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MdulodeTransformaoGenticaeMelhoramento

IntroduoTransformaoGentica
JooLoureiro,GrupodeEcologiaeEvoluodasPlantas Fevereiro2010,DepartamentodeCinciasdaVida,UniversidadedeCoimbra

Objectivosdaaula

Amodificaogenticanumcontextohistrico

ACinciadaGentica DarwineMendel Agenticamolecular A gentica molecular Omaterialgentico Manipulaogentica Descobertasfundamentais Osprimrdiosdarecombinaogentica Clonagemgentica Transformaogentica marcosimportantes

Melhoramentoconvencionalvs.TransformaoGentica Melhoramento convencional vs Transformao Gentica Aplicaesdasplantastransgnicas Caractersticaseplantastransgnicasaprovadas AopiniopblicasobreosOGMs

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Amodificaogenticanumcontextohistrico
OinciodaagriculturanoactualMdioOriente (Mesopotamia)foiextremamenteimportante umavezquepermitiuatransiodeumavida nmada baseadanacaaparaummodode vidasedentrio baseadonaagriculturae pecuria.

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Amodificaogenticanumcontextohistrico
Otrigocomoaprimeira plantacultivada(Egipto) fabricodepo

Desenvolvimentoda agriculturanaAmricado Sul(batateira)eChina (arroz)

E.g.Babilnios Melhoramentodecertaisn caractersticasdepalmeiraspor selecodervoresmachosque seriamusadosparapolinizar revoresfmeas.
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Amodificaogenticanumcontextohistrico
Napocados Descobrimentosa batateira,milhoe , tomateiroforam introduzidosnaEuropa vindosdaAmrica Em1753LinnaeuspublicaolivroSpecies Plantarum,dandoiniciocinciada taxonomiavegetal.

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Amodificaogenticanumcontextohistrico
Em1859Charles DarwinpublicaOnthe g p y OriginofSpeciesby MeansofNatural Selection

Em1866Gregor Mendelpublica Versucheuber PflanzenHybride

AsfundaesparaacinciadaGentica estavamlanadas
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ACinciadaGentica DarwineMendel
CharlesDarwinconsideradoopaidagenticamoderna,mas foramosresultadosdaexperinciasdeMendelquemostraram comoqueasteoriasdeseleconaturalpoderiamfuncionar. IronicamentenuncaseconhecerameoDarwinfaleceusem h f l conhecerasdescobertasdoMendel. AteoriadaevoluodeCharlesDarwin: Adiversidadedavidasurgiucomoadaptaodasespciesa ambientesdiferenteseemmudana extinodealgumas espcieseaparecimentodeoutras. Espciessimilaresoriginaramseapartirdeumancestral comumrecente. Esteprocessoeramediadopelaseleconatural,nosquais nacompetio,osindivduosqueseencontrammaisbem adaptadostmmaiorprobabilidadedesobreviver,reproduzir etransmitirassuascaractersticasprximagerao.

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ACinciadaGentica DarwineMendel

Aseleconaturalsfuncionaporqueindivduosdamesmaespcieapresentamvariaes. Darwinacreditavaqueascaractersticaspresentesnosprogenitoreserammisturadasna descendnciaeestesapresentavamcaractersticasintermdiasentreosdoisprogenitores.

PROBLEMA:Reduodavariaoemcadageraosucessiva,noexistindonadaparaser seleccionado SOLUO:AsLeisdaHereditariedadedeMendel

Mendelrealizouexperinciacomervilheira,anotandodiferenasnotamanho,formae cordaservilhas.

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ACinciadaGentica DarwineMendel

ALeidaHereditariedadedeMendel: Ascaractersticassopassadasdeumagerao paraaoutraaospares,umadecadaprogenitor. Algumas caractersticas so dominantes sobre Algumascaractersticassodominantessobre outras. Avariaonoseperdiadeumageraoparaaoutra independentementedadescendnciase assemelharaumdosprogenitoresousejauma misturaentreosdois,herdavamumaunidadede hereditariedadedecadaprogenitor. Estasunidadeserammisturadasemcadageraoe algumascaractersticaspoderiamreaparecer. AsunidadesdehereditariedadedoMendelficaram depoisconhecidascomoosgenes. AsleisdeMendelsoabasedomelhoramento vegetalmoderno.

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AGenticaMolecular
Ahipteseumgene umaenzima

1902 Sir Archibald Garrod descobriuque doentescomalcaptonria,doenashereditria, nopossuamumaenzima. no possuam uma enzima. 1941 GeorgeBeable eEdwardTatum descobriramqueumamutaogenticano fungo,Neurospora crassa,afectavaasntesede umanicaenzima. Estahipteseestavacorrecta,comaexcepode quealgumasprotenassocompostaspormais doqueumasubunidadequepodemser codificadasporgenesdiferentes.

