Phytotherapie (2007) 5: 249253 Springer 2007 DOI 10.

1007/s10298-007-0265-z

Article original Pharmacognosie

Huiles essentielles et bacteries resistantes aux antibiotiques

V.-G. de Billerbeck
Docteur en microbiologie Laboratoire Elios, 2, rue Crebillon, F-30900 Nmes, France Correspondance : labo.elios@free.fr

Resume : Lobjectif de ce travail est de faire un screening de lactivite antimicrobienne de 40 huiles essentielles sur deux souches bacteriennes resistantes aux antibiotiques (Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa), souvent responsables de maladies nosocomiales, dans le dessein de creer des formulations dhuiles essentielles pour lassainissement de lair en milieu hospitalier. ` S. aureus est une bacterie a Gram positif responsable dinfections des plaies, de la peau et du sang. P. aeruginosa ` est une bacterie a Gram negatif qui provoque des infections localisees dans lurine, le sang, les plaies et lappareil respiratoire. La methode de laromatogramme a revele que la croissance de S. aureus est inhibee par la plupart des huiles essentielles teste es. En revanche, seulement dix huiles essentielles Cinnamomum cassia, Cinnamosma fragrans, Eucalyptus citriodora, Eucalyptus dives, Eugenia caryophyllata, Melaleuca quinquinervia, Nepeta cataria, Pelargonium roseum, Salvia officinalis et Satureja montana ont inhibe le developpement de ` tre dinhibition superieur a ` P. aeruginosa avec un diame 13 mm. Mots cles : Huiles essentielles Resistance aux anti` biotiques Maladies nosocomiales Hygiene de lair

only 10 essential oils Cinnamomum cassia, Cinnamosma fragrans, Eucalyptus citriodora, Eucalyptus dives, Eugenia caryophyllata, Melaleuca quinquinervia, Nepeta cataria, Pelargonium roseum, Salvia officinalis and Satureja Montana inhibited P. aeruginosa growth, resulting in a zone of inhibition greater than 13 mm in diameter. Keywords: Essential oils Antibiotic resistance Nosocomial infection Air purification

Introduction
` Les huiles essentielles peuvent aider a lutter contre les infections se transmettant de plus en plus facilement dans ` les bureaux, les locaux publics, les ecoles, les creches et ` meme les hopitaux [5, 15]. Grace a leur pouvoir antiseptique, les huiles essentielles peuvent permettre ` dassainir lair ambiant ou les systemes de ventilation [13] et limiter ainsi la propagation des germes microbiens. En phytotherapie, les huiles essentielles sont utilisees tes antiseptiques contre les maladies pour leurs proprie infectieuses dorigine bacterienne, comme les bacteries endocanalaires [12] ou la microflore vaginale [1, 16], et dorigine fongique, comme les dermatophytes [3, 8, 9], les moisissures allergisantes [4] ou les champignons opportu nistes [17]. Elles presentent egalement des proprietes cytotoxiques [14] qui les rapprochent donc des anti septiques et desinfectants en tant quagents antimicrobiens ` a large spectre. De nombreuses bacteries sont actuellement ` devenues resistantes aux antibiotiques a large spectre de larsenal pharmaceutique. De plus, les antibiotiques sont inefficaces contre les maladies virales. La complexite chimique des huiles essentielles empeche le decodage de ` la part des germes pathogenes et diminue ainsi le risque de de veloppement de re sistances. En outre, les huiles essentielles agissent egalement sur le terrain du malade. Ainsi, les huiles essentielles de terrain augmentent la capacite defensive de lorganisme en reequilibrant la flore intestinale et les fonctions deficientes [18] ; elles

