UNIVERSIDADE DA REGIO DA CAMPANHA CENTRO DE CINCIAS DA SADE

BIOQUMICA EM SADE
Enfermagem e Fisioterapia

Professor: Sandro Moreira Tuerlinckx

Introduo 1. Aminocidos e protenas 2. Carboidratos 3. Lipdios 4.Nucleotdeos 5.Introduo ao metabolismo, ciclo do cido ctrico e fosforilao oxidativa. 6. Metabolismo dos carboidratos 7. Metabolismo dos lildios 8.Metabolismo protenas dos aminocidos e

Introduo
Para que o aluno possa tornar-se um bom profissional, tanto das reas de cincias da sade, cincias biolgicas e cincias rurais, necessita ter um conhecimento slido das cincias bsicas como anatomia, histologia, fisiologia, gentica, bioqumica, entre outras. A Bioqumica uma rea do conhecimento que estuda a qumica dos seres vivos. Alm de definir a natureza qumica das biomolculas, esta disciplina destina-se a entender os processos envolvidos na formao e degradao dessas molculas e como esses processos so regulados. Esse conhecimento um pr-requisito para o entendimento das funes biolgicas normais, adaptando-as e modificando-as para fins teis. tambm fundamental para o entendimento das funes anormais que levam s desordens funcionais, permitindo o melhor tratamento delas. O conhecimento de estruturas qumicas de biomolculas e de suas interaes celulares tem ajudado o ser humano a entender os processos da vida e resolver problemas de natureza biolgica. Os recentes avanos na rea de bioqumica - como os diversos programas genomas, inclusive o genoma humano, proteomas, terapia gnica, entre outros - abriram grandes perspectivas tecnolgicas exigindo um profissional altamente especializado para atuar nessa rea. Alm disso, a compreenso da ao de frmacos, os efeitos de compostos txicos e suas interaes com o homem e o meio ambiente, tambm envolve um entendimento da bioqumica. De acordo com a tendncia mundial, a bioqumica dever ocupar espao cada vez maior nas indstrias atuais, devido necessidade de substituir os processos utilizados por outros menos agressivos ao homem e ao ambiente, abrindo assim novas oportunidades de carreira neste mbito profissional. A bioqumica , sem dvida, uma das cincias mais fascinantes porque demonstra o ser vivo em seus componentes bsicos e tenta explicar o funcionamento ordenado das reaes qumicas que tornam possvel a vida,

freqentemente adjetivada como milagre ou fenmeno. Entretanto, o processo qumico muito bem organizado que estabelece toda a existncia da vida em nosso planeta, tem sido desvendado, continuamente, por cientistas do mundo inteiro. Muito j se sabe, porm o desconhecido a essncia do conhecimento humano e a luta para desvend-lo advm da natureza desbravadora da humanidade, que no se furta com explicaes empricas e procura a razo dos fatos ao invs de eternizlos mitos. Os captulos que se seguem representam a organizao de informaes bsicas para o aprendizado de Bioqumica, possuindo um carter estritamente didtico, no dispensando, de forma alguma, a consulta s referncias bibliogrficas sugeridas ao final desta apostila e outras, existentes na literatura especializada.

Esta apostila destina-se a ser utilizada como fonte de informao bsica aos alunos que estejam cursando as disciplinas de Bioqumica ministradas pelo Prof. Sandro M. Tuerlinckx, no deve ser utilizada como fonte de pesquisa ou ser referenciada em trabalhos acadmicos, para tal, favor consultar s referncias bibliogrficas sugeridas.

Comeando a conhecer a Bioqumica.

O estudo da Bioqumica infere um conceito nato de que existe uma qumica da vida, ou ento que h vida pela qumica. Antes que um conceito filosfico ou religioso, a vida, aqui, deve ser tratada como o resultado da maximizao de fatores fsicos e qumicos presentes em um sistema extremamente frgil: a clula. Do ponto de vista qumico, os seres vivos so constitudos de elementos bastante simples e comuns em todo o universo: carbono, hidrognio, nitrognio e oxignio (bases dos compostos orgnicos), alm de uma infinidade de outros elementos presentes em quantidades relativamente menores, mas de funes imprescindveis ao funcionamento celular (p.ex.: ferro, enxofre, clcio, sdio, potssio, cloro, cobalto, magnsio etc.) O agrupamento desses elementos, em molculas com funes distintas, foi um passo longo e decisivo para a afirmao do processo de vida em nosso planeta. Existe uma relao direta entre a produo de oxignio pelas cianofceas e o surgimento dos seres multicelulares levando a incrvel diversidade de espcies encontradas na atualidade.
"Evidncias geolgicas sugerem que houve mais de um bilho de anos de intervalo entre o aparecimento das cianobatrias (primeiros organismos a liberar oxignio como parte do seu metabolismo) e o perodo em que grandes concentraes de oxignio comearam a se acumular na atmosfera. Esse intervalo to grande deveu-se, sobretudo, grande quantidade de ferro solvel existente nos oceanos, que reagia com o oxignio do ar para formar enormes depsitos de xido de ferro."

Certamente, este processo lento de liberao de oxignio como um dejeto indesejvel dos primeiros habitantes de nosso planeta, foi responsvel pelo surgimento de um outro organismo adaptado em consumir este oxignio como comburente de molculas orgnicas liberando, assim, a energia trmica to necessria para a manuteno da vida. Mas, descrever o processo complexo que a vida no tarefa to simples quanto

possa parecer. Na verdade desde que o universo surgiu h cerca de 20 bilhes de anos, a vida na Terra tem apresentado mecanismos mpares de reproduo e desenvolvimento que muitas vezes so nicos na natureza e desafiam os conceitos bioqumicos como por exemplo os seres que habitam as fossas vulcnicas do Pacfico, que sobrevivem temperaturas superiores a 1200 C; ou os vrus, que no possuem estrutura celular sendo formados, basicamente, apenas por protenas e cidos nuclicos. Um fato comum a todos os seres vivos, porm, a presena de macromolculas exclusivas dos seres vivos (carboidratos, lipdios, protenas, vitaminas e cidos nuclicos) denominadas de biomolculas. Desta forma, a qumica da vida est atrelada a composio bsica de todo ser vivo. As biomolculas possuem caractersticas qumicas comuns s demais molculas da natureza. Porm, quando associadas em um sistema biolgico, possuem uma dinmica prpria de regulao e sntese, que proporcionam as caractersticas de cada ser vivo. O ambiente ideal para que ocorram estas reaes a clula, com uma srie de organelas especializadas nas mais variadas funes bioqumicas. Apesar das diferenas entre as mais diversas espcies, contudo, todos os seres vivos apresentam uma dinmica bioqumica celular muitssimo parecida, evidenciando o sucesso evolutivo dos processos experimentados nos bilhes de anos de aperfeioamento. As vias metablicas celulares constituem um emaranhado de reaes qumicas que se superpem, mas, maravilhosamente, no se atropelam e sim se completam formando um complexo e preciso ciclo qumico de consumo de reagentes (em bioqumica denominado de substratos) e formao de produtos, como em uma reao qumica qualquer. A forma de regulao destas reaes leva a uma intricada mecnica metablica tendo ao centro a degradao (catabolismo) e sntese (anabolismo) de biomolculas.

1. Aminocidos e Protenas
As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes nas clulas e correspondem a cerca de 50% ou mais de seu peso seco. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, tendo funes fundamentais na lgica celular. Em virtude desta importncia qualitativa e quantitativa, as protenas tm sido largamente estudadas e seus segredos desvendados, no que diz respeito sua sntese ou aproveitamento metablico. Os -aminocidos encontrados em peptdeos e protenas consistem de um grupo funcional cido carboxlico (-COOH), um grupo amino (-NH2) e um hidrognio (-H) ligados ao tomo de carbono-. Grupos-R (cadeia lateral) distintos, tambm esto associados ao carbono-alfa, desta forma, o carbono- encontrado nos aminocidos tetradrico ou assimtrico (exceto no caso da glicina onde o grupo-R o hidrognio). Um aminocido difere de outro justamente pelo grupo-R (cadeia lateral).

A unio entre dois aminocidos, forma um dipeptdeo, assim como trs unem-se formando um tripeptdeo e assim sucessivamente, sendo que a unio de vrios aminocidos ir dar origem a uma cadeia polipeptdica. So conhecidos 20 aminocidos (Alanina, Arginina, Aspartato, Asparagina, Cistena, Fenilalanina, Glicina, Glutamato, Glutamina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metinonina, Prolina, Serina, Tirosina, Treonina, Triptofano e Valina) encontrados nas molculas de protenas, com sua sntese controlada por mecanismos genticos, envolvendo a replicao do DNA e transcrio do RNA. A metade dos aminocidos sintetizada pelo organismo e vai suprir as necessidades celulares; aqueles que no so sintetizados precisam estar presentes na dieta e so chamados de aminocidos essenciais e os aminocidos no-essenciais aqueles que so sintetizados no organismo.

Figura 1-1 : Representao da estrutura geral dos aminocidos em pH neutro.

As protenas so macromolculas de alto peso molecular, polmeros de compostos orgnicos simples, os -aminocidos. Nas molculas proticas os aminocidos se ligam covalentemente, formando longas cadeias no ramificadas, atravs de ligaes peptdicas envolvendo o radical amino (-NH2) de um aminocido e o radical cido carboxlico (COOH) de um outro, havendo a liberao de uma molcula de gua durante a reao (Figura 1-2).

Figura 1-2: A ligao peptdica ocorre entre o grupamento -COOH de um aminocido com o grupamento -NH2 de outro. O primeiro aminocido da cadeia peptdica aquele que possui o grupamento amino-terminal e o ltimo, o que possui o livre o grupamento carboxila-terminal. O grupamento R sempre ocupa posio oposta ao prximo, devido ao C ser assimtrico, o que vai contribuir para a forma tridimensional da protena.

Esta grande variabilidade proporciona arranjos incontveis entre as cadeias peptdicas em sua estrutura tridimensional bem como na funo da protena, uma vez que os diferentes aminocidos possuem diferentes propriedades qumicas que, em conjunto, sero responsveis pela funo da protena. 5

O estudo da composio e polaridade do grupamento R permite agrupar os aminocidos em quatro classes distintas: a) Aminocidos com grupamento R apolar ou hidrofbico: so os menos solveis, devido ausncia de grupamentos hidroflicos no grupamento R. So eles: Cadeia aliftica hidrocarbonada: alanina, leucina, isoleucina, valina e prolina; Anel aromtico: fenilalanina e triptofano; Tioter: metionina. Hidrognio: glicina. A alanina representa o aminocido mais solvel deste grupo e a prolina , na realidade, um iminocido onde o grupamento R um substituinte do aminogrupo. A glicina o aminocido mais simples em virtude de possuir como R apenas um tomo de hidrognio (apolar), sendo tambm o nico aminocido que no possui carbono assimtrico. Algumas vezes classificado como polar, pois o grupamento funcional lhe confere certa solubilidade. b) Aminocidos com grupamento R polar no-carregado: possuem grupamentos hidroflicos na cadeia carbonada que no se ionizam, porm conferem maior solubilidade ao aminocido. So eles: Hidroxila: serina, treonina e tirosina; Grupo Amida: asparagina e glutamina; Sulfidrila ou Tiol: cistena; A cistena e a tirosina tem os grupamentos R mais polares, sendo portanto os mais solveis desta classe. A cistena, freqentemente, ocorre nas protenas em sua forma oxidada, a cistina, na qual a sulfidrila (SH) esto unidas formando pontes dissulfeto (S-S) que so ligaes covalentes importantes na estabilizao da molcula protica. A asparagina e a glutamina so amidas do cido asprtico e do cido glutmico, respectivamente. c) Aminocidos com grupamento R polar carregado positivamente (bsicos): Lisina, arginina e histidina; todos possuem grupamento R de 6 carbonos e a carga positiva localiza-se em um tomo de nitrognio do R.

d) Aminocidos com grupamento R polar carregado negativamente (cidos): cido asprtico e cido glutmico. So citados como aspartato e glutamato em virtude de se ionizarem em pH fisiolgico adquirindo carga negativa no grupamento carboxila (COO-). Na Figura 1-3 esto representados todos os aminocidos.