SirArchibald Garrod

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Omaterialgentico

Quesubstnciatransportaainformao gentica?
1944 Avery, y, MacLeod eMcCarty identificaramoDNA comoessa substncia(estudos embactrias) 1953 Watson e Crick descobrirama estruturadoDNA atravsdaanlise dosresultadosde d lt d d cristalografiade raiosX obtidospor FranklineWilkins.

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AestruturadoDNA

Duplacadeiaemquecadacadeiacompostapornucletidos Dupla cadeia em que cada cadeia composta por nucletidos (deoxiribose e uma base aderida eumabaseaderida, ligadosporgruposfosfato). Existem4tiposdenucletidoscadaumcomumabasediferentes:adenina(A),citosina(C), guanina(G),timina(T). Asduascadeiastmdirecesopostas,encontramseenroladasnumaduplahliceeesto unidaspormeiodeligaesdehidrognioentrebasesopostas(AT,GC) Asequnciadeuma cadeiadeterminaasequnciadaoutra(complementaroureversa). AinformaocodificadanoDNAcomoasequnciadenucletidosdacadeia.
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Aexpressognica

Transcrio: 1) A RNA polimerase transcreve o DNA dando origem ao RNA mensageiro (RNAm); 2) A sequncia de RNAm complementar sequncia de DNA. Traduo: 3) Nos ribossomas, o RNA de transferncia auxilia a converso do RNAm em protenas; 4) Os aminocidos so unidos para formar a protena.

AinformaocodificadanoDNAdeterminaaestruturadeumaprotena expressognica Transcrio Sntesedocidoribonucleico(RNA)usandooDNAcomomolde Asequnciado RNAdeterminadapelasequnciadebasesdoDNA. RNA cadeiasimples;timinasubstitudaporuracilo(U). ORNAprocessadoetransportadoparacomplexosproteicos ribossomas ondeocorrea sntesedeprotenas traduo. Asprotenassoconstitudasporumacadeiadeaminocidoseasequnciadosaminocidos definidapelasequnciadenucletidosnamolculadeRNA.Cadaaminocidonaprotena representadoporumconjuntodetrsnucletidos codo.
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Otamanhodogenoma

AsmolculasdeDNAesto compactadasvoltadeprotenas (histonas)formandoestruturas designadasdecromossomas. Humanos: 23paresdecromossomas. Cadacromossomacom50a 240milhespb 3biliesde pb Mundovegetal: Arabidopsis 0.126biliespb Arroz 0.466biliespb Milho 2.6biliespb Trigo 16 bilies pb Trigo 16biliespb

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Osgenes
Osgenesencontramsedistribudosao longodamolculadeDNA. Arabidopsis 30000genes Humanos 30 000 a 40 000 genes Humanos 30000a40000genes Arroz 45000a56000genes Osgenescompemapenasumapequena partedogenoma.Orestodogenoma compostoporsequnciasrepetitivasdeDNA nocodificado(e.g.,transposes). Osgenesapresentamaregiode codificao informaodasequnciade aminocidosdaprotenaqueogenecodifica. Comregiescodificantes osexes eno codificantes osintres. difi t i t

Osgenestambmapresentaminformaosobrequando,onde,eemrespostaaqu queogeneficaactivo regioupstream promotor,regiodownstreamouintres. Aregiodownstreamtambmapresentaocodoterminador.

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Manipulaogentica Descobertasfundamentais

1957 Oisolamentode DNApolimerase uma enzimaquesintetizaDNA (Kornberg)

1966 Oisolamentoda DNAligase umaenzima queuneduasextremidades doDNA(Weiss e Richardson) 1970 Adescobertadas 1970 A descoberta das enzimasderestrio uma enzimaquereconhece sequnciaespecficasdepares debasesdoDNAecortaoDNA nesseponto(Hamilton Smith)

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Osprimrdiosdarecombinaogentica

1972 Construodeuma molculadeDNAporcorte deDNAviralebacteriano (comenzimasderestrio)e posteriorrecombinao(Paul Berg).

1973 Produodeum plasmdeorecombinante pelousodeenzimasde restrio(Cohen,Chang, Boyer eHelling)e posteriorreintroduoem clulasbacterianasondeo plasmdeoreplicado clonagemgentica

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Clonagemgentica

Bactriadeeleio Escherichia coli.Bactriado intestinohumano as estirpesusadashojeemdia ti d h j di nosopatognicas. Aclonagemdegenesabriua possibilidadedepercebera estruturaefunodosgenes biologiamolecular. Aexploraoeconmica destacinciafoidesignada debiotecnologia. Oprimeiraaplicaofoina indstriafarmacutica produodeinsulinaemE. coli apartirdeumgene humanomodificado.
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Outrasdescobertasmetodolgicasimportantes

1977 Desenvolvimento domtodospara determinarasequncia q denucletidosdoDNA (Gilbert eSanger,mas independentemente)

1983 Desenvolvimento domtododePCR (reacoemcadeiada ( d i d polimerase)emque pequenassequnciasde DNAsoamplificadas semclonagemem bactria(Mullis).

