EFECTO DEL FOTOPERIODO Y LA TEMPERATURA SOBRE LA CONCENTRACIN DE SAPONINA EN TRES ACCESIONES DE QUINUA (Chenopodium quinoa Willd.

) PROVENIENTES DE DIFERENTES LATITUDES

Jos Luis Gonzlez Urbina1, Jos Delatorre Herrera2

RESUMEN La qunoa posee saponina, que es un compuesto glucsido triterpnico (Jacobsen et al., 1997). La mayora de las variedades de semillas de quinua contienen componentes de sabor amargo (Oackenfull, et al., 1978), esto debido principalmente a las saponinas, que son solubles en agua, que se encuentra en las capas externas de la semilla. De todos modos, las saponinas se consideran un factor anti-nutricional y tienen que ser removidas de la cubierta de las semillas de quinua por lavado o pulido en seco, con el fin de disminuir los posibles efectos biolgicos negativos y la amargura (Ruales y Nair, 1992). Las saponinas de Chenopodium quinoa, son una mezcla compleja de glucsidos de alto peso molecular, constituidos por una parte polar (carbohidratos) y otra apolar aglucona triterpnicas que son derivados del cido oleanleico (Mastebroek et al., 2000; Vincken et al., 2006). Su contenido en el grano puede fluctuar desde 0,2 a ms de 3 mg/g, considerndose granos con un contenido menor a 0,7 mg/g dulces, y sobre 1,5 mg/g amargas (Koziol, 1990). La concentracin de saponinas vara con la variedad y las condiciones ambientales y oscila entre el 0,01% a 4,65% de materia seca (Koziol, 1992). Se han encontrado en todas las partes de la planta de quinua, como hojas, flores, frutos y semillas (Kuljanabhagavad et al. 2008). Adems el contenido de saponinas depender del estado de desarrollo en que se encuentre la planta, existe una alto contenido durante la floracin y disminuye en el llenado de grano (Soliz et al., 2002).

INTRODUCCION El contenido de saponina se ve afectada por estrs hdrico, el tipo suelo y en condiciones de un alto dficit de agua hay una disminucin del contenido de saponina (Sols-Guerrero, et al., 2002). El contenido de saponina tambin difiere de su estado fenolgico, en la etapa de ramificacin es baja su concentracin y alta en la etapa de floracin (Risi y Galwey, 1984). De acuerdo al fotoperiodo y la produccin de saponina, el largo del da durante las primeras etapas vegetativas no influye en la produccin de saponinas tanto en ecotipos de Salar y Sur-Costa (Latorre et al., 2008). Coincidentes, con los estudios de Koziol (1990), afirma que durante la etapa de crecimiento vegetativo las quinuas presentan un carcter dulce. Adems durante la etapa de madurez fisiolgica, el contenido de saponinas se incrementa de acuerdo a la etapa anterior, por lo que la duracin del fotoperiodo durante esta etapa produce el mismo efecto. Y el contenido de saponinas en los granos es significativamente mayor en los ecotipos Salar (Latorre et al., 2008) y en la etapa de grano maduro se encuentra que el fotoperiodo no tiene incidencia sobre el contenido de saponinas en todas las selecciones (Salar y SurCosta). Soliz et al., (2002), describe que el contenido de saponinas aumenta dependiendo de la etapa de desarrollo de la planta, y que a partir de la etapa de llenado de grano es cuando proporcionalmente ms aumenta el contenido de saponina.

