DIAGNSTICO

?Clnico

Coprolgico Coprocultivos Hemtico Genitourinarios Biopsias Precipitacin Inmunodiagnstico Aglutinacin Complemento Anticuerpos marcados Gentico

?Directo=Etiolgico=Morfolgico

?Indirecto

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamente Helmintos (huevos)

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamente Protozoos (trofozoitos de amebas)

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamente Protozoos (quistes)

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamente Protozoos (flagelados)

Principales parsitos notificados al Sistema de Informacin Microbiolgica (SIM)

Total anual 2002 Anisakis Ascaris lumbricoides Blastocystis hominis Chilomastix mesnili Cryptosporidium sp Cyclospora cayetanensis Echinococcus granulosus Entamoeba coli Entamoeba histolytica Entamoeba sp Enterobius vermicularis Fasciola hepatica Giardia lamblia Leishmania donovani Leishmania sp Plasmodium falc iparum Plasmodium malariae Plasmodium ovale Plasmodium sp Plasmodium vivax Schistosoma haematobium Schistosoma mansoni Taenia saginata Taenia sp Toxocara canis Toxoplasma gondii Trichomonas vaginalis Trichuris trichiura Otros Nmero de laboratorios declarantes 35 35 36 37 3 64 409 4 121 30 5 20 33 5 262 0 730 2 24 120 2 8 3 23 2 0 39 1 37 78 198 86 146 2001 5 37 378 2 88 0 10 37 15 2 197 2 561 3 26 114 8 7 10 38 1 2 29 39 1 58 168 72 122 2000 1 37 308 1 54 1 38 32 3 0 243 1 508 4 16 100 3 10 18 29 0 1 19 29 4 61 164 35 92 1999 2 10 213 1 97 0 29 31 6 3 232 2 523 1 7 84 2 3 16 22 1 0 19 47 1 45 165 11 88

Artefactos o pseudoparsitos-I

Huevo Trichuris

Polen

Polen

Polen

Artefactos o pseudoparsitos-II
Cel. sanguneas Eritrocitos Macrfagos

Clula vegetal

Pelo vegetal

Espiral vegetal

Cuerpos grasos

Cristal CharcotLeyden

Levaduras

Polen

Huevos insectos

Parsito vegetal

TOMA DE MUESTRAS

?Recomendaciones al paciente ?Nmero de muestras ?Cantidad ?Recipientes y seguridad ?Examen y consistencia de las heces

CONSERVACIN DE LAS HECES-I

?Fijador de Schaudinn

HgCl2 , etanol, glicerina y actico Quistes y trofozoitos Tinciones No concentracin Schaudinn+PVA Quistes y trofozoitos (ptimo) Tinciones Concentracin Laborioso Acetato sdico, actico y formol Conserva la mayora de las formas parasitarias Concentracin No Hg Preparacin fcil y vida media muy alta

?Alcohol polivinilico

?SAF

CONSERVACIN DE LAS HECES-II

?Formol

5% (quistes) y 10% (huevos helmintos) No valido para trofozoitos Concentracin No tincin Preparacin sencilla

?MYF

Mertiolato, yodo y formol Permite concentracin? Preserva y tie

?Azida sdica

Conserva casi todas las formas Muy txica

EXAMEN MACROSCPICO

?Consistencia de las heces

Formes Semiformes Blandas Lquidas

?Presencia de mucus y sangre

?Formas parasitarias macroscpicas

Limpieza Montaje

EXAMEN MICROSCPICO DIRECTO

?Heces muco-sanguinolentas (rpido o fijar en PVA) ?Lquidas o semilquidas (pocas horas)

Mtodos de observacin

?Formes o semiformes (hasta 24h) ?Cmo realizarlo? Toma de muestra Tincin opcional Observacin

Cubreobjetos Heces Solucin fisiolgica

Frotis fecal para tincin permanente

Toma de muestra

Aplicacin de la muestra

Extensin de la muestra

EXAMEN MICROSCPICO PREVIA CONCENTRACIN Homogeneizar ?Operaciones previas Restos voluminosos Restos pesados

Fsicos ?Mtodos

Sedimentacin Flotacin

Fsico-qumicos (difsicos)

Efectividad del diagnostico en funcin del mtodo seleccionado

Operaciones previas

Homogeneizacin

Eliminacin restos voluminosos

Eliminacin restos pesados

MTODOS DE SEDIMENTACIN-I

?Faust e Ingalls ?Jahnes y Hodges

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Agua glicerinada Tamizar Sedimentar (1h) Decantar sobrenadante Repetir el proceso dos veces (45 y 30 min) Observar sedimento

?Baroody y Most

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Agua glicerinada o alcoholizada Tamizar Sedimentar 30 s Centrifugar sobrenadante (1500rpm, 1-2 min) Resuspender y centrifugar de nuevo Repetir el ultimo proceso hasta clarificar Observar sedimento