Figura 1-3: A estrutura geral dos aminocidos est em preto e os grupos-R (cadeia lateral) esto em vermelho.

Propriedades cido-bsicas dos aminocidos

Os grupamentos amino e cido, encontram-se na forma ionizada quando em soluo. Dependendo do pH, o grupamento amino com carga positiva (forma catinica) ou o grupamento cido carboxlico com carga negativa (forma aninica), podem predominar. Porm, em determinado pH (pH isoeltrico ou Ponto isoeltrico), haver somente uma forma dipolar (ou seja, positiva e negativa ao mesmo tempo), onde ser observada uma neutralidade eltrica na molcula. Estes ons dipolares, so tambm chamados de zwitterions (expresso alem que ao p da letra significaria algo como "ons hermafroditas"), predominam no ponto isoeltrico (pHi). A forma catinica predominar em pH abaixo do pHi, enquanto que a forma aninica predominar em pH acima do pHi, uma vez que abaixo ou acima do pHi haver deficincia ou excesso de H+ na soluo, respectivamente, o que varia a carga eltrica pois o grupamento COO- receber H+ e o NH3+ doar ser H+. O valor do pHi varia de acordo com o aminocido e corresponde a um valor que serve como identificador e classificador dos aminocidos de acordo com a variao do pH. Os valores de pK1 e pK2 correspondem aos valores de pH onde o aminocido funciona como um tampo durante uma curva de titulao. Para melhor entender esses conceitos, considere que se realizssemos uma titulao de um cido por uma base, teramos, inicialmente, um pH cido que iria aumentando proporcionalmente ao acrscimo de base (Figura1-4).

Esse aumento proporcional no valor o pH se d porque cada molcula de base adicionada neutraliza uma de cido (formando gua e o sal correspondente) at o valor de equivalncia entre a quantidade de bases e cidos, onde o pH neutro (pH=7,0). um valor tnue, pois qualquer quantidade de base adicionada a mais eleva o pH para a faixa alcalina. No entanto, se esta mesma titulao fosse realizada com a adio de um aminocido no meio a ser titulado, um grfico representando a elevao do pH demonstraria duas zonas de estabilizao (uma em pH cido e outra em pH bsico) indicando que h duas zonas de equilbrio qumico, onde no h a variao do pH mesmo com a adio da base no meio cido (Figura 1-5). Essas regies demonstram que os aminocidos so responsveis por uma funo tamponante (evitam variaes bruscas de pH). Como a forma dipolar a que ocorre no pHi, toda vez que o pH cai abaixo do valor do pHi (acidificao do meio), o aminocido recebe o H+ adicionado atravs da extremidade COO- tornando-se um ction. Quando o pH eleva-se acima do valor do pHi (alcalinizao do meio), o aminocido torna-se um nion devido doao do H+ pelo grupamento NH3 + (Figura 1-6). Se relacionarmos em um grfico o pH em funo dos equivalentes de uma base adicionada a uma soluo cida de um aminocido, observaremos os pontos fundamentais no comportamento cido-bsico dos aminocidos (Figura 1-5).

Figura 1-4 - Em uma titulao convencional de um cido por uma base, a adio de base modifica o pH cido original para bsico passando pelo pH neutro 7,0.

Figura 1-5 - A curva de titulao da glicina. O pHi (somente formas dipolar isoeltricas) corresponde mdia entre os valores de pK1 ([dipolar] = [catinica]) e pK2 ([dipolar] = [aninica]).

No incio da titulao, teoricamente, s existe a forma catinica em virtude de o aminocido funcionar como um receptor de prtons, ou seja, como uma base. Ao adicionar uma base (OH-) ao sistema, comea a haver a neutralizao com o aparecimento da forma dipolar at um determinado ponto em haver igualdade de concentrao entre as duas formas, entrando o sistema em equilbrio, correspondente ao pK1.

titulao, induzido pelo grupamento R (o pK3 freqentemente denominado de pKR). Essas informaes acerca da propriedade cido-bsica dos aminocidos so fundamentais para a compreenso da funo das protenas como um tampo intracelular e, tambm, dos mtodos de identificao dos aminocidos e de separao das protenas que se baseiam na capacidade de aminocidos e protenas mudarem de carga eltrica de acordo com o pH do meio.

Estrutura das protenas

Devido caracterstica anftera dos aminocidos (podem ser ctions ou nions) e a capacidade de modificao da carga eltrica do grupamento R observada em vrios aminocidos as protenas tero conformao estrutural bastante diversificada uma vez que os aminocidos se relacionaro entre si de maneira variada. A flexibilidade dada pelo C devido ao fato de ele ser assimtrico (ligado a quatro grupos diferentes: NH3 +, COO-, H e R) o que lhe garante livre rotao em seu eixo. Esta flexibilidade da molcula protica dada pelo C, confere uma grande versatilidade protena, o que faz de sua estrutura tridimensional o ponto chave para sua funo. Entretanto, esta flexibilidade limitada pela existncia de interaes qumicas entre as cadeias peptdicas e entre os grupamentos R dos resduos de aminocidos, seja intermolecular ou com outros compostos qumicos alheios composio original da protena. Cada tipo de protena possui uma configurao tridimensional peculiar que determinada pela seqncia de aminocidos e pelo grau de inclinao entre as ligaes qumicas (proporcionada pelos arranjos intermoleculares). A estrutura molecular das protenas muito complexa, por essa razo conveniente dividi-la em nveis distintos de organizao, veja a seguinte figura.

Figura 1-6 - As trs formas carregadas dos aminocidos. A forma dipolar corresponde quela que contm um plo positivo em NH3 + e outro negativo em COO- (a carga final neutra) e corresponde nica forma existente no pHi. A forma catinica est presente em qualquer valor de pH abaixo do pHi, enquanto que a aninica tpica do aumento do valor do pH acima do valor do pHi.

Prosseguindo a titulao, com o aumento do pH em virtude do aumento gradual da concentrao de base, comear a predominar a forma dipolar com a queda proporcional da forma catinica at um ponto onde s haver a forma dipolar. Neste ponto, o pH corresponder ao pH isoeltrico (pHi) onde o sistema se apresentar eletricamente neutro. Ao se adicionar mais base, h o aparecimento da forma aninica at um determinado ponto em que haver igualdade na concentrao entre a forma dipolar e a aninica, entrando o sistema, novamente, em equilbrio agora entre a forma dipolar e a forma aninica, correspondente ao pK2. Adicionando mais base, haver a predominncia da forma aninica at o pH 14 onde, teoricamente, s haver a forma catinica. Alguns aminocidos apresentam um terceiro plat de estabilidade em sua curva de titulao (pK3) que correspondente a um terceiro momento de equilbrio durante a

de aminocidos estrutura primria das protenas, tambm pode ser responsvel por modificao em sua eficcia funcional. 2) Estrutura secundria: relaciona a forma que a cadeia polipeptdica assume no espao, que pode ser de -hlice ou -folha pregueada. A conformao em -hlice conferida atravs do ngulo de toro que os resduos de aminocidos apresentam na ligao peptdica, estabilizada por pontes de hidrognio entre o oxignio do grupamento carboxila de um C e o H do grupamento amino do outro aminocido (Figura 1-9).

Figura 1-7: Nveis de organizao da estrutura molecular de uma protena.

1) Estrutura primria: diz respeito seqncia de aminocidos, dada pela seqncia de nucleotdeos da molcula de DNA responsvel por sua sntese. A estrutura primria de peptdeos e protenas refere-se ao nmero linear e a ordem dos aminocidos presentes. A conveno para a designao da ordem dos aminocidos a de que o Nterminal (ou seja, o final com o resduo com o grupo -amino livre) para a esquerda ( do primeiro aminocido) e do C-terminal (ou seja, o fim com o resduo que contm um grupo carboxila livre) para a direita. Nesta estrutura so encontradas ligaes peptdicas e eventualmente, dependendo da protena, podem ser encontradas ainda as pontes de dissulfeto.

Figura 1-9 - A forma de -hlice possvel graas formao de pontes de hidrognio entre os grupamentos funcionais dos aminocidos da ligao peptdica e ao posicionamento contrrio dos grupamentos R.

A forma de -folha pregueada possvel graas a pontes de hidrognio que ocorrem entre duas partes da cadeias polipeptdicas (Figura 1-10) dentro da molcula protica. Uma protena pode apresentar os dois tipos de organizao secundria dentro de sua molcula (Figura 1-11).

Figura 1-8 : Exemplo de estrutura primria

Esta seqncia deve ser fundamentalmente mantida, sob o peso de a protena perder sua funo, como o caso da presena de valina ao invs de glutamato no sexto aminocido da cadeia polipeptdica da hemoglobina, que causa a doena gentica denominada de anemia falciforme. A ausncia ou acrscimo

Figura 1-10 A forma de -folha pregueada ocorre entre duas cadeias peptdicas dentro da molcula

protica, resultante entre pontes de hidrognio entre elas, resultando em um dobramento entre os aminocidos sobre si formando um ngulo caracterstico que lembra as folhas pregueadas dos formulrios contnuos.

3) Estrutura terciria: corresponde s relaes da cadeia polipeptdica no sentido de estabilizar a conformao tridimensional. Muitos tipos de interaes qumicas podem ocorrer dentro de uma molcula protica para garantir a estabilidade das cadeias polipeptdicas. As mais fortes so as ligaes covalentes, como a que ocorre entre dois aminocidos cistena que se unem atravs de pontes dissulfetos entre seus grupamentos SH formando o complexo cistina (Figura 113).

Interaes Hidrofbicas: So as foras nocovalentes mais importantes para a estabilidade da estrutura enovelada. Ocorrem entre aminocidos de cadeia lateral hidrofbica, excluindo e afastando as molculas de gua no momento da ligao. Interaes eletrostticas (ligaes inicas): Ocorrem entre aminocidos que possuem carga positiva ou negativa na cadeia lateral. Foras de van der Waals: uma fora de atrao inespecfica que ocorre quando dois tomos quaisquer esto prximos. Apesar dessas foras serem comparativamente fracas em relao as demais, o efeito cumulativo de numerosas interaes tem substancial influncia para a estabilidade da estrutura enovelada.

Figura 1-11 Estrutura molecular da enzima da gliclise triose fosfato isomerase que apresenta regies em -hlice (espirais em azul) e em -folha pregueada (setas vermelhas).

H, ainda a formao de pontes de hidrognio, interaes eletrostticas e interaes fracas de van der Waals entre os grupamentos R. Foras no covalentes que estabilizam a estrutura protica tridimensional: Pontes de Hidrognio: Grande nmero de pontes de H so formadas no interior e na superfcie das protenas. Alm de formar pontes de H entre si, os grupos polares das cadeias laterais dos aminocidos podem interargir com a gua ou com o esqueleto polipeptdico. As pontes de H contribuem moderadamente para direcionar o enovelamento.