Essential oils and antibiotic-resistant bacteria

Abstract: The aim of this study was to test the antimicrobial activity of 40 essential oils against antibiotic-resistant bacteria (Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa) often responsible for nosocomial infections in order to create essential-oil formulations for air purification in hospitals. Staphylococcus aureus is a Gram-positive bacterium, responsible for wound, skin and blood diseases. Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative bacterium that causes blood, wound, urine and respiratory diseases. Agar diffusion assays revealed that S. aureus growth is inhibited by almost all the essential oils tested. By contrast,

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pourraient meme avoir une activite immunostimulante empruntant les stimuli olfactifs [7]. Quattend-on pour les ` employer dans nos hopitaux ou lon recense 30 % de maladies nosocomiales contre lesquelles la medecine traditionnelle na aucune solution ? Lobjectif de ce travail est de faire un screening de ` 40 huiles essentielles selectionnees dapres leur composition chimique comme potentiellement antimicrobiennes, ` afin de les tester vis-a -vis de souches bacte riennes resistantes aux antibiotiques et denvisager leur utilisation dans lassainissement de lair en milieu hospitalier.

Materiel et methodes Huiles essentielles

La plupart des huiles essentielles testees ont ete fournies par un courtier international, sauf lhuile essentielle de Cinnamosma fragrans qui provient dune distillerie ` artisanale a Madagascar et celle de Satureja montana qui provient de la cueillette de plantes sauvages dans les Alpes de Haute-Provence. Lanalyse chimique des huiles essen tielles a ete realisee par CPG/SM. Le nom latin et usuel des huiles essentielles ainsi que leur origine et leurs composes majoritaires sont regroupes dans le Tableau 1.
Fig. 1. Aromatogramme

Resultats
` Lantibiogramme realise avec S.aureus (Tableau 2) montre ` que cette souche est sensible a la plupart des antibiotiques ` ` ` testes, sauf a la polymixine, erytromycine, kanamycine et tobramycine. Cette souche ne manifeste aucune ` ` ` resistance vis-a-vis des huiles essentielles testees, puisque ` ` les aromatogrammes revelent que 35 huiles essentielles ` ont une activite de niveau sensible (D > 13mm) et les 5 restantes (citron, citronnelle, palmarosa, eucalyptus ` ` citronne et mandravasarotra) ont une activite de niveau ` intermediaire (D 10 mm) sur cette souche (Tableau 4). ` ` En revanche, la souche de P. aeruginosa testee est resistante ` ` a la plupart des antibiotiques, sauf a la colistine (tableau 3). ` Dapres les aromatogrammes (Tableau 4), cette souche est ` ` ` egalement resistante a 20 huiles essentielles, 10 huiles ` ` essentielles manifestent une activite de niveau intermediaire ` ` (Ajowan, cannelle de Chine, helichryse, menthe poivree, ` ` ` ` origan dEspagne, santal, terebenthine, thym a borneol, thym ` ` ` a geraniol et thym a carvacrol) et 10 huiles essentielles ont ` une activite de niveau sensible sur cette souche (cataire, ` ` cannelle de Chine, eucalyptus citronne, eucalyptus menthole, ` geranium bourbon, girofle, mandravasarotra, niaouli, sauge ` a petites feuilles et sarriette).

Souches bacte riennes

Les souches testees ont ete aimablement fournies par le laboratoire de bacteriologie, virologie et microbiologie industrielle de la faculte de pharmacie de Toulouse (Dr C. Roques) : ` Staphylococcus aureus (souche dorigine hospitaliere, antibiogramme en Tableau 2). Pseudomonas aeruginosa (souche dorigine ` hospitaliere, antibiogramme en Tableau 3) ;

