DEPARTAMENTO DE BIOLOGA AREA DE BIODIVERSIDAD ASIGNATURA: FISIOLOGA VEGETAL

CLASE TEORICA N6 BIOTECNOLOGA Y TCNICAS MOLECULARES EN PLANTAS

Profesores: Dr. Antero Burgos

Prof. Angela Bedoya

BIOTECNOLOGA

Biotecnologa:

CONCEPTO:

De acuerdo a la FAO (2003) la Biotecnologa es: Cualquier aplicacin tecnolgica que utiliza sistemas biolgicos, organismos vivos, o algunos de sus derivados para crear o modificar productos o procesos para usos especficos.

Biotecnologa:

NO ES UNA CIENCIA, SINO UN CONJUNTO DE DISCIPLINAS QUE AGRUPAN A: LA BIOLOGA, BIOQUMICA, GENTICA, VIROLOGA, AGRONOMA, MEDICINA, VETERINARIA , entre otras.

Tomado de CONVEME 2005, Thaura Ghnein, IVIC

Biotecnologa:

BIOTECNOLOGA

uso de

Conocimiento Cientfico
para manipular

Procesos de Ingeniera

AGENTES BIOLGICOS

PROCESAMIENTO DE MATERIAS

PRODUCCIN DE BIENES Y SERVICIOS

Biotecnologa:

RESEA HISTRICA

Prcticas empricas de seleccin de plantas y animales y sus cruzas

PRIMER PERIODO Fermentacin como un proceso para preservar y enriquecer el contenido protenico de los alimentos.

SEGUNDO PERIODO

Pasteur descubre que los microorganismos son la causa de la fermentacin.

TERCER PERIODO

Expansin de la industria petroqumica.

Descubrimiento de la penicilina por Fleming en 1928.

CUARTO PERIODO

Se descubre la doble estructura axial del cido "desoxiribonucleico" (ADN) por Crick y Watson en 1953. Primeros experimentos de ingeniera gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973

Biotecnologa:

BIOTECNOLOGA TRADICIONAL Y BIOTECNOLOGA MODERNA

Biotecnologa Tradicional:
Cualquier aplicacin tecnolgica que utiliza sistemas biolgicos, organismos vivos, o algunos de sus derivados para crear o modificar productos o procesos para usos especficos
Produce: alimentos como el pan, el yogurt, las leches fermentadas, los quesos.
FAO, 2003

Biotecnologa Moderna o Nueva

Es el conjunto de diferentes tecnologas moleculares tales como la manipulacin y transferencia de genes, el tipado de ADN y la clonacin de plantas y animales
Produce: Anticuerpos monoclonales, produccin de la insulina a partir de la bacteria llamada Escherichia coli, o de la hormona de crecimiento, manipulacin del ADN.
FAO, 2003

Biotecnologa:

UTILIDADES:
OBTENCIN DE BIENES Y SERVICIO

Elaboracin de alimentos como el pan, el yogurt, las leches fermentadas, los quesos, ingredientes saborizantes como los sazonadores.
Uso de animales para la produccin de drogas y como fuente donante de clulas y rganos. Desarrollo de vacunas contra enfermedades bovinas y porcinas.

A nivel industrial para producir: alcoholes y el cido ctrico.

En medicina elaboracin de Antibiticos, Produccin de insulina y de la hormona de crecimiento.

Fitomejoramiento para la obtencin de nuevas o mejores especies vegetales.

HERRAMIENTAS BIOTECNOLGICAS
CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

BIOTECNOLOGA

INGENIERA GENETICA

CULTIVO DE TEJIDOS In vitro

Concepto:

CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

El cultivo in vitro de define como "El cultivo sobre un medio nutritivo, en condiciones estriles, de plantas, semillas, embriones, rganos, tejidos, clulas y protoplastos (explante) de plantas superiores"
(Pierick,1990).

Tcnica de propagacin asexual bajo condiciones aspticas

Tomado de CONVEME 2005, Carlos Ascanio, CIBA-UCV

TIPOS DE CULTIVO

CULTIVO DE CALLOS CULTIVO DE CLULAS CULTIVO DE PROTOPLASTOS CULTIVO DE RAZ CULTIVO DE APICES DE TALLO CULTIVO DE HOJAS CULTIVO DE EMBRIONES CULTIVO DE VULOS CULTIVO DE ANTERAS CULTIVO DE YEMAS AXILARES
Figura 2. Aspecto de una plntula de ajo obtenida por cultivo de meristemos. Figura 1. Seccin de un meristemo apical de un tubrculo de patata visto al microscopio ptico

CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

REQUERIMIENTOS DE LOS CULTIVOS

1. EXPLANTE: a. Tamao b. Edad Fisiolgica 2. FACTORES FISICOS:

a. Temperatura
b. Luz c. pH d. Humedad relativa e. Medio (slido o lquido) 3. MEDIO NUTRITIVO: a. Nutrientes inorgnicos b. Hidratos de carbono c. Vitaminas d. Nitrgeno e. Reguladores del Crecimiento

CRECIMIENTO DE LOS EXPLANTES Y EFECTO DE LOS REGULADORES

Tomado de CONVEME 2005, Carlos Ascanio, CIBA-UCV

CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

VENTAJAS Y UTILIDAD
Se Requieren de pequeas cantidades de material inicial. Se obtienen plantas libres de enfermedades. Se obvia las condiciones climticas, las estaciones del ao Se obtienen un alto nmero de individuos en un corto tiempo.

CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

FUSIN CITOPLASMTICA O DE PROTOPLASTOS

Puede el gen de una especie funcionar y manifestarse en otra completamente distinta? Se puede aislar y manipular el ADN?

INGENIERA GENTICA

INGENIERA GENTICA

CONCEPTO
La ingeniera gentica es una tcnica que consiste en la introduccin o alteracin de los genes de un individuo.

La ingeniera gentica tambin puede definirse como un conjunto de tcnicas, nacidas de la Biologa Molecular, que permiten manipular el genoma de un ser vivo.

Se realiza a travs de las enzimas de restriccin que son capaces de "cortar" el ADN en puntos concretos y de las ligasas que son capaces de unir fragmentos de ADN.

CMO NACE LA INGENIERA GENTICA?

INGENIERA GENTICA

Agrobacterium tumefaciens

Familia: Rhizobiacea Bacteria del suelo, Gram Negativa. Transforma el Genoma: dicotiledneas, monocotiledneas, hongos y hasta clulas humanas. Produce la enfermedad de la agalla de la corona o del cuello (crown gall).

Induce una proliferacin descontrolada de clulas, produciendo la formacin de tumores.

INGENIERA GENTICA

MODO DE ACCIN DE Agrobacterium tumefaciens

INGENIERA GENTICA

CONSTRUCCIN DE ADN RECOMBINANTE

En la figura tenemos un gen que se desea insertar en un plsmido

Una enzima de restriccin ha cortado el gen y al plsmido, quedando unos bordes cohesivos o pegajosos.

La unin del ADN que contiene el gen que se desea clonar con el vector de clonacin, se realiza por medio de otras enzimas, denominadas ADN-ligasas, que unen ambos trozos de ADN. El resultado es una molcula de ADN recombinante, ya que contiene fragmentos de ADN de distinta procedencia.

CLONACIN DE GENES

VECTOR DE TRASFORMACIN

INGENIERA GENTICA

HERRAMIENTAS BSICAS: ENZIMAS DE RESTRICCIN Y LAS LIGASAS

Corte especfico del ADN en fragmentos pequeos y manejables mediante las ENZIMAS DE RESTRICCIN que pueden considerarse como las "tijeras moleculares".

Cada enzima de restriccin reconoce una secuencia especfica de nucletidos y corta en ese punto cada una de las cadenas de ADN.
Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos. Este extremo puede UNIRSE a otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restriccin. Otras enzimas llamadas LIGASAS terminan de unir a las diferentes secuencias.

INGENIERA GENTICA

ADN RECOMBINANTE
Se denomina ADN recombinante al que se ha formado al insertar un segmento de ADN extrao en un ADN receptor.

Crendose Organismos Modificados Genticamente OMG

PASOS DE LA INGENIERA GENTICA

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

INGENIERA GENTICA

EJEMPLO
PLANTAS QUE SE ILUMINAN En la transfeccin vegetal con Agrobacterium se ha ensayado un marcador inusual: el gen de la enzima luciferasa, de las lucirnagas. El sustrato de esta enzima es una proteina llamada luciferina, que con ATP y oxgeno desprende luz. Plsmidos Ti con este marcador, se transfirieron a clulas de tabaco, con las que se formaron nuevas plantas. Las nuevas plantas obtenidas se regaron en la oscuridad con agua y luciferina disuelta. El resultado fue sorprendente: las plantas se iluminaron como si fuesen unas bombillas de poca potencia o un dibujo de un anuncio fluorescente.

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

BENEFICIOS:
DIRECTOS: Mayor contenido de vitaminas. Mejor calidad de cidos grasos, el almidn y las protenas. Mayor contenido de minerales. Presencia de vacunas.

PROTECCIN A LOS CULTIVOS: Virus, Insectos, hongos y bacterias. Tolerancia a suelos salinos y metales pesados. PROTECCIN AMBIENTAL: Fitorremediacin. Menor uso de pesticidas.

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

RIESGOS

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

Tomado de CONVEME 2005, Ivan Galindo. IDEA

GENTICA MOLECULAR

GENETICA MOLECULAR

ESTRUCTURA DEL ADN

Watson and Crick (1953) Nature 171:373-738

DUPLICACIN

TRANSCRIPCIN

TRADUCCIN

PRINCIPIO FUNDAMENTAL DE LA BIOLOGA

GENETICA MOLECULAR
Toda la morfologa y fisiologa de las plantas se basa en procesos

metablicos, que a su vez son el resultado de la conversin de la informacin gentica en protenas y enzimas que van a controlar el metabolismo

ES LA CIENCIA QUE ESTUDIA LA MORFOLOGA, SECUENCIACIN Y LA INFORMACIN CONTENIDA EN LOS GENES

GENETICA MOLECULAR

LINEAS DE INVESTIGACIN E IMPORTANCIA

Uso del agua Proceso fotosinttico

Tolerancia a estrs bitico y estrs abitico

Floracin Germinacin

EN HUMANOS: Proyecto Genoma Humano Deteccin de genes que producen enfermedades.

GENETICA MOLECULAR

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA PCR

Es una tcnica de amplificacin del ADN

La tcnica fue desarrollada por K.B. Mullis a partir de 1983. Cada ciclo dura aproximadamente 5 minutos y para conseguir una cantidad til se requieren al menos 20 ciclos de reacciones. Se realiza de forma automtica en un aparato como se ve en la fotografa, con lo que se consigue un clonaje rpido en un sistema libre de clulas.

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA PCR

La Naturaleza es sabia, y el hombre, por mucho que lo intente, no podr nunca superarla.
Annimo