Ministerul Sntii al Republicii Moldova Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC I TOXICOLOGIC

V. Valica, L. Uncu, T. Treapina

Analiza medicamentelor derivai ai acidului para-aminobenzenic

Elaborare metodic pentru anul III

Chiinu 2011

INTRODUCERE Elaborarea metodic este destinat pentru pregtirea de sine stttoare a studenilor ctre lucrarea de laborator i pentru lucrul practic de sine stttor al studenilor sub conducerea profesorului. Importana profesional a temei Aceast tem include medicamente din grupul compuilor aromatici derivai de acid paminobenzenic. ncepnd studierea temei, studenii se familiarizeaz cu unele particulariti de analiz a medicamentelor studiate (determinarea a diferitor indici fizico-chimici, analiza grupelor funcionale specifice, metode fizico-chimice de analiz i altele). Importana studierii acestei teme se determin prin aceea, c le d posibilitate: - de a elucida relaia structur chimic - aciune farmacologic n grupul compuilor studiai; - de a aprecia calitatea substanelor medicamentoase dup constante fizice (puterea rotatorie specific, coeficientul de absorbie etc.) - de a determina impuritile medicamentelor prin aplicarea cromatografiei pe strat subire; - de a studia stereoizomeria substanelor studiate; - de a pronostica posibilitatea schimbrii calitii medicamentoase sub influena diverilor factori al mediului ambiant i de a propune condiii optime de conservare n condiiile farmaceutice; Astfel, studierea legitilor generale i particularitile specifice a medicamentelor din grupul acizilor aromatici permite ridicarea nivelului profesional a viitorilor farmaciti n vederea aprecierii calitii medicamentelor. Scopul studierii temei: 1. De a nsui caracteristica comparativ a proprietilor fizice i fizico-chimice a substanelor medicamentoase din grupa compuilor studiai. 2. De a acumula deprinderi n efectuarea reaciilor generale i particulare de identificare a substanelor medicamentoase studiate. 3. Reieind din proprietile fizice i chimice ale preparatelor medicamentoase din grupul aminoacizilor aromatici, a putea determina impuritile i argumenta prezena lor. 4. A putea efectua dozarea preparatelor medicamentoase n corespundere cu cerinele DTN. 5. A putea stabili condiiile de conservare a preparatelor medicamentoase n dependen de structura lor chimic i proprieti. Planul lucrrii de laborator 1. Controlul i corecia nsuirii materialului dup ntrebrile pentru pregtirea de sine stttoare. 2. Lucrul practic al studenilor. 3. Controlul total.

MATERIAL INFORMATIV Cel mai simplu reprezentant al aminoacizilor rndului aromatic este acidul paraaminobenzenic. La aceast grup se refer derivaii acidului p-aminobenzenic anestezina i novocaina (anestezice locale) i analogii lor. Proprietile chimice i reaciile de determinare a identitii a derivailor aminoacizilor aromatici sunt condiionate de grupele funcionale: amino-grupa aromatic primar (anestezina, novocaina), grupa esteric (anestezina, novocaina), ionul de clor etc. Introducerea grupei carboxil n acelai timp cu amino-grupa micoreaz considerabil toxicitatea compuilor. Derivaii acidului p-aminobenzenic se utilizeaz n medicin ca substane medicamentoase cu aciune analgezic local. Prima substan cu aciune anestezic local a fost alcaloidul natural cocaina. La studierea structurii moleculei cocainei i influena prilor componente ale moleculei asupra efectului anestezic a fost extras grupa anesteziofor, care i posed efectul anestezic. Descoperirea grupei anesteziofore n molecula cocainei a adus la sinteza substanelor anestezice locale mai simple dup structur - eterii acidului paminobenzenic (anestezina, novocaina, dicaina). Tabelul 1 Proprietile fizice ale substanelor medicamentoase, derivai ai acidului para-aminobenzenic Denumirea romna, latin i chimic, formula de structur Anestezina NH2 Anaesthesinum Descrierea. Solubilitatea Pulbere alb cristalin, fr miros, cu gust slab amar. Provoac pe limb senzaia de amorire. Foarte puin solubil n ap, uor solubil n etanol, eter, cloroform. Greu solubil n uleiurile grase i acid clorhidric diluat.