Figura 1-12: Exemplos de ligaes que estabilizam a estrutura terciria de protenas.

Figura 1-13 A unio covalente entre dois aminocidos cistena entre seus grupamentos SH, gera uma ponte dissulfeto formando um grupo cistina extremamente rgido que ajuda a manter a estrutura terciria das protenas.

10

Esta estrutura terciria comum a todas protenas e polipeptdios (cerca de 50 aminocidos). Algumas protenas contm apenas uma cadeia polipeptdica (p.ex.: mioglobina, Figura 1-14) enquanto outras so composta por mais de um tipo iguais ou diferentes entre si (protenas oligomricas), como o caso da hemoglobina (Figura 1-15). 4) Estrutura quaternria: o arranjo espacial entre cadeias peptdicas das protenas oligomricas, definida por interaes nocovalentes entre as cadeias peptdicas e outros compostos de origem no protica que, freqentemente, fazem parte da protena. A estrutura quaternria, portanto diz respeito ao arranjo no covalente formado por vrias cadeias polipeptdicas como o caso da hemoglobina.

A configurao espacial final das protenas (estrutura terciria ou quaternria) constante e determinante das funes biolgicas por elas exercidas. As protenas globulares so esferas compactas e irregulares resultantes do enovelamento da cadeia polipeptdica. So bastante solveis em gua e possuem funes diversificadas. A mioglobina e a hemoglobina so exemplos. As protenas fibrosas so protenas de formato cilndrico, apresentam baixa solubilidade em gua e possuem funes estruturais. (p.ex.: colgeno e queratina). O colgeno pouco solvel em gua; apresenta uma tripla hlice estabilizada por pontes de hidrognio. Com uma sequncia repetida de glicina, prolina e hidroxiprolina. Possuindo tambm ligaes cruzadas covalentes de alisinas que aumentam a sua resistncia tensional. A formao de hidroxiprolina e hidroxilisina requer vitamina C. Abaixo um exemplo da estrutura do colgeno, uma protena fibrosa.

Figura 1-14 - Estrutura terciria final da mioglobina, uma protena formada por apenas uma cadeia peptdica. (Adaptado de Devlin, T.M., 1999).

Figura 1-16 Representao esquemtica da estrutura de protenas fibrosas. A estrutura do colgeno evidenciando as cadeias peptdicas unidas em feixes e estabilizadas por pontes de hidrognio.

Figura 1-15 Estrutura quaternria da hemoglobina, uma protena oligomrica formada por quatro cadeias peptdicas unidas por grupamentos prostticos heme.

Algumas protenas tm os dois tipos de conformao, como o caso da miosina muscular e do fibrinognio.

11

Desnaturao Protica: A exposio de protenas a pH extremos ou temperaturas elevadas, mesmo por perodos curtos, faz com que a maioria delas apresentem modificaes fsicas em sua conformao tridimensional e em sua funo fisiolgica, processo conhecido como desnaturao. Desta forma, a perda da configurao espacial modifica completamente sua funo, podendo at significar a destruio da protena.

Figura 1-17 - O grupamento heme e seu anel tetrapirrlico ligado ao ferro reduzido.

Fisiologicamente, condies extremas de desnaturao protica so obtidas com variao brusca acima de 50oC e pH abaixo de 5,0, ambas condies incompatveis com a vida. Desta forma, o desenovelamento protico em hipertermia ou acidoses leva a diminuio ou at perda da funo protica, mas que se mostra reversvel quando cessa a causa da variao de temperatura e/ou pH. Este processo de renaturao, entretanto no visualizado em condies experimentais extremas onde a desnaturao protica irreversvel.

Protenas conjugadas
Muitas protenas apresentam em sua composio, molculas no proticas ligadas de forma covalente ou no aos aminocidos das protenas, denominados, genericamente, de grupo prosttico. A hemoglobina (Figura 1-15) uma protena conjugada cujo grupamento prosttico so quatro grupamentos hemes (Figura 1-17) que se ligam de forma no covalente s cadeias peptdicas.

Um grupo importante de protenas conjugadas so as glicoprotenas que esto presentes na superfcie celular (p.ex.: mucina), fazem parte de protenas estruturais (p. ex.: o colgeno), so hormnios (p.ex.: glucagon) ou receptores de membrana. A glicose liga-se de maneira irreversvel a uma frao da hemoglobina (hemoglobina glicada) e permite a monitorao da concentrao de glicose plasmtica (glicemia) at 120 dias (vida mdia da hemoglobina) antes da coleta de sangue. Outra frao de glicose fixa-se albumina formando as frutosaminas que, maneira da hemoglobina glicada, monitora a glicemia anterior da coleta em at 30 dias (vida mdia das albuminas). As lipoprotenas so importantes transportadoras dos lipdios plasmticos, principalmente os triglicerdeos e o colesterol. De acordo com a variao das lipoprotenas pode-se avaliar o risco para doenas cardacas coronarianas.

12

2. Carboidratos
Os carboidratos so as biomolculas mais abundantes na natureza. Para muitos carboidratos, a frmula geral : [C(H2O)]n, da o nome "carboidrato", ou "hidratos de carbono". So molculas que desempenham uma ampla variedade de funes, entre elas: Fonte de energia; reserva de energia; estrutural; matria prima para a biossntese de outras biomolculas; interaes celulares...

Figura 3.1. Projes de Fischer das Trioses.

Para se distinguir um monossacardeo de tipo L de outro do tipo D temos de saber: 1- Como se numeram os carbonos dos monossacardeos (oses) (o carbono 1 o carbono terminal mais prximo do grupo carbonila). 2- Como se orientam as molculas das oses de acordo com a conveno de Fischer (carbono 1 para cima, ltimo carbono para baixo, convexidade das ligaes carbonocarbono voltada para o observador). Gliceraldedo-L (com OH para a esquerda no penltimo carbono). Gliceraldedo-D (com OH para a direita no penltimo carbono) No gliceraldedo existe apenas um carbono assimtrico (carbono com 4 substituintes so diferentes). Critrios de classificao das oses; alguns exemplos de oses simples ou monossacardeos simples Tipo de grupo carbonila: Aldoses ou Cetoses N de carbonos: Trioses = 3; Tetroses = 4; Pentoses = 5; Hexoses = 6; Heptoses = 7 Posio direita ou esquerda do OH do penltimo carbono: enantimero D ou enantimero L.

Monosacardeos Cetonas com Hydroxila.

so Aldedos ou Multiplos Grupos

Monossacardeos: So os carboidratos mais simples, dos quais derivam todas as outras classes. Quimicamente so polihidroxialdedos (ou aldoses) - ou polihidroxicetonas (ou cetoses), sendo os mais simples monossacardeos compostos com no mnimo trs carbonos: O Gliceraldedo e a Dihidroxicetona.

A di-hidroxiacetona, o gliceraldedo-L e o gliceraldedo-D so ismeros porque tm a mesma frmula molecular (C3H6O3), mas diferente distribuio dos tomos no espao (diferentes frmulas estruturais). No caso dos gliceraldedos-L e D so enantimeros porque um deles , estruturalmente, a imagem especular do outro. Em geral os enantimeros tm muitas caractersticas comuns (ponto de fuso, ebulio...) mas interagem de forma muito diferente em sistemas biolgicos, rodam o plano da luz polarizada em sentidos opostos (se um deles dextrgiro (+)...o outro levgiro (-)...e vice-versa).

13

Figura 3.2. D-Aldoses contm trs, quatro, cinco, e seis tomos de carbono. D-Aldoses contm um grupo aldedo (mostrado em azul) e possuem configurao absoluta do D-gliceraldedo no centro assimtrico (mostrado em vermelho) mais distante do grupo aldedo.

14

A glicose-D e a galactose-D so epmeros porque se distinguem apenas na posio espacial dos substituintes de um dos carbonos assimtricos (o carbono 4).

D-Glicose

D-Galactose

Figura 3.3. D -Cetoses contm trs, quatro, cinco, e seis tomos de carbono. O grupo cetona mostrado em azul. O centro assimtrico mais distante do grupo cetnico, o qual determina a designao D, est mostrado em vermelho.

15

Pentoses e Hexoses Ciclizam para formar anis de Furanose e Piranose.

O grupo carbonila pode reagir com um grupo hidroxila formando um hemiacetal.

Alguns monossacardeos podem encontrar-se na forma linear (Projeo de Fischer) e/ou numa forma cclica (Projeo de Haworth). No caso da glicose pode formar-se um hemiacetal ligando os carbonos 1 e 5.

Em soluo aquosa a forma predominante da D-glicose a forma cclica hexagonal de tipo . As formas e da glicose-D so anmeros e ao carbono 1 da glicose denomina-se carbono anomrico. As formas e so designadas pela posio do OH ligado ao carbono anmero (quando OH estiver para baixo e quando OH estiver para cima ).

Projeo de Fischer para -D-Glucose

Projeo de Haworth para -D-Glucose

A molcula de glicose-D na forma cclica (com um hemiacetal entre os carbonos 1 e 5) pode ter duas formas distintas: e Os monossacardeos em soluo aquosa esto presentes na sua forma aberta em uma proporo de apenas 0,02%. O restante das molculas est ciclizada na forma de um anel hemiacetal de 5 ou de 6 vrtices. O anel de cinco vrtices chamado de anel furanosdico ou furanose. O anel de 6 vrtices chamado de anel piranosdico ou piranose. Na estrutura do anel, o carbono onde ocorre a formao do hemiacetal denominado "Carbono Anomrico", e sua hidroxila pode assumir duas formas: Quando ela fica para baixo Alfa do plano do anel Beta Quando ela fica para cima do plano do anel

Figura 3.4. Formao da Piranose. A glicose em cadeia aberta cicliza quando o grupo hidroxila no C-5 ataca o tomo de oxignio no C-1 aldedo para formar um grupo intramolecular hemiacetal. Duas formas anomericas, designadas e , podem resultar.

No caso das cetoses, o grupo cetona no C-2 em cadeia aberta forma uma cetohexose, assim como a frutose, que pode formar um hemicetal por reagir com o grupo hidroxila em C-6, formando um anel de 6 vrtices, ou reagir com a hidroxila em C-5 formando um anel de 5 vrtices. O anel de 5 vrtices chamado de furanose devido a sua similariedade com o furano.

16

Carboidratos Complexos So Formados Pela Ligao de Monossacardeos.

Os semi-acetais dos monossacardeos cclicos podem ligar-se com: 1- grupos hidroxila originando ligaes glicosdicas de tipo O (o tomo que faz a ponte entre o carbono anomrico e a estrutura a ele ligado um oxignio). Veja exemplo abaixo:

Figure 3.5. Formao da Furanose. A frutose em cadeia aberta cicliza para formar um furano, quando a hidroxila em C-5 ataca o grupo cetona em C-2-cetona formando um hemicetal intramolecular. Dois anmeros so possveis, mas apenas o mostrado.

Exemplo de uma cetohexose: a Dfrutose (o carbono anomrico o 2, destacado em vermelho):

Sacarose

D-Frutose Aldopentoses assim como as D-ribose e a desoxi-D-ribose tambm formam anis do tipo furanose, so estruturas encontradas formando as unidades do RNA e DNA.

2- ou com aminas (no caso dos heterosdeos) originando ligaes glicosdicas de tipo N (o tomo que faz a ponte entre o carbono anomrico e a estrutura a ele ligado um nitrognio). O exemplo abaixo o da ADENOSINA, onde uma base (adenina) est ligada a uma aldopentose (ribose).