Aromatogramme
Laromatogramme est une methode inspiree de lanti biogramme qui permet de determiner lactivite inhibitrice de croissance des huiles essentielles par la mesure du ` diametre dinhibition autour dun disque de cellulose impregne dhuile essentielle (Fig. 1). Une suspension de chaque germe est preparee en eau distillee sterile et ajustee ` 108 bacteries/ml. Chaque suspension ( 100 ml) est etalee a ` sur une bote de Petri de 90 mm de diametre. La surface tes est sechee sous hotte a flux laminaire avec le ` des bo ` couvercle des botes legerement ouvert. Des disques de riles de 6 mm de diametre sont ensuite ` papier buvard ste poses sur les geloses (un disque par bote). Ils sont de gnes dhuile essentielle. La lecture des diametres ` impre ` ` dinhibition D se fait apres 48 heures dincubation a letuve ` a 30 C. Les resultats sont exprimes selon trois niveaux dactivite : resistant (D < 6 mm), intermediaire (13 mm  D  6 mm) et sensible (D > 13 mm).

Conclusion et perspectives
Toutes les huiles essentielles testees inhibent la croissance de S. aureus. En ce qui concerne P. aeruginosa, les dix huiles essentielles plus inhibitrices sont : cataire, cannelle de Chine, eucalyptus citronne, eucalyptus menthole, geranium Bourbon, girofle, mandravasarotra, niaouli, ` sauge a petites feuilles et sarriette. Ces resultats montrent limportance de faire laromatogramme en fonction des germes cibles et linteret de faire des synergies dhuiles essentielles pour augmenter leur spectre dactivite anti-

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Tableau 1. Les huiles essentielles testees Nom latin Carum copticum Cinnamomum cassia Cinnamomum camphora Cinnamomum zeylanicum Cinnamosma fragrans Citrus aurantium Citrus bergamia Citrus limonum Corydothymus capitatus Cupressus sempervirens Cymbopogon citratus Cymbopogon martinii Cymbopogon nardus Eucalyptus citriodora Eucalyptus dives Eucalyptus globulus Eucalyptus radiata Eugenia caryophyllata Helichrysum gymnocephallum Lavandula angustifolia Leptospermum petersonii Lippia citriodora Litsea citrata Melaleuca alternifolia Melaleuca cajeputii Melaleuca quinquenervia Mentha piperita Nepeta cataria Pelargonium asperum Pinus pinaster Pinus sylvestris Rosmarinus officinalis Salvia lavandulaefolia Salvia officinalis Santalum album Satureja montana Thymus satureioides Thymus serpyllum Thymus vulgaris Thymus vulgaris Nom usuel Ajowan Cannelle de Chine Ravintsara Cannelle de Ceylan Mandravasarotra Petit grain bigarade Bergamote Citron jaune Origan dEspagne ` Cypres toujours vert Lemongrass Palmarosa Citronnelle de Ceylan Eucalyptus citronne Eucalyptus menthole Eucalyptus globuleux Eucalyptus radie Girofle ` Helichryse a capitules nus Lavande vraie Leptosperme citronne Verveine citronnee Litsee Tea tree Cajeput Niaouli Menthe poivree Cataire citronnee Geranium rosat (Bourbon) Terebenthine Pin sylvestre Romarin officinal Sauge dEspagne ` Sauge a petites feuilles Santal blanc Sarriette des montagnes ` Thym a borneol Serpolet ` Thym a geraniol ` Thym a carvacrol

Origine, partie utilise e

Inde, semences Chine, rameaux Madagascar, feuilles Madagascar, feuilles Madagascar, feuilles Paraguay, feuilles Cote dIvoire, zestes Bresil, zestes Espagne, sommite fleurie Maroc, rameaux Guatemala, herbe Inde, herbe Ceylan, herbe Vietnam, feuilles Australie, feuilles Chine, feuilles Australie, feuilles Madagascar, boutons floraux Madagascar, sommite fleurie France, sommite fleurie Australie, feuilles Maroc, feuilles Vietnam, baies Australie, feuilles Vietnam, feuilles Madagascar, rameaux France, partie aerienne France, sommite fleurie La Reunion, feuilles Portugal, resine Autriche, aiguilles France, sommite fleurie Espagne, sommite fleurie France, sommite fleurie Inde, bois France, sommite fleurie Maroc, sommite fleurie Albanie, sommite fleurie France, sommite fleurie France, sommite fleurie

