Comatosrafia en caoa fina

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

OBJETIVOS

a) b)

Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, (ccf), sus caractersticas y los factores que en ella intervienen.

Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la seleccin adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.

c)

Aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina como criterio de pureza e

identificacin de sustancias.

ANTECEDENTES

a) b)

Concepto de cromatografa. Tipos de cromatografa. Cromatografa de adsorcin y cromatografa de particin. Ejemplos.

Fenmeno de adsorcin. La propiedad de retencin. Concepto de Rf
La cromatografa en capa fina. Sus caractersticas y aplicaciones.

c)
d) e)

Eluyentes, soportes
Ttna.

reveladores ms comunes para cromatografa en capa

Factores que nfluyen en una separacin por cromatografa de capa fina.

INFORMACIN

Concepto de cromatografia
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slidoJiquido (capa fina, papel o columna), liquidoJiquido y gases-liquido ( fase vapor ).

Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.

46

Quim. Orgnica

t (13ll)

grado otras sustancias sObre su superficie; y, similarmente' todas las sustancias pueden ier adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.

Concepto de Rf

Rf es el registro, es una relacin de distancias, y se define como:

p1

= (a)

distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin

(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.

Punto de aplicacin

(a)

(b)

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc"). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma Placa.

Cromatografia en caPa fina

En este caso se utiliza una placa recUbierta con fase estacionaria mantenendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por taptaridao, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo
"manchas" de los comPonentes.

En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancas depende tanto de su profia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado'
El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rgido, qu pueoen ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm.

Qun. Orgnca

(131l)

Cromatografa en capa,Ela

Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la

identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado.

Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina

oetrleo n-hexano ciclohexano ' tolueno - dietil-ter - f-butil-ter - cloroformo

- ter de -

- cloruro de metileno - acetato de etilo - acetona - rso-propanol - etanol - metanol - cido actico

Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina

Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante:

a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el nmero
que aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de excitacin del

b) c)

indicador utilizado" La introduccin de la placa en vapores de yodo El roco con una solucin de agualH2SOa 1 :1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero. hasta carbonizar los comDuestos.

Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina.

a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas
Para la seleccin del adsorbente deber tomar las sguientes consideraciones:

a) Polaridad b) Tamao de partcula

c)

Dimetro Homogeneidad Pureza

e)

d) Area Superficial

fl

48

Quin. 0rgnica

(1311)

Cromatoerafla en caDa fina

Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.

a)

c)

b)

d)

Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase estacionaria. La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. Pureza de los disolventes.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

MATERIAL

Pioeta de 5 ml * Probeta de 25 ml Tubos caoilares Aqitador de vidrio

* graduados

'l
1

?
1

Esptula Frasco p/cromatoqraf a c/tapa Portaobietos Vidrio de reloi

3 6
I

MATERIAL ADICIONAL Lmoara de luz UV. onda larqa v onda corta Cmara oscura para lmpara de luz UV SUSTANCIAS
1
1

REACTIVOS Acetona Acetato de etilo n-Hexano Metanol Yodo

Silicagel 60 HFzs Para ccf Benzona Cafena Nipagn Nipasol

49 Qum. Orgica

13l

l)

Cromatogafa en capa fina

PROCEDIMIENTO

PREPARACIN DE CROMATOPLACAS Y CAPILARES

Se pueden utilzar cromatofolios ya preparados (comerciales), o bien, preparar las

cromatoplacas en el laboratorio.

Para preparar las cromatoplacas, se introducen dos portaobjetos juntos, limpios y secos, en una suspensin de gel de slice al 35% en acetato de etilo, se dejan secar al aire y se separan con cuidado. Se preparan 6 cromatoplacas y se ordenan sobre
una hoja de papel.

Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas ulilice capilares, que previamente deber ser estirados en la flama del mechero (flama pequea), con el fin de que tengan el dimetro adecuado (ver Figura l)

Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los dibujos de las
cromatoplacas a tamao natural

de todos los experimentos de esta sesin.

EXPERIMENTO

1,.