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Transformaogentica

1977 4anosapsaproduodoprimeiro plasmdeodeDNArecombinante,Nester, GordoneChilton mostramqueDNA bacterianotinhasidoinseridonoDNAdas clulasvegetaishospedeirasapsinfeco comAgrobacteriumtumefaciens.

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Transformaogen tica

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Transformaogentica Marcosimportantes

1983 LaboratriosemGhent,Leiden,St. LouiseCambridgemostraramserpossvel transferirgenesderesistnciaa antibiticosaclulasvegetais. 1983 HallproduzplantasdegirassolGM contendoumgenedefeijo comeoda eradatransformaogenticavegetal. 1984 Bevan desenvolveosvectores binrios,plasmdeosquepodiamser replicadosqueremE.coli,queremA. tumefaciens. Asplantasqueforamalteradas As plantas que foram alteradas geneticamenteporestemodosoreferidas comotransformadas,transgnicas ou geneticamentemodificadas(GMs).

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Transformaogentica Marcosimportantes

1985 Plantastransgnicasresistentesa insectos,vrusebactriassotestadas emcampopela1vez Osprimeiros caracteresteis. caracteres teis 1990 1ensaiodecampobem sucedidodealgodoGM 1994 1aprovaocomfins alimentarespelaFDA tomatescom amadurecimentoretardardo (Flavr Savr) 1996 1cultivoemlargaescaladesoja (RoundUp Ready)emilho(Bt)GM 1997 MilhoBt 1997 Milh Bt aprovadopelaU.E. d l UE 2001 AreadecultivoOGMs excede os50milhesdehectares 2003 PlantasGMs cultivadasem65 milhesdehectaresem18pases
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Melhoramentoconvencionalvs.TransformaoGentica
Melhoramentoconvencional Hibridizaoporcruzamento p sexualintroduz100000genes potencialmentenegativoscomo objectivodeobterumgenede resistnciaaumadoena. Induodemutagnesetem sidousadadurantedcadaspara acriaodevariaesgenticas. i d i i Transformaogentica Introduodeum(ou ( alguns)genesestranhosno patrimniogenticodamelhor cultivardisponvel. GenesBt ouderesistnciaa doenaspodempermitira reduode80%dasaplicaes dequmicosinsecticidasou d i i i id fungicidas.

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Aplicaesdasplantastransgnicas

Melhoramentodeplantascultivadaspelaintroduodenovosgenes:

Aumentarorendimento(tolernciaaherbicidaseresistnciaapragas) Suprimirfalhasnutritivas Suprimir falhas nutritivas Realarosabor

PodemproduzirprotenasparanecessidadesdoHomem(farmacutica) biorreactores vivos Estudodaacodegenesdurante odesenvolvimento

Estudosdepromotores(geneRb7 dotabaco) do tabaco) Descobrirafunodeumgene peloaumentooureduodasua expresso

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Principaisaplicaesnomelhoramentovegetal

Tolernciaaherbicidas Resistnciaainsectos Resistnciaavrus Resistncia a vrus Tolernciaastress

Resistnciaseca Resistnciaaofrio Resistnciaaocalor Amadurecimentoretardado Produodeplantasans Contedoemcarboidratoselpidos Contedoemprotenas

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Melhoramentodaprodutividadeequalidadedasculturas

Melhoramentodocontedoalimentar

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Caractersticaseplantastransgnicasaprovadas

BasededadosdeplantasGM http://www.agbios.com/dbase.php Caractersticaseplantasaprovadas: p p

Composioemaminocidos Composioemcidosgordos Tolernciaaherbicidas Resistnciaainsectos Resistnciaalepidpteros Esterilidademasculina Alteraodacor Mutaes Reduodanicotina Retardamentodo amadurecimento Resistnciaavrus
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AopiniopblicasobreosOGMs

ArelaoentreascompanhiasprodutorasdeOGMseopbliconotemsido pacfica. ExistemovimentosantiOGMsbastantepoderosos(e.g.,Greenpeace)

OscasosPusztai edaborboletaMonarcaforamalvodebastanteatenopelos mediaeresultaramemreceiosacrescidosdosgovernosepopulaes. OsOGMs estomuitomaisestigmatizadosnaEuropadoquenoRestodoMundo.

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OsantiOGMs

http://altercampagne.free.fr/pages/Programme_JIGMOD.htm

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OsOGMsnosmedia

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