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ACTIVITES ANTIOXYDANTES ET ANTIBACTERIENNES DES POLYPHENOLS EXTRAITS DE PLANTES MEDICINALES DE LA PHARMACOPEE TRADITIONNELLE DU BURKINA FASO Damintoti Karou1*, Mamoudou

H. Dicko1, Jacques Simpor, 2 Saydou Yameogo1, Souleym ane Sanon1, Alfred S. Traor1 Universit de Ouagadougou, Centre de Recherche en Sciences Biologiques, Alimentair es et Nutritionnelles (CRSBAN), Laboratoire de Biochimie, 03 BP 7021 Ouagadougou 03, Burkina Faso ; 2 : Laboratoire de Biologie Mdicale Saint Camille de Ouagadou gou, 01 BP 364 Ouagadougou 01, Burkina Faso *Auteur correspondant: damin.karou@univ-ouaga.bf Mots Cls : antioxydants ; polyphnols ; antimicrobiens ; plantes mdicinales. 1. RESUME

Ce travail a eu pour objectif dvaluer les activits antioxydantes et antibactriennes des polyphnols extraits de quatre plantes mdicinales de la pharmacope traditionnell e du Burkina Faso. Il sest agit des plantes suivantes : Combretum micranthum, Kha ya senegalensis, Pterocarpus erinaceus et Sida acuta. Les activits antioxydantes ont t values en utilisant deux mthodes : la rduction du phosphomolybdate et la dcolo ion du radical cation ABTS (acide 22, azino-bis-(3-thylebenzothiazoline)-6-sulfoni que). Les rsultats avec les deux mthodes ont rvl dune part une excellente corrlation tre les deux mthodes (r = 0,92) et dautre part de trs bonnes activits antioxydantes des corces de troncs de K. senegalensis et de P. erinaceus et des feuilles de C. micranthum, de plus ces activits sont fortement corrles avec les teneurs en phnols t otaux exprimes en quivalent dacide gallique (r = 0,94 par la rduction du molybdate e t r = 0,91 par la dcoloration de lABTS). Les tests antimicrobiens ont t raliss sur de souches pathognes de rfrence et sur des souches sauvages isoles des produits pathol ogiques. Les tests de susceptibilit ont t effectus sur milieu solide en utilisant la mthode des puits. Les CMI et les CMB ont t dtermines par la mthode microdilution du CCLS en milieu liquide. Certains microorganismes ont t sensibles aux extraits avec des valeurs CMB comprises entre 20 et 2000 g/ml. A lissue de ce travail il ressor t que lactivit antibactrienne des extraits serait influence par le degr doxydation de composs phnoliques.

2. INTRODUCTION Lutilisation des plantes pour se soigner date de la prhistoire et tous les peuples sur tous les continents ont cette vieille tradition. Malgr les efforts des chimi stes synthse de nouvelles molcules, plus de 25 % des mdicaments prescrits dans les pays dvelopps drivent directement ou indirectement des plantes [1]. Cependant, en t ant que sources de mdicaments, les plantes restent encore sous exploites surtout d ans le domaine de la microbiologie mdicale [2]. Il est certain que la plupart des antibiotiques prescrits drivent des microorganismes et que, un trois antibiotiqu es sont mis sur le march chaque anne [3], mais il est aussi vident que les agents a ntimicrobiens dorigine vgtale ont leur place dans larsenal de mdicaments prescrits pa r les cliniciens et juste titre [4]. Chaque antibiotique a une dure de vie effect ive limite au bout de laquelle les microorganismes dveloppent des rsistances, de pl us, dans les pays en dveloppement, ces produits ne sont pas toujours disponibles, ou, lorsquils le sont, ils cotent trop cher pour les populations, ainsi plus de 8 0 % de ces populations ont recours exclusif aux plantes pour se soigner [2,5]. D ans les pays dvelopps, on assiste une prescription abusive de certains mdicaments, dans le souci davoir une certaine autonomie dans la prise en charge mdicale pour l es problmes de sant primaires, certaines populations pratiquent une auto mdication, le plus souvent base de tisane de plantes [6]. Dans le but de trouver de nouvel les activits antimicrobiennes, les polyphnols de quatre plantes de la mdecine tradi tionnelle du Burkina Faso, prcdemment dcrites pour leurs activits antiplasmodiales [ 7], ont t extraits et tests dans un premier temps sur les souches bactriennes de rfre ce et sur des souches hospitalires isoles des produits pathologiques. Dans un deux ime temps lactivit antioxydante des extraits a t values travers leur capacit ch