Compose s majoritaires
` ` thymol, p-cymene, g-terpinene aldehyde cinnamique ` 1,8-cineole, sabinene, a-terpineol eugenol 1,8-cineole, monoterpenols linalol, acetate de linalyle ` limonene, linalol, acetate de linalyle ` ` ` limonene, b-pinene, g-terpinene ` ` Carvacrol, p-cymene, g-terpinene ` ` a-pinene, d-3-carene citral geraniol, acetate de geranyle geraniol, citronellal, borneol, trans-methylisoeugenol citronellal, citronellol, isopulegol, citronellate de citronellyle ` piperitone, a-phelandrene, ` p-cymene, 4-terpineol ` 1,8-cineole, limonene 1,8-cineole, a-terpineol eugenol, acetate deugenyle, ` b-caryophyllene ` ` limonene, b-caryophyllene, ` ` a-humulene, b-pinene linalol, acetate de linalyle citral, citronellal, citronellol ` ` citral, limonene, b-caryophyllene ` citral, limonene ` 1,4-terpineol, g-terpinene ` 1,8-cineole, limonene 1,8-cineole, viridiflorol menthol, menthone geraniol, nerol, citronellol, citrals geraniol, citronellol ` ` a et b-pinenes, limonene, ` b-caryophyllene ` ` a et b-pinenes, limonene ` 1,8-cineole, camphre, pinenes, ` camphene ` 1,8-cineole, camphre, a-pinene ` 1,8-cineole, camphre, camphene, ` pinenes ` santols, santalenes, bergamotol ` ` carvacrol, g-terpinene, p-cymene borneol, carvacrol, thymol, ` ` camphene, b-caryophyllene thymol, carvacrol, geraniol, ` p-cymene geraniol, acetate de geranyle ` ` carvacrol, p-cymene, g-terpinene

` ` Tableau 2. Antibiogramme realise sur la souche hospitaliere de Staphylococcus aureus VA S FOS S FA S RA S SXT S PEF I TEC S PB R L S PT S SP S E R FT S K R TM R GM S

S : sensible (D > 13 mm), I : interme diaire (6 mm < D < 13 mm), R : re sistant (D < 6 mm). VA : Vancomycine, FOS : Fosfomycine, FA : Acide fusidique, RA : Rifampicine, SXT : Sefotaxi, PEF : Pefloxacine, TEC : Techoplanine, PB : Polymixine, L : Lincomycine, PT: Pristinamycine, SP : Spiramycine, E : Erytromycine, FT : Furanes, K : Kanamycine, TM : Tobramycine, GM : Gentamycine.

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Tableau 3. Antibiogramme realise sur la souche hospitaliere de Pseudomonas aeruginosa TIC R PIP R TCC R CTX R TZP R FEP R CAZ R ATM R IPM R CS S PEF I CIP I AN R TM I GM R K R

S : sensible (D > 13 mm), I : interme diaire (6 mm < D < 13 mm), R : re sistant (D < 6 mm). TIC : Ticarcilline, PIP : Piperacyline, TCC : Ticar-Ac.Clav., CTX : Cefotaxine, TZP : Piper+Tazo-Bactam, FEP : Cefepime, CAZ : Ceftazidine, ATM : Aztreonam, IPM : Imipenem, CS : Colistine, PEF : Pefloxacine, CIP : Ciprofloxacine, AN : Acide nalixidique, TM : Tobramycine, GM : Gentamycine, K : Kanamycine.

