Accin (Fijacin segn Carson)

Aunque son muy similares a las funciones de fijador, las acciones fijadoras pueden ser consideradas un tema aparte. Las enzimas, que son protenas, son desactivadas como consecuencia de la estabilizacin de las protenas por de accin del fijador. Esta es una caracterstica fijadora muy importante, como la accin enzimtica causa la autlisis del tejido. Los tejidos que son ricos en enzimas, por ejemplo hgado, pncreas y cerebro, son ms susceptibles a la autlisis rpida que los tejidos con un predominio de las fibras conectivas de tejido. Los fijadores tambin matan las bacterias y mohos, que causan putrefaccin. Los fijadores hacen que el tejido se vuelva ms receptivo para tinciones y, en muchas instancias, actan como mordientes, que sirven para vincular el colorante con el tejido. Los fijadores modifican los componentes de los tejidos para la mxima retencin de la forma durante los pasos posteriores del proceso. Esta es una accin muy importante porque los pasos posteriores a la fijacin pueden inducir un cambio dramtico en los tejidos. El fijador debe estabilizar los elementos del tejido a fin de que los efectos de cualquier procedimiento posterior sean mnimos. Hay mtodos fsicos y qumicos de estabilizar protenas. Uno de los mtodos fsicos es usar calor. El calor estabilizar y desnaturalizar la protena, como se demuestra cocinando un huevo. La fijacin por calor generalmente no ha sido usada en el laboratorio del histopatologa, pero con la llegada del horno de microondas, se han encontrado muchos mas usos. Los hornos de microondas son un tipo de radiacin no ionizante. Cuando las molculas dipolares (cargadas), como el agua o las cadenas polares laterales de las protenas, estn expuestas a las microondas, las molculas oscilan, dan vueltas hacia atrs o hacia adelante, a razn de 2,5 billones de veces por segundo. El resultado es la friccin molecular o calor instantneo. El calor producido es controlado por el ajuste de los niveles de energa de las microondas y la duracin de la exposicin. Se puede usar la fijacin por microondas en uno o dos pasos. En la fijacin por dos pasos, el primero consiste en la fijacin por inmersin en solucin salina de grandes ejemplares como el estmago, rganos slidos, y segmentos groseros, y el segundo paso consiste en la fijacin de los bloques de 2 mm de espesor inmersos en solucin salina y se calienta a una temperatura de 50C a 60C o 45C a 55C. Estos rangos de temperatura son crticos; si la temperatura se permite para exceder estos rangos o un mximo de 68C, el tejido mostrara ncleos picnticos y sobre teidos. Hopwood dice que la desnaturalizacin de protenas que se produce con el sobrecalentamiento tambin puede causar una prdida de la actividad enzimtica y antigenicidad, falsa localizacin de los cidos

nucleicos, y frecuentemente lisis de los glbulos rojos. Si la temperatura usada es demasiado baja, dar como resultado una mala fijacin. Aunque la solucin salina es ms ampliamente utilizada para la fijacin por microondas, los aldehdos tambin han sido usados. La desecacin es otro mtodo fsico de fijar protenas, pero la desecacin es raramente, si alguna vez, usada en rutina en histopatologa. Sistema de secado de preparaciones para la tincin de Wright es probablemente la utilizacin ms frecuente de este mtodo de fijacin. El mtodo principal de estabilizacin de protenas en el laboratorio de histopatologa implica el uso de uno o ms reactivos qumicos. Estos reactivos pueden ser clasificados como aditivos o no aditivos y coagulantes y no coagulantes. Los fijadores aditivos forman enlaces qumicos, o se suman ellos mismos, con el tejido y los cambian con esta accin. Cuando una molcula fijativa se aade encima de una macromolcula del tejido, la carga elctrica en el sitio adjunto puede ser cambiada. Si la carga elctrica cambia, y esta fuerza ayuda a mantener la conformacin, o molde, de la protena, entonces la estructura terciaria puede estar significativamente alterada. Los reactivos aditivos comunes son cloruro de mercurio, trixido de cromo, cido pcrico, formaldehdo, glutaraldehdo, tetrxido de osmio, sulfato de zinc o cloruro. Los fijadores no aditivos, son compuestos predominantemente orgnicos, como la acetona y los alcoholes, actan sobre tejido sin combinarse qumicamente con l. Por ejemplo, alcoholes metlicos y etlicos precipitan o coagulan protenas pero no se aaden a los tejidos. El mecanismo principal por el cual estos fijadores actan es por la disociacin obligada de las molculas de agua de los grupos de protenas desde el tejido. Como resultado, esto puede provocar el encogimiento y endurecimiento si se produce la sobre exposicin. Los grupo amino (-NH2) y carboxilo (-COOH) de las protenas son muy importantes para la coloracin. Si el fijador se aade por si mismo en uno de estos grupos, la tincin de los tejidos ser notablemente afectada. A un pH de 7.0, el formaldehdo se aade a las protenas de los tejidos principalmente al grupo amino, con la formacin eventual de un puente metilnico. Esto da como resultado un exceso de de cargas negativas en las protenas. Los metales pesados (cromo, mercurio y osmio) son cationes (cargados positivamente) que se combinan con grupos aninicos (cargados negativamente) de las protenas. Esto se traduce en un exceso de cargas positivas. Alguno de esos grupos que se combinan con aniones son sulfhdrico (-SH), carbonilo (-COOH) y acido fosfrico (-PO4).

Para comprender mejor la accin coagulante y no coagulante de los fijadores, imagine dos platos, uno con un trozo de gelatina y el otro con una malla en forma de pelota. Cual de los dos platos el agua penetrara o entrara mas libremente? El agua entrara ms fcilmente en todas las grietas de la malla, pero tendra dificultad para entrar en la gelatina. La coagulacin establece una red en el tejido que le permite a las soluciones penetrar fcilmente o conseguir entrar en el interior del tejido. Los fijadores no coagulantes actan creando un gel que hace que la penetracin de las soluciones posteriores sea difcil. Debido a que los fijadores no coagulantes no permiten una buena penetracin de los reactivos aplicados despus de la fijacin, Baker consideraba a estos fijadores inferiores para la impregnacin e inclusin en parafina. Para usar despus de un fijador no coagulante, los medios de infiltracin o inclusiones que no fueran parafina funcionaban mejor. Los fijadores no coagulantes son: Formaldehdo / Glutaraldehdo / Tetrxido de osmio / Dicromato de potasio / Acido actico Los fijadores coagulantes son: Alcoholes / Sales de zinc / Cloruro de mercurio / Trixido de cromo / Acido pcrico El conocimiento sobre fijadores y fijacin ha evolucionado con el tiempo y se han enumerado ms de 500 fijadores a lo largo de los aos pero solo unos pocos de estos son ampliamente aceptados.