Estudiante de Pre-grado Agronoma, Departamento de Agricultura del Desierto Y Biotecnologa. Universidad Arturo Prat. Iquique-Chile.
2

Dr. Ing. Agrnomo Universidad de Chile, Departamento de Agricultura del Desierto Y Biotecnologa. Universidad Arturo Prat. Iquique-Chile. PROYECTO FONDECYT N 1060281

El fotoperiodismo, es la respuesta de los vegetales a la longitud relativa de los perodos de luz y oscuridad y su orden de alternancia. (Hamner, 1944; Doorenbos, y Wellensiek, 1959; Salisbury, 1961; Zeevaart, 1976). El fotoperiodo como respuesta en quinua, ha sido descrito por diversos autores. Sivori, (1947) trabajando con cultivares del Ecuador encontr que se necesita 10 horas para poder inducir la antesis durante por lo menos 10 das. Mientras que los cultivos de quinua en Bolivia, la floracin depende de una amplia gama de fotoperiodos, y no necesariamente bajo iluminacin continua, esto quiere decir que cuando menor es el fotoperiodo mayor es la floracin, por lo que mientras ms corto ser el fotoperiodo, ms rpido florecen (Fller, 1949). La quinua parece ser cuantitativa de da corto, por el tiempo de antesis (Bertero et al., 2001). Donde la longitud del perodo vegetativo depende no slo de la duracin del da y la latitud de origen, sino tambin de la altitud (Risi y Galwey, 1984). Para ensayos realizados con un gran nmero de genotipos de diferentes latitudes, estos diferan en todo su estados fenolgicos (Risi, 1986; Jacobsen, 1997; Bertero et al., 1999). La sensibilidad fotoperidica para el llenado de grano cumple una funcin importante en la adecuacin de las plantas al ambiente, sobre todo al final de la poca de crecimiento. La sensibilidad permite un llenado de grano acelerado cuando el fotoperiodo se acorta. Sin embargo, este carcter limita la adaptacin de la quinua a latitudes mayores. Por lo tanto, la adaptacin de la quinua a mayores latitudes ha sido una seleccin por carencia o menor sensibilidad al fotoperiodo en el llenado de grano, usando cultivares de origen chileno (Bertero, 2001). El conocimiento de la variacin de sensibilidad al fotoperiodo y su base gentica, permitir obtener genotipos para la siembra en altas latitudes con poca o ninguna sensibilidad, o sembrar cultivares en los lugares tradicionales con mayor sensibilidad. La combinacin entre la sensibilidad al fotoperiodo y la temperatura varan de acuerdo al lugar de origen. Los cultivares originarios de valles andinos, donde el clima es ms clido, se caracterizan por una mayor sensibilidad al fotoperiodo y una fase vegetativa ms larga. Los cultivares del altiplano de Per y Bolivia, y especialmente los del nivel del mar en el sur de Chile, son menos sensibles al fotoperiodo, y tienen una fase vegetativa ms corta (Ruiz y Bertero, 2008). Esto indica que para caracterizar el crecimiento y desarrollo de la quinua, es necesario analizar la respuesta a la temperatura y al fotoperiodo en todas las etapas del crecimiento y con gran nmero de genotipos. La complejidad de la respuesta fotoperidica de la quinua es tal, que durante el llenado de grano y pre-antesis, pueden afectar al crecimiento de semillas; adems a misma respuesta es fuertemente afectada por la temperatura (Bertero, 2001). La mayor inhibicin del crecimiento de semillas y rendimiento, ocurri por una combinacin de temperaturas altas y das largos, y todas las etapas de crecimiento son sensibles al fotoperiodo (Ruiz y Bertero, 2008). Jacobsen et al., (1998) argumentan que a un fotoperiodo determinado, hay un aumento lineal por encima de la temperatura bsica hasta una temperatura ptima, y luego disminuye linealmente hasta cero desde las temperaturas ms altas (Ne Ritchie y Smith, 1991). El modelo ha mostrado respuestas confiables en cultivares seleccionados de diferentes orgenes (Bertero et al., 2008). No se ha cuantificado la variacin en la sensibilidad al fotoperiodo y a la temperatura para los procesos que determinan el inicio del llenado de grano entre los cultivares, pero se sugiere que los cultivares de nivel del mar en Chile son menos sensibles al efecto de altas temperaturas y das largos, lo cual puede explicar su mayor adaptacin a condiciones de latitudes altas. El objetivo de esta investigacin es determinar el efecto del fotoperiodo y la temperatura sobre la produccin de saponina en tres selecciones. Por lo tanto, la relacin entre desarrollo de las plantas y el medio puede alterar el crecimiento de una planta fuera de su regin de