` ` ` Tableau 4. Resultats des aromatogrammes : Diametre dinhibition en mm apres 48 heures dincubation a 30 C Huiles essentielles Souches Ajowan Bergamote Cajeput 30 <6 > 40 <6 Cataire 35 15

` Cypre s Cannelle Ceylan

15 <6 20 8

Cannelle Citron Chine 36 15 12 <6

Citronnelle Ceylan 10 <6

Eucalyptus citronne 9 20

S. aureus > 40 P. aeruginosa 10

Huiles essentielles Souches

Eucalyptus Eucalyptus Eucalyptus Ge ranium Girofle He lichryse menthole globuleux radie Bourbon
> 40 <6 > 40 <6 30 15 30 25 30 12

Lavan devraie 35 <6

Lemongrass > 40 <6

Leptosperme citronne > 40 <6

Litse e
> 40 <6

S. aureus > 40 P. aeruginosa 20 Souches

Huiles essentielles Menthe poivre e Niaouli > 40 15 Origan PalmadEspagne rosa 30 10 12 <6 Petit grain 20 <6 Pin sylvestre 30 <6 Ravint sara 20 <6 Romarin Mandravacamphre sarotra 30 <6 10 15 Sauge dEspagne 35 <6

S. aureus > 40 P. aeruginosa 10

Huiles essentielles Souches

` Sauge a petites feuilles

Santal

Sarriette

Serpolet

Tea tree 28 <6

` Te re benthine Thym a borne ol

18 10 40 10

` ` Thym a Thym a ge raniol carvacrol

30 10 30 10

Verveine citronne e > 40 <6

S. aureus 35 P. aeruginosa 15

20 10

> 40 15

35 <6

microbienne et garantir le confort olfactif. En effet, la ` diffusion atmospherique dhuiles essentielles a phenols conseillee parce quelles peuvent pures est fortement de provoquer lirritation des muqueuses respiratoires. Il est donc recommande de diffuser ces essences dans une base de lavande ou lavandin ou en interaction avec dautres huiles essentielles sans phenols. Il faut egalement eviter les ` huiles essentielles a cetones, qui sont neurotoxiques. Des essais grandeur nature ont ete par la suite entrepris dans le dessein de reproduire les conditions dutilisation des huiles essentielles in situ [6]. Lhuile essentielle de lavande a ` ete diffusee dans une infirmerie avec un diffuseur a effet venturi permettant une diffusion programmee des huiles essentielles. La mesure de la biocontamination de lair a ete ` mesuree avec un aerobiocollecteur, avant et apres diffusion de ` lhuile essentielle de lavande. Apres douze jours de diffusion, nous avons constate une diminution des bacteries et des champignons dans lair respectivement de 50 et 70 % par

rapport au denombrement avant diffusion, ce qui indique un riostatique et fongistatique de lhuile essentielle de effet bacte lavande. Recemment, des chercheurs anglais de la Manchester Metropolitan University ont egalement teste pendant neuf ` mois leffet des huiles essentielles sur les bacteries a la ` source dinfections nosocomiales a lunite des grands brules de lhopital de Wythenshave en Angleterre [10]. Dans deux ` chambres ou un diffuseur dhuiles essentielles a ete installe, ils ont note une diminution de 90 % des bacteries dans lair et une reduction du nombre dinfections dans le service. De plus, aucun cas dinfection au staphylocoque dore resistant ` a la methicilline (SARM) na ete rapporte. ` Cette etude in situ confirme les resultats deja constates in vitro avec les huiles essentielles de tee tree, thym, ` menthe, lavande et genevrier vis-a-vis de souches resis tantes aux antibiotiques : SARM et EVR (enterocoque ` resistant a la vancomycine) [11].

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Des resultats encourageants ont ete egalement menes au service de surveillance continue du CH de Sarlat avec lhuile essentielle de Cinnamomun camphora [2]. Ces premiers essais in vitro et in situ sont prometteurs. Des etudes complementaires sont prevues afin de deter miner leffet antibacterien et antifongique dune formula` tion dhuiles essentielles a long terme dans le dessein de valider son utilisation dans lassainissement de lair en milieu hospitalier (hall daccueil, salles dattente, chambre de malades, salles de reanimation...).

6.

