Explorarea n laborator a metabolismului proteic

Clasele de proteine plasmatice

Plasma -amestec coloidal, Clasele de proteine plasmatice:

albuminele i globulinele,

indexul de disproteinemie:

raportul de concentraie A/G = 0,8 - 1,2.

Proteinemia

concentraia proteinelor totale din plasm Metode:

n ser sau plasm:

Metod fotometric: reacia biuretului: n mediu alcalin legturile peptidice reacioneaz cu ionii de Cu(II) cu formarea unui compus colorat n mov, a crei ntensitate se determin la 546 nm; metoda Kjeldahl: se bazeaz pe determinarea coninutului n azot; Metoda Coomassie: utilizarea colorantului Coomassie Brillant Blue (prag de detecie: 100-1000ng proteine) pyrogallol red ( prag de detecie: 1g protein/ml);

n urin sau LCR:

Material biologic : ser, plasm (heparinat), urin, LCR, lichide de puncie;

Proba Rivalta: difereniere exsudat vs. Transudat

Proteinemia

Valori normale:

ser sau plasm:

60 - 80 g/l (adult) 45-75 g/l (nou-nscui i sugari)

urin: < 150 mg/zi; LCR: 0,15- 0,45 g/l Lichid pleural:

<30 g/l: transudat (origine cardiaca) >30 g/l: exsudat (pneumonie sau proces malign)

Proteinemia

disproteinemie modificarea calitativ/cantitativ a coninutului n proteine a plasmei; Valori sczute (hipoproteinemie):

insuficien hepatic, sindrom nefrotic, arsuri, enteropatii, malnutriie / malabsorbie, insuficien panceatic; pseudohipoproteimemie: prin diluie (recoltare de pe branul) hiperproteinemii absolute: hipeimunoglobulinemie: cronice, gamopatii monoclonale; hiperproteinemii relative: hemoconcentraie, diabet insipid, diaree.

Valori crescute (hiperproteinemie):

Albumine

Dozare ser:

metode fotometrice (verde de bromcrezol), procentaj relativ din proteinogram sau cantitate absolut calculat din valoarea proteinemiei, imunodifuziune radial, nefelometrie imun, imunturbidimetrie;

Dozare urin i LCR: nefelometrie, turbidimetrie; Valori normale:

ser: 55-65% din totalul proteinelor plasmatice; 0,46 0,81 mM/l, 34 - 48 g/l. Urin: sub 20 mg/l; LCR: 110-350 mg/l;

Valori sczute: insuficien hepatic, sindrom nefrotic, arsuri, inflamaii acute i cronice, enteropatii, tumori maligne. Probe biologice: ser, urin, LCR;

Microalbuminuria

Apare n anumite stri patologice: DZ, obezitate, hiperlipidemie, hipertensiune arterial, rezisten la insulin, consum de alcool. Valoare normal:

prima urin de diminea < 20 mg/l urin pe 24 ore: <30 mg/zi;

Creteri uoare ale microalbuminuriei caracterizeaz faza reversibil a nefropatiei diabetice, care rspunde favorabil la terapie. Metode de dozare: imunoturbidimetrie, inmunonefelometrie.

Microalbuminuria

Valoare normal:

prima urin de diminea < 20 mg/l urin pe 24 ore: <30 mg/zi;

Creteri uoare ale microalbuminuriei caracterizeaz faza reversibil a nefropatiei diabetice, care rspunde favorabil la terapie. Metode de dozare: imunoturbidimetrie, imunonefelometrie.

Albuminuria diabetic
Stadiul
I. Hipertrofie i hiperfuncie

Interval
nceputul DZ

Albuminuria
< 30 mg/zi

II. Modificri histologice fr manifestri clinice

III. Nefropatie incipient IV. Nefropatie manifest

2-5 ani

<30 mg/zi

5-15 ani 10-25 ani

30- 300 mg/zi >300 mg/zi

V. Insuficien renal

15-30 ani

>300 mg/zi

Proteinuria Bence-Jones

lanurile uoare de tip lambda sau kappa apare n plasmocitoame, macroglobulinemia Waldenstrm. Metode de evideniere:
imunofixare (prag de sensibilitate: 20-30 mg/l) sau electroforeza urinar (prag de sensibilitate: aprox. 100 mg/l).

