BIOQUMICA AMBIENTAL

Mdulo 3.- Biotransformacin de los XBs

TEMA 6.- Biotransformaciones: activacin y/o detoxicacin Biotransformaciones de XBs: activaciones e inactivaciones. Compuestos biodegradables y persistentes: bioacumulacin y biomagnificacin. Rutas para la biotransformaciones de XBs. Reacciones de fase I: oxidaciones, reducciones e hidrlisis. BIOTRANSFORMACIONES DE LOS COMPUESTOS XENOBIOTICOS Los organismos estn expuestos a un gran nmero de diferentes sustancias qumicas xenobiticas, que, una vez absorbidas por el organismo, se acumulan en l y pueden amenazar su equilibrio funcional. Si la concentracin de cualquier xenobitico en el organismo es excesiva, inevitablemente comportar un riesgo para las funciones de las biomolculas que acten en su entorno, pudiendo alterar el correcto funcionamiento de un rgano, tejido, sistema, etc. Al conjunto de reacciones metablicas por medio de los cuales los tejidos modifican la estructura qumica de un XB se le denomina biotransformacin. Podemos decir que la biotransformacin de un XB consiste fundamentalmente en incrementar su polaridad, en convertir un compuesto no polar en uno soluble en agua. Este es el mecanismo ms comn que usan los organismos para eliminar los txicos ambientales. Al igual que la absorcin y la distribucin, dos procesos de transferencia, la Biotransformacin tambin se lleva a cabo utilizando los mecanismos existentes en los tejidos. Se usa la misma maquinaria bioqumica con la que se metabolizan los compuestos endgenos de estructura qumica similar. Un XB en el interior del organismo puede seguir muchas opciones, pero simplificando: a) puede ser excretado sin que haya sufrido modificacin alguna, con su estructura original. b) puede sufrir reacciones de transformacin metablica, biotransformaciones. Estas se producen para compuestos biodegradables. El sistema metablico de los organismos es el responsable de las biotransformaciones

METABOLISMO Y BIOTRANSFORMACION
El metabolismo de un organismo es el conjunto de reacciones enzimticas organizadas en rutas bioqumicas que sirven para mantener

la funcionalidad de las clulas con las caractersticas estructurales y funcionales propias. Cuando las reacciones enzimticas operan sobre componentes endgenos nos estamosrefiriendo al metabolismo propiamente dicho y cuando las reacciones enzimticas operan sobre los xenobiticos nos referimos a las reacciones de biotransformacin. Ambos trminos metabolismo y biotransformacin se usan a veces como sinnimos, particularmente cuando se refiere al campo de los xenobiticos o de "drugs" en general.

Por ejemplo, las enzimas biotransformadoras de xenobiticos son frecuentemente llamadas enzimas metabolizantes de drogas. Cualquier enzima puede operar sobre su sustrato natural o sobre un compuesto XB, sea frmaco, contaminante, etc.: enzima Sustrato ---------------------------> Producto o metabolito Cofactor

El trmino enzimas bitransformadoras de xenobiticos sera mas apropiado, aunque el trmino enmascarara el hecho de que varios compuestos endgenos, como los esteroides, puedan ser sustratos de estas mismas enzimas. Aplicar el trmino metabolismo a la biotransformacin de xenobiticos, as como el trmino de metabolito a los derivados metablicos de aquellos no parece muy adecuado, pero suele ser generalizado. Igualmente cuando se habla de individuos metabolizadores pobres, aquellos con alguna deficiencia enzimtica y que tienen menor capacidad de biotransformar los XBs., o el trmino metabolizadores extensivos para aquellos individuos con fenotipo normal. Podra resultar conveniente aplicar el trmino de sistemas biotransformadores, aunque no es usual.

Biotransformacin: Suma de reacciones bioqumicas que operan

sobre un XB a cargo de los sistemas enzimticos de un organismo. Ser pues el proceso de transformaciones metablicas que sufre un XB a lo largo de su paso por un organismo, y ha sido el proceso mas estudiado para muchos xenobiticos en muchos tipos diferentes de organismos (fundamentalmente morganismos). Biodegradacin: El resultado de todas las biotransformaciones de un XB en un entorno concreto, a cargo de los diferentes organismos que operen en l. La capacidad biotransformadora de los organismos es muy diferente y est relacionada, adems, con su grado de exposicin a XBs. Por ejemplo, los insectos, que se alimentan de una amplia variedad de plantas, tienen una mayor capacidad para biotransformar XBs que aquellos insectos que se alimentan de un nmero limitado de plantas. Comparados con los mamferos, los peces tienen una ostensible menor capacidad de biotransformar XBs, porque ellos pueden eliminar ms fcilmente los XBs no transformados a travs de las branquias. Por otra parte, las diferencias especficas en la capacidad de biotransformar XBs entre los mamferos no refleja simplemente unas diferencias en su exposicin a contaminantes, sino otros muchos factores. Algunos compuestos estimulan la sntesis de enzimas implicadas en la biotransformacin de XBs. Este proceso conocido como induccin enzimticaes una respuesta reversible y adaptativa a la exposicin a XBs. La induccin enzimtica hace posible que algunos XBs aceleren su propia biotransformacin y la biotransformacin de otros compuestos. Se estudiar este proceso en relacin con el Cit. P-450.

