Informe Final de L Puc - Diciembre

PRODUCCIN DE PROTENA UNICELULAR POR MICROORGANISMOS A PARTIR DE SUSTRATOS ORGNICOS
TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA
SENA CBI (CENTRO DE BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL) MATERIALES Y HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL PALMIRA VALLE 2011
PRODUCCIN DE PROTENA UNICELULAR POR MICROORGANISMOS A PARTIR DE SUSTRATOS ORGNICOS
TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA
INFORME TCNICO FINAL
FLOR MARA MIDEROS, INSTRUCTORA DE COMUNICACIONES, PEDRO DE JESS MIRANDA VILLAMIZAR, GESTOR DE PROYECTO, ERNESTO JOSE MENDOZA PEREZ, INGENIERO QUMICO, OSCAR ALEXANDER BERNAL, INGENIERO QUMICO, YURIA DISNEY MARTINEZ BECERRA, INGENIERA DE PRODUCCIN BIOTECNOLGICA Y DINA MARCELA OSPINA PARRA, INGENIERA EN PRODUCCIN BIOTECNOLGICA
SENA CBI (CENTRO DE BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL) MATERIALES Y HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL PALMIRA VALLE 2011
INTRODUCCIN En el proceso de formacin se logr dominar las herramientas necesarias que permitieron avanzar en el desarrollo de actividades sobre valorar y controlar el sistema de produccin de Protena Unicelular (PUC) desde la inoculacin hasta la obtencin del producto de dicha fermentacin.
Con estas actividades, se adquirieron habilidades y destrezas en el uso de tcnicas de anlisis fisicoqumico y microbiolgico para el control de los procesos biotecnolgicos y obtener productos de alta calidad para alimentacin animal.
Comprende los mtodos de muestreo, normas de bioseguridad e higiene industrial y dominio de las normas tcnicas colombianas en el anlisis de productos industriales e implica la adquisicin de cualidades fsicas y motoras, y la adopcin de procedimientos para el trabajo seguro, segn el Sistema General de Riesgos Profesionales en las industrias nacionales e internacionales.
El desarrollo de las actividades en el primer proyecto de formacin para la Produccin biotecnolgica de Protena Unicelular (PUC) gener el desarrollo de un segundo proyecto denominado, Sistema de Tratamiento Biolgico de los vertimientos producidos en las fermentaciones industriales, al asumir la disposicin de los residuos slidos y lquidos de planta y laboratorio, para darles un tratamiento o aprovechamiento final. En este nuevo proyecto se desarrollan competencias especficas que obedecen al rea tcnica y a las competencias de poltica institucional, tales como, diseo y ejecucin de planta piloto para disposicin de residuo slido en el proceso de compostaje (Bioinsumos), y planta piloto para tratamiento primario de aguas residuales (PTAR Lodos Activos) Se requiri integrar saberes relacionados con una biotica de mnimos universales, en consideracin con el ambiente y el entorno, convocando adems aprendices de diferentes especialidades para la ejecucin de estos proyectos de forma interdisciplinar. Adoptar un lenguaje acorde con el conocimiento tcnico claro y profundo, permiti la transferencia tecnolgica entre los aprendices del TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA, y los dems aprendices del CENTRO DE BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL. Ambos proyectos se divulgaron con el nimo de orientar, dirigir y estimular ideas de negocio , en la obtencin de protena unicelular a partir de sustratos orgnicos como suplemento alimenticio para animales, aumentando la masa muscular en caso de bovinos, equinos, ovinos y dems, estableciendo la produccin de Bioinsumos como abono orgnico o enmienda agraria que permita el mejor rendimiento del suelo u obtener certificacin en el tratamiento de aguas residuales segn normatividad ambiental para mitigar mayores afectaciones e impactos.
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La presencia de subproductos orgnicos tanto agrcolas como industriales, la produccin excesiva de biomasa celular y la falta de desarrollo a nivel nacional de productos o suplementos nutricionales sin afectar la seguridad alimentaria, generando alternativas de desarrollo econmico sustentable y ambiental sostenible la produccin biotecnolgica de protena unicelular a partir de cultivos microbianos.
2. JUSTIFICACIN
La produccin biotecnolgica de protena unicelular (PUC) empleando cultivos microbianos de bacterias, levaduras, algas y hongos filamentosos; son empleados para la alimentacin animal y humana, principalmente por su alto contenido proteico. Los microorganismos crecen rpidamente, lo cual es una de las razones ms importantes para su inters en la produccin industrial. En cuanto al sustrato, la atencin se volc hacia la utilizacin de recursos renovables como residuos agrcolas y subproductos industriales. En algunos casos los sustratos requirieron un pre tratamiento fsico-qumico previo a la fermentacin como la hidrlisis cida, en el caso del micelio fngico, bagazo y bagacillo, sin desestimular el inters hacia la produccin de suplementos proteicos en la alimentacin animal al proveer un nutriente generador de energa y masa muscular, por ejemplo en bovinos, equinos, caprinos y ovinos; mejorando las condiciones del sector pecuario disminuyendo los costos de compuestos qumicos aplicados a los semovientes y, como alternativa a nivel industrial, en lo referente a los que tienen alta produccin de biomasa celular, alternativa econmica de generacin de empleo y sostenibilidad social, ambiental y productiva.
3. OBJETIVO GENERAL
Producir mediante procesos biotecnolgicos Protena Unicelular por sistemas de cultivos microbianos a partir de subproductos orgnicos agrcolas e industriales, asumiendo los resultantes o co-productos de la fermentacin en planta piloto, tanto el lquido como el slido.
4. OBJETIVOS ESPECFICOS Manejar las tcnicas analticas para controlar el proceso de produccin. Validar los ensayos y tcnicas analticas qumicas y fsicas del Control de Procesos Biotecnolgicos aplicados. Realizar la evaluacin de la fermentacin estipulada en la investigacin aplicada. Analizar fisicoqumicamente el medio de cultivo que se va utilizar en la fermentacin. Determinar las condiciones operativas del proceso de fermentacin en los Biorreactores. Realizar la fermentacin teniendo en cuenta los parmetros establecidos del proceso. Realizar una curva de fermentacin en las condiciones planteadas por la Empresa y establecer el tiempo de fermentacin. Operar los Biorreactores para la produccin biotecnolgica segn plan de trabajo. Caracterizar el producto y subproductos del proceso para su correcta disposicin final. Caracterizar las materias primas a utilizar en la Produccin biotecnolgica de protena unicelular. Realizar la evaluacin de las materias primas a utilizar a escala de laboratorio en la Produccin biotecnolgica de protena unicelular. Seleccionar las materias primas, materiales, equipos de laboratorio a utilizar en la produccin biotecnolgica de protena unicelular. Analizar fisicoqumicamente el medio de cultivo que se va utilizar en la fermentacin en la produccin biotecnolgica de protena unicelular. Determinar las condiciones operativas del proceso de fermentacin en Planta Piloto del sustrato y microorganismo seleccionado. Realizar la fermentacin teniendo en cuenta los parmetros establecidos del proceso en la produccin biotecnolgica de protena unicelular. Realizar la cintica de fermentacin en las condiciones planteadas por la Empresa. Operar los Biorreactores para la produccin biotecnolgica segn plan de trabajo. Caracterizar por anlisis bromatolgico el producto y subproductos del proceso para su manejo, tratamiento y disposicin final en la produccin biotecnolgica de protena unicelular. Cualificar los ensayos qumicos analticos en alimentos la concentracin de Nitrgeno y Protenas. Valorar el producto esperado
5. MARCO TERICO
La primera conferencia sobre protena unicelular se llevo a cabo en 1967 en el instituto tecnolgico de Massachusetts. Actualmente Rusia es una de las productoras ms importantes de protena unicelular y esto se debe a la escasez de carne y algunas otras fuentes de protenas. El constante crecimiento de la poblacin, en especialmente las naciones en vas de desarrollo es increble se espera que para a primera dcada del siglo XXI la poblacin mundial llegue de 5 a 6 millones de personas. La ganadera y agricultura convencional es muy probable que no sean capaces de cumplir con la demanda proteica de esta poblacin, se cree que el planeta necesitara producir una cantidad enorme de productos agrcolas. Este problema no involucra solo a seres humanos, sino en especial a sus animales. El alimento de los animales puede presentar una escasez en el futuro debido a que se necesitar ms ganado para cumplir con la exigente demanda. La adecuada alimentacin de los animales es de muy elevado costo, algo que es muy determinante en la produccin de estos. La solucin al problema de la alimentacin humana en primer lugar implica la solucin de las fuentes de protenas en la alimentacin animal. Nos encontramos ante una demanda en constante incremento de fuentes de protenas de un alto valor nutritivo, la cual empieza a ser escasa. En la Produccin Biotecnolgica usamos como microorganismos las levaduras Saccharomyces cerevisiae y Candida utilis para probar su rendimiento y comportamiento ante las variables del proceso. Los sustratos para produccin biotecnolgica vara dependiendo de los ensayos, en el tecnlogo usamos cuatro diferentes sustratos: Grupo 01 Obtencin de Protena Unicelular a partir de bagazo y bagacillo. Grupo 02 Obtencin de Protena Unicelular a partir de porcinaza. Grupo 03 Obtencin de Protena Unicelular a partir de micelio fngico. Grupo 04 Obtencin de Protena Unicelular a partir de residuos de la Maltera. Lo primero es conocer la caracterizacin de las materias primas como sustratos. La atencin se vuelca hacia la utilizacin de recursos renovables como residuos agrcolas y subproductos industriales. En muchos casos las materias primas deben ser sometidas a un pre tratamiento fsico, Qumico y enzimtico para mejorar su rendimiento. Dentro del proceso de formacin la materias primas utilizadas fueron estudiadas y analizadas para tener conocimiento de su composicin y las variables de estos que pueden aportar a nuestro proceso, contando con que estos son totalmente orgnicos. A continuacin se muestran las materias primas y su composicin por literatura.
CARACTERIZACION DE MATERIAS PRIMAS MELAZA DE CAA
Figura 3. Miel B. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira
COMPOSICIN
Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira, durante la primera jornada de saneamiento ambiental realizada al centro.
BAGACILLO
Figura 5 Bagacillo de caa. Tomada en el laboratorio de biotecnologa industrial
Imagen 2.Representacion grafica de la composicin del bagacillo de caa de azcar.
Imagen 3. Carbohidratos contenidos en el bagacillo de caa.
CEPA O BIOCATALIZADOR UTILIZADO EN EL PROYECTO Saccharomyces cerevisiae
Hongo de tipo levadura utilizado industrialmente en la fabricacin de pan, cerveza, vino y etanol donada por la Universidad Francisco de Paula Santander subcultivado por repiques en agar PDA, incubado a temperatura optima y refrigerado a +/-4C . Esta levadura es un microorganismo Anaerobio Facultativo ya que es esencialmente Aerobio pero puede prosperar en un ambiente Anaerbico. . Aerbico: Requiere de oxgeno. . Anaerbico: No requiere de oxgeno. Metabolismo Aerbico o Respiratorio: Cuando el oxgeno es suficiente y el sustrato se mantiene bajo, los azcares son usados para producir energa y nuevas clulas, generndose muy poco alcohol y ms biomasa.
Figura 8. Saccharomyces cerevisiae. Medio de cultivo de micelio y vinaza. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial.
METODOLOGIA ANALISIS Y PLANEACION FASE DE PROYECTO 1
Figura 2. Caracterizacin de melaza. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira
FASE DE PROYECTO 2 PRODUCCION IN VITRO PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira, en la preparacin de medios de cultivo para propagacin y produccin de biomasa. Los medios de cultivo deben tener componentes necesarios para el optimo crecimiento de las levaduras. Macro nutrientes Micronutrientes Elementos traza Clasificacin segn la composicin Sencillos: Monosacridos, Disacridos, Aminocidos, Pptidos, cidos grasos Complejos: Polmeros, Almidn, Quitina, Celulosa, Protenas o complejos proteicos, Subproductos agroindustriales. PRODUCCION IN VITRO Medio de cultivo Composicin Melaza Bagacillo Nitrgeno Fosforo % 25 p/v 10 v/v 2 p/v Cantidad necesaria para amortiguar el pH Caractersticas pH G.E Brix Picnmetro ATRS 4,50 1,050 gr/ml 20 gr/ml 1.010 gr/ ml 3-5%
PRETRATAMIENTOS El bagacillo como se sabe es un polisacrido, por eso es necesario hidrolizarlo para liberar los monosacridos o azucares sencillos contenidos en l, al micelio fngico se le realizan una hidrlisis bsica con hidrxido de sodio (soda caustica) al 40% esto con el fin de extraer la quitina contenida en el, por cada 6,25 gr de micelio se aaden 100 ml de de NaOH al 40% y se autoclavan 2 veces.
La hidrolisis es el desdoblamiento de las molculas de ciertos compuestos orgnicos por la accin del agua, en este caso por la reaccin de cidos y bases en concentraciones bajas. En el pretratamiento el bagacillo de caa es sometido a un proceso de hidrolisis acida y bsica evaluando el rendimiento para cada uno. La concentracin del cido sulfrico, la relacin liquido/slido, el tiempo de reaccin usadas y la temperatura a la que fue sometido; fueron 10 gr de bagacillo aforado a 100 ml con cido sulfrico al 40% v/v, 4 horas, 65 - 70C para cada litro de medio de cultivo. La concentracin de hidrxido de sodio, la relacin liquido/solido, el tiempo de reaccin usadas y la temperatura a la que fue sometida; fueron 10 gr de bagacillo aforado a 100 ml con hidrxido de sodio al 17.5 % v/v, 4 horas, 60 - 65C para cada litro de medio de cultivo. Los hidrolizados se dejan enfriar a temperatura ambiente y se vierten al medio de cultivo.
PRETRATAMIENTOS
CRECIMIENTO, PROPAGACION Y MADURACION PREPARACION DE LA LEVADURA, CRECIMIENTO EN 100 ml Para la preparacin de la levadura se realizaron varios ensayos que se encuentran plasmados en la siguiente tabla. Nota: Los tiempos de activacin se tomaron sin contar con el tiempo que tarda la levadura en crecer en medio semislido (agar).
Imagen 15. Propagacin inoculo 100 ml. Tomada en el Laboratorio de Biotecnologa Industrial
METODO
CONDICIONES
MONITOREO
RESULTADOS
OBSERAVACIONES *Fermentacin por ausencia de oxigeno. *Produccin excesiva de CO2. *48 hrs de activacin. * 10ml de cepa activada en 90 ml de medio de cultivo. (1 tubo).
Pre adaptacin 1: Asada en 10ml de caldo papa (24hr), 1ml de caldo papa activado en 9 ml de medio de cultivo (24hr).
*28 a 30 C en incubadora. *Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina
*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de 1,8x107 - 1,0x108 neubauer inicial y final.
Pre adaptacin 2: Asada de cepa en 10ml de medio de cultivo. (24hr).
*28 a 30 C en incubadora. *Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina.
*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de neubauer inicial y 1,5x106 2,3x106 final.
*Frecuentes contaminaciones por Bacillos. *Baja poblacin. *24 hrs de activacin. * 10ml de cepa activada en 90 ml de medio de cultivo. (1tubo).
Re suspensin celular: Se agregan 3 ml de de agua destilada estril a 1 tubo con siembra inclinada.( 10 minutos).
*45C en bao mara, 5 minutos. *Agua destilada autoclavada. *Trabajo en cabina.
*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de neubauer inicial y 3,9x107 1,0x108 final.
*Mejor y ms poblacin celular. * 10 minutos de activacin. * Se cambio el volumen del solvente a 5ml de agua estril por tubo. *15 ml de cepa activada en 85ml de medio de cultivo.
La levadura se siembra en agar PDA inclinado utilizando tubos de ensayo y tapones de gasa estril, se incuban a 28C, 3 das y se refrigeran a 4C en la nevera. Se realiza re suspensin celular a 3 tubos con siembra, agregando 5 ml de agua destilada estril a cada tubo para un total de 15 ml, que luego son activados en bao mara a 35-37C. Se inoculan los 15 ml de cepa re suspendida en 85 ml de medio de cultivo auto clavado a 121C, 15 minutos, 15 libras de presin, enfriado a temperatura ambiente. Al inoculo se le toma muestra inicial con una pipeta estril de 1 ml y se almacena en viales de vidrio mbar de 10 ml estril, para realizar recuento en cmara de neubauer. Se deja en agitacin constante 12 hr en el shaker (50 rpm). Pasadas las 12 hr se toma muestra final con una pipeta de 1 ml en viales de vidrio mbar de 10 ml estril, evaluando con el recuento de cmara de neubauer el crecimiento celular. Nota: El anterior proceso se realiz en la cabina de flujo laminar previamente esterilizada para evitar contaminaciones en el inoculo por exposicin al ambiente. Los frascos utilizados para la preparacin del inoculo son de vidrio y de color mbar para evitar el contacto de las levaduras con la luz.
PROPAGACION EN 1000 ml Teniendo en cuenta los recuentos en cmara de neubauer realizados al inoculo de 100 ml este es agregado o inoculado en 900 ml de medio de cultivo fresco estril, para un total de 1000 ml contenidos en un Biorreactor con capacidad de 3500 ml, y adaptaciones para aireacin con filtro de aire, salida de CO2 y toma de muestras regulado por un venoclip. Se toma muestra inicial del medio inoculado con una pipeta de 1 ml estril y se contiene en un vial de vidrio mbar de 10 ml estril, para hacer recuento en cmara de neubauer.
Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira,
La propagacin es monitoreada as: Cada 2 horas 10 ml de muestra + Recuento en cmara de neubauer + Picnmetria + pH + T ambiente + T muestra + Brix Cada 6 horas 150 ml de muestra + Acidez voltil + % A.R
PROPAGACION EN 3000 ml Teniendo en cuenta los datos de los monitoreos y de la tincin de gram, se alimenta la propagacin con 2.150 ml de medio de cultivo fresco estril, se toma muestra inicial con una pipeta de 1 ml estril y se conserva en un vial de vidrio mbar de 10 ml para hacer el recuento en cmara de neubauer inicial. La propagacin es monitoreada as: Cada 2 horas 10 ml de muestra con dos mecheros al lado + Recuento en cmara de neubauer + Picnmetro + pH + T ambiente + T muestra + Brix Cada 6 horas 150 ml de muestra + Acidez voltil + % A.R
Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira, durante la primera jornada de saneamiento ambiental realizada al centro. EVALUACION FASE DE PROYECTO 3 TABLAS DE RESULTADO
RESULTADOS
Medio 1 (10Brizx)
7. RESULTADOS MEDIO # 01 ENSAYO pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C 2 4.5 24 ENSAYO pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C 3 4.5 24
1 2 3 4 5
1.2x10e8 hrs 01:45 am 9x10e7 hrs 06:45 am 2.7x10e8 hrs 10:45 am 2,3x10e8 hrs 14:45 2,7x10e8 hrs 18:45
1 2 3 4 5
1.3x10e8 hrs 02:15 am 2.9x10e8 hrs 07:00 am 3.1x10e8 hrs 11:00 am 1.5x10e8 hrs 15:00 2,8x10e8 hrs 19:00
C.C C.C C.C C.C
6 7 8 9
3,9x10e8 7,7x10e8 5,2x10e8 5,5x10e8
hrs 23:45 hrs 04:25 am 08:26 am 12:25 pm
C.C C.C C.C C.C
6 7 8 9
7.2x10e8 hrs 23:00 6x10e8 hrs 04:28 am 1,5x10e8 hrs 08:30am 1,6x108 hrs 12:30pm
45 40
35
30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 t (h) lnx
MEDIO # 03 ENSAYO 1 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C ENSAYO 2 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C 1 2 3 4 5 se monto hrs 21:46 4.45 33 ENSAYO 3 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C 1 2 3 4 5 se monto hrs 22:04 4.45 33
se monto hrs 21:40 4.45 33
1.1x10e8 hrs 1 21:40 2 2.210e8 hrs 01:40 3.7x10e8 hrs 3 05:40 4.3x10e8 hrs 4 09:40 5 2.9x10e8 hrs 13:40
3x10e8 hrs 09:46 3.3x10e8 hrs 01:46 3.7x10e8 hrs 05:46 4.0x10e8 hrs 09:46 1,9x10e8 hrs 13:46
1.8x10e8 hrs 22:04 1.5x10e8 hrs 02:04 2.8x10e8 hrs 06:04 3.1x10e8 hrs 22:04 2.3x10e8 hrs 02:04
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C.C C.C C.C C.C
6 7x10e8 hrs 17:40 7 8 9
C.C C.C C.C C.C
1,8x10e8 hrs 6 17:48 7 8 9
C.C C.C C.C C.C
6 7 8 9
1,3x10e8
45 40 35 30
25
20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 t (h) c.c (g/l)
8. OBSERVACIONES Al realizar los estudios hablados anteriormente nos hemos dado cuenta de que se puede producir un producto novedoso y necesario que pueda cubrir una gran demanda industrial y ganadera a partir de residuos industriales. Gracias a los residuos industriales, al buen uso de los microorganismos y sus caractersticas se puede crear una nueva fuente de protenas para consumo animal. Por medio de la reutilizacin de los desechos industriales ayudamos a preservar el medio ambiente y bajar el ndice de contaminacin. De acuerdo a los estudios realizados este proyecto es viable y rentable. La produccin biotecnolgica de protena unicelular para consumo animal presenta mayor factibilidad utilizando subproductos agroindustriales como medios alternativos, los cuales son: El Micelio fngico debido a su tiempo de duplicacin mxima 2,78 h y la velocidad mxima de de crecimiento 1,135 cell/h, permitiendo un rpido crecimiento de nuestro microorganismo Cndida Utilis utilizando como sustrato alternativo de este medio,
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comparando los medios alternativos. El Bagacillo presenta su tiempo de duplicacin mxima 3,38 h y la Porcinaza presenta un tiempo de duplicacin 5,71 h, siendo estos tiempos de duplicacin muy elevados para los ensayos productivos de biomasa celular, muchos mas lentos con la Saccharomyce cerevisiae. Las caractersticas como densidades de estos medios son factores que afectan stas.
9. DIVULGACIN
En el proceso de divulgacin los aprendices del TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLOGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA, participaron activamente en los eventos de promocin del programa, tales como, el da de la ciencia, convocatoria de divulgacin de proyectos y campaa masiva de materia orgnica (Se adjuntan los videos de sustentacin como anexo) Se recibieron tambin visitas de otros centros de formacin SENA de Cartagena, Martha, Pasto, Cali, Bogot, Direccin Nacional, colegios aledaos y dems Santa
En el desarrollo de esta parte de nuestro proyecto de formacin primero recibimos gran cantidad de material educativo, hago referencia a las charlas y/o clases dictadas por los diferentes instructores del rea de biotecnologa encabezadas por el Ingeniero Biotecnolgico Pedro de Jess Miranda Villamizar, posteriormente enfatizbamos sobre problemas existentes, se realizaban foros donde ponamos a prueba los conocimientos adquiridos y dando nuestros primeros pasos en este nuevo mundo para nosotros. Ya lo que respecta al rea tcnica todo fue cambiando, poco a poco, desde crear esa sensibilidad que algunos necesitaban para hacerles entender que nuestro proyecto de formacin era y es diferente a muchos de los cuales el SENA vena manejando, posteriormente se logr lo que se quera, esa consciencia que tanto requeramos fue llegando y con esta los resultados que todos anhelaban. Iniciamos empleando los conocimientos adquiridos, desde el reconocimiento de una levadura, hasta conocer las condiciones ptimas para su crecimiento, los niveles de estrs que esta podra tolerar, los agentes contaminantes que la llegasen a afectar en un proceso de produccin, las medidas que se deben tomar en caso de contaminacin, etc.. Inicialmente debimos realizar una caracterizacin de nuestra levadura, cual utilizaramos, que parmetros tendramos en cuenta y como sera su ptimo crecimiento. Realizamos listas de chequeo, procedimientos patrones de operacin, todo con el fin de garantizar el correcto uso tanto de materiales y reactivos de nuestro laboratorio como tambin un casi perfecto desarrollo de nuestro proceso, en la medida de lo posible claro est.
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En lo que respecta a la cepa, utilizamos la levadura Saccharomyces cerevisiae, hicimos aislamiento de la cepa, con el fin de purificarla y de esta manera garantizar unos niveles de asepsia bastante altos en nuestro proceso de fermentacin. Para lograr este proceso de purificacin, debimos aprender a distinguir cada uno de los materiales existentes en el laboratorio, desde cajas de petri, beaker, Erlenmeyer, tubos de ensayo hasta azas microbiolgicas, teniendo claro los conceptos adquiridos sobre aislamiento y purificacin de cepas dictados por los instructores en su debido momento sin olvidar los balances de materia que se deban emplear para la correcta formulacin del medio de cultivo, ya sea PDA, Plate count o el que se requiriera en su momento. Se debe previamente enjuagar con agua destilada todos los materiales a utilizar (en este caso de purificacin, cajas de petri, tubos de ensayo, pipetas, probetas y Erlenmeyer), se dejan secar y posteriormente se envuelven con papel kraft, luego de esto se llevan a un horno de esterilizacin donde estarn 3 horas a 120C. Previamente se ha realizado una esterilizacin en la zona estril que es donde se realizar la purificacin de la cepa, donde existen unas lmparas de rayos ultravioleta, donde esta luz promueve la desaparicin de las bacterias que puedan estar presentes en dicha zona, como siempre promoviendo la asepsia del lugar de trabajo. Una vez se lleva a cabo la purificacin de la cepa y se ha sembrado en la caja de petri por agotamiento, sta a su vez se lleva hacia un horno de incubacin donde la dejaremos de 24 a 48 horas dependiendo de su crecimiento (la caja de petri debe estar sellada con emboplast, esto nos asegura que su contenido este aislado del ambiente), todo esto se realiza con los mecheros correspondientes, alcohol al 70% y dems cuidados que se deben tener para un correcto desenvolvimiento. Despus de pasadas las 48 horas se extraen las cajas de petri de la incubadora y se pasa a realizar un conteo de colonias y posteriormente realizar una tincin de gram donde nos aseguraremos que nuestra cepa est libre de contaminantes. Una vez tenemos nuestra cepa podemos iniciar con nuestro proyecto como tal, donde utilizamos las diferentes materias primas que hemos escogido para de esta manera determinar con cul de estos subproductos iniciaremos la fermentacin. Previamente se ha realizado una caracterizacin de dicha materia prima, sta varia en los diferentes equipos de trabajos que existen en el laboratorio de biotecnologa industrial, entre las cuales encontramos, micelio fngico, bagacillo, bagazo, miel b, vinaza, porcinaza, etc. Se realizan diferentes anlisis fisicoqumicos como acidez, ATR, brix, hidrlisis acida o bsica, etc., con esto se busca mejorar la materia prima para que en nuestro proceso de fermentacin los resultados sean mucho mas ptimos. Posteriormente se preparan los medios de cultivo y/o trabajo implementando dichas materias primas a diferentes concentraciones, previamente se realizaron montajes a escala 3000ml para determinar cul sera el medio con mayor rendimiento es decir, el medio con mayor crecimiento celular. Para determinar ello, nos basamos en una serie de anlisis que se realizan en el laboratorio, ya que se debe controlar el proceso de fermentacin de principio a fin pues siempre
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buscamos que la asepsia durante nuestro proceso sea total, no se debe dejar nada a la deriva pues esto implicara una contaminacin que ms adelante desencadenara una prdida total o parcial en nuestro y proceso y esto conllevara a perdida de dinero por los reactivos utilizados en el acondicionamiento del medio como tambin del tiempo dispensado en dicha labor. Los anlisis que se realizan durante el proceso de fermentacin son, acidez voltil, ATR, AR, pH, brix, conteo celular, entre otros. Dichos parmetros se controlan cada 2 horas con el nimo de obtener los suficientes datos para al final tener un resultado ms aproximado a la realidad. Los controles de contaminacin que se hacen en el laboratorio de biotecnologa industrial son peridicos, donde se realizan pruebas al ambiente como pruebas en superficie para tener una idea de la contaminacin existente en dicho ambiente de aprendizaje y de esta manera determinar si se debe ya sea mejorar la limpieza del laboratorio o recurrir a otros mtodos de limpieza y desinfeccin de ambiente y superficie. Cabe denotar que durante nuestro proceso de fermentacin se generan tanto residuos lquidos y slidos que son perjudiciales para el medio ambiente y estaramos en vez de minimizar dicha problemtica, estaramos haciendo lo contrario que sera aumentar el impacto para las descargas que se realizan, para esto tenemos un plan de contingencia y este plan es: BIORREMEDIACIN (SISTEMA DE TRATAMIENTO BIOLGICO DE LOS VERTIMIENTOS EN LAS FERMENTACIONES INDUSTRIALES) Este es nuestro segundo proyecto de aprendizaje, donde buscamos dar una solucin viable a los residuos que por lo pronto generamos durante nuestro proceso de fermentacin, gran parte de los residuos lquidos han sido enviados a la PTAR de lodos activados y otra pequea para compostaje, y donde los residuos slidos si van directamente a compost, por medio de estos procesos se quiere regular, minimizar y/o mitigar el impacto ambiental que se pueda generar, de esta forma tambin podemos dar una solucin viable a los problemas que hoy por hoy estn dando las industrias, que por querer ser ms productivos se estn convirtiendo en un gran problema para el medio ambiente, es por esto que estamos nosotros, para mitigar dichos impactos, en el Centro De Biotecnologa Industrial, se realizaron dos jornadas de saneamiento bsico con el fin de determinar si el centro estaba cumpliendo o no con las exigencias de la norma que dictamina un lmite permisible de descargas hacia el alcantarillado, de no serlo estaramos expuestos a sanciones por parte de las entidades pertinentes, es por esto que tambin se mont una PTAR a escala piloto de lodos activados donde se quera encontrar un optimo desempeo de la misma, queriendo de esta manera llevarla a una escala mayor para de esta forma tratar las aguas del centro y por qu no, re circular esas aguas ya utilizadas para los oficios varios y de esta manera contribuir el ahorro de dineros que bien pudieren ser invertidos en otras obras que nos beneficien.
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En la PTAR el diseo estuvo a cargo del instructor Pedro Miranda y de algunos aprendices del rea, donde se busco la realizacin de la misma y dejarla a punto para que todo el grupo de alumnos pudieran tener una idea ms cercana a la realidad de lo que es una planta como estas y realizar obviamente los anlisis pertinentes en dicha labor, entre los cuales se encuentran, DBO5, slidos Sedimentables, slidos totales, dureza, acidez, alcalinidad, etc., una vez obtenido ese conocimiento se busc tener un plan de manejo ptimo en cuanto a la produccin de protena unicelular como la Biorremediacin de los residuos producidos. Por otra parte, en el rea de compostaje se llevo a cabo el tratamiento de residuos slidos producidos en el laboratorio de biotecnologa industrial como tambin los desechos producidos por la cafetera del centro como de las casas de algunos aprendices, se realizaron campaas de recoleccin de materia orgnica con el fin de obtener la suficiente cantidad para poder dar inicio a nuestro proceso de compostaje, se debieron tener en cuenta parmetros para dicho proceso, como la relacin carbono nitrgeno, la cepa a inocular y las variables de proceso previamente establecidas, control de pH, de temperatura y de humedad. Dichos parmetros fueron controlados constantemente con la finalidad de minimizar el impacto a la comunidad circundante como tambin evitar la aparicin de vectores que son indeseables en nuestro proceso. Previamente en laboratorio se realizaron pruebas de siembra del hongo trichoderma buscando la aceleracin en el proceso de compostaje y optimizar obviamente su rendimiento como tal.
Para finalizar podemos inferir que estos proyectos ya que son nuevos para nosotros tienen algo de dificultad, pero no son imposibles de realizar si se tienen en cuenta todas las normas de bioseguridad pertinentes y manejando un ambiente en la medida de lo posible estril o lo ms asptico posible para de esta manera no alterar los resultados de los anlisis que se realicen en un proceso determinado. ALCANCE Beneficiarios del proyecto Ingenieros, Supervisores de Plantas de Fermentacin, Sector agrcola, sector pecuario, sector industrial, aprendices y comunidad SENA. IMPACTO
SOCIAL: Mejorar la calidad de vida. ECONMICO: Optimizacin de las materias primas, equipos e insumos para la produccin.
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AMBIENTAL: Disminucin de las emisiones contaminantes, manejo sostenible de los subproductos, tratamientos biolgicos para el tratamiento de los residuos slidos y lquidos. TECNOLGICO: Transferencia tecnolgica de los procesos y Bioprocesos en la produccin biotecnolgica para las empresas.
10. BIBLIOGRAFA 11. ANEXOS
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MARCO TEORICA PARA OBTENCIN DE PROTENA UNICELULAR A PARTIR DE PORCINAZA Y MIEL Introduccin a la produccin biotecnolgica de protena unicelular 1) Caracterizacin de materias primas 2) Cepa o biocatalizador usado en el proyecto 2.1) caracterizacin de la levadura cndida utilis 3) Esquema de la produccin biotecnolgica de protena unicelular 4) Formulacin de mosto 5) Resultados de produccin de protena unicelular a partir de porcinaza y miel b
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INTRODUCCIN A LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR
Durante el programa de formacin tecnolgica en proceso biotecnolgicos aplicados a la industria Sena Palmira se desarrollo un proyecto de produccin biotecnolgica y fermentativa de los subproductos agrcolas e industriales de la regin Es as que el grupo dos de los tecnlogos en procesos biotecnolgicos aplicados a la industria utilizamos inicialmente como sustratos de produccin biotecnolgica la crema de levadura como materia prima para la PUC y como biocatalizador la levadura Candida utilis durante el proceso fermentativo Este subproductos es obtenido en la empresa productoras de cerveza del valle del cauca la cual contiene una alto contenido proteico y de especie microbianas pero al final de cabo no fue utilizada como materia prima porque dicha subproducto fue muy difcil su adquisicin para la produccin protena unicelular por lo cual se propuso finalmente utilizar como materia prima porcinaza y miel b para produccin de protena unicelular las cuales esta caracterizada de la siguiente forma para la produccin biotecnolgica
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2) CARACTERIZACIN DE MATERIAS PRIMAS Y BIOCATALIZADOR Porcinaza La porcinaza es subproducto de la empresa porcicola del corregimiento de barrancas Palmira valle de cauca la cual se utilizada como materia prima subproductos nos proporcionas la siguientes caracterstica fsica y qumica
MIEL B La melaza o "miel B" de caa se obtiene de la caa de azcar mediante su molienda utilizando unos rodillos o mazas que la comprimen fuertemente obteniendo un jugo que luego se cocina a fuego directo para evaporar el agua y lograr que se concentre. El producto final tiene una textura parecida a la miel de abeja y de sabor muy agradable. La melaza tambin se utiliza como endulzante de ts, infusiones o jugos Y nuestro cas la miel B se utilizando como fuente de carbono y de energa para la produccin de protena unicelular. Hay que tener en cuenta que, al igual que la miel, su sabor es intenso y hay que poner poquita para que no predomine ms su sabor que el del jugo o infusin. Informacin Nutricional de la miel B Tiene cantidades importantes de vitaminas y minerales.
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Es un alimento muy rico en las vitaminas del grupo B (a excepcin de B1) Al contener hierro, cobre y magnesio ha sido siempre muy recomendada para las personas anmicas, astnicas, tras el parto o cualquier convalecencia. Los cuales son descriptos en la siguiente grafica.
2) CEPA O BIOCATALIZADOR USADO EN EL PROYECTO Cndida utilis Hongo de tipo levadura que crece rpidamente y puede cultivarse sobre una gran diversidad de materiales o sustratos como licor de prensa, obtenido de la fabricacin de la pulpa de citrus desecada, melaza, vinaza, licor residual de sulfito de la industria papelera y residuos de fruto como granos de caf, manzanas etc. Contiene abundantes minerales, vitaminas B, y si se irradia aporta tambin vitamina D. Desde la Segunda Guerra Mundial esta levadura se ha utilizado como fuente y complemento de protenas en la alimentacin humana y animal (Boze y col., 1992). As, ha sido una de las especies ms utilizadas en la produccin de SCP (Single Ceil Protein), trmino acuado por C. L. Wilson en 1966 (en Lichfield, 1979). Candida utilis resulta ser un organismo productor de biomasa ms favorable que Saccharomyces Cerevisiae por las siguientes caractersticas: No necesita el suplemento de ningn aminocido en los medios de produccin, los requerimientos respecto las vitaminas del grupo B son escasos, es capaz de asimilar pentosas, como la xilosa, y puede crecer en medios con una fuente de carbono y amonio como fuente de nitrgeno, con pequeas cantidades de otros nutrientes y factores de crecimiento (Lichfield, 1979). Adems resulta ser ms afn por hexosas que Saccharomyces cerevisiae (Postma y col., 1989a).