radicaux libres. 3. MATRIEL ET METHODES

Matriel vgtal Les chantillons de plantes suivants ont t rcolts aux alentours de Ouagadougou entre juillet et aot 2002 : Rameaux feuills de Combretum micranthum G. Don (Combretaceae) Feuilles et corces de tronc de Khaya senegalensis A Juiss (Meliaceae) Feuilles et corces de tronc de Pterocarpus erinaceus Poir (Fabaceae) Plante entire de Sida acuta Burm f. (Malvaceae) Mthodes Les polyphnols ont t extraits lactone 70 % [8]. La teneur en phnols totaux a t v les extraits lyophiliss [9] miniaturise dans les plaques de microtitration de 96 p uits [10]. Les activits antioxydantes ont t values par la mthode du phophomolybdate [11] et par a dcoloration de lABTS [12]. Les tests de susceptibilit ont t effectus sur milieu muller hinton solides en utilis ant la mthode des puits [13]. Lactivit microbicide a t value en milieu liquide tel q le recommande le NCCLS [14]. 4. RESULTATS ET DISCUSSION

Les rsultats des activits antioxydantes enregistrs avec lABTS et ceux enregistrs ave c le phosphomolybdate sont similaires lexception que dans cette deuxime mthode lacti vit des corces de P. erinaceus est nettement suprieure celle des autres extraits (t ableau 1). Nanmoins il y a une excellente corrlation entre les deux mthodes (coeffi cient de corrlation r = 0,92). Par ailleurs on obtient aussi une bonne corrlation entre les teneurs en composs phnoliques et les activits antioxydantes (r = 0,91 pa r la dcoloration de lABTS et r = 0,94 par la mthode du phosphomolybdate). Des rsulta ts similaires ont t trouvs par dautres auteurs qui ont montr quil y une bonne corrla n entre le profil en phnols totaux et lactivit antioxydante des extraits de plantes suggrant ainsi que les composs phnoliques sont bien responsables de lactivit antioxy dante de ces extraits [15, 16].

Tableau 1. Teneur en phnols totaux et activits antioxydantes des extraits ________________________________________________________________________________ __________ Teneurs en phnols Activits antioxydantes Totaux % Extraits 1Trolox ( mol/ g) 2ABTS (nmol/ g) ________________________________________________________________________________ __________C. micranthum 37.80 1.04 2.08 103 0.02 103 16.37 0.01 K. senegalensis corces 47.19 0.13 2.21 103 0.04 103 21.97 0.46 K. senegalensis feuilles 34.91 1.88 1.50 103 0.03 103 15.47 2.65 P. erinaceus corces 40.80 1.75 1.89 103 0.08 103 22.20 0.29 P. erinaceus feuilles 28.42 0.75 1.88 103 0.03 103 8.08 0.06 S. acuata 10.11 0.29 1.20 103 0.04 102 6.12 1.18

________________________________________________________________________________ _______ Les donn es sont exprimes avec les dviations standard. 2Activit antioxydante mesure p ar la mthode au phosphpmolybdate. 2Activit antioxydante mesure par la dcoloration de lABTS Les tests de susceptibilit ont t effectus deux fois par semaines depuis la dissoluti on des extraits et les activits antimicrobiennes ont t estimes en fonction des diamtr es dinhibition autour des puits. Les rsultats ont montr que les diamtres dinhibition ont vari en fonction du temps de conservation jusquau bout de la troisime semaine s oit 21 jours o les diamtres variaient trs peu. Les valeurs des diamtres dinhibition e nregistrs se trouvent consignes dans le tableau 2. Les concentrations minimales in hibitrices dtermines avec les. Tableau 2. Activits bactricides des polyphnols. Microorganismes Cbm Kse T0 T21 T0 T21 T0 T21 S. dysenteriae 25 21 15 25 S. dysenteriae CIP 504051 S. flexneri 20 14 S. boydii 17 S. thyphi 15 13 S. parathyphi B 12 29 12 16 S. parathyphi C 12 11 K. pneumoniae 15 K. ozenae 20 12 18 K .oxytoca S. aureus 15 22 15 S. aureus ATCC 25923 12 12 E. coli 12 E. coli CIP 105182 Ksf T0 13 15 11 11 11 12 15 Pee T21 15 11 22 15 18 12 Pef T0 10 12 16 Sac T21 11 16 15 18 T0 15 T21 22 11 -