BIOACUMULACIN. COMPUESTOS BIODEGRADABLES Y PERSISTENTES.

Los xenobiticos despus de ser absorbidos, dependiendo de sus propiedades fsico-qumicas, se acumulan en los organismos, especialmente los compuestos con caractersticas lipoflicas o que son

fuertemente liposolubles. Otros compuestos se acumulan porque emulan comportamientos de anlogos biolgicos o porque interaccionan con algunas biomolculas. Por ejemplo el Pb es transportado en sangre dentro de los eritrocitos, como el Fe2+ y se acumula en los huesos al igual que el Ca2+ .El Cd2+ interacciona con las enzimas que dependen de Zn2+ (carboxipeptidasas). El comportamiento bioacumulador se basa tambin en las funciones de los rganos excretores (rin, pulmn, etc.), que generalmente se deshacen de las sustancias en contacto con lquidos o con gases, donde estn en contacto con los conductos de estos rganos. El rin excreta sustancias (hidrosolubles) a travs del filtrado glomerular de la sangre, envindolas por los tbulos renales a la vejiga. Desde los tbulos renales muchas sustancias son reabsorbidas hasta la circulacin, bien de forma activa (agua, sales, glucosa) o bien de forma pasiva (sustancias lipoflicas). La reabsorcin pasiva de las sustancias lipoflicasse produce porque dichas sustancias tienden a disolverse en los lpidos de las membranas de las clulas epiteliales. Puesto que en ellas pueden despus unirse a protenas o lipoprotenas de la sangre, as se genera un transporte neto desde el filtrado glomerular hacia la sangre. Este fenmeno explica que su concentracin en el organismo pueda ir en aumento y se produzca su bioacumulacin primordialmente en los tejidos con alto contenido lipdico (adiposo, hgado, mamas, etc). Este fenmeno se produce generalmente para los compuestos que en su paso por el organismo no son degradados, sino que son persistentes, porque no son abordables por los sistemas de biotransformacin. En general son muy persistentes los hidrocarburos, mas si son policclicos y si estn halogenados y son menos persistentes los carbamatos y los organofosforados Estos compuestos XBs persistentes en el medio, se van acumulando desde entornos acuosos hasta los tejidos de las diferentes especies, conduciendo a un fenmeno de bioconcentracin (BCF) de los XBs. Fbc (Compuestos) Factor de bioconcentracion: medida de la capacidad de un compuesto para acumularse en un tejido despus de su absorcin desde el medio circundante; el BCF da la relacin calculada o experimentalmente determinada, entre la concentracin del compuesto en el organismo y la del medio circundante. BCF: factor de bioconcentracin = razn entre las [ ] de XB en los dos medios comparados

Las especies correspondientes a los eslabones mas altos de las cadenas trficas suelen soportar los niveles mas altos de los XBs acumulados. BAF: factor de bioacumulacin = razn entre las concentraciones del organismo/agua o medio, aunque el proceso haya sido pasando por otros organismos.

Biomagnificacin
Se denomina biomagnificacin al proceso de bioconcentracin que se produce en los organismos de una cadena trfica a travs de los alimentos ingeridos en la cadena alimentaria. Ver pirmides invertidas de biomasa y de contenido en XBs o el Proceso de bioacumulacin para TCDDs.