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Fue donada por la Universidad Francisco de Paula Santander subcultivado por repiques en agar PDA, incubado a temperatura optima y refrigerado a 4C. Esta levadura es un microorganismo Anaerobio Facultativo ya que es esencialmente Aerobio pero puede prosperar en un ambiente Anaerbico. . Aerbico: Requiere de oxgeno. . Anaerbico: No requiere de oxgeno. Metabolismo Aerbico o Respiratorio: Cuando el oxgeno es suficiente y el sustrato se mantiene bajo, los azcares son usados para producir energa y nuevas clulas, generndose muy poco alcohol y ms biomasa.
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2.1) Caracterstica de la levadura Cndida utilis Composicin nutricional unidad Cantidad Material seca NDT Energa digestible Energa metabolizable Protena (TCO) Calcio (TCO) Grasa (TCO) Ceniza (TCO) Fibra (TCO) Fsforo total (TCO) Mcal/kg Mcal/kg % % % % % % % % 93,00 73,00 3,21 2,82 49,00 0,50 1,60 7,80 2,30 1,60
COMO % DE MATERIA SECA Levadura trula MS 93.0 PB 50,0 FB 0.5 Cen. 8.6 EE 6.5 ELN 34.4 Ca 0.40 P 1.30
Levadura trula Levadura trula
ANIMALES BOVINOS OVINOS
DIGESTIBILIDAD (%) PB FB EE 90.0 90.0 80.0 89.0 99.0 78.0
ELN 90.0 95.0
EM 3.49 4.03
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3) ESQUEMA DE PRODUCION BIOTECNOLOGICA DE PROTEINA UNICELULAR A PARTIR DE PORCINAZA Y MIEL
MEDIO 20 ml en resuspencion
Medios de propagacin a 100 ml, 500 ml, 3000 ml ( propagacin)
Medio en planta 14000 ml ( produccin)
4) FORMULACION DE MOSTO El medio de propagacin: 20 Grados Brix 30 % de miel B 0.05 p/v de (NH4)2SO4 2% de porcinaza hidrolizada al 40 % H2SO4 El medio de produccin contiene:
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10% de Porcinaza 2% de melaza El porcentaje restante viene dado por el agua.
Nota: el medio de cultivo se debe manejar una densidad de 1 gr/cm3 Se desarrollaron varios ensayos en pro de la obtencin de un medio de produccin con una densidad similar a la expresada anteriormente compuesto por melaza, Porcinaza y agua. Se obtuvieron los siguientes datos:
Porcinaza 22 gr
Miel B 2 gr Densidad = 1,05 gr/cm3
Agua 190 ml
El ensayo se efectu de la siguiente manera: Se agreg una cantidad de la mezcla de Porcinaza, miel B y agua a un beaker de 25 ml hasta reboce y se pes en la balanza no sin antes tener el peso del recipiente vaco. La frmula aplicada para la obtencin de la densidad del medio a partir de ste mtodo es: d= m/v d= (M2 (muestra)-(M (beaker vaco))/v (beaker) Para calcular el volumen del beaker: V= * r2 *h V= (3,1416) (1,5)2(5) V= 35,343 cm3 y, el radio es la mitad del dimetro, entonces: d= 58,98-29,81/35,343 d=1,05 gr/cm3 Teniendo la densidad deseada, se procede a la preparacin del medio de produccin de 14 litros con las siguientes concentraciones de sustrato: 12% de Porcinaza 2% de Melaza
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14 litros de agua Para saber la cantidad de cada sustrato que compone al medio de produccin, se efectuaron los siguientes clculos basados en los datos arrojados por el ensayo en el que se buscaba una densidad prxima a 1 cm3. 14000 ml (22 gr/190 ml) =1621,05 (12%) (2%)
14000 ml (2 gr/190 ml) = 147,3 gr de melaza
Se toma una muestra de 100 ml del medio de produccin antes de ser llevado al biorreactor # 1 de la planta piloto de fermentaciones industriales. A los 100 ml de muestra se le toman los anlisis mencionados a continuacin Grados Brix pH Densidad ATR Amino nitrgeno libre slo cuando el medio est en el biorreactor, antes no. Acidez voltil Conteo celular inicial y final RESULTADOS DE PRODUCION DE PROTEINA UNICELLULAR A PARTIR DE PORCINAZA Y MIEL B Produccin de protena unicelular del Septiembre 29 de 2011 Inoculacin Escalado de 1000 a 4000 ml Hora 1:00 pm Anlisis Iniciales: Densidad por picnometra : 1,2 gr/cm3 Grados Brix: 21 pH : 4,38 Conteo Inicial: 6,57*10E7 cel./ml Densidad por picnometra d = peso del picnmetro con muestra-peso del picnmetro vaco/volumen
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d = 29,71-17,54/10,189 d = 1,2 gr/cm3 Anlisis final de los 4000 ml de medio Hora: 9:00 pm pH : 4,38 Grados Brix: 18 Conteo final: 1,95*10E6 cel./ml Inoculacin del Biorreactor de 4000 ml al reactor #1 de la planta piloto de fermentaciones Hora 9:20 pm pH : 5,25 Grados Brix: 1 Densidad del medio: 1,2 gr/cm3 Conteo inicial : 8*10E6 cel./ml Anlisis (planta piloto de fermentaciones-reactor #1) Hora 8:30 am Densidad: 1016,00 g/l Grados Brix: 3 pH: 5,19 Conteo celular : 1,7*10E8 cel./ml Hora 10:30 am Densidad: 1,0 gr/cm3 Grados Brix:3 pH:5,11 conteo celular: 1,2*10E8 cel./ml Hora 12:30 pm Densidad: 1,017 gr/cm3 Grados Brix:3 pH: 5,15 Conteo celular: 2,8*10E8 cel./ml
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Hora 3:00 pm Grados Brix: 4 pH: 5 Conteo celular: 1,65*10E8
CRECIMIENTO EXPONENCIAL DE LA PRODUCION DE PROTEINA UNICELULAR A PARTIR DE SUSTRACTOS ORGANICOS POR MICROORGANISMO
CRECIMIENTO EXPONENCIAL 7,00E+08 6,00E+08 5,00E+08 4,00E+08 3,00E+08 2,00E+08 1,00E+08 0,00E+00 0 2,5 5 7,5 TIEMPO 10 12,5 15
Resultado de Produccin protena unicelular a partir de porcinaza y miel B a escala de100 ml
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Resultados de la produccin de protena unicelular a partir de porcinaza y miel B a 1000 ml
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MICELIO FUNGICO
Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira, micelio fngico hmedo resultante de la produccin de acido ctrico por la empresa Sucromiles. S.A
CEPA O BIOCATALIZADOR UTILIZADO EN EL PROYECTO Cndida utilis Hongo de tipo levadura que crece rpidamente y puede cultivarse sobre una gran diversidad de materiales o sustratos como licor de prensa, obtenido de la fabricacin de la pulpa de citrus
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desecada, melaza, vinaza, licor residual de sulfito de la industria papelera y residuos de fruto como granos de caf, manzanas etc. Contiene abundantes minerales, vitaminas B, y si se irradia aporta tambin vitamina D. Desde la Segunda Guerra Mundial esta levadura se ha utilizado como fuente y complemento de protenas en la alimentacin humana y animal (Boze y col., 1992). As, ha sido una de las especies ms utilizadas en la produccin de SCP (Single Ceil Protein), trmino acuado por C. L. Wilson en 1966 (en Lichfield, 1979). Candida utilis resulta ser un organismo productor de biomasa ms favorable que Saccharomyces Cerevisiae por las siguientes caractersticas: No necesita el suplemento de ningn aminocido en los medios de produccin, los requerimientos respecto las vitaminas del grupo B son escasos, es capaz de asimilar pentosas, como la xilosa, y puede crecer en medios con una fuente de carbono y amonio como fuente de nitrgeno, con pequeas cantidades de otros nutrientes y factores de crecimiento (Lichfield, 1979). Adems resulta ser ms afn por hexosas que Saccharomyces cerevisiae (Postma y col., 1989a). Fue donada por la Universidad Francisco de Paula Santander subcultivado por repiques en agar PDA, incubado a temperatura optima y refrigerado a 4C. Esta levadura es un microorganismo Anaerobio Facultativo ya que es esencialmente Aerobio pero puede prosperar en un ambiente Anaerbico. . Aerbico: Requiere de oxgeno. . Anaerbico: No requiere de oxgeno. Metabolismo Aerbico o Respiratorio: Cuando el oxgeno es suficiente y el sustrato se mantiene bajo, los azcares son usados para producir energa y nuevas clulas, generndose muy poco alcohol y ms biomasa.
CARACTERIZACION DE LA LEVADURA TORULA (CANDIDA UTILIS)
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Composicin nutricional Materia seca NDT Energa digestible Energa metabolizable Protena (TCO) Calcio (TCO) Fsforo total (TCO) Grasa (TCO) Ceniza (TCO) Fibra (TCO)
Unidad % % Mcal/kg Mcal/kg % % % % % % COMO % DE MATERIA SECA
Cantidad 93,00 73,00 3,21 2,82 49,00 0,50 1,60 1,60 7,80 2,30
MS Levadura trula 93.0
PB 50.0
FB 0.5
Cen. 8.6
EE 6.5
ELN 34.4
Ca 0.40
P 1.30
DIGESTIBILIDAD (%)
Animal Levadura trula Levadura trula Bovinos Ovinos
PB 90.0 89.0
FB 90.0 99.0
EE 80.0 78.0
ELN 90.0 95.0
EM 3.49 4.03
VINAZA Composicin Las vinazas, en general, poseen nutrientes, como nitrgeno, azufre y fsforo, adems de una lto contenido de materia orgnica. Tambin contienen una gran cantidad de potasio. Entre los compuestos orgnicos ms importantes, estn los alcoholes, cidos orgnicos y aldehdos. Adems, tambin contiene compuestos fenlicos recalcitrantes, como las melanoidinas. Son cidas (pH entre 3 y 4).
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CARACTERSTICAS: Liquido caf oscuro, con olor a miel, denso y viscoso PRESENTACIN: Lquido a granel en carrotanques. ESPECIFICACIONES: Como fertilizante: ANLISIS Slidos totales Materia orgnica Nitrgeno (como N) UNIDADES % m/m Kg/m3 Kg/m3 VALOR 55 621 4.3 UNIDADES % m/m % m/m % m/m VALOR 55 45 0.32
Fsforo (como P2O5)
Kg/m3
0.5
% m/m
0.04
Potasio (como K2O)
Kg/m3
62.4
% m/m
4.8
Calcio (como CaO)
Kg/m3
% m/m
0.51
Magnesio (como MgO) Sulfatos (como SO4=)
Kg/m3
% m/m
0.67
Kg/m3
35
% m/m
2.59
pH Densidad
Adim Kg/m3
4.3 ~ 4.5 1300
COMO ALIMENTO PARA ANIMALES UNIDADES VALOR
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Humedad Protena Cenizas Grasas
% m/m % m/m bs % m/m bs % m/m bs
45 5.21 11.9 0
Fibra Calcio (como Ca)
% m/m bs % m/m bs
0 0.25
Fosforo (como P) Densidad a granel
% m/m bs Kg/m3
0.078 1300
USOS Uso Agrcola: Como fertilizante potsico lquido para suelos: - Fuente de potasio para fertilizacin de cultivos - Aporta materia orgnica, azufre y calcio para acondicionamiento de los suelos - Proporciona un sustrato para el desarrollo de la micro flora del suelo - Sirve de vehculo para la aplicacin de nitrgeno, potasio, fsforo y micronutrientes - Sus componentes son totalmente solubles en agua Como corrector de suelos salinos y salino-sdicos intercambia Sodio y Magnesio por Calcio en la matriz del suelo
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Materia prima para Compostaje Aporta potasio a las formulaciones de compostacion y sirve simultneamente de humectante
Uso como Alimento para Animales:
-Es una fuente econmica de energa para los rumiantes -Contiene aminocidos provenientes de la levadura Como tenso activ Reduce la viscosidad de pastas de piedra caliza en la industria cementera Ayuda a la humectacin en el fraguado de cemento Como fuente de energa El poder calorfico del material permite quemarlo y generar energa trmica dejando una ceniza rica en potasio Licencias
ICA 4053 Ecocert 1877CO 040 n1e Origen Producto resultante de la destilacin de la melaza fermentada durante la produccin de etanol. Se concentra hasta obtener un lquido denso. Instrucciones de Seguridad Industrial El pH del material es ligeramente cido (4 a 4.5) y su contacto con la piel no es peligroso. En caso de contacto directo con la mucosa de los ojos debe lavarse con
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abundante agua estril. En todos los casos en que se manipule se recomienda el uso de guantes y gafas de proteccin de ojos contra las salpicaduras. Instrucciones de Manejo La Vinaza60 es un material rico en materia orgnica. Su DQO puede estar entre 150 000 y 250 000 mgDQO/litro. Es por esto que debe evitarse su derrame sobre corrientes de agua a las cuales puede causar contaminacin muy seria. En todos los casos en que se maneje se debern tomar las precauciones de tener tanques de contencin secundaria (diques) que eviten un derrame accidental del producto a cuerpos de agua superficiales o subterrneos. En caso de un reguero menor puede absorberse el material en tierra, bagazo o aserrn y disponerlo en un terreno donde pueda incorporarse al suelo. Las dosis que se apliquen en el terreno a los cultivos deben ser manejadas segn las recomendaciones de un Ingeniero Agrnomo. Las dosis que se utilicen como alimento para animales debern seguir las recomendaciones de un Zootecnista o un Mdico Veterinario. ESPECIFICACIONES TCNICAS Origen Fertilizante potsico lquido para suelos, resultante de la destilacin de la melaza fermentada durante la produccin de etanol. Como fertilizante lquido Anlisis Qumico Slidos Totales Materia orgnica Nitrgeno (como N) Fsforo (como P2O5) Potasio (como K2O) Calcio (como CaO) Unidades % m/m Kg/m3 Kg/m3 Kg/m3 Kg/m3 Kg/m3 Valor 60 621 4.3 0.5 41 7
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Magnesio (como MgO) Sulfatos (como SO4=) pH Densidad Caractersticas
Kg/m3 Kg/m3 adim Kg/m3
9 35 4.3 ~ 4.5 1300
Fuente de potasio para fertilizacin de cultivos Aporta materia orgnica para acondicionamiento de los suelos Proporciona un sustrato para el desarrollo de la microflora del suelo Sirve de vehculo para la aplicacin de micronutrientes Sus componentes son totalmente solubles en agua
Presentacin
Lquido en tambores de 60 litros o a granel en carro tanque. Origen
Alimento para ganado, resultante de la destilacin de la melaza fermentada durante la produccin de etanol.
Como alimento animal
Anlisis Qumico Humedad Protena Cenizas Grasas Fibra
Unidades % m/m % m/m (b.h.) % m/m (b.h.) % m/m (b.h.) % m/m (b.h.)
Valor 40 5.68 12.9 0 0
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Calcio (como Ca) Fosforo (como P) Energa Neta Densidad a granel Caractersticas
% m/m (b.h.) % m/m (b.h.) Mcal/kg Kg/m3
0.27 0.085 0.88 1300
Sustituye parte de la Melaza en dietas de rumiantes En mezclas con Melaza reduce la viscosidad de esta Acta como aglomerante en la fabricacin de bloques multinutricionales Aporta vitaminas del complejo B Presentacin
Liquido en tambores de 60 litros o a granel en carro tanque. MICELIO FUNGICO Es la biomasa resultante del desarrollo vegetativo del hongo aspergillus Nger utilizado para la fermentacin del azcar en el proceso de fabricacin de acido ctrico anhidro. Se obtiene durante la etapa de purificacin. Por tratarse de un producto de transformacin biolgica natural, la torta de micelio presenta caractersticas que hacen de ella un material til en la nutricin animal, en especial de bovinos. En la tabla se presenta la caracterizacin qumica del producto. Los componentes del micelio tienen efectos benficos sobre los rumiantes al bajar el pH el incrementar el nmero de microorganismos del rumen, aumentar la palatabilidad y digestibilidad de la materia seca y las protenas, incrementar la retencin del nitrgeno suministrado en las dietas e incrementar la utilizacin de elementos traza. Por ltimo, el consumo de micelio mejora la calificacin organolptica y la calidad de la carne y no deja residuos txicos. CARACTERSTICA Humedad Protena Ceniza Grasas Fibra Estrato libre de nitrgeno Sodio Potasio Calcio UNIDAD %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m Mg/kg Mg/kg Mg/kg CANTIDAD 10 12.95 1.28 0.01 44.12 33-20 330 260 760
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Magnesio Hierro Fosforo total Boro Nitrgeno Alanina Arginina Leucina Metionina Fenilalanina Acido aspartico Acido glutmico Glicina Histidina Isoleucina Lisina Prolina Serina Treonina Triptfano Valina
Mg/kg Mg/kg Mg/kg Mg/kg %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m %m/m
50 50 200 30 2.4-2.6 6.8 9.9 7.1 1.1 4.5 10.4 12 5 2.8 4.4 5.5 4.7 6.1 5.8 1.6 4.3
FICHA TECNICA MICELIO SECO ANALISIS QUIMICO GARANTIZADO Proximal Y Cornell efectuados por Corpoica-febrero 2006 NUTRIENTES PORCENTAJES EN BASE SECA
Materia Seca
89
Digestibilidad M.S. (in situ) Digestibilidad M.S. (in vitro)
98.3 95.8
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Energia Bruta EB (Mcal/kg) Energa Digestible ED (Mcal/kg) NDT Energa Metabol EM (Mcal/kg) Energa Neta Lactancia ENL (Mcal/kg) calculada por frmulas NRC Energa Neta de Lactancia ENL (Mcal/kg) calculada por gases Protena Cruda Proteina soluble en buffer PB1 (verdadera, soluble) PA (NNP, soluble) PB2(medianamente soluble) PB3( insoluble) PC(insoluble, no digestible) Fibra Bruta Fibra Detergente Neutro FDN Fibra Detergente Acido FDA Hemicelulosa 13.1
4.26
4.08
90.9 3.34
2.06
1.92
45.5 % de PC 69.3 % de P Soluble 30.7 % de P Soluble 12.6 % de PC 14.7 % PC 27.2 % PC 47.6 71.5 52.4
20.1
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Lignina Celulosa Crabohidratos No Estructurales Contenido Celular Grasa Cenizas Extracto No Nitrogenado MINERALES Calcio Fsforo Sodio Magnesio Potasio Hierro Boro AMINOACIDOS Alanina Arginina Cisteina Fenil Alanina Glicina Histidina
8.3 42,5 43.3 28.5 0.28 0.95 28.6
0.17 0.11 0.03 0.04 0.04 0.005 0.003
0.46 0.37 0.10 0.72 0.43 0.11
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Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Tirosina Treonina Triptfano Valina Ac Asprtico Ac Glutmico Inmunoestimulante (cido ctrico) Enzimas Presentes
0.30 0.52 0.30 0.15 0.30 0.49 0.23 0.47 0.10 0.38 0.65 0.70
2.0 Fitasa-Fosfatasa Proteinasas-LipasasCelulasas
pH
4.2
Las dosis de micelio varan entre 10 y 15 kg por cabeza como complemento de una reaccin. En sucromiles el micelio producto se ha utilizado principalmente en la alimentacin de bovinos en estado fresco. El mayor potencial de uso es como parte de raciones para la alimentacin de ganado. Podra complementarse con otros productos como la melaza, los lodos de levadura previo tratamiento y otras fuentes externas de nutrientes como la urea. Su uso como a uno solo se recomienda en caso de extremos puesto que su proceso de descomposicin es lento.
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DIAGRAMA DE PRODUCCION El trasporte de la materia prima se realizara en 2 pasos que son: El Primer paso es la gestin, de la materia prima con las empresas, luego de tener la aprobacin de las materias primas, luego de esto tambin se gestiona con el coordinador acadmico para que le facilite el trasporte a uno SUCROMILES de nuestros integrantes del grupo de trabajo para que valla por la materia prima al sitio acordado con la empresa. El segundo paso es ya la ejecucin en donde uno de nuestros integrantes se dirige al lugar designado por la empresa en la gestin para recibir la materia prima y traerlo al laboratorio para su almacenamiento. CLAYUCA MATERIA PRIMAS: Micelio fngico; vinaza; levadura torula (cndida utilis). Se realizan los siguientes anlisis: pH Brix Azucares fermentables Ceniza Hmedad