Electroforeza proteinelor

metod analitic de separare a particulelor sau ansamblurilor de particule ncrcate electric, sub aciunea unui cmp electric extern o particul ncrcat electric se va deplasa cu o vitez constant determinat de aciunea urmtoarelor fore:

Electroforeza proteinelor

viteza electroforetic:

v = Q E / 6 r

mobilitatea electroforetic :

= v / E,

= Q / 6 r
particulele pentru care raportul Q/r este identic vor avea mobiliti electroforetice identice

Electroforeza proteinelor

Mediu de migrare: agaroz, pH: 8.6 (tampon TRIS barbital), Colorant: amido black

Electroforeza proteinelor

Se aplic 5 l de ser pe gelul de agaroz Se ateapt 10 min. (penetrarea serului n gel) Se introduce gelul naparatul de electroforez Se aplic tamponul TRIS barbital Se alege programul de migrare Dup migrare i uscare se transfer gelul n unitatea de colorare

Electroforeza proteinelor

Dup colorare se interpreteaz

Inspecie Interpretare densitometric

Fraciunile electroforetice

Clasele proteinelor serice:

albumina 1- globuline: 1lipoprotein (HDL), 1glicoproteina acid, 1antitripsin, 1antichimotripsin, 2-globuline: haptoglobin, ceruloplasmin, 2macroglobulin, 1 i 2 globuline: lipoproteine, hemopexina, factorul C3, transferina, PCR, fibrinogen. fraciunea -globulinelor: IgM, IgA i IgG.

Proteinograma

Valori normale (procentual

calculate din densitograme): albumin 45-60% 1-globuline: 2.5-7.0 % 2-globuline: 7.0-14.0 % -globuline: 9.0-17.0 % -globuline: 16.0-24.8%

Trasee electroforetice

Ciroz hepatic cu pod beta-gamma

Ciroz hepatic cu ascit; Proteine totale: 71 g/l Albumin: 49 g/l Hipoalbuminemie; Pod beta-gamma;

Trasee electroforetice

Sindrom nefrotic

Proteinurie 9,5g/24 ore; Proteine totale: 35 g/l; Albumin: 18 g/l;

albuminemie; Alfa1- globulinemie; alfa2-globulinemie; beta-globulinemie;

Trasee electroforetice

Sindrom inflamator cronic /acutizat(sindrom Crohn)

Proteine totale: 61 g/l; Albumin: 26 g/l;

albuminemie; alfa1- i alfa2 globuline; gammaglobulinemie policlonal;

Trasee electrofretice

Inflamaie acut (otit medie, mastoidit)

Biat de 2 ani; Proteine totale: 57 g/l; Albumin: 36 g/l;

albuminemie; alfa1- i alfa2 globulinemie; gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Anemie feripriv

Proteine totale: 73 g/l; Albumin: 43 g/l; beta-globulinemie (transferina!);

Trasee electroforetice
Hipogamaglobulinemie (leucemie mieloid acut)

Proteine totale: 61 g/l; Albumin: 44 g/l;

albuminemie; alfa1- alfa2 globulinemie; betaglobulinemie; gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Hipogamaglobulinemie (leucemie limfatic cronic)

Proteine totale: 55 g/l; Albumin: 49 g/l;

albuminemie; gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Mielom multiplu

Proteine totale: 109 g/l; Albumin: 36 g/l;

albuminemie; Gradient M in gamma2;

Proteinuria:

Clasificare: proteinurii renale: proteinurie glomerular: trecerea n urin a proteinelor cu greutate molecular mare; proteinurie selectiv: apare doar albumina i transferina; proteinurie neselectiv: pe lng albumin i transferin apar proteine cu greutate molecular mera (de ex. Imunoglobuline); proteinurii tubulare: apariia proteinelor cu greutate molecular mic datorit reabsorbiei tubulare deficitare; forme mixte: n special n cazurile de afeciuni renale avansate apare proteinurie glomerular i tubular; Proteinurii postrenale: infecii i hemoragii urogenitale; Proteinurii prerenale: hiperproteinemii (gamopatie monoclonal);

Electroforez proteine urinare

Indici de selectivitate a proteinuriilor: R=UIgG/UAlb x PAlb/PIgG PAlb sau PIgG- conc. Plasm a Alb. Sau IgG; UAlb sau UIgG conc. In urina a Alb. sau IgG; Interpretare: R<0,2 indic selectivitate mare

Electroforez urinar

Electroforeza LCR

Valori normale:
Prealbumina: 2-7% Albumina: 56-76% 1-globuline: 2-7% 1-globuline: 3,5-12% 1 i 2 globuline: 8-18% globuline: 7-12%

Electroforeza LCR