Universidad Autnoma de Baja California

[MICROBIOLOGIA BSICA]
1 Edicin
Enrique Martnez

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INDICE

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[MICROBIOLOGIA BSICA] Las bacterias son las clulas mas pequeas de todas con un tamao tan pequeo como los generos Chlamydia y Rickettsia (0.1 ~ 0.2 mcm).

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especifica por que consiste en la deteccin de caractersticas de su material gentico.

CLASIFICACION FENOTPICA Diferencias entre procariotas CLASIFICACION y eucariotas Las bacterias se pueden clasificar en su examen macroscpico y microscpico segn diferentes criterios como su capacidad de teirse con la tincin de gram (gram positivas o gram negativas), su forma (cocos, bacilos, espiroquetas, vibrios), propiedades en el cultivo (hemolticas, pigmentacin, olor, tamao de

Las bacterias se clasifican en dos maneras, una es por su fenotipo y la otra por su genotipo. La manera mas practica y usual es la del fenotipo pero se utiliza la genotpica por que es mas

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[MICROBIOLOGIA BSICA] colonias). Esta clasificacin es la mas usual pero a veces es necesario otro tipo de anlisis mas especifico para discriminar entre especies de fenotipo similar. Existen tambin las pruebas de medios de cultivo que miden la capacidad de una especia para metabolizar determinados nutrientes. Dentro de cada especie se dividen aun por fines epidemiolgicos en biotipos que son especias morfolgicamente similares pero genotpicamente diferentes pero aun asi, de origen filogentico comn.

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antibiograma, que consiste en el uso de antibiticos para ver cual le afecta y a cual genera resistencia; y tambin existe el lisotipado que consiste en infectar a la bacteria a diversos virus, lo cual quedo como obsoleto por ser reemplazado con diversas tcnicas genotpicas.

Tambien son utilizados los serotipos para identificar especias antignicamente diferentes en dentro de una misma especia ligadas a un sndrome patolgico en especial, es decir, que dos serotipos diferentes de E. Coli pueden causar dos enfermedades distintas. Existen otros tipos de clasificacin fenotpica como el

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[MICROBIOLOGIA BSICA] CLASIFICACION GENOTIPICA Antes se utilizaba frecuentemente la relacin guanina/citosina pero se dejo de emplear hace tiempo (en el Tortora 9 edicin aun se maneja). Otra es el anlisis de secuencia de cidos nucleicos que consiste en secuenciar el genoma de la especie para su diferenciacin especifica.

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incluimos, pero para mayor informacin favor de referirse al apndice A (Pruebas de genotipificacin).

Cocos Gram (+) Aerobios Catalasa (+) Staphyloccocus Catalasa (-) Aeroccocus Enteroccocus Lactoccocus Streptococcus Bacilos Gram (+) Aerobios Actinomicetos con ac. Micolicos en su pared Nocardia Mycobacterium Otros bacilos Gram (+) Gardnerella Listeria Gram (-) Aerobios Cocos Moraxella Neisseria Bacilos Enteriobacteriae o Enterobacter o Escherichia o Klebsiella o Salmonella o Shigella o Yersenia
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Existen otras tcnicas de genotipado como el anlisis de plsmidos, el ribotipado, y el anlisis de fragmentos de ADN cromosmico, los cuales por motivos de espacio ni Murray, Tortora o yo los

[MICROBIOLOGIA BSICA] Vibrios Vibrio Aeromonos Campylobacter Helicobacter Pseudomonas Haemophilus Otros Generos Bartonella Brucella Cardiobacterium Franciella Legionella Streptobacillus Gram (+) Anaerobios Cocos Gram (+) Anaerococcus Peptostreptococcus Bacilos Gram (-) Actinomyces Clostridium Lactobacillus Propionilbacterium Gram (-) Anaerobios Cocos Veillonella Bacilos Fusobacterium Porphyromonas Otras Bacterias Importantes Mycoplasma Mycoplasma Espiroqueta Borrelia Treponema Leptospirae Leptospira Chlamidiaciae Chlamydia Chlamydiophila Otras Bacterias Coxiella Rickettsia

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TINCION DE GRAM
La tincin de Gram fue desarrollada por Hans Christian Gram, un Bacteriologo danes (en realidad tambin era medico y farmacologo) para diferenciar dos microorganismo causantes de neumona que eran Klebsiella Pneumoniae y Neumococo, esto bajo la inspiracin de que Paul Ehrlich invento un tincin para el bacilo de la tuberculosis. Esta tincin es uno de los mas importantes mtodos diferenciales en microbiologa debido a que nos permite agrupar a las bacterias en dos grandes grupos segn si se
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[MICROBIOLOGIA BSICA] tien o no y si retienen el colorante aplicado. Los pasos para llevar a cabo la tincin de gram son: 1) Un extendido fijado al calor se le agrega un colorante violeta bsico (Violeta cristal). 2) Se le agrega un mordiente (Yodo, lugol) 3) Se lava el portaobjetos con alcohol-acetona. 4) Se enjuaga con agua y despus se agrega el colorante bsico safranina. Esto nos lleva a ver dentro de una muestra problema dos colores diferentes de clulas, unas moradas (gram positivas) y unas rojas o rosadas (gram negativas). Cmo paso esto? Pues es relativamente simple. Pero primero tenemos que conocer las estructuras caractersticas de las bacterias gram positivas y negativas. A continuacin presentan las estructras caracterisiticas de: se de GRAM +

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Las bacterias gram positivas se caraterizan por tener una gruesa capa de peptidoglucano (mureina) que contiene acido teicoico (unido a la membrana clular) y acido lipoteicoico (unido a la capa de peptidoglucano). Esta gruesa capa es sensible a la lisozima, la cual rompe su pared dejando un protoplasto que es una bacteria sin su capa de peptidoglucano.