O C OC2H5

p-aminobenzoat de etil Novocaina NH2 Novocainum

O C O - CH2 - CH2 - N

C2H5 C 2H 5

. HCl

Cristale incolore, sau pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust amar. Provoac pe limb senzaia de amorire. Foarte uor solubil n ap i alcool, puin solubil n cloroform, practic insolubil n eter.

Clorhidratul esterului -dietilaminoetilic al acidului p-aminobenzoic Xicain (Lidocain) Pulbere alb cristalin, cu gust amar Xycainum (Lidocainum) Uor solubil n ap, cloroform, solubil n alcool, insolubil in eter. Punctul de topire este 128-1290C.
H3C CH3 O NH - C CH2 - N C2H5 C2H5 . HCl

Clorhidratul de dietilamino-2,4 -dimetilacetanilida

Metoclopramid Metoclopramidum
CO - NH - CH2 - CH2 - N OCH Cl NH2
3

C 2H 5 C 2H 5

Pulbere alb, cristalin, solubil n ap, practic insolubil n alcool.

. HCl

4-amino-5-chloro-N-(2-(diethylamino)ethyl)2-methoxybenzamid Ultracain Ultracainum (Articainum)

S H H3 C NH - C - CH - N O CH3 C3H7

Pulbere alb sau aproape alb, cristalin, foarte uor solubil n ap, solubil n alcool.

. HCl

4-methyl-3-(2propylaminopropanoylamino)thiophen Bupivocain Bupivocainum (Marcainum)

CH3 NH - C CH3 C4H9 N . HCl . H2O

Pulbere alb sau aproape alb, cristalin, solubil n ap, puin solubil n alcool.

1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl) piperidine-2-carboxamid Reacii comune pentru aminele aromatice i derivaii lor Reacia de azocombinare Aminele aromatice n mediu acid uor formeaz cu nitritul de sodiu sruri de diazoniu incolore, sau de culoare galben-pal. Ultimele reacioneaz cu fenolii i aminele aromatice cu formare de azocolorani. Interaciunea cu fenolii, de obicei, are loc n soluii carbonato-bazice, iar cu aminele n soluii slab-acide sau neutre. Combinarea are loc n poziiile para cu grupele hidroxile sau amine; dac poziiile para n fenol sau amin snt substituite, atunci reacia are loc n poziia orto- ctre grupa hidroxilica sau cea aminica.
NH2 HCl Cl R R + NH3 HNO3 -2 H2O R + N
OH

N Cl NaOH

OH

Colorarea n viiniu-rou a azocoloranilor se obine la combinarea srurilor de diazoniu cu soluia bazic de -naftol, combinarea are loc n poziia :
+ N HO N Cl R OH N N

NaOH

+ NaCl + H2O
R

Dac hidrogenul amino-grupei aromatice este substituit cu radical, atunci preparatele date vor da reacia de azocombinare, dup hidroliza acid prealabil. Reacia de formare a bazelor iff Aminele aromatice primare se condenseaz n mediu acid cu aldehide alifatice sau aromatice, formnd aa numitele baze iff. Produsul reaciei al aminelor aromatice cu pdimetilaminobenzaldehida n mediu de acid clorhidric este colorat de la galben pn la oranj.
R NH2

O H CH

CH3 CH3

N=N

CH3 CH3

H2O

Reacia cu pictura, este bazat pe formarea bazelor if (reacia Ovcinicov), const n aceea c cristalele preparatului (aminei aromatice) se pun pe o hrtie cu coninut de lignin, i adugnd o pictur de acid clorhidric concentrat, apare o coloraie galben-oranj n rezultatul condensrii aminei cu aldehidele, care se conin n lignin, de exemplu cu aldehida coniferilic.
O HO H CO
3

