Coloraţia GRAM – este o metodă compusă de coloraţie.

Această metodă ne
permite să studiem forma bacteriilor şi structura peretelui celular.

Metodica:
1. Pe frotiul uscat şi fixat se aplică o hîrtie de filtru îmbibată cu violet de
genţiană pe care se aplică 1-2 picături de apă – 1-2 min.
2. Înlăturăm hârtia şi aplicăm 1-2 picături de sol. Lugol (pentru fixarea
colorantului) – 1 min.
3. Înlăturăm sol.Lugol şi aplicăm 1-2 picături de alcool 96° - 30 sec.
4. Spălăm frotiul cu apă.
5. Aplicăm 1-2 pic. de fuxină – 1-2 min.
6. Spălăm frotiul cu apă.
7. Uscăm şi microscopiem.

Microorganismele Gram „+” se colorează în violet

Gram „-” se colorează în roţu

Peretele celular la bacteriile Gram „+” este mai gros, conţine acid teihoic şi
peptidoglican în cantităţi mari, care reţin primul colorant.
Peretele celular la bacteriile Gram „-” este mai subţire, conţine acid teihoic şi
peptidoglican în cantităţi foarte mici, care nu reţin primul colorant şi se recolorează
cu fuxina (colorantul 2) în roşu.

Coloraţia Ziehl-Neelsen
Această metodă ne permite să determinăm bacteriile acidorezistente.
Bacteriile acidorezistente se colorează în roşu (datorită prezenţei în peretele
celular a substanţelor ceroase), Ex. agentul patogen al tuberculozei, leprei.
Bacteriile neacidorezistente – în albastru

Metodica:
1. Frotiul fixat se acoperă cu hîrtie de filtru pe care se toarnă fuxină şi
încălzim la flacără până la apariţia vaporilor, apoi răcim şi adăugăm o porţie
nouă de colorant. Încălzirea se repetă de 2-3 ori.
2. Înlăturăm hîrtia de filtru şi spălăm cu apă.
3. Aplicăm sol. 5% H2SO4 - 3min.
4. Spălam cu apă
5. Aplicăm albastru de metilen 3-5 min.
6. Spălam cu apă.
7. Uscăm şi microscopiem.

Coloraţia Burri-Hinss
(metoda negativă de evidenţiere a capsulei)
Cu ajutorul acestei metode punem în evidenţă capsula.
Metodica:
1. Pregătim preparatul după Burri: pe o lamă din sticlă se amestecă o picătură
de suspensie bacteriană şi o picătură de tuş negru. Cu ajutorul unei alte lame
cu marginea şlefuită se prepară un frotiu asemănător frotiului din sânge.
2. Uscăm şi fixăm.
3. Aplicăm fuxină pe 1-2 min.
4. Spălăm cu apă
5. Uscăm şi microscopiem.

Celula bacteriană se colorează în roşu

Fonul frotiului este negru
Capsula este incoloră.

Coloraţia Aujeszky
Această metodă se foloseşte pentru evidenţierea sporilor
Metodica:
1. se prepară un frotiu care se usucă la aer
2. Aplicăm sol. 0,5% acid clorhidric
3. Încălzim până la apariţia vaporilor
4. Spălăm cu apă
5. Uscăm şi fixăm în flacără
6. Colorăm după metoda Ziehl-Neelsen

Sporii se colorează în roşu (datorită acidorezistenţei)

Celula bacteriană în albastru.

Coloraţia Neisser
Această metodă se foloseşte pentru evidenţierea granulaţiilor de volutină.

Metodica:
1. pe frotiul fixat se aplică albastru de metilen acetat Neisser 2-3 min.
2. Sol. Lugol 30 sec.
3. Spălăm cu apă
4. Alicăm vezuvină 1 min.
5. Spălăm cu apă
6. Uscăm şi microscopiem.

Granulaţiile de volutină se colorează în albastru întunecat

Citoplasma celulei – galben
Granulaţiile au pH bazic – primesc colorantul acid (albastru acetat)
Citoplasma are pH acid – primeste colorantul bazic (vezuvina)