APLICACION DE

LA

MUESTRA

EFECTO

DE

LA

CONCENTRACIN,

Con la micro pipeta, tome una pequea cantdad de la solucin-problema y aplique una gota sobre la capa de Silicagel, a 1 cm. aprox. del borde inferior de la placa (ver Figura 2) y trace una marca, con un lpiz fino, en el borde derecho, para no perder el
punto de aplicacin. Para saber cul es el efecto de la concentracin (o el tamao) de las gotas, se harn 3 aplicaciones de la solucin No. 1 en orden creciente de concentracin, en una sola placa, como se ndica en el siguiente ejemplo:

1u

aplicacin 1 gota 2a aplicacin 3 gotas 3a aplicacin 9 gotas

50

Qum. Orgnica

13l

I)

Cromatosraf'fa en caDa fina

Para desarrollar el cromatoqrama, introduzca la placa en una cmara de elucin, (que puede prepararse con un frasco de tamao apropiado), a la que previamente se le coloca por dentro un cuadro de papel filtro para aumentar la saturacin de los vapores del eluyente, coloque unos 4 mL de acetato de etilo y tpela (Figura 3). Una vez que la placa est dentro de Ia cmara, no debe moverla. Cuando el frente del eluyente est casi en el borde superior de la capa de Silicagel, abra el frasco, retire la placa y marque el frente del eluyente con un lpiz fino. Coloque la placa en su hoja de papel, donde anotar sus datos, y djela secar al aire. Para visualizar las manchas, revele primero con la lmpara de luz UV (Figura 4), marcando el contorno de cada una con un lpiz fino y luego introduciendo la placa en
una cmara con cristales de yodo. Conteste las siguientes preguntas:

a) b)

Cul es la relacin existente entre la intensidad y tamao de las manchas con la concentracin de la sustancia aplicada en cada caso? Cul es el Rf de la mancha intermedia?

Experimento No, 2.- Polaridad de las sustancias y polaridad de los eluyentes.

Para comparar la polaridad de dos sustancias diferentes, se le proporcionarn las soluciones No. 2 y No. 3. Prepare 3 cromatoplacas y aplique estas dos soluciones en cada una de ellas, de tal manera que queden como en el siguiente ejemplo:

Solucion2

-------------+

oo

slucin 3

5l
Qum. Orgnica

(1311)

Cromatograff a en capa-.lEla

Para comparar la polaridad de los eluventes, eluya la primera cromatoplaca con hexano, la segunda con AcOEt y la tercera con MeOH.
En cada caso, deje evaporar el eluyente y revele con luz UV, observe y anote sus resultados (calcule el Rf de cada mancha). Luego, revele con yodo y anote sus observacones. Con base en los resultados obtenidos, conteste las siguientes pregunta$

a) b)

c)

Cul es el eluvente adecuado? Por qu? Cul de las dos sustancias problema es la ms polar? Por qu? Cul es la sustancia problema menos polar? Por qu?

Experimento No. 3.- Pureza de las sustancias.

Se desea saber cul sustancia es pura y cul es impura- Para esto se le proporcionarn las soluciones No.4 y No. 5. Prepare una cromatoplaca y aplique en ella ambas soluciones, como en el experimento anteror.
Eluya con AcOEt y deje secar. Revele con luz UV y luego con yodo. Anote sus resultados y observaciones.

Solucion4

-------------+

oo

Solucin 5

Conteste las siguientes preguntas:

a) b)

c)

d)

Cul Cul Cul Cul

es la sustanca pura? Porqu? es la sustancia impura? Cuntas impurezas se observan? es el Rf de la sustancia principal? es el Rf de la impureza?
52

Qum. Orgnica

(1311)

Cromatograffa en caoa fina

Experimento No. 4-B

1 Prob. 2), patrn. utilizando la tcnica de ccf, comparando las dos con una muestra En este caso, se utilizarn Cafiaspirina (Ac. acetil-saliclico y cafena) y Sacrdo/ (Ac. acetl-saliclico, paracetamol y cafena), pero puede usarse otro juego de analgsicos diferente.

Se desea identificar dos pastillas de analgsicos dferentes (Prob.

Se le darn las soluciones marcadas como Prob. cul). Se usar cafena como muestra patrn.

1 y Prob.2,

(sin que Ud sepa cul es

Prepare dos cromatoplas iguales y aplique las soluciones en cada una siguiendo el siguiente esquema:

Cafena

Prob.

Prob.2
1

Eluya una de las cromatoplacas en metanol, y la otra en AcOEt. Deje secar, revele las dos cromatoplacas con luz UV y anote los resultados obtenidos en cada una.

a)

Conteste las siguientes preguntas: Cul eluyente permite una mejor separacin de los componentes?