ALMACENAMIENTO El almacenamiento de las materias primas se realizara en un refrigerador a 5 c en donde la levadura se almacenara por medio de crecimiento lento en tubos en el refrigerador. PREPARACION MEDIO DE CULTIVO La preparacin del MEDIO DE CULTIVO se inicia con la molienda del micelio fngico, luego se prepara en agua la vinaza con el micelio se mescla y luego se suplementa con fuentes de carbono y nitrgeno. INOCULACION La inoculacin comienza con el aislamiento y purificacin del microorganismo del medio de conservacin. Todo esto se realiza en la cabina de flujo laminar, en crecimiento en tubo y dilucin del microorganismo. PROPAGACION CELULAR.
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Aumento de la concentracin celular o medios lquidos, se hace tomando el 10% del inoculo y se agrega al MEDIO ALTERNATIVO que es el micelio con la vinaza y los sustratos, esto se realiza en el mini- birreactor. Se le miden los siguientes parmetros. Concentracin celular. pH Azucares reductores. Brix
BIORREACTOR Son los mismos procesos anteriores solo que a escala en el biorreactor.
PROCESO DE SEPARACION. En este proceso se utiliza la centrifuga y los tubos de ensayo para realizar la separacin. Luego se analiza tanto el sobrenadante y la biomasa para saber con qu porcentaje de protenas sali y si cumple con los parmetros establecidos para su debido uso o vertimiento en el caso del sobrenadante. TABLA DE PROCESO 1 TRANSPORTE 1 ALMACENAMIENTO 7 OPERACIN / INSPECCION
PLAN DE TRABAJO
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ACTIVIDADES SIEMBRA MASIVA PREPARACIN DEL MEDIO AGOTAMIENTO ACTIVACIN DE CEPA PREADAPTACIN VARIABLES DE PROCESO
FEB FEB FEB FEB FEB FEB FEB FEB FEB EN (17 (18 (19 (20 (21 (22 (23 (24 (25 E ) ) ) ) ) ) ) ) ) X X X X X X X X
OBSERVACIONES SE RESERVA CANDIDA EN A.S CAJA PQ Ingtes: MELAZA, VINAZA Y MICELIO SIEMBRA MTODO FRANCS LEVADURA EN CALDO PAPA 01ml de CALDO en 09ml de MEDIO. CONTEO, IDENTIFICACIN, Ph, T, BRIX. LOS 10ml ADICIONARLOS A 90ml DE 1/2. TOMAR DATOS INICIAL (h0) Y FINAL (24h) REALIZAR CURVA SEGN DATOS OBTENIDOS CONTEO, IDENTIFICACIN, Ph, T, BRIX. LOS 100ml ADICIONARLOS A 900ml DE 1/2 DESDE h0 cada 4h POR TURNOS DE TRABAJO REALIZAR CURVA SEGN DATOS OBTENIDOS CONTEO, IDENTIFICACIN, Ph, T, BRIX. LOS 1000ml ADICIONARLOS A 3000ml DE 1/2 DESDE h0 cada 4h POR TURNOS DE TRABAJO GRAFICA LOGARITMICA DE CRECIMIENTO.
ESCALADO A 100ml TOMA DE MUESTRA CINTICA DE CRECIMIENTO VARIABLES DE PROCESO ESCALADO A 1000ml TOMA DE MUESTRA CINTICA DE CRECIMIENTO VARIABLES DE PROCESO ESCALADO A 3000ml TOMA DE MUESTRA CINTICA DE CRECIMIENTO
X X X
X X
X X X X X
X X X X X
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FORMULACIN DEL MEDIO
MATERIAS PRIMAS MICELI FUNGICO, MIEL B Y VINAZA MEDIO 1 BASE DE CLCULO VINAZA MIEL B MICELIO H2SO4 1ml Buffer pH Planeacin Preparar 2 medios y de cada medio hacer 3 ensayos tomar Brix, pH, inicial y final luego cada 4 hrs realizar recuento celular PREPARACION DE MEDIOS PROBLEMAS 3000ml 20% p/v 10% p/v pH BRIX 4.5 24 3000ml 30% p/v 10% p/v MEDIO 2
Nuestros medios problemas se trabajan con la levadura candida utilis. MEDIO N 1 MEDIO N 2 MICELIO 10 % MICELIO 10 % MIEL B 10 % MIEL B 20 % VINAZA 80 % VINAZA 70 % MEDIO N3 MICELIO 10 % MIEL B 30 % VINAZA 60 %
MEDIO N 1 BRIX 21 PH 3,74
MEDIO N 2 BRIX 19 PH 3.61
MEDIO N3 BRIX 21 PH 3,91
NOTA: El pH de los medios se encontraba en 12 y se bajo con ayuda de acido ortofosfrico.
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Al micelio se le realiza una hidrlisis con NaOH, se lleva por 10 min a la autoclave dos veces, luego se filtra y se utiliza el residuo filtrado. Los medios problemas tienen un volumen de 50 ml.
CONTEO 12 HORAS DE MEDIOS: Los medios problemas se hacen por duplicado. MEDIO N 1 MEDIO N 2 MEDIO N3 6,25*10e7 9,62*10e7 2,15*10e8 1,15*10e8 4,5*10e7 1,21*10e8 Tomamos el medio problema con mayor crecimiento en este caso medio n3 para pasar a 1000 ml. Procedimiento Despus de haber hecho esto se le agrega el 5 % del medio en aceite mineral para conservar, se prepara 1000ml del medio y se inocula con el medio que tenemos en conservacin y se realiza conteo cada 3 horas para evaluar el crecimiento.
hora conteo 21:13 00:13 03:13 06:13 09:13 12:13
conteo medio 1000ml 1,1*10e8 1,62*10e9 1.61*10e9 1.66*10e9 2.57*10e10 Final 1.92*10e9
pH 4.27 4.27 4.24 4.24 4.21 4.17
Brix 23 23 23 23 23.2 25.4
Curvas de crecimiento.
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c.c vs t
3E+10 2,5E+10 2E+10 1,5E+10 c.c vs t 1E+10 5E+09 0 -5E+09 0 1 110000000 1610000000 1920000000 1660000000 4 5 6 7 25700000000
162000000 2 3
Brix vs t
26 25,5 25 24,5 25,4
24
23,5 23 22,5 0 1 2 3 4 5 6 7 23 23 23 23 23,2
Brix vs t
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pH vs t
4,28 4,27
4,26
4,24 4,22 4,2 4,18
4,27 4,24 4,24 4,21 pH vs t
4,17 4,16 0 1 2 3 4 5 6 7
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PH vs c.c
3E+10 2,5E+10 2E+10 1,5E+10 PH vs c.c 1E+10 5E+09 0 -5E+09 4,16 1920000000 4,18 4,2 4,22 4,24 1660000000 1610000000 4,26 25700000000
162000000 110000000
4,28
Ln biomasa
30 25 20 15 10 5 0 -1E+10 1E+10 3E+10 21,37559102 21,19950002 21,23008344 18,51599092 23,96975683
18,90310689
Ln biomasa
NOTA: La muestra se tomo cada 3 horas Se comprueba que el Medio con mayor rendimiento y produccin es el Medio tres, de ste realizamos nuestras producciones finales. Medio de cultivo Caractersticas.
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Composicin Micelio Vinaza Miel B Fosforo
% 10p/v 60v/v 30p/v Cantidad necesaria para amortiguar el pH
pH Brix Picnmetro ATRS
3,91 21 gr/ml 0.256 gr/ ml 0.233%
Al inicio de nuestro programa de formacin nuestro proyecto se enfoco en trabajar con el subproducto obtenido durante el proceso de la cerveza que es los residuos de la malteria, pero d a la hora de realizar la caracterizacin de la materia prima y las gestin adecuada nos dimos cuenta de que esta empresa no nos facilitara este producto porque ellos tenan unos proveedores que se los compraban.
MATERIA PRIMA RESIDUOS DE LA MALTERIA (CERVEZA) ESTUDIAN ALIMENTAR GANADO CON RESIDUOS DE HARINA Y CERVEZA
El departamento autonmico seal hoy en un comunicado que esta iniciativa pretende dar salida a subproductos agroindustriales y su traslado a vertederos, al tiempo que abarata los costes de alimentacin. En la primera etapa de este proyecto estudiar la introduccin del pienso fermentado a partir de datos obtenidos de los animales, as como su valor nutritivo, aporte de microfibras y el ahorro
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de forraje.
En una ltima fase del estudio se examinar la produccin lechera, determinando la evolucin de la cantidad y calidad de la leche y su incidencia en los quesos que se elaboren, tanto en el mbito nutricional como en el coste de produccin. El grano sobrante, despus de elaborar la cerveza deber utilizarse antes de 10-15 das ya que pasado este tiempo se estropea. Por eso las grandes fbricas tienen prensas que extraen la humedad de la mezcla que hace que el sobrante se pueda conservar ms tiempo y se pueda transportar con ms facilidad. El grano tambin es rico en protenas, tiene cerca de un 26%.
PORCENTAJE PROMEDIO DE LA COMPOSICIN QUMICA PROXIMAL DE LA PROTENA UNICELULAR EN BASE A SU PESO SECO. COMPUESTOS ORGNICOS (%) Protena Lpidos Cenizas cidos nucleicos HONGOS FILAMENTOSOS 5-8 2-8 9-14 7 ALGAS 7.5-10 7.0-20 8.0-10 3.0-8 LEVADURAS 7.5-8.5 2.0-6.0 5.0-9.5 6.0-12 BACTERIAS 11.5-50 1.5-3.0 3.0-7.0 8.0-16.0
RENTABILIDAD DE LA PRODUCCIN DE PROTENAS UNICELULARES
Los principales factores econmicos son productividad, rendimiento y precio de venta y como el costo del sustrato representa una gran proporcin del costo de fabricacin de la mayora de los
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productos de protenas de organismos unicelulares, es esencial que el rendimiento celular ( peso de clulas producido por unidad de peso de sustrato ) sea elevado y la formacin de subproductos sea mnima.
ELECCIN DEL MICROORGANISMO.
Se deben tener en cuenta criterios como el sustrato necesario y los posibles suplementos del mismo, la velocidad de crecimiento, productividad y rendimiento del sustrato, el PH y la temperatura, la aireacin, morfologa del crecimiento en el fermentador, seguridad y no patogenicidad, ausencia de productos txicos, facilidad de recuperacin de las protenas de organismos unicelulares. Tipo de levadura a utilizar en el P.U.C para el alimento a la ganadera a partir de residuos de la malteria: levadura cndida utilis.
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FLUJO DE PRODUCCION
Puc residuos de la malteria
Transporte camioneta Sena Palmira- almacn bavaria
Entrega de residuos
Inspeccin de la materia a trabajar
Almacenamiento
Inspeccin de la materia
Transporte almacn bavaria- Sena Palmira
Propagacin-in vitro
Inoculacin
Fermentacin
Filtracin o secado
Venta y distribucin
Envase
Anlisis del producto
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Debido al proyecto planteado anteriormente y teniendo en cuenta las dificultades que se nos presentaron decidimos junto con el equipo de trabajo y gestor del proyecto cambiar nuestra materia prima residuos de la malteria por bagacillo y miel B, utilizando como microorganismo Candida utilis.
PROTEINA UNICELULAR APARTIR DE BAGACILLO, MIEL B con (CANDIDA UTILIS) Medio de cultivo seleccionado: 5ml de miel B. 5ml de vinaza. 40ml de H2OD. 0.1ml de acido fosfrico. 0.01gr de cloruro de amonio. 1ml de acido clorhdrico. 5gr de gelatina. Brix: 17. pH: 4.5 Cmara de neubauer: 1.0x10e8 Se escogi entre 3 medios caracterizados por su mayor crecimiento y adaptacin de la cepa. Para su conservacin agregamos 12ml de glicerina en 50ml de medio. Luego procedimos a preparar el medio de 1000ml teniendo en cuenta las cantidades de sustancias agregadas al medio de 50ml (sin contar la glicerina; pues solo fue aplicada para conservacin).
BITACORA DE CONTROL FECHA DE INICIO:20 DE SEPTIEMBRE DE 2011 PREINOCULO CONCETRACION CELULAR:1,0X10E8 pH: 4,5 BRIX:17
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CONTEO: N 1 VOLUMEN 1000 ml HORA 02:00 04:00 06:00 08:00 10:00 12:00 14:00 CONCENTRACION CELULAR 8X10E7 4,5X10E7 1,1X10E8 4,2X10E8 7,1X10E8 3,5X10E7 6,7X10E6 DENSIDAD 1,1 g/l LN 18,1 17,6 18,5 19,8 20,3 17,3 15,7 PH 4 4,2 4,5 3 3,2 3,3 3 GRUPO 4 4 4 4 4 4 4
ln Vs T
25
20
15 ln Vs T
10
0 00:00 02:24 04:48 07:12 09:36 12:00 14:24 16:48
BITACORA DE CONTROL FECHA DE INICIO: PREINOCULO CONTEO: N2 VOLUMEN HORA CONCENTRACION CELULAR GRAVEDAD LN PH GRUPO CONCETRACION CELULAR: 2,87X10E7 pH:4,5 BRIX:19
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1000 ml
02:00 04:00 06.00 08:00 10:00 12:00 14:00
2,87X10E7 7,6X10E7 7,9X10E7 5,7X10E7 5,9X10E7 5,0X10E7 1,3X10E8
1,090 g/l
17,1 18,1 18,1 17,8 17,8 17,7 18,6 4,3 4,4 4,1 3,8 4 4,2
4 4 4 4 4 4 4
18,8 18,6 18,4 18,2 18 ln Vs T 17,8 17,6 17,4 17,2 17 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Series2
BITACORA DE CONTROL
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FECHA DE INICIO:8 DE NOVIEMBRE DE 2010 HORA: 10:00 A.M PREINOCULO CONTEO: N 3 VOLUMEN 1000 ml HORA 02:00 04:00 06:00 08:00 10:00 12:00 VELOCIDAD DE CRECIMIENTO MAXIMA MINIMA 0,81 0,15 CONCENTRACION CELULAR 3,6X10E7 2,4X10E7 2,3X10E7 3,2X10E7 2,0X10E7 7,4X10E7 GRAVEDAD 1,090 g/ l LN 17,3 16,9 16,9 17,2 16,8 18,1 PH 4,4 4,1 3,9 3,6 4 4,2 GRUPO 4 4 4 4 4 4 CONCETRACION CELULAR:6X10E6 PH:4,5 BRIX:19
ln Vs T
18,2 18 17,8 17,6 17,4 ln Vs T 17,2 17 16,8 16,6 00:00 02:24 04:48 07:12 09:36 12:00 14:24
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FACTORES QUE AFECTAN LA EFICIENCIA DEL PROCESO Factores que afectan la velocidad de formacin de Biomasa Tipos de sustrato Tipos de cepa Ambiente Sencillos Procariota Temperatura Complejos Eucariotas pH Viscosidad Arqueo bacterias Aireacin Efecto positivo Efecto negativo Efecto No significativo Mayor velocidad: Mayor Biomasa Menor velocidad: Menor Biomasa No velocidad: No hay crecimiento
PERDIDAS DE AZUCAR: Hidrolisis trmica (termlisis) de la sacarosa (Reaccin de Millard). Generacin de azucares infermentables durante el proceso, aumento en azucares residuales INFECCIONES BACTERIANAS: Por microorganismos como Leuconostoc, Mesenteroides (dextranas), Bacterias acido lcticas (acidez lctica) y acido acticas principalmente, que compiten por los nutrientes y los productos que liberan inhiben el crecimiento y la actividad de la levadura, adems la estresan. La formacin total de cidos de estas bacterias se determina mediante acidez voltil. ACIDOS ORGANICOS: Va ciclo de Krebs: mlico, fumarico, oxlico, ctrico o por bacterias / levadura salvaje: lctico, actico y butrico.
Factores de estrs para Saccharomyces cerevisiae y Cndida utilis La relacin de los factores ambientales en el desarrollo de la levadura est ligada a una buena produccin de biomasa:
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Foto 1. Tomada en el laboratorio. Las bacterias se duplican 8 9 veces ms rpido que la levadura
Imagen 26. Tincin de Gram Candida Utilis tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira.
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El rapido crecimiento de las bacterias afecta la salud de las levaduras
FACTORES QUE AFECTAN LA EFICIENCIA DEL PROCESO LEVADURA SALVAJE: La mayora compite tanto aerbica como anaerbicamente por el azcar y los nutrientes del medio de cultivo, producen glicerol, acido actico, acido lctico, acido Succnico, metanol, oleo fusel, aumenta la turbiedad y espuma (CO2).
1,40E+07 1,20E+07 1,00E+07 8,00E+06 6,00E+06 4,00E+06 2,00E+06 0,00E+00 0 2 4 6 8
Poblacion Celular
Tiempo
Tabla 16. Curva de crecimiento contaminacin por levadura Salvaje montaje 1000ml. Tomada en el Laboratorio de Biotecnologa Industrial Imagen 24. levadura Salvaje contaminacin en montaje 1000ml. Tomada en el Laboratorio de Biotecnologa Industrial
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FORMAS DE CONTROL PARA MINIMIZAR O EVITAR LA INFECCION
Diseo y Limpieza: Lavado y esterilizacin adecuado del material de vidrio a utilizar en el proceso Adicin de Acido Sulfrico: El anhidro Sulfuroso molculas (SO2) es el principal microbicida utilizado en las industrias que anula la levadura salvaje Adicin de Biocida o Antibiticos: Costos elevados en el proceso de produccin , controlan la contaminacin, pero su uso excesivo es de preocupacin mundial porque puede crear cepas resistentes a los antibiticos Esterilizacin del Medio de Cultivo: Se recomienda autoclavar 30 minutos a 121 C, 15 libras de presin
12. DISEO METODOLGICO
1. Transferencia y acompaamiento hacia el proyecto objeto de la Investigacin Aplicada. 2. Permitir visitas tcnicas para desarrollar por observacin las competencias, desde el sector productivo. 3. Incluir Materias Primas y cepas Industriales en el marco de la evaluacin de los Bioprocesos. 4. Evaluacin de las conclusiones y aporte de recomendaciones hacia el Programa de Formacin. FASES DEL PROYECTO Y SUS ACTIVIDADES
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FASES DEL PROYECTO Anlisis y Planeacin
ACTIVIDADES DEL PROYECTO:
Cronograma ( En Meses)
IDENTIFICAR NECESIDADES DE ALTERNATIVAS NUTRICIONALES PARA LA ALIMENTACIN ANIMAL POR PROCESOS BIOTECNOLGICOS Y ACCIN MICROBIANA. ANALIZAR LAS MUESTRAS POR PROCEDIMIENTOS DE IDENTIFICACIN FSICA, QUMICA Y MICROBIOLGICA VALORANDO LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR A PARTIR DE DIFERENTES SUSTRATOS A ESCALA DE LABORATORIO SELECCIONAR LAS MATERIAS PRIMAS, INSUMOS, EQUIPOS Y PROCEDIMIENTOS DE CONTROL Y SEGUIMIENTO DE PARMETROS DE FERMENTACIN SEGN INSTRUCCIONES A NIVEL DE LABORATORIO EN LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR.
2.5
Ejecucin
EJECUTAR LA OPERACIN, TANTO A NIVEL DE LABORATORIO Y PLANTA PILOTO, CUMPLIENDO CON EL ESCALADO DE LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA. ANALIZAR LAS MUESTRAS POR PROCEDIMIENTOS DE IDENTIFICACIN FSICA, QUMICA Y MICROBIOLGICA VALORANDO LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR Y SUS VERTIMIENTOS Y SUBPRODUCTOS SLIDOS . 9.5
Evaluacin
VALIDAR LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR DE ACUERDO A LAS MATERIAS PRIMAS SELECCIONADAS Y CONDICIONES OPERATIVAS DE FERMENTACIN REPORTADAS POR EL LABORATORIO Y LA PLANTA PILOTO. VALORAR LA CONCENTRACIN DE PROTENA UNICELULAR COMO SUPLEMENTO ALIMENTICIO ANIMAL Y REMEDIAR POR PROCESOS BIOTECNOLGICOS LOS VERTIMIENTOS Y SUBPRODUCTOS SLIDOS PROVENIENTES DEL BIOPROCESO.
AMBIENTES DE FORMACIN REQUERIDOS o o o o Laboratorio de Biotecnologa Industrial Planta Piloto de Fermentaciones 20 L Planta Piloto de Tratamiento de Agua Residual- Lodos Activados 200 L Planta Piloto de Compostaje.
A este proyecto se le realizaron los siguientes anlisis: Determinacin de azcares reductores totales y libres (Mtodo de Fehling)
A- PROPOSITO/ PRINCIPIO Determinar los azcares reductores totales y libres usando el mtodo Fehling.
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B- APLICABLE A: Procedimientos en el laboratorio de C.B.I.
C- RESPONSABILIDAD El responsable de ejecutar esta actividad es el aprendiz de laboratorio El responsable de supervisar esta actividad es el instructor del laboratorio
D- CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Utilice bata de laboratorio de tela anti fluidos para evitar posibles derrames perjudiciales para su integridad personal. En el momento de manipular los reactivos y materiales de laboratorio es pertinente que utilice guantes quirrgicos para evitar la contaminacin de estos y proteger su integridad. Use el gorro para evitar la contaminacin del medio donde se encuentra trabajando. Utilice el tapabocas para evitar el posible inhalamiento de vapores y/o gases txicos. Compruebe que las pilas y la carga de corriente sean ptimas para un mejor desarrollo de su actividad de pesaje. Inspeccione el rea de trabajo para as determinar que no exista exceso de humedad ya que esto puede interferir en el desarrollo de su actividad.
E- EQUIPAMIENTO Bao Mara Balanza de Precisin Pilas y adaptador de corriente
