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uma enzima a um processo de purificao, obtendo 10 ml de um lisado contendo 8 mU/ml Lisado inicial Lisado aps a purificao 2 ml x 50 mU/ml = 100 mU 10 ml x 8 mU/ml = 80 mU
Enriquecimento
Um bioqumico submete 2 ml de um lisado contendo 50 mU/ml de uma enzima e 10 mg/ml de protena a um processo de purificao, obtendo no final 10 ml de um lisado contendo 8 mU/ml e 0,5 mg/ml de protena 2 ml x 50 mU/ml = 100 mU 2 ml x 10 mg/ml = 20 mg de protena Atividade Especfica = 100/20 = 5 mU/mg
Lisado inicial
Aps a purificao 10 ml x 8 mU/ml = 80 mU 10 ml x 0,5 mg/ml = 5 mg de protena Atividade Especfica = 80/5 = 16 um/mg
um procedimento de purificao
Concentrao
Volume
As dimenses dos poros do gel determinam a faixa de peso molecular das protenas que podem ser separadas na cromatografia
ve
vo "void"
vt
vt= volume total da coluna Pode ser calculado a partir das dimenses da coluna.
Log (PM)
Kav
pI (ponto isoeltrico)= pH no qual o nmero total de cargas positivas igual ao nmero total de cargas negativas. Logo, a protena no tem carga lquida!
Carga lquida:
Se o pH > pI, a carga lquida da protena negativa Se o pH < pI, a carga lquida da protena positiva
NaCl
NaCl
CM-Sepharose
Q-Sepharose SP-Sepharose
-O-CH2COO-CH2-N+(CH3)3 -CH2SO3-
Cromatografia de hidrofobicidade
A solubilidade de protenas depende de um balano entre os resduos polares/carregados e os resduos hidrofbicos. Sais, competem pela solvatao dos resduos carregados, alterando a solubilidade de uma protena.
Srie de Hofmaister
Anions: SO42- > H2PO4- > CH3COO- > Cl- > Br- > I- > CLO4- > SCNEfeito solubilizante
Efeito precipitante
Ctions: NH4+ > Cs+ > Na+ > Li+ > Mg2+ > Ca2+ > Ba2+ > guanidina
Cromatografia de hidrofobicidade
Cromatografia de hidrofobicidade
Cromatografia de hidrofobicidade
[Sal]
Protena eluda da coluna