Habilitao para Laboratrios de Microbiologia

CONFEDERAO NACIONAL DA INDSTRIA CNI Presidente: Armando de Queiroz Monteiro Neto

SERVIO NACIONAL DE APRENDIZAGEM INDUSTRIAL SENAI Conselho Nacional Presidente: Armando de Queiroz Monteiro Neto SENAI - Departamento Nacional Diretor-Geral: Jos Manuel de Aguiar Martins Diretora de Operaes: Regina Maria de Ftima Torres

AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA Diretor-Presidente: Dirceu Raposo de Mello Diretores Cludio Maierovitch P. Henriques Franklin Rubinstein Maria Ceclia Martins Brito Vitor Hugo Costa Travassos da Rosa

Confederao Nacional da Indstria Servio Nacional de Aprendizagem Industrial Departamento Nacional

Habilitao para Laboratrios de Microbiologia

Braslia 2006

 2000. Eurachem Netherlands.

Direitos reservados desta edio, em lngua portuguesa, para a ANVISA

ANVISA Gerncia-Geral de Laboratrios de Sade Pblica - GGLAS

SENAI/DN Unidade de Tecnologia Industrial - UNITEC

Nota sobre a publicao Este documento aplica-se habilitao na Reblas e complementar Norma NBR ISO 17 025,de janeiro de 2001, verso brasileira, Requisitos Gerais para Competncia de Laboratrios de Ensaios e Calibrao.

FICHA CATALOGRFICA Brasil. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Habilitao para laboratrios de microbiologia / Ministrio da Sade, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia : Ministrio da Sade, 2006. 37 p. (Srie A. Normas e Manuais Tcnicos) (Sries Temticas da Anvisa. Srie Habilitao; v. 3) ISBN 85-334-1212-6 obra completa; ISBN 885-334-1218-5 volume 3. 1. Microbiologia. 2. Laboratrios. 3. Controle de qualidade. I. Ttulo. II. Srie. NLM QW 4 Catalogao na fonte Coordenao-Geral de Documentao e Informao Editora MS OS 2006/0836

Apresentao

com enorme satisfao que colocamos disposio dos profissionais de sade do setor regulado, da comunidade acadmica e dos demais interessados as Sries Temticas Anvisa. Trata-se de uma nova linha editorial que vem suprir uma carncia de publicaes oficiais destinadas orientao tcnico-cientfica de diversos setores ligados Vigilncia Sanitria, somando-se a outras iniciativas editoriais no mbito do Ministrio da Sade que visam a democratizar o acesso s informaes em Sade Pblica, como direito de cidadania. Sem periodicidade definida ou limitao de ttulos, as Sries Temticas fornecem s diversas reas tcnicas da Anvisa um canal apropriado de consolidao e disseminao de contedos especficos orientados para pblicos de interesse, sempre levando em considerao os elementos de convenincia, oportunidade e prioridade dos temas propostos. O assunto que inaugura as Sries Temticas Habilitao de Laboratrios. Nessa primeira srie de publicaes, o tema ser abordado em dez volumes, resultantes de um acordo de cooperao entre a rea de Laboratrios da Anvisa e a Rede EURACHEM, detentora original dos ttulos traduzidos para o portugus. A Rede EURACHEM formada por organizaes nacionais europias que tm como objetivo o estabelecimento de um sistema de rastreabilidade internacional dos resultados de medio qumica, alm de promover as boas prticas laboratoriais. Esperando que esta publicao seja de significativa importncia para os profissionais e usurios do Sistema Nacional de Vigilncia Sanitria, colocamo-nos disposio para o recebimento de comentrios e de sugestes para as prximas edies das Sries Temticas Anvisa.

ANVISA

Prefcio
A Sociedade Brasileira de Microbiologia parabeniza a Anvisa pela publicao deste manual EURACHEM (GUIA EA 04/10) traduzido para a lngua portuguesa. Esse texto vem preencher uma importante lacuna encontrada nas publicaes tcnicas e cientficas disponveis em nosso pas relativas ao tema habilitao de laboratrios de microbiologia. Embora seja destinado principalmente para laboratrios que realizam ensaios microbiolgicos em alimentos e amostras ambientais, os princpios gerais so abrangentes e, assim, podem ser extrapolados para outras reas da microbiologia. A publicao deste manual no poderia ser mais oportuna, pois de mxima urgncia e importncia que os laboratrios de microbiologia do Pas tenham acesso fcil orientao adequada, cientificamente embasada, para o aperfeioamento de suas atividades e para o atendimento dos requisitos necessrios para sua habilitao pelas autoridades competentes nacionais e internacionais. O aprimoramento da legislao brasileira, em consonncia com regulamentos internacionais, determina que os laboratrios que realizam ensaios microbiolgicos busquem implementar um Sistema da Qualidade, aperfeioando-o sempre que necessrio. Esta publicao ser um importante instrumento de orientao para os laboratrios que desejem atingir excelncia nos trabalhos que realizam.

Bernadette D.G.M. Franco e Mrio Killner Sociedade Brasileira de Microbiologia www.sbmicrobiologia.org.br

Mensagem do Diretor-Geral do SENAI

A publicao da Srie Temtica da EURACHEM traz consigo a expectativa do SENAI de difundir conhecimento para a rede de laboratrios brasileiros, tornando acessveis informaes que contribuam para o seu desenvolvimento tcnico-cientfico, com ganhos na produtividade, na qualidade dos produtos e servios e na eliminao de desperdcios. Sua elaborao e conseqente disseminao fazem parte de uma sucesso de aes entre a Anvisa e o SENAI voltadas para laboratrios analticos, explicitando a relao de cooperao entre as instituies para a promoo de aes que venham beneficiar a sade pblica. Esperamos que essa iniciativa traga ganhos definitivos para toda a sociedade brasileira, seja contribuindo para a implementao das boas prticas laboratoriais resultando em maior confiabilidade dos resultados analticos , como, tambm, promovendo a segurana dos produtos e servios oferecidos populao.

Jos Manuel de Aguiar Martins Diretor-Geral do SENAI

Mensagem da Presidente da EURACHEM

com grato prazer que me dirijo rede de laboratrios brasileiros, cuja misso contribuir com as suas boas prticas e resultados analticos de qualidade para a garantia e desenvolvimento do bem-estar pblico. Neste perodo de grande alerta e empenhamento coletivo em introduzir novos desenvolvimentos cientficos e tcnicos no sentido de garantir comparabilidade de resultados de medies, emergentes de cadeias de rastreabilidade bem definidas, por meio da utilizao de metodologias validadas, particularmente louvvel o esforo sistemtico de formao e desenvolvimento das instituies brasileiras, particularmente o que me dado a perceber da Anvisa. A EURACHEM uma rede de organizaes nacionais europias, juntamente com a Comisso Europia, que tem por objetivo estabelecer um sistema para a rastreabilidade internacional dos resultados de medies qumicas e promover as boas prticas laboratoriais. Constituindo um foco para a qumica analtica e para as questes pertinentes de qualidade, a EURACHEM um frum propcio discusso de problemas comuns e ao desenvolvimento de abordagens informadas das questes tcnicas e de poltica laboratorial. Laboratrios primrios, de calibrao e de servios, sentem a necessidade de ver reconhecida a sua competncia e a qualidade dos resultados que produzem e, para isso, procuram a habilitao por organismos nacionais ou internacionais independentes. Habilitados e habilitadores movem-se pela mesma exigncia de qualidade e, assim sendo, os princpios orientadores sero os mesmos. A EURACHEM, sensvel e atenta s necessidades e prioridades dos laboratrios, tem, por intermdio dos seus grupos de trabalho, produzido guias temticos, que, pela sua oportunidade, se tm revelado da mais elevada e vasta aceitao. Para mais fcil assimilao, so cada vez mais os pases a reconhecer a necessidade e a levar prtica a preparao de tradues de alguns desses guias nas vrias lnguas, sendo j vrios os pases europeus cujas delegaes nacionais da EURACHEM realizaram tal tarefa com sucesso gratificante. De todos, talvez o mais divulgado seja o Guia para a Quantificao da Incerteza em Medies Analticas. De qualquer modo, todos eles esto completamente acessveis na lngua inglesa, livres de qualquer limitao de acesso ou impresso, na pgina da EURACHEM. Tambm por meio dos links s pginas das EURACHEM nacionais, possvel, em alguns casos, ter acesso s respectivas tradues. Igualmente, diversos organismos tm solicitado autorizao para policopiar e divulgar pelos seus membros tais Guias, o que tem sido apoiado pela EURACHEM, salvaguardadas as questes de respeito pela propriedade intelectual. Mantendo forte colaborao com organismos internacionais afins e complementares, a EURACHEM prima por uma postura de correo cientfica e de harmonizao de procedimentos e abordagens, o que cimenta e expande a sua misso. Por uma feliz coincidncia, a manifestao de interesse da Anvisa em traduzir os Guias da EURACHEM e torn-los acessveis aos seus associados ocorre num perodo em que um qumico analista portugus preside a EURACHEM. Em nome da instituio que represento e em meu nome pessoal, com enorme orgulho e satisfao que aponho o meu nome a esta iniciativa da Anvisa e de seus dirigentes, que ser, para alm do que de positivo representa para a nao brasileira, um valioso contributo para o fortalecimento da aproximao entre os nossos dois pases de lngua portuguesa e destes com o mundo. Lisboa, maro de 2004. Dra. Maria Filomena Gomes Ferreira Crujo Cames Presidente da EURACHEM