Adenosina

Sacarose, Lactose e Maltose so os Dissacardeos mais Comuns.

Dissacardeos so carboidratos ditos glicosdeos, pois so formados a partir da ligao de dois monossacardeos atravs de ligaes especiais denominadas "Ligaes Glicosdicas". A Ligao Glicosdica: ocorre entre o carbono anomrico de um monossacardeo e qualquer outro carbono do monossacardeo seguinte, atravs de suas hidroxilas e com a sada de uma molcula de gua.

Monossacardeos modificados.
Carboidratos podem ser modificados pela adio de substituintes (mostrado em vermelho). Esses carboidratos modificados so frequentemente expressos na superfcie de clulas.

17

que participam na ligao. Sacarose = glicopiranosil--D-(12)-frutofuranosdeo-D A enzima que no intestino delgado catalisa a hidrlise da ligao glicosdica glicose- (12) frutose- chama-se sacarase.

Sacarose A lactose (aucar do leite) formada por um resduo de galactose e outro de glicose (ligao -1,4). Lactose = galactopiranosil-D-(14)-glicose-D A enzima que no intestino delgado catalisa a hidrlise da ligao glicosdica galactoseglicose -1,4 chama-se lactase.

Figura 3-6: Dissacardeos comuns. Sacarose, lactose e maltose so componentes comuns na dieta.

A maltose um dissacardeo constitudo por dois resduos de glicose-D ligados por uma ligao osdica (ou glicosdica) em que participam o carbono anmero de um resduo de glicose-D (carbono 1) e a hidroxila do carbono 4 de um outro resduo de glicose-D. Em cada molcula de maltose h um carbono anomrico livre. Maltose = glicopiranosil--D-(14)-glicoseD A maltose um di-holosdeo (ou dissacardeo): por hidrlise cada molcula de maltose d origem a duas de glicose. A enzima que, no intestino delgado, catalisa a clivagem hidroltica (hidrlise) da ligao glicosdica existente na maltose pertence classe das hidrolases e chama-se maltase.

Lactose
CURIOSIDADES BIOQUMICAS - Muitos adultos so intolerantes ao leite porque so deficientes em lactase: Muitos adultos no so capazes de metabolizar o acar do leite, a lactose e perturbaes gastrointestinais ocorrem quando estes bebem leite. Intolerncia lactose, ou hipolactasia, mais comumente causada por uma deficincia da enzima lactase, que cliva (quebra) lactose em glicose e galactose.

Maltose Na sacarose em ambos os resduos so os semi-acetais (ambos os carbonos anomricos)

"Deficincia" no bem o termo adequado, pois a diminuio em lactase normal durante o desenvolvimento em todos os mamferos. Como as crianas so desmamadas e o leite se torna menos proeminente em suas dietas, a atividade da lactase normalmente diminui para cerca de 5 a 10% do nvel de nascimento. Esta diminuio no to acentuada com alguns grupos de pessoas, principalmente europeus do Norte, e as pessoas pertencentes a esses grupos podem continuar a ingerir leite sem problemas gastrointestinais. O que acontece com a lactose no intestino de uma pessoa com deficincia de lactase? A lactose uma boa fonte de energia para microorganismos do clon, fermentando-o a cido lctico, ao mesmo tempo, gerando os gases metano (CH4) e hidrognio (H2). O gs produzido cria a desagradvel sensao de distenso no intestino e problema de flatulncia. O cido ltico produzido pelos microorganismos osmoticamente ativo e atrai gua para o intestino, resultando em diarria. Se suficientemente grave, o gs e diarria dificultam a absoro de outros nutrientes como gorduras e protenas. O tratamento mais simples para evitar o consumo de produtos que contenham lactose. Alternativamente, a enzima lactase pode ser ingerida com produtos lcteos.

18

Polissacardeos:
So os carboidratos complexos, macromolculas formadas por milhares de unidades monossacardicas ligadas entre si por ligaes glicosdicas. Os polissacardeos mais importantes: O Amido: o polissacardeo de reserva da clula vegetal. Formado por molculas de glicose ligadas entre si atravs de numerosas ligaes alfa (1,4) e poucas ligaes alfa (1,6), ou "pontos de ramificao" da cadeia. Sua molcula muito linear, e forma hlice em soluo aquosa. O amido um poli-holosdeo ou polissacardeo de glicose--D. O amido natural sempre uma mistura de duas substncias a amilose (linear) e a amilopectina (ramificada). a) Na amilose todas as ligaes so de tipo "14"; uma cadeia linear que se enrola em espiral. (constituda por 150000 a 600000 resduos de glicose) AMILOSE

O Glicognio: o polissacardeo de reserva da clula animal. Muito semelhante ao amido, possui um nmero bem maior de ligaes alfa (1,6), o que confere um alto grau de ramificao a sua molcula. Os vrios pontos de ramificao constituem um importante impedimento formao de uma estrutura em hlice. O glicognio de origem animal e entre dois pontos de ramificao podem existir 5 a 8 resduos de glicose ligados por ligaes -1,4 (o glicognio mais ramificado que a amilopectina).

A Celulose: o carboidrato mais abundante na natureza. Possui funo estrutural na clula vegetal, como um componente importante da parede celular. Semelhante ao amido e ao glicognio em composio, a celulose tambm um polmero de glicose, mas formada por ligaes tipo beta (1,4). Este tipo de ligao glicosdica confere molcula uma estrutura espacial muito linear, que forma fibras insolveis em gua e no digerveis pelo ser humano.

b) Na amilopectina, alm das ligaes "14", ligaes "-16" que do origem s ramificaes. A amilopectina de origem vegetal e entre dois pontos de ramificao podem existir 20 a 30 resduos de glicose ligados por ligaes -1,4. AMILOPECTINA

Tanto na saliva como no suco pancretico dos mamferos existem enzimas hidrolticas (amlases) capazes de catalisar a quebra das ligaes glicosdicas -1,4 do amido e do glicognio, mas no das ligaes -1,4 da celulose. Alguns microorganismos, 19

como os que habitam o rmen de herbvoros, tm capacidade de hidrolisar as ligaes -1,4 da celulose e utiliz-la como fonte de energia.

Glicosaminoglicanos so cadeias de polissacardeos constitudas de unidades repetitivas de dissacardeos aninicos.

Estes glicosaminoglicanos so formados sempre por longas cadeias no ramificadas de unidades repetitivas de dissacardeos, geralmente uma hexosamina e um cido urnico, e so freqentemente sulfatadas. Condroitin sulfato, queratan sulfato, heparina, heparan sulfato, dermatan sulfato, and hialuronato so tipos de glicosaminoglicanos. Glicosaminoglicanos usualmente associados a protenas, formando os proteoglicanos. Entre as funes dos proteoglicanos esto a lubrificao e sustentao de tecido conjuntivo e seus elementos celulares, receptores celulares para fatores de crescimento, protenas transportadoras, e efeito anticoagulante, no caso da heparina.

CURIOSIDADES BIOQUMICAS - Os grupos sanguneos ABO

humano. Para um tipo de grupo sanguneo, uma das trs estruturas diferentes, denominadas A, B e O, podem estar presentes. Estas estruturas tm em comum uma fundao chamada de oligossacardeo O (ou, por vezes, H) antgeno. Os antgenos A e B diferem do antgeno por meio da adio de um monossacardeo extra, ou N-acetylgalactosamina (para A) ou galactose (para B) atravs de uma -1, 3 a ligao a uma fraco do galactosa O antgeno. Glicosiltransferases especficas adicionam os monossacardeos extras ao O antgeno O. Cada pessoa herda o gene de uma glicosiltransferase deste tipo a partir de cada progenitor. O tipo transferase A acrescenta especificamente N-acetylgalactosamina, enquanto o tipo B transferase acrescenta galactose, a remoo destes resduos da membrana dos eritrcitos os converte em tipo"O".

Estas estruturas tm importantes implicaes para transfuses e outros procedimentos de transplante. Se um antgeno normalmente no presente em uma pessoa introduzido, o sistema imunolgico da pessoa o reconhece como estranho. Reaes adversas de podem acontecer, iniciado pela destruio intravascular dos glbulos vermelhos incompatveis.

Figura 3-7: Unidades Repetitivas em Glicosaminoglicanos. Frmulas estruturais para cinco unidades repetitivas de importantes glucosaminoglicanos ilustram a variedade de modificaes e ligaes que so possveis. Amino grupos so mostrados em azul e em vermelho os grupos carregados negativamente.

20

3. Lipdios
Lipdios so biomolculas caracterizadas pela baixa solubilidade em gua e em outros solvente polares e alta solubilidade em solventes apolares. So vulgarmente conhecidos como gorduras e suas propriedades fsicas esto relacionadas com sua natureza hidrfoba. So molculas que possuem uma grande variedade de formas estruturais, tendo em comum somente o fato de serem hidrofbicas e serem biosintetizadas a partir da acetil-CoA. Este fato coloca os lipdios como uma importante molcula dentro do metabolismo energtico, uma vez que a acetilCoA a molcula que inicia os principais processos bioenergticos. De certa forma, os lipdios possuem uma funo energtica mais reservada ao armazenamento do que o aproveitamento puro e simples de seu poder energtico. Os lipdios no so biomolculas polimricas como os cidos nuclicos, protenas e os principais carboidratos, mas possuem uma capacidade de agrupar-se em molculas complexas e possuem, muitas vezes, longas cadeias carbonadas responsveis pelas suas propriedades hidrofbicas. Justamente por serem insolveis, os lipdios so fundamentais para estabelecer uma interface entre o meio intracelular e o extracelular, francamente hidrfilos. A membrana celular corresponde a esta barreira lipdica onde o impedimento de fluxo livre de compostos hidrossolveis, coloca as protenas de membrana como os portais de controle da composio celular. Possuem funes importantssimas para o metabolismo celular tanto de eucariotas como procariotas (Figura 4-1), podendo-se relacionar como principais as seguintes:
Figura 4-1 Os lipdios exercem as mais variadas e importantes funes no metabolismo dos seres vivos.

Composto bioqumico mais calrico em animais e sementes oleaginosas sendo a principal forma de armazenamento (triglicerdeos) e gerao de energia metablica atravs de via metablica especfica (-oxidao de cidos graxos); Componentes das membranas celulares, juntamente com as protenas (fosfolipdios, esfingolipdios e colesterol); Componentes de sistema de transporte de eltrons no interior da membrana mitocondrial (umbiquinona); Formam uma pelcula protetora (isolante trmico) sobre a epiderme de muitos animais (tecido adiposo); Funes especializadas como hormnios, sinalizadores celulares, antioxidantes. So vrios os usos dos lipdios, seja na alimentao (leos de gros, margarina, manteiga, maionese), seja como produtos manufaturados (sabes, resinas, cosmticos, lubrificantes). A nica propriedade qumica comum aos lipdios seu carter hidrofbico e a presena de uma extremidade na molcula que possui certa polaridade e que possibilita sua ligao com compostos polares, que vo tornar possvel seu transporte em meio solveis. Caracteriza-se na molcula dos lipdios, assim, uma cabea polar e uma cauda apolar (Figura 4-2). A cabea polar , geralmente, a carboxila (p.ex.: nos cidos graxos), a hidroxila (p.ex.: no colesterol) ou outro composto polar (p.ex.: o grupamento fosfato nos fosfolipdios). A cauda apolar todo o restante da molcula, formada, predominantemente de carbono e hidrognio, podendo haver ou no duplas ligaes (cadeia insaturada). 21

Os lipdios em soluo aquosa tendem a agregar-se pela cauda apolar deixando a cabea polar em contato com o meio aquoso, formando uma molcula globosa denominada micela que ser tanto mais solvel, quanto maior for a polaridade da cabea polar.