- Tomando en cuenta solamente Ia cromatoplaca eluda en el eluyente que result ser el adecuado, conteste tambin las siguientes preguntas:

b)
d) e)

c)

f)

A qu analgsico corresponde el Prob. 1? Por qu? A qu analgsico corresponde el Prob. 2? Por qu? Cul es el Rf del cido acetil-saliclico? Cul es el Rf del paracetamol? Cul es el Rf de la cafena?

Qum. Orgnica

I (l3ll)

Cromatosraffa en caDa fina

Preparacin de las rnicropipetas

Aplicacin de la muestra en la cromatoplaca

Figura

Figura 2

Placa

Papel

filtro
SolVent

Punto de aplicacin

lrrlnl

Disolvente
Frente del eluyerrte

=--\----\ \
----

-->

Frasco de elucin

Revelado con luz UV

Figura 3

Figura 4

55

Qum. Orgnica

(1311)

Cromatoqrafa en capa fina

MANEJO DE RESIDUOS
Los residuos generados en este experimento son:

RESIDUOS
D1. Hexano D2. Acetona D3. Metanol D4. Acetato de etilo D5. AcOEt-Hexano D6 Caoilares D7. Gel de slice para ccf

CANTIDAD

D1 a D5: Guardar los disolventes para recuperarlos por destilacin D6: Empacar cuidadosamente para incineracin. D7: Se puede recuperar para su reuso, previo lavado y secado

CUESTIONARIO

a)
b)

En el experimento 2, cul.de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor distancia en la placa a partir del punto de aplicacin? por qu? Qu significa que una sustancia tenga:

a) Rf < 0.5? b) Rf = 0.5? c) Rf > 0.5?

c) En el
d) e)

experimento

separacin de la mezcla?, a qu se debe esto?

Por qu se dice que

4,

cul

de las dos formas de elucin permiti mayor

la ccf

es un criterio parcial y no total de identificacin?

Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina?

a) Aplicacin de solucin muy concentrada. b) Utilizar eluyente de alta polaridad. c) Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa.

f)

Una serie de colorantes es separada por cromatografa en capa fina. Calcular los valores de Rf de cada colorante de acuerdo a la siguiente tabla.

Colorantes: Eluyente Rojo de metilo Rodamina B Rojo Congo

g)

Distancia Recorrida (mm) 66.0 56.0 38.0 0.5

Qu tratamiento es necesario darle ala gel de slice para reutilizarla?

Qum. Orgnica

I (lJ1l)

Cromatosrafia en caDa fina

BIBLIOGRAFIA

a) Abbott D. Y Andews R. S., Introduccin a la Cromatoqrafa, 3a ed., Alhambra,

Madrid, 1970.

b) Ault A., Techniques and Experiments for Orqanic Chemistrv. University Science
Books. USA. 1998.

c) vila Z. G. et a/.

Qumica Orsnica. Experimentos con un enfoque ecolqico. Direccin General de Publicaciones y Fomento Editorial, UNAM, Mxico, 200'1.

d) Bates R.8., Schaefer J.P. Tnicas de lnvestiqacin en Qumica Orsnica,

Prentice-Hall lnternacional. Madrid. 1977.

e)

Brewster R.Q., Vanderwerf, C.A.y McEwen, W. Experimental, Alhambra, Madrid, I 974.

E.

Curso de Qumica Oronica

f)

Clement 8., Orqanic Chemistry Laboratory Manual, Texas A&M University, USA, 2002.
Techniques,

g) Fessenden R .J. and Fessenden J. S. Orcanic Laboratorv

Brooks/Cole. USA..'1993.

h)

Hammond C., Experimental Orqanic Techniques, Freeman, USA, 1999.

i) j)
k)

Pasto D.J., Johnson C.R. and Miller M.J. Exoeriments and Techniques in Orqanic Chemistrv. Prentice Hall, Englewood Cliffs, 1992. Pavia D. L-, Lampman G. M. and Kriz G.S. .lntroduction to Orqanic LabSglg|f Technioues, a Contemporary Approach, 3'. ed.. Saunders College, Fort Worth,
1988.

Roberts R. M., Modern Experimental Orqanic Chemistry, 3d. ed., Holt. Rinehart Winston. Nueva York. 1979.

57

Quim" Org{nica

(131 1)