMATE

CELULE TRANSFORMATE
1. conin gene implicate n imortalizarea n vitro (cultivare nr. infinit
pasaje) modificari cromozomiale => cariotip heteroploid

2. se multiplic haotic, cerine nutritive foarte sczute (se multiplic la concentraii foarte sczute de SFV), glicoliza anaerob = sursa principala de energie 3. membran celular modificat n compoziie (absena fibronectinei => independente de aderarea la un suport solid
4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferit de esutul din care deriv 5. telomeraza activa 6. inoculate la animale, pot reproduce tumora de provenienta 7. modificarea morfologiei 8. au antigene de suprafa diferite codificate de virus sau de celulele gazda=> neoantigene 9. aglutineaz uor cu lectinele (antigene vegetale) 10. modificarea mesagerilor secunzi (AMPc)

Echipament de laborator

Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si propagarea culturilor de celule si izolarea virala

TIPURI DE EFECTE CITOPATICE

SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS, herpes PICNOTIC LITIC- enterovirusuri (v.
poliomielitice; v. Coxsackie; ECHO)

INCLUZIONAR- intranuclear, intracitomplasmatic, mixt

EFECT CITOPATIC SINCITIAL

Celule normale

ECP picnotic litic

EFECT CITOPATIC INCLUZIONAR

Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal

Intranuclear

-acidofil: papovavirusuri - bazofil: adenovirusuri

Mixt: v herpetice, v rujeolos

INCLUZII CITOPLASMATICE (RABIE)

patognomonic in SNC - CORPII BABES NEGRI in cornul lui Ammon si neuronii piramidali din cerebel

INCLUZII INTRANUCLEARE
(BOALA CU INCLUZII CMV)

INCLUZII INTRANUCLEARE