MODELO (YCW-010E) GEMMY INDUSTRIA CORP (CQT-5000) A A ADAM
F- MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Un baln aforado de 250 ml
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Un baln aforado de 100 ml Un vaso de precipitados de 500ml Un vaso de precipitados de 250ml Un erlenmeyer de 500ml Una placa de calentamiento Cinco tubos de ensayo Dos pipetas graduadas de 5ml Un embudo de vidrio Un agitador de vidrio Una probeta de 100ml Una probeta de 50ml Una pipeta aforada de 25ml Una pipeta aforada de 10ml Un vidrio de reloj Una pro pipeta Dos aros con nuez (uno pequeo) Una gradilla
REACTIVOS
- Reactivo de Fehling Soxhlet:
CuSO4. 5H2O ( 34,639 g en 500 ml de agua) NaOH Tartrato de sodio y de potasio ( sal de Rochela) ( 173 g de la sal de rochela y 50g de NaOH en un volumen de 500ml)
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G- PREPARACIN DE REACTIVO FEHLING 1. Preparacin del reactivo de Fheling-Sohelt: Prepare la cantidad adecuada de este reactivo, mezclando volmenes iguales de la solucin de sulfato de cobre y de la solucin alcalina del tartrato de sodio y de potasio.
H-PREPARACIN DE SOLUCIN 1. Preparacin de la muestra- Solucin No 1: Pese 20,0 g de la muestra y disulvala en un matraz aforado de 250ml con agua destilada, si observa partculas slidas djelas decantar. 2. Ensayo Previo: En cinco tubos de ensayo agregue sucesivamente a, 2, 3, 4 y 5 ml de la muestra azucarada antes preparada, aada a cada tubo 5 ml de la solucin de FehlingSoxhelt. 3. Caliente en un bao con agua hirviendo por unos tres minutos. 4. Deje sedimentar el xido cuproso y observe el color del lquido en cada tubo y note cual tiene el tinte de color azul ms ligero. Si no se observa en ninguno de los tubos una coloracin azul, debe volver a preparar la solucin No 1, utilizando la mitad del peso de la muestra anterior. Para continuar con el anlisis, de mide 20 veces el volumen de la solucin No 1 con la que se obtuvo el color azul ms ligero, y se coloca en un matraz aforado de 100ml y se completa a volumen con agua destilada (preparacin de solucin No 2) 5. Anlisis gravimtrico: En un vaso de precipitados de 250ml adicione 50ml del reactivo de Fehling-Soxhlet y 50ml de la solucin No 2 azucarada. 6. Cubra el vaso con un vidrio de reloj 7. Caliente hasta el punto de ebullicin por unos 4 a 5 minutos. 8. Retire de la llama y agregar inmediatamente 100cm de agua destilada fra. 9. Luego filtre sobre un papel de filtro previamente pesado 10. Lave el precipitado con una tres porciones de 20ml cada una de agua caliente 11. Luego con tres porciones de 10 ml cada una de alcohol al 70% 12. Finalmente con dos porciones de 20ml cada una de eter etlico. 13. Coloque en la estufa a 120 C por 15 minutos 14. Deje enfriar en el desecador y pese. Calculo de ATRs Mtodo ICUMSA: % de Azucares Totales = 100 T*FF*FD T= Volumen de la Titulacin FF= Factor Fehling FD= Factor de Dilucin= peso de la muestra *25*100
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200*250 Nota: La titulacin debe completarse en 3min contados a partir del momento en que empiece la ebullicin.
El reactivo Fehling se basa en el carcter reductor de los monosacridos. Si el glcido que se investiga es reductor, se oxidar dando lugar a la reduccin del sulfato de cobre, de color azul, a xido de cobre, de color rojo-anaranjado.
I- PROCEDIMIENTO 1. Coloque en 5 tubos de ensayo los siguientes glcidos: Lactosa, sacarosa, almidn, maltosa, glucosa. 2. Proceda a adicionar de dos a tres gotas de fehling A y B a cada tubo de ensayo. 3. Agite vigorosamente para posteriormente llevarlo al bao mara. 4. Si la reaccin se muestra de un color rojo ladrillo la reaccin ser positiva. 5. Si la reaccin adquiere un color azul verdoso nuestra reaccin ser negativa.
SOLIDOS TOTALES DISUELTOS Y SOLIDOS SUSPENDIDOS
A- PROPOSITO/ PRINCIPIO Las partculas suspendidas presentes en el agua, son removidas por filtracin y el agua filtrada es secada en un horno. Los slidos remanentes despus del secado son los slidos disueltos. Estos son determinados y restados de los slidos totales. La diferencia da el resultado de los slidos suspendidos totales. B- APLICABLE A: Este mtodo es aplicable para el agua de proceso en el CBI.
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C- RESPONSABILIDAD El responsable de ejecutar esta actividad es el tecnlogo en procesos biotecnolgicos aplicados ala industria, en el proyecto de biorremediacion. El responsable de supervisar esta actividad es en instructor Ernesto Mendoza. D- CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Usar bata. Cuando utilice los equipos o materiales asegrese que: La cristalera que se va a utilizar debe estar limpia, seca y sin etiquetas. Chequear que las mquinas o materiales se encuentren limpios y en buen estado. E- EQUIPAMIENTO EQUIPOS Material de vidrio: Caja petri Pipeta de 50ml o disponible Desecador
Instrumentos: Balanza con al menos 0.1mg de precisin Horno de bao caliente/bao de vapor
F-MATERIALES
Papel de filtro whatman
G- PROCEDIMIENTO 1. Filtre la muestra de agua (150-200ml) a travs de un papel de filtro whatman numero 1 o equivalente.
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2. Pese una caja o plato de evaporacin vacio y seco (A) 3. Coloque en el plato de evaporacin una cantidad adecuada y determinada de agua filtrada. 4. Evapore la muestra de agua en el horno a aproximadamente 90c 5. Cuando el agua se haya evaporado completamente seque el residuo remanente a 100c o 105c hasta peso constante. Enfrelo en el desecador y pselo inmediatamente (B) 6. Refirase a las notas de slidos totales en agua CLCULOS Calcule los slidos totales disueltos as: Slidos totales disueltos, mg/litro =(B-A)X1000 / volumen de muestra tomada Donde : A: peso del plato vacio en miligramos B: peso del palto + el residuo seco, en miligramos. Reporte el resultado como: el agua contiene ----mg/litro de slidos totales (secados a ----- c) Calcule los slidos suspendidos totales as: Slidos suspendidos totales = slidos totales slidos totales disueltos Reporte el resultado como: El agua contiene ---- mg/litros de slidos totales suspedidos.
Determinacin de Nitrgeno por Mtodo kjeldahl
A- PROPOSITO/ PRINCIPIO Determinar la concentracin de nitrgeno en una sustancia.
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B- APLICABLE A: Sustancias nitrogenadas C- RESPONSABILIDAD El responsable de ejecutar esta actividad es el aprendiz del rea. El responsable de supervisar esta actividad es el instructor del programa D- CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Usar uniforme verde Utilizar careta, gafas, guantes. E- EQUIPAMIENTO EQUIPOS Balanza analtica. Hornilla elctrica. Aparato de destilacin. Campana de extraccin de gases F- MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Bureta de 10ml Frascos goteros Pipetas de 1,5, 10 y 15 ml Papel de pesada de desprovisto de nitrgeno Micro balones de kjeldahl de 100ml MODELO CQT-5000
Reactivos Hidrxido de sodio Acido Brico Acido clorhdrico
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Acido sulfrico Sulfato de sodio anhidro Sulfato de amonio qumicamente puro Selenio metlico oxicloruro de selenio Rojo de metilo Azul de metileno. IPREPARACION DE SOLUCIONES
1. Indicador rojo de metilo, azul de metileno, mezcle dos partes de solucin alcohlica de rojo de metilo al 0.2% y una parte de solucin alcohlica de azul de metileno al 0.2%. 2. Solucin de hidrxido de sodio al 50%.Disuelva 250gr de NaOH en agua lentamente, enfriando posteriormente diluya hasta obtener un volumen total de 500ml. 3. Solucin de acido Brico. Disuelva 20gr de H3BO3 en agua y diluya hasta 500ml. 4. Solucin de HCl: Prepare y estandarice una solucin de 0.02N de HCl (1.8ml HCl concentrada para 1L de solucin). 5. Solucin patrn de referencia de (NH4)2SO4: Pese con exactitud una determinada cantidad de (NH4)2SO4 100 a 200 mg y dilyalo en forma tal que resulte una solucin que contiene 2000 +- 3mg/cc exactamente al objeto de chequear y controlar el mtodo. H- PROCEDIMIENTO Para la destilacin se toma 10ml de la muestra digerida
Determinacin de materia seca gravimtrica.
A- PROPOSITO/ PRINCIPIO Establecer el procedimiento para determinacin de materia seca en los procesos fermentativos efectuados en el laboratorio de CBI. B- APLICABLE A: Muestras de sustancias sometidas a desecacin para obtener el anlisis de materia seca.
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C- RESPONSABILIDAD El responsable de ejecutar esta actividad es el aprendiz del rea. El responsable de supervisar esta actividad es el instructor del programa D- CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Usar uniforme verde Revisar que el desecador se encuentre en ptimas condiciones para iniciar el proceso. Considerar todas las situaciones que favorezcan el funcionamiento de los equipos. Mantener los equipos de retirado de fuentes de alta temperatura o vapor, radiadores, autoclaves, o expuesta directamente a rayos de sol. Siga adecuadamente todas las instrucciones de seguridad del laboratorio. E- EQUIPAMIENTO EQUIPOS Centrifuga Mufla elctrica Balanza analtica. MODELO Gemmy Lesco CQT-5000
F- MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Crisol de porcelana. Desecador con silica gel. Esptula, pinza. Pipeta de 10 ml Bomba de aire Tubo de ensayo. IIPREPARACION DE SOLUCIONES
No procede. H- PROCEDIMIENTO Se toma 10ml muestra del reactor en un Breaker de 100ml y con la ayuda de una bomba de aire y la pipeta de 10ml se extrae 10ml exacto la muestra y se lleva a los tubos de ensayo plstico.
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Despus se monta los tubos de ensayo a la centrifuga y le da un tiempo de 600rpm durante 10min. Se centrifuga hasta obtener la separacin de la materia hmeda y la vinaza.
Despus de la centrifugacin se elimina el sobrenadante, a la biomasa precipitada se le aade 10ml de agua y se vuelve a centrifugar el mismo tiempo y rpm, este para se realiza dos veces.
En el periodo que se est centrifugando la muestra, se toma 3 crisoles y se introduce en una estufa con una temperatura de 105C durante 30 minutos.
Colocarlos en un desecador durante 10 minutos.
Pesar el crisol, anotar su nmero y su peso (T= Tara)
Colocar rpidamente ms o menos 3 a 5 gramos de materia hmeda en el crisol con una esptula y anotar el peso (T+MF= Tara + Materia Fresca)
Colocar los crisoles a 105C durante 24 Hrs.
Sacar los crisoles con una pinza de la estufa colocarlos en un desecador y esperar 10 minutos.
Abrir el desecador, pesar rpidamente los crisoles y anotar el peso. (T+MS= Tara + Materia Seca)
Calcular el porcentaje de Materia Seca. Ejemplo: % peso hmedo o fresco muestra (gr)= [(Peso crisol vacio +MF)-peso crisol vacio] %peso seco muestra (gr)= [(peso crisol vacio + MS)-Peso crisol vacio]
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%Hmedo de la muestra = (Peso hmedo muestra peso seco muestra) x 100 Peso hmedo muestra
TRABAJO EN PLANTA DIDCTICA DE FERMENTACIONES Y LABORATORIO
NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
Bioseguridad es el conjunto de normas o actitudes que tienen como objetivo prevenir los accidentes en el rea de trabajo, es decir, a disminuir el potencial riesgo ocupacional. Estas Sern las normas que adoptar de forma responsable todo el personal que tenga acceso al laboratorio de BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL. Normas Preliminares para entrar al Laboratorio: Contar con autorizacin y la mejor disposicin al ingresar al Laboratorio. Usar elementos de proteccin personal como dotacin o bata verde para visitante. Entender que toda muestra que va a ser manipulada en el laboratorio del CBI debe ser considerada altamente txica, infecciosa o contaminante; trabajando bajo estos parmetros, el estudiante o personal que labora en el laboratorio, reconocer que su salud y la de las personas que trabajan con l son lo ms importante. Adoptar las normas de bioseguridad, ya que, constituyen reglas bsicas de comportamiento que debe adoptar el personal que est en contacto o manipula algn tipo de reactivo, microorganismo o sustancia que pueda ser nociva para la salud de los presentes en el laboratorio de Biotecnologa Industrial del CBI. Incurrir en el incumplimiento de estas normas conlleva a la aparicin de enfermedades, accidentes e incidentes, por esta razn se hace indispensable tenerlas en cuenta en cada procedimiento para ayudar a prevenir dichas enfermedades o en su defecto cualquier accidente dentro del laboratorio ocasionado por falta de informacin, orientacin o desconocimiento de las normas. Contar con reglamento de bioseguridad y designar un responsable para velar por su cumplimiento.
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Garantizar los medios de proteccin necesarios para preservar tanto el personal de laboratorio y a los usuarios como a las muestras biolgicas y se controlar el uso adecuado de los mismos. Disponer de los procedimientos y recursos necesarios para garantizar la adecuada descontaminacin y eliminacin del material desechable y de todos los residuales lquidos y slidos potencialmente infecciosos o contaminantes
DOTACIN DEL PERSONAL QUE ACCEDE AL LABORATORIO Usar bata de manga larga dentro de laboratorio, la cual debe estar completamente cerrada y se pondr antes de entrar y deber ser quitada inmediatamente al salir del laboratorio. Asegurarse de no presentar laceraciones, heridas abiertas u otras lesiones en la piel y en caso de que as sea cubrir la herida de manera conveniente. Las manos se deben lavar antes de ponerse los guantes y una vez se quiten. Usar guantes de ltex de buena calidad y de la talla adecuada para todo manejo de material biolgico y/o qumico. Usar tapabocas y gorro para los procedimientos realizados en el laboratorio. Cuando el personal del laboratorio manipule sustancias de tipo, corrosivo, txico; deber de forma obligatoria utilizar GAFAS de proteccin en los ojos, para evitar cualquier tipo de accidente. Debern usarse zapatos cerrados dentro del laboratorio para evitar el contacto de la piel con material contaminado o cualquier producto qumico peligroso, por derramamiento o salpicadura. Es preferible el uso de uso de pantalones largos ya que pueden impedir que sufra lesiones con materiales corto punzantes y con sustancias qumicas o contaminacin con materiales biolgicos. Emplee delantales impermeables cuando haya posibilidad de salpicaduras o contacto con fluidos de precaucin universal.
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No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes puestos
NORMAS DE TRABAJO Al ingresar al Laboratorio se debe apagar todo tipo de alarmas, celulares, beepers u otros equipos que puedan interrumpir la prctica. Realice limpieza y desinfeccin a las superficies, elementos y equipos de trabajo al final de cada procedimiento y al finalizar la jornada de trabajo. Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber, fumar y/o almacenar comida, as como cualquier otro tem personal (maquillaje, cigarrillos, etc.) dentro del rea de trabajo. Mantenga el cabello corto o recogido. Evitar tapar, enfundar, doblar o quebrar agujas, lminas de bistur u otros elementos corto punzante, una vez utilizados. Estos elementos deben ser directamente colocados en el guardin. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas. Bajo ninguna circunstancia se pipetear sustancia alguna con la boca, paralelo se utilizaran peras plsticas o pro pipetas automticas. Los tubos que se introduzcan en la centrfuga deben ir tapados, adems no se debe detener manualmente la centrifuga, ni destaparla antes de que empiece a girar. Evite el contacto con agujas y elementos corto punzantes.
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No devolver reactivos a los frascos originales, as no hayan sido usados. No permitir la entrada de personas ajenas al laboratorio y/o que no tengan sus implementos de bioseguridad adecuados. Al finalizar la prctica o procedimiento, el laboratorio debe quedar ordenado, el material ubicado de forma ordenada y los desechos generados correctamente clasificados. Cualquier accidente por pequeo que sea, debe comunicarse al instructor responsable de la prctica de laboratorio o en su defecto a la persona que est a cargo del mismo. Todos los desechos biolgicos, ya sean lquidos o slidos, tienen que ser descontaminados antes de su eliminacin. Emplear en todo momento las medidas de bioseguridad aqu expuestas.
MANTENIMIENTO DE LABORATORIO En el laboratorio no debe haber ninguna clase de plagas como cucarachas, roedores, hormigas entre otros. El laboratorio debe ser fumigado mnimo cada seis meses para evitar cualquier tipo de plagas. Se deben inspeccionar todos los equipos antes de su utilizacin y una vez finalizada la prctica. El suelo del laboratorio debe estar siempre seco, limpiando inmediatamente cualquier salpicadura de sustancia sea qumica o agua. Los pisos del laboratorio no deben barrerse ni encerarse solo se trapean con solucin de hipoclorito de Sodio (0.5 al 1.0%). Descontaminar la superficie de los mesones con hipoclorito de Sodio (0.51%). Material de vidrio reutilizable debe ser lavado en el laboratorio. Los reactivos deben quedar bien cerrados y almacenados. El laboratorio debe quedar en perfectas condiciones: o Llaves de agua y gas cerradas. o Luces apagadas. Equipos desconectados, vertederos libres de muestras o manchas de reactivos o con material por lavar, mesones limpios y descontaminados.
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Pisos libres de basura.
ASEPCIA Y DESINFECCION DEL LABORATORIO PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA Y DESINFECCION A) PROPSITO / PRINCIPIO Este procedimiento tiene como objetivo establecer la metodologa para la limpieza de las reas del laboratorio del Centro de Biotecnologa Industrial. B) APLICABLE A: reas generales del Laboratorio de Biotecnologa Industrial, como: mesones, equipos, pisos y otros. C) RESPONSABILIDAD Es responsabilidad del monitor de limpieza cumplir con lo especificado en el procedimiento, Jefe de los aprendices del rea y Responsable de Calidad, que supervisar la correcta realizacin del mismo. D) CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD Realice la limpieza utilizando la bata sanitaria, guantes, gorro y tapabocas. Tener cuidado de no humedecer equipos o partes de ellos que tengan alimentacin elctrica (computadoras, lmparas, toma corrientes y equipos de laboratorio). E) EQUIPAMIENTO No procede F) MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Guantes de goma Pao de tela Esponja Escoba Recogedor Trapeador Frazada Bolsas de nylon Botas de gomas Brillador