Sumrio
Apresentao Prefcio Mensagem do Diretor-Geral do SENAI Mensagem da Presidente da EURACHEM 1 2 3 Introduo e objetivo do documento Pessoal Ambiente 3.1 3.2 3.3 4 5 6 Dependncias Monitorao ambiental Higiene 11 12 12 12 15 15 16 17 18

Validao de mtodos de ensaios Incerteza de medio Equipamentos manuteno, calibrao e verificao de desempenho 6.1 6.2 Manuteno Calibrao e verificao de desempenho

18 19 22 22 22 22 23 24 24 24 25 25

Reagentes e meios de cultura 7.1 7.2 7.3 7.4 Reagentes Meios preparados no laboratrio Meios prontos para uso Rotulagem

Materiais de referncia e culturas de referncia 8.1 8.2 Materiais de referncia Culturas de referncia

9 10

Amostragem Manuseio e identificao das amostras

11 12

Descarte de resduos contaminados Garantia da qualidade dos resultados / controle da qualidade do desempenho 12.1 Controle interno da qualidade 12.2 Avaliao externa da qualidade (ensaios de proficincia)

26 26

26 27 27 28 28 31 32 33 34 36

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Relatrios de Ensaio APNDICES Apndice A Apndice B Apndice C Apndice D Apndice E Apndice F

INTRODUO E OBJETIVO DO DOCUMENTO

Os requisitos gerais para habilitao so apresentados na Norma Internacional Requisitos Gerais para a Competncia de Laboratrios de Ensaio e Calibrao (ISO/ IEC 17 025 1. ed., 1999), daqui por diante chamada de ISO 17 025. Todos esses requisitos devem ser atendidos pelos laboratrios que buscam habilitao. Este documento complementa a ISO 17 025, por fornecer orientao especfica para laboratrios que realizam ensaios microbiolgicos. Fornece orientao detalhada sobre a interpretao da ISO 17 025 para aqueles que realizam anlises de diferentes produtos e matrizes. A orientao aplicvel ao desempenho de todas as medies objetivas, quer de rotina, fora-de-rotina, ou como parte da pesquisa e desenvolvimento. Embora seja destinado principalmente para ensaios microbiolgicos ambientais e de alimentos, os princpios gerais podem ser aplicados a outras reas. A ISO 17 025 continua sendo o documento oficial e, em casos de discordncia, os organismos de acreditao devero se pronunciar sobre questes no-resolvidas. A orientao dada neste documento til tambm para laboratrios que estejam buscando habilitao usando outras normas de qualidade, tais como BPL (Boas Prticas de Laboratrio), BPF (Boas Prticas de Fabricao) e BPC (Boas Prticas Clnicas). 1.3 Este documento pode ser considerado um "Documento de Aplicao" para ensaios microbiolgicos, conforme descrito no Anexo B da ISO 17 025. Este documento foi produzido em conjunto pela EURACHEM e a European Accreditation como um meio de promover uma abordagem consistente para habilitao de laboratrios entre entidades-membro da European Accreditation, particularmente entre aquelas participantes do Acordo Multilateral da European Accreditation. Ensaios microbiolgicos incluem testes de esterilidade, deteco, isolamento, enumerao e identificao de microrganismos (vrus, bactrias, fungos e protozorios) e seus metablitos em diferentes materiais e produtos, ou qualquer espcie de ensaio que utilize microrganismos como parte do mtodo de deteco, bem como incluem o uso de microrganismos para ensaios ecolgicos. Portanto, algumas das orientaes deste documento, por exemplo, em ambiente de laboratrio, devero ser apropriadamente interpretadas. Este documento tambm pode servir de orientao para laboratrios que atuam em reas relacionadas microbiologia, tais como bioqumica, biologia molecular e cultura celular, embora possam haver requisitos adicionais para tais laboratrios. Este documento enfoca a qualidade dos resultados de ensaio e no est voltado especificamente para questes de sade e segurana. Porm, as prticas de laboratrio devem obedecer aos regulamentos nacionais de sade e segurana. importante observar que, em alguns casos, questes de sade e segurana podem ter um efeito sobre a qualidade dos ensaios e o laboratrio dever levar isso em considerao. As definies dos termos usados so apresentadas no Apndice A.

1.4

1.5

1.6

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

11

PESSOAL

2.1

Ensaios microbiolgicos devem ser realizados ou supervisionados por pessoal experiente, qualificado em microbiologia ou equivalente. Qualificaes alternativas podem satisfazer aos requisitos quando o pessoal tiver ampla experincia relativa ao objetivo de habilitao do laboratrio. O pessoal deve ter experincia em trabalhos prticos antes de obter autorizao para realizar, sem superviso, tarefas cobertas pelo objetivo da acreditao, ou antes de ser considerado apto para supervisionar o trabalho acreditado. Regulamentos nacionais especficos podem prevalecer sobre a orientao dada neste documento. Se o laboratrio incluir opinies e interpretaes dos resultados de ensaios nos relatrios, isso deve ser feito por pessoal autorizado, com experincia adequada e conhecimento relevante para a aplicao especfica, incluindo, por exemplo, requisitos legais, tecnolgicos e critrios de aceitao. A gerncia do laboratrio deve garantir que todo o pessoal tenha recebido treinamento adequado para o desempenho competente de ensaios e operao de equipamentos. Isso inclui treinamento em tcnicas bsicas, tais como: semeadura em placas, contagem de colnias, trabalhos em condio de assepsia etc., com o uso de critrios para determinar nveis de aceitao. O pessoal do laboratrio somente pode realizar ensaios se for reconhecidamente capacitado para faz-lo ou se estiver sob superviso adequada. A capacitao contnua deve ser monitorada, sendo capaz de detectar necessidades de reciclagem. Quando um mtodo ou tcnica no for de uso constante, pode ser necessria a verificao do desempenho do pessoal previamente realizao dos ensaios. O intervalo entre as verificaes de desempenho deve ser estabelecido e documentado. A interpretao dos resultados de ensaio para identificao e verificao de microrganismos fortemente relacionada com a experincia do analista e deve ser monitorada regularmente para cada analista. Em alguns casos, pode ser mais apropriado capacitar o analista para a realizao de uma tcnica ou para o uso de um instrumento especfico, ao invs de capacit-lo execuo de um mtodo analtico completo.