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[MICROBIOLOGIA BSICA] GRAM Se caracterizan por tener una capa delgada de peptidoglucano sobre su membrana y tener rodendola una membrana externa la cual a su vez esta recubierta por Lipopolisacarido (LPS) pero el genero Neisseria forma Lipooligosacarido (LOS). Esta membrana externa delimita el espacio periplasmico que contiene factores de virulencia lticos (enzimas que destruyen macromolculas del hospedero). Esta membrana se una a la membrana citoplasmica por la zona de adhesin y se

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une tambin la peptidoglucano por lipoprotenas. Tambien se unen por iones divalentes como Mg y Ca, lo cual explica por que el EDTA y la tetraciclina (quelantes de estos iones) lisa a las bacterias gram negativas.

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[MICROBIOLOGIA BSICA] grosor de la peptidoglucano. capa

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de

Despues cuando se agrega el alcohol-acetona el complejo yodo-colorante violeta es secuestrado por el alcoholacetona pero solo logra ser extraido de las bacterias gram negativas causanda la decoloracin de estas mientras que las gram positivas estn plenamente en color purpura. Las bacterias contienen unas enzimas denominadas transpeptidasas y carboxipeptidasas que enn conjunto se denominan protenas de unin a la penicilidad (PBP, Penicilin Binding Protein), porque a nivel de estas enzimas acta la penicilina y otros antibiticos Lactamicos. Cuando se aade el cristal violeta este ingresa a las clulas hacia el citoplasma. Despues se agrega el yodo y este forma un complejo en el violeta cristal que es demasiado grande para abandonar el citoplasma de las bacterias gram positivas, pero si de las gram negativas, esto es debido a la diferencia en el Al agregar el otro colorante (safranina) se tien solo las clulas gram negativas por que no estn teidas. Es de notar que existen bacterias que no se tien con la tincin de gram, las cuales fueron puestas en las tablas pasadas bajo la denominacin Otras bacterias importantes, estas no se tien debido a su falta de pared clular.

ESTRUCTURAS BACTERIANAS
Estructuras Citoplsmicas El citoplasma de las bacterias contiene un nico
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[MICROBIOLOGIA BSICA] cromosoma circular sin estar delimitado dentro de un ncleo, mas bien este se encuentra en un nucleoide que solo es un espacio imaginario, y adems de este cromosomas puede tener (las bacterias gram negativas} plasmidos. Los plasmidos son cadenas aisladas de genoma que confieren una ventaja selectiva confirindoles a menudo resistencia a algunos antibiticos. El fascinante hecho de que no tengan nucleo hace que se acomplen la transcripcin con la traduccin, es decir que mientras se esta formando el ARNm este se esta traduciendo en los ribosomas bacterianos (70s). La membrana citoplasmica de las bacterias no contiene estorides (como el colesterol) a excepcin de los micoplasmas. Esta membrana les sirve para cosas que normalmente una mitocondria hara, como respirar. La cara interna de la membrana tiene filamentos proteicos parecidos a la actina que durante la divisin clular forman el tabique y en los treponemas helicoidal. dan la

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forma

Tambien puede existir una capsula que es una capa de protenas o polisacridos que recubre de forma laxa a la bacteria. En caso de que la capsula sea muy delgada se habla de una capa de limo; estas dos estructuras en general se les denomina gluxocalix. La capsula no es impresindible para la bacteria pero sus propiedades anfagociticas y su poca antigenicidad le confieren una gran ventaja patognica. Para su motilidad las bacterias tienen flagelos formado por la protena flagelina. Este flagelo permine la quimiotaxis hacia los nutrientes. Estos tienen forma helicoidal. Tambien tienen fimbrias o pili que son para adherencia, y se distinguen de los flagelos por ser mas pequeos, no ser helicoidales y por estar integrados por la protena con un nombre nada tono pilina. Su funcin de adherencia es un importante determinante patognico. Un ejemplo de esto
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[MICROBIOLOGIA BSICA] es E. Coli y Neisseria Gonorrhoae colonizando el aparato urinario. Otra funcin interesante de una clase particular de pili (pili F o pili sexual) que configuran una estructura tubular por la cual existe una transferencia de material gentico. Estos pili estn codificados en el plasmido F. Caracteristicas de Clulas Procariotas Principalmente Bacterias 0.5 ~ 3 mcm Sin membrana nuclear ADN circular y nico. Genoma Haploide Sin mitocondrias Sin aparato de golgi Sin RE Ribosomas 70s (50s + 30s) Su membrana no tiene esteroides Pared formada por protenas, lpidos y peptidoglucano. Reproduccion asexual Se mueve por flagelos simples si existen Respira atravez de la membrana

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El primer paso es obviamente la replicacin del genoma y esto desencadena la divisin clular. El siguiente paso involucra la septacin de la bacteria, esto se lleva a cabo por medio de transpeptidasas (PBP) y pueden formar un ngulo de 90 como en los staphylococcus o uno de 180 como con los streptococcus. Estos generos de multiples cocos formando estructuras relativamente complejas es debido a una separacin incompleta del tabique.