Classificao
Devido a grande variabilidade estrutural dos lipdios, muitos tipos de classificaes so propostas dependendo do ponto de vista, se qumico ou biolgico. Adotaremos uma classificao didtica que atende a ambos ponto de vistas, que agrupa os lipdios de acordo com a presena ou no de cidos graxos em sua molcula. Os lipdios que possuem cidos graxos (cidos carboxlicos com grande cadeia carbonada) so saponificveis, uma vez que reagem com bases fortes formando sabes. So lineares em sua maioria, podendo ser saturados ou insaturados. Possuem funo energtica e estrutural. So os acilgliceris, fosfolipdios, esfingolipdios e ceras. Os lipdios que no possuem cidos graxos em sua molcula, no so saponificveis e no so energticos. A maioria possui funo estrutural ou especializada (hormnios, vitaminas, antioxidantes), desempenhando papel chave em vrias vias metablicas. So os esterides e Eicosanides.

Figura 4-2 Representao didtica de uma molcula de lipdio evidenciando a parte polar e a apolar de sua molcula.

Vrios arranjos micelares so possveis, sendo a prpria camada bi-lipdica das membranas celulares um produto deste arranjo (Figura 4-3). Os lipdios com a cabea polar com pouqussima capacidade de solubilizao (p.ex.: os triglicerdeos, os steres do colesterol), necessitam, freqentemente da adio de compostos emulsificantes (solubilizantes de gorduras) para incrementar a formao das micelas. Esses emulsificadores podem ser protenas (lipoprotenas), carboidratos (glicoprotenas) ou emulsificantes digestivos (sais biliares).

cidos Graxos
Os cidos graxos so cidos carboxlicos de cadeia longa que pode ser saturada ou insaturada e quase sempre de nmero par de carbonos e de cadeia linear. Os cidos carboxlicos j apresentam severa diminuio em sua solubilidade acima de oito carbonos, apesar de serem mais freqentes na natureza os com mais de 14 C e menos de 20 C. Os cidos graxos saturados so sintetizados tanto por vegetais quanto por animais, o que lhes d larga distribuio na natureza. Esta alta estabilidade lhes confere altas temperaturas de fuso, ou seja, em temperatura ambiente, eles esto no estado slido (o cido lurico possui a mais baixa temperatura de fuso: 44oC enquanto que o cido lignocrico liquefaz-se somente em 84,2oC). Esta propriedade permite que os lipdios ricos em cidos graxos saturados

Figura 4-3 Arranjo estrutural micelar dos lipdios em soluo aquosa. A) micela globosa; B) bicamada lipdica; C) bicamada lipdica em forma de membrana separando dois ambientes lquidos distintos.

22

tenham o aspecto de gordura slida (sebo), o que comum nas gorduras animais. Os cidos graxos insaturados possuem um arranjo estrutural menos estvel, devido dupla ligao que desestabiliza as camadas de lipdios, conferindo uma temperatura de fuso bastante baixa (no cido nevrnico a temperatura de fuso de 39oC enquanto que no cido araquidnico de 49,5oC). Desta forma, os lipdios ricos em cidos insaturados possuem o estado lquido (leos) em temperatura ambiente, o que prprio das gorduras vegetais. Os mamferos no possuem enzimas que sintetizam cidos graxos insaturados (dessaturases) cuja dupla ligao esteja abaixo do C16, o que torna os cidos graxos insaturados com dupla ligao abaixo do C16, impossveis de serem sintetizados pelos mamferos, tornando-se essenciais na dieta. Os cidos araquidnico, linolico, linolnico e olico so considerados cidos graxos essenciais justamente por esse motivo e associado ao fato de possurem funes especialssimas na biologia celular. Uma alimentao isenta de gorduras levar carncia desses cidos graxos com conseqncias patolgicas severas.

Acil-gliceris
So assim denominados por se tratarem de molculas compostas por grupamentos acil (cido graxo) (R-COO-) ligado ao glicerol. So formados pela esterificao de um, dois ou trs cidos graxos (saturados ou insaturados, iguais ou no) com uma molcula de glicerol, formando mono, di ou triacilglicerol, comumente denominados de mono, di ou triglicerdeos, denominao vulgar e quimicamente incorreta, mas de grande uso na prtica clnica e laboratorial sendo a denominao utilizada nesta apostila (Figura 4-5).

A
Figura 4-5 - Os triglicerdeos so os principais acilgliceris. A) uma molcula de glicerol une-se a trs molculas de cidos graxos atravs ligaes ster. B) O triglicerdeo formado possui o primeiro e terceiro cido graxo no mesmo plano, opostos ao segundo cido graxo.

Figura 4-4 Representao esquemtica do arranjo das cadeias saturadas e insaturadas em lipdios. A) cido graxo saturado (cido palmtico); B) cido graxo insaturado (cido palmitolico).

Os triglicerdeos so os principais lipdios de reserva tantos de animais quanto de vegetais, o que os coloca como uma das molculas mais calricas utilizadas no metabolismo celular. So uma espcie de reserva molecular de cidos graxos, sendo necessria a quebra da ligao ster por enzimas hidrolticas denominadas, genericamente, lpases liberando os cidos graxos de sua molcula. Em animais, so armazenados no tecido adiposo, que tem a capacidade de absorver grande quantidade dos triglicerdeos provenientes da alimentao, alm de sintetizar novas molculas a partir de outros 23

substratos. A deposio do tecido adiposo promove, ainda a formao de uma camada protetora contra a perda de calor, indispensvel para animais que vivem em clima frio. Os triglicerdeos so encontrados tanto em gorduras animais quanto em leos vegetais, havendo apenas uma predominncia de cidos graxos insaturados nos triglicerdeos de origem vegetal, devido a incapacidade dos animais em sintetizar a maioria dos cidos graxos insaturados necessrios para o metabolismo.

Fosfolipdios
So derivados dos triglicerdeos, onde o terceiro cido graxo substitudo por uma poro extremamente polar contendo fosfato (PO3-2) ligado a um composto X que pode ser de vrias origens (Figura 4-6). Geralmente no segundo carbono tem um cido graxo insaturado (freqentemente o cido araquidnico).

substncia surfactante pulmonar que impede o colabamento (unio das superfcies internas) dos alvolos pulmonares. Esta substncia ajuda a diminuir, tambm, o efeito fsico da presso dos gases respiratrios sobre o alvolo. A produo desta substncia surfactante, entretanto encontrase em plena produo somente aps o nascimento, o que leva a crianas que nascem prematuramente, portanto com pouco surfactante pulmonar, a desenvolverem um quadro srio de insuficincia respiratria devido a dificuldade de encher os alvolos colabados. Esta condio patolgica (conhecida como sndrome da angstia respiratria) tambm pode se estabelecer em adultos sempre que diminui a produo desse fosfolipdio. Quando h a retirada de um dos cidos graxos da molcula de um fosfolipdio, a molcula resultante (fosfolisolipdio) possui potente ao detergente e, realmente, destri a membrana, provocando, obviamente, a morte celular. Enzimas que possuem essa funo (fosfolipase A2) esto presentes em venenos de cobra e de abelhas, justificando a potente ao ltica tecidual. Outras enzimas que retiram a cabea polar (fosfolipase C) geram diacil-gliceris que agem como segundo mensageiros de alguns hormnios.

Esfingolipdios
Figura 4-6 Os fosfolipdios possuem estrutura semelhante aos triglicerdeos. O grupo X pode ser o H (cido fosfatdico, o mais simples), etanolamina, colina, serina, inositol, glicerol ou fosfatidilglicerol. A lectina e a cardiolipina so denominaes vulgares da fosfatidilcolina e do difosfatidilglicerol, respectivamente.

So formados por um cido graxo ligado a uma molcula de esfingosina (um aminolcool) e uma cabea polar X (Figura 47).

Graas grande cabea polar, os fosfolipdios so importantes constituintes da membrana celular, onde o contato com o lquido intracelular e o extracelular viabilizado pela formao a bicamada lipdica. Apesar da grande importncia com lipdios estruturais da membrana, os fosfolipdios possuem papel fundamental em outros processos biolgicos. o caso do dipalmitoilfosfatidilcolina (a fosfatidilcolina cujos cidos graxos so o cido palmtico) que o principal componente da

Figura 4-7 A molcula de esfingolipdio constituda pela esfingosina ligada a somente um cido graxo e uma cabea polar X. O mais simples possui X = H (ceramida) e a base dos demais esfingolipdios.

Dependendo da natureza de X, tm-se diversos tipos de esfingolipdios. A ceramida possui o H como cabea polar, enquanto que 24

Figura 4-8: Exemplos de estruturas qumicas de diferentes lipdios.

25

os demais possuem grupamentos bem definidos, agrupando-se em trs classes distintas: esfingomielinas, cerebrosdeos e gangliosdeos. Esses esfingolipdios possuem funo de proteo e revestimento eltrico dos axnios neuronais, sendo os principais constituintes da bainha de mielina dos neurnios.

Eicosanides
So lipdios no saponificveis derivados do cido araquidnico de 20C (Figura 4-9). So importantes hormnios locais, produzidos no local de uma reao inflamatria e responsveis pela potencializao do sinal qumico da inflamao, no sendo disseminado pela corrente sangunea como os hormnios clssicos. Outras funes primordiais so desempenhadas pelos diferentes tipos de eicosanides. As prostaglandinas so produzidas em quase todos os tecidos e esto envolvidas nos processos de sono e viglia, resposta inflamatria e contrao dos msculos lisos do tero. As tromboxanas so produzidas pelas plaquetas e atuam na diminuio do fluxo sangneo e na formao de trombos (tampes celulares que impedem a hemorragia de pequenos vasos). Os leucotrienos so produzidos pelos leuccitos atuando na contrao da musculatura lisa dos pulmes. A maioria dos medicamentos que atuam inibindo o processo de dor (analgsicos no derivados de esterides) inibidor da via de sntese das prostaglandinas. Os medicamentos que inibem a sntese de leucotrienos so excelentes anti-asmticos e os que inibem a sntese de tromboxanas acarretam uma diminuio da formao de trombos, til para quem tem problemas de coagulao intravascular disseminada (uma doena que possibilita o despreendimento de trombos e a obstruo de vasos sanguneos).

Lipdios esterides
Tambm chamados de esteris, este grupo de lipdio no saponificvel possui possuem como estrutura molecular bsica o ncleo-pentano-per-hidro-fenantreno. (Figura 4-8). Possuem funo diversificada que vai desde estrutural at a especializados hormnios e vitamina (Vitamina D). O colesterol o principal representante deste grupo e sintetizado exclusivamente em animais, possuindo funo importante na formao da membrana celular e na sntese de cidos biliares e hormnios esterides (p.ex.: os hormnios sexuais). Um similar vegetal do colesterol, os fitoesterides, no so absorvidos durante a digesto no possuindo, portanto funo metablica ou patolgica em seres humanos.

Figura 4-9 Os principais esterides.

Figura 4-9 Os eicosanides so derivados do cido araquidnico (20:45,8,11,14).