CH = CH - C H

Pentru identificarea aminelor aromatice se folosesc i alte aldehide. Aa, G.I. Luchiancicova a descris un produs al reaciei de culoare galben al anestezinei cu vanilina. Reacia de condensare cu 2,4-dinitroclorbenzen Aminele aromatice (i alifatice) primare, secundare, teriare se condenseaz cu 2,4dinitroclorbenzen, cu formare de produi de culoare galben. Aminele primare formeaz produi de condensare, care reprezint chinoni:
R - NH2

Cl NO2

NO2

+ R - NH O2N

NO2

HCl

Reacia de formare a brom-derivailor Aminele aromatice la interaciunea cu bromul, uor substituie atomul de hidrogen al inelului benzenic n poziia orto- i para- la halogen, formnd compui insolubili:
Br NH2

3 Br2

Br

NH2 Br

+ 3 HBr

Reacia de formare a coloranilor polimetinici La adugarea la 0,05 g amin aromatic primar 1 ml soluie apoas de furfurol (I) 1% apare o coloraie roie sau zmeurie. Prima stadie a acestei reacii const n condensarea furfurolului i unei molecule de amin cu formare bazei if de culoare galben-deschis (II) :
O H C O I

+ R - NH2
O II

H C N-R

H2O

Ultima reacioneaz apoi cu a doua molecul de amin aromatic; are loc determinarea inelului furfurolic i formarea colorantului polimetinic (III) : HC CH
HC HC O CH C C H N-R H

R - NH2

HN - CH R III

C-C=N-R OH

Pentru identificarea irului de preparate se efectueaz de asemenea reacii i pentru identificarea altor grupe funcionale. Reacia pentru determinarea grupei esterice (hidroxamic) Anestezina i novocaina ca esteri dau reacia hidroxamic. La interaciunea cu hidroxilamina n mediu bazic, ele formeaz acizi hidroxaminici, care dup acidulare cu acid clorhidric formeaz hidroxamai colorai cu srurile de fer (III) sau cupru (II).
NH2 NH2OH . HCl O C O - CH2 - CH2 - N NaOH C2H5 C2H5 . HCl C O N - OH H NH2

HO + CH2 - CH2 - N

C2 H 5 C 2 H5

La efectuarea acestei reacii este necesar de urmat strict cerinele metodicii, deoarece hidroxamatul de fer (III) se formeaz n mediu acid la o anumit indicaie a pH-lui; adugarea excesului de acid duce la distrugerea complexului i schimbarea culorii. Reacia de oxidare Novocaina, anestezina uor se oxideaz, formnd produi colorai sau produi incolori. n calitate de oxidant se folosesc soluiile de permanganat de potasiu, cloramin, peroxid de hidrogen. n rezultatul oxidrii aminelor aromatice primare se poate schimba nu doar culoare, dar i solubilitatea, de aceea una din caracteristicile calitii bune a anestezinei i novocainei este analiza transparenei i coloraiei soluiilor lor. Reacii particulare pentru aminele aromatice i derivaii lor Anestezina Reacia de deosebire a anestezinei este reacia iodoformic. Se nclzete preparatul cu soluie de baz de sodiu, se adaug soluie iod pn la dispariia culorii galbene; apare miros de NH2 NH2 iodoform:

+
O C IV OC2H5

NaOH O C

+
ONa

C2H5OH

C2H5OH + 4I2 + 6NaOH CHI3 + 5NaI + HCOONa + 5 H2O Novocaina ) Soluia de novocain se aciduleaz cu acid sulfuric diluat i se adaug permanganat de potasiu, soluia se decoloreaz (formarea produilor incolori de oxidare a novocainei). b) La soluia apoas de preparat se adaug perhidrol i acid sulfuric concentrat, ncet apare o coloraie liliachie. c) La adugare la soluia apoas de novocain soluie de sodiu bazic, se formeaz un precipitat incolor uleios de baz de novocain:

O H2N C - OCH2 - CH2 - N O H2N

C2H5 C2H5

.H l C

+ +

N H aO

C - OCH2 - CH2 - N

C2H5 C2H5

N l aC

H2O

Pentru prevenirea acestei reacii (n timpul pstrrii la aciunea bazicitii sticlei) n timpul preparrii soluiei novocainei pentru injecie n calitate de stabilizator se recomand de adugat soluie de acid clorhidric 0,1mol/l pn la pH 3,8-4,5. Determinarea cantitativ se petrece dup metoda titrrii nitritometrice (novocaina, anestezina). La determinarea dup metoda nitritometric a derivailor acilici ale aminelor acizilor aromatici este necesar ca prealabil de efectuat hidroliza acid. Pentru determinarea cantitativ pot fi folosite i alte metode: iodclorimetric, bromatometric, titrarea n solveni anhidri, dup aciditate, legat de molecula aminei aromatice (neutralizare, argintometria, mercurimetria, fotometria). Lucrul practic al studenilor la lucrarea de laborator Scopul: A nsui deprinderea efecturii analizei substanelor medicamentoase din grupa compuilor studiai. La indicaia profesorului de ndeplinit urmtoarele sarcini: 1. De apreciat calitatea substanelor medicamentoase dup indicii Caractere organoleptice i Solubilitatea. Rezultatele se prezint sub form de tabel: Denumirea n limba latin, romn, formula chimic. Denumirea raional Caractere organoleptice. Cerinele Rezultatele DTN cercetrilor Solubilitatea Cerinele Rezultatele DTN cercetrilor

Adnotare: Solvenii se aleg de profesor corespunztor cerinelor FS la substana medicamentoas de analizat. 2. Identificarea substanelor medicamentoase din grupul studiat Denumirea romn, Modul de lucru i chimismul reaciei Rezultatul formula de observrilor structur. 2.1. Reacii comune pentru derivaii acidului p-aminobenzenic 2.1.1. Formarea azocolorantului La 0,01-0,05 g amin aromatic se adaug 1 ml ap, 2-3 picturi de acid clorhidric diluat, 2 picturi soluie 2% nitrit de sodiu n exces. Soluia obinut se adaug la 1-2 ml de soluie de naftol. Apare culoarea viiniu-roie. Aceast reacie dau toi compuii, care conin amino-grupa aromatic primar nesubstituit anestezina, novocaina, metoclopramid. Pentru preparatele cu grup aminic substituit: 0,01-0,02 g preparat se fierbe 2-3 minute cu 2-3 ml acid clorhidric diluat. Apoi se adaug 2-3 picturi soluie de nitrit de sodiu, se amestec i cteva picturi de soluie obinut se toarn n soluie bazic de -naftol; apare o coloraie rou-oranj. 2.1.2. Formarea bazelor iff La 0,01-0,02 g preparat n creuzet de porelan, se adaug 2-3 picturi de reactiv, care este format din 0,2 g p-dimetilaminobenzaldehid, 1 ml acid clorhidric concentrat n 10 ml alcool apare coloraie galben, sau oranj. Aceast reacie dau anestezina, novocaina i alte amine aromatice primare.

