La raction antigne /anticorps

I_ La liaison antigne-anticorps
1) Les antignes Ces molcules, normalement trangres l'organisme, portent des pitopes de structure particulire et de petite taille. Ils sont reconnus par les sites de liaison des anticorps. Il peut avoir diffrentes valences (= nombre d'pitopes ). 2) Les anticorps Ce sont des glycoprotines qui ont une structure de base en forme de Y, dont les paratopes, spcifiques d'un antigne, sont variables d'un anticorps l'autre. Ils sont forms des rgions CDR ( 1, 2 et 3 ) des chanes lourdes et lgres. La partie constante comporte des fonctions effectrices. Ils ont des valences diffrentes.

A. Molcules

B. Forces attractives intramolculaires

Ce sont toujours des liaisons non-covalentes qui lient les paratopes et les pitopes. Ces liaisons, d'nergie faible mais en grand nombre, permettent une liaison facile et stable entre l'antigne et l'anticorps. Les liaisons permettant la formation du complexe sont des liaisons hydrognes, lectrostatiques, de Van der Waals et hydrophobes. Ces dernires sont souvent abondantes entre le paratope et l'pitope, elles peuvent former jusqu' 50 % de l'nergie totale de liaison.

C. Complmentarit des formes

Afin que se forment ces liaisons, l'pitope et le paratope doivent avoir une bonne complmentarit strique pour que le maximum d'atomes soient en contact.

D. Notion d'affinit
L'affinit est dfinie comme la somme des forces de liaison et de rpulsion entre un pitope et un paratope. Kaffinit pi + Para piPara

E. Notion d'avidit ( ou affinit fonctionnelle )

L'affinit est une valeur thorique car, en ralit, il y n'a jamais d'anticorps libre, ni d'antigne libre. On utilise alors l'avidit qui est la force avec laquelle un anticorps multivalent lie un antigne multivalent. L'avidit est donc largement

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suprieure la somme des affinits. On observe ainsi que l'avidit augmente trs fortement avec la valence de l'anticorps. L'avidit conditionne la rapidit de la formation du complexe antigne / anticorps. Elle dpend de l'affinit des paratopes, mais aussi de la valence de l'antigne et de l'anticorps et des conditions du milieu ( temprature, pH et force ionique ).

F. Spcifict des anticorps

Un anticorps ne peut se lier qu' un pitope particulier. Voici quelques expriences : Antignes introduits Anticorps scrts Systme srologique 1 antigne 1 pitope 1 anticorps Simple 3 antignes 1 pitope chacun 3 anticorps Simple 1 antigne 3 mmes pitopes 1 anticorps Multiple 1 antigne 3 pitopes diffrents 3 anticorps Multiple Un systme srologique est simple si le nombre d'anticorps correspond au nombre d'pitopes, sinon il est multiple.

II_ L'immunoprcipitation
A. Prcipitation en milieu liquide
1) Test de l'anneau ( ring test ) C'est un test qualitatif. On introduit dans un tube des antignes et des anticorps et on laisse reposer. Ils vont lentement diffuser dans le milieu, crant des gradients de concentration. Lorsqu'ils sont l'quivalence, c'est--dire qu'il y a autant de paratope que d'pitopes, ils forment des complexes et prcipitent.

l Thorie du rseau :
alors

Si et seulement si les antignes et les anticorps sont l'quivalence, alors et seulement ils prcipitent.

2) Technique de Heidelberg et Hendal C'est une vieille technique, mais qui dmontre bien l'quivalence. On verse dans plusieurs tubes une quantit constante d'anticorps, et une quantit croissante d'antignes. On centrifuge les tubes, et on compare la quantit de prcipit en fonction de la concentration. Ainsi, lorsque l'on ajoute des antignes dans les premiers, l'agglutination augmente tandis que c'est lorsqu'on ajoute des anticorps que l'agglutination augmente dans les derniers tubes. Par contre en ajoutant des anticorps ou des antignes dans les tubes l'quivalence, on n'observe aucun changement.

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Concentration en antigne

quivalence

Agglutination

Excs d'anticorps

Excs d'antignes

Chez le cheval

[Antigne]
Remarque : la courbe est diffrente chez le cheval car ses anticorps ont plus d'affinit avec l'eau.