Esporas
Una espora es la manera en la que una bacteria gram positiva logra sobrevivir en estado de latencia o estado de endospora. La espora contiene: Una copia del genoma Concentraciones minimas de ribosomas y protenas.
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DIVISION CLULAR

[MICROBIOLOGIA BSICA] Una cantidad elevada de calcio unido a cido dipicolinico. La espora consiste en una membrana interna, dos capas de peptidoglucano y una capa

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externa formada por una protena similar a la queratina. Esta estructura protege al genoma del calor intenso, la irradiacin, las sustancias qumicas y la accin enzimtica,

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[MICROBIOLOGIA BSICA] y pueden durar hasta siglos y ser resistentes a los desinfectantes convencionales.

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5. Despues se forma se forma la cubierta proteica y el exosporio. 6. Se libera la espora. El proceso inverso se llama germinacin y se da cuando existen agua y nutrientes en el medio. La espora se hincha, pierde sus capas y forma una nueva clula con lo que se completa el ciclo.

A continuacin describir genialmente el proceso de esporulacin. 1. Una falta de nutrientes especficos en el medio desencadena una casacada de procesos que inicia con la duplicacin del genoma. 2. El contenido gentico es rodeado por el tabique y el peptidoglucano. 3. La espora se separa dentro y queda con una doble membrana. 4. En medio de estas dos membranas se forma la corteza que es una capa de peptidoglucano.

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[MICROBIOLOGIA BSICA] Los virus son una especie de zombies moleculares debido que en realidad no estn vivos, ya que no complen con las tres funciones bsicas de los seres vivos (relacin, nutricin y reproduccin). Los virus solo se pueden reproducir utilizando la maquinaria molecular de la clula, y por esto es que son parasitos intracelulares obligados. Los virus se dividen en principalmente en si contienen ADN o ARN y si contienen envoltura o no. Los virus deben de ser

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patognicos para poder sobrevivir al ambiente y sus componentes deben de ser autoensamblables. El virion (particula vrica) contiene un genoma cubierto por una capa de protenas (capside) o una membrana (envoltura). Las protenas de asociacin al genoma pueden asociarse con la capside formando una nucleocapside, que puede o no tener envoltura. El genoma estar formado monocatenario o circular o lineal; o cadena positiva viral puede por ADN bicatenario, de ARN de (como el

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[MICROBIOLOGIA BSICA] ARNm) o de cadena negativa (como un molde) o incluso pueden unirse por sus extremos y formar una cadena en parte positiva y en otra negativa. La capa mas externa del virus ya se la capside o la envoltura contiene una protena de anclaje viral (PAV), quienes median la interaccion del virion con la clula diana. Los virus con cpside soportan fuertes condiciones adversas. Habitualmente son resistentes la desecacin, los cidos, los detergentes, incluyendo cidos biliares y bilis del tubo digestivo, por esto es

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comn la via de transmisin feco-oral. En cambio los virus con

envoltura son bien niitas y solo pueden vivir en medios acuosos y no sobreviven al tubo digestivo, asi que su medio de transmicion son gotitas de moco, sangre o tejidos. Por el lado agradable (para ellos, no nosotros) es inmunopatogenico
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[MICROBIOLOGIA BSICA] debido a que genera reaccines de hipersensibiliadad e inflamacin.

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inmunoproteccion al hospedero-

Virus con Capside Estos virus tienen una capside formada por subunidades que contituyen primero protomeros, capsomeros, y despus una procapside o la capside finalmente, la diferencia entre estas ultimas dos es que la procapside aun no contiene el genoma dentro. Con estos virus los anticuerpos pueden ser suficientes para darle

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A-PENDICE A

Anlisis de Plasmidos. Los plasmidos son pequeas secuencias genticas que usualmente codifican protenas (enzimas) de resistencia contra un antibitico, haciendo resistente a la cepa que lo contiene. El objetivo de este anlisis es detectar la existencia de este plasmido debido a que los plasmidos no siempre estn ah, es decir, a veces estn y a veces no estn y esto depende de la exposicin de la cepa a estas secuencias aisladas del cromosoma bacteriano.

Ribotipado. Aqu se determinan las secuencias de ADN ribosmico debido a que hay una alta conservacin entre especies del mismo genero. Esta clasifiacacion tiene tambin un fin epidemiolgico principalmente.

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