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G) PREPARACIN DE SOLUCIONES 1- HIPOCLORITO DE SODIO Mida en un baln aforado de 1L, 571 ml de hipoclorito de sodio al 5.25% y afore a 1L con agua destilada Agtelo suavemente de forma manual. C1.V1 = C2. V2 2- ALCOHOL INDUSTRIAL Mida en un baln aforado de1L 707 ml de alcohol industrial y afore a 1L con agua destilada. Agtelo suavemente de forma manual. C1. V1 = C2. V2 H) PROCEDIMIENTO El laboratorio cuenta con un programa de higiene que describe los procedimientos para el mantenimiento del orden, la limpieza y desinfeccin de locales y equipos, descrito en tres procedimientos bsicos para el control de agentes biolgicos, estos son: Se comenzar la limpieza por los mesones de transicin adicionndole extran para la limpieza para dejar lisa la membrana de las bacterias dejndolo durante 5 minutos, luego procedemos aplicarle el hipoclorito de sodio al 3% para poder hacer lisis a los microorganismos presentes, lo dejamos actuar durante 3 minutos, ya que hay bacterias acido resistentes que podran sobrevivir a ste primer procedimiento, procedemos a aplicarle alcohol al 70% hasta evaporar. Frecuencia de limpieza: Mesones y equipos: diario 2 veces al da Pisos: tres veces por semana.
Foto. Tomada En El Laboratorio De Biotecnologa Industrial Sena Palmira DESCARTE Se debe minimizar, separar y preparar la cantidad de residuos que se generen en el laboratorio para su recoleccin de acuerdo con los procedimientos especificados por el laboratorio.
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El laboratorio debe tener al menos tres canecas de basura, en las cuales se clasificaran de forma correcta los desechos generados por el mismo. Caneca roja, caneca verde y caneca gris. Clase de residuo contenido bsico color etiqueta Rotular con: Toda clase de vidrio, bolsas de No peligrosos reciclable plstico, embases de plstico sin Gris Plstico , vidrio contaminar. Reciclable Rotular con: No peligrosos ordinario Empaques de e inerte barrido, tela papel plastificado, Verde No peligrosos ordinario o inertes. Rotular con:
Compuestos de cultivos, mezclas de Peligrosos infecciosos microorganismos, medios de cultivo, Biosanitarios, qumicos Rojo agentes infecciosos o cualquier cito txicos. residuo contaminado por estos. Peligrosos Qumicos infecciosos Restos de sustancias qumicas y sus empaques o cualquier otro residuo Rojo contaminado con estos.
Riesgo Biolgico Rotular con:
Riesgo Qumico
PLANTA DE FERMENTACIONES La Planta Piloto de Fermentacin tiene como finalidad principal el desarrollo a escala semiindustrial de productos obtenidos a partir del cultivo de clulas y microorganismos, ya sean bacterias, hongos o levaduras.
Foto. Planta piloto de fermentaciones. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira.
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Cuando tenga puesto los elementos de bioseguridad tenga en cuenta las siguientes CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD: 5.1 SEGURIDAD GENERAL DE LA PLANTA Todas las personas que trabajan en la planta deben tener la responsabilidad de mantener el rea libre de derramamiento de lquidos y aceites, entre otros. Seguridad en el laboratorio y manejo de productos qumicos Seguridad en el laboratorio El manejo de las aguas residuales y de productos qumicos crea un potencial de peligro para la salud y la seguridad del personal de laboratorio. El peligro se origina en el momento en que los aprendices no tienen la precaucin de manejo adecuado con estos materiales, no leen los rtulos y no siguen las reglas y procedimientos de laboratorio. En el laboratorio siempre existe la posibilidad de derrame de productos qumicos lo cual requiere de una accin inmediata para corregir o minimizar el efecto de este peligro potencial. Algunas reglas de seguridad son las siguientes: Usar agentes qumicos siempre conociendo los principios bsicos, conociendo sus propiedades y saber como usarlos. Tener seguridad que el recipiente que contiene estos productos est debidamente tapado y rotulado con la fecha de preparacin y que contenga las notificaciones sobre peligro, entre otros. Leer las especificaciones cuidadosamente. Almacenar los qumicos de acuerdo con la peligrosidad, flamabilidad, explosividad, etc., en reas adecuadas para esto. Usar las ventilaciones existentes. Vestirse apropiadamente (guantes, bata y gafas, entre otros). Conocer los antdotos para los agentes qumicos venenosos, mantenindose a mano en caso de requerirse. Cuando se recojan las muestras, utilizar dispositivos propios para la colecta de ese material.
Seguridad con la salud Prevencin contra cadas.
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Mantenga todas las reas bien iluminadas y limpias. Recoja todos los objetos perdidos (herramientas, escaleras y mangueras, entre otros) Limpie cualquier derrame de aceite y de grasas.
Prevencin contra infecciones en general. Lave bien las manos. Use guantes cuando est recolectando muestras. Tome un bao y cmbiese de ropa antes de ir a casa. Use el tapabocas y las gafas. Otras Recomendaciones Usar la lgica cuando se requiera mover o levantar objetos pesados. Usar los equipos apropiados. No corra. LIMPIEZA CON SODA DE LOS BIORREACTORES PARA INICIAR UNA PROPAGACIN Enjuagar el propagador con agua. Adicionarle 30% de soda. Abrir la vlvula de vapor en la chaqueta. Subir la temperatura de 190 a 200. Esta temperatura se deja por 50 minutos y se activa el contador. Luego de vaporizada la soda se pasa para otro reactor. Luego se enjuaga con agua y el enjuagu se baja a la canal.
LIMPIEZA CON BACTERICIDA PARA LOS BIORREACTORES
Enjuagar el propagador con agua. Se le adiciona el bactericida segn lo convenido. Se abre la vlvula de vapor de la chaqueta. Se sube la temperatura a 190 a 200. Esta temperatura se deja por 30 minutos y se activa el contador. Luego de vaporizada el bactericida se pasa para otro reactor. El biorreactor queda listo y esterilizado. El biorreactor queda listo para preparar los medios de cultivo.
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LIMPIEZA EN LOS FERMENTADORES
Liquidar todo el fermentador. Abrir la vlvula del drenaje hacia la canal para liquidarlo lo del fondo y se lleva a la PTAR. Verter agua a presin por la parte superior del tanque para realizar el lavado por todas las paredes y el fondo. Luego se le abre la vlvula de agua que est pegada la tubera para realizar lavado al intercambiador de calor y tubera de recirculacin. Cuando el agua salga limpia se procede a mirar que el tanque este limpio esto demora ms o menos una hora. Medir con el equipo de gases que no tenga CO2. Lavar las partes muertas del fermentador que son el agitador, los mostradores, y comunicaciones. Luego con el tanque de soda que est en un 5% de concentracin se le mete soda por la parte superior del tanque. Hacerlo por una hora hasta que el fermentador tenga nivel con soda para recircularlo por el intercambiador de calor y la tubera. Pasar la soda nueva mente al tanque de soda para recuprala. La soda que no pasa que queda en el fondo se abre a la canal para neutralizarla y enviar a la PTAR. Verter agua por la parte superior para enjuagarlo por la tubera y el intercambiador de calor. Verter agua al fermentador hasta que tape las paredes y aplicarle el bactericida y recircular por 30 minutos con vapor. Bajar el bactericida a la canal y se avisa a la PTAR y queda listo.
SISTEMA DE TRATAMIENTO BIOLGICO EN LOS VERTIMIENTOS DE LAS FERMENTACIONES INDUSTRIALES PLANTA DIDCTICA PTAR DE LODOS ACTIVOS ANLISIS FSICO QUMICO DEL AGUA En nuestro planeta, el agua (H2O) es la nica sustancia que coexiste abundantemente en los tres estados fsicos posibles. Es nuestro nico lquido comn y el slido pura mas ampliamente distribuido, estando siempre presente en todas partes de la atmsfera suspendido en forma de partculas de hielo o sobre la superficie terrestre en diversos tipos de nieve y hielo. SOLIDOS TOTALES
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PRINCIPIO Los slidos totales en el agua incluyen los slidos suspendidos y los slidos disueltos. Para determinarlos se toma una cantidad conocida de muestra de agua y se seca completamente en un horno a 100 C. Los slidos remanentes son pesados y determinados como slidos totales en el agua. Este mtodo es aplicado para el agua de proceso usada en la destilera. SOLIDOS TOTALES DISUELTOS Y SOLIDOS SUSPENDIDOS Este mtodo es aplicable para el agua de proceso y para el agua de enfriamiento.
PRINCIPIO: Las partculas suspendidas presentes en el agua, son removidas por filtracin y el agua filtrada es secada en un horno. Los slidos remanentes despus del secado son los slidos disueltos. Estos son determinados y restados de los slidos totales. La diferencia da los slidos suspendidos totales. DUREZA DEL AGUA Este mtodo puede ser aplicado para todo tipo de agua de proceso, aguas subterrneas, aguas de ro etc. PRINCIPIO: Originalmente la dureza del agua fue definida como la capacidad del agua para precipitar el jabn. Los iones de Calcio y Magnesio o sus sales principalmente precipitan el jabn. Acidez Ph La acidez de un agua es una medida de la cantidad total de substancias cidas (H+) presentes en esa agua, expresados como partes por milln de carbonato de calcio equivalente. Se ha demostrado que un equivalente de un cido (H+) es igual al equivalente de una base (OH-). ALCALINIDAD Es una medida de la cantidad total de sustancias alcalinas (OH-) presentes en el agua y se expresan como partes por milln de CaCO3 equivalente. Tambin se hace as porque puede desconocerse cules son los lcalis presentes, pero stos son, al menos, equivalentes al CaCO3 que se reporte.
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DUREZA La DUREZA es una caracterstica qumica del agua que esta determinada por el contenido de carbonatos, bicarbonatos, cloruros, sulfatos y ocasionalmente nitratos de calcio y magnesio . la dureza es indeseable en algunos procesos, tales como el lavado domstico e industrial, provocando que se consuma ms jabn, al producirse sales insolubles. PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE LODOS ACTIVOS
POLITICAS DE ANALISIS DEL LABORATORIO
La poltica de los anlisis implementados, en la PTAR va sujeta a la normatividad internacional sobre el manejo de laboratorio y buenas prcticas de manipulacin con la ayuda de equipos de ltima tecnologa y capacitacin de sus analistas garantizando la confiabilidad de los mismos. A continuacin se procede a nombrar los equipos y reactivos que se trabajan:
EQUIPOS
SOLUCIONES Y REACTIVOS
Plancha de agitacin
Soluciones para anlisis de alcalinidad (HCL) 0.2%
Estufa para calentar muestras PH metro Oximetro buretas
AGV (NAOH) 0.05%
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Pipetas probetas Conos himmoff peras Balones volumtricos Agitador de madera
Fig .1 Algunos equipos del laboratorio de la PTAR
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ASPECTOS DE SEGURIDAD
Cuidados bsicos La planta de tratamiento anaerobia es potencialmente el rea de mayor peligrosidad en el tratamiento de aguas residuales, debido principalmente a la produccin de biogs, rico en gas metano, que es fcilmente combustible. El operador de la planta debe estar bien familiarizado con los problemas de esta rea, con los dispositivos de seguridad que se debern usar, con las debidas precauciones y con algunas reglas generales de seguridad industrial. Tambin se tiene el rombo de seguridad extintores tipo ABC, y SOFKLAN, DUCHA DE EMERGENCIA, RUTA DE EVACUACIN Y RED CONTRA INCENDIO. Fig 2. Extintores y ducha de emergencia
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Elementos bsicos de proteccin personal de los operarios Los operadores deben usar gafas de proteccin y mscaras para no inhalar los vapores de los componentes qumicos Guantes de ltex para manipulacin de reactivos Guantes anticidos Botas antideslizantes Traje de dos piezas anticidos Jabn desinfectante y alcohol Adems se cuentan con extintores de tipo ABC y sofkaflan Tambin los operarios cuentan con un control anual de exmenes generales que les realiza la empresa como: aspirometria, optometra, audiometra, y chequeos medico generales. Riesgos fisicoqumicos y biolgicos a los que estn expuestos los operarios de la PTAR.
RIESGOS QUIMICOS Manipulacin de soda caustica, cido fosfrico, rea, hipoclorito de Na, reactivos.
RIESGOS FISICOS Manipulacin de herramientas. Calor ambiental Motores en movimiento
RIESGOS BILOGICOS Manipulacin de lodos aerobios y anaerobios y vapores.homgos
DISEO DE PLANTA
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Altura: 2 metros Ancho:1,80 metros Tanques de alimentacin: la planta consta de dos tanques de ste tipo y tienen la funcin de acumular las aguas residuales provenientes del centro de Biotecnologa Industrial. tanque de lodos activados: posee una bomba de aire que satura el agua residual de oxgeno y de sta forma, de lugar a un filtro microbiano de descontaminacin biolgica y como resultado final del tratamiento se obtiene lodos activados sedimentados. tanque de sedimentacin: tiene como funcin principal sedimentar las sustancias que tienen una densidad mayor que la del agua. tanque de recibo: ste tanque es el receptor del agua tratada. Para lograr la adecuada aplicacin de las tcnicas de Biorremediacin, se llevan a cabo anlisis continuos del proceso que permiten llevar un control del funcionamiento y trabajo tanto de la planta como de los agentes biolgicos que participan en el tratamiento aplicado al agua residual originada en el SENA. El rendimiento o la capacidad de la planta para descontaminar el agua estn estimados en un 85-95%. De acuerdo a los tipos de microorganismos que tienen lugar en el tratamiento del agua residual as mismo se establecen y se identifican varias clases de plantas con reactores que mantienen las condiciones que permiten la propagacin de los mismos (reactores aerobios y anaerobios).
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La P.T.A.R del centro de Biotecnologa Industrial como componente innovador de de nuevos procesos sistematizados a escalas pilotos de los tratamientos biolgicos y biotecnolgicos, por tal motivo muestra uno de sus nuevos proyectos la planta de tratamientos de aguas residuales automatizada con una capacidad de 200 Lts de trabajo.
Prototipo de planta piloto automatizada 200 Lts.
Sistema de tratamientos biolgicos para residuos slidos COMPOSTAJE Es un proceso controlado y acelerado de descomposicin de las partes orgnicas de los residuos totalmente aerobio, dando lugar a un producto estable llamado compost.
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Imagen de apoyo de procesos de compostaje
6. DISEO METODOLGICO
5. Transferencia y acompaamiento hacia el proyecto objeto de la Investigacin Aplicada. 6. Permitir visitas tcnicas para desarrollar por observacin las competencias, desde el sector productivo. 7. Incluir Materias Primas y cepas Industriales en el marco de la evaluacin de los Bioprocesos. 8. Evaluacin de las conclusiones y aporte de recomendaciones hacia el Programa de Formacin. FASES DEL PROYECTO Y SUS ACTIVIDADES
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FASES DEL PROYECTO Anlisis y Planeacin
ACTIVIDADES DEL PROYECTO:
Cronograma ( En Meses)
IDENTIFICAR NECESIDADES DE ALTERNATIVAS NUTRICIONALES PARA LA ALIMENTACIN ANIMAL POR PROCESOS BIOTECNOLGICOS Y ACCIN MICROBIANA. ANALIZAR LAS MUESTRAS POR PROCEDIMIENTOS DE IDENTIFICACIN FSICA, QUMICA Y MICROBIOLGICA VALORANDO LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR A PARTIR DE DIFERENTES SUSTRATOS A ESCALA DE LABORATORIO SELECCIONAR LAS MATERIAS PRIMAS, INSUMOS, EQUIPOS Y PROCEDIMIENTOS DE CONTROL Y SEGUIMIENTO DE PARMETROS DE FERMENTACIN SEGN INSTRUCCIONES A NIVEL DE LABORATORIO EN LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR.
2.5
Ejecucin
EJECUTAR LA OPERACIN, TANTO A NIVEL DE LABORATORIO Y PLANTA PILOTO, CUMPLIENDO CON EL ESCALADO DE LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA. ANALIZAR LAS MUESTRAS POR PROCEDIMIENTOS DE IDENTIFICACIN FSICA, QUMICA Y MICROBIOLGICA VALORANDO LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR Y SUS VERTIMIENTOS Y SUBPRODUCTOS SLIDOS . 9.5
Evaluacin
VALIDAR LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR DE ACUERDO A LAS MATERIAS PRIMAS SELECCIONADAS Y CONDICIONES OPERATIVAS DE FERMENTACIN REPORTADAS POR EL LABORATORIO Y LA PLANTA PILOTO. VALORAR LA CONCENTRACIN DE PROTENA UNICELULAR COMO SUPLEMENTO ALIMENTICIO ANIMAL Y REMEDIAR POR PROCESOS BIOTECNOLGICOS LOS VERTIMIENTOS Y SUBPRODUCTOS SLIDOS PROVENIENTES DEL BIOPROCESO.
AMBIENTES DE FORMACIN REQUERIDOS o o o o Laboratorio de Biotecnologa Industrial Planta Piloto de Fermentaciones 20 L Planta Piloto de Tratamiento de Agua Residual- Lodos Activados 200 L Planta Piloto de Compostaje. 7. RESULTADOS MEDIO # 01 ENSAYO pH inicil BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C 2 4.5 24 ENSAYO pH inicil BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C 3 4.5 24
1 2 3 4
1.2x10e8 hrs 01:45 am 9x10e7 hrs 06:45 am 2.7x10e8 hrs 10:45 am 2,3x10e8 hrs 14:45
1 2 3 4
1.3x10e8 hrs 02:15 am 2.9x10e8 hrs 07:00 am 3.1x10e8 hrs 11:00 am 1.5x10e8 hrs 15:00
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C.C C.C C.C C.C C.C
5 6 7 8 9
2,7x10e8 3,9x10e8 7,7x10e8 5,2x10e8 5,5x10e8
hrs 18:45 hrs 23:45 hrs 04:25 am 08:26 am 12:25 pm
C.C C.C C.C C.C C.C
5 6 7 8 9
2,8x10e8 hrs 19:00 7.2x10e8 hrs 23:00 6x10e8 hrs 04:28 am 1,5x10e8 hrs 08:30am 1,6x108 hrs 12:30pm
45 40
35
30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 t (h) lnx
MEDIO # 03 ENSAYO 1 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C ENSAYO 2 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C hrs hrs 13:40 C.C C.C 4 5 1 2 3 se monto hrs 21:46 4.45 33 ENSAYO 3 pH inicial BRIX inicial pH final Brix final C.C C.C C.C C.C C.C 1 2 3 4 5 se monto hrs 22:04 4.45 33
se monto hrs 21:40 4.45 33
1.1x10e8 hrs 1 21:40 2 2.210e8 3.7x10e8 3 05:40 4.3x10e8 4 09:40 5 2.9x10e8 hrs 01:40 hrs