2.2

2.3

2.4

AMBIENTE

3.1

Dependncias 3.1.1 Um laboratrio tpico composto pelas instalaes de ensaio (onde os ensaios microbiolgicos e as atividades associadas so conduzidos) e por instalaes auxiliares (acessos, corredores, prdios da administrao, vestirios, banheiros, almoxarifados, arquivos etc.). Em geral, existem requisitos ambientais especficos para as instalaes de ensaio.

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Sries Temticas Anvisa

Laboratrio

Srie Habilitao

Volume 3

Dependendo dos tipos de ensaio realizados, o acesso ao laboratrio microbiolgico deve ser restrito ao pessoal autorizado. Quando tais restries estiverem em vigor, o pessoal deve ser informado quanto ao que segue: (a) Uso estabelecido para uma rea especfica; (b) Restries impostas ao trabalho dentro dessas reas; (c) As razes para a existncia de tais restries; (d) Nveis de conteno adequados. 3.1.2 O laboratrio deve possuir um fluxo que minimize riscos de contaminao cruzada, quando esses riscos forem significativos para o tipo de ensaio realizado. As maneiras para alcanar esse objetivo podem ser: (a) Construir o laboratrio segundo o princpio de disposio "sem possibilidade de retorno"; (b) Trabalhar de maneira seqencial, tomando precaues apropriadas para garantir a integridade dos ensaios e das amostras (por exemplo, com uso de recipientes fechados); (c) Separar atividades por tempo ou espao. 3.1.3 Geralmente, se consideram boas prticas possuir locais separados, ou reas claramente designadas, para o seguinte: Recepo de amostras e reas de armazenamento; Preparao das amostras para ensaio (por exemplo: um local separado deve ser usado para produtos em p com possibilidade de contaminao elevada); Anlise das amostras, incluindo a incubao; Manuteno dos microrganismos de referncia; Preparao dos meios de cultura, equipamentos e vidrarias, incluindo esterilizao; Avaliao de esterilidade, quando pertinente; Descontaminao. A rea de lavagem (aps descontaminao) pode ser compartilhada com outras reas do laboratrio, desde que sejam tomadas as precaues necessrias para impedir a contaminao cruzada por traos de substncias que possam interferir no desenvolvimento microbiano. A necessidade da separao fsica deve ser julgada com base nas atividades especficas do laboratrio (por exemplo: quantidades e tipos de ensaios conduzidos). Materiais de laboratrio no devem ser transportados com freqncia de uma rea para outra para evitar contaminao cruzada

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

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acidental. No laboratrio de biologia molecular, cada rea de trabalho (ambientes de trabalho com baixas/mdias/altas cargas de DNA) deve ter pipetas, ponteiras, centrfugas, tubos etc. de uso exclusivo. 3.1.4 O espao deve ser suficiente para permitir que as reas de trabalho sejam mantidas limpas e arrumadas. O espao deve ser proporcional ao volume de anlises realizadas e organizao interna do laboratrio. O espao deve estar de acordo com o especificado pela legislao nacional, quando existente. Os recintos de trabalho devem ter ventilao e temperatura apropriadas. Isso pode ser obtido por ventilao natural ou forada ou pelo uso de um condicionador de ar. Devem ser usados filtros apropriados quando do uso de condicionadores de ar. Os filtros devem ser adequadamente inspecionados, conservados e substitudos de acordo com o tipo de trabalho realizado. A reduo de contaminao pode ser obtida por meio de: paredes, tetos, pisos e bancadas com superfcie lisa (rugosidade de uma superfcie determinada pela facilidade de limpeza). No se recomenda azulejo para revestimento de bancadas; cantos arredondados entre os pisos, paredes e tetos; abertura mnima de janelas e portas durante a realizao de ensaios; protetores contra insolao, colocados externamente ao edifcio; fcil acesso para limpeza dos protetores contra insolao, caso seja impossvel coloc-los do lado de fora do edifcio; tubulaes que no passem por cima das superfcies de trabalho, exceto quando hermeticamente vedadas; sistema de ventilao dotado de entrada de ar com filtro antipoeira; instalaes para lavagem das mos, preferencialmente com torneiras acionadas sem o uso das mos; armrios at o teto; eliminao de qualquer madeira spera e sem tratamento; superfcies de madeiras, conexes e ferragens adequadamente seladas; materiais e equipamentos estocados de modo a facilitar a limpeza; eliminao de moblia, documentos ou outros itens, alm daqueles estritamente necessrios s atividades de ensaio.

3.1.5

3.1.6

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Sries Temticas Anvisa

Laboratrio

Srie Habilitao

Volume 3

Essa lista no est completa e nem todos os exemplos se aplicam a todas as situaes. O ideal que tetos tenham superfcie lisa, com iluminao embutida. Quando isso no for possvel (como em caso de tetos suspensos e luzes pendentes), o laboratrio deve ter registros de controle dos aspectos que possam resultar em riscos para a higiene e ter meios eficazes para solucion-los, como, por exemplo, com um programa de inspeo e limpeza das superfcies. 3.1.7 Quando os laboratrios esto localizados em reas de produo industrial, o pessoal deve estar ciente do potencial de contaminao das reas de produo e deve demonstrar que tomou as medidas apropriadas para evitar tais ocorrncias.

3.2

Monitorao ambiental 3.2.1 Deve haver um programa de monitorao ambiental apropriado, como, por exemplo, a exposio de placas ao ar e swabs de superfcies. As contagens ambientais aceitveis devem ser determinadas e deve haver um procedimento documentado para quando estes limites forem ultrapassados. A anlise dos dados deve permitir a determinao de tendncias nos nveis de contaminao.

3.3

Higiene 3.3.1 Deve haver um programa de limpeza documentado para instalaes, equipamentos e superfcies de laboratrio que considere resultados de monitorao ambiental e a possibilidade de contaminao cruzada, bem como um procedimento para lidar com derramamentos. Deve haver espao suficiente de armazenamento para que seja possvel a limpeza, evitando o acmulo de poeira. O registro de dados em papel deve ser reduzido ao mnimo e deve ser proibido plantas e pertences pessoais na rea de trabalho do laboratrio. Roupas apropriadas ao tipo de ensaio realizado (incluindo, se necessrio, proteo para cabelo, barba, mos, sapatos etc.) devem ser usadas no laboratrio de microbiologia e removidas antes da sada do local de trabalho. Isso particularmente importante no laboratrio de biologia molecular, onde, por exemplo, o deslocamento de uma rea de alta carga de DNA para uma de baixa carga de DNA possa introduzir contaminao cruzada. Em muitos laboratrios, um jaleco de laboratrio pode ser suficiente. Instalaes adequadas para lavagem das mos devem estar disponveis.

3.3.2

3.3.3

3.3.4

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

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VALIDAO DE MTODOS DE ENSAIOS

4.1

A validao de mtodos de ensaios microbiolgicos deve refletir as reais condies de trabalho. Isso pode ser obtido pelo uso de produtos naturalmente ou artificialmente contaminados, com um nvel predeterminado de organismos contaminantes. O analista deve estar ciente de que a adio de organismos contaminantes a uma matriz somente simula, de maneira superficial, a presena dos contaminantes de ocorrncia natural. Contudo, freqentemente essa a melhor e nica soluo disponvel. A validao ir depender do mtodo e da aplicao. Em caso de matrizes no especificadas no procedimento-padro, o laboratrio dever validar os mtodos para estas matrizes.