Cbm : C. micranthum, Kse : K. senegalensis corces, Ksf : K. senegalensis feuilles , Pee : P. erinaceus corces, Pef : P. erinaceus feuilles, Sac : S. acuta T0 : pou r les extraits nouvellement solubiliss, T21 : pour les extraits conservs pendant 2 1 jours, (-): pour les souches rsistantes.

extraits dans leurs conditions optimales dactivit ont vari de 20 2000g/ml. Travailla nt sur les extraits hydroalcooliques dAcacia aroma Gill ex Hook et Arn, Arias et al. [17] nont enregistr aucune diffrence dactivit entre extrait frachement prpar et ait conserv Dans notre cas lactivit des extraits est due aux polyphnols et elle pourrait de ce fait tre lie au degr doxydation de ces composs. En effet, les polyphnols sont des com oss trs susceptibles dautooxydation en prsence de loxygne de lair. Cette oxydation s

raduit par une polymrisation des monomres tels les monomres de flavonodes pour donner des polymr es de poids molculaires levs. Il a t dmontr que le mcanisme de toxicit vis--vis d rganismes se fait soit par la privation des ions mtalliques tels que le fer soit par des interactions non spcifiques telles que ltablissement des pont hydrognes avec les protines des parois cellulaires (les adhsines) ou les enzymes [18,4]. Cependa nt un important facteur qui rgit lactivit antimicrobienne des polyphnols est leur po ids molculaire, les monomres sont trop petits pour tablir assez de pont hydrognes ta ndis que les polymres de haut poids molculaire sont trop grands pour traverser la paroi bactrienne, le poids molculaire idal serait donc celui des oligomres [19]. Rfrences bibliographiques [1] Newman, D.J. ; Cragg, G.M.et Snader, K.M., Natural Prod. Rep. 17 (2000) 175-285. [2] Kirby, G.C. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 90 (1996) 605-609. [3] Clark, A.M. Pharmacol. Res, 13 (1996) 1996. [4] Cowan, M.M. Clin. Microbiol. Rev. 12 (1999) 564-582. [5] Hostettmann, K. et Marston, A. Phytochem. Rev. 1 (2002) 275-285. [6] Eisenberg, D.M.; Kessler, R.C.; Foster, C.; Nortlock, F.E.; Calkins D.R. et Delbanco, T.L. Nat. Engl. J. of Med. 328 (1993) 246-252. [7] Karou, D. ; Dicko, M.H. ; Sanon, S. ; Simpore, J. et Traore, A.S. J. Eth nopharmacol. 89 (2003) 291-294. [8] Yu, Z. et Dahlgren, R. A. J. Chem. Ecol. 26 (2000) 2119-2140. [9] Singleton, V.L.; Orthofer, R.et Lamuela-Raventos, R.M. Methods Enzymol. 299 (1999) 152-177. [10] Dicko, M.H.; Hilhorst, R.; Gruppen, H.; Traore, A.S.; Laane, C.; Van Ber kel, W.J.H. et Voragen, A.G.J. J. Agric. Food Chem. 50 (2002) 3780-3788. [11] Prieto, P.; Pineda, M.et Aguilar, M. Biochemistry. 269 (1999) 337-341. [12] Re, R.; Pellegrini, N.; Proteggente, A.; Pannala, A.; Yang, M. et Rice-E vans, C.,. Free Rad. Biol. Med 26 (1999) 1231-1237. [13] Perez, C.; Pauli, M. et Bazerque, P. Acta Biol. Med. Exp. 15 (1990) 113115. [14] National Committee for Clinical Laboratory Standards. 5th ed vol. 17 . A pprouved standards-M7-A4. NCCLS document M7-A4. National Committee for Clinical Laboratory Standard Wayen Pa, 2000. [15] Tunalier, Z.; Kozar, M.; Ozturk, N.; Baser K.H.C.; Duman, H.; Kirimer et N. Chem. Nat. Comp. 40 (2004) 206-210. [16] Fernndez-Pachn, M.S.; Vilao, D.; Garcia-Parilla, M.C. et Troncoso, A.M. Ana l. Chim. Acta. 513 (2004) 113-118. [17] Arias, M.E.; Gomez, J.D.; Cudmani, N.M.; Vattuone, M.A. et Isla, M.I.. L ife Science. 75 (2004) 191-202. [18] Scalbert, A.,. Phytochemistry. 30 (1991) 3875-3883. [19] Field, J.A., Lettinga, G.Basic Life Science 59 (1992) 673-692.