origen, y los esfuerzos para introducir la quinua a otras regiones se han basado en la experiencia de cultivo de variedades de distintos orgenes. De acuerdo a las experiencias de diferentes autores (Simmonds, 1965; Risi y Galwey, 1984; Risi, 1984: Jacobsen, 1997; Bertero et al., 1999; Bertero, 2003; Ruiz y Bertero, 2008) el fotoperiodo y las respuestas de la temperatura al desarrollo de la quinua se afectan de forma significativa a su adaptacin. Adems las concentraciones de saponinas dependern del estado fenolgico del cultivo. Es por esto que la interaccin de estos factores podr tener una respuesta en la produccin de saponina. Si bien es cierto, se sabe que la produccin de saponinas depende de su estado fenolgico (Soliz et al., 2002), no se sabe cmo influyen el largo del da y la temperatura en la concentracin de ste compuesto. Debido a esto se ha postulado que el efecto conjunto de fotoperiodo corto y altas temperaturas producir un mayor contenido de saponinas en los granos en las selecciones de quinua. Las quinuas utilizadas son variedades de das neutros de Ecuador, variedades de das cortos del norte de Chile y variedades del sur de Chile como da corto. LOCALIZACIN DEL TRABAJO El presente ensayo se ubicar en el Campus Huayquique de la Universidad Arturo Prat, ubicado en 201618,33 S y 700749,95 O a una elevacin de 27 m.s.n.m., ubicado en la regin de Tarapac, Primera regin de Chile. En la actualidad la investigacin se encuentra en desarrollo con fecha termino marzo del ao 2010. MATERIALES Y METODOLOGIA Para la germinacin, crecimiento y desarrollo, se construyeron tres cmaras de 3,00 * 1,50 m. cada una. El fotoperiodo es controlado con luces de haluros metlicos y de sodio que suministran aproximadamente 350 mol de fotones m-2 s-1, medidos con un medidor de quantum marca Spectrum modelo QMSW. Las cmaras estn divididas para dos fotoperiodos de 8 horas y de 16 horas y a su vez cada cmara cuenta con rangos de temperaturas mximas de 205C, 305C y 405C, para cada cmara (figura 1).

Figura 1. Montaje de la estacin de trabajo en invernadero.

El establecimiento de las plantas de quinua se realiz sobre un sustrato inerte de perlita la cual se encuentran contenida en un recipiente plstico de color negro, para evitar la propagacin de microorganismos en la solucin nutritiva. La instalacin de la estacin de trabajo se encuentra en un invernadero de policarbonato de 7,5 x 15 m. en ste se instalaron las tres cmaras, para cada fotoperiodo por temperatura se dispusieron 15 contenedores plsticos de 5 litros de doble espacios, en el espacio superior de cada contenedor se encuentra el sustrato de perlita, y el espacio inferior se coloc la solucin nutritiva (Schlick y Bubenheim, 1993, modificado por Delatorre, 2008) para las variedades de quinua. El agua de riego es suministrado por un sistema semi-hidropnico (Delatorre, 2008), el oxgeno ser aplicado con un compresor elctrico. Para esto se utiliza agua filtrada con una conductividad elctrica de 0,0025 dS/m con un pH 6. En cada contenedor se dispone de un micro-tbulo que se encuentra conectado a un compresor, el cual suministra oxigeno a la solucin nutritiva. Las semillas utilizadas de quinua son de variedades Roja de Colchane, Regalona de Temuco y Tunkahuan de Ecuador. El detalle de los 18 tratamientos conformados por la interaccin de los tres factores se observan en el cuadro 1.