MTODOS DE SEDIMENTACIN-II

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Tween-80 al1% Tamizar Llenar tubo con pinza abierta (2 m aprox) Sedimentar (20 min) Cerrar pinza y abrir llave Observar

?Van Someren (Modificado por Gregoire)

MTODOS DE FLOTACIN-I
Capas obtenidas- flotacin

1. Homogeneizar 2. Reposar 45 min 3. Observar capa superior ?Fulleborn (salmuera) 1. 2. 3. 4. 5. Homogeneizar Llenar tubo Borrel hasta formar menisco Cubreobjetos sobre menisco Reposar 15 min Observar

?Willis (salmuera)

Toma de muestra en un mtodo basado en la flotacin

MTODOS DE FLOTACIN-II

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. ?Faust (sulfato de zinc)

Homogeneizar en agua Tamizar y recoger tamizado en tubo Centrifugar 1500 rpm, 5 min Decantar y repetir hasta clarificar Resuspender sedimento en SO 4Zn Centrifugar 1500 rpm, 2min Observar

1. Homogeneizar directamente en SO4Zn 2. Tamizar 3. Seguir pasos 6 y 7. ?Faust simplificado

MTODOS DE FLOTACIN-III

1. 2. 3. 4. ?Janeckso y Urbanyi

Homogeneizar (Biyoduro-yoduro) Tamizar Centrifugar 2500 rpm, 3min Observar

1. Homogeneizar en sacarosa 2. Centrifugar 500 g, 5 min 3. Observar ?Sheather

MTODOS DIFASICOS-I

?Rivas

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Homogeneizar (cido actico 5%) Tamizar Tubo ensayo (tamizado+eter) Emulsionar Centrifugar 1500rpm, 1min Observar sedimento
Capas obtenidas

?Ritchie 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Homogeneizar (solucin salina) Tamizar Centrifugar 1500rpm, 1min Decantar, resuspender y repetir hasta clarificar Resuspender en formol 10% y aadir eter Emulsionar Centrifugar 1500rpm, 2min Observar sedimento

MTODOS DIFASICOS-II

?Ritchie simple

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Homogeneizar en formol 10% Tamizar Tubo ensayo (tamizado+eter) Emulsionar Centrifugar 1500rpm, 2min Observar sedimento

?Bailenger

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Homogeneizar (aceto-acetico) Sedimentar 60 s Tamizar el sobrenadante Tubo ensayo (tamizado+eter) Emulsionar Centrifugar 1500rpm, 1min Observar sedimento

MTODOS DIFASICOS-III

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Homogeneizar en MYF Tamizar Tubo ensayo (tamizado+eter) Emulsin estable Centrifugar 1500rpm, 1min Observar sedimento 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

?Blagg y col.

?Thebauld

Homogeneizar (TCA+formol) Tamizar y sedimentar 1min Ampolla decantacin (tamizado+eter) Emulsionar y reposar 2min Tomar el liquido claro del fondo Centrifugar 1500rpm, 1min Resuspender en solucin densa (NaBr) Centrifugar 1500rpm, 1min Observar pelcula superficial

MTODOS DIFASICOS-IV

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Homogeneizar (sulfato sodico) Aadir gota de Triton Tamizar Tubo ensayo (tamizado+eter) Emulsionar Centrifugar 1500rpm, 1min Observar sedimento

?Faust e Ingalls

PARASEP (mtodo comercial patentado)

PARASEP (mtodo comercial patentado)

METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-I Diagnstico de Enterobius vermicularis ?Tcnica de Graham (cinta adhesiva)
Modalidad 1 Modalidad 2

?Tcnica de Markey (torunda vaselinada)

METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-II Mtodos migratorios (Strongyloides stercoralis) ?Metodo de Baermann y Brugg ?Metodo de Baermann y Lee

?Metodo de la placa de agar (S. stercoralis)

METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-I ?tiles para pocas especies ?Intensidad / encuesta epidemiolgica ?Orientacin tratamiento ?Seguimiento eficacia

?Metodo de Kato-Katz

METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-II ?Mtodo de Stoll 1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. 2. 3. 4. 5. 4g heces + Erlenmeyer 60ml NaOH 0.1M 10 bolas vidrio Homogeneizar 0.15ml en porta + cubre Huevos contados x 100 = huevos/g 4g heces + Erlenmeyer 4ml antiformina, mezclar y reposar 1h Solucin sacarosa hasta 40ml Tomar 0.1ml en porta + cubre Huevos contados x 100 = huevos/g

?Mtodo de Cadwell

?Mtodo de la cmara McMaster

1. 2. 3. 4. 5.