Biomagnificacin de TCDDs(persistentes)
Suelo superficial150 pg/g

Hierba270 pg/g Hierba (Seveso)100 pg/mg = ng/g Hgadoconejos433-633ng/g Granja Sevesopollos35-24 ng/g

BIOTRANSFORMACIONES Y ACCION TOXICA: Deactivacin o detoxicacin y bioactivacin o activacin. Los organismos contienen un nmero de sistemas enzimticos capaces de biotransformar compuestos XBs, al igual que metabolizan los compuestos endgenos para convertirlos en desechables, para transformarlos en otros ms hidrosolubles, que sean mas fcilmente excretables. Las biotransformaciones pueden inducir considerables cambios en la actividad biolgica de los XBs. Si esta actividad decrece, el proceso se denomina de bioinactivacin (detoxicacin) y si aumenta se denomina bioactivacin (activacin). As pues, los efectos txicos de los compuestos exgenos, frecuentemente no provienen de los compuestos patrn sino de los metabolitos reactivos formados a partir de ellos dentro de las clulas. Estas biotransformaciones de compuestos relativamente inertes a metabolitos muy reactivos con una toxicidad intrnseca mayor que la de los compuestos originales se denomina activacion metabolica , bioactivacion o toxificacin Esquema de biotransformaciones: activacines y desactivaciones

excreccin METABOLITOS

NO TXICOS

Detoxicacin:La actividad biolgica (incluida la txica) de las sustancias frecuentemente desciende con las biotransformaciones, pero no siempre La biotransformacin que produce cambios de aumento de hidrosolubilidad de una molcula y mejora su excreccin, generalmente conlleva una disminucin del efecto txico de la sustancia original y se puede definir como bioinactivacin o detoxicacin. Habr menos acumulacin de la sustancia en el organismo, su nivel descender y puesto que hay una relacin general (dosis-respuesta) entre la concentracin de sustancia y la intensidad de su efecto txico, este tipo de biotransformaciones significan un descenso de la intensidad de la accin biolgica. La Detoxicacin, sigue diversos caminos en dependencia de la naturaleza qumica del XB. - Detoxicacin con grupos no funcionalesbenceno, toluenorequiere 2 fases - Detoxicacin de nuclefilos-OH, -SH, -NH2conjugacin: S, Glu, Ac. - Detoxicacin de electrfilosiones-GSH, epoxi hidrolasa, H-quinona y DTdiaforasa - Detoxicacin de radicales libresHO.glutation - Detoxicacin de toxinas proteicasson eliminadas por proteasas o por tioredoxina en los S-SEjemplos: La hidroxilacin en el anillo de aminas aromticas 1s conduce a su destoxicacin, mientras que la hidroxilacin en el N de la aminas primarias conlleva activacin. Los estudios pioneros de James y Miller (aos 40-50) con el colorante N-(CH3)2-4-amino-azo-benceno (DAB), un hepatocarcingeno en ratas, demostraron la conversin in vivo del compuesto qumico a productos derivados que eran los que se unan a Ac. nucleicos y protenas, los corcingenos. El b-naftil-amino tiende primero a ser metabolizado antes que a causar cncer de vejiga y el 2-Acetilaminofluoreno (2-AAF) slo es carcingeno

despus de su biotransformacin a N-OH-AAF. Estos hechos establecen la importancia de la activacin metablica en la carcinognesis inducida qumicamente. Los aromticos policclicos son cancergenos por la formacin de derivados oxidados. BIOACTIVACIN:La reactividad aumentada en un XB puede ser debido a: Formacin de electrfilos,de radicales libres, de nuclefilos o de reactivos red-ox Esto no es extrao, puesto que hay que comprender que, la introduccin de grupos polares en una molcula no solo aumenta su capacidad para su eliminacin o para someterse a posteriores reacciones de destoxicacin, sino que aumenta su reactividad hacia otras muchas molculas, incluidas las biolgicas. Si un XB puede reaccionar con un componente de un sistema biolgico (proteina, DNA, etc, o cualquier metabolito del metabolismo celular) hay una posibilidad razonable de que la clula se vea afectada por l. Si esta influencia es adversa, significa que el XBmostrar un efecto txico. REACCIONES DE BIOACTIVACIN mas frecuentes OxidacinCit P450, FMO, Alcohol y aldehido deshidrogenasa, PGS ConjugacinGlutatio transf., Sulfotrans., glucuronidacin Des-conjugacinB-liasa de CYS-S- conjugados

Microflora intestinalHidrolasas y reductasas.

AMINAS PRIMARIASNhidroxilacin HIDROCARBUROS POLICCLICOSDerivados epoxi

Derivados azo-benceno PCDD y PCBs coplanarTodos forman metabolitos reactivos cancergenos,sustancias electrfilas que unen al DNA.

