POLISACRIDOS DE LA PARED CELULAR DE PENICILLUS CAPITATUS (UDOTEACEAE, CHLOROPHYTA) DE LA COSTA VENEZOLANA

Cell wall polysaccharides of Penicillus capitatus (Udoteaceae, Chlorophyta) from the coast of Venezuela Ciancia, M1,2; Caneln, D.J.3; Suarez, A.I.4, Compagnone, R.S.5; Arata, P.X.1; Matulewicz, M.C.2
1Ctedra

de Qumica de Biomolculas, Departamento de Biologa Aplicada y Alimentos, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires, Argentina. 2CIHIDECAR-CONICET, Departamento de Qumica Orgnica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Argentina. 3Escuela de Bioanlisis, Facultad de Medicina, Universidad Central de Venezuela, Venezuela. 4Facultad de Farmacia, Universidad Central de Venezuela, Venezuela. 5Escuela de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela, Venezuela.

INTRODUCCIN
Se sabe que las algas verdes del orden Bryopsidales biosintetizan xilorabinogalactanos sulfatados que componen la matriz de la pared celular. Este orden ha sido dividido en dos subrdenes. De stos, Penicillus capitatus pertenece a Halimedineae que comprende algas que se encuentran en hbitats tropicales y subtropicales y presentan un cierto grado de calcificacin. La matriz fibrilar est formada principalmente por -(13)-xilanos. Hasta el momento, no se han estudiado los polisacridos sulfatados de especies de este gnero, slo se han caracterizado aquellos del alga Caulerpa racemosa, que pertenece al mismo suborden. El presente trabajo tiene como objetivo analizar los polisacridos sulfatados de especmenes de P. capitatus colectados en Ocumare de la Costa (Aragua, Venezuela) en marzo de 2007.

Tabla 2. Anlisis por metilacin de las fracciones F1 y F6, obtenidas a partir de PA1, as como de las fracciones modificadas.

Monosacrido 2,3,4-Xyl 2,4-6-desoxyHex 2,3,4,6-Gal 2,4,6-Gal 2,3,6-Gal 2,3,4-Gal 4,6-Gal 2,3-Gal 2,4-Gal 2-Gal Gal Glc
1 Parcialmente

F2 2 2 Tr. 7 Tr. 4 9 25 21 31 -

F2

F2

F2

F7 10 3 23 30 20 13 -

F7 desulfatado 12 7 7 6 11 39 6 4 4

despiruvilado desulfatado desulf/despir 14 17 7 3 11 4 30 10 2 Tr. 6 5 4 9 Tr. 2 10 12 39 4 2 4 3 23 17 6 5 3 4 31 3 Tr. 4

MATERIALES Y MTODOS
El material se extrajo con metanol y el residuo de la extraccin metanlica, con agua a temperatura ambiente, obteniendo los extractos PA1 y PA2, y a 90C. Los extractos obtenidos con agua caliente estaban constituidos principalmente por -(14)-glucanos, polisacridos de reserva (93 % de glucosa), que reviste inters para el presente trabajo. PA1, constituido por hidratos de carbono (34,2%), principalmente galactosa (77%), sulfato (10%) y protenas (20,7%), se fraccion por cromatografa de intercambio aninico, obtenindose 7 fracciones que se analizaron. Dos de ellas contenan un alto porcentaje de protenas (F3 y F4). Tanto en la fraccin principal (F1, 6,6 % de sulfato) y como en la de mayor contenido de sulfato (F6, 18 % de sulfato) predomina la galactosa como monosacrido constituyente y en ambas el contenido de protenas es mnimo. Por otra parte, presentan cantidades muy importantes de cido pirvico (6,2 y 6,7 %, respectivamente); estas fracciones se eligieron para su estudio estructural. Se realiz el estudio estructural por anlisis por metilacin de F1 y F6, Adems, F1 se someti a procesos de despiruvilacin-metilacin, desulfatacin-metilacin y despiruvilacin-desulfatacin-metilacin, mientras que F6 se estudio por desulfatacin-metilacin. Los resultados de estos estudios se muestran en la Tabla 2. Estos estudios permitieron determinar la estructura de las fracciones, que se resumen en la Tabla 3. La Fig. 1 muestra las unidades estructurales del galactano. Los datos espectroscpicos confirmaron estos resultados.

metilados, con grupos metilo en las posiciones indicadas.