4.2

Mtodos qualitativos de ensaios microbiolgicos, em que o resultado expresso em termos de presena/ausncia, assim como procedimentos de confirmao e identificao, quando necessrio, devem ser validados pela determinao da especificidade, erro relativo, falso-positivo, falso-negativo, limite de deteco, efeito da matriz, repetitividade e reprodutibilidade (ver Apndice A para definies). Para mtodos quantitativos de ensaios microbiolgicos, a especificidade, sensibilidade, erro relativo, desvio positivo, desvio negativo, repetitividade, reprodutibilidade e limite de quantificao dentro de uma variabilidade definida devem ser considerados e, se necessrio, determinados quantitativamente. As diferenas relativas s matrizes devem ser levadas em conta ao se analisar diferentes tipos de amostras. Os resultados devem ser avaliados por mtodos estatsticos apropriados. Os laboratrios devem guardar os dados de validao dos kits analticos comerciais usados no laboratrio. Esses dados de validao podem ser obtidos por meio de ensaios colaborativos e pela validao de dados encaminhados pelo fabricante e avaliados por uma terceira parte (por exemplo: AOAC). Se os dados de validao no estiverem disponveis ou no forem inteiramente aplicveis, o laboratrio deve ser responsvel pela validao do mtodo. Se for necessrio o uso de uma verso modificada do mtodo para que o mesmo seja atendido, de acordo com a mesma especificao do mtodo original, o laboratrio deve fazer comparaes usando replicatas. O delineamento experimental e a anlise de resultados devem ser estatisticamente vlidos. Mesmo quando a validao estiver concluda, o analista precisar ainda verificar se o desempenho documentado pode ser atingido, por exemplo, pelo uso de amostras artificialmente contaminadas ou materiais de referncia com matrizes relevantes.

4.3

4.4

4.5

4.6

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Sries Temticas Anvisa

Laboratrio

Srie Habilitao

Volume 3

INCERTEZA DE MEDIO

5.1

A definio internacional para incerteza de medio apresentada no Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia: 1993 da ISO (ver Apndice B). A abordagem geral para avaliar e expressar a incerteza nos ensaios prevista pelos organismos de habilitao europeus aquela baseada nas recomendaes do Bureau Internacional de Pesos e Medidas (BIPM), conforme descrito no Guia para Expresso da Incerteza de Medio, 1995, ISO Genebra. Ensaios microbiolgicos geralmente esto na categoria daqueles que dispensam o clculo rigoroso, metrolgica e estatisticamente vlidos, da incerteza de medio. geralmente apropriado basear a estimativa da incerteza somente em dados de repetitividade e reprodutibilidade, mas, de maneira ideal, incluindo a tendncia (por exemplo, a partir dos resultados dos esquemas de ensaios de proficincia). Os componentes individuais da incerteza devem ser identificados e demonstrados como estando sob controle, com avaliao de sua contribuio para a variabilidade dos resultados. Alguns componentes (por exemplo: efeitos da pipetagem, pesagem e diluio) podem ser prontamente medidos e facilmente avaliados para demonstrar uma contribuio desprezvel incerteza total. Outros componentes (por exemplo: estabilidade e preparao da amostra) no podem ser diretamente medidos e sua contribuio no pode ser avaliada de uma maneira estatstica, mas sua importncia para a avaliao dos resultados deve ser tambm considerada.

5.2

5.3

Espera-se que laboratrios de ensaios microbiolgicos acreditados tenham cincia da distribuio homognea, ou no, dos microrganismos nas matrizes que analisam e levem isto em conta por ocasio da subamostragem. Contudo, no se recomenda que esse componente de incerteza seja includo em estimativas, a no ser que as necessidades do cliente indiquem o contrrio. Os principais motivos para isso so que a incerteza decorrente da distribuio de microrganismos dentro da matriz do produto no uma funo do desempenho do laboratrio, podendo ser especfica para uma amostra individual analisada, e porque mtodos de ensaio devem especificar o tamanho da amostra a ser usada, levando em conta a baixa homogeneidade. O conceito de incerteza no pode ser aplicado diretamente aos resultados de ensaios qualitativos, tais como aqueles obtidos em anlises de deteco ou de identificao. Todavia, fontes individuais de variabilidade, como, por exemplo, o desempenho do reagente e a interpretao do analista, devem ser identificadas e deve ser demonstrado estarem sob controle. Adicionalmente, para ensaios em que o limite de deteco uma indicao de adequao importante, a incerteza associada ao inculo deve ser estimada e sua importncia avaliada. Os laboratrios tambm devem estar cientes da ocorrncia de resultados falso-positivos e falso-negativos associados s anlises qualitativas por eles usadas.

5.4

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

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EQUIPAMENTOS - MANUTENO, CALIBRAO E VERIFICAO DE DESEMPENHO

Como parte de seu sistema da qualidade, o laboratrio deve ter um programa documentado para a manuteno, calibrao e verificao de desempenho de seus equipamentos. 6.1 Manuteno (O guia sobre manuteno de equipamentos pode ser encontrado na ISO 7.218). 6.1.1 A manuteno de equipamentos crticos deve ser realizada em intervalos especificados, de acordo com vrios fatores, como, por exemplo, a taxa de uso. Devem ser mantidos registros detalhados da manuteno. Exemplos de manuteno de equipamentos e intervalos so apresentados no Apndice F. Deve-se prestar ateno para evitar contaminao cruzada provocada por diferentes itens utilizados no laboratrio, como, por exemplo: itens descartveis devem estar limpos e esterilizados quando apropriado; vidraria deve ser corretamente limpa e esterilizada quando necessrio. De maneira ideal, os laboratrios devem ter uma autoclave separada para descontaminao. Contudo, apenas uma autoclave pode ser aceitvel desde que sejam tomadas precaues adequadas para separar cargas de descontaminao e de esterilizao e que esteja em vigor um programa documentado de higienizao dos ambientes interno e externo da autoclave. 6.1.3 Tipicamente, os seguintes itens de equipamentos devero ser submetidos limpeza, reviso ou inspeo e, quando pertinente, esterilizao: Itens para servios gerais - aparelhos de filtrao, recipientes de vidro ou plstico (frascos, tubos de ensaio), placas de Petri de vidro ou plstico, instrumentos de amostragem, fios ou alas de platina ou de nquel/cromo ou de material plstico; Banhos-maria, incubadoras, fluxos laminares, autoclaves, homogeneizadores, geladeiras, freezers; Equipamentos volumtricos pipetas, dispensadores automticos, semeadores em espiral; Instrumentos de medio - termmetros, cronmetros, balanas, medidores de pH, contador de colnias.

6.1.2

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Sries Temticas Anvisa

Laboratrio

Srie Habilitao

Volume 3

6.2

Calibrao e verificao de desempenho 6.2.1 O laboratrio deve estabelecer um programa para calibrao e verificao de desempenho dos equipamentos que possuem influncia direta sobre os resultados dos ensaios. A freqncia de calibrao e a verificao de desempenho devero ser determinadas pelo histrico documentado do equipamento e sero baseadas na necessidade, tipo e desempenho anterior do equipamento. Os intervalos entre calibrao e verificao devem ser inferiores ao necessrio para o equipamento permanecer em condies adequadas de uso. Exemplos de intervalos de calibrao e verificaes tpicos de desempenho para vrios instrumentos de laboratrio so apresentados no Apndice D e no Apndice E. Dispositivos para medio de temperatura (a) Quando a temperatura possuir efeito direto sobre o resultado de uma anlise, ou for decisiva para o desempenho correto do equipamento, os dispositivos medidores de temperatura, como termmetros de vidro, termopares e termmetros com resistncia de platina, usados em incubadoras e autoclaves, devem ser de qualidade apropriada para alcanar a preciso necessria. (b) A calibrao dos dispositivos deve ser rastrevel a padres nacionais e internacionais de temperatura. Quando a preciso permitir, podem ser usados dispositivos que atendam s especificaes do fabricante (por exemplo: ISO 1 770 para termmetros de vidro). Tais dispositivos podem ser usados para monitorar geladeiras e freezers de armazenamento e tambm incubadoras e banhos-maria, quando a tolerncia aceitvel em torno da temperatura-alvo assim o permitir. necessria a verificao do desempenho de tais dispositivos. 6.2.3 Incubadoras, banhos-maria, estufas de esterilizao A estabilidade da temperatura, a uniformidade de distribuio da temperatura e o tempo necessrio para atingir condies de equilbrio em incubadoras, banhos-maria, estufas de esterilizao e salas com temperaturas controladas devem ser inicialmente estabelecidos e documentados, principalmente em relao ao uso normal do equipamento (por exemplo: posio e altura das pilhas das placas Petri e o espao entre essas pilhas). A manuteno das caractersticas registradas durante a validao inicial dos equipamentos deve ser verificada e registrada aps cada reparo ou modificao significativa. Os laboratrios devem monitorar a temperatura de operao desse tipo de equipamento e guardar os registros. 6.2.4 Autoclaves, incluindo preparadores de meios A seqncia a seguir mostra a abordagem necessria para a calibrao e monitorao de desempenho. Para garantia da qualidade, devem-