2.1.3. Reacia cu 2,4-dinitroclorbenzen La 0,01 g preparat n epruvet se adaug 8-10 picturi soluie alcoolic 1% 2,4dinitroclorbenzen, se nclzete pn la fierbere, se rcete i se adaug 1-2 picturi soluie de baz de sodiu. Apare o coloraie galben-oranj. Dup acidularea soluiei cu cteva picturi de acid acetic diluat i se agit cu cloroform, care se coloreaz n galben. Aceast reacie d anestezina, novocaina i alte amine. 2.1.4. Reacia de substituie La soluia preparatului se adaug exces de ap de brom se formeaz precipitat de bromderivat. Precipitate cu apa de brom formeaz anestezina, novocaina i alte amine aromatice cu poziii orto- sau para- libere. 2.1.5. Reacia pentru ionul de clor La soluia de substan se adaug 1-2 ml soluie azotat de argint i 1 ml acid azotic; apare un precipitat alb cazeinos. 2.1.6. Reacia hidroxamic 0,1 g anestezin (novocain) se dizolv n 2 ml ap (anestezina n alcool), se adaug 2 ml soluie alcalin de hidroxilamin, se agit 5 min., se adaug 2 ml acid clorhidric diluat i 0,5 ml soluie 10% clorur de fer; anestezina formeaz o coloraie brun, iar novocaina viinie. 2.2. Reacii specifice 2.2.1. Anestezina 2.2.1.A. Se dizolv 0,05 g de preparat n 2 ml de ap acidulat cu 5 picturi de acid clorhidric diluat, se adaug 3 picturi soluie nitrat de sodiu 0,1 mol/l i se agit. Soluia obinut se adaug la 3 ml de soluie bazic de -naftol. Apare o coloraie viiniu-roie sau se formeaz precipitat rou-oranj. 2.2.1.B. Se nclzete 0,05 g anestezin cu 5 ml soluie hidroxil de sodiu i se adaug soluie de iod 0,1 mol/l pn la dispariia culorii galbene; apare miros de iodoform. 2.2.1.C. Se dizolv 0,05 g anestezin n 2 ml ap i 5 picturi acid clorhidric diluat i se adaug 2 ml soluie cloramin. Peste 2-3 minute se adaug 2 ml eter i se agit. Stratul de eter se coloreaz n oranj. 2.2.1.D. Cristale de anestezin se pun pe sticlua port-obiect, se adaug 1 pictur de aceton sau alcool 95% i solventul se vaporizeaz la aer, apoi se adaug 1 pictur de solvent i din nou se las pn la vaporizare. La microscop (mrirea 70x) se observ cristale de anestezin n form de plci dreptunghiulare cu o ntunecare caracteristic. 2.2.2. Novocaina 2.2.2.A. Preparatul are reacii caracteristice pentru identificarea amino-grupei aromatice primare (Vezi 2.2.1.A.). 2.2.2.B. Se dizolv 0,05 g novocain n 2 ml ap; se adaug 3 picturi acid clorhidric diluat i 1 ml soluie de permanganat de potasiu 0,1 mol/l; culoarea violet dispare ndat. 2.2.2.C. Se dizolv 0,2 g novocain n 2 ml ap, se adaug 0,5 ml soluie hidroxid de sodiu; se formeaz precipitat uleios incolor. 2.2.2.D. Determinarea ionului de clor se efectueaz dup indicaia din 2.1.5. 2.2.2.E. La amestecul care conine 0,01 g novocain se adaug 1-2 picturi perhidrol i 3-5 picturi acid sulfuric conc. Peste puin timp apare coloraia liliachie. 2.2.6. Xicaina 2.2.6.A. La 4-5 picturi soluie de preparat 1% se adaug 3-5 picturi soluie nitrat de cobalt, peste 2-3 minute apare un precipitat cristalin verde-albastru. 2.2.7. Metoclopramida 2.2.7.A. Spectrul n IR ale substanei trebuie s corespund spectrului substanei standarde prin dispersie n bromur de potasiu. 2.2.7.B. Spectrul n UV al soluiei 0,001 % trebuie s prezinte dou maxime: la 272 nm i la 308 nm. Sarcina 3: Efectuarea determinrii cantitative