Figura 1. Unidades estructurales propuestas para los galactanos de Penicillus capitatus.

CO2H3C OH O
CH2OH O O OR OR O O O O OH OH

CO2O H3C O O OR CH2O HO R=H, SO3H

O O

RESULTADOS
Tabla 1. Rendimiento y anlisis del extracto obtenido a temperatura ambiente, PA1, y de las fracciones obtenidas a partir del mismo por cromatografa de intercambio aninico sobre DEAE-Sephadex A-25

Eluyente Fraccin NaCl, M PA1 F1 F2 F3

3

Rendimiento % 0,3 0,4 3,7 8,3 3,7 10,9 0,4

2 1

cidos Carbohidratos Sulfato Protena Composicin en monosacridos (moles %) urnicos %, anh 34,2 29,3 nd 25,1 24 54,8 45,9 nd SO3Na % 10 6,6 6,8 5 4,4 11,8 18 7,8 % 3,1 2,4 nd 3,8 3,2 2,9 2 nd % 20,7 1,1 nd 32 46,6 4,3 1,4 nd Ram 2 2,4 7,7 3 1,3 1,6 0,3 3,2 Fuc 4,6 3,5 7,6 4 1,5 1,9 0,7 9,6 Ara 0,4 5,7 2,2 0,5 0,9 0,1 2,5 Xil 3,2 1,6 9,6 5,2 2,6 2,6 1,2 12,4 Man Gal 5,6 4 7,9 4,3 3,6 0,7 10 77 82 67,7 86,5 87,3 95,7 Glc 7,5 6,2 10 3,3 2,2 1,2 Unidades estructurales 3)-D-Gal(1 3)-D-Gal 2S(1 3)-D-Gal 4,6-Pir(1

Tabla 3. Unidades estructurales presentes en F1 y F6.

1

extracto 0,25 0,5 0,75 1 1,5 4

42,6

F1 7 4 10 32 9 26 10

F6 10 3 6 10 11 31 15

20,4 24,5 24,6

F4 F5 F6 F7

3)-D-Gal 2S,4,6-Pir(1 tGal 4,6-Pir 3,6)-D-Gal (1 3,6)-D-Gal 4S(1

1La

26,9 25,4

al alga molida. obtenida por tratamiento de la fase con NaCl 4 M a ebullicin. contenido de carbohidratos subi a 34.9% y el de protenas baj a 22.3 %.

1 Respecto

2 Fraccin

3 Por

tratamiento con proteasa el

configuracin fue asignada a partir de los datos espectroscpicos. Los mismos tambin indican una configuracin R para el carbono acetlico (C 26.0 ppm, H 1,41 ppm).

CONCLUSIONES
Penicillus capitatus biosintetiza galactanos sulfatados y piruvilados como principal componente de la matriz de la pared celular. A pesar de esto, se encuentran en muy baja proporcin respecto al peso seco del alga, debido, posiblemente, a la cubierta calcrea que caracteriza a estas algas. Estos galactanos presentan un esqueleto hidrocarbonado similar al de los galactanos Tipo II de las plantas, como los de los arabinogalactano-protenas, entre otros. Sin embargo, a diferencia de stos presentan un alto grado de piruvilacin, tanto en unidades enlazadas por la posicin 3, como en unidades terminales. Adems, estn sulfatados en el C-2 de algunas de las unidades enlazadas por 3, que pueden estar piruviladas. La otra posicin de sulfatacin es el C-4 de unidades enlazadas por las posiciones 3 y 6. Las estructuras propuestas para las fracciones F1 y F6 son muy similares, por esto se deduce que los restantes galactanos tendran estructuras de este tipo con pequeas variaciones cuantitativas. Estos galactanos tienen una cadena hidrocarbonada similar los de las especies del gnero Codium, aunque se diferencia en que en stos ltimos el cido pirvico forma un acetal con los carbonos 3 y 4 de unidades terminales, adems no presentan sulfatacin en la posicin 2. Por otro lado, para los polisacridos de Caulerpa racemosa, se ha determinado una cadena de unidades de galactosa enlazadas por 3 y sulfatadas parcialmente en C-6, para el que no se ha registrado piruvilacin. Sin embargo, este polisacrido sera un xiloarabinogalactano, en este caso, muy diferente del galactano de P. capitatus.