3x10e8 hrs 09:46 3.3x10e8 hrs 01:46 3.7x10e8 hrs 05:46 4.0x10e8 hrs 09:46 1,9x10e8 hrs
1.8x10e8 hrs 22:04 1.5x10e8 hrs 02:04 2.8x10e8 hrs 06:04 3.1x10e8 hrs 22:04 2.3x10e8
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C.C C.C C.C C.C
6 7x10e8 hrs 17:40 7 8 9
C.C C.C C.C C.C
13:46 1,8x10e8 hrs 6 17:48 7 8 9
hrs 02:04 C.C C.C C.C C.C 6 7 8 9 1,3x10e8
45 40 35 30
25
20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 t (h) c.c (g/l)
8. OBSERVACIONES Al realizar los estudios hablados anteriormente nos hemos dado cuenta de que se puede producir un producto novedoso y necesario que pueda cubrir una gran demanda industrial y ganadera a partir de residuos industriales. Gracias a los residuos industriales, al buen uso de los microorganismos y sus caractersticas se puede crear una nueva fuente de protenas para consumo animal. Por medio de la reutilizacin de los desechos industriales ayudamos a preservar el medio ambiente y bajar el ndice de contaminacin. De acuerdo a los estudios realizados este proyecto es viable y rentable. La produccin biotecnolgica de protena unicelular para consumo animal presenta mayor factibilidad utilizando subproductos agroindustriales como medios alternativos, los cuales son: El Micelio fngico debido a su tiempo de duplicacin mxima 2,78 h y la velocidad mxima de de crecimiento 1,135 cell/h, permitiendo un rpido crecimiento de nuestro
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microorganismo Cndida Utilis utilizando como sustrato alternito de este medio, comparando los medios alternativos. El Bagacillo presenta su tiempo de duplicacin mxima 3,38 h y la Porcinaza presenta un tiempo de duplicacin 5,71 h, siendo estos tiempos de duplicacin muy elevados para los ensayos productivos de biomasa celular, muchos mas lentos con la Saccharomyce cerevisiae. Las caractersticas como densidades de estos medios son factores que afectan stas.
9. DIVULGACIN
En el proceso de divulgacin los aprendices del TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLOGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA, participaron activamente en los eventos de promocin del programa, tales como, el da de la ciencia, convocatoria de divulgacin de proyectos y campaa masiva de materia orgnica (Se adjuntan los videos de sustentacin como anexo) Se recibieron tambin visitas de otros centros de formacin SENA de Cartagena, Martha, Pasto, Cali, Bogot, Direccin Nacional, colegios aledaos y dems Santa
En el desarrollo de esta parte de nuestro proyecto de formacin primero recibimos gran cantidad de material educativo, hago referencia a las charlas y/o clases dictadas por los diferentes instructores del rea de biotecnologa encabezadas por el Ingeniero Biotecnolgico Pedro de Jess Miranda Villamizar, posteriormente enfatizbamos sobre problemas existentes, se realizaban foros donde ponamos a prueba los conocimientos adquiridos y dando nuestros primeros pasos en este nuevo mundo para nosotros. Ya lo que respecta al rea tcnica todo fue cambiando, poco a poco, desde crear esa sensibilidad que algunos necesitaban para hacerles entender que nuestro proyecto de formacin era y es diferente a muchos de los cuales el SENA vena manejando, posteriormente se logr lo que se quera, esa consciencia que tanto requeramos fue llegando y con esta los resultados que todos anhelaban. Iniciamos empleando los conocimientos adquiridos, desde el reconocimiento de una levadura, hasta conocer las condiciones ptimas para su crecimiento, los niveles de estrs que esta podra tolerar, los agentes contaminantes que la llegasen a afectar en un proceso de produccin, las medidas que se deben tomar en caso de contaminacin, etc.. Inicialmente debimos realizar una caracterizacin de nuestra levadura, cual utilizaramos, que parmetros tendramos en cuenta y como sera su ptimo crecimiento.
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Realizamos listas de chequeo, procedimientos patrones de operacin, todo con el fin de garantizar el correcto uso tanto de materiales y reactivos de nuestro laboratorio como tambin un casi perfecto desarrollo de nuestro proceso, en la medida de lo posible claro est. En lo que respecta a la cepa, utilizamos la levadura Saccharomyces cerevisiae, hicimos aislamiento de la cepa, con el fin de purificarla y de esta manera garantizar unos niveles de asepsia bastante altos en nuestro proceso de fermentacin. Para lograr este proceso de purificacin, debimos aprender a distinguir cada uno de los materiales existentes en el laboratorio, desde cajas de petri, beaker, Erlenmeyer, tubos de ensayo hasta azas microbiolgicas, teniendo claro los conceptos adquiridos sobre aislamiento y purificacin de cepas dictados por los instructores en su debido momento sin olvidar los balances de materia que se deban emplear para la correcta formulacin del medio de cultivo, ya sea PDA, Plate count o el que se requiriera en su momento. Se debe previamente enjuagar con agua destilada todos los materiales a utilizar (en este caso de purificacin, cajas de petri, tubos de ensayo, pipetas, probetas y Erlenmeyer), se dejan secar y posteriormente se envuelven con papel kraft, luego de esto se llevan a un horno de esterilizacin donde estarn 3 horas a 120C. Previamente se ha realizado una esterilizacin en la zona estril que es donde se realizar la purificacin de la cepa, donde existen unas lmparas de rayos ultravioleta, donde esta luz promueve la desaparicin de las bacterias que puedan estar presentes en dicha zona, como siempre promoviendo la asepsia del lugar de trabajo. Una vez se lleva a cabo la purificacin de la cepa y se ha sembrado en la caja de petra por agotamiento, sta a su vez se lleva hacia un horno de incubacin donde la dejaremos de 24 a 48 horas dependiendo de su crecimiento (la caja de petriq debe estar sellada con emboplast, esto nos asegura que su contenido este aislado del ambiente), todo esto se realiza con los mecheros correspondientes, alcohol al 70% y dems cuidados que se deben tener para un correcto desenvolvimiento. Despus de pasadas las 48 horas se extraen las cajas de petriq de la incubadora y se pasa a realizar un conteo de colonias y posteriormente realizar una tincin de gram donde nos aseguraremos que nuestra cepa est libre de contaminantes. Una vez tenemos nuestra cepa podemos iniciar con nuestro proyecto como tal, donde utilizamos las diferentes materias primas que hemos escogido para de esta manera determinar con cul de estos subproductos iniciaremos la fermentacin. Previamente se ha realizado una caracterizacin de dicha materia prima, sta varia en los diferentes equipos de trabajos que existen en el laboratorio de biotecnologa industrial, entre las cuales encontramos, micelio fngico, bagacillo, bagazo, miel b, vinaza, porcinaza, etc. Se realizan diferentes anlisis fisicoqumicos como acidez, ATR, brix, hidrlisis acida o bsica, etc., con esto se busca mejorar la materia prima para que en nuestro proceso de fermentacin los resultados sean mucho mas ptimos. Posteriormente se preparan los medios de cultivo y/o trabajo implementando dichas materias primas a diferentes concentraciones, previamente se realizaron montajes a escala 3000ml para
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determinar cul sera el medio con mayor rendimiento es decir, el medio con mayor crecimiento celular. Para determinar ello, nos basamos en una serie de anlisis que se realizan en el laboratorio, ya que se debe controlar el proceso de fermentacin de principio a fin pues siempre buscamos que la asepsia durante nuestro proceso sea total, no se debe dejar nada a la deriva pues esto implicara una contaminacin que ms adelante desencadenara una prdida total o parcial en nuestro y proceso y esto conllevara a perdida de dinero por los reactivos utilizados en el acondicionamiento del medio como tambin del tiempo dispensado en dicha labor. Los anlisis que se realizan durante el proceso de fermentacin son, acidez voltil, ATR, AR, pH, brix, conteo celular, entre otros. Dichos parmetros se controlan cada 2 horas con el nimo de obtener los suficientes datos para al final tener un resultado ms aproximado a la realidad. Los controles de contaminacin que se hacen en el laboratorio de biotecnologa industrial son peridicos, donde se realizan pruebas al ambiente como pruebas en superficie para tener una idea de la contaminacin existente en dicho ambiente de aprendizaje y de esta manera determinar si se debe ya sea mejorar la limpieza del laboratorio o recurrir a otros mtodos de limpieza y desinfeccin de ambiente y superficie. Cabe denotar que durante nuestro proceso de fermentacin se generan tanto residuos lquidos y slidos que son perjudiciales para el medio ambiente y estaramos en vez de minimizar dicha problemtica, estaramos haciendo lo contrario que sera aumentar el impacto para las descargas que se realizan, para esto tenemos un plan de contingencia y este plan es: BIORREMEDIACIN (SISTEMA DE TRATAMIENTO BIOLGICO DE LOS VERTIMIENTOS EN LAS FERMENTACIONES INDUSTRIALES) Este es nuestro segundo proyecto de aprendizaje, donde buscamos dar una solucin viable a los residuos que por lo pronto generamos durante nuestro proceso de fermentacin, gran parte de los residuos lquidos han sido enviados a la PTAR de lodos activados y otra pequea para compostaje, y donde los residuos slidos si van directamente a compost, por medio de estos procesos se quiere regular, minimizar y/o mitigar el impacto ambiental que se pueda generar, de esta forma tambin podemos dar una solucin viable a los problemas que hoy por hoy estn dando las industrias, que por querer ser ms productivos se estn convirtiendo en un gran problema para el medio ambiente, es por esto que estamos nosotros, para mitigar dichos impactos, en el Centro De Biotecnologa Industrial, se realizaron dos jornadas de saneamiento bsico con el fin de determinar si el centro estaba cumpliendo o no con las exigencias de la norma que dictamina un lmite permisible de descargas hacia el alcantarillado, de no serlo estaramos expuestos a sanciones por parte de las entidades pertinentes, es por esto que tambin se mont una PTAR a escala piloto de lodos activados donde se quera encontrar un optimo desempeo de la misma, queriendo de esta manera llevarla a una escala mayor para de esta forma tratar las aguas del centro y por qu no, re circular esas aguas ya utilizadas para los oficios varios y de esta
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manera contribuir el ahorro de dineros que bien pudieren ser invertidos en otras obras que nos beneficien. En la PTAR el diseo estuvo a cargo del instructor Pedro Miranda y de algunos aprendices del rea, donde se busco la realizacin de la misma y dejarla a punto para que todo el grupo de alumnos pudieran tener una idea ms cercana a la realidad de lo que es una planta como estas y realizar obviamente los anlisis pertinentes en dicha labor, entre los cuales se encuentran, DBO5, slidos Sedimentables, slidos totales, dureza, acidez, alcalinidad, etc., una vez obtenido ese conocimiento se busc tener un plan de manejo ptimo en cuanto a la produccin de protena unicelular como la Biorremediacin de los residuos producidos. Por otra parte, en el rea de compostaje se llevo a cabo el tratamiento de residuos slidos producidos en el laboratorio de biotecnologa industrial como tambin los desechos producidos por la cafetera del centro como de las casas de algunos aprendices, se realizaron campaas de recoleccin de materia orgnica con el fin de obtener la suficiente cantidad para poder dar inicio a nuestro proceso de compostaje, se debieron tener en cuenta parmetros para dicho proceso, como la relacin carbono nitrgeno, la cepa a inocular y las variables de proceso previamente establecidas, control de pH, de temperatura y de humedad. Dichos parmetros fueron controlados constantemente con la finalidad de minimizar el impacto a la comunidad circundante como tambin evitar la aparicin de vectores que son indeseables en nuestro proceso. Previamente en laboratorio se realizaron pruebas de siembra del hongo trichoderma buscando la aceleracin en el proceso de compostaje y optimizar obviamente su rendimiento como tal.
Para finalizar podemos inferir que estos proyectos ya que son nuevos para nosotros tienen algo de dificultad, pero no son imposibles de realizar si se tienen en cuenta todas las normas de bioseguridad pertinentes y manejando un ambiente en la medida de lo posible estril o lo ms asptico posible para de esta manera no alterar los resultados de los anlisis que se realicen en un proceso determinado. ALCANCE Beneficiarios del proyecto Ingenieros, Supervisores de Plantas de Fermentacin, Sector agrcola, sector pecuario, sector industrial, aprendices y comunidad SENA. IMPACTO
SOCIAL: Mejorar la calidad de vida.
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ECONMICO: Optimizacin de las materias primas, equipos e insumos para la produccin. AMBIENTAL: Disminucin de las emisiones contaminantes, manejo sostenible de los subproductos, tratamientos biolgicos para el tratamiento de los residuos slidos y lquidos. TECNOLGICO: Transferencia tecnolgica de los procesos y Bioprocesos en la produccin biotecnolgica para las empresas.
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10. ANEXOS
CARTA SOLICITUD DE MATERIA PRIMACARTA SOLICITUD DE MATERIA PRIMA
REGIONAL VALLE SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD
Palmira, febrero 28 del 2011
Ingeniera Mayagez S.A Candelaria Asunto: Solicitud de materia prima Cordial Saludo: Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con numero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de las siguientes materias primas: Vinaza concentrada, Miel B y bagacillo esto con el propsito de complementar los resultados del proyecto de formacin: produccin de protena unicelular para el consumo animal, proyecto que adelanta que hace parte del proceso de formacin de estos destacados aprendices. Informacin de contacto: Ingeniero Ernesto Mendoza Instructor rea de biotecnologa Telfono: 3156779455
~ 114 ~
Agradezco la atencin prestada. Cordialmente. Ernesto Josu Mendoza
Palmira, Agosto 2 del 2011 Ingeniera Elizabeth Castillo Ventas Divisin Coproductos ecastillo@sucromiles.com.co Sucromiles 4310744 Recta Cali Palmira Km 18 Asunto: Solicitud de Materia prima Cordial Saludo: Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de Formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con Nmero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de la siguiente materia prima: 1 kilo de micelio fngico 5 galones de vinaza Esto con el propsito de complementar los resultados del Proyecto de Formacin: Produccin de Protena Unicelular con el objetivo de suplemento proteico el consumo animal por procesos biotecnolgicos.
~ 115 ~
Informacin de contacto: Ing. Pedro Miranda Villamizar Instructor rea de Biotecnologa Telfono: 3106796599 pjmiranda@misena.edu.co Agradezco la atencin prestada.
Palmira, Agosto 2 del 2011
Ingeniero Julin Parra Jefe Destilera Providencia japarra@ingprovidencia.com Ingenio Providencia E.S.D. Asunto: Solicitud de Materia prima Cordial Saludo:
~ 116 ~
Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de Formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con Nmero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de la siguiente materia prima: 5 galones de melaza 5 galones de Miel B 10 Kg de bagacillo 5 Kg de Lodos orgnicos del Decanter Esto con el propsito de complementar los resultados del Proyecto de Formacin: Produccin de Protena Unicelular con el objetivo de suplemento proteico el consumo animal por procesos biotecnolgicos. Informacin de contacto: Ing. Pedro Miranda Villamizar Instructor rea de Biotecnologa Telfono: 3106796599 pjmiranda@misena.edu.co Agradezco la atencin prestada.
Palmira, febrero 28 del 2011
~ 117 ~
Ingeniera Mayagez S.A Candelaria Asunto: Solicitud de materia prima Cordial Saludo: Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con numero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de las siguientes materias primas: Vinaza concentrada, Miel B y bagacillo esto con el propsito de complementar los resultados del proyecto de formacin: produccin de protena unicelular para el consumo animal, proyecto que adelanta que hace parte del proceso de formacin de estos destacados aprendices. Informacin de contacto: Ingeniero Ernesto Mendoza Instructor rea de biotecnologa Telfono: 3156779455 Agradezco la atencin prestada. Cordialmente. Ernesto Josu Mendoza
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Ingeniera Elizabeth Castillo Ventas Divisin Coproductos ecastillo@sucromiles.com.co Sucromiles 4310744 Recta Cali Palmira Km 18 Asunto: Solicitud de Materia prima Cordial Saludo: Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de Formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con Nmero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de la siguiente materia prima: 1 kilo de micelio fngico 5 galones de vinaza Esto con el propsito de complementar los resultados del Proyecto de Formacin: Produccin de Protena Unicelular con el objetivo de suplemento proteico el consumo animal por procesos biotecnolgicos. Informacin de contacto: Ing. Pedro Miranda Villamizar Instructor rea de Biotecnologa Telfono: 3106796599 pjmiranda@misena.edu.co Agradezco la atencin prestada.
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Ingeniero Julin Parra Jefe Destilera Providencia japarra@ingprovidencia.com Ingenio Providencia E.S.D. Asunto: Solicitud de Materia prima Cordial Saludo: Con el fin de desarrollar ptimamente los resultados de aprendizaje del programa de Formacin titulada Procesos Biotecnolgicos Aplicados a la Industria con Nmero de ficha de caracterizacin 87051, solicito comedidamente su colaboracin con el aporte de la siguiente materia prima: 5 galones de melaza 5 galones de Miel B 10 Kg de bagacillo 5 Kg de Lodos orgnicos del Decanter Esto con el propsito de complementar los resultados del Proyecto de Formacin: Produccin de Protena Unicelular con el objetivo de suplemento proteico el consumo animal por procesos biotecnolgicos. Informacin de contacto: Ing. Pedro Miranda Villamizar Instructor rea de Biotecnologa Telfono: 3106796599 pjmiranda@misena.edu.co Agradezco la atencin prestada.
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Informe Final de L Puc - Diciembre