7. 8. 9.

Remerciements
Lauteur remercie la collaboration du Laboratoire du genie de lenvironnement industriel et le soutien de lIncubateur ` technologique de lE cole des Mines dAle s pour la realisation de ce travail, ainsi que le partenariat avec la societe Versane pour la mise en place des essais in situ.

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Bibliographie
13. 1. Arnal-Schnebelen B, Hadji-Minaglou F, Peroteau JF, et al. (2004) Essential oils in infectious gynaecological diseases: statistic study on 658 cases. International Journal of Aromatherapy 14: 192-7 ` 2. Blanchard JM (2007) Cinnamomum camphora a cineole (ravintsara), une plante au service de la prevention des infections nosocomiales en milieu hospitalier ? Phytotherapie 5(1): 15-20 3. Chaumont JP, Leger D (1989) Proprietes antifongiques de quelques phenols et de composes chimiquement voisins, relation structure activite. Plant Med Phytother 23: 124-8 4. Chaumont JP, Le ger D (1992) Lutte contre les moisissures allergisantes des habitations. Proprietes inhibitrices de lhuile essentielle de geranium Bourbon , du citronellol, du geraniol et du citral. Ann Pharm Fr 50: 156-66 ` 5. De Billerbeck VG, Roques CG, Vaniere P, Marquier P (2002) Activite ` antibacterienne et antifongique de produits a base dhuiles

14.

15. 16.

17.

18.

` essentielles. Hygienes (revue officielle de la Societe francaise ` ` dhygiene hospitaliere) 10: 248-51 De Billerbeck VG (2006) Les Huiles essentielles et les bacteries resistantes aux antibiotiques Communication orale In : Aroma therapie et huiles essentielles , XVIIe Journee universitaire de phytotherapie organisee par lAMPP, Paris, 18 juin 2006 Inouye S, Abe S (2007) Nouvelle approche de laromatherapie anti infectieuse. Phytotherapie 1: 2-4 Kishore N, Mishra AK, Chansouria JPN (1993) Fungitoxicity of essential oils against dermatophytes. Mycoses 36: 211-5 Lima EO, Gompertz OF, Giesbrecht AM, et al. (1993) Antifungal activity of essential oils obtained from plants against dermatophytes. Mycoses 36: 333-6 Morissette C (mai 2007) Des huiles essentielles pour chasser les bacte ries des ho pitaux ? Article publie sur Internet : www.passeportsante.net qui cite article original : www.mmu.ac.uk Nelson RRS (1997) In vitro activities of five plant essential oils against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and vancomycin-resistant Enterococcus faecium. J Antimicrob Chemother 40: 305-6 Pellecuer J, Jacob M, Simeon Bouchberg M, et al. (1980) Essais dutilisation dhuiles essentielles de plantes aromatiques medi terraneennes en odontologie conservatrice. Plant Med Phytother 14: 83-98 Pibiri MC (2005) Assainissement microbiologique de lair et des ` ` systemes de ventilation au moyen dhuiles essentielles, these de doctorat, EPFL, Lausanne, Suisse Sivropoulou A, Papanikolaou E, Nicolaou C, et al. (1996) Antimicrobial and cytotoxic activities of oregano essential oils. J Agr Food Chem 44: 1202-05 Tonneau M (2007) Infections nosocomiales : des huiles essentielles en prevention. Sante magazine (375): 92-3 Viollon C, Leger D, Chaumont JP (1993) Activites antagonistes in ` vitro de certains composes volatils naturel vis-a-vis de germes de la flore vaginale. Plant Med Phytother 26: 17-22 Viollon C, Chaumont JP (1994) Antifungal properties of essential oils and their main components upon Cryptococcus neoformans. Mycopathologia 128: 151-3 Willem JP (2002) La diffusion atmospherique. In : Les Huiles essentielles : medicine davenir. Ed. Le Dauphin, Paris, pp. 265-73