26

4. Nucleotdeos
Todas as clulas dos seres vivos possuem DNA e RNA, com exceo dos vrus que no so organismos celulares e possuem DNA ou RNA em sua composio, nunca os dois ao mesmo tempo. O DNA difere do RNA em vrios aspectos que vo desde a composio molecular, forma estrutural, at a funo e mecanismo de sntese, possuindo, entretanto, vrias semelhanas que os torna molculas irms e de extrema importncia para o estudo da bioqumica celular, por serem responsveis por todas as caractersticas da clula e as molculas alvo da evoluo. Quimicamente, os cidos nuclicos so polmeros de nucleotdeos unidos por ligaes do tipo fosfo-di-ster, formando uma molcula polimrica. Nucleotdeos so as unidades bsicas dos cidos nuclicos e so formados, sempre, por uma molcula de pentose a qual se liga a uma molcula de base nitrogenada e uma molcula de fosfato em pontos especficos e de maneira covalente, adquirindo forma estrutural helicoidal prpria e caracterstica do tipo de molcula. Embora faam parte da composio dos cidos nuclicos, os nucleotdeos so encontrados na forma livre dentro da clula, sendo responsveis por funes no relacionadas diretamente com a reproduo celular, como o caso do ATP (Figura 5-1). A unio das bases nitrogenadas pentose, somente, forma um nucleosdeo, ou seja, um nucleotdeo desprovido e fosfato. A pentose (monossacardeo de 5 carbonos) pode ser a ribose (no RNA) ou a desoxirribose (no DNA) ambas em sua forma cclica pentagonal de furanose. Em um nucleotdeo, convenciona-se identificar os carbonos da pentose acrescentando o apstrofo para diferenci-lo dos carbonos da base nitrogenada, desta forma o C1', C2', C3' e C5' esto aptos realizar ligaes qumicas atravs das hidroxilas (-OH) livres nestes carbonos, com exceo da desoxirribose que no possui hidroxila no C2' (Figura 5-2).

Figura 5-1: Estrutura molecular da adenosina-trifosfato (ATP), um nucleotdeo. A base nitrogenada liga-se ao C1' e o fosfato no C5' da pentose.

Figura 5-2 - As pentoses presentes nos cidos nuclicos so a ribose (no RNA) e a desoxirribose (no DNA) que possui uma -OH a menos no C2'.

As bases nitrogenadas presentes nos cidos nuclicos so de dois tipos: as bases pricas, purnicas ou, simplesmente, purinas e as bases pirimdicas, pirimidinicas ou pirimidinas (Figura 5-3), com todas elas ligando- se molcula de pentose no C1', sendo que nas purinas o ponto de ligao o nitrognio na posio 9 (N9) e nas pirimidinas o N1. Presentes tanto no DNA quanto no RNA, encontram-se a adenina, citosina e a guanina, com a timina sendo prpria do DNA e a uracila do RNA. Esta excluso de bases nitrogenadas d-se devido impossibilidade da timina no RNA e uracila no DNA parearem formando uma perfeita hlice.

27

Figura 5-3 - As bases nitrogenadas que fazem parte da composio dos cidos nuclicos. As bases purnicas ligam-se ao C1' da pentose atravs do N na posio 9, enquanto que as bases pirimidnicas ligam-se em C1 pelo N1.

A ligao entre os nucleotdeos ocorre, portanto, atravs de ligaes covalentes extremamente fortes tendo um grupamento fosfato como ligante, as ligaes fosfo-dister(Figura 5-4). Essas ligaes garantem um "esqueleto" covalente rgido para a molcula de cido nuclico e que s clivado sob ao de enzimas hidrolticas digestivas denominadas de nucleases (DNase e RNase). A ligao entre as molculas de nucleotdeos que permite a polimerizao e a estrutura final do DNA e RNA ocorre entre a hidroxila do C3' de um nucleotdeo com o fosfato hidroxila do C5' do outro nucleotdeo, de forma que sempre o C5' do primeiro nucleotdeo ter um fosfato livre, enquanto que o ltimo nucleotdeo adicionado ter sempre -OH livre no C3'. Esta uniformidade na configurao da cadeia polimrica de nucleotdeos, tanto de DNA quanto de RNA, confere uma direo molcula onde convencionado que o primeiro nucleotdeo de uma determinada seqncia o que tem a extremidade 5' livre, enquanto que o ltimo ter a extremidade 3' livre.

Figura 5-4 - Direo da polimerizao orientada no sentido 5' 3'' de um dmero de RNA. Observe como o primeiro nucleotdeo sempre ter a extremidade 5' livre e o ltimo extremidade 3'. A ligao do tipo fosfo-dister extremamente rgida e confere alta estabilidade cadeia polimerizada de cidos nuclicos.

28

5. Metabolismo
Uma das principais funes da bioqumica estudar o metabolismo celular, ou seja, a maneira como a clula sintetiza e degrada molculas dentro de um processo coordenado para garantir sua sobrevivncia com o mximo de economia energtica. O anabolismo (sntese das biomolculas) sempre um processo que necessita de energia para que ocorra. Isto tpico de situaes onde o estado energtico celular est com excesso de substratos para a sntese e, portanto, h bastante energia disponvel no meio celular. De maneira inversa, o catabolismo ir liberar energia quando as biomolculas forem degradadas. Isto acontecer sempre quando houver necessidade energtica e as molculas degradadas funcionaro como os substratos para a liberao de energia que o meio celular necessita. Anabolismo e catabolismo correspondem a processos antagnicos, mas que ocorrem de maneira articulada permitindo a maximizao da energia disponvel dentro da clula. Dentro desse ponto de vista, cada molcula degradada libera energia para o meio que ser utilizada por alguma reao de sntese num acoplamento perfeito das reaes endergnicas e exergnicas. As biomolculas energticas so os carboidratos, lipdios e protenas que so obtidas em grandes quantidades durante a alimentao ou so mobilizadas das reservas orgnicas quando so ingeridas em quantidade insuficiente na alimentao ou quando o consumo energtico aumenta grandemente (p.ex.: durante a realizao de exerccios fsicos). A forma final de absoro da energia contida nessas molculas se d na forma de ligaes de alta energia do ATP o qual sintetizado nas mitocndrias por processos oxidativos que utilizam diretamente o O2. Desta forma, essencial a presena de mitocndrias e de oxignio celular para o aproveitamento energtico completo das biomolculas. Quando no h mitocndrias (p.ex.: nas hemcias) ou quando a quantidade de O2 disponvel insuficiente (p.ex.: em clulas musculares submetidas a extremo esforo fsico), o metabolismo anaerbico ocorre.

Entretanto, enquanto o metabolismo aerbico comum a todas as biomolculas energticas, o metabolismo anaerbico exclusividade dos carboidratos, onde o produto final lactato pode ser reciclado e gerar novas molculas de glicose (atravs da gliconeognese), num processo que necessita de mitocndrias. No s o lactato convertido em glicose por esta via, mas vrias outras molculas como aminocidos e o glicerol. Algumas vias metablicas so exclusivas de algumas biomolculas, como o caso da sntese de glicognio a partir de glicose e da sntese de uria no fgado, a partir do grupamento amino dos aminocidos. Alguns processos, entretanto so comuns a todas as biomolculas, como o caso da neoglicognese que utiliza como substrato o lactato proveniente do metabolismo da glicose, o glicerol proveniente dos cidos graxos e vrios aminocidos. Nas hemcias, em particular, uma via metablica no mitocondrial (a via da pentosefosfato) produz grandes quantidades de NADPH que possui funo antioxidante e constitui importante rota metablica nesta clula, apesar de tambm ocorrer em tecidos onde a sntese biolgica alta (p.ex.: nos hepatcitos). O metabolismo dividido, didaticamente, em trs estgios distintos onde a produo de energia ser disponibilizada a partir de substratos especficos (Figura 1-1). Num primeiro estgio, as biomolculas grandes so degradadas em suas molculas constituintes em um processo que corresponde digesto, quando h alimentos disponveis. Dentro de um ponto de vista de necessidade energtica, esses substratos sero mobilizados das reservas biolgicas. Esta primeira fase promove a liberao de 20 aminocidos a partir da degradao protica, cidos graxos e glicerol a partir dos triglicerdeos e glicose a partir do amido alimentar ou do glicognio muscular e heptico. Numa segunda fase, essas molculas simples so degradadas em vias metablicas especficas onde o produto final principal a molcula de acetil-CoA que formada dentro das mitocndrias. As maneiras como a acetilCoA formada so muito variadas. De uma forma geral, a gliclise forma piruvato a partir da glicose no citoplasma que convertido em acetil-CoA na mitocndria. Somente sete aminocidos geram direto acetil-CoA com os demais gerando

29

intermedirios da gliconeognese. Os cidos graxos geram acetil-CoA atravs da betaoxidao, um processo intramitocondrial, mas que se inicia no citoplasma com a ativao dos cidos graxos. Esta segunda fase do metabolismo possui uma diversidade muito grande de vias metablicas prprias de cada biomolculas, porm o produto final comum, a acetil-CoA, faz com que seja necessrio perfeita integrao para o incio da prxima fase mitocondrial. A terceira e ltima fase do metabolismo ocorre somente em condies de aerobiose e no interior das mitocndrias. A acetil-CoA a molcula que inicia esta fase com o ciclo de Krebs (Ciclo do cido Ctrico) a etapa crucial onde a formao de citrato desencadeia o processo que levar a formao de alto potencial redutor verificado na formao de molculas de NADH e FADH2, alm de ATP formados na matriz mitocondrial. Associado a este ciclo, uma cadeia de transporte dos eltrons retirados dos substratos pelos NADH e FADH2, presente na crista da mitocndria, permite a sntese de ATP em grande escala a partir da oxidao do O2 proveniente da respirao que se combina com os H+ mitocondrial e os eltrons liberados, formando H2O. Este processo extremamente eficaz e a concentrao de acetil-CoA mitocondrial fundamental para o sucesso deste processo. Um excesso de acetil-CoA leva ao desvio da sntese de ATP para a sntese de cidos graxos, colesterol e corpos cetnicos. Este desvio do metabolismo energtico muito comum e um a forma eficaz de impedir o excesso do metabolismo oxidativo mitocondrial com a superproduo de ATP. Apesar da sntese desses compostos ser citoplasmtica, o excesso de acetil-CoA mitocondrial que inicia esta sntese, em um processo ordenado e extremamente eficaz, tpico de quando h excesso de substratos energticos provenientes da alimentao ou da degradao dos cidos graxos provenientes dos adipcitos.

30

Figura 1-1 As trs fases do metabolismo.