3) Exprience d'immunonephelomtrie La dviation de la lumire dans un prcipit dpend de sa concentration. On peut alors doser les antignes ou les anticorps.
Prcipit

Antignes

Anticorps

B. Prcipitation en milieu glifi

Arc de prcipitation

Laser

La glose est compos d'1% d'agar, et de 99% d'eau. Les molcules peuvent donc diffuser dans toutes les directions.
Anticorps

Antigne

Ce faisant, il se forme un gradient de concentration. On observe un arc de prcipitation l'endroit o il y a l'quivalence. Remarque : il y a autant d'arcs de prcipitation que de groupes d'antignes / anticorps.

Concentrations :
quivalence

1) Mthode d'Oudin On met en contact dans un tube deux gloses contenant chacune des antignes et des anticorps. Les molcules vont diffuser et former un arc de prcipitation l'quivalence.

Glose avec des antignes A et B

Apparition de deux arcs de prcipitation

Glose avec des anticorps anti-A et anti-B

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La position des arcs de prcipitation dpend des antignes et des anticorps concerns. En effet, les molcules diffusent en fonction de leur taille et de leur structure. La position varie aussi avec la concentration. Plus l'antigne est concentr, plus il devra diffuser avant d'atteindre l'quivalence. De plus au cours du temps, l'arc de prcipitation va descendre jusqu' une certaine hauteur pour rester une densit qui lui correspond.
Concentration en antignes Temps

2) Technique d'Ouchterlony Cette technique permet de comparer les pitopes ports par diffrents antignes. C'est une mthode qualitative. On fait des puits dans la glose que l'on remplit de diffrents antignes et anticorps. On observe alors des arcs de prcipitation qui sont diffrents en fonction des antignes et des anticorps prsents.

Ce sont les mmes antignes, les arcs se compltent.

Les antignes ne sont pas les mmes, les arcs ne se compltent pas.

Un des antignes est partag car un arc se complte avec l'autre. Antignes de concentrations diffrentes

3) Technique de Mancini On remplit des puits avec un antigne de concentrations diffrentes, dans une glose remplie d'anticorps contre cet antigne. On observe des cercle de prcipitation dont le diamtre est proportionnel la concentration d'antigne. On peut alors doser l'antigne.

Glose remplie d'anticorps

4) Immunolectrophorse Cette technique permet d'analyser des mlanges complexes d'antigne. On effectue une lectrophorse de ce mlange afin de sparer les antignes. On peut ainsi analyse jusqu' une trentaine de protines.

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Arc de prcipitation o est l'antigne immunogne

Mlange de protines

Glose remplie d'anticorps

l lectrophorse en fuse ( mthode de Laurell )

L'lectrophorse en fuse permet de doser l'antigne. Cette technique est beaucoup plus sensible que celle de Mancini. La taille des arcs de prcipitation est proportionnelle la concentration de l'antigne.

Rfrence pour le dosage

Antigne doser

l lectrophorse bidimensionnelle

En effectuant deux lectrophorse successives perpendiculaires, on peut sparer les antignes qui diffusent ensemble. Le dosage n'est malheureusement plus possible.

III_ L'immunoagglutination
A. Principe
Lors de l'agglutination, les anticorps et les antignes s'associent de manire former un rseau. S'il y a beaucoup d'antignes et d'anticorps, on observe le prcipit l'il nu, c'est l'agglutination directe. Mais si la quantit d'antignes et d'anticorps est trop faible, on peut artificiellement dclencher l'agglutination afin de l'observer ; c'est l'agglutination indirecte.

l Agglutination indirecte
On fixe des antignes sur des billes de plastique ( latex ou polystyrne ) voire parfois des cellules. Ces billes tant volumineuses, on observe beaucoup mieux la formation d'un rseau.
Srum

Antignes

Rseau observable l'il nu

Il est aussi possible de faire l'inverse, c'est--dire d'attacher des anticorps sur des billes afin de tester quels sont les antignes compatibles avec certains anticorps. Exemples d'application :
Anticorps Antignes

Rseau observable l'il nu

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l Test de grossesse

Aprs la fcondation, le corps de la femme se met fabriquer l'hormone hCG. Ainsi en dtectant cette hormone, on dtecte une grossesse.

Agglutination visible Pas d'hCG

Anticorps anti-hCG

Urine ( avec peuttre des hCG ) Particules recouvertes d'hCG

Pas d'agglutination visible Fallait mettre un prservatif !

l Test virologique

Agglutination visible Srongatif

Antignes du virus

Sang ( avec peuttre des anticorps antiviraux ) Particules recouvertes d'anticorps antiviraux

Pas d'agglutination visible Sropositif

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