Cuadro 1. Tratamientos para las tres selecciones de quinua

Tratamiento T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T16 T17 T18

Seleccin ROJA AREG ECU-621 B04 AREG ECU-621 ROJA AREG ECU-621 B04 AREG ECU-621 ROJA AREG ECU-621 B04 AREG ECU-621

T temperatura 20C 20C 20C 20C 20C 20C 30C 30C 30C 30C 30C 30C 40C 40C 40C 40C 40C 40C

Foto perodo 8 horas 8 horas 8 horas 16 horas 16 horas 16 horas 8 horas 8 horas 8 horas 16 horas 16 horas 16 horas 8 horas 8 horas 8 horas 16 horas 16 horas 16 horas

Para los anlisis de laboratorio se cuenta con una balanza granataria marca Sartorius modelo BLI 5005 y analtica marca Sartorius modelo MC1. La conductividad elctrica de la solucin nutritiva empleada en el ensayo se medir con un conductivmetro marca Inolab modelo WTW. El pH de la solucin se medir con un medidor de pH marca Extech modelo pH100. La determinacin de las variables bioqumicas se realizar bajo el sistema HPLC que consiste en una bomba Waters 600 Controller, un inyector automtico Water 717 Autosampler, un detector de longitud variable Jasco (UV) 1570 y el programa de anlisis de datos Borwin versin 1.5. Para la medicin del contenido de saponina: Se caracterizarn tres estados fenolgicos, Crecimiento vegetativo hasta pre-antesis, antesis a llenado de grano y madurez fisiolgica a cosecha. Para el primer estado se medir la cantidad de saponina dividiendo a la planta en dos parte, raz y parte area, para el segundo estado se dividir la planta en cuatro partes; raz y la parte area en tres partes, primer tercio tallo, segundo tercio tallo y panoja. El tercer estado se dividir la planta en cuatro partes; raz y la parte area en tres partes, primer tercio tallo, segundo tercio tallo y granos. Para todos los estados se considerar las cinco repeticiones. Todas las muestras antes del anlisis sern liofilizadas y despus analizadas bajo el sistema HPLC. El protocolo para HPLC es el siguiente. 1) 2) 3) 4) 5 g de semilla entera en polvo en 25 ml de agua destilada y 25 ml de etanol. Agitacin magntica durante 2 hrs a temperatura ambiente, en shot cerrado Filtrar a 20 m (Filtro Wathman n4). Tomar del filtrado 15 mL y realizar peso seco por triplicado (5 ml c/u) realizar en pocillo de aluminio. 5) Medir los Brix. 6) Poner en placas de vidrio de dimetro de 6 cm, 5 ml del filtrado en cada una y secar a 100 C durante 3 das. 7) Re disolver el polvo obtenido a una concentracin de 30 mg/ml.

8) Filtrar con membrana de nitrocelulosa de 0,45 m 9) Guardar en eppendorf volmenes de 0,5 mL y Liofilizar. Las muestras sern liofilizadas con un Liofilizador marca Virtis modelo Benchtop K. La obtencin del agua para realizar los anlisis se obtendr de un nanopurificador de agua marca Barnstead modelo EASY pure II. Diseo experimental El diseo experimental que se utilizar en esta investigacin es un experimento factorial en un diseo completamente aleatorizado del tipo 3 x 2 x 3, considerando tres factores: el primero a tres niveles (variedades de quinua), el segundo a dos niveles (dos fotoperiodos) y el tercer factor a tres niveles (tres temperaturas desde pre-antesis). El modelo matemtico se describe a continuacin. Modelo aditivo lineal en trminos del experimento