31

6. Metabolismo dos aminocidos e das protenas

A frao metablica de energia obtida a partir de aminocidos, se eles so derivados de protena diettica ou a partir de protena tecidual, varia muito com o tipo de organismo e com condies metablicas. Carnvoros podem obter (imediatamente aps uma refeio) at 90% das suas necessidades energticas a partir da oxidao de aminocidos, enquanto que herbvoros podem preencher apenas uma pequena frao de suas necessidades energticas por esta via. A maioria dos microrganismos pode expulsar aminocidos a partir de seu ambiente e utiliz-los como combustvel, quando exigido pelas condies metablicas. Plantas, no entanto, raramente ou nunca oxidam aminocidos para fornecer energia, os hidratos de carbono produzidos a partir de CO2 e H2O na fotossntese so geralmente sua nica fonte de energia. Nos animais, aminocidos sofrem degradao oxidativa em trs diferentes circunstncias metablicas: 1. Durante o procedimento normal de sntese e degradao de protenas celulares alguns aminocidos que so liberados a partir de protena de degradao e no so necessrios para a nova sntese protica sofrem degradao oxidativa. 2. Quando uma dieta rica em protenas e aminocidos e a ingesto ultrapassa as necessidades do organismo para a sntese protica, o excedente catabolizado; aminocidos no podem ser armazenados. 3. Durante o jejum prolongado ou de diabetes mellitus no controlada, quando carboidratos ou esto indisponveis ou no devidamente utilizados, as protenas celulares so utilizados como combustvel. De acordo com todas estas condies metablicas, aminocidos perdem os seus grupos amino para formar grupos -ceto cidos, os "esqueletos de carbono" de

aminocidos. Os -ceto cidos sofrem oxidao a CO2 e H2O, ou, muitas vezes mais importante ainda, fornecem trs e quatro unidades de carbono que podem ser convertidos por neoglicognese em glicose, o combustvel para o crebro, msculo esqueltico, e de outros tecidos. Como no catabolismo de carboidratos e cidos graxos, os processos de degradao de aminocidos convergem em vias catablicas centrais, com os esqueletos de carbono da maioria dos aminocidos encontram o seu caminho para o ciclo de cido ctrico. Uma importante caracterstica distingue os aminocidos de outros processos de degradao catablica: cada aminocido contm um grupo amino, e as vias de degradao de aminocidos, portanto, incluem um passo-chave na qual o grupo -amino grupo separado do esqueleto de carbono e destinado para as vias metablicas do grupo amino.

Figura 1. Viso geral do catabolismo de amino acidos em mamferos. Os grupos amino e os esqueletos carbnicos seguem caminhos distintos, mas interligados.

Os aminocidos so importantes fontes de energia para o metabolismo celular, porm s so utilizados quando h uma extrema carncia

32

energtica ou durante a prtica de exerccios fsicos intensos. importante frisar que os carboidratos e lipdios so melhores produtores de energia e a mobilizao de aminocidos pode estar relacionada a uma degradao de protenas musculares ou plasmticas levando o organismo a uma depleo dessas protenas, o que pode trazer conseqncias desastrosas como a atrofia muscular e a hipoalbuminemia. A sntese da uria um dos processos metablicos mais importantes, pois impede a formao de amnia txica ao organismo a partir do nitrognio protico, exclusiva do fgado, o que o torna o centro da degradao de aminocidos. Os msculos precisam ajustar o consumo de aminocidos com a exportao da amnia para o fgado na forma dos aminocidos glutamina ou alanina, em uma via metablica extremamente importante e que permite o equilbrio fisiolgico, principalmente durante a realizao de exerccios fsicos, como ser discutido adiante. A uria a principal forma de excreo do nitrognio protico nos vertebrados terrestres. Em aves e rpteis, o cido rico a principal forma de excreo do nitrognio protico; em peixes e larvas de anfbios a amnia excretada intacta, permanecendo em alta concentrao plasmtica em peixes de gua salgada para manter o equilbrio osmtico.

comum em todos os tecidos podendo ocorre por dois processos diferentes: a transaminao e a desaminao. A transaminao ou aminotransferncia catalisada por enzimas chamadas transaminases ou aminotransferases, que possuem como co-fator o piridoxal-fosfato, a forma ativa da vitamina B6.

Amnia

cido rico

Figura 2: Piridoxal fosfate, o grupo prostetico das aminotransferases. (a) Piridoxal fosfato (PLP) e sua forma aminada, piridoxamine fosfato, so coenzimas estritamente vinculadas s aminotransferases. Os grupos funcionais esto sombreados. (b) Piridoxal fosfato est ligado enzima atravs de interaes no-covalentes e por uma base de Schiff a um resduo de Lisina no stio ativo.

Uria

1. Transaminao e Desaminao
A maior parte do nitrognio protico no utilizada em vias metablicas nos seres humanos. Sendo assim, a retirada do grupamento amino (-NH3+) dos aminocidos o primeiro passo metablico, com a formao de amnia (NH3), um composto altamente txico que excretada, na forma de uria pelos rins. O processo de sntese da uria envolve enzimas tanto citoplasmticas quanto mitocondriais. A retirada do grupamento amino a reao preparatria para essa sntese e

Figura 3. Aspartate Aminotransferase. O stio ativo da enzima dependente de PLP; inclui piridoxal fosfato anexada enzima por uma base de Schiff articulada com lisina 268. Um resduo de arginina no stio ativo ajuda a orientar os substratos pela ligao aos seus grupos.

33

Esse processo metablico consiste na transferncia do grupamento amino para o cetoglutarato (um cetocido) formando um outro cetocido e o aminocido glutamato. Dependendo do aminocido transaminado, haver um tipo diferente de cetocido formado (p.e.x.: a alanina forma o piruvato; o aspartato forma o oxalacetato) porm sempre o mesmo aminocido glutamato formado. Isso faz com que aps essa reao, uma grande quantidade de glutamato seja produzida no fgado.

Ensaios para avaliao de dano tecidual.

Figura 4: Transaminaes catalisadas por enzima. Em muitas reaes de aminotransferase, o cetoglutarato o grupo amino aceptor. Todas as aminotransferases tm piridoxal fosfato (PLP) como cofator.

Anlises de certas atividades enzimticas no soro sangneo podem dar valiosas informaes sobre diagnsticos para uma srie de doenas. Alanina aminotransferase (ALT; tambm chamada transaminase-glutmicopirvica TGP) e aspartato aminotransferase (AST, tambm chamada glutamateoxaloacetate transaminaseglutmico-oxalactica, GOT) so importantes no diagnstico do corao e do fgado causada por ataque cardaco, toxicidade de drogas, ou infeco. Depois de um ataque cardaco, uma variedade de enzimas, incluindo as aminotransferases, vazam do corao lesado para a circulao sangunea. As medies das concentraes de soro sangneo das duas aminotransferases pelos testes SGOT e SGPT (S de soro) e de uma outra enzima, a creatinofosfoquinase, pela SCK-teste podem fornecer informaes sobre a gravidade dos danos. O SGOT e SGPT testes tambm so importantes na medicina ocupacional, para determinar se as pessoas expostas ao tetracloreto de carbono, clorofrmio, ou outros solventes industriais sofreram danos hepticos. Degenerao heptica causada por estes solventes acompanhada de extravazamento de vrias enzimas a partir de hepatcitos para o sangue.
Glutamato libera seu grupo amino como amnia no fgado.

Figura 5 - A transaminao dos aminocidos ocorre com a formao de um nico aminocido, o glutamato, e um cetocido para cada tipo de aminocido metabolizado. O aceptor de amino o cetocido -cetoglutarato.

As principais transaminases do hepatcito so a transaminaseglutmicopirvica (TGP) ou alanina aminotransferase (ALT) e a transaminaseglutmicooxalactica (TGO) ou aspartato aminotransferase (AST). Essas enzimas transaminam a alanina e o aspartato, respectivamente, possuindo tambm ao sobre os demais aminocidos, apesar de haver uma transaminase para cada tipo de aminocido.

Nos hepatcitos, o glutamato transportado do citosol para mitocndrias, onde ele sofre desaminao oxidativa catalisada pela glutamato desidrogenase. Em mamferos, esta enzima est presente na matriz mitocondrial. a nica enzima que pode usar tanto NAD_ ou NADP_ como o aceptor de equivalentes de reduo. A ao combinada de uma aminotransferase e da glutamato desidrogenase referida como transdesaminao. O -cetoglutarato formado a partir da desaminao do glutamato podem ser usado no ciclo do cido ctrico ou para a sntese de glicose. A vantagem da transaminao justamente a formao de glutamato e a necessidade de uma nica via metablica posterior para a degradao dos aminocidos. 34

necessita ser convertida em uria mas o msculo no possui as enzimas para essa sntese, somente o fgado. Logo, h a necessidade da formao de um produto no txico para transportar a amnia dos tecidos extrahepticos para serem metabolizadas at uria no fgado. A glutamina e alanina realizam esta funo.

Glutamina Transporta Amnia no sangue O aminocido glutamina o principal transportador de amnia plasmtica aps ser sintetizado a partir da unio de glutamato com amnia pela ao da enzima glutaminasintetase. O glutamato no atravessa a membrana celular devido sua carga eltrica. uma reao que gasta ATP e produz a glutamina que ser degradada at glutamato e amnia no fgado.

Figura 6 - A desaminao oxidativa um processo intramitocndrial que gera amnia par a sntese de uria. estimulada pelo ATP e inibida pelo GTP. O -cetoglutarato regenerado para o citoplasma.

A toxidade da amnia formada impede que esta reao seja citoplasmtica pois poderia levar a sua sada para o sangue, o que acarretaria danos srios, principalmente ao sistema nervoso central. A desaminao oxidativa uma reao intramitocondrial e est acoplada a um processo eficaz de degradao da amnia formada, a sntese da uria. Essa desaminao mitocondrial, requer NAD+ ou NADP+ como receptor dos eltrons da reao. Com a retirada do grupamento amino do aminocido, h a formao de um cetocido. No caso do glutamato (principal aminocido dessa via) o cetocido formado o -cetoglutarato que sai da mitocndria e retorna ao citoplasma para servir de substrato para outra reao de transaminao. O -cetoglutarato um intermedirio do Ciclo de Krebs e a sua sada da mitocndria s pode ocorrer quando o Ciclo de Krebs no est ativo, caso contrrio ele ser utilizado como substrato das enzimas. Em vertebrados, a atividade da glutamato desidrogenase alostericamente regulada. Guanosina trifosfato e adenosina trifosfato so inibidores alostricos, enquanto guanosina difosfato e adenosina difosfato so ativadores alostricos. Assim, uma reduo da energia, acelera a oxidao de aminocidos. Um problema adicional enfrenta os msculos quando degradam aminocidos para o metabolismo energtico: a amnia formada

Figura 7: Transporte de Amnia sob a forma de glutamina. O excesso de amnia nos tecidos adicionada ao glutamato para formar glutamina, um processo catalisado pela glutamina sintetase. Aps o transporte na corrente sangunea, a glutamina penetra no fgado e a NH4 + liberada na mitocndria pela enzima glutaminase.

35

Alanina Transporta Amnia Msculos Esquelticos ao Fgado

dos

O aminocido alanina tambm um importante transportador de amnia dos tecidos extra-hepticos. Entretanto, a sua sntese atende a algumas necessidades musculares especficas e s observada quando h um intenso trabalho muscular. Nessa situao metablica, o msculo tende a produzir muito lactato resultante da gliclise anaerbica, a partir do piruvato. O lactato pode ser reciclado no fgado gerando nova molcula de glicose na neoglicognese. Porm, o H+ liberado para o sangue tende a levar a uma acidose que uma das causas da fadiga muscular. Da mesma forma, o msculo est degradando muitos aminocidos e aumentando perigosamente a amnia celular. Assim sendo, a sntese da alanina resolve estes dois problemas de uma s vez, j que so necessrios piruvato e amnia para sintetizar uma molcula de alanina (Figura10-29). A alanina captada pelo fgado e degradada gerando novamente o piruvato, que reciclado na neoglicognese fornecendo novas molculas de glicose, garantindo um "segundo flego" para o praticante de exerccio fsico intenso com uma nova carga de glicose plasmtica para o metabolismo energtico. Esta via metablica denominada de Ciclo da glicose-alanina um importante meio de economia energtica do organismo.

