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2011
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Operacin de CCF
El adsorbente se mezcla con un aglutinante, a menudo yeso; esta mezcla se suspende en agua y se deposita sobre una placa de vidrio o sobre una superficie plana rgida, metlica o de un material plstico por medio de un dispositivo embadurnador apropiado. Al secarse, la suspensin queda adherida a la placa de vidrio, bien directamente o por efecto de un aglutinante, como una capa delgada y rugosa de adsorbente de un espesor de 0.1 a 2 mm. Esta capa puede utilizarse en cromatografa en forma similar a una hoja de papel. La separacin depende de las propiedades adsorbentes de la capa, tal como si el adsorbente estuviera rellenando una columna.
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Ejemplo de aplicacin.
Mecanismos de separacin
Adsorcin Reparto Intercambio inico Exclusin por tamao
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El proceso de adsorcin
Solvente hexanos ciclohexano tolueno Eter dietlico Acetato de etilo Cloruro de metileno acetona metanol agua
Constante dielctrica 1.89 2.02 2.38 4.34 6.02 8.93 20.7 32.7 80.1
Diagrama que relaciona la polaridad de la muestra con la del solvente y la actividad del adsorbente para una buena separacin por CCF.
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Ejercicio:
Los siguientes fenoles fueron analizados por CCF en Slica Gel G usando una mezcla de tolueno, metanol y cido actico (10:2:1) como fase mvil. los valores de Rf medidos fueron: 0.20, 0.41, 0.63, 0.84. Indique el valor de Rf que corresponde a cada estructura.
salicilaldehido
Galato de etilo
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Adsorbentes y otros separadores cromatogrficos Slica Gel: Para separar: aldehdos, cetonas, alcaloides, azcares, fenoles, esteroides, terpenoides, cidos grasos y aminocidos. Cuando la slica gel no se activa por calor, contiene agua suficiente para que las separaciones ocurran por un mecanismo de reparto.
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Adsorbentes y otros separadores cromatogrficos Celulosa y resinas cambiadoras de iones: Se emplean en la cromatografa de capa fina por intercambio inico y las resinas se usan tambin para separacin de compuestos orgnicos por mecanismo de reparto.
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Adsorbentes y otros separadores cromatogrficos Aglutinantes: Su objeto es retener la capa del adsorbente sobre la placa; el ms comn es el yeso (sulfato de calcio monohidratado), que se aade a los adsorbentes en un 10 a 15%. Otro es el almidn que se aade en cantidades de 1 a 3%.
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Preparacin de Placas
Aplicador Kensaco Espesores mltiples y compuertas intercambiables: capas de 250, 275, 500, 1500 y 2000 m de espesor. Compuerta para capas de espesores de 50 a 3000 m en etapas de 50 m. Valores de Rf constantes dentro de un intervalo de espesor razonablemente amplio (10 a 20 m) Compuertas con gradiente de espesor. Aplicadores con separadores de adsorbente, para dos a cinco secciones paralelas de diferentes capas de adsorbentes sobre la misma placa. Aplicador Camag: Estacionario, la placa se desplaza por debajo del aplicador. Se producen placas de 300 a 500 m de espesor y durante el secado se encoge la capa a 200-250 m. Preparacin de portaobjetos por sumergimiento en suspensin adsorbente. de
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Preparacin de Placas
Secado: Slica gel o almina, son secadas durante 15 minutos manteniendo el soporte en posicin vertical. Despus se seca en posicin vertical en un horno durante 1 a 2 h a 10-120 C. Actividad determinada efectuando la cromatografa de una mezcla patrn de colorantes (azobenceno, p-metoxiazobenceno, paminoazobenceno, sudn III y sudn IV) o mediante sustancias del tipo de las que se desean separar.
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Aplicacin de la muestra
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Reactivos cromgenos utilizados en las CCF CCF, recomendable, rociado de la cromatoplaca con el reactivo. Hacerlo en campana de extraccin y a una distancia de 20 a 30 cm. Los cromatogramas deben examinarse con luz UV, (254 nm y 360 nm) antes y despus de la aplicacin de los agentes cromgenos. Agentes cromgenos permiten localizar en el cromatograma en papel de 1 a 10 g de compuesto y en cromatogramas en capa fina, de 0.1 a 1 g.
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Esteroides y Esteroles:
Benceno o benceno-acetato de etilo (9:1 8:2), (Slica gel G) Cloroformo-etanol (96:4), (almina) Acetato de etilo-ciclohexano (mezclas diversas), (cido silcico aglutinado con almidn) Benceno-cloroformo (9:1), (Slica gel G)
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Terpenoides
Hexano o hexano-acetato de etilo (85:15), (cido silcico aglutinado con almidn) Benceno o mezclas de benceno-ter de petrleo o etanol (almina) ter isoproplico o ter isoproplico-etanol (5:2 o 19:1) (Slica gel G)
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Aceites esenciales
Benceno-cloroformo (1:1), (Slica Gel G) ter de petrleo (Slica gel G)
Cardenlidos
Cloroformo-piridina (6:1), (Slica Gel G)
cidos grasos
ter de petrleo-ter isoproplico-cido actico (70:30:1), (Slica Gel C) Cloroformo-ter de petrleo (Almina)
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Disolventes usados en la CCF de algunos grupos de compuestos orgnicos (Relacin v/v) Vitaminas
Metanol-tetracloruro de carbono-xileno, cloroformo (almina) Cloroformo-ter de petrleo (Almina) Metanol, propanol o cloroformo (gel de slice G)
Alcaloides
Cloroformo o etanol o hexano-cloroformo (3:7) ms 0.05% dietilamina (Almina) Benceno-etanol (9:1), (Slica Gel) Cloroformo-acetona-dietilamina (5:4:1), (Slica Gel G)
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Separacin I: Slica gel GF Fase mvil: Benceno Revelador: fosfomolibdato, 10 min, 100C Anisaldehido-cido sulfrico, 10 min 100C
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Separacin 2: Fase estacionaria: Slica Gel G Fase mvil: cloroformo-benceno (75+25) Revelador: fosfomolibdato, 10 min, 100C
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Separacin 3: Fase estacionaria: Slica Gel G Fase mvil: benceno-Acetato de etilo (70+30) Revelador: anisaldehido-Acido sulfrico, 10 min, 100C
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Bioautografa
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Anlisis Cuantitativo
1) In situ
Densitmetro
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CCF preparativa
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