Yijk

Fi Tj Sk (FS)ik (FT )ij (TS ) jk (FTS)ijk ijk

BIBLIOGRAFIA Bertero, D., King, W. y Halla, J. 1999. Modelling photoperiod and temperature responses of Flowering in quinoa (Chenopodium quinoa Willd.). Field Crops Research 63, pp. 19-34. Bertero, D; King R; y Halla, J. 2008. Photoperiod-sensitive development phases in quinoa (Chenopodium quinoa Willd.). Field Crops Res. 60: pp. 231-243. Bertero, D. 2001. Effects of Photoperiod, Temperature and Radiation on the Rate of Leaf Appearance in Quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) under Field Conditions. Annals of Botany 87, pp. 495-502. Delatorre, J. y Pinto, M. 2008. Importancia de los componentes inico y osmtico del estrs salino sobre la germinacin de cuatro selecciones de quinua (Chenopodium quinoa Willd). Agricultura Tcnica (enviada en mayo 2008). Doorenbos, J. y Wellensiek, S. 1959. Photoperiodic Control of Floral Induction. Laboratory of Horticulture, Agricultural University, Wageningen, Netherlands. Annual Review of Plant Physiology Vol. 10: pp. 147-184. Fller, H., 1949. Photoperiodic responses of Chenopodium quinoa and Amaranthus caudatus. Am. J. Bot. 36: pp. 175180. Hamner, K., 1944. Photoperiodism in plants. United States Department of Agriculture, Agricultural Research Administration, Ithaca, New York. Annual Review of Biochemistry, Vol. 13: pp. 575-590. Jacobsen, S.E; Mujica, A y Stolen, O., 1997. Tolerancia de la quinua a la sal durante la germinacin. Agron. Trop 48(3). pp. 359-366. Koziol M., 1990. Afrosimetric stimation of theshold saponin concentration for bitterness in quinoa. (Chenopodium quinoa Willd). J.Agric. Foos Sci. 54: pp. 211-219.

Mastebroek, H., Limburg, H., Gilles, T. y Marvin, H., 2000. Occurrence of sapogenins in leaves and seeds of quinoa (Chenopodium quinoa Willd.). J. Sci. Food Agr. 80 (1), pp. 152 156. Oakenfull, D. y Sidhu, G.S., 1990. Could saponins be a useful treatment for hypercolesterolaemia. Eur. J. Clin. Nutr. 44, pp. 7988. Risi, J., Galwey, N.W., 1984. The Chenopodium grains of the Andes: Inca crops for modern agriculture. Adv. Appl. Biol. 10, pp. 145216. Ruales, J. y Nair, B., 1992. Nutritional quality of the protein in quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) seeds. Plant Foods Hum. Nutr. 42, pp. 112. Ruiz, A. y Bertero, D., 2008. Light interception and radiation use efficiency in temperate quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) cultivars. Europ. J. Agronomy 29, pp. 144152. Salisbury, F., 1961. Photoperiodism and the Flowering Process. Department of Botany and Plant Pathology, Colorado State University, Fort Collins, Colorado. Annual Review of Plant Physiology Vol. 12: pp. 293-326. Schlick, G y Bubenheim, D. 1993. Quinoa: An Emerging"New" Crop with Potential for CELSS. NASA technical paper 3422. Solz-Guerrero, J.B. D. Jasso de Rodriguez, R. Rodrguez-Garca, J.L. Angulo-Snchez, and G. Mndez-Padilla. 2002. Quinoa saponins: Concentration and composition analysis. p. 110 114. In: J. Janick and A. Whipkey (eds.), Trends in new crops and new uses. ASHS Press, Alexandria, VA. Sivori, E. M., 1947. Fotoperiodismo en Chenopodium quinoa Willd. Reaccin de la cigota y gametofito femenino. Darwiniana 7: pp. 541551. Soliz, J., Jasso, D., Rodrguez R., Angulo, J., Mndez, G., 2002. Quinoa saponins: concentration and composition analysis. In: Janick, J., Whipkey, A. (Eds.), Trends in New Crops and New Uses. ASHS Press, Alexandria, VA, pp. pp. 110114. Vincken, J., Heng, L., Groot A. y Gruppen, H., 2007. Saponins, classification and occurrence in the plant kingdom. Phytochemistry 68. pp.275297 Zeevaart, J., 1976. Physiology of Flower Formation. Annual Review of Plant Physiology Vol. 27: pp. 321-348.