Figura 8: Ciclo Glicose-alanina. Alanina serve como um transportador de amnia e do esqueleto de carbono a partir do piruvato do msculo esqueltico ao fgado. A amnia entra no ciclo da uria e o piruvato utilizado para a produo de glicose, que devolvida ao msculo.

36

2. Sntese da uria
No fgado, ir haver a produo de grande quantidade de um composto nitrogenado atxico formado por duas molculas de amnia, conjugadas com CO2 - a uria. Esta reao se processa parte no citoplasma e parte na mitocndria do hepatcito. Na seqncia de reaes envolvendo a sntese da uria (Figura 10-27), h a sntese do aminocido arginina e a participao dos aminocidos no codificados ornitina e citrulina. A arginina consumida em grande quantidade na produo de uria o que faz com que seja necessria na alimentao de animais jovens, em fase de crescimento. Portanto, esse aminocido apesar de ser sintetizado torna-se essencial na alimentao. As reaes do ciclo da uria podem ser agrupadas a seguir: a) Formao da carbamoil-fosfato: na mitocndria, h a hidratao de um CO2 e uma NH3 (proveniente da desaminao do glutamato), com o gasto de 2 ATP's; Cabamoil-fosfato Sintetase I. 1) Formao da citrulina: o carbomoilfosfato doa seu grupamento carbomoil para a ornitina, que penetrou na mitocndria atravs de um transportador especfico, formando a citrulina. A citrulina sai da mitocndria pelo mesmo transportador de ornitina; Ornitina trancarbamilase. 2) Formao do arginino-succinato: atravs da incorporao de aspartato na molcula de citrulina, com gasto de 1 ATP, no citoplasma. Esse aspartato mobilizado da mitocndria atravs do mesmo transportador que promove a entrada de glutamato na mitocndria; Arginino-succinato sintase. 3) Sntese da Arginina: o arginino-succinato sofre quebra, liberando uma molcula de fumarato e uma molcula de arginina. Esse fumarato requerido para o Ciclo de Krebs,

ativando-o, o que faz com que a sntese de uria e o Ciclo de Krebs "rodem" juntos, via metablica denominada por muitos de "Bicicleta de Krebs"; Arginino-succinato liase. 4) Sntese da Uria: a arginina formada sofre ao da enzima arginase, que catalisa a sntese da uria e a liberao de uma molcula de ornitina que retorna a mitocndria, dando incio um novo ciclo. O Ciclo da Uria pode ser resumido como um processo metablico heptico que degrada amnia com a participao da ornitina e cirtulina como transportadores dessa amnia mitocondrial, favorecendo a liberao da uria formada no citoplasma. A "Bicicleta de Krebs" uma expresso que lembra a integrao existente entre o ciclo da uria e o metabolismo energtico, pois no se pode esquecer que a cada amnia liberada significa que um aminocido foi desaminado e o cetocido formado est apto para o metabolismo celular. Por essas razes, pode-se perceber a importncia dos aminocidos para o metabolismo energtico heptico, alm de que a sntese de glicognio e de cidos graxos impedem uma maior utilizao de carboidratos e lipdios exclusivamente para produzir energia para o hepatcito.

37

Figura 9: Ciclo da uria e as reaes que alimentam o ciclo com grupos amino. As enzimas que catalisam estas reaes (denominadas no texto) esto distribudas entre a matriz mitocondrial e do citosol. Um grupo amino entra no ciclo de uria como carbamoil fosfato, formado na matriz, sendo que o outro entra como aspartato, formado na matriz por transaminao do oxaloacetato e do glutamato, catalisada pela aspartato aminotransferase. O ciclo da uria consiste de quatro etapas. 1 Formao de citrulina a partir de ornitina e carbamoil fosfato (entrada do primeiro grupo amino); a citrulina passa para o citosol. 2 Formao de argininosuccinato atravs de um intermedirio citrullyl-AMP (entrada do segundo grupo amino). 3 Formao de arginina a partir de argininosuccinato; esta reao libera fumarato, que entra no ciclo de cido ctrico. 4 Formao de uria; esta reao tambm regenera, ornitina. As vias pelas quais NH4+ chega na matriz mitocondrial dos hepatcitos.

38

O ciclo do cido ctrico e o ciclo da uria esto interconectados

Figura 10: Ligaes entre o ciclo de uria e cido ctrico ciclo. A interligao dos ciclos foram chamados de "Bicicleta de Krebs." O fumarato produzido no citosol pelo ciclo da uria pode ser reaproveitado na mitocndria pelo ciclo do cido ctrico.

A Atividade do Ciclo da Uria Regulada em Dois Nveis.

Figura 11: Sntese de N-acetilglutamato e a ativao da carbamoil fosfato sintetase I.

39

3. Catabolismo da cadeia carbonada dos aminocidos

Diariamente, h um renovao de cerca de 400g de protenas o que significa que, durante o dia, cerca de 400g de protenas so degradadas porm a mesma quantidade est sendo produzida o que garante uma certa estabilidade na quantidade total de protenas no organismo. Esta taxa de renovao, denominada de taxa de turnover, implica na necessidade da obteno de aminocidos essenciais na dieta alm da sntese dos no-essenciais. Apenas 11 aminocidos so sintetizados no organismo, porm a arginina sintetizada, mas totalmente consumida no ciclo da uria o que a torna indispensvel na dieta e a cistena e a tirosina so sintetizadas a partir da metionina e fenilalanina (aminocidos essenciais) o que faz com somente nove aminocidos sejam verdadeiramente independentes da alimentao. Entretanto, uma alimentao completa apresenta uma grande quantidade de aminocidos, sejam essenciais ou no ou que favorece a uma absoro de aminocidos sempre acima das necessidades dirias. Desta forma, o catabolismo dos aminocidos intenso aps uma refeio protica, permitindo a formao de grande quantidade de uria, resultado da degradao do grupamento amino, como visto anteriormente. O cetocido resultado das reaes de transaminao e desaminao., entretanto, possuem diversos destinos metablicos que podem ser reunidos em dois grandes grupos: 1) os cetognicos; e 2) os glicognicos. O primeiro grupo (os cetognicos) corresponde aos que so degradados em acetil-CoA (de forma direta ou indireta, na forma de acetoacetil-CoA) e fornecem energia de forma imediata no ciclo de Krebs. So fenilalanina, tirosina, triptofano, lisina, isoleucina, treonina e leucina. A acetil-CoA produzida pelos aminocidos cetognicos no pode ser convertida em glicose, o que vai induzir entrada obrigatria no Ciclo de Krebs para a produo de energia. Desta forma, um excesso de catabolismo destes aminocidos levar ao desvio para a produo de cidos graxos, colesterol e corpos cetnicos de maneira idntica a um excesso de acetil-CoA oriundo do

catabolismo de carboidratos e lipdios. Os demais fornecem intermedirios do ciclo de Krebs (oxalacetato, fumarato, succcinil-CoA e cetoglutarato) bem como o piruvato. Esses produtos podem ser convertidos em glicose atravs da neoglicognese e, assim, produzirem energia para as reaes metablicas celulares, sendo os aminocidos que os produzem chamados de glicognicos por este motivo. Alguns aminocidos cetognicos (fenilalanina, tirosina, triptofano, isoleucina e teronina) podem ser utilizados como substratos para a neoglicognese alm de produzir acetilCoA, sendo chamados, portanto, de glicocetognicos. A Figura 10-30 demonstra a entrada esquemtica dos aminocidos no metabolismo energtico.

Figura 12: Resumo do catabolismo dos aminocidos. Aminocidos so agrupados de acordo com os seus principais degradativos produtos finais. Alguns aminocidos so listados mais de uma vez, porque as diferentes partes dos seus esqueletos de carbono so degradados a diferentes produtos finais. A figura mostra as mais importantes vias catablicas em vertebrados, mas h pequenas variaes entre as espcies de vertebrados. Treonina, por exemplo, degradada pelo menos atravs de duas diferentes vias, bem como a importncia de um determinado caminho pode variar com o organismo e as suas condies metablicas. Os aminocidos glicognicos e cetognicos tambm so delineados na figura, pelo sombreamento colorido. Repare que cinco dos aminocidos so ambos glicognicos e cetognicos. Os aminocidos que so degradados a piruvato tambm so potencialmente cetognicos. Apenas dois aminocidos, leucina e lisina, so exclusivamente cetognicos.

40

O Catabolismo da Fenilalanina Genticamente Defeituoso em Algumas Pessoas

Figura 13: Vias catablicas para fenilalanina e tirosina. No homem esses aminocidos so normalmente convertidos para acetoacetyl-CoA e fumarato. Defeitos genticos herdados para muitas destas enzimas causam doenas humanas (sombreado amarelo).

Figura 14: Vias alternatives para o catabolismo da Fenilalanina em Fenilcetonria. Em PKU, fenilpiruvato acumula-se em tecidos, sangue e urina. A urina tambm pode conter fenilacetate e fenilactato.

41

Aminocidos de cadeia ramificada no so degradados no fgado

Figura 15: Vias catablicas de trs aminocidos de cadeia ramificada: valina, isoleucina e leucina. As trs vias, que ocorrem em tecidos extra-hepticos, compartilham as primeiras duas enzimas, como mostrado aqui. O complexo desidrogenase de -cetocido de cadeia ramificada anloga aos complexos da piruvato e -cetoglutarato desidrogenase e exige os mesmos cinco co-fatores. Esta enzima deficiente em pessoas com a doena da urina em xarope de bordo (Maple syrup urine disease).

4. Sntese dos aminocidos

Os aminocidos essenciais so sintetizados nos vegetais atravs do aproveitamento do nitrognio na forma de NH4+, nitritos e nitratos presentes no solo e que so produzidos por bactrias capazes de fixar o N2 atmosfrico convertendo-os nos produtos nitrogenados absorvidos pelos vegetais (p.ex.: Azobacter sp.e Rhizobium sp. fixam o N2; Nitrossomonas sp. e Nitrobacter sp. convertem amnia em nitritos e nitratos). A decomposio bacteriana de animais mortos gera NH4+, nitritos e nitratos, diretamente da degradao dos aminocidos, independente da captao do N2 atmosfrico. Os aminocidos no-essenciais so sintetizados nos animais a partir de molculas precussoras que fazem parte do ciclo de Krebs e do grupamento amino proveniente da degradao de aminocidos. Como vrios aminocidos fornecem intermedirios do ciclo de Krebs, h uma interdependncia entre os aminocidos no seu processo de degradao e sntese.

O glutamato, glutamina e prolina so sitentizados a partir do -cetoglutarato. O aspartato sintetizado a partir do oxalacetato (recebendo o grupo amino do glutamato). A asparagina sintetizada a partir do aspartato e o grupo amino provm da glutamina. A alanina oriunda da transaminao do piruvato e glutamato. A serina sintetisada a partir do gliceraldedo-3-fosfato, sendo que a glicina e a cistena derivam da serina. A arginina utilizada durante o ciclo da uria. A tirosina origina-se a partir da hidroxilao da fenilalanina.

Viso geral da sntese dos aminocidos no-essenciais.

42

Referncias bibliogrficas adicionais para estudo:

CAMPBELL, M.K.; FARREL S.O. Bioqumica. Verso COMBO. So Paulo: Cengage Learning, 2007. Indicado pelo professor. DEVLIN, T.M. Manual de Bioqumica com correlaes clnicas. 2 ed. So Paulo: Edgard Blcher, 1999. NELSON, D.L.; COX, M.M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So Paulo: Sarvier, 2002. STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. VOET, D.; VOET, J.G.; PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto Alegre: ArtMed, 2000.

43