3.1. Anestezina Circa 0,2 g preparat (mas exact) se dizolv n amestec de 10 ml ap i 10 ml acid clorhidric diluat. Apoi se adaug ap pn la volumul 80 ml, 1 g bromur de potasiu i la amestecare continu se titreaz cu soluie nitrat de sodiu 0,1 mol/l, se adaug la nceput cu viteza de 2 ml pe minut, iar la sfritul titrrii (nainte de 0,5 ml pn la cantitatea echivalent) cte 0,05 ml peste 1 minut punctul de echivalen se determin cu ajutorul indicatorului intern tropeolin 00 n amestec cu albastru de metilen. Titrarea se efectueaz la temperatura nu mai mare de 18-20C pn la trecerea culorii de rou-violet la albastru. 1 ml soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l corespunde la 0,01652 g de anestezin, care n preparat trebuie s fie nu mai puin de 99,5%. 3.2. Novocaina Circa 0,3 g preparat (mas exact) se dizolv n 10 ml ap i 10 ml acid clorhidric diluat i apoi se efectueaz cum este indicat n 3.1. n calitate de indicator se folosete rou neutru. Titrarea se efectueaz pn la trecerea culorii de la zmeuriu la albastru. 1 ml soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l corespunde la 0,02728 g de novocain, care n preparat trebuie s fie nu mai puin de 99,5%. 3.3. Metoclopramida Circa 0,2 g preparat (mas exact) se dizolv n 10 ml ap i se adaug 20 ml acid clorhidric diluat. Apoi se efectueaz ca n experiena 3.1. 1 ml soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l corespunde la 0,03363 g de metocloprami, care n preparat trebuie s fie nu mai puin de 99,0%. Sarcina 4: De efectuat determinarea cantitativ a novocainei pentru injecii, prin metoda spectrofotometric Prepararea soluiei de analizat: dizolvrilor corespondente ale soluiei 1mol/l analizate din fiol de acid clorhidric, se prepar soluie de novocain 0,02%. Dizolvarea soluiei analizate de novocain: Concentraia sol. analizate % Cantitatea sol. Volumul vaselor de msurare, ml 2 2,5 250 1 2,0 100 0,5 4,0 400 Absorbana soluiei de analizat se determin la spectrofotometru la lungimea de und 272 nm n cuveta cu grosimea stratului 1 cm (soluia de comparare - soluia acid clorhidric 1 mol/l). Preparare soluiei standard de novocain: 0,02 g novocain (mas exact) se dizolv n soluia de acid clorhidric 1 mol/l n balonul cotat cu volumul de 100 ml i se determin densitatea optic n aceleai condiii. Calcularea concentraiei novocainei n soluiile din fiole: Concentraia soluiei de analizat se determin dup formula: An. * st. * V = , unde: Ast. Aan., Ast. absorbana soluiei de analizat i a soluiei standard Cst. concentraia standard, %. V gradul de diluie

Fig. 1 Spectrul solutiei standard de Novocaina in diferiti solventi Spectrul n IR al substanei de novocaina trebuie s corespund spectrului substanei standard prin dispersie n bromur de potasiu.

Fig. 2 Spectrul in infrarosu al solutiei standard de Novocaina 1. 2. Probleme de recapitulare: Cu care reacii chimice se poate de determinat identitatea preparatelor, derivai ai acidului paminobenzenic? Scriei egalarea reaciilor chimice. Ce dependen exist ntre structura chimic i proprietile anestezice locale ale preparatelor medicamentoase? Care proprieti chimice i metode de analiz pot fi folosite la determinarea cantitativ a anestezinei, novocainei, xicainei? Prin ce metode se poate de determinat punctul de echivalen la determinarea cantitativ nitritometric? Se poate de deosebit anestezina, novocaina dup solubilitatea n ap i eter? Bibliografie: Conspectul leciei

3.
4.

5.
1.

10

2. 3. 4. 5.

abilev F.V. Chimie farmaceutic, Chiinu: Universitas, 1994.-p 675p Farmacopea romn. Ediia X-a Bucureti: Editura medical, 1993.-1315p. Ghid farmacoterapeutic. Ch.: F.E.-P. Tipografia central, 2006. 1424 p. Haieganu E., Stecoza C. Chimie terapeutic. Vol. II. Bucureti: Editura Medical, 20062008. 253 p. 6. .. .- .: -, 2007. 624 .

11