6.2.2

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

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se avaliar materiais e itens processados por autoclavagem, de maneira a detectar eventuais variaes de processamento dentro de um mesmo lote e entre lotes diferentes. (a) Autoclaves devem ser capazes de satisfazer tolerncias especficas de tempo e temperatura. Panelas de presso com apenas vlvulas de segurana no podem ser utilizadas. Sensores usados para controle ou monitoramento dos ciclos de operao necessitam de calibrao e o desempenho dos cronmetros deve ser verificado. (b) A validao inicial deve incluir estudos de desempenho (pesquisas de distribuio espacial da temperatura) para cada ciclo de operao e cada configurao de carga usada na prtica. Esse processo deve ser repetido quando houver reparo ou modificao s i g n i f i c a t i v a (por exemplo: troca do programador ou sonda do termorregulador, rearranjos de carga, ciclos de operao) ou quando indicado pelos resultados de verificaes do controle de qualidade do meio de cultura. Sensores de temperatura em nmero suficiente devem ser posicionados dentro da carga (por exemplo: sensores contidos em recipientes com lquidos ou meios) de tal forma que as diferenas de localizao possam ser demonstradas. No caso de preparadores de meios, em que o aquecimento uniforme no pode ser demonstrado de outra forma, o uso de dois sensores, um adjacente sonda de controle e o outro afastado desta, pode ser considerado apropriado. A validao e revalidao devem considerar a adequao dos tempos de elevao e decrscimo da temperatura, bem como o tempo efetivo da temperatura de esterilizao. (c) Devem ser fornecidas instrues operacionais claras, com base nos perfis de aquecimento determinados para usos tpicos durante a validao/revalidao. Devem ser estabelecidos critrios de aceitao/rejeio e registros de operaes da autoclave, incluindo temperatura e tempo adotados em cada ciclo. (d) A monitorao pode ser feita de uma das seguintes formas: (i) uso de um termopar e de um registrador para produzir um grfico ou relatrio impresso; (ii) observao direta e registro da temperatura mxima alcanada e tempo nessa temperatura. Alm da monitorao direta da temperatura de uma autoclave, a eficincia de sua operao durante cada ciclo pode ser verificada pelo uso de indicadores qumicos ou biolgicos para fins de esterilizao/descontaminao. Tiras indicadoras ou fitas de controle de esterilizao devem ser usadas somente para indicar que uma carga foi processada e no para demonstrar que a esterilizao tenha sido feita de forma correta.

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Volume 3

6.2.5

Pesos e balanas

Pesos e balanas devem ser calibrados regularmente (de acordo com seu uso pretendido), de forma rastrevel, em intervalos regulares. 6.2.6 Dispositivos volumtricos

(a) Dispositivos volumtricos, tais como dispensadores automticos, dispensadores/diluidores, pipetas manuais mecnicas e pipetas descartveis, podem ser usados no laboratrio de microbiologia. Os laboratrios devem realizar uma verificao inicial dos dispositivos volumtricos e ento realizar verificaes regulares para garantir que os equipamentos estejam operando dentro da especificao requerida. A verificao pode no ser necessria para vidraria que foi certificada para uma tolerncia especfica. Os dispositivos devem ser verificados quanto preciso do volume dispensado, em comparao com o volume pr-estabelecido (para diversos ajustes diferentes, no caso de instrumentos com volume varivel). A repetitividade dos volumes dispensados deve ser avaliada. (b) Para dispositivos volumtricos descartveis os laboratrios devem adquirir os suprimentos de empresas com um sistema de qualidade reconhecido. Aps a validao inicial da adequao do dispositivo, recomenda-se a execuo de verificaes aleatrias de preciso. Se o fornecedor no tiver um sistema de qualidade reconhecido, os laboratrios devem verificar a adequao de cada lote do dispositivo. 6.2.7 Outros dispositivos

Medidores de condutividade, medidores de oxignio, medidores de pH e outros instrumentos similares devem ser verificados regularmente ou antes de cada uso. As solues-tampo usadas para fins de verificao devem ser guardadas em condies apropriadas e devem ser identificadas com uma data de validade. Quando a umidade for importante para o resultado do ensaio, higrmetros devem ser calibrados, sendo a calibrao rastrevel a padres nacionais ou internacionais. Cronmetros, incluindo o cronmetro da autoclave, devem ser verificados, usando-se um cronmetro calibrado ou o sinal de tempo nacional. Quando centrfugas forem usadas em procedimentos de ensaio, deve ser feita uma determinao da importncia da fora centrfuga. Quando esta for crtica, a centrfuga precisar ser calibrada.

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REAGENTES E MEIOS DE CULTURA

7.1

Reagentes Os laboratrios devem assegurar que a qualidade dos reagentes usados seja apropriada para o ensaio em questo. Devem verificar a adequao de cada lote de reagentes crticos para o ensaio, inicialmente e durante sua validade, usando microrganismos-controle positivos e negativos que sejam rastreveis a colees de culturas nacionais ou internacionais reconhecidas.

7.2

Meios preparados no laboratrio 7.2.1 O desempenho apropriado dos meios de cultura, diluentes e outras solues preparadas no laboratrio deve ser verificado, quando relevante, com relao: sobrevivncia ou recuperao dos microrganismosalvo; inibio ou supresso dos microrganismos no-alvo; a propriedades bioqumicas (diferenciais e diagnsticas); a propriedades fsicas (por exemplo: pH, volume e esterilidade). Para avaliao da recuperao ou sobrevivncia de microrganismos deve ser dada preferncia a procedimentos quantitativos (ver tambm ISO 11 133, Parte 1 e 2). 7.2.2 Matrias-primas (formulaes comerciais desidratadas e constituintes individuais) devem ser armazenadas sob condies apropriadas, como, por exemplo, em ambiente frio, seco e protegido da luz. Todos os recipientes, especialmente aqueles com meios desidratados, devem ser hermeticamente fechados. Meios desidratados que apresentem alteraes, como, por exemplo, empedrados ou com mudana de colorao, no devem ser usados. gua destilada, deionizada, ou produzida por osmose reversa, livre de substncias bactericidas, inibidoras ou interferentes, deve ser usada na preparao, a no ser que o mtodo de teste especifique de outra forma. A validade dos meios preparados, mantidos nas condies definidas de armazenamento, deve ser determinada e controlada.

7.2.3 7.3

Meios prontos para uso 7.3.1 Todos os meios, diluentes e outras solues, adquiridos no estado de prontos para uso, ou parcialmente prontos, necessitam de

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Volume 3

validao antes do uso. A avaliao de desempenho para recuperao ou sobrevivncia dos microrganismos-alvo e a inibio ou supresso dos microrganismos no-alvo deve ser quantitativa. Atributos, tais como propriedades fsicas e bioqumicas, devem ser avaliados usando-se critrios objetivos. 7.3.2 Como parte da validao, o laboratrio deve possuir conhecimento das especificaes de qualidade do fabricante, o que inclui, pelo menos, o seguinte: Nome dos meios e lista dos ingredientes, incluindo quaisquer suplementos; Prazo de validade e critrios de aceitao aplicados; Condies de armazenamento; Freqncia de amostragem; Verificao da esterilidade; Verificao de crescimento dos microrganismos de controle alvo e no-alvo (com suas referncias da coleo de cultura) e critrios de aceitao; Verificaes fsicas e critrios de aceitao aplicados; Data de edio da especificao. 7.3.3 Lotes de meios devem ser identificveis. Cada lote recebido deve vir acompanhado pela evidncia de que satisfaz a especificao de qualidade. O laboratrio dever se certificar de que o fabricante notificar quaisquer alteraes na especificao da qualidade do produto. Quando o fabricante de meios prontos para uso ou parcialmente prontos possuir um sistema da qualidade reconhecido, como, por exemplo, a srie ISO 9 000, a verificao de conformidade com a especificao inicial do produto pode ser realizada conforme a expectativa de consistncia de qualidade dos produtos recebidos. Em outras circunstncias so necessrias verificaes para cada lote recebido.