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PRODUCCIN DE PROTENA UNICELULAR POR MICROORGANISMOS A PARTIR DE SUSTRATOS ORGNICOS

TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA

PRODUCCIN DE PROTENA UNICELULAR POR MICROORGANISMOS A PARTIR DE SUSTRATOS ORGNICOS

TECNOLOGO EN PROCESOS BIOTECNOLGICOS APLICADOS A LA INDUSTRIA

INFORME TCNICO FINAL

CARACTERIZACION DE MATERIAS PRIMAS MELAZA DE CAA

Figura 3. Miel B. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira

Figura 5 Bagacillo de caa. Tomada en el laboratorio de biotecnologa industrial

Imagen 2.Representacion grafica de la composicin del bagacillo de caa de azcar.

Imagen 3. Carbohidratos contenidos en el bagacillo de caa.

CEPA O BIOCATALIZADOR UTILIZADO EN EL PROYECTO Saccharomyces cerevisiae

METODOLOGIA ANALISIS Y PLANEACION FASE DE PROYECTO 1

Figura 2. Caracterizacin de melaza. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira

FASE DE PROYECTO 2 PRODUCCION IN VITRO PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

*28 a 30 C en incubadora. *Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina

*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de 1,8x107 - 1,0x108 neubauer inicial y final.

Pre adaptacin 2: Asada de cepa en 10ml de medio de cultivo. (24hr).

*28 a 30 C en incubadora. *Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina.

*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de neubauer inicial y 1,5x106 2,3x106 final.

*45C en bao mara, 5 minutos. *Agua destilada autoclavada. *Trabajo en cabina.

*Tincin de Gram. *Recuento en cmara de neubauer inicial y 3,9x107 1,0x108 final.

Foto 1. Tomada en el laboratorio de Biotecnologa Industrial Sena Palmira,

C.C C.C C.C C.C

3,9x10e8 7,7x10e8 5,2x10e8 5,5x10e8

hrs 23:45 hrs 04:25 am 08:26 am 12:25 pm

C.C C.C C.C C.C

se monto hrs 21:40 4.45 33

C.C C.C C.C C.C

6 7x10e8 hrs 17:40 7 8 9

C.C C.C C.C C.C

1,8x10e8 hrs 6 17:48 7 8 9

C.C C.C C.C C.C

10. BIBLIOGRAFA 11. ANEXOS

INTRODUCCIN A LA PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE PROTENA UNICELULAR

Levadura trula Levadura trula

ANIMALES BOVINOS OVINOS

DIGESTIBILIDAD (%) PB FB EE 90.0 90.0 80.0 89.0 99.0 78.0

ELN 90.0 95.0

3) ESQUEMA DE PRODUCION BIOTECNOLOGICA DE PROTEINA UNICELULAR A PARTIR DE PORCINAZA Y MIEL

Medios de propagacin a 100 ml, 500 ml, 3000 ml ( propagacin)

Medio en planta 14000 ml ( produccin)

10% de Porcinaza 2% de melaza El porcentaje restante viene dado por el agua.

Miel B 2 gr Densidad = 1,05 gr/cm3

14000 ml (2 gr/190 ml) = 147,3 gr de melaza

Hora 3:00 pm Grados Brix: 4 pH: 5 Conteo celular: 1,65*10E8

Resultado de Produccin protena unicelular a partir de porcinaza y miel B a escala de100 ml

Resultados de la produccin de protena unicelular a partir de porcinaza y miel B a 1000 ml

CARACTERIZACION DE LA LEVADURA TORULA (CANDIDA UTILIS)

Unidad % % Mcal/kg Mcal/kg % % % % % % COMO % DE MATERIA SECA

MS Levadura trula 93.0

Animal Levadura trula Levadura trula Bovinos Ovinos

ELN 90.0 95.0

Fsforo (como P2O5)

Potasio (como K2O)

Calcio (como CaO)

Magnesio (como MgO) Sulfatos (como SO4=)

4.3 ~ 4.5 1300

COMO ALIMENTO PARA ANIMALES UNIDADES VALOR

Humedad Protena Cenizas Grasas

% m/m % m/m bs % m/m bs % m/m bs

Fibra Calcio (como Ca)

Fosforo (como P) Densidad a granel

Uso como Alimento para Animales:

28 a 30 C en incubadora. Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina

Tincin de Gram. Recuento en cmara de 1,8x107 - 1,0x108 neubauer inicial y final.

28 a 30 C en incubadora. Medios estriles Cepa fresca. *Trabajo en cabina.

Tincin de Gram. Recuento en cmara de neubauer inicial y 1,5x106 2,3x106 final.

45C en bao mara, 5 minutos. Agua destilada autoclavada. *Trabajo en cabina.

Tincin de Gram. Recuento en cmara de neubauer inicial y 3,9x107 1,0x108 final.