3g heces + Erlenmeyer Aadir liquido hasta 45ml Homogeneizar Llenar cmara Huevos contados x 100=huevos/g

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-I Schistosoma haematobium ?Sedimentacin Tomar la orina Depositarla en copa sedimentacin Sedimentacin 1-2h Centrifugar 2000g, 2min Observar sedimento ?Filtracin 1. 2. 3. 4. Filtrar la orina y extraer filtro Colocarlo en un portaobjetos Aadir 1 gota de Lugol Contar huevos en 10 ml de orina Infeccin leve: 1-49 h/10ml Infeccin grave: mas de 50 h/10ml

1. 2. 3. 4. 5.

Filtracin

Toma de orina y filtracin

Pase de aire

S. haematobium

Tincin con Lugol

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-II Microfilarias ?Triple concentracin 1. 2. 3. 4. 5. 6. Aadir timerosal al 1% en la orina Dejar reposar toda la noche (Baermann) Recoger 10-30ml Centrifugar 400g, 3-5 min Resuspender sedimento en solucin salina Centrifugar y examinar
Dispositivo Baermann

Loa loa

?Filtracin Igual que para Schistosoma

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-III Trichomonas vaginalis ?Muestras 1. 2. 3. 4. Exudado vaginal Exudado uretral Semen Orina

Trichomonas vaginalis

?Mtodos 1. Examen directo: Diluir con solucin salina Centrifugar si es orina 2. Tincin 3. Cultivo

DIAGNOSTICO HEMATICO-I

Parsitos

1. 2. 3. 4. 5.

Plasmodium sp Babesia sp Trypanosoma sp Microfilarias Leishmania sp

Gota gruesa

Muestra

1. Sangre 2. Cundo tomarla?

Frotis fino

Mtodos

1. 2. 3. 4.

Examen directo Gota gruesa Frotis fino Previa concentracin

Plasmodium

Tripomastigotes

Trypanosoma

Amastigotes

DIAGNOSTICO HEMATICO-II Tinciones 1. Giemsa 2. Wright 1. Gota gruesa (100 campos; inmersin) 2. Frotis (200-300 campos; inmersin) 1. Fijar frotis o hemolizar gota gruesa antes de 48h 2. Conservacin larga (resina de montaje)

Examen preparaciones

Recomendaciones

Mtodos de concentracin

1. 2. 4. 6. 7.

Capa opalina=Buffy Coat QBC; 3. Knott Filtracin; 5. Gradiente Triple centrifugacin PHA

DIAGNOSTICO HEMATICO-III Extensin de la capa opalina (buffy coat) 1. Llenar un capilar de hematocrito (Wintrobe) 2. Centrifugar 100g, 30min 3. Examinar buffy coat Capas: plasma, clulas blancas (buffy coat) y eritrocitos

Filtracin Concentracin de Knott 1. Sangre citratada (1ml) + formol 2% (10ml) 2. Centrifugar 500g, 2min 3. Observar sedimento 1. 2. 3. 4. 5. 6. Sangre citratada (1ml)+agua 10ml Agitar (hemolisis) y filtrar (5 micras) Pasar 10ml agua destilada Pasar aire por el filtro Pasar 3ml de metanol Retirar filtro, secar y teir

DIAGNOSTICO HEMATICO-IV Centrifugacin en gradiente 1. Ficoll-Hypaque (4ml)+Sangre heparinizada (4ml) 2. Centrifugar 400g, 40min Capas: plasma, cel.blancas, parsitos, cel.rojas Triple centrifugacin 1. 2. 3. 4. Centrifugar la sangre heparinizada 300g, 10min Recoger sobrenadante y centrifugar 500g, 10min Recoger sobrenadante y centrifugar 900g, 10min Examinar sedimento Mtodo fitohemaglutinina (PHA) 1. 2. 3. 4. 5. Sangre heparinizada+PHA (0.1mg/ml final) Mezclar suavemente Centrifugar 150g, 10min Centrifugar sobrenadante 700g, 10min Examinar sedimento

Metodo Quantitative Buffy Coat (QBC)

ANALISIS DE MUESTRAS ESPECIALES

?Esputo

Paragonimus sp Quiste hidatidico Amebosis pulmonar Larvas Ascaris, Ancylostoma, Necator o Strongyloides Cryptosporidium Tripanosomiosis africana Meningoencefalitis amebiana Angiostrongylus cantonensis

?Lquido cefalorraqudeo

?Aspirados

Duodenales Sigmoidoscopia Gastroscopia Abscesos pulmonares o hepticos Ganglios linfticos, medula y bazo Ulceras cutneas

CULTIVO DE PARASITOS ?Coprocultivos de helmintos

Cultivo en placa Petri Cultivo fecal en tira de papel

?Coprocultivos de protozoos ?Inoculacin animal ?Xenodiagnstico