7.3.4

7.4

Rotulagem Os laboratrios devem garantir que todos os reagentes, incluindo solues estocadas, meios, diluentes e outras solues, sejam adequadamente rotulados, com, pelo menos, indicaes quanto identidade, concentrao, condies de armazenamento, data de preparao, prazo de validade e/ou perodos de armazenamento recomendados. O responsvel pela preparao deve ser identificvel por intermdio de registros.

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MATERIAIS DE REFERNCIA E CULTURAS DE REFERNCIA

8.1

Materiais de referncia Materiais de referncia e materiais de referncia certificados (ver definies no Apndice A) fornecem rastreabilidade em medies e so usados, por exemplo: Para demonstrar a preciso dos resultados; Para calibrar equipamentos; Para monitorar o desempenho do laboratrio; Para validar mtodos; Para possibilitar uma comparao de mtodos. Quando possvel, materiais de referncia devem ser usados em matrizes apropriadas.

8.2

Culturas de referncia 8.2.1 Culturas de referncia so necessrias para o estabelecimento de desempenho dos meios e kits de ensaio, para a avaliao contnua desses meios e kits e para a validao de mtodos. A rastreabilidade necessria no estabelecimento de desempenho dos meios de cultura, na validao de mtodos de anlise e kits de ensaio. Para demonstrar a rastreabilidade, os laboratrios devem usar cepas de microrganismos de referncia obtidas diretamente de uma coleo nacional ou internacional reconhecida, quando esta existir. Como alternativa, podem ser usadas culturas comerciais que o laboratrio tenha comprovado ter propriedades equivalentes. Seguindo a orientao da ISO 11.133-1, cepas de referncia podem ser sub-cultivadas uma vez, para fornecer estoques de referncia. Verificaes bioqumicas e de pureza devem ser feitas em paralelo, conforme necessrio. Recomenda-se guardar estoques de referncia em alquotas congeladas ou liofilizadas. Culturas de trabalho, para uso de rotina, devem ser subculturas primrias do estoque de referncia (ver Apndice C sobre preparao de estoques de trabalho). Uma vez descongelados, os estoques de referncia no devem ser re-congelados e reutilizados. Estoques de trabalho no devem ser subcultivados, a no ser que isto seja estabelecido por um mtodo padro ou que os laboratrios comprovem que no houve nenhuma mudana em qualquer propriedade pertinente. Os estoques de trabalho no devem ser subcultivados em substituio a estoques de referncia. Culturas comerciais somente podem ser usadas como culturas de trabalho.

8.2.2

8.2.3

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Volume 3

AMOSTRAGEM

9.1

Em muitos casos, laboratrios de ensaio no so responsveis pela amostragem inicial para a obteno das amostras para ensaio. Quando forem responsveis por isso, recomenda-se que a amostragem possua um sistema de qualidade associado e, de preferncia, que o laboratrio tenha esse procedimento habilitado. O transporte e o armazenamento devem ser realizados em condies que mantenham a integridade da amostra (por exemplo: resfriada ou congelada). As condies devem ser monitoradas, mantendo-se os respectivos registros. Quando apropriado, a responsabilidade pelo transporte das amostras e pelo seu armazenamento entre a amostragem e a chegada no laboratrio deve ser claramente documentada. Os ensaios das amostras devem ser realizados assim que possvel aps a amostragem e estar de acordo com as normas e/ ou regulamentos nacionais/internacionais vigentes. A amostragem deve ser executada somente por pessoal treinado e deve ser feita com assepsia, usando-se equipamento esterilizado. As condies ambientais, como, por exemplo, a contaminao do ar e a temperatura, devem ser monitoradas e registradas no local da amostragem. O horrio da amostragem deve ser registrado. MANUSEIO E IDENTIFICAO DAS AMOSTRAS

9.2

9.3

10

10.1

A flora microbiana pode ser sensvel a fatores como, por exemplo, temperatura ou durao do armazenamento e transporte da amostra. importante verificar e registrar o estado da amostra na ocasio de recebimento pelo laboratrio. O laboratrio deve ter procedimentos que cubram o recebimento e a identificao da amostra. Se houver amostra insuficiente, ou de baixa qualidade devido deteriorao fsica, temperatura incorreta, embalagem danificada ou rotulagem deficiente, o laboratrio deve entrar em contato com o cliente, antes de decidir testar ou recusar a amostra. Em qualquer caso, o estado da amostra deve ser indicado no relatrio do ensaio. O laboratrio deve registrar todas as informaes relevantes e, de modo particular, as seguintes informaes: (a) Data e, quando relevante, horrio de recebimento; (b) Estado da amostra no recebimento e, quando necessrio, a temperatura; (c) Caractersticas da operao de amostragem (data da amostragem, condies de amostragem, etc).

10.2

10.3

Habilitao para Laboratrio de Microbiologia

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10.4

As amostras que sero analisadas posteriormente devem ser armazenadas sob condies adequadas para minimizar as variaes na populao microbiana eventualmente presente. As condies de armazenamento devem ser definidas e registradas. As embalagens e rtulos das amostras podem estar altamente contaminados e devem ser manipulados e estocados com cuidado, a fim de evitar qualquer disseminao de contaminao. A subamostragem feita no laboratrio imediatamente antes dos ensaios considerada como parte do mtodo de ensaio. Deve ser feita de acordo com as normas nacionais ou internacionais, caso existam, ou por mtodos internos validados. Procedimentos de subamostragem devem ser desenvolvidos levando-se em conta a distribuio desigual dos microrganismos nas amostras (guia geral apresentado na ISO 6 887 e ISO 7 218). Deve haver um procedimento escrito para a reteno e descarte de amostras. As amostras devem ser guardadas at que os resultados do ensaio estejam disponveis, ou por um tempo maior, se necessrio. As amostras sabidamente contaminadas devem ser descontaminadas antes de serem descartadas (ver 11.1). DESCARTE DE RESDUOS CONTAMINADOS

10.5

10.6

10.7

11

11.1

O descarte correto dos materiais contaminados no pode afetar diretamente a qualidade dos ensaios. Devem existir procedimentos para minimizar a possibilidade de contaminao dos materiais ou do ambiente de ensaio. Contudo, esta uma questo de boas prticas de laboratrio e deve obedecer aos regulamentos ambientais ou de sade e segurana nacionais/ internacionais (ver tambm a ISO 7 218). GARANTIA DA QUALIDADE DOS RESULTADOS / CONTROLE DA QUALIDADE DO DESEMPENHO

12

12.1

Controle interno da qualidade 12.1.1 O controle interno da qualidade abrange todos os procedimentos assumidos por um laboratrio para a avaliao contnua de seu trabalho. O principal objetivo assegurar a consistncia dos resultados dirios e sua conformidade com critrios definidos. 12.1.2 necessrio um programa de verificaes peridicas que demonstre que a variabilidade (entre os analistas e entre equipamentos ou materiais etc.) est sob controle. Todas as anlises que fazem parte do escopo da habilitao do laboratrio precisam estar includas. O programa pode envolver:

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o uso de amostras artificialmente contaminadas; o uso de materiais de referncia (incluindo os de ensaios de proficincia); replicatas de ensaios; replicatas da avaliao dos resultados de ensaio. O intervalo entre essas verificaes ser influenciado pela elaborao do programa e pelo nmero dos ensaios reais. Recomenda-se que, para monitorar o desempenho, os ensaios incorporem controles, quando possvel. 12.1.3 Em casos especiais, um laboratrio pode ser habilitado para um ensaio que seja raramente solicitado a fazer. Em tais casos, o programa de controle interno da qualidade em andamento pode ser inadequado, havendo necessidade de um esquema que demonstre desempenho satisfatrio, conduzido em paralelo aos ensaios. 12.2 Avaliao externa da qualidade (ensaios de proficincia) 12.2.1 Os laboratrios devem participar regularmente de ensaios de proficincia que sejam relevantes a seus escopos de habilitao, devendo ser dada preferncia a esquemas de ensaios de proficincia que utilizem matrizes adequadas. Em casos especficos, a participao pode ser obrigatria. 12.2.2 Os laboratrios devem usar avaliao externa da qualidade, no apenas para detectar problemas no laboratrio, mas tambm para verificar a validade de todo o sistema da qualidade. 13 RELATRIOS DE ENSAIO

13.1

Se o resultado da enumerao negativo, ele deve ser relatado como "no detectado para uma unidade definida" ou "menor que o limite de deteco para uma unidade definida". O resultado no deve ser apresentado como "zero para uma unidade definida", a no ser que ele seja um requisito legal. Os resultados de ensaios qualitativos devem ser relatados como "detectado/ no detectado numa quantidade ou volume definido". Eles podem ser tambm expressos como "menor que um nmero especificado de organismos para uma unidade definida", quando o nmero de microrganismos especificado estiver acima do limite de deteco do mtodo e isto tiver sido combinado com o cliente. Quando uma estimativa da incerteza do resultado do ensaio for expressa no relatrio, quaisquer limitaes precisam ser esclarecidas com o cliente (particularmente se a estimativa no incluir a falta de homogeneidade da distribuio dos microrganismos na amostra).

13.2

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APNDICES
APNDICE A

GLOSSRIO Calibrao Conjunto de operaes que estabelece, sob condies especificadas, a relao entre valores indicados por um instrumento ou sistema de medio, ou valores representados por uma medida materializada ou um material de referncia, e os valores correspondentes das grandezas estabelecidos por padres. Notas: O resultado de uma calibrao permite tanto o estabelecimento dos valores do mensurando para as indicaes como a determinao de correes a serem aplicadas. Uma calibrao pode, tambm, determinar outras propriedades metrolgicas, como o efeito das grandezas de influncia. O resultado de uma calibrao pode ser registrado em um documento, algumas vezes denominado certificado de calibrao ou relatrio de calibrao.[VIM: ISO 1993 Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia.] Material de referncia certificado Material de referncia, acompanhado por um certificado, com um ou mais valores de propriedades, e certificado por um procedimento que estabelece sua rastreabilidade obteno exata da unidade na qual os valores da propriedade so expressos, sendo que cada valor certificado acompanhado por uma incerteza para um nvel de confiana estabelecido. [ISO Guia 30:1992] Aplicado a ensaios microbiolgicos quantitativos o menor nmero de microrganismos dentro de uma variabilidade definida que pode ser determinada sob condies experimentais do mtodo em avaliao. Aplicado a ensaios microbiolgicos qualitativos o menor nmero de microrganismos que pode ser detectado, mas em nmeros que no podem ser estimados com preciso. Ocorre quando o mtodo alternativo fornece um resultado negativo sem confirmao, quando o mtodo de referncia apresenta um resultado positivo. Este desvio se torna um resultado falso-negativo quando o resultado verdadeiro puder ser comprovado como sendo positivo.

Limite de determinao

Limite de deteco Desvio negativo

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Desvio positivo

Ocorre quando o mtodo alternativo fornece um resultado positivo sem confirmao, quando o mtodo de referncia apresenta um resultado negativo. Este desvio se torna um resultado falso-positivo quando o resultado verdadeiro puder ser comprovado como sendo negativo. Termo coletivo para cepas de referncia, estoques de referncia e culturas de trabalho. Microrganismos identificados pelo menos em nvel de gnero e de espcie, catalogados e descritos de acordo com suas caractersticas, de preferncia, mencionando sua origem. [ISO 11 133-1:2000] Normalmente obtidos a partir de uma coleo nacional ou internacional reconhecida.

Culturas de referncia Cepas de referncia

Material de referncia

Material ou substncia que tem um ou mais valores de propriedade que so suficientemente homogneos e bem estabelecidos, para serem usados na calibrao de um aparelho, na avaliao de um mtodo de medio ou na atribuio de valores a materiais. [ISO Guia 30:1992]

Mtodo de referncia

Mtodo suficientemente investigado, que descreve clara e exatamente as condies e procedimentos necessrios para a medio de uma ou mais grandezas que foram demonstrados como tendo exatido e preciso compatvel com seu uso pretendido e que podem ser, portanto, usados para avaliar a exatido de outros mtodos para a mesma medio, particularmente para permitir a caracterizao de um material de referncia. Normalmente, um mtodo padro nacional ou internacional.

Estoques de referncia Veracidade relativa Repetitividade

Conjunto de culturas idnticas distintas, obtidas por uma subcultura nica a partir da cepa de referncia. [ISO 11 133-1:2000] Grau de correspondncia entre os resultados do mtodo sob avaliao e aqueles obtidos usando-se um mtodo de referncia reconhecido. Grau de concordncia entre os resultados de medies sucessivas do mesmo mensurando sob as mesmas condies de medio. [VIM: ISO 1993 Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia.]

Reprodutibilidade Grau de concordncia entre os resultados de medies do mesmo mensurando realizadas sob condies variadas de medio.

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[VIM: ISO 1993 Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia.] Sensibilidade Frao do nmero total de culturas ou colnias positivas corretamente identificadas na inspeo presuntiva. [ISO 13 843:2000] Frao do nmero total de culturas ou colnias negativas corretamente identificadas na inspeo presuntiva. [ISO 13 843:2000] Subcultura primria de um estoque de referncia. [ISO 11 133-1:2000] Confirmao, pela obteno de evidncia objetiva, de que os requisitos para uso ou aplicao especificamente pretendidos foram cumpridos. [ISO 9 000:2000] Confirmao, pela obteno de evidncia objetiva, de que os requisitos especificados foram cumpridos. [ISO 9 000:2000]

Especificidade

Cultura de trabalho Validao

Verificao

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APNDICE B

REFERNCIAS 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. ISO/IEC 17 025, Requisitos gerais para a competncia dos laboratrios de ensaio e calibrao. ISO 7 218, Microbiologia de alimentos e substncias alimentcias para animais Regras gerais para exames microbiolgicos. ISO 6 887-1, Preparao de diluies. ISO Guia 30, Termos e definies usados em relao a materiais de referncia. ISO 9 000; Sistemas para gesto da qualidade fundamentos e vocabulrio. VIM: ISO 1993 - Vocabulrio Internacional de Termos Fundamentais e Gerais de Metrologia. ISO (CIPM): 1995, Guia para a expresso da incerteza de medio. Minuta ISO/DIS 16.140, Microbiologia de alimentos. Protocolo para a validao de mtodos alternativos. ISO 13 843, Qualidade da gua Guia para validao de mtodos microbiolgicos. ISO 11 133-1, Microbiologia de alimentos e substncias alimentcias para animais. Diretrizes para preparao e produo de meios de cultura. Parte 1 Diretrizes gerais sobre garantia de qualidade para a preparao de meios no laboratrio. Minuta ISO/FDIS 11 133-2, Microbiologia de alimentos e substncias alimentcias para animais. Diretrizes para preparao e produo de meios de cultura. Parte 2 Diretrizes prticas sobre ensaios de desempenho em meios de cultura. EN 12 741, Biotecnologia Laboratrios para pesquisa, desenvolvimento e anlise Orientao para operaes em laboratrios de biotecnologia.