Otras reacciones de biotransformacin que son reacciones de bioactivacin, son las de oxidacin de los organofosforados, i.e., la transformacin del insecticida parathion en paraoxon (cambia un >P=S por un >P=O). El parathion es un organotiofosfato, cuya neurotoxicidad radica en la inhibicin de la aceilcolinesterasa (AChE). La afinidad de la enzima por el paraoxon (metabolito) es muy superior que la que mantiene por el precursor. La reaccin de oxidacin que transforma al txico en un compuesto mas hidrosoluble y mas fcilmente excretable, le convierte tambin en un compuesto ms txico, producindose as una bioactivacin. El paraoxon, no obstante, puede ser hidrolizado y como consecuencia pierde su efecto txico sobre la AChE. Los nitritos forman meta-hemoglobina. Los nitritos y las aminas forman carcingenos en el organismo. Conversin de nitrato, va nitrito en nitrosamina cancergena. La formacin de nitrosamina puede tener lugar en el estmago (pH) despus del consumo de alimentos ricos en nitratos (espinacas), junto con un componente de la dieta que contenga aminas, que pueden nitrosilarse. Las nitrosaminas son carcinognicas porque sus metabolitos son muy reactivos, por ejemplo la hidroxilacin de las N-nitrosaminas procura procesos de metilacin sobre las bases nitrogenadas en el DNA.

El arseniato es menos txico que el arsenito. Las reacciones de oxidacin se consideran de detoxicacin; pero en los tbulos renales lo que predomina es la reduccin, activacin local. El arseniato puede competir con el fosfato en la formacin del ATP y en la absorcin tubular del rin. Estos compuestos de As pueden reaccionar tambin con los grupos SH de las protenas y los cofactores. Algunas biotransformaciones de XBs pueden afectar a su capacidad de absorcin por otros organismos; por ejemplo el Hg cuando es metilado por bacterias se hace ms liposoluble; la afinidad del CH3-Hg por los grupos sulfidrilo (-SH) de las protenas le convierte en bioactivo para otros organismos.

PRINCIPALES RUTAS PARA LA BIOTRANSFORMACIN DE XENOBITICOS

Las reacciones de biotransformacion son conversiones enzimticas de sustancias xenobiticas lipoflicas, generalmente a productos

hidroflicos, mas eliminables o excretables, las reacciones son a veces son coincidentes con las que sufren los productos metablicos endgenos (Vit. D, prostaglandinas, ). El conjunto de reacciones biotransformadoras de XB suele agruparse en dos fases: I y II.

+Un primer conjunto de reacciones, en las que la biotransformacin es la conversin de compuestos lipoflicos (no polares) en compuestos mas polares y por lo tanto algo ms solubles en agua, mediante las reacciones llamadas de fase I,(oxidaciones, reducciones e hidrlisis), que tienen lugar frecuentemente bajo la catlisis de enzimas componentes de los sistemas llamados oxidasas de funcin mixta (OFM). Estas reacciones producen compuestos que pueden ser ms, igual o menos txicos que sus predecesores. Aunque si es frecuente que sean ms reactivos, lo que suele conllevar una mayor capacidad txica. Aunque la degradacin completa de un XB requiere de muchas reacciones, el ataque incial suele

ser mediante las reacciones de fase I: oxidaciones o reducciones. Las oxidaciones incluyen todas las monooxigenasas dependientes del Cit P450,las monooxigenasas que contienen nucletidos de flavina y otras (ver tabla adjunta).

Son muchas las reacciones de oxidacin que conllevan la bioactivacin de sus sustratos a travs de la formacin de puentes epoxi. Este es el caso del benceno, u otros H. aromticos, cuya oxidacin a fenol pasa por la formacin de un intermediario muy reactivo, un epoxi. Este epoxi no es estable y la mayor parte de l se convierte rpidamente en fenol. A causa de su carcter electroflico, los epoxi pueden tambin reaccionar con grupos nucleoflicos en biomolculas como las protenas o el DNA, que pueden inducir dao en dichas molculas. Algunas de estas reacciones en el DNA pueden producir alteraciones que eventualmente deriven en cncer. Muchas de las conocidas bioactivaciones carcinogenticas pasan por la produccin de un intermediario reactivo electroflico. (EJEMPLOS COMENTADOS ANTERIORMENTE). Las reacciones de fase II son reacciones de conjugacin (glucuronidacin, sulfonacin y formacin de Ac. mercaptrico), donde los XBs polares en origen y los XBs que se han convertido en polares por haber soportado reacciones tipo fase I,son conjugados (ac. glucurnico, sulfato, glutation) con sustancias endgenas hidroflicas. Estas reacciones enzimticas estn encaminadas a aumentar an ms la hidrosolubilidad de sus sustratos y por lo tanto hacerlos ms fcilmente excretables por el organismo. Adems la mayor parte de los derivados conjugados tienen muy baja actividad biolgica, por lo tanto muchas reacciones de la fase II son reacciones de bioinactivacin en procesos de detoxicacin. Aunque no siempre.