11.

12.

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APNDICE C

Uso geral das culturas de referncia

Cepa de referncia proveniente de fonte reconhecida por rgo de habilitao

Sub-cultivada uma s vez

Estoques de referncia
No Permitido
Liofilizados, mantidos em nitrognio lquido, congelados, etc. Condies especificadas e tempos de armazenamento recomendados

Mantidos sob condies especificadas

Descogelar/reconstituir

Sub-cultivada uma s vez

Cultura de trabalho Condies especificadas e tempos de armazenamento recomendados

Uso de rotina

* Verificaes de pureza e testes bioqumicos em paralelo, conforme apropriado. Todas as partes do processo devem ser inteiramente documentadas, mantendo-se registros detalhados de todas as etapas.

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APNDICE D

Guia de calibrao e verificaes de calibrao Estas informaes so fornecidas para fins de orientao e a freqncia ser baseada na necessidade, tipo e desempenho prvio do equipamento. TIPO DE EQUIPAMENTO
Termmetros de referncia (lquido em vidro) Termopares de referncia

REQUISITO
Recalibrao inteiramente rastrevel Um nico ponto (p. ex.: verificao do ponto de congelamento) Recalibrao inteiramente rastrevel Verificao com termmetro de referncia

FREQNCIA SUGERIDA
A cada 5anos Anualmente A cada 3anos Anualmente Anualmente

Verificao com termmetro de referncia no Termmetros de trabalho e Termopares ponto de congelamento e/ou faixa de temperaturas operacionais de trabalho Balanas Pesos de calibrao Peso(s) aferidor(es) Calibrao inteiramente rastrevel Calibrao inteiramente rastrevel Verificao com peso calibrado ou verificao na balana imediatamente aps a calibrao rastrevel

Anualmente A cada 5 anos Anualmente

Vidrarias volumtricas Calibrao gravimtrica na tolerncia exigida Microscpios Higrmetros Centrfugas Calibrao rastrevel de micrmetro de mesa (onde apropriado) Calibrao rastrevel Calibrao rastrevel ou verificao com um tacmetro independente, conforme apropriado

Anualmente Inicialmente Anualmente

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APNDICE E Guia sobre validao de equipamentos e verificao de desempenho Estas informaes so fornecidas para fins de orientao e a freqncia ser baseada na necessidade, tipo e desempenho prvio do equipamento. TIPO DE EQUIPAMENTO
Equipamento com temperatura controlada (incubadoras, banhos, geladeiras, freezers) Estufas de esterilizao

REQUISITO
(a) Estabelecer estabilidade e uniformidade de temperatura Monitorar a temperatura (a) Estabelecer estabilidade e uniformidade de temperatura Monitorar a temperatura

FREQNCIA SUGERIDA
(a) Inicialmente, a cada 2 anos e aps reparo / modificao Diariamente/ a cada uso (a) Inicialmente, a cada 2 anos e aps reparo / modificao A cada uso (a) Inicialmente, a cada 2 anos e aps reparo / modificao A cada uso (a) Inicialmente, a cada ano e aps reparo/ modificao Semanalmente A cada uso (a) Inicialmente, e aps reparo /modificao

Autoclaves

(a) Estabelecer caractersticas para cargas / ciclos Monitorar a temperatura / tempo

Capelas de segurana

(a) Estabelecer desempenho

Monitorao microbiolgica Monitorao do fluxo de ar Capelas com fluxo laminar de ar (a) Estabelecer desempenho

Verificar com exposio de placas Semanalmente Cronmetro Microscpios Medidores de pH Verificar com sinal de tempo nacional Verificar alinhamento Ajustar usando, pelo menos, duas soluestampo de qualidade adequada Verificar o zero e a leitura com peso aferidor (a) Verificar condutividade Verificar contaminao microbiana Anualmente Diariamente / a cada uso Diariamente / a cada uso

Balanas Deionizadores e unidades de osmose reversa

Diariamente/a cada uso (a) Semanalmente Mensalmente

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Diluentes gravimtricos

(a) Verificar peso de volume dispensado Verificar relao de diluio

(b) Diria Diria A cada ajuste ou troca Regularmente (a ser definido, levando em conta a freqncia e natureza de uso) (a) Inicialmente e anualmente Diariamente/a cada uso Mensalmente Anualmente Anualmente

Dispensadores de meios Pipetadores / pipetas

Verificar volume dispensado Verificar exatido e preciso do volume dispensado

Semeadores em espiral

(a) Estabelecer desempenho com mtodo convencional Verificar estado da cnula e os pontos iniciais e finais Verificar volume dispensado

Contador de colnias Centrfugas

Verificar com nmero contado manualmente Verificar velocidade com um tacmetro calibrado e independente Verificar com indicador anaerbio Monitorar quanto contaminao microbiana do ar e das superfcies, usando, por exemplo, amostradores de ar, exposio de placas, placas de contato ou swabs.

Incubadoras e jarras de anaerobiose Ambiente delaboratrio

A cada uso Semanalmente

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APNDICE F Guia sobre manuteno de equipamentos Estas informaes so fornecidas para fins de orientao e a freqncia ser baseada na necessidade, tipo e desempenho prvio do equipamento. TIPO DE EQUIPAMENTO (a) Incubadoras (b) Geladeiras (c) Freezers, fornos REQUISITO Limpar e desinfetar as superfcies internas FREQNCIA SUGERIDA (a) Mensalmente (b) Quando necessrio (por exemplo: a cada 3 meses) (c) Quando necessrio (por exemplo: anualmente) Mensalmente, ou a cada 6 meses, se usado biocida (a) Anualmente (b) A cada uso (a) Regularmente, conforme recomendado pelo fabricante (b) Anualmente, ou conforme recomendado pelo fabricante (c) Anualmente Anualmente ou conforme recomendado pelo fabricante Anualmente A cada uso (a) A cada uso (b) Anualmente Conforme necessrio (por exemplo, a cada 3 meses)

Banhos-maria

Esvaziar, limpar, desinfetar e repor a gua (a) Revisar (b) Limpar e desinfetar (a) Fazer inspees visuais da gaxeta, limpar/drenar cmara (b) Reviso completa

Centrfugas Autoclaves

(c) Verificao de segurana do cmara de presso Capelas de segurana Capelas de fluxo laminar Microscpios Medidores de pH Balanas, diluentes gravimtricos Destiladores de gua Reviso completa e checagem mecnica Servio completo de manuteno Limpar eletrodo (a) Limpar (b) Revisar Limpar e remover a crosta

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Volume 3

Deionizadores, unidades de osmose reversa Jarras de anaerobiose Distribuidores de meios, equipamentos volumtricos, pipetas, e equipamentos para servios gerais

Trocar cartucho / membrana

Conforme recomendado pelo fabricante Aps cada uso A cada uso

Limpar/ desinfetar Descontaminar, limpar e esterilizar, conforme apropriado

Semeadores em espiral (a) Revisar (b) Descontaminar, limpar e esterilizar Laboratrio (a) Limpar e desinfetar superfcies de trabalho (b) Limpar pisos, desinfetar tanques e pias (c) Limpar e desinfetar outras superfcies

(a) Anualmente (b) A cada uso (a) Diria e durante o uso (b) Semanalmente(c) A cada 3 meses

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ANVISA Gerncia-Geral de Laboratrios de Sade Pblica GGLAS Galdino Guttmann Bicho Maria Lcia Prest Martelli Ncleo de Assessoramento em Comunicao Social e Institucional Edio Gerncia de Comunicao Multimdia Design grfico

SENAI/DN Unidade de Tecnologia Industrial UNITEC Orlando Clapp Filho Zeide Lcia Gusmo Cunha Gomes Superintendncia de Servios Compartilhados SSC rea Compartilhada de Informao e Documentao ACIND Marmenha Rosrio Normalizao

Cely Curado Reviso Gramatical